CN106680505A - 一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法 - Google Patents
一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106680505A CN106680505A CN201710004878.6A CN201710004878A CN106680505A CN 106680505 A CN106680505 A CN 106680505A CN 201710004878 A CN201710004878 A CN 201710004878A CN 106680505 A CN106680505 A CN 106680505A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- latex
- monoclonal antibodies
- monoclonal antibody
- matchable
- paired
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000004816 latex Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 229920000126 latex Polymers 0.000 title claims abstract description 32
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 13
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102100021184 Golgi membrane protein 1 Human genes 0.000 description 3
- 101001040742 Homo sapiens Golgi membrane protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-oxoniopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)C1=O GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ABFYEILPZWAIBN-UHFFFAOYSA-N 3-(iminomethylideneamino)-n,n-dimethylpropan-1-amine;hydrochloride Chemical compound Cl.CN(C)CCCN=C=N ABFYEILPZWAIBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 1
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法：以多株可以相互两两配对的单克隆抗体修饰胶乳微球，进行胶乳增强免疫比浊方法检测对应抗原，即可高灵敏、高特异地获得样本中抗原含量信息。该方法与传统的多克隆抗体标记胶乳增强免疫比浊方法的优点在于，单克隆抗体特异性较高，而且利用相互两两配对的单克隆抗体，针对抗原的结合位点更多，抗体与抗体之间不会形成结合位置的竞争，因而也可以提高检测灵敏度。
Description
技术领域
本发明涉及医学检测和生物技术领域，尤其涉及基于一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法。本发明可应用于超灵敏抗原检测，为抗原检测手段提供一种可供选择的方法。
背景技术
胶乳增强免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促凝剂的作用下，自液相析出，形成微粒使反应液出现浊度，从而计算出待检样品中抗原的含量。这种方法可用仪器检测，自动化程度高，提高了检测的速度、灵敏度和易操作性，适合大量样本的临床检测。传统的胶乳增强免疫比浊方法是用胶乳微球标记多克隆抗体，但是多克隆抗体能与多种抗原表位结合，因此多克隆抗体的特异性较差。单一的单克隆抗体只识别某一特定抗原表位，因此单克隆抗体的特异性较高，但是这种超高的特异性会使敏感性降低，所以我们设计了利用多株单克隆抗体进行检测的方法，这种方法即克服了多克隆抗体特异性低的缺点，又克服了单一的单克隆抗体敏感性低的缺点，而且利用两两相互配对的单克隆抗体，针对抗原的结合位点更多，抗体与抗体之间不会形成结合位置的竞争，因而更加的提高了检测的灵敏度。
发明内容
本发明设计了多株单克隆抗体同时包被微球的方法。该方法与传统的多克隆抗体标记胶乳增强免疫比浊方法的优点在于，单克隆抗体的特异性较高。单一的单克隆抗体只识别某一特定抗原表位，这种超高的特异性会使敏感性降低，所以我们设计了利用多株单克隆抗体进行检测的方法，这种方法即克服了多克隆抗体特异性低的缺点，又克服了单一的单克隆抗体敏感性低的缺点。
筛选了两两相互配对的多株单克隆抗体。针对抗原的结合位点更多，抗体与抗体之间不会形成结合位置的竞争，因而可以提高检测灵敏度。
所述多株单克隆抗体，主要特征为：包括但不限于三株或者三株以上的单克隆抗体。
所述确定两两配对的实验可以是但不限于ELISA和涉及到双抗体夹心实验筛选出的成对单克隆抗体等。
与现有技术相比，本发明具有以下特点：
传统的胶乳增强免疫比浊方法是用胶乳微球标记多克隆抗体，但是多克隆抗体能与多种抗原表位结合，因此多克隆抗体的特异性较差。单一的单克隆抗体只识别某一特定抗原表位，因此单克隆抗体的特异性较高，但是这种超高的特异性会使敏感性降低，所以我们设计了利用多株单克隆抗体进行检测的方法，这种方法即克服了多克隆抗体特异性低的缺点，又克服了单一的单克隆抗体敏感性低的缺点，而且我们利用可以相互两两配对的单克隆抗体更加增加了检测的敏感性。
附图说明
以下结合附图及实施例对本发明作进一步描述。
图1为一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法流程示意图。
图2为胶乳微球包被三株单克隆抗体、胶乳微球包被多克隆抗体和ELISA三种方法检测血清中GP73含量的ROC曲线。
具体实施方式
以下结合实例对本发明作进一步描述：
