CN106399324A - 一种调控根系发育的苹果生长素运输载体基因MdPIN1及其应用 - Google Patents
一种调控根系发育的苹果生长素运输载体基因MdPIN1及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106399324A CN106399324A CN201610754968.2A CN201610754968A CN106399324A CN 106399324 A CN106399324 A CN 106399324A CN 201610754968 A CN201610754968 A CN 201610754968A CN 106399324 A CN106399324 A CN 106399324A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mdpin1
- gene
- apple
- auxin
- arabidopsis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 58
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 title abstract description 63
- 239000002363 auxin Substances 0.000 title abstract description 63
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 63
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 title abstract description 8
- 239000013598 vector Substances 0.000 title description 7
- 230000002786 root growth Effects 0.000 title 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 22
- 230000010496 root system development Effects 0.000 claims abstract description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 6
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 claims description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 claims 5
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 abstract description 43
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 abstract description 30
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 11
- 230000021749 root development Effects 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 9
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 abstract description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 5
- 241000220225 Malus Species 0.000 description 22
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 101000605831 Arabidopsis thaliana Auxin efflux carrier component 1 Proteins 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 230000027870 phototropism Effects 0.000 description 3
- 230000009648 positive gravitropism Effects 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- 102000005591 NIMA-Interacting Peptidylprolyl Isomerase Human genes 0.000 description 2
- 108010059419 NIMA-Interacting Peptidylprolyl Isomerase Proteins 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000021016 apples Nutrition 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012869 germination medium Substances 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 2
- 101150037009 pin1 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000008121 plant development Effects 0.000 description 2
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 101100259716 Arabidopsis thaliana TAA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100160772 Arabidopsis thaliana YUC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100160774 Arabidopsis thaliana YUC2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100160776 Arabidopsis thaliana YUC4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100160779 Arabidopsis thaliana YUC6 gene Proteins 0.000 description 1
- MQETZQLZTJUQHR-UHFFFAOYSA-N Auxin B Natural products CCC(C)C1CC(C(C)CC)C(C(O)CC(=O)CC(O)=O)=C1 MQETZQLZTJUQHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 101000691848 Oryza sativa subsp. japonica Auxin efflux carrier component 1a Proteins 0.000 description 1
- 101100259832 Oryza sativa subsp. japonica TAR2 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000003766 bioinformatics method Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000005014 ectopic expression Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 238000011027 product recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- -1 that is Chemical compound 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8291—Hormone-influenced development
- C12N15/8294—Auxins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Botany (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种苹果生长素运输相关基因MdPIN1的分子克隆及其在调节根系发育，影响生长素运输中的应用。利用35S强启动子驱动原理的转基因技术，将MdPIN1基因在拟南芥中异位表达，获得转基因拟南芥。MdPIN1在拟南芥中超量表达影响植株根系生长素运输，但是对生长素合成没有显著影响。进一步表型观察发现，MdPIN1在拟南芥中超量表达显著抑制主根伸长，促进侧根数目增多。以上结果说明苹果MdPIN1基因在影响生长素运输，调节植物根系发育方面发挥重要作用。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学和生物技术领域，具体涉及一种苹果调控生长素运输及根系发育基因MdPIN1的克隆及其应用。
背景技术
生长素是一种重要的植物激素，在植物生长发育过程中发挥重要作用，包括植物器官发生(Benkováet al.,2003；Bohn-Courseau,2010),重力响应和及顶端优势(Kepinskiand Leyser,2005)以及组织分化(Reinhardt,2003)。细胞间单项极性运输是生长素特有的运输方式，即生长素只能从植物体形态学的上端向下端运输，且与重力作用无关(Liu etal.,1993；Lupini et al.,2014)。生长素极性运输存在于植物的茎，根和叶中，影响生长素不对称分布和植株形态(Friml,2003)。生长素的极性运输由定位于质膜上的生长素运输载体负责(Kepinski and Leyser,2005；Mravec et al.,2009)。
生长素运输载体，包括生长素输入载体(AUX1)和生长素输出载体(PINs)，它们通过调节生长素的运输和分布影响植物生长发育的各个方面( ek and Friml,2009；Haga and Sakai,2012)。在拟南芥中，有八个PIN基因(PIN1-PIN8)，PIN1首先被鉴定与生长素运输相关(Kramer et al.,2004)。AtPIN1基因编码622个氨基酸残基，包含8-12个对于生长素转运活性至关重要的跨膜区域。以前的研究已经表明AtPIN1参与侧根器官形成( et al.,2014),向光性反应(Blakeslee et al.,2004),形态发生和生长素运输(Heisler et al.,2010)。AtPIN1的功能可以被生长素运输抑制剂影响(Geldner et al.,2001)，进一步说明了AtPIN1在生长素极性运输过程中发挥重要作用。最近，水稻PIN1基因，OsPIN1被鉴定参与生长素依赖的不定根生成和分蘖(Xu et al.,2005)。
苹果是世界上重要的水果作物，对果树生长素极性运输进行研究有助于实现植株形态结构和根系发育调节，最终提高果树产量。在本研究中，我们通过同源克隆的方式鉴定了MdPIN1基因，结果显示，在拟南芥中异位表达MdPIN1促进了植株根系发育和生长素运输。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从苹果中鉴定并分离的一新型调控根系生长素运输以及根系发育的生长素输出载体基因MdPIN1。实验发现MdPIN1影响根系生长素运输，MdPIN1超量表达拟南芥表现出主根长度受到抑制，侧根数目增多的表型；提示该基因在植物生长素运输和根系发育中发挥重要作用。
首先，本发明公开了一种分离的苹果生长素运输载体基因MdPIN1，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
进一步的，所述生长素运输载体基因MdPIN1来自嘎啦苹果。
本发明第二方面公开了前述苹果生长素运输载体基因MdPIN1编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
本发明利用同源克隆技术获得了苹果生长素运输相关基因MdPIN1，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，蛋白质氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
MdPIN1基因序列如下：
ATGATTACATTATCCGACTTCTACCACGTCATGACGGCGGTGGTGCCGCTCTACGTGGCCATGATCTTGGCCTACGGCTCCGTGAAGTGGTGGAAGATCTTCACCCCCGACCAGTGCTCCGGCATCAACCGCTTCGTCGCCCTCTTTGCCGTCCCCCTCCTCTCCTTCCACTTCATCTCCACCAACGACCCTTACAACATGAACACCCGCTTCATTGCCGCCGACACCCTCCAGAAGCTGATCGTCCTCGCCGTCCTCGGCGTCTGGACCAAAGTCAGCAAAAGGGGCTGCCTGGAATGGACGATCACTCTCTTCTCCGTCTCCACTCTGCCCAACACTCTGGTCATGGGAATCCCATTGCTCAAGGGAATGTACGGCGATTTTTCCGGGAGTTTGATGGTGCAGATCGTCGTCCTCCAGTGCATTATCTGGTACACTTTGATGCTTTTCATGTTCGAATACCGAGGAGCAAGACTCCTCATCTCGGAGCAGTTTCCCGACACTGCGGGATCCATTGTCTCCATCCACGTCGACTCCGATATTATGTCGCTCGACGGAAGACAGCCCCTCGAGACTGAAGCGGAGATCAAGGAGGACGGCAAACTCCACGTCACTGTCAGAAAATCAAACGCTTCGCGCTCGGATATTTTATCGCGGCGATCTCAGGGGCTGTCGTCCACCACCCCGCGGCCGTCGAATCTCACTAATGCGGAGATTTACTCCCTGCAGTCTTCGAGAAATCCGACGCCGAGAGGGTCAAGTTTCAACCACACGGACTTCTACTCCATGATGGCTGCCGGAAGGAACTCGAATTTCGGAGCTAACGATGTTTATGGGATGTCTGCGTCCAGAGGGCCGACTCCACGGCCATCAAATTTCGAGGAAGACGGTGGCGGCGGCGCTGTCAGCTCCGCTACTGGAAATAAGCCACGGTTTTACCACGGCGGACAGAATAATGCAGTGGCGCATTACCCGGCCCCAAACCCAGGGATGTTTTCTCCGACGGCGTCCAGAACCGTCACCGCTAATGCTAATAGCAATGCCATGAATGCAAAGAGAGCTAATGGGCAAGCTCAGAAAACAGAGGACACCAATGGCGGGAAGGATCTTCATATGTTTGTTTGGAGCTCAAGTGCTTCTCCTGTTTCAGATGTGTTTGGAAGCAATGAATACGGTGGTGCTGCCCATGATCACAAAGAAGTAAAATTGGCTGTGTCTCCAGGAAAAGTGGAGGGGAGGAGAGAGAATCAGGAAGAGTATTTGGAGAGAGAAGATTTCAGATTTGGAAACAGAGATCAGATGAACATGAACAATGAGGCTGAGAAAGGAGGGGATGGGATTGGAAAAGCCAAAGTGATGCCTCCAACAAGTGTGATGACAAGGCTAATTCTCATCATGGTTTGGAGAAAACTCATTAGAAACCCAAACACTTACTCCAGCTTGATCGGCCTCACTTGGTCTCTAGTCTCATTCAGGTGGCACGTTCAAATGCCAGCCATTGTAGCGAAGTCCATCGCCATACTATCTGATGCAGGACTTGGCATGGCCATGTTCAGCCTCGGTTTGTTTATGGCTTTGCAGCCAAAGATCATAGCTTGTGGAAACTCCGTTGCAGCTTTTGCCATGGCTGTGAGATTCCTTACAGGTCCAGCTGTCATGGCAGCTGCTTCCATTGCTGTTGGCTTAAGAGGCACTCTCTTACATGTTGCCATTGTACAGGCAGCCCTACCCCAAGGAATTGTTCCCTTTGTCTTTGCCAAGGAATACAATGTACACCCTGATATTCTCAGCACGGGGGTTATATTTGGAATGTTGATTGCGTTGCCCATAACGCTTGTTTACTACATTTTGTTGGGGCTATGA(SEQ ID NO:1)
MdPIN1基因编码的氨基酸序列如下：
MITLSDFYHVMTAVVPLYVAMILAYGSVKWWKIFTPDQCSGINRFVALFAVPLLSFHFISTNDPYNMNTRFIAADTLQKLIVLAVLGVWTKVSKRGCLEWTITLFSVSTLPNTLVMGIPLLKGMYGDFSGSLMVQIVVLQCIIWYTLMLFMFEYRGARLLISEQFPDTAGSIVSIHVDSDIMSLDGRQPLETEAEIKEDGKLHVTVRKSNASRSDILSRRSQGLSSTTPRPSNLTNAEIYSLQSSRNPTPRGSSFNHTDFYSMMAAGRNSNFGANDVYGMSASRGPTPRPSNFEEDGGGGAVSSATGNKPRFYHGGQNNAVAHYPAPNPGMFSPTASRTVTANANSNAMNAKRANGQAQKTEDTNGGKDLHMFVWSSSASPVSDVFGSNEYGGAAHDHKEVKLAVSPGKVEGRRENQEEYLEREDFRFGNRDQMNMNNEAEKGGDGIGKAKVMPPTSVMTRLILIMVWRKLIRNPNTYSSLIGLTWSLVSFRWHVQMPAIVAKSIAILSDAGLGMAMFSLGLFMALQPKIIACGNSVAAFAMAVRFLTGPAVMAAASIAVGLRGTLLHVAIVQAALPQGIVPFVFAKEYNVHPDILSTGVIFGMLIALPITLVYYILLGL(SEQ ID NO:2)
从嘎啦苹果组培苗中提取总RNA，反转录得到cDNA。根据国际基因库中已发布的拟南芥中PIN1的保守氨基酸序列，设计兼并引物，进行常规聚合酶链式反应(Polymerasechain reaction,PCR)。将合适大小的PCR产物与pMD18-T载体连接，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选重组子，并进行测序分析确认，最后得到cDNA全长序列。
该基因开放阅读框(open reading frame,ORF)为1863bp。由此推得，该基因编码620个氨基酸，基因序列号为MDP0000138035，位于第6号染色体，包括6个外显子和5个内含子。将其氨基酸序列在国际基因库中检索，发现与已公布的拟南芥相关基因AtPIN1有较高的同源性，所以我们将该基因命名为MdPIN1。
本发明第三方面公开了前述苹果生长素运输载体基因MdPIN1在调节植株生长素运输和/或根系发育中的用途。
进一步的，所述苹果MdPIN1基因在根系发育中的用途，为提高主根长度并抑制侧根数目。
由实验结果可知，苹果MdPIN1基因影响根系生长素运输，但对根系生长素合成没有显著影响。
本发明第四方面公开了一种核酸构建体，包含处于强启动子控制下的前述苹果生长素运输载体基因MdPIN1。
进一步的，所述强启动子为花椰菜花叶病毒35S启动子。
利用强启动子(花椰菜花叶病毒35S启动子)驱动原理的转基因技术，将MdPIN1基因的超量表达载体转入拟南芥中，从而获得转基因植株。MdPIN1影响根系生长素运输，MdPIN1超量表达拟南芥表现出主根长度受到抑制，侧根数目增多的表型，说明MdPIN1基因在植株生长素运输和根系发育中发挥重要作用。
综上所述，本发明的有益效果在于，发明人首次在苹果中分离出一个新型的调节植株生长素运输和根系发育的生长素运输载体基因。
附图说明
图1载体的构建及转基因拟南芥的获得
(A:苹果MdPIN1基因PCR扩增产物电泳MdPIN1:MdPIN1基因扩增产物，Mark:分子量标记DM2000；B：35S:MdPIN1结构示意图；C：RT-PCR分析MdPIN1基因在转基因拟南芥L1，L2,L3株系中的表达水平)；
图2 MdPIN1对植株生长素运输的影响
(A-B：根系向地性实验，C-D：植株向光性实验)；
图3 MdPIN1对植株生长素合成没有显著影响
(A：DR5-GUS染色观察生长素积累情况B：定量PCR检测野生性拟南芥与转基因拟南芥及生长素合成基因YUC1，YUC2，YUC4，YUC6，TAA1表达量)；
图4 MdPIN1调节根系发育
(A：生长10天的野生型拟南芥(Col-0)和转基因拟南芥(L1，L2，L3)根系系统观察；B-C：转基因拟南芥与野生型拟南芥相比，主根长度明显受到抑制，侧根数目显著增多，Bars＝1cm)。
具体实施方式
本发明通过分子克隆技术研究了苹果生长素运输相关基因MdPIN1在调节根系发育，影响生长素运输中的应用。利用35S强启动子驱动原理的转基因技术，将MdPIN1基因在拟南芥中异位表达，获得转基因拟南芥；MdPIN1在拟南芥中超量表达影响植株根系生长素运输，但是对生长素合成没有显著影响。进一步表型观察发现，MdPIN1在拟南芥中超量表达可以显著抑制主根伸长，并促进侧根数目增多。
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1 嘎啦苹果MdPIN1基因的克隆
1.嘎啦苹果组培叶片RNA提取
通过CTAB法提取嘎啦苹果组培叶片的总RNA，包括以下步骤：
1)取1.5g经200mM NaCl盐处理24小时的嘎啦苹果组培苗，放入预冷的研钵，加液氮磨碎，转入预冷的50ml离心管中；
2)迅速加入10ml预热到65℃的提取缓冲液(CTAB 20％w/v，Tris-HCl 0.1mol/l，EDTA 25mol/l，NaCl 2mol/l，巯基乙醇2％w/v，PVP 2％w/v，无RNA酶的双蒸水定容，其中PVP和巯基乙醇现用现加)，轻轻混匀，65℃水浴中0.5小时；
3)加入与上步离心管液等体积的水饱和酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)混合物，冰浴振荡0.5小时，4℃、12,000rpm离心20分钟；将上清液转移到新的50ml离心管中；
4)加入1/3上清液体积的10mol/L预冷LiCl，-20℃放置3小时，12,000rpm离心30分钟，弃上清液；
5)加入500μl SSTE缓冲液(NaCl 1mol/l，SDS 0.5％w/v，EDTA 10mol/l，无RNA酶的双蒸水定容)充分悬浮沉淀后，平均分装到2支1.5ml离心管中；
6)分别加入与悬浮液等体积的水饱和酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)混合物，冰浴振荡10分钟，4℃、12,000rpm离心10分钟；将上清液转移到新的1.5ml离心管；
7)分别加入与上清液等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合物，冰浴振荡10分钟，4℃、12,000rpm离心10分钟；将上清液转移到新的1.5ml离心管；
8)加入2.5倍上清液体积的预冷无水乙醇，-20℃放置1-2小时；
9)于4℃、12,000rpm离心20分钟，70％乙醇洗2次；
10)于4℃、14,000rpm离心10分钟，超净台上风干沉淀；加入20μl DEPC水溶解RNA。
11)置-80℃储藏备用，或立即进行以下反转录实验。
2.将总RNA反转录得到cDNA
总RNA的反转录使用市售的反转录试剂盒，获得反转录cDNA。
3.MdPIN1全长DNA序列的扩增
设计兼并引物(MdPIN1-F/MdPIN1-R)，以上述反转录cDNA为模板进行PCR扩增。
MdPIN1-F：5’-CCACTCAATCTCTCTGCCAAT-3’(SEQ ID NO:3)；
MdPIN1-R：5’-GACTGGTGAGAGGGAGAGTT-3’(SEQ ID NO:4)。
PCR扩增体系：纯化的cDNA产物25μl，5×TdT缓冲液10μl，0.1％BSA5μl，10mM dCTP2.5μl，TdT 15U，双蒸水定容至50μl。
PCR扩增程序：94℃预变性5分钟；循环参数为94℃变性30秒、56℃退火30秒、72℃延伸90秒，进行32个循环；72℃充分延伸10分钟。
PCR反应结束后，回收PCR产物并将其连接到pMD-18T载体上，获得pMD18-T-MdPIN1质粒。测序(北京六合华大基因科技股份有限公司)结果显示，MdPIN1基因核苷酸序列如SEQID NO:1所示；其氨基酸序列如SEQID NO:2所示。测序正确的单克隆，碱法提取pMD18-T-MdPIN1的质粒DNA，-20℃保存，用于后续功能验证实验(附图1A)
4.苹果MdPIN1生物信息学分析
通过GDR数据库(http://www.rosaceae.org/)分析MdPIN1基因的染色体位置和基因组结构。结果显示，MdPIN1定位于苹果基因组的第6号染色体上，由6个外显子和5个内含子构成。
MdPIN1基因编码区含有1863bp的核苷酸，利用DNASTAR相关软件进行序列分析，苹果MdPIN1基因编码620个氨基酸。通过NCBI网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)的数据库和expasy网站(http://www.expasy.org/)的分析软件，对MdPIN1蛋白预测序列的功能结构域和保守域进行比较分析，结果发现：MdPIN1预测蛋白在9-615aa含有6个连续的跨膜结构域，这对于MdPIN1蛋白的膜定位至关重要。
实施例2 MdPIN1基因载体的构建
为进一步研究MdPIN1基因的功能，将包含有MdPIN1基因编码区在内的共1863bp片段正确插入表达载体pCAMBIA 1300上(附图1B)。
1.利用DNAMAN软件，根据分离出的MdPIN1基因的核苷酸序列(SEQ.ID.NO:1)，设计带酶切位点的引物EMdPIN1-F和EMdPIN1-R(SEQ ID NO:18-19)，以实例1保存的pMD18-T-MdPIN1的质粒DNA为模板，进行PCR反应，扩增带有EcoRI和PstI酶切位点的MdPIN1序列。
EMdPIN1-F：5’-CTGCAGCCACTCAATCTCTCTGCCAAT-3’(SEQ ID NO:5)，划横线部分为PstⅠ酶切位点；
EMdPIN1-R：5’-GGATCCGACTGGTGAGAGGGAGAGTT-3’(SEQ ID NO:6)，划横线部分为BamHⅠ酶切位点。
扩增体系及扩增程序同实施例1，仅将引物和模板进行替换。
2.PCR反应结束后，1.0％琼脂糖凝胶电泳、PCR产物回收、载体连接、转化、测序。碱法提取其质粒DNA，用PstⅠ和BamHⅠ双酶切，鉴定正确后用于后面的实验。
3.用PstⅠ和BamHⅠ两个内切酶，同时双酶切前一步骤所得质粒DNA与pCAMBIA 1300质粒，回收MdPIN1的片段和pCAMBIA 1300载体片段，用T4连接酶将二者连接起来。筛选阳性克隆进行测序，从中选择正确的重组子pCAMBIA 1300-MdPIN1。
4.用构建好的重组子pCAMBIA 1300-MdPIN1转化农杆菌LB4404感受态细胞。进行PCR鉴定，挑取阳性菌落进行测序。测序正确的重组子pCAMBIA 1300-MdPIN1单克隆用于后面拟南芥的转化。
实施例3 获得转基因拟南芥
将获得的拟南芥种子，分别用70％酒精消毒3min，4％次氯酸钠消毒8-10min(期间多次摇晃)，灭菌水冲洗5次，吸干水。播种于种子萌发培养基上(直接铺于表面)，光培养(25-28℃，16h长日照/8h短日照，10d)，至小苗长出。移栽到基质培养到开花。
挑取农杆菌单克隆菌落接种于10mL YEP液体培养基(含50mg/L潮霉素)中，28℃、200rpm，振荡培养至OD600为0.6-0.8(约48h)；取其中lmL菌液加入20mL YEP液体培养基内，28℃、200rpm，振荡培养至OD600为0.6-0.8(约5h)。离心收集菌体，用侵染液(含0.05g/ml蔗糖、0.03-0.05％Silweet)悬浮稀释20倍，备用；
将拟南芥花序浸到侵染液中15-20s，收集果荚，50mg·L-1潮霉素抗性筛选后，PCR检测得到阳性转基因植株，经过连续3代筛选得到T3代纯合体，收取种子，进行表型分析。
利用筛选培养基(含100mg/L潮霉素)筛选抗潮霉素阳性的候选转基因株系，共获得3个35S:MdPIN1阳性株系(L1、L2、L3)；为进一步鉴定转基因株系，在进行继代培养时，每株系各取0.1g左右的组培苗，提取相应的RNA，反转录并进行半定量PCR检测，以确定这些株系中MdPIN1的表达水平。结果显示，MdPIN1基因在L1、L2及L3中过量表达(附图1C)。
实施例4 转基因拟南芥的根系表型
作为生长素输出载体，PIN1基因调控生长素运输。为了研究MdPIN1对生长素运输的影响，我们实施根系向地性实验和向光性实验。
1.根系向地性实验
取野生型(Col-0)和转基因拟南芥竖直培养生长6天的幼苗暗处倾斜135°培养，分别在生长8h,18h,28h时拍照观察，并计算主根弯曲度数。结果发现，与野生型拟南芥相比，35S::MdPIN1转基因拟南芥弯曲度数更大(附图2A-B)，暗示转基因拟南芥中生长素运输可能受到影响。
2.向光性实验
取野生型(Col-0)和转基因拟南芥暗处生长5天的幼苗在单侧光照下培养，观察统计植株下胚轴弯曲角度。结果显示，野生型拟南芥相比，35S::MdPIN1转基因拟南芥下胚轴弯曲度数更大(附图2C-D)。以上结果说明，转基因拟南芥中生长素运输可能受到影响。
实施例5 MdPIN1对生长素合成没有显著影响
DR5作为生长素的Mark基因，可以用来种子杂交。选择生长状态良好的DR5-GUS转基因拟南芥(山东农业大学生命科学学院张宪省教授提供)以及MdPIN1转基因拟南芥进行杂交。杂交成功后，收集果荚，PCR检测得到阳性转基因植株，经过连续3代筛选得到T3代纯合体，收取种子，进行表型分析。
GUS染色液染色观察根系中生长素积累情况。结果显示，在DR5-GUS/MdPIN1杂交植株中，主根根尖与侧根原基部位GUS染色没有显著差异，说明超量表达MdMIEL1基因可能不影响生长素积累(附图3A)。
定量PCR检测野生型与转基因拟南芥中生长素合成基因(AtYUC1，AtYUC2，AtYUC4，AtYUC6，AtTAA1)表达量(检测方法参考Mashiguchi K,Tanaka K,Sakai T,et al.The mainauxin biosynthesis pathway in Arabidopsis[J].Proceedings of the NationalAcademy of Sciences,2011,108(45):18512-18517.)。结果显示，拟南芥与转基因拟南芥中生长素合成基因没有显著差异，暗示MdPIN1基因可能不影响生长素的合成(附图3B)。
实例6 MdPIN1调控根系发育
为进一步确定转基因植株的功能，将拟南芥播种在竖直的MS培养基上，观察拟南芥根系发育表型。
(1)种子处理。将获得的拟南芥种子(Col-0，L1，L2，L3)，分别用70％酒精消毒3min，4％次氯酸钠消毒8-10min(期间多次摇晃)，灭菌水冲洗5次，吸干水。播种于种子萌发培养基上。4℃层积处理4天后至光下培养(21-24℃，16h长日照/8h短日照)。
(2)选择萌发后4天左右、根系发育一致的野生型拟南芥(Col-0)和转基因拟南芥(L1，L2，L3)，转移到MS培养基上竖直培养(21-24℃，16h长日照/8h短日照)。继续培养6天后，观察拟南芥根系表型并拍照。
结果发现，与野生型拟南芥相比，超量表达MdPIN1的转基因拟南芥主根长度明显受到抑制，侧根数目显著增多。(附图4A-C)
