CN106550939A - 一种黑果小檗种子长期保存的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黑果小檗种子长期保存的方法，包括如下步骤：将种子杀菌消毒后进行晾晒，然后将干燥后的黑果小檗种子置于‑2～5℃条件下，在乙二醇15％+二甲基亚砜(DMSO)(10％)+蔗糖10％的混合液中浸泡45～60分钟；将预冷冻处理好的黑果小檗种子置于脱脂纱布袋中，连同纱布放在下层为硅胶的干燥器中进行干燥；然后在干燥后的种子上均匀地涂抹地蜡，涂抹完成后，将种子用锡箔纸袋密闭包装，先放入温度为‑25℃～40℃的低温环境下保存30～60分钟，再将其装入充有液氮的密封袋(‑196摄氏度)进行超低温保存。本发明可以长期保持种子活性，保证种子发芽率，提高出苗率和幼苗定居能力。
Description
技术领域
本发明涉及种子保存领域，具体涉及一种黑果小檗种子长期保存的方法。
背景技术
黑果小檗(学名：Berberis atrocarpa)是小檗科小檗属的植物，是中国的特有植物。分布于中国大陆的湖南、云南、四川、新疆等地，生长于海拔600米至2,800米的地区。黑果小檗是干旱区浅山带分布的优势树种，在涵养水源、保育土壤等方面具有重要的生态功能。同时，黑果小檗是很好的野生植物药，在民族医药方面已得到普遍应用和重视，黑果小檗的茎皮及根都含有小檗碱，入药可解毒泻火，果实入药，可健胃，清热解毒。用于肠胃炎、痢疾、消化不良及维生素C缺乏症等。因其分布广泛、且具有上述医疗保健功效，具有较大的开发利用潜力。
目前由于受人类高强度活动的干扰，黑果小檗群落不断退化，年净生产力降低，抗干扰能力和稳定性减弱，天然更能能力弱。制约干旱区黑果小檗种群更新的原因之一为种子保存时间短，发芽能力弱。在自然条件下黑果小檗种子的寿命为25～40天。在传统的更新过程中，果实成熟后，将种子在常温下存放，如不及时播种，则很大程度上降低了种子的发芽能力，限制了天然更新。
现代种子保存，实际上及时采用冷冻空调技术，再加上控制种子水分和种子包装封闭，从而达到低温、低湿、密闭的保存条件，使种子安全、长期保存。高的湿度条件促进了霉菌的生长，使得种子变霉或虫害发生。高温加速了酶促反应。因此，控制适宜的温度和湿度是长期保存种子的必要条件。但一般既要低温又要低湿的控制条件不容易达到。目前解决低湿主要是有通过干燥剂来控制含水量；低湿主要是将种子置于-196℃的液氮中保存。但如果不通过冷冻保护处理，直接将种子放入液氮中，会破坏种子的细胞结构，同时种子即使在干燥剂中被干燥后再次接触空气后也会返潮，不利用种子的保存。
综上，在黑果小檗更新过程中急需一种黑果小檗种子长期保存的方法，以长期保持种子活性，保证种子发芽率，提高出苗率和幼苗定居能力。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种黑果小檗种子长期保存的方法，可以长期保持种子活性，保证种子发芽率，提高出苗率和幼苗定居能力。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种黑果小檗种子长期保存的方法，包括如下步骤：
S1、杀菌消毒：将健康饱满的黑果小檗种子在多菌灵浸泡液中浸泡45～60分钟后，用蒸馏水冲洗3～5遍；然后将种子平铺在带木架的网筛上，平铺的厚度为1～1.5cm；在硫磺熏蒸器中加入硫磺粉末，在温度为30℃的条件下对网筛上平铺的种子进行熏蒸1～1.5h；每5～7天熏蒸一次，连续熏蒸2～3次；
S2、种子晾晒：将杀菌消毒后的黑果小檗种子放置在种子晾晒盒上晾晒3～5天，每1～2h翻动一次；严禁直接将种子直接接触土地或是水泥地晾晒，否则接触地面的种子会因高温而影响影响种子内的酶活性；
S3、冷冻保护处理的预冷冻：将干燥后的黑果小檗种子置于-2～5℃条件下，在乙二醇I5％+二甲基亚砜(DMSO)(10％)+蔗糖10％的混合液中浸泡45～60分钟；
S4、干燥：将预冷冻处理好的黑果小檗种子置于脱脂纱布袋中，连同纱布放在下层为硅胶的干燥器中，硅胶与种子质量比为8∶1～10∶1，每天更换干硅胶，干燥5～10天，将种子含水量控制在2.9～6.9％之间；
S5、地蜡保护种子再度返潮：为了防止干燥后的种子取出后再度受潮，将海绵沾上地蜡，均匀地在种子上涂抹3～4遍，再用脱脂纱布将地蜡粉擦掉；
S6、低温冷藏：将地蜡涂抹后的种子用锡箔纸袋密闭包装，先放入温度为-25℃～40℃的低温环境下保存30～60分钟，再将其装入充有液氮的密封袋(-196摄氏度)进行超低温保存。
优选地，所述步骤S1中多菌灵浸泡液由50％的多菌灵可湿性粉剂与水兑制而成，每8～10克的50％的多菌灵可湿性粉剂兑水2～2.5L。
