CN106636027A

CN106636027A - 具有抗除草剂活性的小麦蛋白质、其编码基因及应用

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Publication number: CN106636027A
Application number: CN201710069306.6A
Authority: CN
Inventors: 方军; 朴钟泽; 万常照; 白建江; 杨瑞芳
Original assignee: Shanghai Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Shanghai Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2017-02-08
Filing date: 2017-02-08
Publication date: 2017-05-10

Abstract

具有抗除草剂活性的小麦蛋白质、其编码基因及应用，其为小麦乙酰羟基酸合成酶的突变体蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示，该蛋白质源于小麦6号染色体6A、6B或6D中乙酰羟基酸合成酶基因的表达，将小麦乙酰羟基酸合成酶通过体外突变而获得，其氨基酸序列的特点为：与野生型相比，6号染色体6A、6B和6D中分别缺失Trp551位点、Trp550位点和Trp548位点氨基酸，该突变体蛋白质对咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类等多类型除草剂具有抗性，其编码基因转化的植物具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类等多类型除草剂的活性。

Description

具有抗除草剂活性的小麦蛋白质、其编码基因及应用

技术领域

本发明属于抗除草剂蛋白质领域，具体涉及具有抗除草剂活性的小麦蛋白质、其编码基因及其应用。

背景技术

小麦是我国四大主粮作物之一(其他主粮为水稻、玉米、土豆)，产量关乎国家的稳定和安全。但是，杂草与小麦争光、争肥、争水，造成小麦生产减产，甚至绝收。

禾本科杂草，例如节节麦、雀麦、野燕麦、早熟禾等与小麦同属不同种，越年生或一年生，外部形态无论苗期、成株期都与小麦极为相似，尤其是生长前期难以辨认。近年来，由于冬季气候变暖、少免耕面积扩大等原因，小麦田杂草发生危害加重，对小麦生产构成了严重威胁，且危害呈扩展蔓延之势。种植抗除草剂小麦可以简单、经济、有效地解决小麦田中杂草的危害。

小麦内源的抗除草剂乙酰羟基酸合成酶(acetohydroxy acid synthase，简称AHAS)蛋白质由ahas基因突变产生。抗除草剂AHAS蛋白质由ahas基因突变产生，表达抗除草剂AHAS蛋白质可以使植物获得抗除草剂特性，解决田块中的杂草问题。AHAS蛋白质主要分布在微生物和植物中，在动物中几乎不存在，AHAS抑制除草剂对人畜无害。

但是，小麦是异源6倍体植物，基因的同源性和异源性比较复杂，目前，国内外对小麦基因功能的研发远远落后于水稻、玉米等2倍体植物，其中，小麦内源抗除草剂蛋白质研究甚少。因此，发掘和研究具有抗除草剂活性的小麦AHAS蛋白质具有良好的创新性和经济价值。

目前，培育抗AHAS抑制除草剂小麦的方法为以小麦种子或者植株为材料进行化学或者物理诱变，进行植物体内基因组突变。这种方法获得抗除草剂玉米的试验时间长(大于5年)，获得新突变体难(突变结果为核苷酸单个碱基变化引起单个氨基酸的替换，容易与已经存在的突变重复)，而且成功几率小(通常突变成功率小于百万分之一)，很多实验室进行多年的研发无法获得新的突变体。

发明内容

本发明的目的在于提供具有抗除草剂活性的小麦蛋白质、其编码基因及其应用，其为抗多类型除草剂活性的小麦AHAS突变体蛋白质，该蛋白质具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶类等多类型除草剂的活性，其编码基因转化的植物具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶类等多类型除草剂的活性。

与目前通过体内突变获得的氨基酸替换突变体不同，本发明采用氨基酸删除策略，通过基因体外突变，改造小麦AHAS蛋白质，获得小麦AHAS突变体蛋白质，使其具有抗除草剂活性。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

具有抗除草剂活性的小麦蛋白质，其为小麦乙酰羟基酸合成酶的突变体蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8或SEQ ID No.9所示。

本发明其氨基酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示的抗除草剂活性的小麦蛋白质为前体全长蛋白质,该前体全长蛋白质删除信号肽后成为成熟蛋白质，对应于如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的前体全长蛋白质的氨基酸系列，成熟蛋白质的氨基酸序列分别如SEQ ID No.7、SEQ ID No.8和SEQ ID No.10所示。

具有抗除草剂活性的基因，其为编码所述具有抗除草剂活性的小麦蛋白质的核苷酸序列。

进一步，所述氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的小麦蛋白质的核苷酸序列如SEQID No.4所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的小麦蛋白质的核苷酸序列如SEQ IDNo.5所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的小麦蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.7所示的小麦蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.8所示的小麦蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.9所示的小麦蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示。

本发明所述具有抗除草剂活性的蛋白质用于培育抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类除草剂植物。

一种获得抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类除草剂植物的方法，包括，将所述小麦AHAS突变体蛋白质的编码基因转化到植物中，使所述植物产生具有抗除草剂活性的小麦AHAS突变体蛋白质。

优选地，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示小麦蛋白质的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示小麦蛋白质的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，氨基酸序列如SEQ ID No.3所示小麦蛋白质的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，氨基酸序列如SEQ ID No.7所示小麦蛋白质的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，氨基酸序列如SEQ ID No.8所示小麦蛋白质的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，氨基酸序列如SEQ ID No.9所示小麦蛋白质的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示。

进一步，所述咪唑啉酮类除草剂为咪唑乙烟酸、甲氧咪草烟或者甲基咪草烟，但不限于这几种咪唑啉酮类除草剂。

又，所述磺酰脲类除草剂为甲嘧磺隆，但不限于这种磺酰脲类除草剂。

优选地，所述嘧啶类除草剂为双草醚，但不限于这种嘧啶类除草剂。

进一步，所述植物为小麦、玉米或棉花。

本发明抗除草剂活性的蛋白质，该蛋白质为小麦6号染色体6A、6B、6D中ahas基因表达中经过人工改造的小麦AHAS突变体蛋白质，源于小麦基因组中ahas基因的表达，将野生型小麦AHAS通过体外突变，获得小麦AHAS突变体蛋白质，其氨基酸序列的特点为：表达染色体6A突变基因的氨基酸序列与野生型小麦AHAS相比，缺失Trp551位点氨基酸。表达染色体6B突变基因的氨基酸序列与野生型小麦AHAS相比，缺失Trp550位点氨基酸，表达染色体6D突变基因氨基酸的序列与野生型小麦AHAS相比，缺失Trp548位点氨基酸，这些突变体蛋白质对咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类等多类型除草剂具有抗性。

本发明中，表达小麦6号染色体6A突变基因的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其成熟蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示；表达小麦6号染色体6B突变基因的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，其成熟蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No.8所示；表达小麦6号染色体6D突变基因的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，其成熟蛋白质的氨基酸序列如SEQ IDNo.9所示。

将本发明获得的AHAS突变体编码基因转化到植物中，在植物中进行表达，使植物中含有AHAS突变体蛋白质，可使植物具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶羧酸类等多类型除草剂的活性。

本发明的AHAS突变体编码基因的核苷酸序列不限于小麦内源序列，包括表达所述蛋白质的人工合成核苷酸序列。

在小麦、玉米或者棉花中表达AHAS突变体，得到转基因小麦W-WA1M5、W-WA2M5、W-WA3M5，转基因玉米M-WA1M5、M-WA2M5、M-WA3M5、转基因棉花C-WA1M5、C-WA2M5、C-WA3M5，在转基因植物和野生型植物苗期喷洒抗咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶羧酸类等多类型除草剂，野生型植物植株全部死亡，转基因植物全部存活。说明表达本发明小麦AHAS突变体的植物具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶羧酸类等多类型除草剂活性。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1)本发明采用氨基酸删除策略，对氨基酸进行定点突变，可对删除氨基酸后的突变体蛋白质进行体外抗除草剂活性测定，为开发更多新型抗除草剂AHAS突变体蛋白质提供基础，具有操作简单，筛选过程简单、创新性强等优点，发掘了小麦内源抗除草剂基因，增加抗除草剂基因的种类。

2)本发明的AHAS突变体蛋白质是通过体外突变获得的，体外突变具有可设计性强、试验时间短、创新性强等体内突变无法比拟的优点，获得突变体时间小于2个月，同时，通过特定的突变设计，避免与已报道AHAS突变体蛋白质重复。

3)将本发明AHSA突变体蛋白质的编码基因表达后，获得的AHAS全长突变体蛋白质和AHAS无信号肽成熟突变体蛋白质均具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶羧酸类等多类型除草剂的活性。

附图说明

图1为本发明实施例1中纯化后的AHAS蛋白质SDS-PAGE电泳图；

其中，泳道1：纯化后的WA1M5S蛋白质；泳道2：纯化后的WA2M5S蛋白质；泳道3：纯化后的WA3M5S蛋白质；泳道4：纯化后的WA1WS蛋白质；泳道5：纯化后的WA2WS蛋白质；泳道6：纯化后的WA3WS蛋白质；Mk：蛋白质Marker，分子量已在图上标出。

图2-图3为本发明实施例2中WA1M5S、WA2M5S、WA3M5S及其对照WA1WS、WA2WS、WA3WS对咪唑啉酮类除草剂(咪唑乙烟酸和甲氧咪草烟)的抗性曲线图。

图4为本发明实施例2中WA1M5S、WA2M5S、WA3M5S及其对照WA1WS、WA2WS、WA3WS对嘧啶羧酸类除草剂(双草醚)的抗性曲线图。

图5为本发明实施例2中WA1M5S、WA2M5S、WA3M5S及其对照WA1WS、WA2WS、WA3WS对磺酰脲类除草剂(甲嘧磺隆)的抗性曲线图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。

以下实施例中，如无特殊说明为《分子克隆实验指南》(科学出版社，2002年)所记载方法。

引物合成和测序委托生工上海生物工程股份有限公司进行，试剂、菌株、载体等实验用品从杭州西格玛生物技术公司购买。

咪唑烟乙酸除草剂为山东先达公司的“豆说好”，稀释浓度为稀释200倍。甲基咪草烟除草剂为德国巴斯夫公司的“百垄通”，稀释浓度为稀释1000倍。甲氧咪草烟除草剂为美国氰胺公司的“金豆”，稀释浓度为稀释100倍。甲嘧磺隆除草剂为江苏瑞邦农药厂的“森草净”，稀释浓度为稀释5000倍。双草醚除草剂为江苏省激素研究所股份有限公司的“双草醚”，稀释浓度为稀释1000倍。

实施例1获得小麦6号染色体中删除Trp551(6A)/Trp550(6B)/Trp548(6D)AHAS突变体蛋白质的方法，包括以下步骤：

1.构建删除Trp551(6A)/Trp550(6B)/Trp548(6D)基酸的小麦ahas基因

1.1构建删除Trp551(6A)氨基酸的小麦ahas1基因

(1)通过多聚合链式反应(PCR)的方法，从小麦基因组中扩增出AHAS1所在的DNA片段A6A(公共数据库NCBI序列号：TGACv1 473240_6AL中3996-7551)，通过琼脂糖电泳分离、纯化出PCR产物，即A6A。

其中，进行PCR反应使用的引物为：

CH6AL-F：5’tttgtgtcgttttatactggtatag；

CH6AL-R：5’atcggtgtgacttagaatcggggtc。

PCR反应体系为：2×高保真聚合酶预混液50μl、引物CH6AL-F(10μM)4μl、引物CH6AL-R(10μM)4μl、野生型小麦基因组DNA1μl和去离子水41μl，总体积为100μl。

PCR程序：a)95℃，10分钟；b)95℃，40秒；c)52℃，40秒；d)68℃，2分钟；e)循环步骤2-4，25次；f)68℃，10分钟；g)16℃，保存。

以A6A为模板，使用引物6AL F和TA A1EcoR，扩增出ahas1基因wa1w(NCBI序列号：TGACv1 473240_6AL中4575-6520)，将PCR产物进行T克隆(pGEMT，美国Promega公司)，获得T-WA1W。

其中，PCR反应体系和程序中，除模板和引物外，其它条件同上。

引物的具体序列为：

6AL F：5’ccatggccgccgccacctcccccgc；

TA A1EcoR：5’gaattctcagtacgaggtcctgccatcaccc。

(2)以T-WA1W为模板，使用引物6AL 551WF和6AL 551WR，进行PCR反应，将PCR产物进行T克隆，获得删除Trp551(6A)氨基酸的突变体克隆T-WA1M5。

其中，PCR反应体系和程序中，除模板和引物外其它条件与步骤(1)相同。

引物的具体序列为：

6AL 551WF：5’catctgggaatggtggtgcaagaggataggttttacaaggcc；

6AL 551WR：5’ggccttgtaaaacctatcctcttgcaccaccattcccagatg。

其中，WA1M5的DNA序列如SEQ ID NO.4所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

1.2构建删除Trp550(6B)氨基酸的小麦ahas2基因

使用与上述1.1构建删除Trp551(6A)氨基酸的小麦ahas1基因中步骤相同的PCR方法，使用引物CH6BL-F和CH6BL-R从小麦基因组中扩增出ahas2所在的DNA片段B6A(NCBI序列号：TGACv1 500462_6BL中40831-44374)，再以B6A为模板，使用引物6BL F和TA A1EcoR，进行PCR反应，扩增出ahas2基因wa2w(NCBI序列号：TGACv1 500462中42182-44124)，将PCR产物进行T克隆，获得T-WA2W，再以T-WA2W为模板，使用引物6BL 550WF和6BL 550WR，进行PCR反应，将PCR产物进行T克隆，获得删除Trp550(6B)氨基酸的突变体克隆T-WA2M5，其中，WA2M5的DNA序列如SEQ ID NO.5所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

其中，扩增B6A时，使用的引物CH6BL-F和CH6BL-R的具体序列如下：

CH6BL-F：5’ccacaaccgcgagtggaaatacc；

CH6BL-R：5’catgaagcaggaaaaagggat。

其中，扩增ahas2基因wa2w时，使用的引物6BL F具体序列如下：

6BL F:5’ccatggccgcagccacctcccccgc；

其中，扩增删除Trp550氨基酸的突变体WA2M5时，使用的引物6BL 550WF和6BL550WR具体序列如下：

6BL 550WF：5’catctgggaatggtggtgcaggaggataggttttacaaggcc；

6BL 550WR：5’ggccttgtaaaacctatcctcctgcaccaccattcccagatg。

1.3构建删除Trp548(6D)氨基酸的小麦ahas3基因

使用与上述步骤1.1构建删除Trp551(6A)氨基酸的小麦ahas1基因中相同的PCR方法，使用引物CH6DL-F和CH6DL-R，从小麦基因组中扩增出ahas3所在的DNA片段D6A(NCBI序列号：TGACv1 527727_6DL中28689-32840)，D6A为模板，使用引物6AL F和TA A1EcoR(参见本实施例1.1中步骤(1))，扩增出ahas3基因wa3w(NCBI序列号：TGACv1 527727_6DL中29526-31462)，将PCR产物进行T克隆，获得T-WA3W，再以T-WA3W为模板，使用引物6AL 551WF和6AL 551WR(具体序列参见本实施例中1.1步骤(2))，进行PCR反应，将PCR产物进行T克隆，获得删除Trp548氨基酸的突变体克隆T-WA3M5，其中，WA3M5的DNA序列如SEQ ID NO.6所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

