CN1055182A - N-(吡咯并《2，3-d》嘧啶-3-基酰基)-谷氨酸衍生物 - Google Patents
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Abstract
N-(酰基)谷氨酸衍生物中酰基为4-羟基吡咯
并[2，3-d]嘧啶-3-基取代者，是抗肿瘤剂。典型的具
体衍生物是N-[4-(2-{4-羟基-6-氨基吡咯并
[2，3-d]嘧啶-3-基}乙基)苯甲酰基]-L-谷氨酸。
Description
本发明所涉及的是一种谷氨酸衍生物，其结构式如下：
式中
R1是-OH或-NH2;
R2是氢或药物上可接受的阳离子;
R3是未取代的或被氯基、氟基、甲基、甲氧基或三氟甲基所取代的1，4-亚苯基或1，3-亚苯基;噻吩二基或呋喃二基，它们中每种均可是未取代的或为氯基、氟基、甲基、甲氧基或三氟甲基所取代的;环己基二基;或烷烃二基;
R4是氢、甲基或羟甲基;
R5是氢、1-6个碳原子的烷基、或氨基，而且以＊标识的碳原子是S-构型，
本发明的化合物被描述为包括吡咯并[2，3-d]嘧啶杂环环状系统，所说杂环环状系统按如下编码：
可以理解的是，Ⅰ式所描述的这类吡咯并[2，3-d]嘧啶是相应的5-H-6-OXO或5-H-6-亚氨基结构的异构等同物。除另有说明，为简化起见在本文中该化合物用6-羟基和6-氨基的惯例来描述和命名，而5-H-6-OXO和5-H-6-亚氨基结构是完全相当的则是可以理解的。
Ⅰ式的化合物对一种或多种使用叶酸、特别是使用叶酸的代谢衍生物作为作用物的酶有抑制作用。这些化合物作为胸苷酸合成酶的抑制剂显得是特别有效的，而该合成酶使用N5，N10-甲基亚基-四氢叶酸作为辅酶能促使脱氧尿苷酸甲基化而成为脱氧胸苷酸。这样，该化合物可单独或联合使用以抑制那些另外还依赖于被抑制的酶的瘤的生长。
本发明还涉及：Ⅰ式化合物的可药用的盐、这些化合物及其盐的制备方法、制备这些化合物时使用的化学中间体、与哺乳动物中的瘤进行斗争的方法及含有这些化合物或其盐的药用组合物。
可通过去掉保护基而直接转变成所需的最终化合物（Ⅰ式）的第一组有用的化学中间体是结构式如下的化合物：
式中：
R3定义如上;
R2′是氢或羧基保护基;
R4′是氢、甲基、羟甲基或带有羟基保护基的羟甲基;
R5′是氢、烷基、氨基或带有保护基的氨基;
R6是氢或烷酰氧基;
至少R2′、R4′和R5′中之一分别是羧基保护基、羟基保护基或氨基保护基。
Ⅰ式的化合物可以游离二羧酸的形式使用，在此情况下两个R2基团都是氢。另一方面，该化合物通常可以以其医学上可接受的盐的形式被使用，后一种用法更为可取，在此情况下，两个R2基团中之一或二者是医药上可接受的阳离子。这种盐的形式（包括其水合物）通常是晶态的，有利于形成溶液或配制药用组合物。与碱的医药上可接受的盐包括由碱金属、碱土金属、非毒性金属、铵和单基取代的、双取代的及三取代的胺所形成的盐，形成这类盐的物质例如有：钠、钾、锂、钙、镁、铝、锌、铵、三甲基铵、三乙醇铵、吡啶鎓及被取代的吡啶鎓盐。优先选用一钠和二钠盐，特别是二钠盐。
R3基团是具有至少两个处在带有自由价键的碳原子之间的碳原子的二价基团。比如R3可以是1，4-亚苯基环或1，3-亚苯基环，该环是未取代的或任选地被氯基、氟基、甲基、甲氧基或三氟甲基所取代的。
另一方面，R3可以是一个噻吩二基或呋喃二基，也就是说，可以是一个噻吩环或呋喃环，其中两个氢原子已从两个环碳原子上被去掉，例如噻吩-2，5-二基、噻吩-3，5-二基、噻吩-2，4-二基、及噻吩-3，4-二基环状系统，及呋喃-2，5-二基-二基、呋喃-3，5-二基、呋喃-2，4-二基、呋喃-3，4-二基环状系统，这些环状系统可以是未取代的或是被氯基、氟基、甲基、甲氧基或三氟甲基所取代的。尽管从理论上说噻吩-3，5-二基系统是噻吩-2，4-二基系统的同等物，但在本文中这两个术语用来表示由该噻吩环在分子的其余部分中的取向而产生的二种异构形式，例如，所述的靠近R3的羧基是在该噻吩环的2位上的结构，以及所述靠近R3的羧基是在噻吩环的3位上的结构。同样的惯例也适用于呋喃环。
另一方面，R3可以是一个环己烷二基基团，即6个碳原子的二价环烷基团，如环己烷-1，3-二基及环己烷-1，4-二基。
另外，R3可以是一种烷烃二基，即直链或枝链的、2-4个碳原子的二价脂族基团，如桥亚乙基、三亚甲基、四亚甲基、丙烷-1，2-二基、丙烷-2，3-二基、丁烷-2，3-二基、丁烷-1，3-二基及丁烷-2，4-二基。还可理解的是，尽管从理论上讲丙烷-1，2-二基是丙烷2，3-二基的等同物，丁烷-1，3-二基是丁烷-2，4-二基的等同物，但在本文中使用这二个术语旨在表示由相对于该分子的其余部分的不对称烷烃二基链取向而产生的二种异构形式。
在本文中所使用的以R2′、R4′及R5′标识的保护基指的是这样一些基团：它们通常不出现于最终的用于治疗的化合物中，但它们是有意地在合成的某一阶段被引入以便保护那些在化学操作过程中可能反应的基团，然后这些保护基在合成的较后的阶段中被除去。由于带有这类保护基的化合物主要是作为化学中间体来说具有重要意义（虽然某些衍生物也显示出生物活性），所以其精确的结构并不是关键的。各种形成及去除这类保护基的反应在许多著作中都有叙述，例如：“Protective Groups in Organic Chemistry”，Plenum Press，London and New York，1973;Greene.Th.W.“Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley，New York，1981;“The Peptides”，Vol.I.Schroeder and Lubke.Academic Press，London and New York，1965;“Methoden der organischen Chemie”，Houben-Weyl，4th Edition，Vol.15/I，Georg Thieme Verlag，Stuttgart 1974;引证上述公开内容仅供参考。
就R2′而言，羧基可以以酯基的形式得到保护，所述酯基在充分缓和的条件下可以有选择地被除去，从而不会破坏所需要的分子结构，所说的酯特别是指1-12个碳原子的低级烷基酯，例如甲基或乙基酯，尤其是在1位上枝连的低烷基酯，例如叔丁基酯;这些低烷基酯在1-或2-位上被下列基团所取代：（ⅰ）低级烷氧基，如甲氧甲基、1-甲氧乙基及乙氧甲基;（ⅱ）低级烷硫基，如甲硫基甲基及1-乙硫基乙基;（ⅲ）卤素，如2，2，2-三氯乙基、2-溴乙基及2-碘乙氧羧基;（ⅳ）一或两种苯基，它们每种可以是未经取代的或是被下列基团单基取代、双取代或三取代：低级烷基例如叔丁基，低级烷氧基例如甲氧基，羟基，卤基例如氯基，硝基例如苄基、4-硝基苄基、二苯甲基、二-（4-甲氧苯基）甲基;或（ⅴ）芳酰基如苯酰基。羧基还可以以有机甲硅烷基的形式受到保护，这类甲硅烷基例如是三甲基甲硅烷基乙基或三-低级烷基甲硅烷基，例如是三甲基甲硅烷氧基羰基。
对于R4′，羟基基团可通过形成乙缩醛和缩酮而被保护，例如形成四氢吡咯-2-基氧基（THP）衍生物。
就R5′而言，氨基基团可以利用酰基基团以酰胺的形式被保护，该酰基基团在缓和的条件下可有选择地被除去，在这类酰基中要特别指出的是甲酰;在羰基基团的α位上枝连的低级烷酰基，尤其是诸如新戊酰之类的叔烷酰基;或是一个在羰基的α位被取代的低级烷酰基，比如是三氟乙酰。
优先选用的Ⅰ式化合物是其中的R5为氨基或氢的那些化合物。在这类化合物中，R1最好是羟基、R3是1，4-亚苯基而R4是氢或羟甲基。在此类别中优先选用的还有下述化合物，其中的R1为羟基、R3是噻吩二基而R4是氢或羟甲基。
本发明的化合物可按第一工艺通过使Ⅲ式化合物催化加氢而制成：
式中：
Z1是氢，或与R4′结合在一起的Z1为碳-碳键;
R2′是氢或羧基保护基团;
R3和R6定义如上;
当所取R4′与Z1无关时，则R4′是氢、甲基、羟甲基或被羟基保护基团所取代的羟甲基;
R5′是氢、1-6个碳原子的烷基，氨基或氨基保护基团。
适用的加氢催化剂包括贵金属及其氧化物，例如钯或氧化铂、氧化铑及附于载体（如碳或氧化钙）上的上述催化剂。
当Ⅲ式中与R4′连在一起的Z1是一个碳-碳键，即在Z1和R4′结合到其上面的两个碳原子之间存在着一个三键时，则该加氢产物中的R4′将是氢。若在R3（或任何为R2′、R4′和/或R5′所包含的保护基）中不存在任何手性，则加氢产物将是在标有＊的碳原子周围具有S-构形的单对映体。当Z1和R4′每个都是氢，也就是说，当Z1和R4′结合到其上面的两个碳原子之间存在双键时也是如此。
另一方面，当R4′不是氢时，得到一种R，S和S，S非对映体的混合物。该非对映体混合物本身可在治疗上使用（在去除保护基之后），或可用诸如色谱法进行机械分离。作为替代方法，各个非对映体可通过下述方法进行化学分离：与手性酸形成盐，例如10-樟脑磺酸、樟脑酸、α-溴樟脑酸、甲氧基乙酸、酒石酸、二乙酰酒石酸、苹果酸、吡咯烷酮-5-羧酸等的各对映体，然后分离出一个或这两个单独的非对映体的碱，任选地重复此工艺从而获得基本上不含其它成分的任一个非对映体或获得两者，它们的光学纯度＞95%。
R2′、R4′、R5′和/或R6所包含的保护基可在加氢之后通过酸性或碱性水解而除去，比如用氯化氢使R4′保护基裂开或用氢氧化钠使R2′或R5′保护基裂开，借此产生Ⅰ式的化合物。除去各种保护基的方法在上文所述的参考文献中已有叙述，引用这些文献作为参考。
采用与美国专利No.4，818，819中所述相似的方法可制备出Ⅲ式的化合物，但是要使用相应的卤代吡咯并[2，3-d]嘧啶。例如，使下列Ⅳ式的吡咯并[2，3-d]嘧啶与Ⅴ式的不饱和化合物进行反应：
式中X是溴基或碘基，R5′和R6定义如前;
式中Z1、R3及R4′定义如前，而R7是
式中R2′定义如前。在进行上述反应时有美国专利No.4818819中所述类型的钯/三取代的磷化氢催化剂存在，引证该专利的这一公开内容供参考。
当R7是-CONHCH（COOR2′）CH2CH2COOR2′时，这一偶联反应的产物进行前述的氢化并去除任何的保护基。
作为替代方法，也可使Ⅳ式的化合物，在有美国专利No.4818819中所述类型的钯/三取代的磷化氢催化剂存在的情况下，与Ⅵ式的化合物进行反应从而得到Ⅶ式的中间体。
式中，Z1、R2′R3及R4′定义如前，
Ⅶ式的产物可经氢化、水解而去除R2′和R6保护基，任选地在R5′所包含的氨基基团的中间体保护下按美国专利No.4684653中所述的方式采用常规的形成肽键（如DCC或氯代膦酸二苯酯）的缩合技术与被保护的谷氨酸衍生物偶合，然后除去这些保护基。
在进一步的变化中，采用美国专利No.4818819中所述的方法可制成Ⅲ式的化合物。例如使Ⅷ式的化合物在有美国专利No.4818819中所述类型的钯/三取代磷化氢催化剂存在下与Ⅸ式的化合物反应，
式中，Z1、R4′、R5′及R6定义如前，
式中，X、R3及R7也定义如前，该工艺的这种改型特别适用于（但不限于）制备那些其中R4是羟甲基的化合物，在这种情况下Ⅵ式中的R4′是一个被保护的羟甲基基团，例如是四氢吡喃-2-基氧基甲基。
Ⅷ式的化合物也可用美国专利No.4818819的方法、通过用Ⅹ式的不饱和化合物处理Ⅳ式的化合物而得到，
式中，R4″是甲基、被保护的羟甲基或三取代的甲硅烷基，上述处理是在有前述类型的钯/三取代磷化氢催化剂存在下进行的。这方法特别适用于（但不限于）制备那些其中的R4是羟甲基的化合物。
虽然不总是这种情况，但Ⅳ式中R6是氢的化合物可能趋向于有些不溶解于用来进行U.S4818819中所述反应的溶剂。在这种情况下，Ⅳ式中R6为氢的化合物可首先用氢化钠及一种适宜的链烷酸烷基酯（如新戊酸氯甲酯）处理，以便将一个烷酰氧基基团引入5-位中从而提高溶解度。
适于作为中间体并因其对酶的作用而十分有用的化合物小类是缺少谷氨酸侧链的Ⅺ和Ⅻ式的衍生物及其在医药上可接受的盐：
和
式中，R1是-OH或-NH2;
R4是氢、甲基或羟甲基;
R5是氢、1-6个碳原子的烷基、或氨基;
R8是氢、氯基、氟基、甲基、甲氧基、三氟甲基或羧基;
Y是-S-或-O-。
按下述方法获得Ⅺ式和Ⅻ式的化合物：按美国专利No.4818819中所述的方法，即在有一种钯/三取代磷化氢催化剂存在的情况下，使Ⅶ式的化合物与下式的化合物反应：
式中的X、Y及R8定义如前，使所得的偶联产物氢化、水解从而除去R2′保护基。典型的Ⅺ式和Ⅻ化合物有：3（2-苯基-3-羟丙基）-4-羟基-6-氨基-吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（噻吩-2-基）乙基]-4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（噻吩-2-基）乙基]-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（噻吩-2-基）乙基]-4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（噻吩-3-基）乙基]-4-羟基-6-氟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（噻吩-3-基）乙基]-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（噻吩-3-基）乙基-4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2（呋喃-2-基）乙基]-4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（呋喃-2-基）乙基]-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（呋喃-2-基）乙基]-4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（呋喃-3-基）乙基]-4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶，3-[2-（呋喃-3-基）乙基-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶及3-[2-（呋喃-3-基）乙基]-4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶。
如上所述，利用美国专利No.4818819中所述的不饱和化合物的钯催化偶联及美国专利No.4684653中所述的谷氨酸偶联反应、用合适的吡咯并[2，3-d]嘧啶取代其中所公开的吡咯并[2，3-d]嘧啶可以制备本发明的化合物，上述Ⅳ式的吡咯并[2，3-d]嘧啶中间体可采用下述方法得到：用N-碘琥珀酰亚胺处理ⅩⅢ式的化合物：
式中R5′和R6定义如本文，产生相应的2，3-二碘吡咯并[2，3-d]嘧啶，该2，3-二碘吡咯并[2，3-d]嘧啶随后用锌和乙酸处理以便选择性地除去2-位上的碘原子，结果得到相应的Ⅳ式的3-碘吡咯并[2，3-d]嘧啶。
按前述工艺得到Ⅱ式中R1为-OH的化合物。如果需要R1是-NH2的Ⅰ式化合物，可用1，2，4-三唑及（4-氯苯基）二氯磷酸酯处理R1是-OH的化合物，然后用浓氨处理该反应的产物。
前已述及，本发明的化合物对一种或多种用叶酸、尤其是用叶酸的代谢衍生物作为被用物的酶具有作用。例如，N-｛4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸显示出对人的T-细胞产生的淋巴母细胞的白血病细胞（CCRF-CEM）的生长具有很强的抑制作用，显示出0.004μ/ml的IC50。加入嘌呤（如次黄嘌呤）或加入氨基咪唑甲酰胺不会使细胞毒性反转，但加入在胸苷酸循环中而不是在重新嘌呤合成中显示出特殊的抑制性的胸苷则可使之反转。这些化合物可在取得资格的专业人员的指导下用来抑制瘤的生长，包括绒膜癌、白血病、妇女乳腺癌、头和颈的表皮癌、被鳞的或小细胞肺癌及各种淋巴肉瘤。这些化合物还可用于治疗蕈样真菌病和牛皮癣。
这些化合物可以口服，但最好单独地或与其它治疗剂一起对患有瘤的和需治疗的哺乳动物不经肠道给药，上述的其它治疗剂包括抗瘤剂、类固醇等。不经肠用药途经包括肌肉、鞘内、静脉内、及动脉内用药。剂量制度必须是按特定的瘤、病人状况及反应滴定，常用剂量为约10-约100mg/日，持续5-10天，或每天给药250-500mg，周期性（例如每14天）重复。虽然与现在使用的其它抗代谢物相比该化合物具有低毒性，但通过降低日剂量抑或隔日或间隔更长时间（例如每三天）用这化合物给药或者二种方法兼用，可以消除毒性反应。口服方式包括片剂和含1-10mg药剂/单位剂量的胶囊。含20-100mg/ml的等渗压盐水可用于不经肠给药。
下列实施例将用来进一步解释本发明。在核磁共振数据中，“S”代表单峰、“d”代表双峰、“t”代表三重峰、“q”代表四重峰、“m”代表多重峰、而“br”代表宽峰。
实施例1
3-碘-4-羟基-6-新戊酰氨基-吡咯并[2，3-d]嘧啶
将3.0g（0.02摩尔）的4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶和8.4g（0.07摩尔）的新戊酰氯在40ml吡啶中的溶液组成的混合物在80-90℃下搅拌30分钟，然后将此混合物蒸干，再把残留物溶于30ml甲醇中。添加10%的氨水，产生4.2g（89%）4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶，该化合物可用通过硅胶的色谱法、用8%的甲醇在二氯甲烷中的溶液洗脱而进一步纯化，溶点295℃，1NMR（d6-DMSO）δ 1.20（s，9H），6.37（d，J＝3.4Hz，1H），6.92（d，J＝3.4Hz，1H），10.78（s，1H），11.56（s，1H），11.82（s，1H）.对C11H14N4O2的分析计算值：C，56.40;H，6.02;N，23.92。实测值：C，56.16;H，6.01;N，23.67。
将9.9g（44毫摩尔）的N-碘丁二酰胺加到4.7g（20毫摩尔）4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶在200ml二甲基甲酰胺中的混合物里。于室温下在黑暗中搅该混合物18小时。通过蒸发除去大部分二甲基甲酰胺，再将残留的浆液注入300ml水中。经过滤收集所产生的固体，在真空中置于五氧化二磷上方使之干燥，得到2，3-二碘-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶，该化合物可采用色谱法在硅胶上、用2.5%的甲醇在二氯甲烷中的溶液洗脱而进一步纯化。熔点＞290℃，1NMR（d6-DMSO）δ 1.18（s，9H），10.85（s，1H），11.85（s，1H），12.42（s，1H）。对C11H12N4O2I2的分析计算值：C，27.18;H，2.49;N，11.53;I，52.22;
实测值：C，27.51;H，2.51;N，11.27;I，52.02。
按类似的制法，但从4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶和4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶（7-二氮次黄嘌呤）开始，结果分别获得2，3-二碘-4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶及2，3-二碘-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶，熔点＞205℃（化合物失去碘）。1NMR（d6-DMSO）δ 7.79（s，1H），11.93（s，1H），12.74（s，1H）。
将1.3g（20毫摩尔）锌粉加到4.86g 2，3-二碘-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶在100ml冰醋酸及25ml水中的混合物中。在室温下将该混合物搅拌18小时，用500ml水稀释，然后冷却。经过滤收集此固体并在真空下置于五氧化二磷上方干燥，得到3-碘-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶，该化合物可进一步经色谱法在硅胶上用2.5%的甲醇在二氯甲烷中的溶液洗脱而提纯。熔点＞240℃。1NMR（d6-DMSO）δ 1.20（s，9H），7.12（d，J＝1.8Hz，1H），10.82（s，1H），11.79（s，1H），11.89（s，1H）。对C11H13N4O2I的分析计算值为：C，36.69;H，3.64;N，15.56;I，35.24。实测值为C，36.91;H，3.58;N，15.65;I，35.56。
以类似的制法从2，3-二碘-4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶和2，3-二碘-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶开始，分别获得3-碘-4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶和3-碘-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶，熔点＞245℃（化合物失去碘）。1NMR（d6-DMSO）δ 7.20（d，J＝2.2Hz1H），7.82（d，J＝2.8Hz，1H），11.85（d，J＝1.1Hz，1H），12.17（s，1H）
实施例2
N-[4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯
往3.6g（10毫摩尔）充分干燥的3-碘-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶在40ml二甲基甲酰胺中的混合物里添加4.0g（13.19毫摩尔）的N-（4-乙炔基苯甲酰）-L-谷氨酸二甲酯、0.38g碘化铜（Ⅰ）、3ml三乙胺和1.0g四个一（三苯膦）钯。在室温下将此混合物搅拌2小时，然后倾入500ml水中。过滤收集此固体、空气干燥、然后在200ml甲醇中回流。冷却此混合物，过滤收集固体，再将该固体溶于21 10%的甲醇在二氯甲烷中的溶液里，在硅胶上用色层法分离。初始的黑带再次用色层法分离，将第一次与第二次所得到的无色带合在一起进行蒸发，得到结果3.5g N-[4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯，它可以通过从50%的甲醇在二氯甲烷中的溶液中重结晶而进一步纯化。熔点280-285℃，1NMR（d6-DMSO）δ 1.21（s，9H），1.96-2.15（m，2H），2.44（t，J＝7.5Hz，2H），3.56（s，3H），3.62（s，3H），4.40-4.45（m，1H），7.43（s，1H），7.53（d，J＝8.4Hz，2H），7.87（d，J＝8.4Hz，2H），8.82（d，J＝7.4Hz，1H），10.95（s，1H），11.95（s，1H）。
对C27H29N5C7的分析计算值为：C，60.56;H，5.46;N，13.08。实测值：C，60.55;H，5.46;N，12.89。
以类似的制法，用等量的N-（戊-4-炔酰基）-L-谷氨酸二甲酯、N-（庚-6-烯酰基）-L-谷氨酸二甲酯及N-（己-5-炔酰基）-L-谷氨酸二甲酯代替上述方法中的N-（4-乙炔基苯甲酰基）谷氨酸二甲酯，结果获得N-[5-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）戊-4-炔酰基]-L-谷氨酸二甲酯、N[7-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）庚-6-烯酰基]-L-谷氨酸二甲酯及N-[6-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）己-5-炔酰基]-L-谷氨酸二甲酯。
按美国专利No.4882334中所述的方法（此专利于1989.11.21颁发，此处引证该专利以供参考）通过使己-5-炔酸氯化物（用亚硫酰氯处理己-5-炔酸而得到）与L-谷氨酸二甲酯在有一种酸性接受体如三乙胺存在的情况下进行反应可得到N-（己-5-炔酰基）-L-谷氨酸二甲酯。随后，可通过例如5-氰基戊-1-炔的加碱水解而制备己-5-炔酸。
实施例3
N-[4-｛1-羟基-3-（4-羟基-6-氨基-吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）丙-2-基｝苯甲酰]-谷氨酸二甲酯
将14.6g 3-碘-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、7.6g 2-（2-丙炔氧基）-四氢吡喃、798mg（10%）氯化钯、2.36g（20%）三苯膦、428mg（5%）碘化亚铜、45ml三乙胺及700ml乙腈的混合物在氮气氛下回流加热12小时。然后向该热的反应混合物添加3.2g 2-（2-丙炔氧基）-四氢吡喃，再继续回流12小时。总共回流加热24小时后，在减压下除去溶剂，残留物经过硅胶使用2%的溶在二氯甲烷中的甲醇溶液过滤。浓缩该滤液并在硅胶上用20∶1的乙酸乙酯∶己烷混合物洗脱进行色层分离，结果得到3-（3-四氢吡咯-2-基氧基丙-1-炔-1-基）-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶，它可用乙酸乙酯进行重结晶而被进一步提纯。
将2g 3-（3-四氢吡咯-2-基氧基丙-1-炔-1-基）-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、40ml甲醇、20ml氯仿、40mg载于硫酸钡上的钯（5%）及40mg合成喹啉的混合物在1大气压氢气氛下搅拌40分钟。然后经蒸发除去溶剂，再用二氯甲烷稀释残留物。二氯甲烷溶液经过硅胶用2%的甲醇在二氯甲烷中的溶液过滤以去除催化剂、滤液经浓缩得到一种油状物，通过对其加醚而产生3-（3-四氢吡咯-2-基氧基丙-1-烯-1-基）-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、它可通过柱色谱法用乙酸乙酯洗脱、再用乙酸乙酯进行重结晶而进一步提纯。
含3.48g 3-（3-四氢吡咯-2-基氧基丙-1-烯-1-基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3.12g（1.2当量）N-（4-碘苯甲酰基）谷氨酸二乙酯、546mg（20%）三-（2-甲苯基）膦、201mg（10%）乙酸钯及85.8mg（5%）碘化亚铜在15ml三乙胺及240ml乙腈中的溶液的混合物在氮气氛中回流加热。12小时后，加入1.17g N-（4-碘苯甲酰基）谷氨酸二乙酯，再将该反应混合物在氮气氛中回流加热12小时。在减压下浓缩该反应混合物，将残留物在硅胶上用20∶1的乙酸乙酯∶己烷混合液洗脱、进行色层分离。（任何被回收的原料可经上述步骤再循环）。该浓缩物料被溶于1∶5的乙酸乙酯∶乙醚的溶液中，再将此溶液冷冻15小时。过滤收集所产生的固体，用冷的乙酸乙酯洗涤，再经干燥得到N-[4-｛1-（四氢吡咯-2-基氧基）-3-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）丙-2-烯-2-基]谷氨酸二乙酯。
实施例4
N-[5-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基｝乙炔基）-噻吩-2-基羰基]-L-谷氨酸二甲酯
将2.0g 3-碘-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、1.2g三甲基甲硅烷基乙炔、0.1g氯化钯、0.23g三苯膦、0.06g碘化亚铜及2.6g三乙胺在100ml乙腈中的混合物于50℃在密封管中加热1.5小时，然后回流3小时。在减压下去除溶剂，残留物用1∶1的乙酸乙酯∶己烷磨碎，然后过滤。将所收集到的固体溶于二氯甲烷中，然后使该溶液通过硅胶板，用1%的甲醇在二氯甲烷中的溶液洗脱。浓缩该洗脱液、得到3-三甲基甲硅烷基乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶。
在氮气氛下，向1.5g 3-三甲基甲硅烷基乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶在100ml冷却至0℃的无水四氢呋喃中的溶液里添加4.75ml 1M的氟化四丁铵在无水四氢呋喃中的溶液。5分钟后使该反应混合物达到室温，然后搅拌2小时。在减压下除去溶剂，再用色谱法在硅胶上提纯残留物，得到3-乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶。
将1.70g 3-乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、2.30g N-（5-溴基噻吩-2-基羰基）-L-谷氨酸二甲酯（按1989.11.21颁发的美国专利No.4882334中所述方法制备，引证该专利仅供参考）、44mg氯化钯、130mg三苯膦、25mg碘化亚铜、以及1.13ml三乙胺在30ml乙腈中的溶液的混合物回流加热3小时，然后冷至室温。减压下去除溶剂，采用柱色谱法（Waters 500）用1∶19的甲醇∶二氯甲烷洗脱、分离该残留物，得到N-[5-（4羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基｝乙炔基）噻吩-2-基羰基]-L-谷氨酸二甲酯。
在上述方法中，取代等量的N-（4-溴基噻吩-2-基羰基）-L-谷氨酸二乙酯及N-（5-溴基噻吩-3-基羰基）-L-谷氨酸二乙酯，分别获得N-[4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）噻吩-2-基羰基]-L-谷氨酸二乙酯和N-[5-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）噻吩-3-基羰基]-6-谷氨酸二乙酯。
N-[4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）呋喃-2-基羰基]-L-谷氨酸二乙酯和N-[5-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）呋喃-3-基羰基]-L谷氨酸二乙酯，同样可分别由N-（4-溴代呋喃-2-基羰基）-L-谷氨酸二乙酯和N-（5-溴代呋喃-3-基羰基）-L-谷氨酸二乙酯制得。
同样，由N-（2-氟-4-碘苯甲酰基）-L-谷氨酸二甲酯和N-（3-氟-4-碘苯甲酰基）-L-谷氨酸二甲酯（按1989年11月21日公告批准的美国专利US4，882，334中所述来制备，其公开的内容在此一并供作参考），可分别制得N-[2-氟-4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯和N-[3-氟-4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯。
实施例5
N-[4-（4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基-乙炔基）苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯
使3-碘-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶按实施例2中所述的方法，同N-（4-乙炔基苯甲酰基）-L-谷氨酸二甲酯反应，相应制得N-[4-（4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯，将其在硅胶上用色谱法提纯，熔点为160℃（分解）。
1NMR（d6-DMSO）δ 1.98-2.15（m，2H），2.45（t，J＝7.5 Hz，2H）3.57（s，3H），3.64（s，3H），4.40-4.45（m，1H），7.51（（d，J＝2.5Hz，1H），7.55（d，J＝8.2Hz，2H），7.87（s，1H），7.90（d，J＝8.2Hz，1H），11.97（d，J＝3.7Hz，1H），12.31（s，1H）。
另一种方法是，按实施例2的方法用等当量4-乙炔基苯甲酸甲酯、4-乙炔基甲苯、4-乙炔基苯、4-乙烯基氯苯、4-乙炔基氟苯、3-乙炔基氟苯和1-甲氧基-4-乙炔基苯取而代之，制得4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酸甲酯、3-（4-甲基苯基）乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-苯基乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-（4-氯苯基）乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-（4-氟苯基）乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-（3-氟苯基）乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶和3-（4-甲氧苯基）乙烯基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶。
用3-碘-4-羟基吡咯并〔2，3-d〕嘧啶代替3-碘-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶，同4-乙炔基苯甲酸甲酯、4-乙炔基甲苯、4-乙炔基氯苯、4-乙炔基氟苯、3-乙炔基氟苯及1-甲氧基-4-乙炔基苯反应，则分别生成4-（4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酸甲酯、3-（4-甲基苯基）乙烯基-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-苯基乙炔基-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-（4-氯苯基）乙炔基-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-（4-氟苯基）乙炔基-4-羟基吡咯并〔2，3-d〕嘧啶、3-（4-甲氧基苯基）乙炔基-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶。
使10g 3-碘-4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶同2.19g 80%的氢化钠油悬浮液和75ml脱水二甲基甲酰胺反应。30分钟后，添加6.02g新戊酸氯甲酯。将反应混合物搅拌3小时，倾入水中，并用乙酸中和。固体物用丙酮二氯甲烷在硅胶上进行色层分离，起初产生3-碘-4-羟基-1，5-双（新戊酰氧基）-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶（熔点155℃），接着产生3-碘-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶（熔点236℃）。
按实施例2的方法，使用3-碘-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶，则产生N-[4-（4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯，熔点196℃。按C29H32N4O8分析计算：C，61.70;H，5.71;N，9.92。实测：C，61.90;H，5.71;N，9.95。
用3-碘-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶代替3-碘-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶，同4-乙炔基苯甲酸甲酯、4-乙炔基甲苯、4-乙炔基苯、3-乙炔基氟苯及1-甲氧基-4-乙烯基苯反应，产生4-（4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基苯甲酸甲酯、3-（4-甲基苯基）-乙炔基-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-苯基乙炔基-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-（4-氯苯基）-乙炔基-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-（4-氟苯基）-乙炔基-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶和3-（4-甲氧苯基）-乙炔基-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶。
实施例6
N-｛4-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸二甲酯
将1.0g N-[4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯溶于250ml 50%甲醇二氯甲烷溶液，并添加0.8g 3%的披钯炭，使所成的混合物在50p.s.i下氢化3小时，过滤并减压浓缩。固体物经过滤收集并干燥，产生0.72g N-｛4-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸二甲酯。溶点247℃。
1MNR（d6-DMSO）δ 1.21（s，9H），1.90-2.12（m，2H），2.42（t，J＝7.4Hz，2H），2.92（t，J＝4Hz，2H），2.97（t，J＝4Hz，2H），3.55（s，3H），3.61（s，3H），4.38-4.45（m，1H），6.61（s，1H），7.27（d，J＝8.2Hz，2H），7.75（d，J＝8.2Hz，2H），8.64（d，J＝7.4Hz，1H），10.75（s，1H），11.22（s，1H）。按C27H33N5O7分析计算：C，60.10;H，6.17;N，12.98。实测：C，59.94;H，6.15;N，12.72。
实施例7
N-｛5-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]噻吩-2-基羰基｝-L-谷氨酸二甲酯
对N-[5-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基｝乙炔基）噻吩-2-基羰基]-L-谷氨酸二甲酯，进行实施例6的氢化处理，制得N-｛5-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]噻吩-2-基羰基｝-L-谷氨酸二甲酯。
同样，对下列化合物进行实施例6中的氢化处理：
（a）N-[2-氟-4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯、
（b）N-[3-氟-4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）-苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯、
（c）N-[4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）噻吩-2-基羰基]-L-谷氨酸二乙酯、
（d）N-[5-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）噻吩-3-基羰基]-L-谷氨酸二乙酯、
（e）N-[5-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）戊-4-炔基]-L-谷氨酸二甲酯、
（f）N-[7-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）庚-6-炔基]-L-谷氨酸二甲酯、
（g）N-[6-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）己-5-炔基]-L-谷氨酸二甲酯、
（h）4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酸甲酯、
（i）3-（4-甲基苯基）乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（j）3-苯基乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（k）3-（4-氯苯基）乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（l）3-（4-氟苯基）乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（m）3-（3-氟苯基）乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（n）3-（4-甲氧基苯基）乙炔基-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（o）4-（4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酸甲酯、
（p）3-（4-甲基苯基）乙炔基-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（q）3-苯基乙炔基-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（r）3-（4-氯苯基）乙炔基-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（s）3-（4-氟苯基）乙炔基-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（t）3-（4-甲氧基苯基）乙炔基-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（u）4-（4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酸甲酯、
（v）3-（4-甲基苯基）乙炔基-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（w）3-苯基乙炔基-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（x）3-（4-氯苯基）乙炔基-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（y）3-（4-氟苯基）乙炔基-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、和
（z）3-（4-甲氧基苯基）乙炔基-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶。
分别制得：
（a）N-[2-氟-4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙基）苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯、
（b）N-[3-氟-4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙基）苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯、
（c）N-[4-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）噻吩-2-基羰基]-L-谷氨酸二乙酯、
（d）N-[5-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙基）噻吩-3-基羰基]-L-谷氨酸二乙酯、
（e）N-[5-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）戊基]-L-谷氨酸二甲酯、
（f）N-[7-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）庚基]-L-谷氨酸二甲酯、
（g）N-[6-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）己基]-L-谷氨酸二甲酯、
（h）4-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酸甲酯、
（i）3-[2-（4-甲基苯基）乙基]-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（j）3-（2-苯基乙基）-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（k）3-[2-（4-氯苯基）乙基]-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（l）3-[2-（4-氟苯基）乙基]-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（m）3-[2-（3-氟苯基）乙基]-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（n）3-[2-（4-甲氧基苯基）乙基]-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（o）4-[2-（4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酸甲酯、
（p）3-[2-（4-甲基苯基）乙基]-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（q）3-[2-（4-氯苯基）乙基]-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（r）3-[2-（4-氟苯基）乙基]-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（s）3-[2-（4-甲氧基苯基）乙基]-4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（t）4-[2-（4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酸甲酯、
（u）3-[2-（4-甲基苯基）乙基]-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（v）3-（2-苯基乙基）-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（w）3-[2-（4-氯苯基）乙基]-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（x）3-[2-（4-氟苯基）乙基]-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、
（y）3-[2-（4-甲氧基苯基）乙基]-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶、和
（z）3-[2-（4-甲氧基苯基）乙基]-4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶。
实施例8
N-[4-｛1-（四氢吡喃-2-基氧基）-3-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）丙-2-基｝苯甲酰基]谷氨酸二乙酯
将1.16g N-[4-｛1-（四氢吡喃-2-基氧基）-3-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）丙-2-烯-2-基｝苯甲酰]谷氨酸二乙酯和174mg（20%）非晶态二氧化铂（Ⅳ）溶于150ml冰醋酸所成的溶液，在50psi下氢化10小时。反应混合物用50ml甲醇稀释，并经硅藻土过滤。浓缩滤液并用乙酸乙酯稀释。经冷却15小时后所形成的固体物，用过滤法收集，用冷乙酸乙酯洗涤，并干燥之，得N-[4-｛1-（四氢吡喃-2-基氧基）-3-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）丙-2-基｝苯甲酰基]谷氨酸二乙酯。
实施例9
N-｛4-[2-（4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸二甲酯
将1.1g N-[4-（4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酰基]-L谷氨酸二甲酯溶于100ml 50%甲醇二氯甲烷溶液，并添加08g 3%的披钯炭，将所成的混合物在50p.s.i.下氢化24小时，过滤，并减压浓缩滤液。残留物中加入乙醚，并用过滤法收集固体物，然后使之干燥，得0.67g N-｛4-[2-（4-羟基氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸二甲酯。熔点：170-172℃。
1NMR（d6-DMSO）δ 1.94-2.14（m，2H），2.44（t，J＝7.4Hz，2H），2.93-3.02（m，2H），3.57（s，3H），3.63（s，3H），4.40-4.70（m，1H），6.71（s，1H），7.29（d，J＝8.2Hz，2H），7.77（m，3H），8.66（d，J＝7.4Hz，1H），11.52（s，1H），11.71（s，1H）。
以相似方法，由N-[4-（4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基乙炔基）苯甲酰基]-L-谷氨酸二甲酯，按上述步骤制得N-4-〔2-（4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸二甲酯。
实施例10
N-｛4-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸
将1.5g N-｛4-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸二甲酯与10ml 1N氢氧化钠所组成的混合物，在室温下搅拌3天，生成N-｛4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸的钠盐。用冰醋酸中和之。过滤收集所形成的固体物，并在50%甲醇二氯甲烷溶液中再结晶，得0.8g（67%）N-｛4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸。1NMR（d6-DMSO）δ 1.80-2.00（m，2H），2.10-2.30（m，2H），2.77-2.820（m，2H），2.89-2.93（m，2H），4.13-4.19（m，2H），6.25（d，J＝1.3Hz，1H），7.23（d，J＝8.1Hz，2H），7.69（d，J＝8.1Hz，2H），8.13（d，J＝6.7Hz，1H），10.55（s，1H）。
实施例11
N-[4-｛1-羟基-3-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）丙-2-基｝苯甲酰基]谷氨酸二乙酯
将由0.94g N-[4-｛1-（四氢吡喃-2-基氧基）-3-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）丙-2-基｝苯甲酰基]谷氨酸二乙酯溶于40ml 0.1N甲醇氯化氢（methanolic hydrogen chloride）所成的溶液，在室温下搅拌2小时。反应混合物用205mg碳酸钠溶于10ml水所成的溶液加以中和，并减压蒸除大部分甲醇。加入100ml二氯甲烷，所成的溶液用20ml水洗涤二次，用无水硫酸镁干燥并浓缩之。残留物用1∶2的乙酸乙酯和乙醚研碎，过滤并干燥之，制得N-[4-｛1-羟基-3-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）丙-2-基｝苯甲酰基]谷氨酸二乙酯。
实施例12
N-[4-｛1-羟基-3-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）丙-2-基｝苯甲酰基]谷氨酸
将0.3g N-[4-｛1-羟基-3-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）丙-2-基｝苯甲酰基]谷氨酸二乙酯溶于9ml 1N氢氧化钠水溶液所成的溶液，在室温和氮气氛下搅拌72小时。用1N盐酸使反应混合物略为酸化（pH＝～4），并过滤之。将如此收集到的固体物用水（5ml）和冷乙醇（5ml）洗涤并干燥之，制得N-[4-｛1-羟基-3-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）丙-2-基｝苯甲酰基]谷氨酸。
同样，由N-｛2-氟-4-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸二甲酯和N-｛3-氟-4-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸二甲酯，按上述步骤分别制得N-｛2-氟-4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸[熔点230℃（产生泡沫），＞300℃（分解）]和N-｛3-氟-4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸[熔点＞300℃（分解）]。
按与上述步骤相似的方式，由N-｛4-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]噻吩二基羰基｝-L-谷氨酸二乙酯、N-｛5-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]噻吩-3-基羰基｝-L-谷氨酸二乙酯、N-｛5-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]呋喃-2-基羰基｝-L-谷氨酸二甲酯和N-｛5-[2-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]噻吩-2-基羰基｝-L-谷氨酸二甲酯，分别制得化合物N-｛4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙]噻吩-2-基羰基｝-L-谷氨酸、N-｛5-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基噻吩-3-基羰基｝-L-谷氨酸、N-｛5-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]呋喃-2-基羰基｝-L-谷氨酸（熔点200-203℃）和N-｛5-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]噻吩-2-基羰基｝-L-谷氨酸（熔点241-243℃）。
同样，由N-[5-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）戊酰基]-L-谷氨酸二甲酯、N-[7-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）庚酰基]-L-谷氨酸二甲酯和N-[6-（4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）己酰基]-L-谷氨酸二甲酯，分别制得N-[5-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）戊酰基]-L-谷氨酸、N-[7-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）庚酰基]-L-谷氨酸和N-[6-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）己酰基]-L-谷氨酸。
实施例13
N-｛4-[2-（4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸
将0.5g N-｛4-[2-（4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸二甲酯加入3ml 1N氢氧化钠所成的混合物，在室温下搅拌3天，生成N-｛4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸的钠盐。反应混合物用盐酸中和。过滤收集所生成的固体物，经加水使之在甲醇中再结晶，得0.35g（75%）N-｛4-[2-（4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸。1NMR（d6-DMSO）δ 1.88-2.12（m，2H），2.33（t，J＝7.3Hz，2H），2.97（m，4H），4.33-4.40（m，1H），6.70（d，J＝1.2Hz，1H），7.28（d，J-7.0Hz，2H），7.76（m，3H），8.50（d，J＝7.6Hz，1H），11.48（s，1H），11.67（s，1H），12.40（br，1H）。
以相似的方式，由N-｛4-[2-（4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸二甲酯，以上述步骤先制得N-｛4-[2-（4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸的钠盐，经用冰醋酸中和后，制得N-｛4-[2-（4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸。
使4-[2-（4-羟基-5-新戊酰氧基-6-甲基氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰甲酯、3-[2-（4-甲基苯基）乙基]-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-（2-苯基乙基）-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（4-氯苯基）乙基]-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（4-氟苯基）乙基]-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（3-氟苯基）乙基]-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（4-甲氧基苯基）乙基]-4-羟基-6-新戊酰氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶和4-[2-（4-羟基-6-新戊酰甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酸甲酯进行上述步骤，分别制得4-[2-（4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酸、3-[2-（4-甲基苯基）乙基]-4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-（2-苯基乙基）-4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2-（4-氯苯基）乙基]-4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-（2-（4-氟苯基）乙基]-4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶、3-[2（3-氟苯基）乙基]-4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶（熔点295-298℃）、3-[2-（4-甲氧基苯基）乙基]-4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶（熔点280-284℃）和4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酸（熔点＞300℃）。
实施例14
抗代谢物活性比较试验
采用下列化合物进行抗代谢物试验：
化合物A
化合物C
将上列各化合物溶于100%的二甲亚砜中，制备各化合物的稀释液，使其浓度在下面指出的试验浓度范围内。
各化合物的抑制活性，按下列步骤测试：
原细胞的预备
使人体淋巴母细胞白血病细胞（cem human lymphoblastic leu-kemia cells），在添加10%透析胎牛血清（Gibco）的RPMI 1640培养基（MABiO）中，在37℃及由95%空气与5%CO2组成的加湿气氛下生长。该细胞在保持log相浓度为3～7×105细胞/ml的静态悬浮液（T型曲颈瓶，Corning公司产）中生长。
步骤
（ⅰ）将10μl待试化合物置于微滴板井眼中（Costar 24微滴板）。该步骤对各试验浓度的化合物均重复进行。
（ⅱ）将50μl的无血清培养基加到各井眼中。
（ⅲ）将添加10%透析胎牛血清、16mM hepes及8mM mop缓冲剂的RPMI 1640培养基和3×104细胞/ml装入无菌瓶中，并将该瓶置于磁搅拌器上。用Wheaton蠕动泵将1.5ml细胞悬浮液分送到各井眼中。分送到各井眼中产生的最终体积是2.0ml，细胞浓度为4.8×104细胞/井眼。
（ⅳ）将微滴板置于加湿恒温箱（95%空气、5%CO2）中，在37℃下培育72小时。
（ⅴ）经培育后，用ZB 1 Coulter Counter粒子计数器测量各井眼，确定IC50（抑制50%细胞生长的浓度）。
（ⅵ）该试验的结果如下：
表 Ⅰ
浓度 细胞生长（%）
（μg/ml） A B C
100.0 13.1 - 14
33.3 15.5 10.8 12
11.1 16.2 9.6 12
3.7 15.3 10.4 13
1.23 16.1 11.3 14
0.411 21.5 13.0 13
0.137 63.9 17.7 14
0.045 100.0 33.5 14
0.015 - 76.9 25
0.005 - - 96
化合物A、B和C各都呈现对人体淋巴母细胞白血病细胞的活体外抑制活性。这些化合物在活体外的一般相对抑制浓度（IC50）如下：
化合物A：0.2μg/ml，
化合物B：0.03μg/ml，
化合物C：0.007μg/ml。
所有化合物都显示抑制活性。在活体外进行比较时，化合物C在三者中活性最大。
逆转试验
各化合物的作用机制，均用所谓“逆转”试验的进一步测试来确定。向这些试验提供能单独或共同辨别酶抑制作用特定点的各种化合物或先质。
（a）次黄嘌呤-如果化合物起嘌呤再合成抑制剂的作用，则次黄嘌呤会使化合物的抑制作用逆转。这样，次黄嘌呤的存在，可使细胞不进行嘌呤再合成。
（b）胸苷-如果化合物起胸苷酸合成酶的特殊抑制作用，则胸苷会单独使化合物的抑制作用逆转。
（c）次黄嘌呤和胸苷-如果一种化合物在（a）中确不是嘌呤再合成的抑制剂，而且在（b）中确定不是胸苷酸（thymidilate）合成酶的抑制剂，则结合使用次黄嘌呤和胸苷的逆转试验，可确定该化合物是否可以同时抑制这两种合成途径。这样，如果这两者的结合使用可使一种化合物的抑制作用逆转，则该化合物很可能起抑制二氢叶酸还原酶的剂作用（与嘌呤和嘧啶的生物合成都有关）。
步骤
在各种情况下，都采用上面概述的基本步骤，变动在于，将250μl的逆转化合物[或者（b）中的各逆转化合物]加到测试井眼中，将加到各个测试井眼中的无血清培养基量减少同样的量[或者在（b）中完全不加]。将逆转化合物在磷酸盐缓冲的盐水（无菌滤过0.2μ顶隔膜（acrodisc）过滤器-Gelman）中配制成8X原液。使250μl原液的最终浓度为100μM次黄嘌呤及/或5μM胸苷。
逆转试验的结果如下：
（a）次黄嘌呤（100μM）：
表Ⅱ
浓度 细胞生长（%）
μg/ml） 化合物 + 化合物 + 化合物 +
A＊次黄嘌呤 B＊次黄嘌呤 C＊次黄嘌呤
100.0 13.1 15.3 - - 14 13
33.3 15.5 16.7 10.8 16.2 12 14
11.1 16.2 17.6 9.6 15.9 12 13
3.7 15.3 16.4 10.4 14.4 13 13
1.23 16.1 15.5 11.3 15.6 14 13
0.411 21.5 19.0 13.0 20.4 13 12
0.137 63.9 73.8 17.7 43.2 14 15
0.045 100.0 100.0 33.5 83.9 14 12
0.015 - - 76.9 99.5 25 24
0.005 - - - - 96 100
＊数据取自表Ⅰ。
（b）次黄嘌呤（100μM）加胸苷（5μM）：
进一步测试化合物B，以确定抑制活性的第二部分。
表Ⅲ
浓度 细胞生长（%）
（μg/ml） 对比值 B＊+次黄嘌呤和胸苷
33.3 10.8 69.9
11.1 9.6 74.7
3.7 10.4 79.4
1.23 11.3 89.4
0.411 13.0 92.7
0.137 17.7 92.9
0.045 33.5 92.8
＊数据取自表Ⅰ。
（c）胸苷（5μM）：
表Ⅳ
浓度 细胞生长（%）
μg/ml） 化合物 + 化合物 + 化合物 +
A＊胸苷 B＊胸苷 C＊胸苷
100.0 13.1 48.8 - - 14 44
33.3 15.5 49.4 10.8 11.6 12 57
11.1 16.2 49.4 9.6 11.6 12 52
3.7 15.3 52.6 10.4 12.1 13 56
1.23 16.1 62.1 11.3 12.3 14 58
0.411 21.5 73.9 13.0 14.9 13 55
0.137 63.9 98.1 17.7 18.0 14 64
0.045 100.0 100.0 33.5 32.5 14 81
0.015 - - 76.9 81.1 25 100
0.005 - - - - 96 100
＊数据取自表Ⅰ。
活体内活性分析
测试化合物A和C，以进一步比较其活体内抗肿瘤活性。
给雌性小鼠（Strain DBA/2）接种肿瘤细胞。接种后当天，开始用待试化合物治疗。治疗包括连续8天腹膜内给8个日剂量的化合物A或C。最后一天治疗的次日，测量肿瘤大小，以确定待试化合物对肿瘤生长的抑制作用。
结果如下：
表Ⅴ
化合物A
剂量 动物数 肿瘤重量 %
（mg/kg） （mg）1抑制
0（Control）＊8 2050±774 -
0（Control）＊8 2753±790 -
200 8 2525±694 0
100 8 3447±747 0
50 8 1935±498 19
25 8 2121±410 12
12.5 8 3360±703 0
6.25 8 2719±413 0
3.125 8 2825±822 0
＊所有对比组测定数据的平均肿瘤重量（mg）＝2402±839。
1.平均值±标准误差。
表Ⅵ
化合物C
剂量 动物数 肿瘤重量 %
（mg/kg） （mg）1抑制
试验1
0.0（对比组） 6 3606±2099 0
0.0（对比组） 6 5533±1234 0
200.00 7 0±0 100
100.00 7 0±0 100
50.00 6 0±0 100
25.00 7 0±0 100
12.50 7 102±166 98
试验2
0（对比组）＊10 6776±1328 -
0（对比组）＊10 5533±2645 -
40 9 0±0 100
20 10 18±57 100
10 10 196±152 97
5 10 1034±657 83
2.5 10 2908±1948 53
1.25 10 6682±2300 0
0.6256 10 7381±2397 0
＊所有对比组该数据的平均肿瘤重量（mg）＝6155±2134。
1.平均值±标准误差。
化合物A在活体内对肿瘤生长基本上毫无抑制作用。尽管在剂量为25和50mg/Kg时，观察到肿瘤重量稍有减少，但不能视为有效，因为在剂量为100或200mg/Kg时，肿瘤重量毫无减少。
化合物C呈现显著的活体内抑制肿瘤生长的作用，在剂量低如20mg/Kg时，100%抑制;在剂量至少为2.5mg/kg时，抑制大于50%。
化合物B同化合物A或C的作用机制不一样，即DHFR抑制，而不是TS抑制。尽管在活体外，化合物A和C看来是TS抑制，但在活体外，化合物C的活性比化合物A至少大25倍。在活体内，化合物A无抗肿瘤剂活性。化合物C在活体内具很高的抗肿瘤活性。
典型化合物抗CCRF-CEM细胞培养物的代表性抑制值如下：
化合物 IC50
（μg/ml）
4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-
d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酸……＞20.00
N-｛4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，
3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷
氨酸……0.004
3-[2-（4-甲氧基苯基）乙基]-4-羟基-
6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶……＞20.00
N-｛2-氟-4-[2-（4-羟基-6-氨基吡
咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝
-L-谷氨酸……0.008
N-｛3-氟-4-[2-（4-羟基-6-氨基吡
咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝
-L-谷氨酸……0.019
3-[2-（3-氟苯基）乙基]-4-羟基-6-
氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶……＞20.00
N-｛5-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，
3-d]嘧啶-3-基）乙基]噻吩-2-基羰基｝
-L-谷氨酸……0.025
N-｛5-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，
3-d]嘧啶-3-基）乙基]呋喃-2-基羰基｝
-L-谷氨酸……＞20.00
N-｛4-[2-（4-羟基-6-甲基吡咯并[2，
3-d]嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷
氨酸……0.0084
N-｛4-[2-（4-羟基吡咯并[2，3-d]
嘧啶-3-基）乙基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸……1.20
添加次黄嘌呤或AICA并不逆转这些化合物的细胞毒性，这可假定它们并不抑制嘌呤再生物合成的途径，但其细胞毒性可被胸苷逆转，这表明胸苷酸合成酶是主靶。添加甲酰四氢叶酸也逆转细胞毒性，这表明细胞毒性是由于叶酸相关机制的拮抗作用所致。
Claims (15)
1、一种制备以下式表示的化合物的方法
式中：
R1为-OH或-NH2；
R2为氢或一个可在药物中应用的阳离子；
R3为未取代的或被氯、氟、甲基、甲氧基或三氟甲基取代的1，4-亚苯基或1，3-亚苯基；各是未被取代的或被氯、氟、甲基、甲氧基或三氟甲基取代的噻吩二基或呋喃二基；环己二基或链烷二基；
R4为氢、甲基或羟甲基；以及
R5为氢、含1-6个碳原子的烷基、氨基或含1至12个碳原子的烷酰氨基，
标有＊的碳原子的构型为S型。
该方法包括催化氢化以下式表示的化合物
式中：
Z1是氢、或Z1与R4′一起共同为一个碳一碳键；
R1是-OH或-NH2；
R2′是氢或羧基保护基团；
R3的定义如上所述；
R4′在与Z1无关时为氢、甲基、羟甲基或以羟基保护基团以代的羟甲基；
R5′是氢、含1-6个碳原子的烷基、氨基、含1至12个碳原子的烷酰氨基或氨基保护基团；
以制得用下式表示的化合物；
式中X、R1、R2′、R3、R4′、R5′的定义如上所述；
而且当X=COOR2′时，使之与一种被保护的谷氨酸耦合，以形成一种化合物其中
再除去所有保护基团。
2、根据权利要求1所述的方法，其中在原料化合物中R1是-OH;R3是1，4-亚苯基;R4′是氢和R5′是氢。
3、根据权利要求1所述的方法，其中在原料化合物中R1是-OH;R3是1，4-亚苯基;R4′是氢和R5′是甲基。
4、根据权利要求1所述的方法，其中在原料化合物中R1是-OH;R3是噻吩二基;R4′是氢和R5′是氢。
5、根据权利要求1所述的方法，其中在原料化合物中R1是-OH;R3是噻吩二基;R4′是氢和R5′是甲基。
6、根据权利要求1所述的方法，其中原料化合物为N-｛4-[2-（4-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）-1，2-亚乙烯基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸。
7、根据权利要求1所述的方法，其中原料化合物为N-｛4-[2-（4-羟基-6-甲基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）-1，2-亚乙烯基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸。
8、根据权利要求1所述的方法，其中在原料化合物中R5′是氨基或含1至12个碳原子的烷酰氨基。
9、根据权利要求8所述的方法，其中原料化合物为N-｛4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）-1，2-亚乙烯基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸。
10、根据权利要求1所述的方法，其中在原料化合物中R3是未被取代的或被氯、氟、甲基、甲氧基或三氟甲基取代的噻吩二基或呋喃二基;环己二基和链烷二基;R4′是氢、甲基或羟甲基;而R5′是氨基。
11、根据权利要求10所述的方法，其中在原料化合物中R3是噻吩二基而R4′是氢。
12、根据权利要求10所述的方法，其中原料化合物为N-｛5-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）-1，2-亚乙烯基]噻吩-2-基羰基｝-L-谷氨酸。
13、根据权利要求10所述的方法，其中原料化合物为N-｛4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）-1，2-亚乙烯基]噻吩-2-基羰基｝-L-谷氨酸。
14、根据权利要求10所述的方法，其中原料化合物为N-｛5-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）-1，2-亚乙烯基]噻吩-2-基羰基｝-L-谷氨酸。
15、根据权利要求1所述的方法，其中原料化合物为N-｛4-[2-（4-羟基-6-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-3-基）-1，2-亚乙烯基]苯甲酰基｝-L-谷氨酸。
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Legal Events
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Effective date of registration: 20050520 Address after: indiana Patentee after: Eli Lilly and Co. Address before: new jersey Patentee before: Trustees of Princeton University |
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Commission number: 4W01334 Conclusion of examination: In the period of validity of the patent right of invention 90110125.7, the patent right shall be maintained on the basis of the claim made by the patent holder on 2010, 09, 21. Decision date of declaring invalidation: 20110511 Decision number of declaring invalidation: 16419 Denomination of invention: N-(pyrrolo {2,3-d} pyrimidin-3-ylacyl)-glutamic acid derivatives Granted publication date: 19960103 Patentee: Eli Lilly and Co. |
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Commission number: 4W100475 Conclusion of examination: In the period of validity of the patent right of invention 90110125.7, the patent right shall be maintained on the basis of the claim made by the patent holder on 2010, 09, 21. Decision date of declaring invalidation: 20110511 Decision number of declaring invalidation: 16419 Denomination of invention: N-(pyrrolo {2,3-d} pyrimidin-3-ylacyl)-glutamic acid derivatives Granted publication date: 19960103 Patentee: Eli Lilly and Co. |