本发明公布了一种基于多株相互两两配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法，以多株可以相互两两配对的单克隆抗体修饰胶乳微球，进行胶乳增强免疫比浊方法检测对应抗原，即可获得样本中抗原含量信息。在本发明的一个较佳的实例中，以羧基化的胶乳微球包被三株两两配对的单克隆抗体，在全自动生化分析仪上进行信号的检测。
实施例：以肝癌肿瘤标志物GP73蛋白为对象进行检测。
1.在胶乳微球上包被单克隆抗体。将107nm的胶乳微球(100μL with 5％wt/vol)分散于50mM的HEPES溶液(pH 7.0)中，加入三株单克隆抗体(0.5mg/mL)在摇床上孵育30min。加入0.5mg/mL的NHS(N-hydroxysulfosuccinimide)和EDC(1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl carbodiimide hydrochloride)孵育30min后用1％的封闭液BSA(Bovine Serum Albumin)封闭30min。胶乳微球包被的抗体分散在含有1％BSA的Tris-HCl(1.0Mm，pH 6.8)中，超声至溶液透光。试剂保存在4℃待用。
2.样本检测。样本检测在自动生化分析仪中进行，10μL的样本和240μL的试剂1(10mM Tris-HCl(pH 7.0),150mM NaCl,0.01％Tween-20and PEG-6000)加入到反应盘中，孵育5min后，加入试剂2(胶乳微球包被的单克隆抗体)启动免疫比浊反应。反应5min后记录570nm波长处第5min和第10min处吸光度的变化。
3.免疫比浊检测结果如图2所示。胶乳微球包被三株单克隆抗体的反应体系检测肝癌血清样本中GP73的敏感性和特异性(96.7％和93.3％)均高于胶乳微球包被多克隆抗体(94.6％和72.4％)和ELISA(70.0％和83.3％)。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上的限制，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，依据本发明的技术实质，对以上实施例所作的任何简单的修改、等同替换与改进等，均仍属于本发明技术方案的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法，其特征在于：以单克隆抗体修饰胶乳微球，进行胶乳增强免疫比浊方法检测对应抗原，从而获得样本中抗原含量信息；其中所采用的单克隆抗体为多株单克隆抗体，且所述多株单克隆抗体相互两两配对。
2.根据权利要求1所述的基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法，其特征在于：所述多株单克隆抗体包括三株或者三株以上的单克隆抗体。
3.根据权利要求1所述的基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法，其特征在于：所述两两配对的单克隆抗体是通过筛选出的成对单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法，其特征在于：所述两两配对的单克隆抗体是通过利用双抗体夹心实验筛选出的成对单克隆抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710004878.6A CN106680505A (zh) | 2017-01-04 | 2017-01-04 | 一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710004878.6A CN106680505A (zh) | 2017-01-04 | 2017-01-04 | 一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106680505A true CN106680505A (zh) | 2017-05-17 |
Family
ID=58848977
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710004878.6A Pending CN106680505A (zh) | 2017-01-04 | 2017-01-04 | 一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106680505A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108008130A (zh) * | 2017-11-24 | 2018-05-08 | 海格德生物科技（深圳）有限公司 | 基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒及其制备方法 |
| CN110865192A (zh) * | 2019-11-21 | 2020-03-06 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种基于胶乳增强免疫比浊法测定gp73的试剂盒及其制备使用方法 |
| CN114324877A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-12 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | 一种兼具低值精密度以及抗hook能力的胶乳免疫比浊试剂 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10123137A (ja) * | 1996-10-16 | 1998-05-15 | Sekisui Chem Co Ltd | 高感度免疫測定法 |
| EP2042870A1 (en) * | 2007-09-28 | 2009-04-01 | Fujifilm Corporation | Method of high sensitive immunoassay |
| CN102944679A (zh) * | 2012-11-15 | 2013-02-27 | 北京康美天鸿生物科技有限公司 | 一种胶乳比浊法进行视黄醇结合蛋白检测的试剂盒 |
| CN104407145A (zh) * | 2014-10-28 | 2015-03-11 | 绍兴市疾病预防控制中心 | 肠道病毒71型乳胶凝集检测试剂盒制备及应用 |