其中，扩增DNA片段D6A时，所用的引物CH6DL-F和CH6DL-R的具体序列为：

CH6DL-F：5’gtgtaaaagtagacatgtgtt；

CH6DL-R：5’tgcgaccccccacaacacccg。

2.表达、纯化删除信号肽的小麦AHAS成熟蛋白质

(1)以上述步骤1.1中获得的T-WA1W为模板，使用引物6AL BamF和TA A1EcoR，进行PCR反应，将PCR产物进行T克隆，获得删除信号肽的wa1w基因克隆T-MA1WS。

其中，PCR反应体系和程序中，除模板和引物外其它条件同上，引物6AL BamF：的具体序列为：

6AL BamF：5’ggatccacaatgctccggccctggggcccgtccgag；

(2)构建蛋白质表达载体，将WA1WS克隆入pGEX4T2，获得表达无信号肽AHAS野生型蛋白质的载体4T2-WA1WS。

(3)将表达无信号肽AHAS野生型蛋白质的载体4T2-WA1WS转入表达菌株Rosetta中，培养、收获细胞，超声波破碎细胞，将离心获得上清液通过GST柱，清洗GST柱，洗脱，最终获得成熟的野生型蛋白质WA1WS。

用与上述步骤2(1)-2(3)相同的方法，分别以上述步骤1中获得的T-WA2W、T-WA3W、T-WA1M5、T-WA2M5以及T-WA3M5为模板，使用相应的引物进行PCR反应，将PCR产物进行T克隆，构建蛋白质表达载体，分别获得无信号肽的表达成熟AHAS野生型蛋白质载体4T2-WA2WS和4T2-WA3WS、无信号肽且删除Trp551(6A)氨基酸的表达成熟AHAS突变体蛋白质载体4T2-WA1M5S、无信号肽且删除Trp550(6B)氨基酸的表达成熟AHAS突变体蛋白质载体4T2-WA2M5S以及无信号肽且删除Trp548(6D)氨基酸的表达成熟AHAS突变体蛋白质载体4T2-WA3M5S，再将上述表达载体分别通过表达菌株Rosetta进行表达，获得对应的无信号肽的成熟野生型蛋白质WA2WS和WA3WS、无信号肽而且删除Trp551氨基酸的成熟AHAS突变体蛋白WA1M5S，其氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，DNA序列如SEQ ID NO.10所示、无信号肽而且删除Trp550氨基酸的成熟AHAS突变体蛋白WA2M5S，其氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，DNA序列如SEQID NO.11所示、无信号肽而且删除Trp548氨基酸的成熟AHAS突变体蛋白WA3M5S，其氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，DNA序列如SEQ ID NO.12所示。

其中，以T-WA2W为模板进行扩增时，使用的引物为6BL BamF和TA A1EcoR，引物6BLBamF的具体序列为：

6BL BamF：5’ggatccacaatgctccggccgtggggcccctccgag；

以T-WA3W为模板进行扩增时，使用的引物为6AL BamF和TA A1EcoR。

以T-WA1M5为模板进行扩增时，使用的引物为6AL BamF和TA A1EcoR。

以T-WA2M5为模板进行扩增时，使用的引物为6BL BamF和TA A1EcoR。

以T-WA3M5为模板进行扩增时，使用的引物为6AL BamF和TA A1EcoR。

将获得的野生型蛋白质WA1WS、WA2WS和WA3WS，以及突变体蛋白质WA1M5S、WA2M5S和WA3M5S，进行SDS-PAGE电泳检测，获得蛋白质胶，蛋白质胶参见图1。

由图1可见，泳道1至泳道6中的AHAS蛋白质在90kDa位置具有明显条带，此位置与蛋白质理论大小相符。此外，该蛋白质条带在整个泳道的蛋白质条带中占主要比例，说明通过步骤2获得了高纯度的AHAS蛋白质。

实施例2检测AHAS突变体蛋白质对除草剂的抗性

分别以实施例1获得的小麦AHAS变体蛋白质WA1M5S、WA2M5S和WA3M5S，以及AHAS野生型蛋白质WA1WS、WA2WS和WA3WS为检测主体，水为空白对照处理，以浓度在0-100μM的不同品种除草剂(咪唑烟乙酸、甲氧咪草烟、甲嘧磺隆、双草醚)为影响因素，进行抗除草剂生物测定。

在2ml离心管中配置溶液反应体系：450μl测定缓冲液，10μl AHAS蛋白质(WA1M5S、WA2M5S、WA3M5S、WA1WS、WA2WS或WA3WS，0.5μg/μl)，40μl影响因素溶液(水为空白对照处理，除草剂为影响因素)，总体积500μl。

AHAS活性测定缓冲液：100mM丙酮酸钠，10mM氯化镁，1mM TPP，50μM FAD，50mM磷酸盐，pH7.4。

反应程序：将含有不同影响因素反应体系的离心管置于37℃反应1小时；20μl30％硫酸终止反应。60℃反应0.5小时；加入250μl 1.7％α-萘酚，0.17％肌酸，60℃显色0.5小时。从离心管中取出200μl，检测含有不同影响因素的溶液在525nm吸光度值。

检测结果：以除草剂浓度为0(影响因素溶液为水对照)的野生型蛋白质WA1WS处理的525nm吸光度值为100％活性，计算野生型和突变体蛋白质在不同影响因素条件下的活性比例，绘制曲线图，结果参见图2-图5。

由图2-图5可见，随着咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶羧酸类等多类型除草剂的增加，WA1WS、WA2WS、WA3WS活性降低至0；而WA1M5S、WA2M5S、WA3M5S活性在高浓度除草剂中依然保持接近100％活性。因此，WA1M5S、WA2M5S、WA3M5S对咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶羧酸类等多类型除草剂具有抗性。

实施例3小麦ahas突变体基因在植物中的转化及表达

为了在单子叶及双子叶植物中表达AHAS突变体蛋白质，以pCambia 1300载体(简称1300)为载体，用辣椒斑驳病毒35S(简称35S)启动子和终止子构建AHAS表达元件，35S启动子和终止子DNA序列见http://www.snapgene.com/resources/plasmid_files/plant_vectors/pCAMBIA1300/，具体步骤如下：

(1)以实施例1中获得的删除Trp551氨基酸的突变体克隆T-WA1M5为模板，使用引物6AL BamF和TA A1Sac(引物系列如实施例1所示)，通过PCR和BamH1/Sac1双酶切，获得ahas突变体片段WA1M5T。

(2)以1300载体为模板，使用引物35S-Hind和35S-Bam，通过PCR和BamH1/Hind3双酶切，获得启动子片段35S；

其中，引物序列为：

35S-Hind：5’gcgaagcttcatggagtcaaagattcaaa；

35S-Bam：5’gtgggatccagtcccccgtgttctctccaaatgaa。

(3)以1300载体为模板，使用引物ter-Sac和ter-Kpn，通过PCR和BamH1/Hind3双酶切，获得终止子片段ter；

其中，引物序列为：

ter-Sac：5’gtggagctcagtagatgccgaccggatctgt；

ter-Kpn：5’cagggtacccgccgaattaattcggggga。

(4)将1300进行HindIII/SacI双酶切，获得片段1300HS，与35S和WA1M5T进行连接、克隆，获得1300-35S-WA1M5。

(5)将1300-35S-WA1M5进行SacI/KpnI双酶切，与ter连接、克隆，获得表达AHAS突变体的载体1300-WA1M5。

用与上述步骤(1)-(5)同样的方法，以删除Trp550氨基酸的突变体克隆T-WA2M5为模板，获得表达AHAS突变体的载体1300-WA2M5。其中，步骤(1)中使用的引物为6BL BamF和TA A1Sac(引物系列如实施例1所示)。

用与上述步骤(1)-(5)同样的方法，以删除Trp548氨基酸的突变体克隆T-WA3M5为模板，获得表达AHAS突变体的载体1300-WA3M5，其中，步骤(1)中使用的引物与步骤(1)相同，为6AL BamF和TA A1Sac。

(6)将表达AHAS突变体的载体1300-WA1M5、1300-WA2M5和1300-WA3M5分别转入农杆菌菌株LBA4044中，获得表达AHAS突变体蛋白质的植物转化农杆菌。

2.获得表达AHAS突变体蛋白质的植物

转基因植物的获得方法为现有成熟技术，转基因植物制备委托上海博祈生物科技有限公司进行。

使用农杆菌介导法将载体1300-WA1M5、1300-WA2M5、1300-WA3M5分别转入小麦、玉米和棉花中，获得转基因小麦W-WA1M5、W-WA2M5、W-WA3M5，转基因玉米M-WA1M5、M-WA2M5、M-WA3M5、转基因棉花C-WA1M5、C-WA2M5、C-WA3M5。

在获得的转基因植物：转基因小麦W-WA1M5、W-WA2M5、W-WA3M5，转基因玉米M-WA1M5、M-WA2M5、M-WA3M5、转基因棉花C-WA1M5、C-WA2M5、C-WA3M5和对应野生型植物的苗期喷除草剂，十天后，统计死亡率，结果参见表1。

表1

由表1可知，野生型植物植株全部死亡，而转基因植物全部存活，说明表达本发明AHAS突变体蛋白质的植物具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶羧酸类等多类型除草剂活性。

<110> 上海市农业科学院

<120> 具有抗除草剂活性的小麦蛋白质、其编码基因及应用

<130> 1711035

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> SEQ ID NO.1

<211> 646

<212> PRT

<213> 小麦（Triticum aestivum）

<400> 1

Met Ala Ala Ala Thr Ser Pro Ala Val Ala Phe Ser Gly Ala Ala Ala

1 5 10 15

Ala Ala Ala Ala Met Pro Lys Pro Ala Arg Gln Pro Leu Pro Arg His

20 25 30

Gln Pro Ala Ser Arg Arg Ala Leu Pro Ala Arg Val Val Arg Cys Cys

35 40 45

Ala Ala Pro Pro Ala Ala Ala Thr Ser Ala Ala Pro Pro Ala Thr Ala

50 55 60

Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu

65 70 75 80

Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly Ile Val Asp Val Phe Ala Tyr Pro

85 90 95

Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val

100 105 110

Ile Thr Asn His Leu Phe Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala

115 120 125

Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr

130 135 140

Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu

145 150 155 160

Leu Asp Ser Ile Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg

165 170 175

Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr

180 185 190

Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile

195 200 205

Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro

210 215 220

Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala

225 230 235 240

Val Pro Ile Trp Asp Thr Pro Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg

245 250 255

Leu Pro Lys Pro Pro Ser Thr Glu Ser Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu

260 265 270

Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala

275 280 285

Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro

290 295 300

Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro

305 310 315 320

Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr

325 330 335

Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp

340 345 350

Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile

355 360 365

Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro

370 375 380

His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn

385 390 395 400

Ala Leu Leu Asn Gly Ser Lys Ala Gln Gln Gly Leu Asp Phe Gly Pro

405 410 415

Trp His Lys Glu Leu Asp Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Phe

420 425 430

Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu

435 440 445

Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln

450 455 460

His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln

465 470 475 480

Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala

485 490 495

Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile

500 505 510

Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile

515 520 525

Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His

530 535 540

Leu Gly Met Val Val Gln Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala

545 550 555 560

His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp

565 570 575

Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr

580 585 590

Lys Lys Ser Glu Val Thr Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro

595 600 605

Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu

610 615 620

Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Met Glu Gly

625 630 635 640

Asp Gly Arg Thr Ser Tyr

645

<210> SEQ ID NO.2

<211> 645

<212> PRT

<213> 小麦（Triticum aestivum）

<400> 2

Met Ala Ala Ala Thr Ser Pro Ala Val Ala Phe Ser Gly Ala Ala Ala

1 5 10 15

Ala Ala Ala Ala Ile Pro Lys Pro Ala Arg Gln Pro Leu Pro Arg His

20 25 30

Gln Pro Ala Ser Arg Arg Ala Leu Pro Ala Arg Ile Val Arg Cys Cys

35 40 45

Ala Ala Ser Pro Ala Ala Thr Ser Val Ala Pro Pro Ala Thr Ala Leu

50 55 60

Arg Pro Trp Gly Pro Ser Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val

65 70 75 80

Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly Ile Val Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly

85 90 95

Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile

100 105 110

Thr Asn His Leu Phe Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser

115 120 125

Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser

130 135 140

Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu

145 150 155 160

Asp Ser Ile Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met

165 170 175

Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg

180 185 190

Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro

195 200 205

Arg Val Ile Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly

210 215 220

Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val

225 230 235 240

Pro Val Trp Asp Thr Pro Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu

245 250 255

Pro Lys Pro Pro Ser Thr Glu Ser Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val

260 265 270

Gly Glu Ser Arg Arg Pro Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala

275 280 285

Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val

290 295 300

Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu

305 310 315 320

Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala

325 330 335

Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp

340 345 350

Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile Val

355 360 365

His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His

370 375 380

Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ala

385 390 395 400

Leu Leu Asn Gly Ser Lys Ala Gln Gln Gly Leu Asp Phe Gly Pro Trp

405 410 415

His Lys Glu Leu Asp Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Phe Lys

420 425 430

Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp

435 440 445

Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His

450 455 460

Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp

465 470 475 480

Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala

485 490 495

Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp

500 505 510

Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg

515 520 525

Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His Leu

530 535 540

Gly Met Val Val Gln Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His

545 550 555 560

Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe

565 570 575

Val Thr Ile Ala Lys Gly Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr Lys

580 585 590

Lys Ser Glu Val Thr Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly

595 600 605

Pro Tyr Leu Leu Asp Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro

610 615 620

Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Met Glu Gly Asp

625 630 635 640

Gly Arg Thr Ser Tyr

645

<210> SEQ ID NO.3

<211> 643

<212> PRT

<213> 小麦（Triticum aestivum）

<400> 3

Met Ala Ala Ala Thr Ser Pro Ala Val Ala Phe Ser Gly Ala Thr Ala

1 5 10 15

Ala Ala Met Pro Lys Pro Ala Arg His Pro Leu Pro Arg His Gln Pro

20 25 30

Val Ser Arg Arg Ala Leu Pro Ala Arg Val Val Arg Cys Cys Ala Ala

35 40 45

Ser Pro Ala Ala Thr Ser Ala Ala Pro Pro Ala Thr Ala Leu Arg Pro

50 55 60

Trp Gly Pro Ser Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala

65 70 75 80

Leu Glu Arg Cys Gly Ile Val Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala

85 90 95

Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Thr Asn

100 105 110

His Leu Phe Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr

115 120 125

Ala Arg Ala Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro

130 135 140

Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser

145 150 155 160

Ile Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly

165 170 175

Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile

180 185 190

Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val

195 200 205

Ile Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val

210 215 220

Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val

225 230 235 240

Trp Asp Thr Pro Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys

245 250 255

Pro Pro Ser Thr Glu Ser Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu

260 265 270

Ser Arg Arg Pro Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly

275 280 285

Glu Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr

290 295 300

Thr Leu Met Gly Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu

305 310 315 320

Arg Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp

325 330 335

Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val

340 345 350

Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile Val His Ile

355 360 365

Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser

370 375 380

Ile Cys Ala Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Asp Leu Leu

385 390 395 400

Asn Gly Ser Lys Ala Gln Gln Gly Leu Asp Phe Gly Pro Trp His Lys

405 410 415

Glu Leu Asp Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Phe Lys Thr Phe

420 425 430

Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu

435 440 445

Thr Lys Gly Glu Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met

450 455 460

Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser

465 470 475 480

Ser Ser Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly

485 490 495

Ala Ala Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp

500 505 510

Gly Ser Phe Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu

515 520 525

Asn Leu Pro Val Lys Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met

530 535 540

Val Val Gln Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr

545 550 555 560

Leu Gly Asn Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr

565 570 575

Ile Ala Lys Gly Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Ser

580 585 590

Glu Val Thr Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr

595 600 605

Leu Leu Asp Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile

610 615 620

Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Met Glu Gly Asp Gly Arg

625 630 635 640

Thr Ser Tyr

<210> SEQ ID NO.4

<211> 1941

<212> DNA

<213> 小麦（Triticum aestivum）

<400> 4

atggccgccg ccacctcccc cgccgtcgca ttctccggcg ccgccgccgc cgccgccgcc 60

atgcccaagc ccgcccgcca gcctctcccg cgccaccagc ccgcctcgcg ccgcgcgctc 120

cccgcccgcg tcgtcaggtg ctgcgccgcg ccccccgctg ctgccacctc cgccgcgccc 180

cccgccaccg cgctccggcc ctggggcccg tccgagcccc gcaagggcgc cgacatcctc 240

gtcgaggcgc tcgagcgctg cggcatcgtc gacgtattcg cctaccccgg cggcgcgtcc 300

atggagatcc accaggcgct gacgcgctcg cccgtcatca ccaaccacct cttccgccac 360

gagcaggggg aggcgttcgc ggcgtccggc tacgcccgcg cgtccggccg cgtcggcgtc 420

tgcgtcgcca cctccggccc gggggccacc aacctcgtct ccgcgctcgc tgacgccctc 480

ctcgactcca tccccatggt cgccatcacg ggccaggtcc cccgccgcat gatcggcacg 540

gacgcgttcc aggagacgcc catagtggag gtcacgcgct ccatcaccaa gcacaactac 600

ctggtccttg acgtggagga tatcccccgc gtcatccagg aagccttctt cctcgcgtcc 660

tctggccgcc cggggccggt gctggttgat atccccaagg atatccagca gcagatggcc 720

gtgcctatct gggacacgcc gatgagtttg ccagggtaca tcgcccgcct gcccaagcca 780

ccatctactg aatcgcttga gcaggtcctg cgtctggttg gcgagtcacg gcgcccaatt 840

ctgtatgttg gtggtggctg cgctgcatct ggcgaggagt tgcgccgctt tgttgagctc 900

actgggattc cagttacaac tactcttatg ggccttggca acttccccag cgacgaccca 960

ctgtctctgc gcatgcttgg gatgcatggc actgtgtatg caaattatgc agtcgataag 1020

gctgacctgt tgcttgcatt tggtgtgcgg tttgatgatc gtgtgactgg gaaaatcgag 1080

gcttttgcaa gcaggtccaa gattgtgcac attgacattg acccagctga gattggcaag 1140

aacaagcagc cacatgtctc catttgtgca gatgttaagc ttgctttaca ggggttgaat 1200

gctctattaa atgggagcaa agcacaacag ggtctggatt ttggtccatg gcacaaggag 1260

ttggatcagc agaagaggga gtttcctcta ggattcaaga cttttggcga ggccatcccg 1320

ccgcaatatg ctatccaggt actggatgag ctgacaaaag gggaggcgat cattgctacc 1380

ggtgttgggc agcaccagat gtgggcggct cagtattaca cttacaagcg gccacggcag 1440

tggctgtctt cgtctggttt gggggcaatg ggatttgggt taccagctgc agctggcgct 1500

gctgtggcca acccaggtgt tacagttgtt gacattgatg gagacggtag tttcctcatg 1560

aacattcagg agttggcatt gatccgtatt gagaacctcc ctgtgaaggt gatgatattg 1620

aacaaccagc atctgggaat ggtggtgcaa gaggataggt tttacaaggc caatcgggcg 1680

cacacatacc ttggcaaccc agaaaatgag agtgagatat atccagattt tgtgacgatt 1740

gctaaaggat tcaacgttcc ggcagttcgt gtgacgaaga agagcgaagt cactgcagca 1800

atcaagaaga tgcttgagac cccagggcca tacttgttgg atatcatcgt cccgcatcag 1860

gagcacgtgc tgcctatgat cccaagcggt ggtgctttca aggacatgat catggagggt 1920

gatggcagga cctcgtactg a 1941

<210> SEQ ID NO.5

<211> 1938

<212> DNA

<213> 小麦（Triticum aestivum）

<400> 5

atggccgcag ccacctcccc cgccgtcgca ttctcgggcg ccgccgccgc cgccgccgcc 60

atacccaaac ccgcccgcca gcctctcccg cgccaccagc ccgcctcgcg ccgcgcgctc 120

cccgcccgca tcgtcaggtg ctgcgccgcg tcccccgccg ccacctccgt cgcgcctccc 180

gccaccgcgc tccggccgtg gggcccctcc gagccccgca agggcgccga catcctcgtc 240

gaggcgctgg agcgctgcgg catcgtcgac gtcttcgcct accctggcgg cgcgtccatg 300

gagatccacc aggcgctgac gcgctcgcca gtcatcacca accacctctt ccgccacgag 360

cagggggagg cgttcgcggc gtccgggtac gcccgcgcgt ccggccgcgt cggcgtctgc 420

gtcgccacct ccggcccggg ggccaccaac ctcgtctccg cgctcgccga cgctctcctc 480

gactccatcc ccatggtcgc catcacgggc caggtccccc gccgcatgat cggcacggat 540

gcgttccagg agacgcccat cgtggaggtc acgcgctcca tcaccaagca caactacctg 600

gtccttgacg tggaggatat cccccgcgtc atccaggaag ccttcttcct cgcatcctct 660

ggccgcccgg ggccggtgct ggttgatatc cccaaggaca tccagcagca gatggctgtg 720

cctgtctggg acacgccgat gagtttgcca gggtacatcg cccgcctgcc caagccacca 780

tctactgaat cgcttgagca ggtcctgcgt ctggttggcg agtcacggcg cccaattctg 840

tatgttggtg gtggctgcgc tgcatctggt gaggagttgc gccgctttgt tgagctcact 900

gggattccag ttacaactac tcttatgggc cttggcaact tccccagtga cgacccactg 960

tctctgcgca tgctggggat gcatggcact gtgtatgcaa attatgcagt agataaggct 1020

gacctgttgc ttgcatttgg tgtgcggttt gatgatcgtg tgaccgggaa aatcgaggct 1080

tttgcaagca ggtccaagat tgtgcacatt gacattgacc cagctgagat tggcaagaac 1140

aagcagccac atgtctccat ttgtgcagat gttaagcttg ctttacaggg gttgaatgct 1200

ctattaaatg ggagcaaagc acaacagggt ctggattttg gtccatggca caaggagttg 1260

gatcagcaga agagggagtt tcctctagga ttcaagactt ttggtgaggc catcccgccg 1320

caatatgcta tccaggtact ggatgagctg acaaaagggg aggcgatcat tgccaccggt 1380

gttgggcagc atcagatgtg ggcggctcag tattacactt acaagcggcc acggcagtgg 1440

ctgtcttcgt ccggtttggg tgcaatggga tttgggttgc cagctgcagc tggcgctgct 1500

gtggccaacc caggtgttac agttgttgac attgatgggg acggtagttt cctcatgaac 1560

attcaggagt tggcgttgat ccgtattgag aacctcccag tgaaggtgat gatattgaac 1620

aaccagcatc tgggaatggt ggtgcaggag gataggtttt acaaggccaa ccgggcgcac 1680

acataccttg gcaacccaga aaatgagagt gagatatatc cagattttgt gacgattgct 1740

aaaggattca acgttccggc agttcgtgtg acgaagaaga gcgaagtcac tgcagcaatc 1800

aagaagatgc ttgagacccc agggccatac ttgttggata tcattgtccc gcatcaggag 1860

cacgtgctgc ctatgatccc aagcggtggt gcttttaagg acatgatcat ggagggtgat 1920

ggcaggacct cgtactga 1938

<210> SEQ ID NO.6

<211> 1932

<212> DNA

<213> 小麦（Triticum aestivum）

<400> 6

atggccgccg ccacctcccc cgccgtcgca ttctcgggcg ccaccgccgc cgccatgccc 60

aaacccgccc gccatcctct cccgcgccac cagcccgtct cgcgccgcgc gctccccgcc 120

cgcgtcgtca ggtgttgcgc cgcgtccccc gccgccacct ccgccgcgcc tcccgcaacc 180

gcgctccggc cctggggccc gtccgagccc cgcaagggcg ccgacatcct cgtcgaggcg 240

ctcgagcgct gcggcatcgt cgacgtcttc gcctaccccg gcggcgcctc catggagatc 300

caccaggcgc tgacgcgctc gcccgtcatc accaaccacc tcttccgcca cgagcagggg 360

gaggcgttcg cggcgtccgg ctacgcccgc gcgtccggcc gcgtcggcgt ctgcgtcgcc 420

acctccggcc cgggggccac caacctcgtc tccgcgctcg ccgacgccct cctcgactcc 480

atccccatgg tcgccatcac gggccaggtc ccccgccgca tgatcggcac ggacgcgttc 540

caggagacgc ccatagtgga ggtcacgcgc tccatcacca agcacaacta cctggtcctt 600

gacgtggagg atatcccccg cgtcatccag gaagccttct tccttgcatc ctctggccgc 660

ccggggccgg tgctagttga tatccccaag gacatccagc agcagatggc tgtgcccgtc 720

tgggacactc caatgagttt gccagggtac atcgcccgcc tgcccaagcc accatctact 780

gaatcgcttg agcaggtcct gcgtctggtt ggcgagtcac ggcgcccaat tctgtatgtt 840

ggtggtggct gcgctgcatc tggcgaggag ttgcgccgct ttgttgagct cactgggatt 900

ccagttacaa ctactcttat gggccttggc aacttcccca gtgacgaccc actgtctctg 960

cgcatgctgg ggatgcatgg cactgtgtat gcaaattatg cagtcgataa ggctgacctg 1020

ttgcttgcat ttggtgtgcg gtttgatgat cgtgtgactg ggaaaatcga ggcttttgca 1080

agcaggtcca agattgtgca cattgacatt gacccagctg agattggcaa gaacaagcag 1140

ccacatgtct ccatttgtgc agatgttaag cttgctttac aggggttgaa tgatctatta 1200

aatgggagca aagcacaaca gggtctggat tttggtccat ggcacaagga gttggatcag 1260

cagaagaggg agtttcctct aggattcaag acttttggcg aggccatccc gccgcaatat 1320

gctatccagg tactggatga gctgacaaaa ggggaggcga tcattgccac cggtgttggg 1380

cagcaccaga tgtgggcggc tcagtattac acttacaagc ggccacggca gtggctgtct 1440

tcgtctggtt tgggggcaat gggatttggg ttaccagctg cagctggcgc tgctgtggcc 1500

aacccaggtg ttacagttgt tgacattgat ggagacggta gtttcctcat gaacattcag 1560

gagttggcat tgatccgtat tgagaacctc ccagtgaagg tgatgatatt gaacaaccag 1620

catctgggaa tggtggtgca ggaggatagg ttttacaagg ccaatcgggc gcacacatac 1680

cttggcaacc cagaaaatga gagtgagata tatccagatt ttgtgacgat tgctaaagga 1740

ttcaacgttc cagcagttcg agtgacgaag aagagcgaag tcactgcagc aatcaagaag 1800

atgcttgaga ccccagggcc atacttgttg gatatcatag tcccgcatca ggagcacgtg 1860

ctgcctatga tcccaagcgg tggtgctttc aaggacatga tcatggaggg tgatggcagg 1920

acctcgtact ga 1932

<210> SEQ ID NO.7

<211> 582

<212> PRT

<213> 小麦（Triticum aestivum）

<400> 7

Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu

1 5 10 15

Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly Ile Val Asp Val Phe Ala Tyr Pro

20 25 30

Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val

35 40 45

Ile Thr Asn His Leu Phe Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala

50 55 60

Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr

65 70 75 80

Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu

85 90 95

Leu Asp Ser Ile Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg

100 105 110

Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr

115 120 125

Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile

130 135 140

Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro

145 150 155 160

Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala

165 170 175

Val Pro Ile Trp Asp Thr Pro Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg

180 185 190

Leu Pro Lys Pro Pro Ser Thr Glu Ser Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu

195 200 205

Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala

210 215 220

Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro

225 230 235 240

Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro

245 250 255

Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr

260 265 270

Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp

275 280 285

Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile

290 295 300

Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro

305 310 315 320

His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn

325 330 335

Ala Leu Leu Asn Gly Ser Lys Ala Gln Gln Gly Leu Asp Phe Gly Pro

340 345 350

Trp His Lys Glu Leu Asp Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Phe

355 360 365

Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu

370 375 380

Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln

385 390 395 400

His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln

405 410 415

Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala

420 425 430

Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile

435 440 445

Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile

450 455 460

Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His

465 470 475 480

Leu Gly Met Val Val Gln Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala

485 490 495

His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp

500 505 510

Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr

515 520 525

Lys Lys Ser Glu Val Thr Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro

530 535 540

Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu

545 550 555 560

Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Met Glu Gly

565 570 575

Asp Gly Arg Thr Ser Tyr

580

<210> SEQ ID NO.8

<211> 582

<212> PRT

<213> 小麦（Triticum aestivum）

<400> 8

Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu

1 5 10 15

Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly Ile Val Asp Val Phe Ala Tyr Pro

