CN106794206A

CN106794206A - 肌醇和一种或多种益生菌以及它们的用途

Info

Publication number: CN106794206A
Application number: CN201580042464.1A
Authority: CN
Inventors: I·席尔瓦佐雷兹; C·梅斯; K·M·戈弗雷; P·N·贝克; Y·S·宗
Original assignee: Societe dAssistance Technique pour Produits Nestle SA
Current assignee: Societe des Produits Nestle SA
Priority date: 2014-08-08
Filing date: 2015-08-06
Publication date: 2017-05-31
Also published as: CN116270762A; BR112017001807B1; CA2953030C; MX2017001804A; MX374421B; EP3177155B1; CA2953030A1; EP3177155A1; BR112017001807A2; PH12017500014A1; WO2016020495A1

Abstract

本发明涉及包含肌醇和益生菌的母亲营养组合物。此类组合物已被专门设计成为备孕妇女、怀孕妇女和/或泌乳期妇女提供经优化的营养。本发明还涉及使用肌醇和一种或多种益生菌的组合产品来最大程度减轻怀孕个体或备孕个体的过度脂肪蓄积，和/或治疗或预防妊娠期糖尿病和怀孕个体和/或其后代的与妊娠期糖尿病相关的病症。其中所述肌醇和一种或多种益生菌的组合产品在孕前和/或孕期和/或哺乳期期间施用给所述个体。

Description

肌醇和一种或多种益生菌以及它们的用途

技术领域

本发明涉及包含肌醇和益生菌的母亲营养组合物。此类组合物已被专门设计成为备孕妇女、怀孕妇女和/或泌乳期妇女提供经优化的营养。本发明还涉及使用肌醇和一种或多种益生菌的组合产品来最大程度减轻怀孕个体或备孕个体的过度脂肪蓄积和/或治疗或预防妊娠期糖尿病以及怀孕个体和/或其后代的与妊娠期糖尿病相关的病症。

背景技术

越来越多的科学证据显示，产前和产后的早期营养和其他环境因素会影响长期健康和良好状态的调控，并且可引起慢性疾病发展的风险。有几项研究表明，在生育期饮食摄入发生变化或对各种大量和微量营养素加以控制，可影响几种生理过程，例如生长、代谢、食欲、心血管功能等(Koletzko B et al(2011)Am J Nutr 94(s):2036-43S(Koletzko B等人，2011年，《美国营养学杂志》，第94期增刊，第2036-2043页))。因此，妇女在孕前和孕期的营养状态(营养物质储备和饮食摄入)与优化新生儿和儿童健康结果相关。据信母亲营养会影响营养物质对发育中的胎儿的有效性和供应，这些营养物质是关键发育过程中所需的。妇女在孕前的营养状态不仅影响其自身的健康和良好状态，还会影响婴儿的健康、成长和良好状态。例如，缺乏微量营养素对胎儿组织和器官具有深刻且通常持久的影响，即使母体并未表现缺乏这些微量营养素的临床征兆(Ashworth CJ et al(2001)122:527-35(Ashworth CJ等人，2001年，第122卷：第527-535页))。多种微量营养素摄入不足在居住在资源匮乏地区的生育年龄妇女中很常见(Torhem LE et al.(2010)J.Nutr.140:2051S–58S(Torhem LE等人，2010年，《营养学杂志》，第140卷，第2051S-2058S页))。泌乳期妇女在分娩后的营养状态也不仅影响其自身的健康和良好状态，还会影响婴儿的健康、成长和良好状态。

各种各样的营养物质已用于对母体施用的组合物中，并且已研发各种营养组合物来解决母亲营养需要。这些营养组合物通常含有维生素和矿物质混合物。然而，为了母亲和婴儿着想，通过选择对这些妇女最有用的营养物质来专门将这种特定群体的营养缺乏作为目标，以便诸如提供针对生育期妇女的营养需要而定制的组合物，从而优化母亲的产前和产后营养仍然是有用的。

本发明人现发现，包含肌醇和益生菌的对母体施用的组合物对解决备孕妇女、怀孕妇女和泌乳期妇女及其后代的特定营养需要尤其有用。

本发明人还惊讶地发现，向个体施用肌醇和一种或多种益生菌的组合产品可最大程度减轻所述个体的过度脂肪蓄积(脂肪贮存)并增加所述个体的瘦肌肉量。令人惊奇的是，这些成分的组合的效果比基于单独使用这些成分时可预期的效果更好。这种更好的效果可大于累加效果。

如Athukorala C等人在BMC Pregnancy Childbirth,2010,10:56(《BMC妊娠和分娩》，2010年，第10卷，第56页)中、Ovesen P等人在Obstet Gynecol,2011,118:305(《妇产科学》，2011年，第118卷，第305页)中以及Aisling MM等人在Diabetes Care 32(7):1308(《糖尿病护理》，第32卷，第7期，第1308页)中所提出，已经确定孕期在体脂沉积、肥胖和妊娠期糖尿病(GDM)之间存在关联性。

因此，最大程度减轻个体在孕前和/或孕期的脂肪蓄积可预防和/或治疗GDM和/或预防怀孕个体或其后代的与GDM相关的病症。

GDM被定义为在孕期出现或在此期间才被认识到的不同程度的葡萄糖耐受不良(Metzger BE,Coustan DR(Eds.):Proceedings of the Fourth International Work-shop-Conference on Gestational Diabetes Mellitus.Diabetes Care 21(Suppl.2):B1–B167,1998)(Metzger BE、Coustan DR编辑，《第四届国际妊娠性糖尿病研讨会论文集》，《糖尿病护理》，第21卷，第2增刊，第B1–B167页，1998年))。

在孕期，母亲身体中的激素发生变化，导致胰岛素抗性增加且血浆葡萄糖浓度升高。这些变化有助于确保营养物质从母亲转移到胎儿，从而有助于确保胎儿的最佳生长发育。一般来讲，通过母亲增加胰岛素产量会抵消胰岛素抗性的增加和血浆葡萄糖浓度的升高。然而，有些母亲无法产生足量的胰岛素来抵消这种变化，于是便可导致所述母亲患妊娠期糖尿病(下文称为GDM)。

GDM是一种可增加许多母胎病症风险的孕期紊乱，所述母胎病症包括巨大儿、产伤、肩难产、早产和剖宫产(下文称为剖腹产)。患有GDM的母亲在怀孕后不久和以后生活中发展为II型糖尿病的风险也有所增加。此外，患有GDM的母亲的后代发展为葡萄糖耐量受损和/或患上超重/肥胖以及相关代谢疾病(例如，II型糖尿病和肥胖症)的风险也有所增加。

因此，需要找到治疗和/或预防怀孕个体的GDM的方法。

此外，还发现向个体施用肌醇和一种或多种益生菌的组合产品可增加所述个体胰腺中的胰岛素的量。这可导致胰岛素对葡萄糖负荷的应答得到改善，因此可治疗或预防GDM或怀孕个体或其后代的与GDM相关的病症。

发明内容

发明内容在权利要求书中陈述。如上所述，本发明人现已发现，包含肌醇和益生菌的对母体施用的组合物对解决备孕妇女、怀孕妇女和泌乳期妇女及其后代的特定营养需要尤其有用。因此，此类组合物是本发明的目的。另一个目的是使用所述组合物来最大程度减轻个体在孕前和/或孕期的过度脂肪蓄积和/或治疗或预防怀孕个体(例如，怀孕妇女、猫或狗)的GDM。

如上所述，GDM与影响怀孕个体和/或其后代的多种病症相关，所述病症为例如早产和剖宫产、对母亲或婴儿造成的产伤、肩难产、巨大儿、后代血糖浓度过高、后代在产后立即出现和随后生命中出现的超重/肥胖以及相关代谢疾病(例如，II型糖尿病、脂肪肝和肥胖症)，GDM还与母亲在产后不久和以后生活中患上或发展为2型糖尿病的风险增大相关。因此，肌醇和一种或多种益生菌的组合产品通过治疗或预防GDM，也可用于治疗或预防这些怀孕个体或其后代的这些病症。

当肌醇和一种或多种益生菌的组合产品进一步与维生素B2和/或维生素B6、B12和D中的一种或多种组合时，肌醇和一种或多种益生菌的组合产品对于最大程度减轻个体在孕前和/或孕期的脂肪蓄积和/或预防和/或治疗GDM尤其有效。

肌醇和一种或多种益生菌的组合产品任选地进一步与维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种组合，可在孕前和/或孕期和/或泌乳期经肠施用给个体。

肌醇和一种或多种益生菌的组合产品任选地进一步与维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种组合，可以适于个体摄取的任何形式施用或使用，例如以在例如乳、果汁或水中重构的粉末状营养组合物的形式、食物产品、饮料、营养补充剂(诸如，喷洒在食物上或溶解在水性介质(如乳、果汁或水)中的粉末状营养补充剂)或功能性食品的形式。

肌醇和一种或多种益生菌任选地进一步与维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种组合，可用于制备用来最大程度减轻个体在孕前和/或孕期的过度脂肪蓄积和/或治疗或预防怀孕个体的GDM的药物。

肌醇和一种或多种益生菌以及任选的维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种可与标签一起提供，所述标签指示用于最大程度减轻个体在孕前和/或孕期的过度脂肪蓄积和/或治疗或预防怀孕个体的GDM的套装产品的剂量需求。

附图说明

图1是示出在实施例3中发现分别缺乏维生素D、维生素B12、维生素B6、叶酸、铁和锌的受调查妇女的百分比的图。

图2是示出肌醇和益生菌的组合处理未孕Goto Kakizaki大鼠10周后对大鼠的脂肪量百分比变化的影响的图表。

图3是示出肌醇和益生菌的组合处理未孕Goto Kakizaki大鼠10周后对大鼠的脂肪增量与体重增量之比的影响的图表。

图4是示出肌醇和益生菌的组合在怀孕Goto Kakizaki大鼠妊娠第19.5天对胰腺中胰岛素的量的影响的图表。

图5是示出肌醇和益生菌的组合在怀孕Goto Kakizaki大鼠妊娠第16.5天对胰岛素曲线下面积(AUC)增加的影响的图表。

图6是示出肌醇和益生菌的组合对腓肠肌中SLC5A11转录的影响的图表。

具体实施方式

本发明人研究了备孕妇女、怀孕妇女和泌乳期妇女的特定需要，以确定对该特定群体最有用的营养物质。基于以上发现和研究，本发明人设计了包含肌醇和益生菌的经优化的组合物，以专门解决该特定群体的最迫切需要。

肌醇或1,2,3,4,5,6-环己六醇是以九种立体异构形式存在的多元醇，这九种立体异构取决于其六个羟基的空间取向。肌醇或顺式-1,2,3,5-反式-4,6-环己六醇是肌醇的主要异构形式。肌醇是存在于动物和植物细胞中的化合物，作为真核细胞中第二信使的结构基础，尤其是作为三磷酸肌醇(IP3)、磷脂酰肌醇磷酸脂(PIP2/PIP3)和肌醇聚糖，在各种细胞过程中起着重要作用。相关研究已表明肌醇参与多种生物过程，诸如细胞生长和存活、外周神经的发育和功能、骨生成、能量代谢以及繁殖(Croze et al.(2013)Biochimie 95:1811-1827(Croze等人，《生物化学》，第95卷，第1811-1827页))。在新鲜的水果和蔬菜以及所有含有种子(豆类、谷物和坚果)的食物中发现，肌醇是游离形式的磷酸肌醇和植酸(Clements RS and Darnell B.Am J Clin Nutr(1980)33:1954-1967(Clements RS和Darnell B，《美国临床营养学杂志》，1980年，第33卷，第1954-1967页))。来自植酸的肌醇可通过在植物、微生物和动物组织中发现的植酸酶释放到肠道中(Schlemmer U et al.MolNutr Food Res(2009)53:S330-S375(Schlemmer U等人，《分子营养与食品研究》，2009年，第53卷，第S330-S375页))。这些酶能够释放游离肌醇、正磷酸盐和中间产物，包括单磷酸、二磷酸、三磷酸、四磷酸和五磷酸形式的肌醇。摄取的大部分肌醇六磷酸盐被水解成肌醇。

由于肌醇具有重要的生理作用，尤其是能够促进细胞生长，因此肌醇尤其受备孕妇女、怀孕妇女和泌乳期妇女的关注。然而，本发明人在实施例4中详述的饮食摄入研究表明，怀孕妇女通常不能摄入足够种类含有肌醇的食物(主要是水果和蔬菜)。因此，本发明人发现，补充肌醇对备孕妇女、怀孕妇女和泌乳期妇女特别有益处。

肌醇优选地以每日剂量0.2g至5g、优选地1.5g至5g、更优选地2g至5g、最优选地2g至4g的量提供。

如本文所用的术语“肌醇”是指肌醇(顺式-1,2,3,5-反式-4,6-环己六醇)和/或其代谢物。

如本文所用的术语“代谢物”是指在施用(如摄取)具体化合物之后由个体的身体从该具体化合物产生和/或形成的任何物质。其包括化合物的活性形式和分解代谢物。

适于怀孕个体摄取的任何来源的肌醇可用于本发明中。

肌醇的代谢物可选自D-手性肌醇、L-手性肌醇和前述两种肌醇的组合。具体地讲，代谢物是D-手性肌醇。

将肌醇与益生菌组合也是特别有益的，因为发现这样能改善肠道屏障功能并且有助于营养物质通过肠道(Cani PD et al.(2009)Gut 58:1091-1103(Cani PD等人，《肠道》，2009年，第58卷，第1091-1103页))。因此将肌醇与益生菌组合能够增强对肌醇和可能存在于组合物中的其他营养物质的吸收。

如本文所用的术语“益生菌”是指活益生菌、非复制型益生菌、死益生菌、无活力益生菌、益生菌的片段如DNA、益生菌的代谢物、益生菌的细胞质化合物、益生菌的细胞壁材料、益生菌的培养上清液以及任何前述物质的组合。

具体地讲，益生菌是活益生菌、非复制型益生菌、死益生菌、无活力益生菌以及它们的任何组合。更具体地讲，益生菌是活益生菌。

优选地，益生菌包含乳杆菌属(Lactobacillus)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)的组合。最优选的乳杆菌菌株是由雀巢研发上海有限公司(NestléR&D centre ShanghaiLtd)(中国上海市嘉定区曹安路13号桥南，邮编201812)保藏在中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)并且可以以保藏号CGMCC 1.3724获得的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)GG菌株。最优选的双歧杆菌菌株是保藏在法国国家微生物保藏中心(CNCM)并且保藏号为CNCM I-3446的乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BB12菌株。优选地，益生菌包含可以以保藏号CGMCC 1.3724获得的鼠李糖乳杆菌GG菌株和以保藏号CNCM I-3446保藏的乳双歧杆菌BB12菌株的混合物。最优选地，益生菌由可以以保藏号CGMCC 1.3724获得的鼠李糖乳杆菌GG菌株和以保藏号CNCM I-3446保藏的乳双歧杆菌BB12菌株的混合物构成。在一个优选的实施方案中，益生菌以每日剂量10⁵至10¹²菌落形成单位(cfu)、更优选地以每日剂量10⁷至10¹¹cfu的量提供。

在一个优选的实施方案中，本发明的组合物还包含至少一种维生素，所述维生素选自维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素D以及它们的混合物。优选地，该组合物包含维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D。

在实施例3中详述的研究中，本发明人惊讶地发现，与其他营养物质相比，怀孕妇女通常更缺乏维生素B6、B12和D。此外，在实施例4中详述的研究中，他们发现怀孕妇女群体中有很大一部分未能食用足够量的维生素B2。因此，为了补偿这些特别经常出现的缺乏情况，用这些维生素补充怀孕妇女的饮食是特别受关注的。

如本文所用的术语“维生素B2”是指维生素B2和/或其代谢物。

可使用适于怀孕个体摄取的任何来源的维生素B2。具体地讲，维生素B2可以是核黄素，例如以商标Riboflavin Universal出售的核黄素。

维生素B2的代谢物可选自黄素单核苷酸(下文称为FMN)、黄素腺嘌呤二核苷酸(下文称为FAD)以及它们的盐(例如，核黄素-5'-磷酸钠盐)。

如本文所用的术语“维生素B12”是指维生素B12和/或其代谢物。

如本文所用的术语“维生素B6”是指维生素B6和/或其代谢物。

如本文所用的术语“维生素D”是指维生素D、其前体和/或其代谢物。

如本文所用的术语“前体”是指所施用(例如，由个体摄取)并由所述个体的身体使用以产生和/或形成具体化合物的任何物质。

具体地讲，维生素B6可以是盐酸吡哆醇和/或选自5'-磷酸吡哆醛(下文称为PLP)的维生素B6代谢物。

具体地讲，维生素B12可以是氰钴胺素和/或选自羟钴胺素、甲基钴胺素、腺苷钴胺素以及它们的组合的维生素B12代谢物。

具体地讲，维生素D可以是维生素D2、维生素D3或它们的组合、选自7-脱氢胆钙化醇的维生素D的前体，以及选自25-羟基维生素D3、1,25-二羟基维生素D3、25-羟基维生素D2、1,25-二羟基维生素D2和前述物质的组合的维生素D代谢物。

最优选地，维生素D是维生素D3，以及选自25-羟基维生素D3、1,25-二羟基维生素和任何前述物质的组合的维生素D代谢物。甚至更具体地讲，维生素D3是胆钙化醇。

如果存在维生素B2，维生素B2优选地以每日剂量0.14mg至14mg的量提供。如果存在维生素B6，维生素B6优选地以每日剂量0.19mg至19mg的量提供。如果存在维生素B12，维生素B12优选地以每日剂量0.26μg至26μg的量提供。如果存在维生素D，维生素D优选地以每日剂量1.5μg至100μg的量提供。最优选地，每日剂量的本发明组合物包含1.8mg维生素B2、2.6mg维生素B6、5.2μg维生素B12和10μg维生素D。

实施例3的研究还表明了在至少某些怀孕妇女群体中通常缺乏锌，但缺乏锌的程度比缺乏维生素B2、B12、B6和D的程度轻。因此，用锌补充怀孕妇女的饮食也是特别有利的。因此，在一个优选的实施方案中，本发明的组合物还包含锌。更优选地，锌以每日剂量1.1mg至40mg的量存在。

可使用适于怀孕个体摄取的任何来源或形式的锌。具体地讲，锌可以是锌盐，诸如氯化锌、吡啶甲酸锌、硫酸锌、氧化锌、乙酸锌、碳酸锌以及前述物质的组合。

更具体地讲，锌是氯化锌。

还可添加另外的维生素和矿物质。例如，可根据政府机构(诸如USRDA)的建议添加维生素和矿物质。例如，该组合物可含有下列微量营养素中的一种或多种：钙、镁、磷、铁、锌、铜、碘、硒、维生素A或视黄醇活性等同物(RAE)(例如，β胡萝卜素形式或类胡萝卜素的混合物形式)、维生素C、维生素B1、烟酸、叶酸、生物素、维生素E。优选地，该组合物所含有的微量营养素中的一种或多种的量如下：100mg至2500mg钙、35mg至350mg镁、70mg至3500mg磷、2.7mg至45mg铁、1.1mg至40mg锌、0.1mg至10mg铜、22mg至1100μg碘、6mg至400μg硒、77mg至3000μg维生素A或视黄醇活性等同物(RAE)(例如，β胡萝卜素形式或类胡萝卜素的混合物形式)、8.5mg至850mg维生素C、0.14mg至14mg维生素B1、1.8mg至35mg烟酸、60μg至1000μg叶酸、3μg至300μg生物素、1.9μg至109μg维生素E。

本发明的组合物还可有利地包含选自长链多不饱和脂肪酸(诸如，花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA))的至少一种油，所述至少一种油的量为本领域技术人员已知的任何合适的量，例如每日剂量100mg至500mg的量、更优选地每日剂量介于200mg和400mg之间的量。

然而，在孕期摄入高脂肪和/或补充母亲PUFA与后代肥胖更加严重的风险增加相关。因此，在一个具体实施方案中，本发明的组合物不包含长链多不饱和脂肪酸和/或动物脂肪和/或植物脂肪。