优选地，所述步骤S2中的种子晾晒盒四周为宽2-4cm、高3-5cm的木条，长可根据需要自定，晾晒盒的底部为透气性好的孔径为8目的高密度聚乙烯(HDPE)防虫网。
本发明具有以下有益效果：
1、通过地蜡保护种子，实现了再度防潮：种子含水量是影响种子保持时间的主要因素之一。在以往种子干燥的过程中，只是采用干燥剂进行控制种子含水量。但实际上种子只要与空气接触，空气中的水分会通过种子的呼吸作用再度进入种子内，影响种子的保存时间、种子寿命、种子活力。本专利通过在干燥剂干燥之后的种子上涂抹具有防潮功能的地蜡控制种子含水量；
2、采用冷冻保护剂在低温冷藏前进行预冷冻，有效地抑制力种子内水分的结晶过程，保护了种子细胞结构。
3、长期保持种子活性，保证种子发芽率，提高出苗率和幼苗定居能力，减少和避免种质流失，有效地保护种质资源和生物遗传多样性，尤其是为干旱区浅山带优势灌木黑果小檗更新和恢复提供技术指导。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
一种黑果小檗种子长期保存的方法，包括如下步骤：
消毒杀菌：将在新疆天山东部国有林管理局板房沟分局采集的健康黑果小檗种子，取出外果皮后获得种子，自然晾干后在多菌灵浸泡液中浸泡45分钟。每8克的50％的多菌灵可湿性粉剂兑水2L。将种子平铺在带木架的网筛上，平铺的厚度为1cm。在硫磺熏蒸器中加入硫磺粉末，对网晒的种子进行熏蒸1h。每5天熏蒸一次，连续熏蒸2次。
种子晾晒：将杀菌消毒后的黑果小檗种子放置在种子晾晒盒上晾晒5天，每1h翻动一次。种子晾晒盒四周为宽2cm、高3.5cm、长2.5米的木质框，晾晒盒的底部为透气性好的孔径为8目的高密度聚乙烯(HDPE)防虫网。
冷冻保护处理：将干燥后的黑果小檗种子置于2.5℃条件下，在乙二醇I5％+二甲基亚砜(DMSO)(10％)+蔗糖10％的混合液中浸泡45分钟。
干燥：将晾晒好的黑果小檗种子置于脱脂纱布袋中，连同纱布放在下层为硅胶的干燥器中。硅胶与种子质量比为10∶1，每天更换干硅胶。干燥7天，将种子含水量控制在5.5～6.0％之间。
地蜡保护种子：为了防止干燥后的种子取出后再度受潮，将海绵沾上地蜡，均匀地在种子上涂抹3遍，再用脱脂纱布将地蜡粉擦掉。
低温冷藏：将地蜡保护后的种子用锡箔纸袋密闭包装，先放入温度为-30℃的低温环境下保存45分钟，再将其装入充有液氮的密封袋(-196摄氏度)进行超低温保存。
实施例2
一种黑果小檗种子长期保存的方法，包括如下步骤：
消毒杀菌：将在新疆阿尔泰山国有林管理局小东沟分局采集的健康黑果小檗种子，取出外果皮后获得种子，自然晾干后在多菌灵浸泡液中浸泡60分钟。每10克的50％的多菌灵可湿性粉剂兑水2.5L。将种子平铺在带木架的网筛上，平铺的厚度为1.5cm。在硫磺熏蒸器中加入硫磺粉末，对网晒的种子进行熏蒸1h。每7天熏蒸一次，连续熏蒸2次。
种子晾晒：将杀菌消毒后的黑果小檗种子放置在种子晾晒盒上晾晒5天，每1h翻动一次。种子晾晒盒四周为宽2cm、高3.5cm、长2.5米的木质框，晾晒盒的底部为透气性好的孔径为8目的高密度聚乙烯(HDPE)防虫网。
冷冻保护处理：将晾晒后的黑果小檗种子置于5℃条件下，在乙二醇I5％+二甲基亚砜(DMSO)(10％)+蔗糖10％的混合液中浸泡60分钟。
干燥：将晾晒好的黑果小檗种子置于脱脂纱布袋中，连同纱布放在下层为硅胶的干燥器中。硅胶与种子质量比为8∶1，每天更换干硅胶。干燥5天，将种子含水量控制在2.9％之间。
地蜡保护种子：为了防止干燥后的种子取出后再度受潮，将海绵沾上地蜡，均匀地在种子上涂抹3遍，再用脱脂纱布将地蜡粉擦掉。
低温冷藏：将地蜡保护后的种子用锡箔纸袋密闭包装，先放入温度为-30℃的低温环境下保存30分钟，再将其装入充有液氮的密封袋(-196摄氏度)进行超低温保存。
表1 20℃下地蜡涂抹和没有地蜡涂抹的黑果小檗种子含水量比较(起始含水量为6.9％)
| 保存时间(天) | 地蜡涂抹种子含水量(％) | 没有地蜡涂抹种子含水量(％) |
| 15 | 6.9 | 6.9 |
| 30 | 6.9 | 7 |
| 45 | 6.8 | 7.2 |
| 60 | 6.8 | 7.2 |
| 75 | 6.7 | 7.3 |
| 90 | 6.7 | 7.2 |
| 105 | 6.7 | 7.3 |
| 120 | 6.5 | 7.3 |
| 135 | 6.5 | 7.4 |
| 150 | 6.5 | 7.4 |
| 165 | 6.5 | 7.5 |
| 180 | 6.3 | 7.6 |
表2 不同含水量下不同保存时间黑果小檗种子发芽率(25℃)
表3 不同温度下(℃)不同保存时间(天)黑果小檗种子发芽率(含水量6.9％)
从表1-表3可知，与没有经过地蜡涂抹的种子相比，地蜡涂抹种子在较长的一段时间内都可以保持稳定的含水量；种子在含水量为低于6.9％(常温下)和温度低于-10℃(含水量为6.9％)条件下，在1年后仍然有发芽能力。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种黑果小檗种子长期保存的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、杀菌消毒：将健康饱满的黑果小檗种子在多菌灵浸泡液中浸泡45～60分钟后，用蒸馏水冲洗3～5遍；然后将种子平铺在带木架的网筛上，平铺的厚度为1～1.5cm；在硫磺熏蒸器中加入硫磺粉末，在温度为30℃的条件下对网筛上平铺的种子进行熏蒸1～1.5h；每5～7天熏蒸一次，连续熏蒸2～3次；
S2、种子晾晒：将杀菌消毒后的黑果小檗种子放置在种子晾晒盒上晾晒3～5天，每1～2h翻动一次；严禁直接将种子直接接触土地或是水泥地晾晒，否则接触地面的种子会因高温而影响影响种子内的酶活性；
S3、冷冻保护处理的预冷冻：将干燥后的黑果小檗种子置于-2～5℃条件下，在乙二醇15％+二甲基亚砜(DMSO)(10％)+蔗糖10％的混合液中浸泡45～60分钟；
S4、干燥：将预冷冻处理好的黑果小檗种子置于脱脂纱布袋中，连同纱布放在下层为硅胶的干燥器中，硅胶与种子质量比为8∶1～10∶1，每天更换干硅胶，干燥5～10天，将种子含水量控制在2.9～6.9％之间；
S5、地蜡保护种子再度返潮：将海绵沾上地蜡，均匀地在种子上涂抹3～4遍，再用脱脂纱布将地蜡粉擦掉；
S6、低温冷藏：将地蜡涂抹后的种子用锡箔纸袋密闭包装，先放入温度为-25℃～40℃的低温环境下保存30～60分钟，再将其装入充有液氮的密封袋(-196℃)进行超低温保存。
2.如权利要求1所述的一种黑果小檗种子长期保存的方法，其特征在于，所述步骤S1中多菌灵浸泡液由50％的多菌灵可湿性粉剂与水兑制而成，每8～10克的50％的多菌灵可湿性粉剂兑水2～2.5L。
3.如权利要求1所述的一种黑果小檗种子长期保存的方法，其特征在于，所述步骤S2中的种子晾晒盒四周为宽2-4cm、高3-5cm的木条，长可根据需要自定，晾晒盒的底部为透气性好的孔径为8目的高密度聚乙烯(HDPE)防虫网。
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| CN201610922686.9A Pending CN106550939A (zh) | 2016-10-21 | 2016-10-21 | 一种黑果小檗种子长期保存的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106550939A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111642170A (zh) * | 2020-07-10 | 2020-09-11 | 四川省林业科学研究院 | 一种梓叶槭种子保存方法 |
| CN114747375A (zh) * | 2022-04-16 | 2022-07-15 | 朱杰 | 混合种子存储方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1258444A (zh) * | 1999-11-23 | 2000-07-05 | 雷州市科技服务中心 | 超低温育种方法 |
| CN102696579A (zh) * | 2012-06-05 | 2012-10-03 | 杭州师范大学 | 一种石斛原球茎包埋玻璃化法超低温保存方法 |
| CN104012523A (zh) * | 2014-05-28 | 2014-09-03 | 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 | 一种白及种子的包埋玻璃化超低温保存方法 |
| CN104222072A (zh) * | 2014-08-27 | 2014-12-24 | 中国农业科学院麻类研究所 | 一种亚麻种子玻璃化超低温保存方法 |
-
2016
- 2016-10-21 CN CN201610922686.9A patent/CN106550939A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN1258444A (zh) * | 1999-11-23 | 2000-07-05 | 雷州市科技服务中心 | 超低温育种方法 |
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
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