20 25 30

Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val

35 40 45

Ile Thr Asn His Leu Phe Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala

50 55 60

Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr

65 70 75 80

Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu

85 90 95

Leu Asp Ser Ile Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg

100 105 110

Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr

115 120 125

Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile

130 135 140

Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro

145 150 155 160

Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala

165 170 175

Val Pro Val Trp Asp Thr Pro Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg

180 185 190

Leu Pro Lys Pro Pro Ser Thr Glu Ser Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu

195 200 205

Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala

210 215 220

Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro

225 230 235 240

Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro

245 250 255

Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr

260 265 270

Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp

275 280 285

Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile

290 295 300

Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro

305 310 315 320

His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn

325 330 335

Ala Leu Leu Asn Gly Ser Lys Ala Gln Gln Gly Leu Asp Phe Gly Pro

340 345 350

Trp His Lys Glu Leu Asp Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Phe

355 360 365

Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu

370 375 380

Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln

385 390 395 400

His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln

405 410 415

Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala

420 425 430

Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile

435 440 445

Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile

450 455 460

Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His

465 470 475 480

Leu Gly Met Val Val Gln Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala

485 490 495

His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp

500 505 510

Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr

515 520 525

Lys Lys Ser Glu Val Thr Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro

530 535 540

Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu

545 550 555 560

Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Met Glu Gly

565 570 575

Asp Gly Arg Thr Ser Tyr

580

<210> SEQ ID NO.9

<211> 582

<212> PRT

<213> 小麦（Triticum aestivum）

<400> 9

Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu

1 5 10 15

Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly Ile Val Asp Val Phe Ala Tyr Pro

20 25 30

Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val

35 40 45

Ile Thr Asn His Leu Phe Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala

50 55 60

Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr

65 70 75 80

Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu

85 90 95

Leu Asp Ser Ile Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg

100 105 110

Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr

115 120 125

Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile

130 135 140

Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro

145 150 155 160

Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala

165 170 175

Val Pro Val Trp Asp Thr Pro Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg

180 185 190

Leu Pro Lys Pro Pro Ser Thr Glu Ser Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu

195 200 205

Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala

210 215 220

Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro

225 230 235 240

Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro

245 250 255

Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr

260 265 270

Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp

275 280 285

Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile

290 295 300

Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro

305 310 315 320

His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn

325 330 335

Asp Leu Leu Asn Gly Ser Lys Ala Gln Gln Gly Leu Asp Phe Gly Pro

340 345 350

Trp His Lys Glu Leu Asp Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Phe

355 360 365

Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu

370 375 380

Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln

385 390 395 400

His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln

405 410 415

Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala

420 425 430

Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile

435 440 445

Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile

450 455 460

Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His

465 470 475 480

Leu Gly Met Val Val Gln Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala

485 490 495

His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp

500 505 510

Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr

515 520 525

Lys Lys Ser Glu Val Thr Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro

530 535 540

Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu

545 550 555 560

Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Met Glu Gly

565 570 575

Asp Gly Arg Thr Ser Tyr

580

<210> SEQ ID NO.10

<211> 1749

<212> DNA

<213> 小麦（Triticum aestivum）

<400> 10

ctccggccct ggggcccgtc cgagccccgc aagggcgccg acatcctcgt cgaggcgctc 60

gagcgctgcg gcatcgtcga cgtattcgcc taccccggcg gcgcgtccat ggagatccac 120

caggcgctga cgcgctcgcc cgtcatcacc aaccacctct tccgccacga gcagggggag 180

gcgttcgcgg cgtccggcta cgcccgcgcg tccggccgcg tcggcgtctg cgtcgccacc 240

tccggcccgg gggccaccaa cctcgtctcc gcgctcgctg acgccctcct cgactccatc 300

cccatggtcg ccatcacggg ccaggtcccc cgccgcatga tcggcacgga cgcgttccag 360

gagacgccca tagtggaggt cacgcgctcc atcaccaagc acaactacct ggtccttgac 420

gtggaggata tcccccgcgt catccaggaa gccttcttcc tcgcgtcctc tggccgcccg 480

gggccggtgc tggttgatat ccccaaggat atccagcagc agatggccgt gcctatctgg 540

gacacgccga tgagtttgcc agggtacatc gcccgcctgc ccaagccacc atctactgaa 600

tcgcttgagc aggtcctgcg tctggttggc gagtcacggc gcccaattct gtatgttggt 660

ggtggctgcg ctgcatctgg cgaggagttg cgccgctttg ttgagctcac tgggattcca 720

gttacaacta ctcttatggg ccttggcaac ttccccagcg acgacccact gtctctgcgc 780

atgcttggga tgcatggcac tgtgtatgca aattatgcag tcgataaggc tgacctgttg 840

cttgcatttg gtgtgcggtt tgatgatcgt gtgactggga aaatcgaggc ttttgcaagc 900

aggtccaaga ttgtgcacat tgacattgac ccagctgaga ttggcaagaa caagcagcca 960

catgtctcca tttgtgcaga tgttaagctt gctttacagg ggttgaatgc tctattaaat 1020

gggagcaaag cacaacaggg tctggatttt ggtccatggc acaaggagtt ggatcagcag 1080

aagagggagt ttcctctagg attcaagact tttggcgagg ccatcccgcc gcaatatgct 1140

atccaggtac tggatgagct gacaaaaggg gaggcgatca ttgctaccgg tgttgggcag 1200

caccagatgt gggcggctca gtattacact tacaagcggc cacggcagtg gctgtcttcg 1260

tctggtttgg gggcaatggg atttgggtta ccagctgcag ctggcgctgc tgtggccaac 1320

ccaggtgtta cagttgttga cattgatgga gacggtagtt tcctcatgaa cattcaggag 1380

ttggcattga tccgtattga gaacctccct gtgaaggtga tgatattgaa caaccagcat 1440

ctgggaatgg tggtgcaaga ggataggttt tacaaggcca atcgggcgca cacatacctt 1500

ggcaacccag aaaatgagag tgagatatat ccagattttg tgacgattgc taaaggattc 1560

aacgttccgg cagttcgtgt gacgaagaag agcgaagtca ctgcagcaat caagaagatg 1620

cttgagaccc cagggccata cttgttggat atcatcgtcc cgcatcagga gcacgtgctg 1680

cctatgatcc caagcggtgg tgctttcaag gacatgatca tggagggtga tggcaggacc 1740

tcgtactga 1749

<210> SEQ ID NO.11

<211> 1749

<212> DNA

<213> 小麦（Triticum aestivum）

<400> 11

ctccggccgt ggggcccctc cgagccccgc aagggcgccg acatcctcgt cgaggcgctg 60

gagcgctgcg gcatcgtcga cgtcttcgcc taccctggcg gcgcgtccat ggagatccac 120

caggcgctga cgcgctcgcc agtcatcacc aaccacctct tccgccacga gcagggggag 180

gcgttcgcgg cgtccgggta cgcccgcgcg tccggccgcg tcggcgtctg cgtcgccacc 240

tccggcccgg gggccaccaa cctcgtctcc gcgctcgccg acgctctcct cgactccatc 300

cccatggtcg ccatcacggg ccaggtcccc cgccgcatga tcggcacgga tgcgttccag 360

gagacgccca tcgtggaggt cacgcgctcc atcaccaagc acaactacct ggtccttgac 420

gtggaggata tcccccgcgt catccaggaa gccttcttcc tcgcatcctc tggccgcccg 480

gggccggtgc tggttgatat ccccaaggac atccagcagc agatggctgt gcctgtctgg 540

gacacgccga tgagtttgcc agggtacatc gcccgcctgc ccaagccacc atctactgaa 600

tcgcttgagc aggtcctgcg tctggttggc gagtcacggc gcccaattct gtatgttggt 660

ggtggctgcg ctgcatctgg tgaggagttg cgccgctttg ttgagctcac tgggattcca 720

gttacaacta ctcttatggg ccttggcaac ttccccagtg acgacccact gtctctgcgc 780

atgctgggga tgcatggcac tgtgtatgca aattatgcag tagataaggc tgacctgttg 840

cttgcatttg gtgtgcggtt tgatgatcgt gtgaccggga aaatcgaggc ttttgcaagc 900

aggtccaaga ttgtgcacat tgacattgac ccagctgaga ttggcaagaa caagcagcca 960

catgtctcca tttgtgcaga tgttaagctt gctttacagg ggttgaatgc tctattaaat 1020

gggagcaaag cacaacaggg tctggatttt ggtccatggc acaaggagtt ggatcagcag 1080

aagagggagt ttcctctagg attcaagact tttggtgagg ccatcccgcc gcaatatgct 1140

atccaggtac tggatgagct gacaaaaggg gaggcgatca ttgccaccgg tgttgggcag 1200

catcagatgt gggcggctca gtattacact tacaagcggc cacggcagtg gctgtcttcg 1260

tccggtttgg gtgcaatggg atttgggttg ccagctgcag ctggcgctgc tgtggccaac 1320

ccaggtgtta cagttgttga cattgatggg gacggtagtt tcctcatgaa cattcaggag 1380

ttggcgttga tccgtattga gaacctccca gtgaaggtga tgatattgaa caaccagcat 1440

ctgggaatgg tggtgcagga ggataggttt tacaaggcca accgggcgca cacatacctt 1500

ggcaacccag aaaatgagag tgagatatat ccagattttg tgacgattgc taaaggattc 1560

aacgttccgg cagttcgtgt gacgaagaag agcgaagtca ctgcagcaat caagaagatg 1620

cttgagaccc cagggccata cttgttggat atcattgtcc cgcatcagga gcacgtgctg 1680

cctatgatcc caagcggtgg tgcttttaag gacatgatca tggagggtga tggcaggacc 1740

tcgtactga 1749

<210> SEQ ID NO.12

<211> 1749

<212> DNA

<213> 小麦（Triticum aestivum）

<400> 12

ctccggccct ggggcccgtc cgagccccgc aagggcgccg acatcctcgt cgaggcgctc 60

gagcgctgcg gcatcgtcga cgtcttcgcc taccccggcg gcgcctccat ggagatccac 120

caggcgctga cgcgctcgcc cgtcatcacc aaccacctct tccgccacga gcagggggag 180

gcgttcgcgg cgtccggcta cgcccgcgcg tccggccgcg tcggcgtctg cgtcgccacc 240

tccggcccgg gggccaccaa cctcgtctcc gcgctcgccg acgccctcct cgactccatc 300

cccatggtcg ccatcacggg ccaggtcccc cgccgcatga tcggcacgga cgcgttccag 360

gagacgccca tagtggaggt cacgcgctcc atcaccaagc acaactacct ggtccttgac 420

gtggaggata tcccccgcgt catccaggaa gccttcttcc ttgcatcctc tggccgcccg 480

gggccggtgc tagttgatat ccccaaggac atccagcagc agatggctgt gcccgtctgg 540

gacactccaa tgagtttgcc agggtacatc gcccgcctgc ccaagccacc atctactgaa 600

tcgcttgagc aggtcctgcg tctggttggc gagtcacggc gcccaattct gtatgttggt 660

ggtggctgcg ctgcatctgg cgaggagttg cgccgctttg ttgagctcac tgggattcca 720

gttacaacta ctcttatggg ccttggcaac ttccccagtg acgacccact gtctctgcgc 780

atgctgggga tgcatggcac tgtgtatgca aattatgcag tcgataaggc tgacctgttg 840

cttgcatttg gtgtgcggtt tgatgatcgt gtgactggga aaatcgaggc ttttgcaagc 900

aggtccaaga ttgtgcacat tgacattgac ccagctgaga ttggcaagaa caagcagcca 960

catgtctcca tttgtgcaga tgttaagctt gctttacagg ggttgaatga tctattaaat 1020

gggagcaaag cacaacaggg tctggatttt ggtccatggc acaaggagtt ggatcagcag 1080

aagagggagt ttcctctagg attcaagact tttggcgagg ccatcccgcc gcaatatgct 1140

atccaggtac tggatgagct gacaaaaggg gaggcgatca ttgccaccgg tgttgggcag 1200

caccagatgt gggcggctca gtattacact tacaagcggc cacggcagtg gctgtcttcg 1260

tctggtttgg gggcaatggg atttgggtta ccagctgcag ctggcgctgc tgtggccaac 1320

ccaggtgtta cagttgttga cattgatgga gacggtagtt tcctcatgaa cattcaggag 1380

ttggcattga tccgtattga gaacctccca gtgaaggtga tgatattgaa caaccagcat 1440

ctgggaatgg tggtgcagga ggataggttt tacaaggcca atcgggcgca cacatacctt 1500

ggcaacccag aaaatgagag tgagatatat ccagattttg tgacgattgc taaaggattc 1560

aacgttccag cagttcgagt gacgaagaag agcgaagtca ctgcagcaat caagaagatg 1620

cttgagaccc cagggccata cttgttggat atcatagtcc cgcatcagga gcacgtgctg 1680

cctatgatcc caagcggtgg tgctttcaag gacatgatca tggagggtga tggcaggacc 1740

tcgtactga 1749

Claims

1.具有抗除草剂活性的小麦蛋白质，其为小麦乙酰羟基酸合成酶的突变体蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8或SEQID No.9所示。

2.具有抗除草剂活性的基因，其为编码权利要求1所述小麦蛋白质的核苷酸序列。

3.如权利要求2所述的具有抗除草剂活性的基因，其特征在于，所述氨基酸序列如SEQID No.1所示的小麦蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，或者氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示的小麦蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的小麦蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.7所示的小麦蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.8所示的小麦蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.9所示的小麦蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示。

4.如权利要求1所述具有抗除草剂活性的小麦蛋白质用于培育抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类除草剂植物。

5.一种获得抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类除草剂植物的方法，包括，将权利要求1所述小麦蛋白质的编码基因转化到植物中，使植物产生具有抗除草剂活性的小麦乙酰羟基酸合成酶的突变体蛋白质。

6.根据权利要求5所述获得抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类除草剂植物的方法，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ IDNo.10、SEQ ID No.11或SEQ ID No.12所示。

7.根据权利要求5所述获得抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类除草剂植物的方法，其特征在于，所述咪唑啉酮类除草剂为咪唑乙烟酸、甲氧咪草烟和甲基咪草烟中的至少一种。

8.根据权利要求5所述获得抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类除草剂植物的方法，其特征在于，所述磺酰脲类除草剂为甲嘧磺隆。

9.根据权利要求5所述获得抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类除草剂植物的方法，其特征在于，所述嘧啶类除草剂为双草醚。

10.根据权利要求5-9任一项所述获得抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类除草剂植物的方法，其特征在于，所述植物为小麦、玉米或棉花。