在另一个具体实施方案中，本发明的组合物不包含寡糖。

本文提及的任何营养物质可以有效实现本发明目的的任何量使用。技术人员将能够确定合适的剂量。通常，剂量将取决于母亲的年龄、体型、健康状态、生活方式和基因遗传。

通常，量在本申请中被定义为每日剂量的量。因此，营养物质的量可根据该营养物质旨在每天一次还是更多次或更少次被食用而相应地在每种组合物中选择。

营养物质可作为持续释放制剂提供。如果是这样，可降低食用营养物质的频率，同时身体仍能持续获得足够的这种营养物质供应。

本发明的组合物旨在对母体施用。这意味着将组合物施用于备孕妇女、怀孕妇女和/或泌乳期妇女。优选地，将其施用于备孕妇女和/或怀孕妇女，最优选地施用于怀孕妇女。

优选地，将本发明的组合物施用于备孕妇女，例如在怀孕或备孕之前至少1个月、2个月、3个月或4个月期间施用。当将该组合物施用于怀孕妇女或泌乳期妇女时，优选地在孕期和/或泌乳期将组合物施用至少4周、优选地至少8周、更优选地至少12周、更优选地至少16周、更优选地至少20周、更优选地至少24周、更优选地至少28周、甚至更优选地至少36周。随着怀孕中期和怀孕晚期的营养需求不断增加，更加优选地的是在整个怀孕晚期、最优选地在整个怀孕中期和怀孕晚期施用本发明的组合物。

备孕妇女通过摄入适当的营养物质来备孕是尤为重要的。因此，妇女在孕期和泌乳期的营养物质需求有所增加。此外，泌乳期要求母亲储备需要建立和补充的能量、蛋白质和其他营养物质。本发明的组合物被专门设计成满足每个这些时期中的妇女的需要。

该组合物可以是适于将所有成分施用于妇女的任何形式。例如，该组合物可以是在乳或水中重构的粉末状营养组合物的形式、食物产品、功能性食物产品、饮料、饮品、乳制品、药物制剂、宠物食物产品、营养补充剂或功能性食品的形式。

当该组合物呈要在乳或水中重构的粉末状营养组合物的形式时，其优选地包含蛋白质源、碳水化合物源和脂质源，优选地还包含卵磷脂。更优选地，其还包含大豆卵磷脂和/或膨松剂。蛋白质源可以是奶粉或脱脂奶粉。蔗糖和/或麦芽糖糊精可用作碳水化合物源。脂质源可以是植物油。作为另一种选择或除此之外，该制剂还可包含葡萄糖浆、乳脂、柠檬酸镁、胆碱盐和胆碱酯、益生元纤维和/或抗坏血酸棕榈酸酯。例如，可添加风味物化合物(例如，可可粉或蜂蜜)来提供不同口味。

如本文所用的术语“食物产品”是指可供人类或动物安全食用的任何种类的产品。所述食物产品可以是固体、半固体或液体形式，并且可包含一种或多种营养物质、食物或营养补充剂。例如，食物产品可另外包含以下营养物质和微量营养物质：蛋白质来源、脂质来源、碳水化合物来源、维生素和矿物质。该组合物还可包含抗氧化剂、稳定剂(以固体形式提供时)或乳化剂(以液体形式提供时)。

如本文所用的术语“功能性食物产品”是指为个体提供额外的健康促进或疾病预防功能的食物产品。

食物产品和功能性食物产品包括例如基于谷类的产品、酸奶或其他乳制品和棒。

如本文所用的术语“营养补充剂”或“饮食补充剂”是指为个体提供所述个体可能无法以其他方式足量消耗的营养物质的营养产品。例如，营养补充剂可包括维生素、矿物质、纤维、脂肪酸或氨基酸。

补充剂可例如以丸剂、片剂、锭剂、咀嚼胶囊或咀嚼片剂、片剂或胶囊，或者可例如溶解在水中或喷洒在食物上的粉末补充剂的形式提供。最优选的是可溶解在液体中或喷洒在食物上(最优选地溶解在水中)的粉末补充剂。此类补充剂通常可提供所选择的营养物质，但在个体的整体营养需要中所占的比例不显著。通常，此类补充剂在个体的日能量需要中所占的比例不超过0.1％、1％、5％、10％或20％。

如本文所用的术语“乳制品”是指由动物如牛、山羊、绵羊、牦牛、马、骆驼以及其他哺乳动物生产的食物产品。乳制品的示例是低脂乳(例如，0.1％、0.5％或1.5％的脂肪)、无脂乳、乳粉、全脂乳、全脂乳制品、黄油、酪乳、酪乳制品、脱脂乳、脱脂乳制品、高乳脂产品、炼乳、鲜奶油、奶酪、冰淇淋和甜食产品、益生菌饮料或益生菌酸奶型饮料。

如本文所用的术语“药物制剂”是指包含至少一种药物活性剂、化学物质或药物的组合物。药物制剂可以是固体或液体形式，并且可包含至少一种本领域技术人员可识别的附加活性剂、载剂、溶媒、赋形剂或助剂。药物制剂可以是片剂、胶囊、颗粒、粉末、液体或糖浆的形式。如本文所用的术语“饮料产品”是指可以由个体安全食用的液体或半液体形式的营养产品。

如本文所用的术语“宠物食物产品”是指旨在由宠物食用的营养产品。如本文所提及的宠物或伴侣动物，应理解为选自狗、猫、鸟、鱼、啮齿类动物(例如，小鼠、大鼠和豚鼠、兔子)等的动物。

该组合物的所有成分可混合在一起，或者作为另一种选择，该组合物可以套装产品的形式提供，在套装产品中，成分或成分组分开提供并且用于被妇女一起食用。

因此，包含至少两种物理上分开的组合物(每种组合物包含上述成分中的至少一种)的套装产品是本发明的另一个目的，其中物理上分开的组合物中的至少一种包含肌醇，并且物理上分开的组合物中的至少一种包含益生菌。

物理上分开的组合物中的每一种还可包含上述其他成分中的一种或多种。最优选地，第一组合物包含选自维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素D以及它们的混合物的至少一种维生素，第二组合物包含益生菌。肌醇可在第一组合物或第二组合物中提供，或者甚至分开提供，但优选地在与提供维生素相同的组合物中提供。在本发明的一个优选实施方案中，套装产品包含第一组合物和第二组合物，第一组合物包含肌醇和选自维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素D和它们的混合物的至少一种维生素，任选地还包含除了益生菌之外的上述其他维生素和/或营养物质，第二组合物包含益生菌。在一个最优选实施方案中，套装产品包含第一组合物和第二组合物，第一组合物包含肌醇、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素D和锌，第二组合物包含益生菌。益生菌与其他成分分开是最优选的，这样可避免由于存在高浓度的矿物质或其他营养物质而对益生菌造成的任何损害。

出于本发明的目的，定期施用组合物(或包含在套装产品中的组合物)，例如一天两次、一天一次、每两天一次或每周一次。

在另一实施方案中，本发明提供了用于制备对母体施用的组合物的方法，该方法包括将肌醇与如上所述的益生菌混合，任选地与上述任何其他成分混合。

如上所述，除了本发明人确定包含肌醇和益生菌的对母体施用的组合物对解决备孕妇女、怀孕妇女和泌乳期妇女及其后代的特定营养需要尤其有用之外，本发明人还惊讶地发现向个体施用肌醇和一种或多种益生菌的组合产品可最大程度减轻个体在孕前和/或孕期的过度脂肪蓄积和/或治疗或预防怀孕个体的GDM。

因此，在本发明的另一方面，提供了肌醇和一种或多种益生菌的组合产品，该组合用于预防或最大程度减轻个体在孕前和/或孕期的过度脂肪蓄积和/或治疗或预防GDM和怀孕个体和/或其后代的与GDM相关的病症。

如本文所用的术语“个体”是指哺乳动物，更具体地讲是指猫、狗或人。

如果哺乳动物的体脂百分比过高，则认为其超重或肥胖。

如果人类女性的体脂百分比大于37％，则认为其肥胖。

如果人类女性的体脂百分比为31％至36％，则认为其超重。

孕期脂肪蓄积过度与发展为妊娠性并发症(如GDM)和后代不良后果的风险增加有关。因此，在孕前和孕期最大程度减轻过度脂肪蓄积可能是有益的，此外如上所述，脂肪蓄积过度与GDM相关。

构成孕期过度脂肪蓄积的因素将取决于个体的体重和身体组成(如脂肪百分比)。技术人员将能够基于临床医疗指南来确定过度脂肪蓄积。

体脂百分比可通过对个体进行生物电阻抗分析(以下称为BIA)或通过使个体经受核磁共振(下文称为NMR)来测量。

如本文使用的术语“GDM”是指在孕期出现或在此期间才被认识到的不同程度的葡萄糖耐受不良。

哺乳动物是否患有葡萄糖耐受不良可通过测量其空腹血浆葡萄糖浓度或通过进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)来确定。技术人员将熟悉这些试验以及用于诊断葡萄糖耐受不良(因此诊断GDM)的标准。根据美国临床化学协会(AACC)出版的美国临床生化科学院(NACB)指南以及国际糖尿病与妊娠研究组(IADPSG)指南中列出的标准，如果怀孕人类个体的空腹血浆葡萄糖浓度等于5.1mmol/L或更高，或其在饮用75g葡萄糖1小时后的血糖浓度高于10mmol/L，或其在饮用75g葡萄糖2小时的血糖浓度高于8.5mmol/L，则认为其患有葡萄糖耐受不良。

如本文所用的术语“治疗”还涵盖改善和/或缓解病症，即改善和/或缓解病症症状。其可例如涵盖降低个体的病症严重程度。

如本文所用的术语“预防”是指预防个体发生病症或降低个体发生病症的风险。

适于怀孕个体摄取的任何来源的肌醇可用于本发明中。

一种或多种益生菌可以是任何乳酸菌、双歧杆菌或它们的组合，其中所述乳酸菌和双歧杆菌具有确定的益生菌特性。乳酸菌菌株的非限制性示例包括：尤其可从芬兰维利奥公司(Valio Oy,Finland)以商标LGG获得的鼠李糖乳杆菌ATCC 53103，以及由雀巢研发上海有限公司(NestléR&D centre Shanghai Ltd)(中国上海市嘉定区曹安路13号桥南，邮编201812)保藏在中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)并且可以以保藏号CGMCC 1.3724获得的鼠李糖乳杆菌。双歧杆菌菌株的非限制性示例包括：尤其是在法国国家微生物保藏中心(CNCM)保藏为CNCM I-3446且由丹麦汉森集团公司(Christian Hansen company,Denmark)以商标Bb12出售的乳双歧杆菌、由日本森永乳业株式会社(Morinaga MilkIndustry Co.Ltd.,Japan)以商标BB536出售的长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)ATCC BAA-999、由丹尼斯克公司(Danisco)以商标Bb-03出售的短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)菌株、由森永乳业株式会社以商标M-16V出售的短双歧杆菌菌株，以及由拉曼集团罗塞尔研究所(Institut Rosell,Lallemand)以商标R0070出售的短双歧杆菌菌株。

在一个具体实施方案中，一种或多种益生菌是鼠李糖乳杆菌CGMCC 1.3724和乳双歧杆菌CNCM I-3446的混合物。

鼠李糖乳杆菌CGMCC 1.3724和乳双歧杆菌CNCM I-3446可以1:99至99:1的比例使用，但更具体地讲，它们将以1:2至2:1、甚至更具体地以1:1的比例使用。

当肌醇和一种或多种益生菌的组合产品进一步与维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种结合时，肌醇和一种或多种益生菌的组合产品对于最大程度减轻个体在孕前和/或孕期的脂肪蓄积和/或治疗或预防GDM以及预防怀孕个体或其后代的与GDM相关的病症尤其有效。当肌醇和一种或多种益生菌的组合产品进一步与这些所列成分中的一种或多种组合时，比基于单独使用肌醇和一种或多种益生菌或者维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种来最大程度减轻个体在孕前和/或孕期的过度脂肪蓄积和/或治疗或预防怀孕个体的GDM时可预期的效果有所改善。改善的效果可大于累加效应或协同效应。

因此，在一个实施方案中，肌醇和一种或多种益生菌的组合产品进一步与维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种组合。

具体地讲，肌醇和一种或多种益生菌进一步与维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D组合。

适于怀孕个体摄取的任何来源的维生素B6、维生素B12和维生素D可用于本发明中。

更优选地，维生素D是维生素D3，以及选自25-羟基维生素D3、1,25-二羟基维生素和前述物质的组合的维生素D代谢物。甚至具体地讲，维生素D3是胆钙化醇。

肌醇和一种或多种益生菌的组合产品任选地进一步与维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种组合，可以任何有效剂量使用，所述剂量能够在最大程度减轻个体在孕前和/或孕期的脂肪蓄积方面和/或在治疗或预防GDM和怀孕个体和/或其后代的与GDM相关的病症方面提供益处。

就脂肪蓄积而言，有效剂量可以是与不施用所述剂量相比能够降低脂肪蓄积的任何剂量。

就GDM而言，有效剂量可以是不同程度改善怀孕个体的葡萄糖耐受不良的任何剂量。

确定有效剂量完全在本领域技术人员的能力范围内。通常，有效剂量将取决于个体的年龄、体型、健康状态，取决于个体的生活方式及其基因遗传。

就最大程度减轻脂肪蓄积而言，有效剂量可例如在服用所述剂量一定时间段之前和之后通过对个体进行生物电阻抗分析(下文称为BIA)或通过使个体经受核磁共振(下文称为NMR)来确定。所述时间段可以是10天至3个月。

就GDM而言，有效剂量可例如通过测试剂量对个体的空腹血浆葡萄糖浓度的影响或通过进行OGTT来确定。有效剂量应提高个体的空腹葡萄糖浓度并降低个体的血糖应答。

特别有用的肌醇剂量是0.2mg至5mg、1.5mg至5mg、2g至4g，或2g。

特别有用的一种或多种益生菌剂量是10e5至10e12菌落形成单位(cfu)、10e7至10e11cfu、10e9cfu。

特别有用的维生素B2(如果存在)剂量可以是0.14mg至14mg、1mg至2.5mg、1.5mg至2mg，或1.8mg。

特别有用的维生素B6(如果存在)剂量是0.19mg至19mg，或2.6mg。特别有用的维生素B12(如果存在)剂量是0.26μg至26μg，或5.2μg。特别有用的维生素D(如果存在)剂量是1.5μg至100μg、5μg至50μg，或10μg。

如本文使用的术语“剂量”是指在孕前和/或孕期和/或泌乳期向个体施用的每日量。每日量或剂量可一次性全部施用，或者可在一天内分若干次施用。剂量可通过任何已知的方法施用，尤其是经肠施用，例如口服。

一种或多种剂量可在任何时间施用，例如白天或夜间。如果在个体食用食物或饮用饮料(例如，食用正餐或零食)之前施用，则剂量可特别有效。

在一个实施方案中剂量分2次施用，具体地讲，剂量分2次施用，早上一次，晚上一次，具体为在早餐前和晚餐前。

如本文所用的术语“早餐”是指当天的第一餐。

如本文所用的术语“晚餐”是指当天的最后一餐。

在本发明的另一方面，提供了套装产品，该套装产品用于最大程度减轻个体在孕前和/或孕期的过度脂肪蓄积和/或治疗或预防GDM和怀孕个体和/或其后代的与GDM相关的病症，该套装产品包含：

·肌醇和一种或多种益生菌以及任选的维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种

·指示怀孕个体的剂量需求的标签。

剂量需求可以是每天施用2次，具体地讲，每天在食用任何食物或饮用任何饮料之前施用2次。更具体地讲，每天施用2次，其中早上一次，晚上一次。甚至更具体地讲，每天施用2次，其中早上早餐前一次，晚上晚餐前一次。

肌醇、一种或多种益生菌以及任选的维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种均可以提供所述维生素或者一种或多种益生菌的持续释放的形式提供。如果是这样，可降低使用这些化合物的频率，同时身体仍能持续获得足够的这些化合物供应。

肌醇和一种或多种益生菌的组合产品任选地进一步与维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种组合，可在同一组合物中施用。作为另一种选择，肌醇和一种或多种益生菌以及任选的维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种可彼此分开施用或彼此组合施用，例如肌醇(任选地与维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种一起)可与所述一种或多种益生菌分开施用。具体地讲，分开施用可以是同时但分开施用，例如肌醇(任选地与维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种一起)可与所述一种或多种益生菌同时但分开施用，例如与所述一种或多种益生菌以两种片剂分开但紧接着(例如，在5分钟、4分钟、3分钟、2分钟、1分钟内)依次施用。

肌醇和一种或多种益生菌的组合产品任选地进一步与维生素B2、B6、B12和D中的一种或多种结合，旨在施用于备孕个体、怀孕个体和/或泌乳期个体。具体地讲，其被施用于备孕个体和/或怀孕个体。更具体地讲，其将被施用给怀孕的个体。

如果将肌醇与一种或多种益生菌相组合，并任选地进一步与维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种相组合，施用于备孕个体，其可以例如在怀孕或希望怀孕前至少1个月、2个月、3个月或4个月期间施用。如果肌醇和一种或多种益生菌相组合，并任选地进一步与维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种相组合，施用于怀孕个体，它可以在整个或部分怀孕阶段施用，例如至少4周、至少8周、至少12周、至少16周、至少20周、至少24周、至少28或至少36周，具体施用时长取决于个体的妊娠阶段。还可以在所述个体的整个或部分哺乳阶段继续施用。

由于在孕中期和孕晚期GDM的风险会增加，因此在孕中期和孕晚期进行施用可以特别有利于预防或治疗GDM，或预防怀孕个体或其后代出现与GDM相关的病症。

肌醇与一种或多种益生菌相组合，任选地进一步与维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种相组合，可以适于个体摄取的任何形式施用或利用，例如能够以组合物形式使用，该组合物为例如粉末营养组合物、食物产品、功能性食物产品、饮品(饮料)、乳制品、药物制剂、宠物食物产品、功能性食品、营养补充剂(例如喷洒在食物上或溶解在水性介质(例如水或果汁或乳)中的粉末状营养补充剂)。

当组合物为粉末状营养组合物的形式时，其还可以包含蛋白质源、碳水化合物源和脂质源，可能还有卵磷脂。它还可以包含大豆卵磷脂和/或膨松剂。蛋白质源可以是奶粉或脱脂奶粉。蔗糖和/或麦芽糖糊精可用作碳水化合物源。脂质源可以是植物油。作为另一种选择或除此之外，制剂还可包含葡萄糖浆、乳脂、柠檬酸镁、胆碱盐和胆碱酯、益生元纤维和/或抗坏血酸棕榈酸酯。例如，可添加风味物化合物(例如，可可粉或蜂蜜)来提供不同口味。

肌醇与一种或多种益生菌相组合，任选地进一步与维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种相组合，还可以与其他维生素和矿物质结合使用。例如，由政府机构(例如USRDA))推荐用于怀孕补充的维生素和矿物质，例如钙、镁、磷、铁、锌、铜、碘、硒、维生素A或视黄醇活性等同物(RAE)(例如，β胡萝卜素，或类胡萝卜素的混合物)、维生素C、维生素B1、烟酸、叶酸、生物素、维生素E。

如果肌醇和一种或多种益生菌的组合产品，任选地还组合有维生素B2，维生素B6，维生素B12和维生素D中的一种或多种，与以下量的一种或多种下列微量营养素组合使用，则可为特别有益的：100至2500mg钙、35至350mg镁、70至3500mg磷、2.7至45mg铁、1.1至40mg锌、0.1至10mg铜、22至1100μg碘、6至400μg硒、77至3000μg维生素A或例如呈β-胡萝卜素或类胡萝卜素混合物形式的视黄醇活性等同物(RAE)、8.5至850mg维生素C、0.14至14mg维生素B1、1.8至35mg烟酸、60至1000μg叶酸、3至300μg生物素、1.9至109μg维生素E。

肌醇和一种或多种益生菌的组合产品，任选地还组合有维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种，也可以有利地与至少一种寡糖和/或至少一种长链多不饱和脂肪酸(例如，花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA))组合使用。寡糖和长链多不饱和脂肪酸可以对个体施用安全的任何浓度使用。

肌醇和一种或多种益生菌的组合产品，任选地还组合有维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种，也可以与其他常用成分以所采用的组合物形式组合使用，所述组合物形式为例如粉状营养补充剂或食物产品。此类成分的非限制性示例包括：其他营养物质，例如选自脂质(除DHA和ARA之外的任选脂质)、碳水化合物和蛋白质、微量营养素(除了上面列出的那些之外)或药物活性剂；常规食物添加剂，例如抗氧化剂、稳定剂、乳化剂、酸化剂、增稠剂、缓冲剂或用于pH调节的试剂、螯合剂、着色剂、赋形剂、调味剂、渗透剂、药学上可接受的载剂、防腐剂、糖、甜味剂、质构剂、乳化剂、水、以及它们的任何组合。

然而，尽管上文有所描述，但孕期高脂肪摄入和/或母亲PUFA补充已与后代肥胖更加严重的风险增加相关。因此，在一个具体实施方案中，肌醇和一种或多种益生菌，任选地还组合有维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种，不与长链多不饱和脂肪酸和/或动物脂肪和/或植物脂肪组合使用。

在一个具体实施方案中，肌醇和一种或多种益生菌，并且任选地还组合有维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种，不与寡糖组合使用。

如上所述，GDM与可影响怀孕个体和/或其后代的多种病症相关。如果的孕期、产期、产后或随后的生命中所述怀孕个体或其后代病症发展的风险增加，则认为GDM与该病症相关。

影响怀孕个体和/或其后代的与GDM相关的病症的非限制性示例包括：早产和剖宫产、对母亲或婴儿造成的产伤、肩难产、巨大儿、后代血糖浓度过高、后代在产后立即出现和随后生命中出现的超重/肥胖以及相关代谢疾病(例如II型糖尿病、脂肪肝病和肥胖症)，以及母亲在产后立即出现或在随后生命中发展为2型糖尿病的增加的风险。因此，通过治疗或防止GDM，肌醇和益生菌和/或维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种的组合还可用于治疗或防止这些怀孕个体或其后代的这些病症。

在本发明的另一个方面，提供了肌醇和一种或多种益生菌的组合产品，其任选地还组合有维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种，用于制备药物，所述药物用于使孕前和/或孕期个体的过度脂肪蓄积最小化，和/或用于治疗或预防GDM和怀孕个体和/或其后代的与GDM相关的病症，所述药物在孕前和/或孕期和/或哺乳期期间施用给所述个体。

在另一个方面，提供了使孕前和/或孕期个体的过度脂肪蓄积最小化和/或治疗或预防GDM和怀孕个体和/或其后代的与GDM相关的病症的方法，该方法包括在孕前和/或孕期和/或哺乳期间给所述个体施用肌醇和一种或多种益生菌的组合产品和/或维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种。

GDM在以往怀孕过程中患上GDM的下列个体中更为普遍：若个体存在GDM或II型糖尿病的家族史、若个体本身超重或肥胖、若个体是人类并且年龄超过25岁，以及若个体是人类并且是黑人、西班牙裔、美洲印第安人或亚洲人。

因此，肌醇和一种或多种益生菌，任选地还组合有维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种，可特别有益于治疗和/或预防GDM，以及预防一个或多个这些子集的个体和/或其后代的与GDM相关的病症。

本领域技术人员还将清楚，肌醇和一种或多种益生菌以及本文公开的任何其他任选成分的组合可以包含在组合物中，诸如本文公开的组合物，该组合物可在本文列出的任何方法或用途中使用。

本领域的技术人员将理解，他们可以自由地组合本文所公开的本发明的所有特征。具体地讲，可将针对本发明不同实施例所描述的特征进行组合。对于具体的特征如果存在已知的等同物，则这些等同物被纳入，如同在本说明书中明确提到这些等同物。根据附图和非限制性实施例，本发明的其他优点和特征将显而易见。

现在将通过以下实施例更详细地描述本发明。

实施例

实施例1

表1列出了示例性组合物，其包含肌醇和益生菌(鼠李糖乳杆菌GG1和乳双歧杆菌BB122)的组合，并且还组合有维生素B2和维生素B6、维生素B12和维生素D。

表1中的组合物用于粉末形式的营养补充剂，该粉末形式的营养补充剂旨在喷洒到食物上。

表1：实施例1的组合物

以名称CGMCC 1.3724保藏的菌株

以名称CNCM I-3446保藏的菌株

该组合物可以例如作为套装产品提供，该套装产品包含在一个小袋中的益生菌粉末和在第二小袋中的所有其他成分。

实施例2

提供将在水中重构的用于孕妇的奶粉饮料，每份奶粉饮料由30g奶粉与表1中提及量的一半的表1所列成分混合构成。该组合物至少在孕晚期每天给孕妇施用两次。

实施例3

已经分析了孕妇的营养缺乏状况，以便优化对母体施用的组合物的配方，从而更明确地解决该特定群体的营养缺乏状况。

研究设计：

分析中包括两个母婴群体：

A)SWS群体：

该群体涉及处于妊娠晚期并且参与了南安普顿妇女调查(SWS)的501对母婴。表2汇总了所分析的SWS个体的特征。

表2：所分析的SWS个体的特征概要：

B)GUSTO群体：

该群体涉及处于妊娠晚期，并且招募从新加坡的两个主要公共产科单位，即国立大学医院(NUH)和KK女子医院(KKH)的500对母婴。将接受化疗、服用精神药物或患有I型糖尿病的母亲排除在外。表3汇总了所分析的GUSTO个体的特征。

表3：所分析的GUSTO个体的特征概要：

测定不同微量营养物质在SWS群体孕妇血清中的浓度，并且测定这些微量营养物质在GUSTO群体孕妇血浆中的浓度。对于每个群体，确定了表现出这些营养物质存在缺陷和/或不足的妇女的百分比。

维生素D浓度的测量

通过放射免疫测定法(索灵公司，美国明尼苏达州斯蒂尔沃特(Diasorin，Stillwater，Minnesota，USA))分析血清/血浆25-羟基维生素D[25(OH)D]的浓度。这种测定法测定了25(OH)D2和25(OH)D3的浓度。该测定法符合英国国家维生素D外部质量保证计划(UK National Vitamin D External Quality Assurance Scheme)的要求，并且批内测定和批间测定的CV小于10％。

根据25-羟基维生素D浓度将母亲维生素D状态按如下标准分类：<25nmol/L“缺乏”，25nmol/L至50nmol/L“不足”，50nmol/L至70nmol/L“临界”，以及>70nmol/L“充足”，如2004年英国的国家饮食与营养调查局(UK National Diet and Nutrition Survey 2004)所用。

参考文献：Ruston D,Hoare J,Henderson L,et al.The National Diet andNutrition Survey:Adults Aged 19-64Years,Vol.4:Nutritional Status(Anthropometry and Blood Analytes),Blood Pressure and PhysicalActivity.London:HMSO；2004(Ruston D、Hoare J、Henderson L等人，《英国国家饮食与营养调查：19-64岁成年人》，第4卷：营养状况(人体测量和血液分析)、血压和体力活动。伦敦：英国皇家文书局(HMSO)；2004年)。

维生素B12浓度的测量

使用贝克曼库尔特DXi 800(Beckman Coulter DXi 800)连续随机存取分析仪上的“存取免疫测定系统”通过自动免疫测定法来分析维生素B12。存取维生素B12测定法是使用存取免疫测定系统(贝克曼DxI 800(Beckman DxI 800))定量测定人血清和血浆(肝素)中维生素B12水平的顺磁性颗粒化学发光标记免疫测定法。存取维生素B12测定法是竞争性结合免疫酶测定，其在整个测定范围内表现出<12％的总不精确性。维生素B12区别于零的最低可检测水平为50pg/mL(37pmol/L)，置信度为95％。

下表示出了测量中使用的两台机器的质量控制数据。

表4：质量控制数据(右为机器1，左为机器2)

用于诊断血浆或血清中维生素B12缺乏和消耗的推荐临界值分别为<148pmol/l(<200pg/ml)和<221pmol/l(<300pg/ml)。

将血清维生素B12的测量水平<200ng/L定义为维生素B12缺乏状态的限值。

参考文献：Badiou S,Bariolet S,Laurens C,Aillaud N,Bargnoux AS,Mariano-Goulart D,Dupuy AM,Cristol JP.Comparison of isotopic and immunoenzymaticmethods for folate and vitamin B12determination.Clin Lab.2010；56:547-52(Badiou S、Bariolet S、Laurens C、Aillaud N、Bargnoux AS、Mariano-Goulart D、DupuyAM、Cristol JP，叶酸和维生素B12测定的同位素和免疫酶方法的比较，《临床实验》，2010年，第56卷：第547-552页)。Simpson JL,Bailey LB,Pietrzik K,Shane B,HolzgreveW.Micronutrients and women of reproductive potential:required dietary intakeand consequences of dietary deficiency or excess.Part I--Folate,Vitamin B12,Vitamin B6.J Matern Fetal Neonatal Med.2010Dec；23(12):1323-43(Simpson JL、Bailey LB、Pietrzik K、Shane B、Holzgreve W，微量营养物质和具有生育潜力的妇女：需要饮食摄入和饮食缺乏或过量的后果，部分I--叶酸、维生素B12、维生素B6，《母体的胎儿和新生儿医学杂志》，2010年12月，第23卷第12期：第1323-1343页)。Institute of Medicineand Committee(IOM).Dietary reference intake:folate,other B vitamins andcholine.Washington,DC:National Academy Press；199.8(美国国家医学院(IOM)，饮食参考摄入：叶酸、其他B族维生素和胆碱。华盛顿哥伦比亚特区：国家学院出版社；1998年)。

维生素B6(PLP)浓度的测量

利用具有柱后衍生和荧光检测功能的反相高效液相色谱(HPLC)法，测定5-磷酸吡哆醛(PLP)。由于没有用于维生素B6HPLC方法的外部质量方案，因此通过内部程序实现质量控制(QC)。通过向人血浆中加入PLP水溶液，制得QC物质。最终QC浓度被设计成与典型的中间范围的人类样品和预先提供的CDC“中间台(mid bench)”质量控制品相匹配。对QC物质进行加标，使得额外的含水量仅占总介质的0.02％。每次分析运行执行两次QC物质分析。如果平均回收率在标称值的95％至105％范围之外，则对该运行的分析结果进行相应纠正。质量控制中所获得的PLP值与预期值具有良好的一致性，表明这种方法的准确度较高。