| CN105548557A (zh) * | 2015-12-08 | 2016-05-04 | 苏州德沃生物技术有限公司 | 超敏乳胶增强免疫比浊检测试剂及其检测方法和应用 |
-
2017
- 2017-01-04 CN CN201710004878.6A patent/CN106680505A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10123137A (ja) * | 1996-10-16 | 1998-05-15 | Sekisui Chem Co Ltd | 高感度免疫測定法 |
| EP2042870A1 (en) * | 2007-09-28 | 2009-04-01 | Fujifilm Corporation | Method of high sensitive immunoassay |
| CN102944679A (zh) * | 2012-11-15 | 2013-02-27 | 北京康美天鸿生物科技有限公司 | 一种胶乳比浊法进行视黄醇结合蛋白检测的试剂盒 |
| CN104407145A (zh) * | 2014-10-28 | 2015-03-11 | 绍兴市疾病预防控制中心 | 肠道病毒71型乳胶凝集检测试剂盒制备及应用 |
| CN105548557A (zh) * | 2015-12-08 | 2016-05-04 | 苏州德沃生物技术有限公司 | 超敏乳胶增强免疫比浊检测试剂及其检测方法和应用 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108008130A (zh) * | 2017-11-24 | 2018-05-08 | 海格德生物科技（深圳）有限公司 | 基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒及其制备方法 |
| CN110865192A (zh) * | 2019-11-21 | 2020-03-06 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种基于胶乳增强免疫比浊法测定gp73的试剂盒及其制备使用方法 |
| CN114324877A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-12 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | 一种兼具低值精密度以及抗hook能力的胶乳免疫比浊试剂 |
| CN114324877B (zh) * | 2021-12-31 | 2024-07-26 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | 一种兼具低值精密度以及抗hook能力的胶乳免疫比浊试剂 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105548565B (zh) | 一种用于检测克氏锥虫抗体的试剂盒及其制备和应用 | |
| JP6713478B2 (ja) | Ｐｉｖｋａ−ｉｉの測定方法、及びｐｉｖｋａ−ｉｉ免疫測定試薬又はキットの製造方法 | |
| CN105699653B (zh) | 一种超敏感超顺磁性纳米免疫微球及其检测gp73抗原的方法 | |
| JP7345002B2 (ja) | 腫瘍マーカーの測定方法及び測定試薬 | |
| AU2010274320B2 (en) | Insulin measurement method | |
| JP2009085753A (ja) | サンドイッチイムノアッセイ法 | |
| JP2019516964A5 (zh) | ||
| KR20140015488A (ko) | Psa의 측정 방법 및 그의 시약 | |
| US20150044666A1 (en) | Non-equilibrium two-site assays for linear, ultrasensitive analyte detection | |
| CN106680505A (zh) | 一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法 | |
| Wu et al. | Novel enzyme-linked aptamer-antibody sandwich assay and hybrid lateral flow strip for SARS-CoV-2 detection | |
| CN104204801B (zh) | 免疫分析方法及试剂 | |
| CN104931685B (zh) | 一种基于携带His标签重组抗原的发光免疫检测方法 | |
| CN104714028B (zh) | 一种检测IgM抗体的免疫检测方法 | |
| US10772976B2 (en) | Method for detecting AFP | |
| CN106442993A (zh) | 基于胰蛋白酶荧光底物检测卵巢癌肿瘤标志物ca125的酶联免疫试剂盒制备方法 | |
| JP6578119B2 (ja) | 前立腺特異抗原の測定方法及び測定キット | |
| CN109073641A (zh) | 使用硫酸化多糖类的免疫学测定法 | |
| JP2018004323A (ja) | デキストランを共存させた免疫学的測定方法 | |
| CN104833797A (zh) | 检测双特异性抗体msbody的elisa方法及应用 | |
| JP7157061B2 (ja) | ジカウイルスを検出する方法及びキット | |
| CN106324253A (zh) | 一种梅毒螺旋体抗体测定试剂盒及其检测方法 | |
| CN103983771A (zh) | 一种用于检测隐蔽态t-2毒素的免疫磁珠间接竞争elisa试剂盒的制备及应用 | |
| JPH08327629A (ja) | 検体前処理方法 | |
| JP5137880B2 (ja) | 結合性物質を固定化した乾燥粒子の製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170517 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |