CN105101987A - 新型的稳定十五肽盐，其制备方法，其在制备药物制剂中的用途以及其治疗用途 - Google Patents

Abstract

新型的稳定十五肽盐，其制备方法，其在制备药物制剂中的用途以及其治疗用途。本发明公开了通式(I)的新型稳定十五肽盐：

Description

新型的稳定十五肽盐，其制备方法，其在制备药物制剂中的用途以及其治疗用途

技术领域

本发明属于药物化学领域并涉及新型的稳定十五肽的盐，其在下文也称为式(I)的bepecin盐：

其中n是1、2或3，并且BAA是碱性氨基酸，

涉及其制备方法，其在制备药物制剂中的用途以及其治疗用途。

技术问题

许多药理学研究已证实了具有氨基酸序列GlyGluProProProGlyLysProAlaAspAspAlaGlyLeuVal(SEQIDNO1)的十五肽(缩写为BPC-157或bepecin)对人和动物有机体的保护、再生和治疗活性。到现在为止，这种肽一直以游离形式或以醋酸盐形式或作为与碱的盐例如钠盐使用。所有这些形式的特点均为在胃液中仍没有足够的稳定性，这特别地限制了这些化合物的口服使用并同时降低了它们的治疗价值。因此，有必要以在胃液中和在升高的环境温度下均实质性地更加稳定的形式制备此十五肽。该制剂的这种形式可更成功地用于特别是至生物体中的口服递送。由于更高的稳定性，还可预期总体更好的效力。

现有技术

十五肽BPC157或bepecin(身体保护化合物的缩写)具有以下肽序列：GlyGluProProProGlyLysProAlaAspAspAlaGlyLeuVal；并且其代表实际存在于哺乳动物的胃液中的天然BPC蛋白质的N-末端部分。天然BPC蛋白借助复杂的生化方法(美国专利号5,288,708)从人或动物的胃液中获得。且不论高要求的操作，这种方式的获得在原材料来源的不确定性和可能污染病毒方面也是不合适的。因此，通过化学合成(P.R.B.M.Petek,Peptides1998,Proceed.of25thEPS,Budapest1998,p.814；Z.PflaumandR.ActaChim.Slov.,2005,52,34–39)，仅制备了具有上述序列的N-末端部分。令人惊讶的是，已发现该片段保留了天然BPC蛋白的几乎所有效应(EP0572688和美国专利号6,268,346)。具有15个氨基酸的序列的N-末端部分似乎是整个蛋白质具有生物活性的最主要原因。从医学角度来看该化合物非常吸引人，因为其在极低浓度(每公斤体重从ng到mg及更多的范围)下对几乎所有的器官具有效应并且没有任何毒性或副作用。

药理学研究已显示被引入生物体中的十五肽bepecin(SEQIDNO1)具有以下效应：

-对胃肠道任何部分的溃疡的效应(P.等人,LifeSci.,1994；54,PL63–68)；(P.等人,Exp.Clin.Gastroenterol.,1991,1,17–20)；

-不论病因的抗炎症效应(P.等人,J.Physiol./Paris/,1997,91,113–122)；

-针对胃肠道的炎性疾病-克罗恩氏病的效应(等人,J.Physiol./Paris/,2001,95,295–301)；

-对肝脏和胰脏的保护效应(等人,J.Physiol./Paris/,2001,95,315–324)；

-促进烧伤的愈合(D.P.等人,Burns2003,29,323–334；Burns,2001,127,817–827)；

-促进伤口愈合(S.Seiwerth,P.等人,J.Physiol./Paris/,1997,91,173–178)；

-针对放射性辐射的保护效应(P.M.Petek,R.J.Physiol./Paris/,1993,87,313–327)；

-促进骨折的愈合(B.V.P.等人,Bone,1999,24,195–202)；

-与肾上腺素能和多巴胺能系统相互作用，在应激条件下保护粘膜(P.等人,Dig.Dis.Sci.,1997,42,661–671)；

-在一些肿瘤类型(腹水，黑色素瘤)中的抗肿瘤效应(P.M.Petek,R.J.Physiol./Paris/,1993,87,313–327；S.Radeljak,S.Seiwert,P.MelanomaResearch,2004,14(4),A14–A15)；

-对疱疹病毒HSV-1和HSV-2、LCM、CMV、A型流感病毒和蜱传脑炎病毒的抗病毒效应(P.R.M.Petek,J.Physiol./Paris/,1993,87,313–327)；

-促进断裂的神经联系的再生(P.等人,Dig.Dis.Sci.,41,1604–1614；M.等人,Dig.Dis.Sci.,2003,48,1879)；

-促进断裂跟腱的愈合(M.P.等人,J.Orthoped.Res.,2003,21,976–983)；

-去除与NO形成有关的器质性异常(P.等人,Eur.J.Pharm.,1997,332,23–33)。

肽bepecin作为活生物体自身物质的组成部分不显示任何毒性体征。为了测定LD₅₀以及获得关于急性、亚慢性和慢性毒性的数据的目的而在小鼠上进行的测试仍未成功，因为以10ng至100mg/kg体重的广泛剂量范围静脉内、口服或腹膜内施用的此肽不诱导任何毒性变化。

此外，致畸和遗传毒性的测试(沙门氏菌微粒体试验)没有证实这种作用的体征。

合成的十五肽BPC-157的盐还公开于专利EP0983300和美国专利号6,288,028中。这些盐比原始的形式，即比游离酸或乙酸盐稍好，但它们仍缺乏在胃液中足够的稳定性。

技术问题的解决方案

待解决的基本问题是化合物在升高的温度下的稳定性，特别是在胃液中的稳定性。本发明涉及具有碱性氨基酸的新型十五肽盐，其具有显著改善的热稳定性和在胃液中的稳定性。

胃液是不同化合物的复杂混合物且主要成分是：水，氯化钠，盐酸，粘蛋白类，酶，特别是胃蛋白酶，等等。胃液主要是酸性的；其pH值从1至7不等且异常更高。正常pH值的范围是从2至5，这也是分解的多肽、肽和蛋白质的胃蛋白酶的最大活性范围。

本发明因此涉及式(I)的新型稳定十五肽盐：

其中n是1、2或3，并且BAA是碱性氨基酸.

作为碱性氨基酸，可使用L-、D-或DL-形式的碱性精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸或其它，优选为L-精氨酸。

本发明还涉及式(I)的十五肽盐的制备方法，其中具有序列(SEQIDNO1)的十五肽与碱性氨基酸BAA在水溶液中于室温下以1至3摩尔碱性氨基酸对1摩尔具有SEQIDNO1的十五肽的摩尔比进行反应：

形成的溶液的pH值用滴定法调节，随后通过HPLC色谱和冷冻干燥以固体形式分离形成的式(I)的盐。

在本发明的方法的优选实施方案中，通过1mol碱性氨基酸与1mol十五肽(SEQIDNO1)的反应获得的溶液的pH值被调节至4.1至5.0，优选被调节至4.60±0.05。

在本发明的方法的另一个优选实施方案中，通过2mol碱性氨基酸与1mol十五肽(SEQIDNO1)的反应获得的溶液的pH值被调节至6.7至7.8，优选被调节至7.40±0.05。

本发明还涉及固体和液体形式的药物制剂，其用于口服、静脉内、直肠、阴道、肌肉内、局部和其它的使用，所述制剂含有治疗有效量的本发明的十五肽盐。

本发明还涉及除了本发明的十五肽盐以外，还含有一种或多种其它活性物质，优选为抗生素或抗氧化剂的药物制剂。

本发明还涉及除了本发明的十五肽盐以外，还含有稳定性增强添加剂的药物制剂，所述添加剂选自包含碱金属和碱土金属碳酸盐或碳酸氢盐的组，优选为碳酸氢钠。

本发明还涉及除了本发明的十五肽盐以外，还含有稳定性增强添加剂的药物制剂，所述添加剂选自包含糖诸如海藻糖、山梨糖醇或D-甘露糖醇的组，但优选为D-甘露糖醇。

本发明还涉及用于阻止、预防和治疗下列疾病和病状的药物制剂：

-应激相关疾病和病症，胃肠道任何部分中的溃疡，一般性抗炎活性，胃肠炎性疾病，克罗恩氏病，急性胰腺炎；

-器官保护活性：保护肝脏和胰腺病变，保护内皮细胞，预防粘连形成，预防和治疗心肌梗死和脑卒中，在免疫系统中的保护作用；

-治疗病毒感染，特别是甲型肝炎、疱疹病毒、A型流感病毒和ARBO病毒，诸如蜱传脑炎，西尼罗河热，登革热1-4型，巨细胞病毒CMV和LCM病毒，猫白血病病毒；

-治疗黑色素瘤及相关肿瘤；

-伤口、烧伤、骨折的加速愈合，断裂的神经联系、跟腱和破裂的肌肉、脊髓损伤的再生；

-治疗与NO形成相关的器质性异常：高血压，低血压，过敏反应，循环和感染性休克，凝血细胞聚集；

-治疗神经系统疾病和病症：多发性硬化，重症肌无力，红斑狼疮，神经病变，躯体感觉神经功能障碍，哮喘，鼻炎，天疱疮和湿疹；

-儿茶酚胺能功能障碍，精神分裂症，苯丙胺，药物和酒精戒断效应；

-预防和消除因皮质类固醇和NSAID引起的病症；

-治疗眼中的鳞状黄斑变性；

-作为原始疗法用于其中血液循环的快速重组是必需的所有病况；

-在兽医医学中用于动物增重以及用于增加精子的贮存稳定性。

本发明还涉及本发明的十五肽盐在制备用作食品补充剂的制剂中的用途。

发明详述

新型化合物的组成和结构通过使用质谱仪，通过氨基酸分析，¹H-NMR，FTIR和UV光谱来测定。UV光谱在VarianCarry50光谱仪中记录，FTIR光谱在PerkinElmer727B光谱仪中记录，质谱在AutoSpecQ质谱仪上记录，以及¹H-NMR光谱在BrukerAdvanceDPX500光谱仪上记录。比旋度[α]_D ²⁸使用PerkinElmer141型光谱仪测定。对于实施例43中的光学成像，使用摄像机VehoDiscoveryVMS-001,x30-30，对于热成像，使用利用FLIRQuickPlot软件的红外摄像机的T-335(FLIR,USA)。

上述问题通过具有可以是L-、D-或DL-形式的碱性氨基酸的新型十五肽bepecin盐而得到解决。典型的氨基酸是精氨酸，赖氨酸，鸟氨酸，2,4-二氨基丁酸，2,6-diaminocapronicacid，2,6-二氨基己酸，2,5-二氨基戊酸，2,6-二氨基庚二酸，2,3-二氨基丙酸，瓜氨酸，高精氨酸，高赖氨酸(homolysine)等。这些盐可由一分子的十五肽和一个、两个或三个分子的碱性氨基酸组成。

盐溶液的pH值取决于介导盐稳定性的盐组成。优选使用具有L-精氨酸的盐。它们通常通过将十五肽(SEQIDNO1)与碱性氨基酸在水溶液中以1:1至1:3(十五肽:碱性氨基酸)的摩尔比反应来制备。首先，将氨基酸过量加入，随后用稀乙酸重新滴定过量的氨基酸以调节适宜的pH值。最佳pH值是：在具有摩尔比1:1(十五肽:BAA)的盐中，4.1至5.0，优选4.60±0.05；在具有摩尔比1:2的盐中，6.7至7.8，优选7.40±0.05；在具有摩尔比1:3的盐中，该值未经调节。该盐溶液随后在填充有反相吸附剂的HPLC柱上纯化。在冷冻干燥相应的流出物后，获得高纯度的十五肽盐。

所获得的盐非常易溶于水。含有2mol碱性氨基酸/1mol十五肽的十五肽盐具有最有利的特性，优选的是bepecin二-L-精氨酸盐(缩写：Arg-BPC)。

如在之前的专利EP0572688、US6,268,346和在出版物Z.Pflaum,R.ActaChem.Slov.,2005,52,34–39中所描述的，用于合成的起始化合物(十五肽BPC-157或bepecin)在固体聚合物载体上利用肽合成制备。十五肽可以是游离形式，如铵或钠盐，或甚至是乙酸盐或三氟乙酸盐的形式。

bepecin二-L-精氨酸盐(1:2，缩写：Arg-BPC)在升高温度下的稳定性通过加速老化法在50℃和65％的相对湿度(其代表具有肽结构的化合物的非常严格的条件)下测定。

表1：处于50℃和65％相对湿度中的十五肽含量递减：

该表进一步显示碳酸氢钠至bepecin盐的添加增加了其在升高温度下的稳定性。这样的添加将在0.5mg至3.0mg/1mgbepecin的范围中。在片剂和胶囊剂的组成中将考虑此特性。使用特定糖例如海藻糖或D-甘露糖醇的添加的单独实验显示稳定性的类似改善。

具有L-精氨酸的bepecin盐在水溶液中的稳定性在浓度为1g/100ml的水性盐溶液在50℃下和在单独的测试中在非常严格的条件(100℃，其中在一小时后测定到分解)下温育后进行测定。

表2：在50℃/时间(小时)下水中的十五肽含量递减：

表3：在100℃-1小时下水中的十五肽含量递减：

化合物特别是肽在胃液中的稳定性是重要的参数，肽在胃蛋白酶的存在下以及在酸性介质中非常迅速地分解。在胃液中更好的稳定性意味着更长的时间，在其中化合物可用于吸收和发挥其治疗活性。

人工胃液显示了正常人胃液中的条件，并包含：1000ml水中0.08mol盐酸，0.03mol氯化钠和1.0g胃蛋白酶。

所研究的10mg/5ml浓度的肽盐在具有pH值2.0、3.0和4.0的人工胃液中在37℃下温育。

表4：在pH＝2.0下胃液中的十五肽含量递减(相对％)

表5在pH＝3.下胃液中的十五肽含量递减(相对％)

表6：在pH＝4.0下胃液中的十五肽含量递减(相对％)

十五肽BPC-157在测试样品中的含量在下列系统中通过HPLC方法测定：

柱：ReprosilOrpegenC18,100,5μm,250×4.6mm，

流动相A：0.1％三氟乙酸/5％乙腈/水

流动相B：0.11％三氟乙酸/40％乙腈/水

梯度：在25分钟内从100％A至30％A

温度：20℃

流速：1.5ml/分钟

检测：UV，210nm

稳定性测定的结果表明，具有碱性氨基酸的bepecin盐比其它的迄今已知的存在问题的十五肽盐实质上更加稳定，这是令人惊讶的巨大的优势。在任何情况下，这些新型的盐比根据专利EP0983300和USNo.6,288,028所述的具有不同胺、碱金属和碱土金属的bepecin盐(其易于形成极性降解产物(多至10％，结构尚未确定))更好。更好的稳定性的结果还是更好的生物活性，因为完整化合物存在于生物体中的时期更长并且可用于更有效的吸收。

在光下的稳定性

这种类型的化合物对于紫外光非常易感。用波长253.7nm的紫外光辐照20℃下的Arg-BPC(1g/100ml水)水性溶液，随后在230至350nm的波长范围内在70分钟的时期内每10分钟测量吸光度。结果示于图1中，并确认该化合物是稳定的。

作为本发明的目的的新型的bepecin盐可用作治疗活性物质，其与惰性的药学可接受的载体一起被转化为合适的形式例如片剂和胶囊剂，用于治疗疾病和病状、生物体损伤、创伤、骨折和烧伤以及病毒感染，如通过之前的药理学研究所确定的。

本发明的目的还是含有与不同添加剂混合的bepecin盐的氨基酸盐的口服药物制剂。所使用的药学可接受的添加剂是本领域技术人员一般熟知的物质。惰性物质或药物添加剂选自下列组：

-填充剂例如：无水乳糖，微晶纤维素，淀粉，磷酸钙，碳酸钙，麦芽糖糊精，D-甘露糖醇，海藻糖等；

-粘合剂例如：微晶纤维素，羟烷基纤维素，聚维酮，纤维素酯，淀粉或其混合物；

-崩解剂例如：淀粉，交联羧甲纤维素钠(crosslinkedsodiumcroscarmelose)，交聚维酮，微晶纤维素，羧甲基纤维素钠等，主要为1-10％的量；

-稳定剂例如：碱金属和碱土金属碳酸氢盐或所选择的糖，优选碳酸氢钠和D-甘露糖醇；

-在压片中使用的润滑剂和助流剂：滑石，硬脂酸镁，硬脂酸，硬脂酸钾和胶体二氧化硅。这些物质通常在最后阶段加入到其它成分中。

bepecin盐在具有不同酸度的溶液中的稳定性的比较显示，该化合物在微酸性、中性或甚至微碱性介质(优选在6.5至8.5的pH范围中)中是最稳定的。合理地，在组成药物制剂中应当考虑此。在用于压片和封装的颗粒的制备中，适当地添加微碱性物质例如碱金属和碱土金属碳酸氢盐和碳酸盐、碱性碳酸盐和氧化物，诸如碳酸氢钠、碳酸氢钙和氧化镁，从而提高稳定性。所选择的糖的添加防止美拉德反应。药物制剂通过已知的方法制备，例如直接混合，干法造粒，湿法造粒，或通过在暖风逆流的同时干燥下将bepecin盐溶液喷雾到惰性制药物质上来制备。如果需要的话，向如此获得的颗粒添加其它成分，以常规方式均化和压片或封装。在最后的阶段，片剂、胶囊或锭剂可用对胃液活性有抗性的保护膜包衣，以使bepecin释放不比在肠内更早。

本发明的新型盐中的氨基酸成分是这种形式中活性物质的更大疏水性的原因。因此，期望更好地转移通过生物膜是现实的，这也提供用于透皮制剂例如乳膏、软膏或贴剂的制造。

透皮系统由活性物质不能透过的支持层、用作活性物质储库的压敏聚合物层、在几个位置穿孔以允许活性物质穿过其中的保护箔和外层保护箔组成。

Bepecin盐可以以溶液、灌肠剂、注射剂或干注射剂的形式使用。在这种情况下，具有介于6和8之间，优选介于7.0和7.5之间的最适pH值的缓冲剂的水性溶液用作溶剂。该溶液可通过精细过滤经过具有0.22μm孔的过滤器或通过非常短的加热至100℃来进行灭菌。干注射剂以含有bepecin盐、缓冲剂和防腐剂的无菌溶液在安瓿中冻结并冻干的方式制备。

旨在用于眼或鼻滴剂的溶液通过使用具有7.0至7.5的pH值的等渗和等氢离子溶液制备，其除了活性物质bepecin以外还含有缓冲剂和防腐剂并在无菌条件下过滤。

用于直肠和阴道使用的栓剂通过采用明胶、可可脂、具有低熔点的天然或半合成脂肪、石蜡、甘油、具有1000至6000的基础分子量的聚乙二醇，向其中混入bepecin的水性溶液来制备。此外，可添加乳化剂、抗氧化剂和防腐剂。

Bepecin盐还可以以乳膏、软膏或凝胶的形式使用。在这种情况下，使用基于天然的、植物或动物脂肪和天然油的亲脂性、亲水性或两亲性脂肪基质，向其中也可添加防腐剂、着色剂、乳化剂、水或缓冲溶液以及抗氧化剂。

Bepecin是在极低剂量下起作用的化合物。用于口服使用的治疗剂量的范围将是10^–5至10^–2mg/kg体重，其取决于疾病的类型和严重程度。片剂、锭剂或胶囊剂中常用的剂量范围将是从0.1到至多5mg。局部使用的浓度更高，范围为0.001％至0.5％。最佳剂量的确定根据评估和经验而定。非常重要的是，bepecin不显示任何副作用或毒性。基于上述以及其对生物体众多的有利效应，还可能将其以非常低的剂量(从每日1μg到至多0.1mg)用于食品补充剂的形式。在为此目的制备的制剂中，其还可与维生素、矿物质和其它有利作用的物质相结合。

根据本发明，还可添加改善bepecin的主要活性或协同地作用的其它单一活性物质。这些是来自下列组中的物质：

-具有抗菌活性的物质，例如庆大霉素，阿奇霉素，氨苄青霉素，头孢菌素和多西环素，特别是在用于局部使用的制剂中，其中期望同时实现抗病毒和抗菌活性。这样的例子是蜱叮咬，其中意图是双重的：同时防止疏螺旋体(borellia)和蜱传脑炎；

-具有抗氧化剂活性的物质，例如干燥的绿茶提取物，辅酶Q₁₀，依地吡喃，姜黄素，abigenol，碧萝芷等。

与辅酶Q₁₀或泛醌的结合是特别有利的。辅酶Q₁₀是非常有效的抗氧化剂和自由基清除剂，并且可另外地用于与血流量减少、高血压相关的心脏疾病和心功能不全的体征。最近已证实一个重要的抗氧化剂还是具有强大抗癌活性的姜黄素。

我们的研究已证实新型bepecin盐在治疗神经系统疾病例如多发性硬化中非常有利的活性。此炎性疾病导致对脑和脊髓中轴突周围的髓鞘的损害。神经细胞通常通过神经纤维-轴突发送电子信号进行通信，其中髓鞘是绝缘体。在髓鞘损坏的情况下，电信号传导中断或极度扰乱。在多发性硬化中，机体免疫系统攻击并损坏髓鞘。针对多发性硬化没有已知有效的治疗方法。现有的治疗旨在改善攻击后的功能，预防新的攻击，但通常具有有害效应或难以耐受。

Bepecin具有抗炎性、修复性、保护性和免疫调节活性。

药理学研究的基础上，预期bepecin对多发性硬化具有良好的治疗效应。具有bepencin-L-精氨酸盐的制剂的使用在由感染莱姆疏螺旋体病(L.Reiketall.,Neurology,46,1989,790–795)或梅毒(D.Grey,TheLancet,July12,1986,75–77)引起继发性损伤和障碍的辅助治疗中可以是有用的。在所有这些情况中，髓鞘受损且脑中的病变可用MRL可见。

多发性硬化将由含有稳定形式的1mg至5mg剂量的bepecin盐的口服制剂来治疗。bepecin制剂的使用不与有害的或令人不快的副作用相关，它们对于长期施用也是安全的。

在对动物的药理学实验的基础上，据信合适药物制剂的形式的具有碱性氨基酸的bepecin盐的使用还将在其它神经系统疾病例如神经病、重症肌无力等中是有益的。

Bepecin还对于侧支血管在股动脉严重损伤后的重组具有非常有益的效应。

本发明进一步显示但不局限于下列意欲澄清工艺的实施例中。实施例18至44描述为测定bepecin的药理学活性而进行的实验。它们已通过使用实践中和引用的文献来源中广泛使用的体外和体内实验模型来实施。在所有的实验中Bepecin以具有L-精氨酸的盐的形式使用。

附图简述

图1：显示当通过紫外光辐照时，bepecin溶液的稳定性；样品1至7的吸光度各自测量10分钟。

图2：显示bepecin对黑色素瘤B-16细胞的活性。

图3：显示bepecin对蜱传脑炎病毒(TBE)的效应：

A：10²TBE病毒(i.c.v.)和无bepecin的0.9％NaCl盐水(i.p.)的同时施用。

B：10²TBE病毒(i.c.v.)和10μg/kgbepecin(i.p.)的同时施用。感染症状发生在相当晚的阶段。

C：10μg/kgbepecin(i.p.)在用10²TBE病毒(i.c.v.)感染前4小时的施用。没有疾病的临床体征。30天之后，将动物无痛致死，并将一部分脑匀浆物转移至新的动物；见：D。

D：脑匀浆物的和用10²TBE病毒(i.c.v.)的新感染的同时施用。即使在50天后也没有疾病的体征。

图4：bepecin盐的¹H-NMR光谱，在D₂O中记录：

A：bepecinL-赖氨酸盐(1:3)的光谱，

B：bepecinL-精氨酸盐(1:2)的光谱，

C：bepecinL-鸟氨酸盐(1:2)的光谱。

图5：显示侧支血管：

A：只经历局部盐水浴1分钟的对照组-无侧支血管可见；

B：经历bepecin浴1分钟的测试组-可见具有安全的相互连接的大量侧支血管。

实施例

实施例1：bepecinD-精氨酸盐(1:2)的制备

Bepecin三氟乙酸盐(500mg，0.34mmol)溶解在25ml水中。伴随温和搅拌，逐渐加入D-精氨酸(212mg，1.22mmol)，并再搅拌15分钟。该溶液的pH值随后用稀乙酸(50％)调节至7.40±0.05。将溶液过滤澄清并冷冻干燥。将冻干物溶解在少量水中，并施加在经预先洗涤和用纯水平衡的HPLC柱(ID＝2.2cm,h＝25cm,吸附剂ReprosilC18,10μm)的起始处。用具有增加浓度的异丙醇的水进行洗脱：从0至5％的异丙醇，30分钟。弃去含有盐和杂质的第一级分。将收集的主要级分冷冻干燥。获得含有2molD-精氨酸/1mol十五肽的550mg干燥盐。

氨基酸分析对应于如下组成：

2-Ala,1-Val,3-Gly,4-Pro,1-Leu,2-Asp,1-Glu,1-Lys,2-Arg。

MS(TOFMSES+):M₁＝1419.8(十五肽+H⁺)

M₂＝175.1(D-精氨酸+H⁺)

FTIR(cm^–1):3275,3057,2958,2872,1628,1533,1448,1394,1315,1244,1204,1161,1096,1044,919,875。

比旋度(c＝1g/100ml)[α]_D ²⁸＝–154°。HPLC纯度:99.48％。

实施例2：bepecinL-精氨酸盐(1:1)的制备

具有bepecin乙酸盐和L-精氨酸的溶液按实施例1所述制备。该溶液的pH值用稀乙酸(50％)调节至4.60±0.05，类似于实施例1处理得到的溶液。获得含有1molL-精氨酸/1molbepecin的232mg无定形粉末。

氨基酸分析对应于如下组成：

2-Ala,1-Val,3-Gly,4-Pro,1-Leu,2-Asp,1-Glu,1-Lys,1-Arg。

MS(TOFMSES+):M₁＝1419.8(十五肽+H)

M₂＝175.1(L-精氨酸+H)

FTIR(cm^–1):3265,3060,2960,2875,1629(CONH),1534,1448,1394,1312,1243,1202,1160,1043,919,873。

比旋度(c＝1g/100ml)[α]_D ²⁸＝–119.0°。HPLC纯度:98.57％。

实施例3：bepecmL-精氨酸盐(1:2)的制备，(缩写：Arg-BPC)

Bepecin乙酸盐(1g，0.705mmol)和L-精氨酸(420mg，2.41mmol)溶解在4ml水中(溶液的pH值为8.92)，搅拌20分钟。随后用用稀乙酸(50％)将pH值调节到7.40±0.05。将该溶液施加在经预先充分洗涤和用纯水平衡的HPLC柱(ID＝2.2cm,h＝25cm,吸附剂：ReprosilC18,10μm)的起始处。用具有增加浓度的异丙醇的水逐步洗脱：从0至5％的异丙醇，30分钟。弃去含有盐和杂质的级分。将主要级分冷冻干燥。获得易溶于水的1.10g白色无定形粉末。

氨基酸分析对应于如下组成：

2-Ala,1-Val,3-Gly,4-Pro,1-Leu,2-Asp,1-Glu,1-Lys,2-Arg。

MS(TOFMSES+):M₁＝1419.8(十五肽+H⁺)

M₂＝175.1(L-精氨酸+H⁺)

FTIR(cm^-1):3271,3057,2958,2875,1632(CONH),1539,1448,1394,1244,1205,1161,1097,1044,919,873,652。

比旋度(c＝1g/100ml)[α]_D ²⁸＝–124,3°。HPLC纯度:99.54％。

¹H-NMR光谱示于图4/B中。

实施例4：bepecinL-赖氨酸盐(1:3)的制备，(缩写：Lys-BPC)

Bepecin乙酸盐(500mg，0.34mmol)和L-赖氨酸(176mg，1.2mmol)溶解于3ml水中，搅拌20分钟。将溶液施加在HPLC柱上并如实施例3所述纯化。获得易溶于水的283mg白色无定形粉末。

氨基酸分析对应于如下组成：

2-Ala,1-Val,3-Gly,4-Pro,1-Leu,2-Asp,1-Glu,4-Lys

MS(TOFMSES+):M₁＝1419.8(十五肽+H⁺)

M₂＝147.1(L-赖氨酸+H⁺)

FTIR(cm^–1):3269,3060,2958,2875,1981,1627(CONH),1532,1447,1393,1315,1241,1203,1160,1008,919,873,654。

比旋度(c＝1g/100ml)[α]_D ²⁸＝–130°。HPLC纯度:99.47％。

¹H-NMR光谱示于图4/A中。

实施例5：bepecinL-鸟氨酸盐(1:2)的制备，(缩写：Orn-BPC)

Bepecin乙酸盐(500mg，0.34mmol)和L-鸟氨酸(1.77mg，1.05mmol)溶解在5ml水中，pH值用稀乙酸调节至7.40±0.05。如前面的实施例中所述将该溶液在HPLC柱上纯化。获得易溶于水的412mg白色无定形粉末。

氨基酸分析对应于如下组成：

2-Ala,1-Val,3-Gly,4-Pro,1-Leu,2-Asp,1-Glu,1-Lys,2-Orn

MS(TOFMSES+):M₁＝1419.8(十五肽+H⁺)

M₂＝170.1(L-鸟氨酸+H⁺)

FTIR(cm^–1):3269,2958,2875,2162,1636(CONH),1522,1442,1389,1311,1243,1203,1160,1094,1040,911,873,654,610

比旋度(c＝1g/100ml)[α]_D ²⁸＝–137°。HPLC纯度:99.30％。

¹H-NMR光谱示于图4/C中。

实施例6：片剂

实施例7：片剂-膜包衣的

实施例8：眼滴剂

实施例9：胶囊剂

实施例10：用于局部使用的溶液

实施例11：凝胶

实施例12：乳膏

100g乳膏的亲脂性成分：硬脂酸，鲸蜡硬脂醇和硬脂醇，具有辛酸和癸酸的饱和中链甘油三酯，硅油Dimeticon和鲸蜡硬脂醇硫酸钠总共16.4g在60℃下溶解。

亲水成分：向无菌过滤的纯水(70g)添加丙二醇(3g)和防腐剂丁基-4-羟基苯甲酸酯(0.5g)，搅拌并加热至60℃。通过使用0.1摩尔的氢氧化钠溶液调节pH值至6.5。此后，将亲水相在搅拌下添加至亲脂相，冷却并搅拌直至达到30-35℃为止。将抗氧化剂生育酚乙酸酯(0.05g)加入到该混合物中，充分搅拌，最后添加含有Arg-BPC(0.1g)的10g水溶液。将混合物充分搅拌并装入适当的容器中。

实施例13：栓剂

实施例14：口腔分散片剂

实施例15：透皮制剂-贴剂

活性成分：将Arg-BPC(5.0mg)和doxocycline(1.0g)溶解在水(10g)、二甘醇单乙基醚(1.8g)、聚乙二醇单月桂酸酯(0.5g)和二乙醇胺(0.2g)的混合物中。添加25g聚合物溶液GELVA.RTM.2484(Monsanto)并充分搅拌。然后将溶液静置20分钟以除气。然后将其施加到不渗透膜(聚乙烯膜或镀铝的聚乙烯膜)例如3M-Scotchpack1006)并在40-50℃进行干燥。该层随后用多孔受控物质释放箔和保护膜覆盖并切成合适的尺寸。

实施例16：具有延长的稳定性的片剂

配制：

BepecinL-精氨酸盐1:2(1.0g)和D-甘露糖醇(1.0g)溶于20ml水中，无菌过滤(0.22μm过滤器)，并冷冻干燥。得到的白色无定形粉末含有50％的bepecin盐。

片剂制备：

稳定性测试：

将根据描述的方法制备的片剂在-15℃、+25℃和+50℃/RH65％下温育，bepecin的测定使用HPLC方法来测量。温育持续时间：18个月。

温度：-15℃+25℃+50℃

bepecin的测定(HPLC)：99.8％96.6％92.35％

如果使用外推法，可得出结论，制备的片剂将在室温下稳定至少2年。

实施例17：具有bepecin的食品添加剂-泡腾片剂

实施例18：bepecin对NO系统的活性

一氧化氮(NO)具有在内皮和神经细胞中的信号传导分子以及所谓的杀死性分子(通过免疫细胞活化)的作用。一般而言，在NO过量和缺乏的情况中，似乎NO强烈促成生物体中不同异常和病症的形成，例如高血压，咽峡炎，阳萎，循环和脓毒性休克，心力衰竭，心律失常，卒中，炎性过程，血小板和白血球的粘附和聚集，创伤和烧伤、肌肉、腱、韧带和骨损伤的不良愈合，胃肠道病损，糖尿病，胰腺炎，循环和感染性休克，内皮功能紊乱，心脏缺陷和帕金森氏病。

Bepecin具有影响NO的释放和NO-水平的正常化以及抵消NO阻断物质例如L-NAME的施用后的失调和对抗NO前体例如L-精氨酸施用的副作用的特征性质。Bepecin对NO系统的此活性在一定程度上阐明了其非常宽范围的药理学活性。

通过使用在文献中描述的方法：J.Physiol.Paris,1007,91,139–49；Regul.Pept.,2009,156(1–3),83–89；J.Pharm.Sci.,2008,108(1),7–1；J.Clin.Exp.Cardiology,2012,3,201,Regul.Pept.2013,181C,50-66,Med.Sci.Monit.2006,12,36-45andEur.J.Pharmacol.,1997,332(1),23–33，已实验证明bepecin可导致“体外”NO释放并抵消L-精氨酸和L-NAME的效应。因此，bepecin使血压异常正常化，这是由NO结果导致的。

当在10ng至10μg/kg体重的剂量范围中胃肠外或口服使用时，Bepecin还可防止异丙肾上腺素-心肌梗塞以及由甲基地高辛(6mg/kgi.v.或i.p.)引起的心律失常。其防止由NO阻断剂L-NAME引起的病损的恶化。Bepecin抵消由过高和过低的NO-值造成的失调并重新建立正常的NO-系统功能。

如果10ng至10μg/kg体重的剂量范围中胃肠外或口服使用，Bepecin通常在NO-系统中具有调制效应。其防止由NOS阻断剂L-NAME引起的病损的恶化。

实施例19：对伤口愈合的效应

通过使用在文献中具体描述的方法：J.Physiol.Pharmacol.,2009,60(Suppl.7),191–196；J.Orthop.Res.,2010,28,(9),1155–1161；Burns,2005,31(3),310–315；Bone,1999,24(3),195–202；Surg.Today,2007,37(9),768–777，已发现，bepecin因其改善血管生成和胶原产生而显著促进下述病症的愈合：

-皮肤切口；

-深层皮肤烧伤；

-各种吻合如肠道伤口；糖尿病创面；

-各种瘘；

-各种组织横断，特别是韧带、腱、肌肉和神经横断；

-骨折，包括同时软组织损伤；

-角膜创伤，即使具有完全的上皮磨损或角膜溃疡。

基于这些结果以及大鼠和人中愈合过程之间的很大相似性，bepecin将成功地用于人中伤口、烧伤和骨折的愈合。

实施例20：内皮保护、血管生成、血栓形成和出血性病症

基于广泛综述的证据(JPhysiolParis.1993；87,313-27,Inflammopharmacol2006；14,214–21,CurrPharmDes2010；16,1224–34,J.Physiol.Pharmacol.,2009,Dec.,60,Suppl.7,161–5,Thromb.Res.,2012,May,129(5),652–9)；证明了bepecin影响血管完整性损失后的活动。Bepecin在无水酒精胃内灌注后恢复内皮完整性维护(即其表现出细胞保护效应)，而且，bepecin展示出在胃肠道和胃肠外组织病损中的快速伤口愈合效应。因此证实了在大鼠中的腹主动脉吻合术之后，bepecin施用在至少24小时防止阻塞性血栓形成，并且当在已经形成的血栓形成和血管阻塞的存在下给予时，其迅速破坏已形成的阻塞性血栓并且恢复小腿功能。

在对大鼠进行的其它实验中，在截肢后，证明了bepecin始终抵抗出血时间延长和血小板减少症以及阿司匹林-、华法林和肝素延长的出血。Bepecin腹膜内、静脉内或胃内地施用(10μg/kg,10ng/kg体重)。

在预防和消除已形成的凝块、出血时间延长和阿司匹林-、华法林和肝素延长的出血导致的血小板减少症以及由大剂量肝素(250mg/kg,25mg/kg,10mg/kgi.v.)、华法林(1.5mg/kgi.g.，连续3天每天一次)、阿司匹林(0.1g/kgi.g.(每天一次/连续3天或1.0g/kgi.p.一次)导致的血小板减少症的过程中一个重要的发现是，bepecin其本身不影响凝结参数。

因此，使用bepecin的疗法可扩展至其中血栓形成或血液病症任一存在的所有相关病状。Bepecin还可以是其中egr-1和/或naB2的功能受损的病状的原始疗法。

实施例21：粘连形成

我们以往的研究证实了bepecin对炎症过程及其结果的显著效应。此外，我们还证实了bepecin对粘连形成(粘结)的治疗效应和防止粘连的发展(或至少显著减少)的治疗效应。

通过几个合适的方法(即根据Gastroenterology,2010,138,(5,Suppl.1)753中描述的大鼠中腹膜壁层的手术切除；根据Surg.Today,2007,37(9),768–777的回肠-回肠吻合术；Dig.Dis.Sci.,2009,54(10),2070–2083)的空肠-回肠吻合术)，已显示bepecin一般性地减少粘连形成(肉眼可见的和显微镜可见的)，这与功能性改善相关(即吻合增强，动物体重增加到正常水平)。Bepecin以其10ng至10μg/kg体重范围的定期低剂量胃肠外、口服或局部地使用。

考虑到动物模型与人有机体病状之间的一致性，本申请请求保护bepecin在这些病症中的治疗用途。

实施例22：免疫调节

由天然或合成的物质诱导的免疫调节(特别地作为重要的巨噬细胞功能)被认为是预防和治疗传染性和肿瘤性疾病的良好替代。

通过使用J.Physiol.Pharmacol.,2009,60,Suppl.2,69中描述的方法，测定了bepecin增加巨噬细胞(小鼠中主要的免疫活性细胞)活性的“体内”功效(即巨噬细胞流动性增加，单核与多核白细胞之间的M/P比的恢复)。用50μg或100μg/kg体重剂量的bepecin对小鼠每日注射(i.p.)进行连续3天。

活化的巨噬细胞诱导调节B-、T-和NK-细胞的功能的因子的产生和释放，这对于免疫调节作用是重要的。Bepecin的此免疫调节作用将有利地用作辅助手段用于几种传染病和肿瘤性疾病的治疗。

实施例23：NSAlD-非固醇类抗炎药

如已发现的，bepecin具有针对所有炎性参数的强力效应，并同时显著改善了病变和损伤的治疗和预防，特别是在使用了NSAID之后。对乙酰氨基酚、阿司匹林、双氯芬酸、布洛芬和吲哚美辛诱发文献中描述的许多副作用：J.Physiol.Pharmacol.,2010,61(2),241–250；Gastroenterology,2010,138,5,Suppl.1,S-369。这特别地由胃、肠、肝和脑病损的形成、出血时间延长和各种行为紊乱(包括惊厥)证实。这些均由bepecin的胃肠外或口服施用抵消。

除了增加的出血以外，bepecin还有效地对抗阿司匹林(1g/kg,i.p.)或双氯芬酸(12.5mg体重/公斤，i.p.)使用后的血小板减少症，其在非常低的10ng至10μg/公斤体重的剂量范围内胃肠外、胃内或以饮用水施用。

Bepecin抵消NSAID的副作用。此外，考虑到其对急性和慢性炎症的有益效应(其中还使用了NSAID)，最佳方法会是单独使用bepecin而不使用NSAID。

实施例24：过敏反应和过敏样反应

当胃肠外给药时，蛋清和葡聚糖在大鼠中诱导严重的过敏样反应(B.N.Halpern,Histamine,CibaFound.Symp.,J.andA.ChurchillLtd,London,1956,92–123和H.Selye,Endocrinology,1937,21,169)。天然和合成聚合物可诱导大规模的内源性组胺释放。经麻醉的动物接受6％、10％、20％、40％、60％、80％、90％浓度的葡聚糖静脉溶液和/或蛋清的溶液(1ml/大鼠或0.15ml/小鼠)至其尾巴中。突起的水肿出现于面部、上下嘴唇、口鼻部、爪和阴囊(表现为极度发绀)。动物在葡聚糖和/或蛋清施用后经历呼吸困难和几例死亡。相反，方案中的bepecin(10μg，1μg，10ng，10pg/kg)既有效地防止过敏样反应和血管脱证还显著地改善抗组胺剂例如氯米帕明(20mg/kg)和西咪替丁(10mg/kg)的作用，单独的抗组胺剂仅贫乏地有效或甚至是无效的。

因此，考虑到所使用的模型是良好模仿人过敏样反应的规则模型，提供了bepecin在过敏性条件中的有益效应。

实施例25：皮质类固醇

皮质类固醇(特别是全身性给予的)可导致严重的紊乱(即免疫抑制、伤口愈合不良等)。通过使用在文献中描述的方法：Med.Sci.Monit.,2010,16(3),BR81–88；andBurns,2005,31(3),310–315，发现bepecin完全抵消皮质类固醇失能的伤口愈合(即6-α-甲泼尼龙，在小鼠和大鼠中1mg和10mg/kg体重，i.p.)，这是在全身性皮质类固醇治疗的肌肉挤压伤、深层皮肤烧伤、横断的跟腱或内侧副韧带、各种瘘、胃、结肠及皮肤缺陷或皮质类固醇免疫抑制(脾细胞的检查)中始终表现出的效应。

Bepecin作为乳膏薄层(即1μg/g中性乳膏)以10ng至10μg/kg体重的剂量范围胃肠外、口服或局部地使用。

因此，由于呈现出与人类情况有相当的重叠，bepecin可用于消除由皮质类固醇的使用诱发的病症和/或在一些适应证中甚至代替皮质类固醇。

实施例26：高血压，低血压和血压调节

如J.Physiol.Paris,1993,87(5),313–327andEur.J.Pharmacol.1997,332(1),23–33所述进行的实验表明bepecin对血压正常动物的血压没有影响，但其既可降低升高的血压也可升高降低的血压。具体地，bepecin降低患有二肾(2K1C)或一肾(1K1C)Goldblatt高血压的高血压动物性中升高的血压；给大鼠长时间供给高果糖(80％)或高盐(15％)饮食；用NOS-阻断剂L-NAME处理大鼠(5mg/kg，i.v.)；或者用巨大剂量的KCli.p.处理。Bepecin抵抗低血压(即，使具有慢性心脏衰竭和增加的血清内皮肽-1值的大鼠中的血压正常化)、多柔比星诱发的低血压(2.5mg/kgi.p.，15天内6次)，并且还使慢性心脏衰竭逆转。另外，bepecin抵消用NO前体L-精氨酸(100mg/kgi.v.)处理的大鼠中的低血压。定期地，预防性或治疗性给予bepecin。以10ng至10μg/kg的剂量胃肠外或口服给药的bepecin引起以其它方式存在于这些过程中的其它病损和病症的显著减少或甚至消失。

在低血容量性休克中，bepecin恢复血压并防止否则会致命的结果。其还可增加血容量损失，否则可能会导致死亡。

考虑到血压紊乱模型和人类紊乱之间的显著相似性，bepecin在血压紊乱、高血压和低血压以及相关病症的治疗中得到了证实。

实施例27：乙醇-急性和慢性中毒，麻醉药

通过使用Curr.Pharm.Des.,2010；16(10),1224–1234；J.Physiol.Pharmacol.,2009,60(Suppl.7),177–181；Eur.J.Pharmacol.,1999,364(1),23–31；LifeSci.,1994,54,(5),PL68；Dig.Dis.Sci.,1997.42(5),1029–1037中描述的方法，进行了在乙醇中毒中bepecin效力的研究。

10ng至10μg/kg体重的剂量范围内的Bepecin(胃肠外或口服给药)预防和抑制乙醇急性中毒、戒断和急性和慢性胃和肝脏病损以及由急性饮酒或长期慢性饮酒导致的门静脉高血压的效应。依此类推，bepecin拮抗吗啡成瘾小鼠中的戒断症状。另外，类似于纳洛酮(10mg/kgs.c.)，bepencin拮抗吗啡的麻醉作用(16mg/kgs.c.)。

如果采用乙醇为原型，则bepecin从而对抗异丙酚、硫喷妥钠和氯胺酮的效应。其减少麻醉和僵直性昏厥(即芬太尼、去氢苯高醇)的效应。

由于食用酒精也在人中产生类似的效应，bepecin可用于急性和慢性酒精中毒和戒断症状(还例如在吗啡和类似物质中)，并且还与麻醉剂一起使用，以调节其麻醉效应。

实施例28：bepecin对肿瘤的活性

用于研究实验性肿瘤的常用模型涉及在小鼠中黑色素瘤B-16和癌的转移灶的数量的评估。这些实验性肿瘤与人类肿瘤具有相当大的相似性。

Ehrlich腹水瘤(EAT)生长在所有小鼠品系中并且通常在这些实验中可辨识地使用。

感染EAT肿瘤细胞的小鼠存活最多25天。在用bepecin(2μg/ml)孵育小鼠之前。Bepecin显著延长动物存活，大多数存活至观察结束(45天)。Bepecin还防止中性粒细胞减少的发生，减少网状细胞并改善使用环磷酰胺细胞抑制剂后的血红蛋白值。

体外实验

对黑色素瘤细胞的活性在补充有磷酸盐缓冲液和抗生素的RPMI1840培养基中的人黑色素瘤细胞培养物中进行了研究。细胞培养物在37℃和具有5％CO₂的湿润大气下在培养箱中生长。向生长良好的细胞培养物单独地添加2pg/ml、2ng/ml和10ng/ml浓度的bepecin，还可与血管内皮生长因子(VEGF-10ng/ml)组合，进行48小时。通过光学显微镜和通过流式细胞术观察细胞形态。在添加bepecin至细胞培养物之后，黑色素细胞的密度显著降低。此外，细胞表型从圆形黑色素细胞改变为具有精细形成的细胞交错的纺锤状上皮细胞。大多数表达的结果在10ng/ml的bepecin浓度下是明显的。类似的变化也在首先用VEGF刺激随后使用bepecin的细胞情况下观察到。图2。

流式细胞分析显示，在2pg/ml浓度的bepecin下，S期的细胞数量相较于对照减少至20％，并且在2ng/ml和10ng/ml浓度的bepecin下减少至55％。

免疫印迹分析表明，bepecin通过抑制响应VEGF因子的促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)来抗促有丝分裂(antimitogenically)地作用。

Bepecin明显表达抗肿瘤潜能。考虑到动物模型和人病状之间的相似性和在体内和体外实验中获得的有益结果，bepecin将有效用于抗肿瘤治疗。其还可用于减少细胞抑制剂的副作用。

实施例29：胃肠道病损

描述于许多出版物(Curr.Pharm.Des.,2010,16(10),1224–34；J.PhysiolPharmacol.2009,60(Suppl.7),107–114；Dig.Dis.Sci.2008,108(11),(7–17)；Dig.Dis.Sci.2009,54(1)46–56)中的方法和材料用于在几个实验性溃疡模型(例如，24小时-束缚应激，皮下或直肠内半胱胺，96％乙醇至胃中的灌注，NSAID-病损，DNFB(二硝基氟苯)病损，反流性食管炎)在处理前、同时处理和处理后测定10ng至10μg/kg(i.p.,i.g.)剂量范围内的bepecin与参照标准物比较的治疗活性。在所有模型中，bepecin成功地胃肠外或口服使用。

Bepecin有效抑制伤口的出现并加速在所有模型中存在的那些的治疗。

考虑到与人类病症的相当大的相似性，bepecin可成功地在所有消化道病损的治疗中应用。

实施例30：钾-低钾血症和高钾血症

钾对于心脏平滑肌、消化道、骨骼肌和神经的正常功能是至关重要的。正常的钾浓度对于心律非常重要，从而浓度过低(低钾血症)和浓度过高(高钾血症)诱发心律障碍和生物体中许多其它异常。

通过应用J.Clin.Exp.Cardiolog.2012,3,201；Regul.Pept.,2013,181C,50–66中描述的方法,施加呋塞米(100mg/kg，i.p.)，随后在90-150分钟后，对PR、RR、QRS、QT间期持续时间，P、R、S、T波及其振幅进行心电图监测；此外，还分析了AV阻断、室性早搏、室性心动过速的出现。尽管存在低钾血症，所有bepecin(10μg/kg和10ng/kg，i.p.和i.g.)方案维持窦性心律，无室性早搏、室性心动过速、AV阻断，无间期的延长并且波的振幅不减小。Bepecin在呋塞米之后90分钟(具有低钾血症，存在3^rd级AV阻断和/或室性心动过速)给予。在5-10分钟内，bepecin方案使P、R、S、T波，PR、RR、QRS、QT间期持续时间，R、S、T波振幅，总体AV阻断正常化，并且终止室性心动过速。

通过使用之前在J.Pharmacol.Sci.,2007,104(1),7–18；J.Pharmacol.Sci.,2006,102(3),269–277中描述的方法，证实了bepecin对KCl-过量(腹膜内(i)中，胃内(ii)，在体外(ⅲ))的完全抵消能力。因此，bepecin可作为原始疗法用于使随着低钾血症和高钾血症的表现而出现的所有病症正常化。

实施例31：钙-高钙血症

碳酸钙在生物体中具有重要作用，因为它作用于心肌、血管和神经元的细胞。过高的水平钙(高钙血症)的最常见原因是原发性甲状旁腺功能亢进，第二原因是恶性肿瘤和肉芽肿。高钙血症可导致各种病症，例如高血压，软组织和眼角膜的钙化，肾结石和消化性溃疡。

病理生理钙血症可能由增加破骨细胞活性和骨重吸收(这是肾脏跟随不上的)的疾病引起。它还可在维生素D过量下和通过使用钙替代物(抗酸剂和噻嗪类利尿剂)而发生。一个非常普遍的原因往往是高血压患者中钙通道阻滞剂的使用。Bepecin被显示有效用于高钙血症，抵消CaCl₂过量的效应。同样，bepecin可抵消钙通道阻滞剂过量的效应。

钙过量也即延长的高钙血症在大鼠中诱发急性胰腺炎和QT_c间期缩短以及PQ间期延长。大鼠接受CaCl₂溶液(200mg和400mg/kg，i.p.)。连续地，记录ECG并如Dig.Dis.Sci.,1996,41(7),1518–1526；Regul.Pept.,2009,156(1–3),83–89；J.Pharmacol.Sci.,2004,95(1),19–26中描述的测定K、Na、Cl、淀粉酶、肌酸激酶和LDH(在5、10、15、25和60分钟)以及在60分钟的急性胰腺炎。还将Bepecin(10μg/kg，i.p.)在CaCl₂前30分钟预防性地施用。

大鼠接受维拉帕米的推注(40mg/kg，i.p.)。Bepecin(10μg/kg和10ng/kg，i.p.)在维拉帕米前30分钟施用(预处理)或者在之后5分钟作为处理后施用。

Bepecin抵消严重高钙血症的结果，消除了QTCinterval既缩短和PQ间期延长和抵消否则严重的急性胰腺炎，和降低血清淀粉酶的值。

5分钟后，维拉帕米诱发心动过缓(200-230/分钟)以及2^nd度房室传导阻滞持续30和45分钟。使用bepecin保持或恢复了窦性心律(在治疗应用中，房室传导阻滞也被消除)。

实验表明，bepecin防止或逆转高钙血症的所有结果。因此，bepecin可作为原始疗法用于使随着高钙血症的表现而出现的所有紊乱正常化。

实施例32：对肌无力综合征的影响

肌无力综合征表现在增加的肌肉松弛，已知巨大量的不同药物使重症肌无力恶化，按照ActaNeurol.Scand.,Suppl.,1984,100,39–47使用腹膜内施用的过量硫酸镁诱导肌无力综合症。200-300g体重的接受硫酸镁(500mg/kg体重，i.p.)的雄性和雌性大鼠表现出显著的肌无力，已经经过了5分钟(进行性乏力、虚脱、肌肉无力)的朝向完全不动性的进展。Bepecin在硫酸镁之前15分钟或同时地施用(10μg/kg和10ng/kg体重，i.p.)并完全抵消了硫酸镁扰乱，所有的动物是正常活跃的。

跑台跑步测试表明，在正常大鼠中施用bepecin后，其表现得到了改善并且其可比以前跑动更长的时间。

因此，一般而言，bepecin可作为原始疗法用于使表现为肌无力综合症的所有病症正常化，并且特别地，抵消伴随使用镁的疗法出现的所有病症。同样地，bepecin可以是一般性改善骨骼肌功能的原始疗法。

实施例33：对神经肌肉型和神经精神性疾病的影响

多巴胺系统通常被认为是对运动功能必不可少的(J.Neural.Transm.2010Dec；117(12):1359–69)。通过使用先前在LifeSci.2001Mar.9；68(16),1905–12.J.Physiol.Paris.2000Mar–Apr；94(2),105–110中描述的方法，已证实bepecin可以以特定的方式与多巴胺系统强烈地相互作用，前提是其抵消由不同的精神安定药例如氟哌啶醇、氟奋乃静和氯氮平诱发的躯体感觉障碍和僵直性昏厥、多巴胺囊泡消耗、由神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱发的黑质纹状体多巴胺破坏、多巴胺受体阻断的后果。Bepecin强烈改善MPTP损伤的体感取向并降低了MPTP-诱发的活动过度，以及最重要的是，强烈改善MPTP-动力异常(震颤，运动不能，僵直性昏厥-否则在盐水对照中十分显著)，从而导致对照中MPTP处理的定期致死过程的几乎完全消失。

如上所述，在有或没有吻合术的情况下，bepecin强烈改善肌肉横断或挫伤后的肌肉愈合和神经横断后的神经愈合。因此，这可能意味着bepecin还可适合于改善神经肌肉连接失能和从神经至肌肉的信号传输。

事实上，bepecin可用于一般性改善肌肉功能失能。考虑到所述多巴胺和血清素系统在动物模型和人类疾病中的共同重要性，bepecin可用于相应的神经精神病学(neuropsyhiachiatric)病症，特别是与多巴胺和/或血清素系统有关的病症。

实施例34：胰岛素-糖尿病

通过使用先前在Skin.Pharmacol.Physiol.2006,19(5),266–274,J.Physiol.Paris,1999Dec；93(6),501–4中描述的程序，局部给予的bepecin可显著增加糖尿病动物中皮肤伤口的愈合。进一步证实，bepecin抑制四氧嘧啶诱发的溃疡、果糖摄入诱发的高血压和胰岛素抗性的发展。类似地，在胰岛素后作为抗溃疡肽立即(i)腹膜内或(ii)胃内施用的bepecin(10μg/kg)可在胃溃疡之外还始终抵消所有胰岛素(250IU/kg的过度剂量i.p.)病症和致命性结果(即发作(最后致命的)、大脑皮质和海马中严重受损的神经元、肝肿大、脂肪肝、具有显著低血糖症的肝糖原分解。因此，bepecin治疗的成功可指示bepecin在胰岛素监测中的潜在作用，并且bepecin可影响过量胰岛素施用后的一个或多个致病过程，从而应用其以控制糖尿病患者中的各种紊乱，特别是胰岛素治疗的使用(滥用)。

实施例35：抗炎活性，疼痛和温度

基于大量综述的证据(J.Physiol.Paris.1993；87,313–27,Inflammopharmacol.2006；14,214–21,Curr.Pharm.Des.2010；16,1224–34)，bepencin被证明降低炎症介质(即髓过氧化物酶，白三烯B₄，血栓烷B₂)在体外和体内的释放。Bepecin成功拮抗急性、非特异性炎症的几种模型(即角叉菜胶，松节油，棉球)以及DNFB-损伤。此外，bepecin对抗温度降低(即浸水测试)和升高(酵母诱发的)。相一致地，bepecin拮抗炎性疼痛(乙酸)和非炎性疼痛(MgSO₄)。此外，bepecin增加大鼠角叉菜胶测试中的痛阈并在Randall-Selitto测试中展示抗痛觉过敏效应。

在横断的坐骨神经的情况中，在有或没有吻合术的情况下，bepecin强烈降低神经性疼痛。

bepecin对慢性炎症病损例如佐剂性关节炎(在动物中用弗氏佐剂诱发)和非固醇类抗炎剂(NSAIA)诱发的胃肠病损的效应在大鼠中同时进行了研究并被发现为非常令人信服的。

在良好发展的佐剂性关节炎的治疗中，bepecin的受益者效应早在2周的治疗后就是明显的，并且其甚至在施用一年后也可清楚地看到。

因此，bepecin可用作原始治疗以减轻急性和慢性炎症的负面后遗症，使体温正常化，并且特别是减少疼痛。

实施例36：对神经损伤的效应

通过使用在Regul.Pept.,2010Feb25；160(1–3),33–41中先前描述的方法，显示了大鼠中横断坐骨神经的愈合和在吻合部位处通过在损伤后立刻施加(腹膜内/胃内/局部)的bepecin(10μg/kg，10ng/kg)的施用实现的改善。临床地(自切)、显微镜/形态测定地和功能性地(EMG，损伤后一或两个月，以每周间隔行走恢复)显示了所述改善。Bepecin-治疗的大鼠表现出更快的轴突再生：组织形态测定地(纤维的增加的密度和尺寸，神经弓和神经周再生，增加的有髓鞘神经纤维直径、髓鞘板的厚度、有髓鞘神经纤的数量/面积)，电生理学地(增加的运动作用)和功能性地(改善的因素SFI)。

因此，bepecin显著改善大鼠中坐骨神经的愈合。考虑到实验模型和人病理学之间的显著相似性，这些发现可实际用于各种神经损伤的治疗。

实施例37：体感神经元、运动神经损伤，脑损伤以及联系神经/肌肉上中断的信号传输

体感神经元的功能障碍或功能亢进被证实在多种疾病中，例如由糖尿病引起的先天性感觉神经的神经病变，带状疱疹，带状疱疹后神经痛，特应性皮炎，受伤组织的愈合扰乱，银屑病，湿疹，哮喘，慢性关节炎等。

体感神经元是针对创伤的第一道防线系统。它们控制内环境稳定，并且还在危险的情况下起始适当的措施。

它们的保护性能力通过辣椒素对皮肤和胃肠粘膜的实验性破坏来证实。以高剂量给予的该物质分解感觉纤维，而低剂量(低于0.5mg/kg)激活神经递质释放并且对粘膜有保护效应。在Dig.Dis.Sci.,1996,41(8),1604–1614中描述的实验中，使用了高剂量的辣椒素，其分解感觉纤维。以10ng至10μg/kg动物体重的剂量口服或局部施用的Bepecin强烈减小辣椒素的效应。

Bepecin还强烈减少由体重下降诱发的动物脑损伤的后果。该模型描述于Regulat.Pept.,2010,160(1–3),26–32中。使用琥珀胆碱注射(0.2mg/kg)进右侧肌肉-四头肌-的实验也诱发肌肉作用中的神经肌肉性障碍，这是因为从神经至肌肉的失败的信号传输。在琥珀胆碱注射之前或之后施用的Bepecin完全消除了琥珀胆碱的局部效应。

考虑到bepecin的神经保护效应，实验模型和人类病理学之间的显著相似性，这些发现可实际应用于各种神经损伤的治疗中增强的临床表现。

实施例38：对脑病和多发性硬化的效应

通过使用先前在Eur.J.Pharmacol.2011,667,322-9；LifeSci.2011,88,535–42；J.Physiol.Pharmacol.2010,61,241–50；J.Physiol.Pharmacol.,2009,60Suppl.7,107–14；Regul.Pept.,2010,160,26–32中描述的方法，已证实bepecin对抗结果性导致具有过量的NSAID的脑病的所有因素。其还对抗在巨大剂量的胰岛素施用后出现脑病损。Bepecin完全对抗危及生命的胰岛素毒性和致命性发作、大脑皮质和海马中严重受损的神经元。Bepecin还可减少由创伤造成的脑损坏。目前，那他珠单抗(抵抗α4-整联蛋白分子的细胞粘附的人源化单克 隆抗体)有利地用于多发性硬化和克罗恩氏病的治疗。考虑到bepecin在溃疡性结肠炎的各种模型中的先前应用及其有效性，已提及的bepecin在受损的肌肉、神经和脑损伤中的有效性，可预期bepecin在多发性硬化的合适模型中的有益效应。

在变应性脑炎的各种实验模型中，cuprizone据称是最可靠的一个。使用了最近描述的方案((J.Physiol.Pharmacol.2013,Brain,2006,129,1940–1952)。对Wistar大鼠在其饮食方案中施用2.5％的cuprizone并与bepecin的添加组合，bepecin以10μg/kg或10ng/kg，0.16μg/ml/12ml/天/大鼠或0.16ng/ml/12ml/天/大鼠添加至饮用水中直到四天后的无痛致死为止；另外胃内给予1g/kgcuprizone，每日一次，并胃内给予10μg/kg或10ng/kgbepecin。因此，大鼠被反复给予其食物中较高剂量的cuprizone，这加速损坏的形成。作为结果，神经损坏在脑的不同部位中观察到，最显著的损坏发生在胼胝体、侧背丘脑和连接核(nucleusreunion)中。用cuprizone和bepencin治疗的大鼠始终经历所有部位中较少的神经损坏。Bepencin在受最大影响的那些部位中显示最有益的效应。

因此，根据实验的结果，bepencin证实适合用于炎性肠病和多发性硬化的治疗。Bepecin还可在各种脑病中作为原始疗法。

实施例39：抗病毒活性

虫媒病毒，肝炎、疱疹和LCM病毒

在新生的24小时大的BALB-C品系小鼠(雄性和雌性)中研究了抗病毒活性。虫媒病毒(TBE＝蜱传脑炎病毒，Bhania，登革热1、2、3和4型，Sindbis，西尼罗河和病毒)，甲型肝炎病毒，淋巴细胞脉络丛脑膜炎(LCM)病毒和疱疹病毒1和2型，作为10^–2的稀释的病毒悬浮液i.c.(或甲型肝炎中p.o.)使用(0.02ml/小鼠)。剂量被调整为在0.02mli.c.(或甲型肝炎中p.o.)/小鼠上关于LD₁₀₀是相当的并以稀释度10^–2接种。Bepecin(20μg/kg体重)或0.9％NaCl溶液(0.02ml/小鼠)如下i.c.或i.p.使用：

(ⅰ)病毒感染前处理2小时(-2h)，

(ii)与病毒感染同时地(0)

(iii)在感染症状出现后4天。

结果示于表7中。

当bepecin在病毒感染之前施用时(i)，在观测时没有记录到疾病或死亡的任何迹象。如果bepencin与感染伴随施用(ii)，疾病症状出现在显著较晚的阶段，20天后(在无bepecin的对照组中，所有动物在5天内死亡)。如果bepecin在最初症状的存在下给予，则疾病的爆发显著延迟(iii)。

表7中的数字代表所有受感染的动物死亡(包括对照组)时的时间天数。在由健康的未经处理的动物组成的第二组中没有死亡病例。符号“+”表示口服剂量，符号“a”表示ARBO病毒，以及符号“n.d.”意指没有死亡病例。所有的动物在感染后观察40天。

蜱传脑炎病毒

在测试小鼠中bepecin针对蜱传脑炎病毒的活性明显地显示于图3中。Bepecin以0.02mg/kg体重的剂量使用。Bepecin显著延长测试动物的存活，或通过使用合适的剂量甚至防止感染。

为了验证所使用的病毒悬浮液的毒力的结果，获取早先用TBE病毒和bepecin感染的动物的脑组织的一部分并制备脑匀浆物作为悬浮液。通过使用该悬浮液，使新的动物接种和感染新的病毒悬浮液(TBE)。经处理的动物即使在50天后也没有表现出疾病的任何症状，而仅给予盐水来替代脑匀浆物的动物在5天内死亡。

表7：

疱疹病毒

使用VERO细胞(TICD₅₀,HSV-1,10¹⁰,ID_50/200μl和HSV-2:10¹¹,ID_50/100μl，孵育24、48和72小时)的研究证实在接种疱疹病毒HSV-1和HSV-2的体外细胞系统中，bepecin抑制HSV病毒的复制并保护细胞抵抗致细胞病变作用HSV病毒。

Bepecin的“体内”活性通过使用在新生小鼠品系BALB/C上实验测定，所述实验使用浓度为10¹⁰ID_50/100μl的HSV-1和浓度为10¹¹ID_50/100μl的HSV-2的脑内接种。BepecinL-精氨酸盐以10μg/kg和100μg/kg的剂量施用。未经处理的动物组用于比较的目的；这些动物仅用盐水和10mg/kg和100mg/kg剂量的阿昔洛韦处理。在一个组中，所有药剂施加48小时，并且在病毒感染后施加另外的72小时。结果表明，bepecin显著减少致死感染小鼠中患病动物的数量并且比公认药物阿昔洛韦更有效。用阿昔洛韦治疗的小鼠的存活时间为112/105/115小时(中值/最小值/最大值)，而用bepecin治疗的小鼠的存活时间(在较小剂量上！)显著更长：131/128/135小时。

10μg/kg和100μg/kg剂量的bepencin的效率被证实在相同的测试条件下好于10mg/kg和100mg/kg的显著更高剂量的阿昔洛韦的效率。

在用巨细胞病毒CMV感染的情况下获得类似的结果。

甲型流感病毒

在MDCK模型(MadinDarby犬肾)上进行bepecin对甲型流感病毒H1N1和H3N2型的活性研究。作为培养基，施用补充了5％胎牛血清和抗生素的MEM(最小必需培养基)(NaruseN.等人,J.Antibiot.,1991,44,733–740)。Bepecin显示出对甲型流感病毒的强抑制效应，即使在非常低的32μg/ml的浓度也如此，并且其比迄今已知使用的化合物显著更加有效。

猫白血病病毒

猫白血病病毒(FeLV)是逆转录病毒，由此作为RNA病毒传播，但RNA被逆转录成DNA。其在猫中以唾液或鼻分泌物传播。该动物的免疫系统失效并且感染对动物是致命的。这种类型的疾病是血液淋巴细胞癌(白血病)的类型。

bepecin的活性通过使用在从6个月至5岁大的32只猫(两种性别)上进行的测试来研究(由所有者同意)，这些猫没有针对这种疾病进行预先疫苗接种。所有猫处在强烈表达的疾病期，ComboFeLV/FIV测试为阳性。所有动物具有高至41.5℃的高体温，以及严重疾病的体征：黄疸，腹泻，心动过速，腹痛，脱水和抑郁。

经诊断后，所有猫接受皮下注射形式的1μg/kg体重剂量(1ml中的)的bepecin溶液，前8天每天一次，随后同样的剂量口服多达总共一个月。

立即观察到了改善，体温仅在30分钟内即下降最少1℃，并且一般性病况在一周内回复。然而，一些动物中的病况在4-5天后再次暂时恶化24小时，但在第6天再次改善，然后在约10天内观察到完全恢复。

结论：如果施用1μg/kg体重的每天bepecin剂量，未经预防性接种疫苗并因猫白血病患病的猫可在10天内完全恢复。迄今为止，除了接种疫苗和非常昂贵的干扰素-ω以外，还没有针对此疾病的有效药物。

基于病毒亚型的相似遗传学，可预期bepecin在一些其它病毒感染的病例中是有效的，例如水痘带状疱疹(VZV或HHV-3)，Epstein-Barr(EBV)病毒，人疱疹病毒HHV-6、HHV-7、HHV-8(Kaposi)和基孔肯雅热(CHIKV)。

考虑到这些病毒中的一些也在人中诱导类似疾病现象，相信bepecin可用于也在人中治疗这些疾病，尤其是在形式对于患者是非常不利时候(例如AIDS和AIDS相关的综合征)。

实施例40：括约肌作用

实验测试方法具体地描述于J.Pharmacol.Sci.,2007,104(1),7–18andJ.Pharmacol.Sci.,2006,102(3),269–277andRegul.Pept.,2013.181C,50-66中。发现Bepecin(10ng/kg至10μg/kg体重，胃肠外或口服)保持大鼠中的括约肌功能(食道括约肌，幽门括约肌和尿道括约肌)和括约肌内的压力，否则这将发生紊乱。此外，即使在长期持续的病症(即食管炎，急性胰腺炎)后，或在不同的压力性尿失禁程序后，bepecin也可迅速恢复括约肌功能及其压力。此外，bepecin还缓解和消除由括约肌失能引起的食管炎和其它病症(急性胰腺炎；不同的压力性尿失禁)。

因此，考虑到使用的模型与人体病理学的相似性，bepecin可以是用于与失效的括约肌功能相关的所有病症的原始疗法。

实施例41：动物体重增加-兽医学

通过使用Dig.Dis.Sci.,2009,54(1),45–56中描述的方法，对具有广泛小肠切除后的晚期短肠综合征和进展性体重减轻的大鼠进行了4周的研究。在手术后，动物的疲惫随着伴随的体重减轻、隐窝深度的两倍增加、在第一个周内肌肉厚度的四倍增加、空肠和回肠扩张和紊乱的空肠/回肠比率而增加。在bepecin施用后立即观察到持续的体重增加和以下的增加：绒毛高度，隐窝深度和肌肉厚度(圆形肌肉层)。以10ng/kg至10μg/kg体重剂量的bepecini.m.或p.o.处理的大鼠不具有空肠和回肠直径的不同。它们有恒定的空肠/回肠比和增加的吻合断点。

因此，用所述剂量的bepecin从第1天至21天处理小猪具有实质更好的体重增加并且无腹泻。

因此，考虑到使用的模型与动物病理学的相似性，bepecin可以是在与短肠功能相关的所有病症中的原始疗法。此外，bepecin可因而用于也在耕作动物中改善体重增加。

实施例42：Bepecin对精子保存的影响

通常已知在精子的保存中由于温度变化和渗透效应，精子冷冻过程导致精子活动力降低大约50％。形态学变化由于精子膜的组织、通透性和脂质组成而发生。

已发现bepecin对根据稍作改良的标准方法(培养基在冷冻前加入bepecin)冷冻的牛精子的活动力具有有益作用。

实验的第一部分旨在测定体外最有效bepecin剂量(20ng/ml)对精子(如果精子在冷冻前以这样的方式处理)解冻后的质量的效应。第二部分研究对精子形状的效应。结果由相差显微镜和通过CASA计算机处理进行评价。

在培养基冷冻前使用bepecin的处理相较于对照精子样品改善了在37℃下的解冻后活动力(P<0.05；主观法：P＝0.0046；CASA：P＝0.014)。

精子与bepecin在解冻后立即的共处理改善了其相较于对照样品的活动力(P<0.05；主观法：P＝0.0018；CASA：p＝0.014)。

考虑所述结果，可得出结论，在加入bepecin的情况下冷冻牛的精子对精子解冻后的体外质量具有很好的效应。为了确认这些结果，进一步的体内研究将是有益的。

结论：根据目前可用的结果，bepecin对精子在低温保存中的质量具有有利的效应。

实施例43：在血管摘除后的效应

Bepecin在大血管切除后具有特定的有益效应。不同于L-NAME和L-精氨酸，bepecin迅速桥接血管断端之间的缺损，从而即使在最坏的情形下，也迅速地重新组织血液供应。

大鼠中股动脉的一部分(腹壁后动脉和旋股侧动脉之间)被切除以研究在临界尺寸血管缺损形成后的血管缺损内侧支血管的出现。血管缺损内侧支血管出现根据在CardiovascRes.1997Sep；35(3):547–52中对于微血管造影评估所描述的方法进行评估。使用红外摄像机进行热成像。

在切除大鼠中股动脉的限定部分后5-10分钟在于血管缺损出现后立即接受局部1分钟盐水浴(1ml/大鼠，5ml/kg)的对照组中没有观察到血管缺损内的侧支血管出现。图5A。

在于血管缺损出现后立即接受局部1分钟L-精氨酸浴(1ml/大鼠，100mg/kg)的大鼠中切除股动脉的限定部分后5-10分钟在血管缺损内存在微小的侧支血管但没有相互连接。

在于血管缺损出现后立即接受局部1分钟L-NAME浴(1ml/大鼠，5mg/kg)的大鼠中切除股动脉的限定部分后5-10分钟血管缺损的区域是完全空的并且血管缺损内没有侧支血管存在。

在bepecin施用的情况下，在于血管缺损出现后立即接受局部1分钟bepecin浴(1ml/大鼠，10μg/kg)的大鼠中切除股动脉的限定部分后5-10分钟在血管缺损内可观察到(由热成像记录确认)具有完全相互连接形成桥接网络和功能性网络的侧支血管。图5B。

该证据表明，bepecin介导的适应在股动脉切除和闭塞后迅速出现在现有侧支动脉内以恢复血管传导和从而肢体血流。事实上，晚期适应是动脉生成，其是侧支动脉重塑的过程，而早期适应是血管舒张J.Vasc.Surg.2010Jan；51(1):165–73。无论如何，L-精氨酸和bepecin之间的明显区别证明早期适应(目前在血管损伤后按天-周期(而不是分钟-周期)研究，并且不是在血管缺损本身内研究)不是简单的血管扩张，而是特定的bepencin介导的桥接过程。我们可以谈论的是对通过络脉的血液的初始增加(以成为永久的方式)具有显著效应的重要过程。因此实现了高度发达的阶段和改善的最终结果(从两个断端形成血管树)。

基于该实验结果，bepecin可以是针对其中血液供应的快速重组会是强制性的所有病况的原始疗法。

实施例44：急性毒性

在所有的研究中，bepecin显示非常安全的特征谱。作为二-L-精氨酸盐(1:2)以及所有其它盐形式的Bepecin，当以非常高的剂量方案即1g/kg体重腹膜内、静脉内或胃内给予雄性和雌性WistarAlbino大鼠时，显示无毒性且无不良效应。

Claims (12)

1.通式(I)的新型稳定十五肽盐：

其中n表示1、2或3，并且BAA表示碱性氨基酸。

2.式(I)的新型稳定十五肽盐，其中碱性氨基酸是L-、D-或DL-形式的精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸或其它氨基酸，优选是L-精氨酸。

3.通式(I)的新型稳定十五肽盐的制备方法，其特征在于，将具有(SEQIDNO1)的十五肽与碱性氨基酸BAA在水溶液中于室温下以1至3的碱性氨基酸对1摩尔具有(SEQIDNO1)的十五肽的摩尔比进行反应：

其中所形成的溶液的pH值用滴定法调节，随后通过HPLC色谱和冷冻干燥以固体形式分离形成的式(I)的盐。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，将L-、D-或DL-形式的精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸或其它氨基酸，优选L-精氨酸，用作碱性氨基酸。

5.根据权利要求3和4所述的方法，其特征在于，通过1mol的碱性氨基酸与1mol的十五肽(SEQIDNO1)的反应获得的溶液的pH值被调节至4.1至5.0，优选被调节至4.60±0.05。

6.根据权利要求3和4所述的方法，其特征在于，通过2mol的碱性氨基酸与1mol的十五肽(SEQIDNO1)的反应获得的溶液的pH值被调节至6.7至7.8，优选被调节至7.40±0.05。

7.固体和液体形式的药物制剂，其用于口服、静脉内、直肠、阴道、肌肉内、局部和其它的使用，所述制剂含有治疗有效量的根据权利要求1和2所述的具有通式I的十五肽盐。

8.根据权利要求7所述的药物制剂，其特征在于除了所述十五肽盐以外，还含有一种或多种其它活性物质，优选为抗生素或抗氧化剂。

9.根据权利要求7和8所述的药物制剂，其特征在于含有用于增加稳定性的添加剂，所述添加剂选自碱金属和碱土金属碳酸盐或碳酸氢盐，优选为碳酸氢钠。

10.根据权利要求7、8和9所述的药物制剂，其特征在于含有用于增加稳定性的添加剂，所述添加剂选自糖诸如D-甘露糖醇、海藻糖、山梨糖醇或类似的，优选为D-甘露糖醇。

11.根据权利要求7至10所述的药物制剂，其用于在下列疾病、病状和病症的预防、保护和治疗中使用：

-应激相关疾病和病症，胃肠道任何部分的溃疡，一般性抗炎活性，胃肠炎性疾病，克罗恩氏病，急性胰腺炎；

-器官保护活性：保护肝脏和胰腺病变，保护内皮细胞，预防粘连形成，预防和治疗心肌梗死和脑卒中，在免疫系统中的保护效应；

-治疗病毒感染，特别是甲型肝炎、疱疹病毒、A型流感和ARBO病毒，诸如蜱传脑炎，西尼罗河热，登革热1-4型，巨细胞病毒CMV和LCM病毒，猫白血病病毒；

-治疗黑色素瘤及相关肿瘤；

-伤口、烧伤、骨折的加速愈合，断裂的神经联系、跟腱和破裂的肌肉、脊髓损伤的再生；；

-治疗与NO形成相关的器质性异常：高血压，低血压，过敏反应，循环和感染性休克，凝血细胞聚集；

-治疗神经系统疾病和病症：多发性硬化，重症肌无力，红斑狼疮，神经病变，躯体感觉神经功能障碍，哮喘，鼻炎，天疱疮和湿疹；

-儿茶酚胺能功能障碍，精神分裂症，苯丙胺，药物和酒精戒断效应；

-预防和消除因皮质类固醇和NSAID引起的病症；

-治疗眼中的鳞状黄斑变性；

-作为原始疗法用于其中血液供应的快速重组是必需的所有病况；

-在兽医医学中用于动物增重以及用于增加精子的贮存稳定性。

12.根据权利要求1和2所述的十五肽盐在制备用作食品补充剂的制剂中的用途。