如果有少数样品在初始分析中所得的浓度值位于校准范围之外，则对这几个样品重复进行分析。有甚至更少样品的浓度被报告为低于最低的校准标准，因为在极大程度上，不可能对这些样品进行再次分析。这种方法意味着，一些被再次分析的样品被报告为其浓度值远远低于最低标准，同时少数样品被呈现为值低于最低可测量值。在统计分析中，我们为具有低于底标准的值的那些样品(3个受试对象)分配了介于0与校准范围底值之间的中间值。一个个体没有PLP峰，因此其PLP浓度被设为“0”。

通常利用血浆PLP水平来评估维生素B6状态。由于血浆PLP以PLP-白蛋白复合物的形式从肝脏中运出，因此认为血浆PLP可反映肝脏B6的水平和储备。认为<20nmol/l的血浆PLP水平反映了用于评估充足性的成人不良维生素状态。因此，将血清/血浆PLP水平<20nmol/L定义为维生素B6缺乏状态的限值。

参考文献：Rybak ME,Pfeiffer CM.Clinical analysis of vitamin B6:Determination of pyridoxal 50-phosphate and 4-pyridoxic acid in human serumby reversed-phase high-performance liquid chromatography with chlorite postcolumn derivatization.Analytical Biochemistry 2004；333:336-344(Rybak ME和Pfeiffer CM，“维生素B6的临床分析：利用具有亚氯酸盐柱后衍生功能的反相高效液相色谱法测定人血清中的5-磷酸吡哆醛和4-吡哆酸”，《分析生物化学》，2004年，第333卷，第336-344页)。Lumeng L,Ryan MP,Li TK.Validation of the diagnostic value ofplasma pyridoxal 50-phosphate measurements in vitamin B6 nutrition of therat.J Nutr 1978；108:545-553(Lumeng L、Ryan MP、Li TK，“大鼠维生素B6营养中血浆5-磷酸吡哆醛测量的诊断值的验证”，《营养学杂志》，1978年，第108卷，第545-553页)；Li A,Lumeng L,Aronoff GR,Li T-K.Relationship between body store of vitamin B6 andplasma pyridoxal-P clearance:metabolic balance studies in humans.J Lab ClinMed 1985；106:491-497(Li A、Lumeng L、Aronoff GR、Li T-K，维生素B6的体内储存与血浆吡哆醛-P清除之间的关系：人体代谢平衡研究，《实验室与临床医学杂志》，1985年，第106卷，第491-497页)。Coburn SP,Lewis DL,Fink WJ,Mahuren JD,Schaltenbrand WE,Costill DL.Human vitamin B6pools estimated through muscle biopsies.Am J ClinNutr 1988；48:291–294(Coburn SP、Lewis DL、Fink WJ、Mahuren JD、Schaltenbrand WE、Costill DL，通过肌肉活检估计的人类维生素B6库，《美国临床营养学杂志》，1988年，第48卷，第291-294页)。

叶酸浓度的测量

使用贝克曼库尔特DXi 800(Beckman Coulter DXi 800)连续随机存取分析仪上的“存取免疫测定系统”通过自动免疫测定来分析血清/血浆叶酸浓度。存取叶酸测定法是使用存取免疫测定系统(贝克曼DxI 800(Beckman DxI 800))定量测定人血清、血浆(肝素)或红血细胞中叶酸水平的顺磁性颗粒化学发光标记免疫测定法。存取叶酸测定法是竞争性结合受体测定，其在整个测定范围内表现出低于15％的总不精确性。叶酸区别于零的最低可检测水平为0.5ng/mL(1.1nmol/L)，置信度为95％。

下表示出了测量中使用的两台机器的质量控制数据。

表5：质量控制数据(右为机器1，左为机器2)

在分析中，叶酸水平<3ng/ml被定义为叶酸缺乏状态的限值。

参考文献：1.Badiou S,Bariolet S,Laurens C,Aillaud N,Bargnoux AS,Mariano-Goulart D,Dupuy AM,Cristol JP.Comparison of isotopic andimmunoenzymatic methods for folate and vitamin B12 determination.ClinLab.2010；56:547-52(Badiou S、Bariolet S、Laurens C、Aillaud N、Bargnoux AS、Mariano-Goulart D、Dupuy AM、Cristol JP，叶酸和维生素B12测定的同位素和免疫酶方法的比较，《临床实验》，2010年，第56卷：第547-552页)。

铁浓度的测量

使用商业酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(AssayMax人铁蛋白ELISA，AssayPro)测量铁蛋白。简言地讲，将50μl样品或标准品或对照品添加到预涂布的微板上，并且夹在固定化的抗体和对铁蛋白特异的生物素化的多克隆抗体之间，铁蛋白由链霉亲和素-过氧化物酶缀合物识别。然后洗去所有未结合的物质，并且加入过氧化物酶底物。停止显色，并且在微量板读数器上在450nm的波长下立即测量颜色的强度。

认为血清/血浆铁蛋白水平<15ng/ml表示铁耗尽(缺乏)。

参考文献：由WHO在Serum ferritin concentrations for the assessment ofiron status and iron deficiency in populations.Vitamin and Mineral NutritionInformation System.Geneva,World Health Organization,2011(WHO/NMH/NHD/MNM/11.2)(《血清铁蛋白浓度，维生素和矿物质营养信息系统》，日内瓦，世界卫生组织，2011年，(WHO/NMH/NHD/MNM/11.2))中所述的“Serum ferritin concentrations for theassessment of iron status and iron deficiency in populations”(用于评估人群铁状态和铁缺乏的血清铁蛋白浓度)一文。

锌浓度的测量

通过电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS模型NexIon 300D，瑞士里施珀金埃尔默公司(Perkin Elmer；Rotkreuz,Switzerland))测定血清/血浆锌(Zn)浓度。将血清样品解冻，并且在加入100μl浓度为1mg/l的In作为内标后，使用0.14M HNO3在塑料管中将50-100μl血清稀释至5ml。使用含有25μg/l、50μg/l、75μg/l、100μg/l的Zn和L-半胱氨酸盐酸盐单水合物的标准品校准ICP-MS以进行基质匹配。被选择用于分析的同位素是66Zn。ICP-Ms配备有玻璃旋流喷雾室和Meinhard喷雾器(样品吸收率为300μl/min)。使用碰撞模式以3.5ml/min的氦气池气体流量去除干扰。冻干的人类对照血清与样品一起分析(Seronorm TraceElement Serum，水平1和2，Sero AS，Billingstad，挪威，参考编号：201405和203105)用于质量控制。对于Zn而言，用质量控制样品水平1获得的该方法的中间重现性的变异系数CV(iR)为2.5％。用质量控制样品水平2获得的该方法的中间重现性的变异系数CVn(iR)为32.0％。两种浓度水平下的回收率均在94％-107％的范围内。

血清/血浆锌水平<700/L被定义为锌缺乏状态的极值。

参考文献：Hotz C,Peerson JM and Brown KH.Suggested lower cutoffs ofserum zinc concentrations for assessing zinc status:reanalysis of the secondNational Health anNutrition Examination Survey data(1976–1980).Am J ClinNutr.2003；78:756–64(Hotz C、Peerson JM和Brown KH，建议的用于评估锌状态的血清锌浓度的较低截断值：第二国家健康和营养检查调查数据的再分析(1976年–1980年)，《美国临床营养学杂质》，2003年，第78卷：第756-764页)。

结果

血清/血浆样品分析的结果表明，在妊娠晚期观察到特定微量营养物质的缺乏。

妊娠晚期维生素D不足(<50nmol/L)对于来自SWS群体(39％)和来自GUSTO群体(47％)的妇女极其普遍。

维生素B6缺乏(<20nmol/L)对于来自SWS群体(70％)的妇女极为普遍，在GUSTO群体(16％)中较为常见但并不是非常普遍。

妊娠晚期维生素B12缺乏(<200ng/L)对于来自SWS群体(65％)和来自GUSTO群体(62％)的妇女极其普遍。

叶酸缺乏(<3ng/ml)对于来自SWS群体(1％)和来自GUSTO群体(1％)的妇女极为罕见。

来自SWS群体(4％的妇女的铁蛋白水平<15ng/ml)和来自GUSTO群体(7％的妇女的铁蛋白水平<30nmol/L)的妇女的铁缺乏症出现频率低。

锌缺乏(<700/L)对于来自SWS群体的妇女(40％)较为普遍，而对于来自GUSTO群体(4.8％)的妇女而言发生率较低。

结果汇总在图1中。因此，这些结果表明，孕妇的主要缺乏的营养物质是维生素B6、维生素B12和维生素D，同时在较小程度上缺乏锌。相反，孕妇不太经常缺乏叶酸和铁。

实施例4

在本研究中，通过饮食摄入调查和与最新版本的中国膳食推荐摄入量(DRI)相比较，针对中国孕妇的代表性样本评估了孕妇的营养状况。

研究设计

研究个体

联系了来自8个中国城市(包括北京、成都、广州、兰州、上海、沈阳、苏州和郑州)的600位孕妇。她们中有20％的人拒绝参加调查，同时有480名妇女同意参加调查。480人中有1人未完成问卷。因此，479份调查表被认为有效。

入选/排除标准

孕妇在总体上必须是健康的；没有慢性疾病的迹象、没有饮酒(定义为每周饮用两次以上)或吸烟习惯。将具有以下病症孕妇也排除在外：妊娠期糖尿病、高血压、传染病(结核病、病毒性肝炎和HIV感染)、可能会限制她们在研究期间回答问题和接受药物的能力的精神疾病或回忆障碍。

入选后，参与者在与调查者一对一面试中完成若干调查问卷，其包括一般信息、人体测量结果、生活习惯、营养补充情况、饮食频率问卷(FFQ)和调查前一天的24小时饮食回顾。指导参与者完成饮食记录的方式。使用食物模型和测量器具来度量份量大小。参与者必须回答表格上的所有问题，否则调查问卷被认为无效。

统计分析

由两人在分开的两台计算机上使用Epidata执行数据输入，以保证输入的准确性。

营养物质摄入评估

通过使用2002年的中国食物成分数据库(CFCD)来计算营养物质摄入量。对包括维生素B2(核黄素)在内的多种营养物质进行分析。使用平均需求量估算值(EAR)和可耐受最高摄入量水平(UL)来确定营养物质的不足和过量摄入情况。

参考文献：Yang Yue-xin,WANG Guang-ya,PAN Xing-chang,et al.Chinese FoodComposition Table2002[M].Beijing:Pecking University Medical Press,2002.21-219.Chinese Nutrition Society.Chinese DRIs 2013[M].Beijing.published date2014.6.12(Yang Yue-xin、WANG Guang-ya、PAN Xing-chang等人，中国食物成分表，2002年，专著，北京：北京大学医学出版社，2002年，第21-219页。中国营养学会，中国膳食推荐摄入量(DRI)，2013年，专著，北京，出版日期：2014年6月12日)。

食物类群摄入量评估

根据中国居民平衡膳食塔(中国营养学会(Chinese Nutrition Society)出版)，食物被分类为八个主要食物类群。这些类别是“谷物、马铃薯和豆类”、“蔬菜”、“水果”、“肉和家禽”、“鱼和虾”、“鸡蛋”、“乳和奶制品”、“大豆和大豆制品和坚果”、“油”、“盐”、“水”和“饮料”。

有402人(96.2％)报告称每日食用“蔬菜”，其中只有15人(3.6％)报告称仅每周食用“蔬菜”。有416名(99.5％)的妇女报告称每天食用了“水果”，其余的人报告称每周食用“水果”。

结果

表6和表7分别示出了营养物质摄入量分析结果，以及对于中国DRI而言该摄入量的充分性。

表6：个体摄入的维生素B2平均量

	所有个体	孕早期	孕中期	孕晚期
					维生素B2(mg)	1.3±0.9	1.2±0.9	1.4±1.1	1.4±0.9

表7：膳食参考摄入量和个体摄入量的评估

表8示出了食物类群摄入量分析结果，以及对于中国DRI而言该摄入量的充分性。

表8：食物类群摄入量分析的结果

这些分析结果表明，在中国，在怀孕期间：

约一半(50.6％)妇女的维生素B2摄入量低于推荐摄入量(<1mg/天)

近一半(47.2％)妇女的蔬菜摄入量低于推荐摄入量。

近三分之一(27.6％)妇女的水果摄入量低于推荐摄入量。

这些结果强有力地表明应使用维生素B2和主要存在于水果和蔬菜中的营养物质来补充母亲的饮食。

实施例5

将从查尔斯河实验室(Charles River)(法国和美国)购得的80只体重相近的4-5周龄雌性未交配Goto Kakizaki(GK)大鼠在控温室(22±1℃)中以12小时的光照/黑暗循环单独笼养，并持续喂食AIN-93G啮齿动物生长饲料(研究饲料，美国，表9)。

驯化一周后，在基于AUC葡萄糖值和体重进行随机化后将GK大鼠分成4组(n＝20)并接受如下相应处理10周：

1.对照组：GK雌性大鼠自由采食AIN-93G饲料+对照明胶(表10)。

2.肌醇组：GK雌性大鼠自由采食补充有肌醇饲料的AIN93-G饲料(每100g饲料中1g肌醇^*)+对照明胶(表10)。

3.益生菌组：GK雌性大鼠自由采食AIN93-G+含有10⁹个LPR CFU和10⁹个乳双歧杆菌CFU的明胶(表10)。

4.混合组：GK雌性大鼠自由采食补充有肌醇饲料的AIN93G饲料(每100g饲料中1g肌醇)+含有10⁹个LPR CFU和10⁹个乳双歧杆菌CFU的明胶(表10)。

^*柯驰医药有限公司(Kirsh Pharma)

在15周龄时，将雌性大鼠与Wistar雄性大鼠(法国查尔斯河实验室(CharlesRivers,France))合笼，直到观察到阴道栓，这指示妊娠第0.5天。雌性大鼠在整个妊娠期间保持喂食为其所分配的实验饲料。在妊娠16.5天对所有雌性(每组n＝20)进行OGTT，在妊娠19.5天在禁食6小时后处死一半动物(每组n＝9-11)。

表9：AIN-93G研究饲料

表9.5–AIN-93G中添加维生素混合物

表10：实验明胶的组成

	处理	对照
			明胶(g)	12	12
糖精(mg)	0.06	0.06
			益生菌(g)*	7.7	0
麦芽糖糊精混合物(g)	0	6.7
			总干物质+水(mL)	80.2	81.2
总计(mL)	99.96	99.96

*含有2.53E+10cfu/g鼠李糖乳杆菌(Lactobacillts rhamnosus NCC4007)和1.58E+10cfu/g乳双歧杆菌(Bifido Lactis NCC2818)的预混合物。

测量和分析

生理测量和样品收集：

·将5周龄和妊娠16.5天的所有动物在白天食物剥夺6小时(从上午7.30至下午13:30)后进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)。在OGTT期间，从尾静脉采集两个基线血样，其中在取样(时间-10和0)之间间隔至少10分钟，随后以1.5g/Kg体重的剂量经口灌服葡萄糖溶液(20％重量体积比(wt/v))。然后在施用葡萄糖后15、30、45、60、90和120分钟时从尾部切口收集另外的血样。使用Contour Next血糖仪(瑞士苏黎世的拜耳公司(Bayer AG,Zurich,Switzerland))直接分析所有血样的血糖水平。

·在整个研究中每周测量动物的体重和食物摄取量2次。

·在治疗10周之前和之后通过使用核磁共振仪(EchoMRI TM 2004，美国休斯顿声望科技医疗公司(Echo Medical Systems,Houston,USA))测量身体组成(体脂率、瘦体质量和身体水分含量)。从这些收集的数据，可以如下计算脂肪百分比变化和脂肪增量/体重增量：

·脂肪百分比变化：(治疗结束时的脂肪百分比-治疗开始前的脂肪百分比)

·脂肪增量/体重增量：(治疗期结束时的脂肪(g)-治疗开始前的脂肪(g))/(治疗期结束时的体重(g)-治疗开始前的体重(g))

·瘦体增量/体重增量：(治疗期结束时的瘦体(g)-治疗开始前的瘦体(g))/(治疗期结束时的体重(g)-治疗开始前的体重(g))

·脂肪增量：治疗期结束时的脂肪(g)-治疗开始前的脂肪(g)

·瘦体增量：治疗期结束时的瘦体(g)-治疗开始前的瘦体(g)

·脂肪质量百分比：脂肪质量(g)/体重*100

·瘦体质量百分比：瘦体质量(g)/体重*100

处死：在白天食物剥夺6小时(从上午7:30至下午13:30)之后，将雌鼠斩首，通过解剖收集器官，称重并立即在液氮中冷冻。将其保存在-80℃直至分析。

·胰腺胰岛素测量：在处死期间将胰腺称重，并保存在酸-乙醇-H2O溶液中，直至提取胰岛素以测定胰腺胰岛素，将胰腺用酸-乙醇(溶液体积比(v/v)：75％乙醇，1.5％的37％HCl和23.5％蒸馏水)匀浆化，并在-20℃下温育过夜。使用购自美国伊利诺伊州晶体化学公司(Crystal Chem.Inc(IL,USA))的试剂盒，通过ELISA方法测量上清液中的胰岛素含量。

结果：每次测量的平均值示于表11中。在图2至图4中还可以看到脂肪百分比变化、脂肪增量/体重增量、μg胰腺胰岛素/g胰腺的结果。

表11

实施例6

·对照组：GK雌性大鼠自由采食AIN-93G饲料+对照明胶(表10)。

·肌醇组：GK雌性大鼠自由采食补充有肌醇饲料的AIN93-G饲料(每100g饲料中1g肌醇^*)+对照明胶(表10)。

·益生菌组：GK雌性大鼠自由采食AIN93-G+含有10⁹个LPR CFU和10⁹个乳双歧杆菌CFU的明胶(表10)。

·混合组：GK雌性大鼠自由采食补充有肌醇饲料的AIN93G饲料(每100g饲料中1g肌醇)+含有10⁹个LPR CFU和10⁹个乳双歧杆菌CFU的明胶(表10)。

^*柯驰医药有限公司(Kirsh Pharma)

在15周龄时，将雌性大鼠与Wistar雄性大鼠(法国查尔斯河实验室(CharlesRivers,France))合笼，直到观察到阴道栓，这指示妊娠第0.5天。雌性大鼠在整个妊娠期间保持喂食为其所分配的实验饲料。分娩时，只取每窝最少有8只仔鼠(其中最少有3至4只雄性仔鼠)的母鼠及其仔鼠用于本研究。控制每窝仔鼠的数量，不超过8只，且优选雄性仔鼠。在哺乳期期间，所有的大鼠自由采食AIN-93G啮齿动物生长饲料(研究饲料，美国(USA)，表1)。仔鼠16日龄之前，一直保持母鼠乳汁喂养。在此期间，让母鼠自由地用乳汁喂养仔鼠。然后，每笼饲养两只仔鼠，并且从第22天至第53天喂食AIN93-G。每周测量一次后代的体重，在21日龄时评估身体成分，并且在100日龄时处死所有动物。

测量和分析

生理测量和样品收集：

·在整个研究中每周测量后代的体重1-2次。

·在21日龄时使用核磁共振仪(EchoMRI TM 2004，美国休斯顿声望科技医疗公司(Echo Medical Systems,Houston,USA))测量瘦体质量。根据所收集的这些数据，可以如下计算瘦体质量百分比：

·瘦体质量百分比：瘦体质量(g)/体重

处死：在禁食6小时后(上午7:30至下午13:30)，在麻醉(异氟烷)状态下处死后代。在EDTA管中收集血液，并且通过Cobas(Cobas C111，罗氏公司(Roche))测定血浆FFA。

·胰腺胰岛素测量：在处死期间对胰腺称重，并将其保存在酸-乙醇-H2O溶液中，直至提取胰岛素。为了测定胰腺胰岛素，将胰腺用酸-乙醇(溶液v/v：75％乙醇，1.5％的37％HCl和23.5％蒸馏水)匀浆化，并在-20℃下温育过夜。使用购自美国伊利诺伊州晶体化学公司(Crystal Chem.Inc(IL,USA))的试剂盒，通过ELISA方法测量上清液中的胰岛素含量。

结果：每次测量的平均值示于表12中。

表12

	对照	肌醇	益生菌	混合物(肌醇+益生菌)
					21日龄时的瘦体质量(以百分比计)	82.8	81.8	82.1	83.2
21日龄时的瘦体质量(以g计)	36.2	39.3	38.2	34.6
					21日龄时的体重(以g计)	44.3	48.1	46.4	43.9
整个胰腺中的胰岛素(μg)	84	89	90	107
					μg胰腺胰岛素/g胰腺	68	76	75	89
FFA血浆(mmol/l)	0.43	0.41	0.43	0.40

实施例7

肌醇和益生菌的补充如何影响怀孕期间大鼠腓肠肌中的SLC5A11转录的测量。

对实施例6中描述的每组10只雌鼠的肌肉(腓肠肌)组织样品进行基因表达分析。在妊娠19.5天时，将大鼠禁食6小时后在麻醉条件(异氟烷)下处死。使用超过31,000个探针组，使用全面覆盖转录大鼠基因组的大鼠基因组230 2.0阵列(RatGenome 230 2.0Array)进行此分析，从而分析来自超过28,000个完全证实的大鼠基因的30,000多个转录物和变体。

对每个样品执行如下步骤：

1)用于微阵列分析的样品制备。

首先，使用Covaris cryoPREP^TMCP02(Covaris公司)将组织粉碎，然后取10-20mg粉末移入冷冻于液氮中的试管内以避免解冻样品。然后，使用FastPrep和AgencourtRNAdvance组织试剂盒方案(2015年1月版本)进行裂解和提取。使用Quant-it Quant-iT^TM RNA试剂和试剂盒对提取的RNA定量后，使用标准灵敏度RNA分析试剂盒和片段分析仪(先进分析技术公司(Advanced Analytical Technologies,Inc))进行质量控制。RQN>7.5的所有样品适合用于cRNA合成。使用TotalPrep^TM-96RNA扩增试剂盒进行cRNA合成，所述合成以在9μL不含核酸酶的水中的300ng总RNA起始，并对商业方案进行修改以使用Agencourt RNAclean XP试剂盒执行纯化步骤，而非使用Illumina TotalPrep-96试剂盒的两步纯化步骤。然后，分别使用Quant-it Quant-iT^TM RNA试剂和试剂盒以及标准灵敏度RNA分析试剂盒对cRNA进行定量和质量控制。使用片段分析仪(先进分析技术公司(Advanced Analytical Technologies,Inc))，并且预期的平均大小应当为1580个核苷酸(nt)或更大。最后，使用5X阵列片段化缓冲液(Affymetrix试剂盒IVT)将cRNA片段化，并将样品在94℃下温育35分钟。最后，进行杂交，首先制备主混合物，所述主混合物含有每个样品3.7μL的对照寡核苷酸B2(3nM)、11μL的20X杂交对照(必须先在65℃下加热5分钟)、110μL的2X杂交混合物、22μL的DMSO以及43.9μL的不含核酸酶的水。对于每个样品，将29.4μL片段化的cRNA+190.6μL杂交混合物加入250μL PCR板中，并将这些杂交混合物保存在-20℃下直至使用，或者如果不在一周内使用则保存在-80℃下。

2)微阵列杂交

对于此步骤，使用杂交洗涤和染色试剂盒(产品编号：900720，美国昂飞公司(Affymetrix,Inc.))。首先，在PCR仪中将杂交混合物加热至99℃保持5分钟，再冷却至45℃保持另外5分钟。同时，对于每个阵列(大鼠基因组230 2.0阵列，2pk基因芯片，产品编号：900505，美国昂飞公司(Affymetrix,Inc.))，使用200μL的预杂交混合物填充探针阵列，然后在45℃的杂交炉(Affymetrix杂交炉645，美国昂飞公司(Affymetrix,Inc.))中旋转温育10分钟。接着，从杂交炉中取出阵列，去除预杂交溶液，再用200μL杂交混合物重新填充。最后，将探针阵列置于杂交炉中，设定为45℃，杂交16小时。

3)微阵列染色和扫描

对于此表达洗涤，严格遵循如制造商所述的染色和扫描方案。使用Affymetrix流控技术工作站450、Affymetrix基因芯片自动装片机和Affymetrix基因芯片扫描仪处理阵列。提取基因表达水平数据，并使用来自专用商业软件的工作流程进行分析。

结果示于图6中。

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(本页非国际申请一部分,并且不作为国际申请中的一页)

Claims

1.一种对母体施用的组合物，所述组合物包含肌醇和益生菌，其中所述益生菌优选地包含乳杆菌属(Lactobacillus)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)的组合，并且其中更优选地所述乳杆菌属(Lactobacillus)是可以以保藏号CGMCC 1.3724获得的鼠李糖乳杆菌GG(lactobacillus rhamnosus GG)菌株，和/或所述双歧杆菌属是以保藏号CNCM I-3446保藏的乳双歧杆菌BB12(Bifidobacterium lactis BB12)菌株。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物还包含至少一种维生素，所述维生素选自维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素D以及其混合物。

3.根据权利要求2所述的组合物，其中如果所述组合物包含维生素B2，则维生素B2以每日剂量0.14mg至14mg的量存在于所述组合物中，如果所述组合物包含维生素B6，则维生素B6以每日剂量0.19mg至19mg的量存在，如果所述组合物包含维生素B12，则维生素B12以每日剂量0.26μg至26μg的量存在；并且如果所述组合物包含维生素D，则维生素D以每日剂量1.5μg至100μg的量存在。

4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于它还包含锌。

5.根据前述权利要求中任一项所述组合物，所述组合物包含肌醇、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素D、乳双歧杆菌BB12 CNCMI-3446和鼠李糖乳杆菌GG CGMCC 1.3724，并且优选地包含0.2mg至5mg的肌醇、0.14mg至14mg的维生素B2、0.19mg至19mg的维生素B6、0.26μg至26μg的维生素B12、1.5μg至100μg的维生素D、10⁵至10¹²cfu的乳双歧杆菌BB12CNCMI-3446，以及10⁵至10¹²cfu的鼠李糖乳杆菌GG CGMCC 1.3724，所有量均由日剂量限定。

6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于将所述组合物施用给备孕妇女，施用给孕妇或施用给哺乳期的妇女，并且优选地，其中所述组合物呈要在乳或水中重构的粉末状营养组合物的形式、食品、饮料、营养补充剂或功能性食品的形式。

7.一种套装产品，所述套装产品包含至少两种物理上分开的组合物，每种所述组合物包含至少一种权利要求5所述的成分，其中至少一种所述物理上分开的组合物包含肌醇，并且至少一种所述物理上分开的组合物包含益生菌。

8.一种如权利要求1至权利要求6中任一项所定义的组合物，所述组合物用于最大程度减轻怀孕个体或备孕个体的过度脂肪蓄积，和/或治疗或预防妊娠期糖尿病和怀孕个体和/或其后代的与所述妊娠期糖尿病相关病症，其中所述组合物在孕前和/或孕期和/或哺乳期期间施用给所述个体。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述个体是选自以下项的哺乳动物：猫、狗、人类，并且其中所述组合物优选地经肠内施用，更优选口服施用，并且优选地为粉末状营养组合物、食品、饮料、营养补充剂、诸如粉末状营养补充剂或功能性食品。

10.根据权利要求8或权利要求9所述的组合物，其中与妊娠期糖尿病相关的所述病症是早产和剖宫产、对母亲或婴儿造成的产伤、肩难产、巨大儿、后代血糖浓度过高、后代在产后立即出现和随后生命中出现的超重/肥胖以及相关代谢疾病，例如II型糖尿病、脂肪肝病和肥胖症，以及母亲在产后立即出现或在随后生命中发展为2型糖尿病的增加的风险。

11.肌醇和一种或多种益生菌的组合产品，其用于最大程度减轻怀孕个体或备孕个体的过度脂肪蓄积，和/或治疗或预防妊娠期糖尿病和怀孕个体和/或其后代的与妊娠期糖尿病相关的病症，其中所述肌醇和一种或多种益生菌的组合产品在孕前和/或孕期和/或哺乳期期间施用给所述个体，其中所述益生菌优选地选自：乳杆菌属、双歧杆菌属及其组合，更优选地选自：鼠李糖乳杆菌GG(CGMCC 1.3724)、乳双歧杆菌BB-12(CNCM I-3446)及其组合，并且其中所述肌醇和一种或多种益生菌同时施用、分开施用、或依次施用。

12.根据权利要求11所述的肌醇和一种或多种益生菌的组合产品，其中所述肌醇和一种或多种益生菌的组合产品与维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种组合施用，并且其中所述肌醇和/或一种或多种益生菌与维生素B2、维生素B6、维生素B12和维生素D中的一种或多种分开地或依次施用，并且其中与妊娠期糖尿病相关的所述病症是早产和剖宫产、对母亲或婴儿造成的产伤、肩难产、巨大儿、后代血糖浓度过高、后代在产后立即出现和随后生命中出现的超重/肥胖以及相关代谢疾病，例如II型糖尿病、脂肪肝病和肥胖症，以及母亲在产后立即出现或在随后生命中发展为2型糖尿病的增加的风险。

13.一种最大程度减轻怀孕个体或备孕个体的过度脂肪蓄积、和/或治疗或预防妊娠期糖尿病和怀孕个体和/或其后代的与所述妊娠期糖尿病相关病症的方法，所述方法包括在孕前和/或孕期和/或哺乳期间给所述个体施用由权利要求1至权利要求6中任一项所定义的组合物，或施用由权利要求11至权利要求12中任一项所定义的肌醇和一种或多种益生菌的组合产品。

14.根据权利要求7所述的套装产品，所述套装产品用于最大程度减轻怀孕个体或备孕个体的过度脂肪蓄积，和/或治疗或预防妊娠期糖尿病和怀孕个体和/或其后代的与所述妊娠期糖尿病相关的病症，所述套装产品还包括指示个体的剂量需求的标签。

15.根据权利要去1至权利要求6中任一项所述的组合物，或根据权利要求11至权利要求12中任一项所述的肌醇和一种或多种益生菌组合产品，所述组合物或所述组合产品用于制备最大程度减轻怀孕个体或备孕个体的脂肪蓄积、和/或用于治疗或预防妊娠期糖尿病和怀孕个体和/或其后代的与所述妊娠期糖尿病相关的病症的组合物。