综上所述，MdPIN1基因不仅影响生长素运输，对根系发育也有显著影响。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种分离的苹果生长素运输载体基因MdPIN1，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.根据权利要求1所述的分离的苹果生长素运输载体基因MdPIN1，其特征在于，所述生长素运输载体基因MdPIN1来自嘎啦苹果。
3.一种分离的权利要求1所述苹果生长素运输载体基因MdPIN1编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
4.权利要求1所述苹果生长素运输载体基因MdPIN1在调节植株生长素运输和/或根系发育中的用途。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述苹果MdPIN1基因在根系发育中的用途，为提高主根长度并抑制侧根数目。
6.一种核酸构建体，包含处于强启动子控制下的权利要求1所述苹果生长素运输载体基因MdPIN1。
7.根据权利要求6所述的核酸构建体，其特征在于，所述强启动子为花椰菜花叶病毒35S启动子。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610754968.2A CN106399324A (zh) | 2016-08-30 | 2016-08-30 | 一种调控根系发育的苹果生长素运输载体基因MdPIN1及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610754968.2A CN106399324A (zh) | 2016-08-30 | 2016-08-30 | 一种调控根系发育的苹果生长素运输载体基因MdPIN1及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106399324A true CN106399324A (zh) | 2017-02-15 |
Family
ID=58002717
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610754968.2A Pending CN106399324A (zh) | 2016-08-30 | 2016-08-30 | 一种调控根系发育的苹果生长素运输载体基因MdPIN1及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106399324A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107176980A (zh) * | 2017-06-15 | 2017-09-19 | 山东农业大学 | 苹果多肽MdCEP1PHyp及其应用 |
| CN107245489A (zh) * | 2017-06-08 | 2017-10-13 | 山东农业大学 | 一种调控根系发育的苹果多肽激素基因MdCEP7及其应用 |
| CN111793636A (zh) * | 2020-07-29 | 2020-10-20 | 山东农业大学 | 一种调控不定根发育的苹果基因MdBT2及其应用 |
| CN112136689A (zh) * | 2020-08-31 | 2020-12-29 | 山东大学 | 一种检测根际微生物对植物生长及根系发育影响的实验体系及其应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101736014A (zh) * | 2010-01-22 | 2010-06-16 | 南京农业大学 | 水稻生长素运输蛋白基因OsPIN2的基因工程应用 |
| CN102268442A (zh) * | 2011-01-27 | 2011-12-07 | 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所 | 芒果生长素极性输出载体MiPIN1基因及其克隆方法 |
| CN102296084A (zh) * | 2011-09-05 | 2011-12-28 | 山东大学 | 生长素输出载体pin1家族基因在玉米、高粱育种中的应用 |
| CN102373224A (zh) * | 2011-08-05 | 2012-03-14 | 河北师范大学 | 一种水稻生长素运输蛋白基因及其应用 |
| CN104520954A (zh) * | 2011-11-16 | 2015-04-15 | 昆士兰州为代表的农业,渔业和林业部门 | 通过修饰持绿stgx基因座而生产的耐旱植物 |
-
2016
- 2016-08-30 CN CN201610754968.2A patent/CN106399324A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101736014A (zh) * | 2010-01-22 | 2010-06-16 | 南京农业大学 | 水稻生长素运输蛋白基因OsPIN2的基因工程应用 |
| CN102268442A (zh) * | 2011-01-27 | 2011-12-07 | 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所 | 芒果生长素极性输出载体MiPIN1基因及其克隆方法 |
| CN102373224A (zh) * | 2011-08-05 | 2012-03-14 | 河北师范大学 | 一种水稻生长素运输蛋白基因及其应用 |
| CN102296084A (zh) * | 2011-09-05 | 2011-12-28 | 山东大学 | 生长素输出载体pin1家族基因在玉米、高粱育种中的应用 |
| CN104520954A (zh) * | 2011-11-16 | 2015-04-15 | 昆士兰州为代表的农业,渔业和林业部门 | 通过修饰持绿stgx基因座而生产的耐旱植物 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 无: "XM_008376623.2", 《GENBANK》 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107245489A (zh) * | 2017-06-08 | 2017-10-13 | 山东农业大学 | 一种调控根系发育的苹果多肽激素基因MdCEP7及其应用 |
| CN107245489B (zh) * | 2017-06-08 | 2020-09-15 | 山东农业大学 | 一种调控根系发育的苹果多肽激素基因MdCEP7及其应用 |
| CN107176980A (zh) * | 2017-06-15 | 2017-09-19 | 山东农业大学 | 苹果多肽MdCEP1PHyp及其应用 |
| CN111793636A (zh) * | 2020-07-29 | 2020-10-20 | 山东农业大学 | 一种调控不定根发育的苹果基因MdBT2及其应用 |
| CN111793636B (zh) * | 2020-07-29 | 2021-09-28 | 山东农业大学 | 一种调控不定根发育的苹果基因MdBT2及其应用 |
| CN112136689A (zh) * | 2020-08-31 | 2020-12-29 | 山东大学 | 一种检测根际微生物对植物生长及根系发育影响的实验体系及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1945021A2 (en) | Methods of increasing abiotic stress tolerance and/or biomass in plants and plants generated thereby | |
| CN107746846A (zh) | 编码甘薯bZIP转录因子的IbABF4基因及应用 | |
| CN109988231A (zh) | 水稻基因OsGRF4在提高植物耐冷性中的应用 | |
| CN113150097B (zh) | 一种与植物耐逆性相关的蛋白OsERF096及其编码基因与应用 | |
| CN107245489B (zh) | 一种调控根系发育的苹果多肽激素基因MdCEP7及其应用 | |
| CN106399324A (zh) | 一种调控根系发育的苹果生长素运输载体基因MdPIN1及其应用 | |
| CN105504034B (zh) | Myb37蛋白及其编码基因在调控植物抗旱性中的应用 | |
| JP2016013057A (ja) | 植物に多収性を付与する核酸、収量が増加した形質転換植物を作製する方法、植物の収量を増大させる方法 | |
| CN106480065B (zh) | 一种苹果抗逆基因MdoCKX7及其应用 | |
| CN115011631B (zh) | 调控玉米苗期抗旱性的蛋白及其编码基因和应用 | |
| CN107653249A (zh) | 一种大麦钙调蛋白基因HvCAM1及其耐盐应用 | |
| CN113584047B (zh) | 大麦HvNAT2基因及其用途 | |
| CN107253980B (zh) | OsGRF7基因在水稻株型调控中的应用 | |
| CN104610438B (zh) | 一种棉花胁迫应答相关蛋白GhGeBP及其编码基因与应用 | |
| CN103288943B (zh) | bHLH13蛋白及其编码基因和其应用 | |
| US20120167247A1 (en) | Inhibition of bolting and flowering of a sugar beet plant | |
| CN107573411A (zh) | 小麦TaZIM1‑7A蛋白在调控作物抽穗期中的应用 | |
| CN104878018B (zh) | 一种控制玉米行粒数和穗粒数的多效性基因及其应用 | |
| CN105237631B (zh) | 一种来源于羊草与抗寒相关的蛋白及其编码基因与应用 | |
| CN108841835B (zh) | 大豆ZF-HD蛋白编码基因GmZFHD11的应用 | |
| CN110818786A (zh) | 一种组成型激活态小g蛋白及其在水稻耐盐方面的应用 | |
| CN104177482B (zh) | 一种植物耐逆性相关SbSNAC1蛋白及其编码基因和应用 | |
| CN112195187B (zh) | 一种水稻分蘖角度调控基因及其编码的蛋白和应用 | |
| CN105175522B (zh) | 百脉根ap2/erf转录因子及其编码基因和应用 | |
| CN105734078A (zh) | 包含苹果根系发育相关基因MdMIEL1的遗传构建体及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170215 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |