CN104880521A

CN104880521A - 一种判断当归是否经过硫磺熏蒸的鉴定方法

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Publication number: CN104880521A
Application number: CN201510054565.2A
Authority: CN
Inventors: 李松林; 孔铭; 白映佳; 徐金娣
Original assignee: Jiangsu Provincial Insititute of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Jiangsu Provincial Insititute of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2015-02-02
Filing date: 2015-02-02
Publication date: 2015-09-02

Abstract

本发明公开了判断当归药材是否经过硫磺熏蒸处理的方法。对当归药材进行适当提取，采用反相液相色谱-质谱联用技术进行分析，记录色谱图和质谱图。通过在正离子模式下提取离子质核比为273.08，或者在负离子模式下提取离子质核比为271.06，在提取离子流图中观察是否会出现准分子离子质核比为273/271的两个色谱峰来判断当归是否经过硫磺熏蒸。本发明与现有的判断当归药材是否经过硫磺熏蒸的检测方法相比较，具有取样量小、专属性强、样品处理简单和结果准确度高等优点，是一种灵敏和专属的鉴别方法。

Description

一种判断当归是否经过硫磺熏蒸的鉴定方法

【技术领域】

本发明涉及一种中药材及饮片优劣的鉴定技术，具体涉及利用当归硫熏加工过程中产生的特征性成分来判断当归是否经硫磺熏蒸的鉴别技术。

【背景技术】

硫磺熏蒸方法长期应用于食品、农产品及药材等产品的贮藏养护和加工过程，其主要目的是实现防腐、防霉、防虫蛀，以及有利于干燥和增色等。药材硫磺熏蒸法是部分药材加工养护的传统方法之一。然而现代研究表明，硫磺熏蒸会造成药材中二氧化硫、重金属等有害物质的残留，此外，硫磺熏蒸还会引起药材的有效成分发生转化，含量降低，从而影响药材的药效以及安全性。随着人们对硫磺熏蒸可能会影响人体健康的担忧，以及近年来硫熏药材品质和范围有所扩增，已引起了社会和国家相关部门的高度重视。2004年基于个案处理，国家食品药品监督管理局下发了《关于对中药材采用硫磺熏蒸问题的批复》相关规定。《中国药典》2005年版取消了山药、葛根等中药材的硫熏工艺。《中国药典》2008年增补本中增加了二氧化硫残留的检测。《中国药典》2010年版将二氧化硫残留量的检测列入了附录中。可见，硫磺熏蒸法已经不允许应用于中药材加工中。

当归是我国一味常用的中药材，药用历史悠久，始载于《神农本草经》，历代本草均有记载。当归具有“补血活血，调经止痛，润肠通便”的功效，为医家之常用，素有“十方九归”之称。当归鲜药材含水量高，储存过程中极易发生霉变，严重影响当归的使用和流通，因此，当归产地加工普遍使用硫磺熏蒸法以达到防霉保鲜的目的，另外，一些饮片生产企业也会使用硫磺熏蒸法来延长饮片的储存期。为此，能够快速鉴定药材是否硫磺熏蒸显得十分迫切，也是确保药材有效性与安全性的重要手段。

目前判断药材是否硫磺熏蒸的主要方式是《中国药典》2010年版附录下规定的二氧化硫残留检测，但该法仅间接测定药材表面的二氧化硫残留量，随着药材放置时间的延长，二氧化硫可挥发，形成假阴性结果，且滴定过程繁琐，重复性差，装置复杂，费时费力，在检测大量样本时显得尤为明显。此外，滴定法灵敏度低，远不及仪器分析高灵敏，快速，简便。

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题是运用现代分析检测技术，使用特定的鉴别方法，判断当归是否经过硫磺熏蒸。

本发明的基本原理为：

当归经硫磺熏蒸后，会产生新的藁本内酯含硫衍生物，这些新成分经溶剂提取后经反相液相色谱质谱联用分析，表现出比原藁本内酯类成分更短的保留时间，见图1-1、图1-2、图1-3和图1-4。

质谱数据显示，新产生的含硫衍生物在正负离子模式下均出现了特征离子，该特征离子仅在硫熏当归中能提取到，而在非硫熏当归中则无法提取到。表现为在正离子模式下硫磺熏蒸当归出现质核比为273.08的加质子准分子离子峰，在负离子模式下出现质核比为271.06的去质子准分子离子峰，见图2-1和图2-2。因此采用提取离子法，在正离子模式下提取273.08，或者在负离子模式下提取271.06，可以更为快速直观的检测出当归药材是否硫磺熏蒸。见图3-1、图3-2、图3-3和图3-4。

本发明即是通过测定这两个离子，判定当归是否经过硫磺熏蒸。

本发明技术方案：

当归药材细粉加极性溶剂提取，提取液用采用反相液相色谱-质谱联用仪测定，记录色谱图和质谱图，若在正离子模式下提取到质核比为273.08的离子，或者在负离子模式下提取到质核比为271.06的离子，则表示该当归经硫磺熏蒸；若在正离子模式下未提取到质核比为273.08的离子，且在负离子模式下未提取到质核比为271.06的离子，则表示该当归未经过硫磺熏蒸。

本发明优选了当归药材提取溶剂为水，甲醇，乙醇中的任一种。

本发明优选了提取溶剂的用量为当归药材细粉加5～400倍。

本发明优选了采用反相液相色谱-质谱联用仪测定时，质谱采用电喷雾离子化方式，扫描模式为正离子和负离子扫描。

本发明优选了采用反相液相色谱-质谱联用仪测定时，反相液相色谱方法的色谱柱填料为碳十八或碳八键合硅胶。

本发明优选了采用反相液相色谱-质谱联用仪测定时，反相液相色谱流动相为水相与甲醇有机相。

本发明进一步优选了反相液相色谱流动相中含有0-1％的甲酸或乙酸，水相的变化范围为97％-3％。

本发明与现有的判断当归药材是否经过硫磺熏蒸的检测方法相比较，具有专属性强、结果准确度高、取样量小、样品处理简单等优点，是一种灵敏、专属、快捷的鉴别方法。

【附图说明】

图1-1未硫熏当归HPLC-ESI(+)-MS色谱图

图1-2硫熏当归HPLC-ESI(+)-MS色谱图，其中1为新产生的特征成分色谱峰

图1-3未硫熏当归HPLC-ESI(-)-MS色谱图

图1-4硫熏当归HPLC-ESI(-)-MS色谱图，其中1为新产生的特征成分色谱峰

图2-1新特征成分ESI(+)质谱图

图2-2新特征成分ESI(-)质谱图

图3-1硫熏当归ESI(+)提取离子质核比为273.08的提取离子流图，其中1为新产生的特征成分色谱峰

图3-2硫熏当归ESI(-)提取离子质核比为271.06的提取离子流图，其中1为新产生的特征成分色谱峰

图3-3非硫熏当归ESI(+)提取离子质核比为273.08的提取离子流图

图3-4非硫熏当归ESI(-)提取离子质核比为271.06的提取离子流图

图4-1实施例1中非硫熏当归HPLC-ESI(+)-MS色谱图

图4-2实施例1中硫熏当归HPLC-ESI(+)-MS色谱图

图4-3实施例1中非硫熏当归ESI(+)提取离子质核比为273.08的提取离子流图

图4-4实施例1中硫熏当归ESI(+)提取离子质核比为273.08的提取离子流图，其中1为提取到的硫熏当归特征峰

图5-1实施例2中非硫熏当归HPLC-ESI(+)-MS色谱图

图5-2实施例2中硫熏当归HPLC-ESI(+)-MS色谱图

图5-3实施例2中非硫熏当归ESI(+)提取离子质核比为273.08的提取离子流图

图5-4实施例2中硫熏当归ESI(+)提取离子质核比为273.08的提取离子流图，其中1为提取到的硫熏当归特征峰

图6-1实施例3中非硫熏当归ESI(-)提取离子质核比为271.06的提取离子流图

图6-2实施例3中硫熏当归ESI(-)提取离子质核比为271.06的提取离子流图

图7-1实施例5中非硫熏当归ESI(+)提取离子质核比为273.08的提取离子流图

图7-2实施例5中硫熏当归ESI(+)提取离子质核比为273.08的提取离子流图

【具体实施实例】

实施例一：

样品制备：硫熏及非硫熏当归药材细粉0.1g，各加甲醇10ml，室温超声提取40min，提取液经0.2μm聚四氟乙烯膜过滤，进样，记录色谱图。

色谱条件：Waters ACQUTIY BEH C₁₈柱(2.1mm×100mm,1.7μm)；流动相为A:0.1％甲酸水

溶液；B:0.1％甲酸甲醇溶液，梯度洗脱(见表1)；流速为0.4ml/min；柱温为35℃；样品室

温度为10℃；进样体积为2μl。

表1流动相梯度表

质谱条件：Waters Q-TOF SYNAPT G2-S质谱仪，以氮气为雾化器和锥孔气，电喷雾离子源分别采用正、负离子(ESI⁺/ESI^-)扫描模式，毛细管电压3.0kV，锥孔电压40V，离子源温度100℃，脱溶剂气温度350℃，反向锥孔气流30l/h，脱溶剂气500l/h，碰撞(CID)能量分别设为4V和20-50V，扫描时间0.2s。

结论：非硫熏当归在正离子模式下未提取到质核比为273.08的离子(图4-1和图4-3)，且在负离子模式下未提取到质核比为271.06的离子；硫熏当归能在正离子模式下提取到质核比为273.08的离子(见图4-2、图4-4)，在负离子模式下提取到质核比为271.06的离子，表明该方法可鉴别硫熏当归。

实施例二：

样品制备：硫熏及非硫熏当归药材细粉0.1g，各加水10ml，室温超声提取40min，提取液经0.2μm聚四氟乙烯膜过滤，进样，记录色谱图。

色谱条件：同实施例一

质谱条件：同实施例一

结论：非硫熏当归在正离子模式下未提取到质核比为273.08的离子(见图5-1、图5-3)，且在负离子模式下未提取到质核比为271.06的离子；硫熏当归能在正离子模式下提取到质核比为273.08的离子(见图5-2、图5-4)，在负离子模式下提取到质核比为271.06的离子，表明该方法可鉴别硫熏当归。

实施例三：

样品制备：硫熏及非硫熏当归药材细粉0.1g，各加甲醇20ml，室温超声提取40min，提取液经0.2μm聚四氟乙烯膜过滤，进样，记录色谱图。

色谱条件：同实施例一。

质谱条件：同实施例一。

结论：非硫熏当归在正离子模式下未提取到质核比为273.08的离子，且在负离子模式下未提取到质核比为271.06的离子(见图6-1)；硫熏当归能在正离子模式下提取到质核比为273.08的离子，在负离子模式下提取到质核比为271.06的离子(见图6-2)，表明该方法可鉴别硫熏当归。

实施例四：

样品制备：硫熏及非硫熏当归药材细粉0.2g，各加甲醇50ml，加热回流提取1小时，过滤，滤液经0.2μm聚四氟乙烯膜过滤，进样，记录色谱图。

色谱条件：同实施例一

质谱条件：同实施例一

结论：硫熏当归能在正离子模式下提取到质核比为273.08的离子，在负离子模式下提取到质核比为271.06的离子；非硫熏当归在正离子模式下未提取到质核比为273.08的离子，且在负离子模式下未提取到质核比为271.06的离子，表明该方法可鉴别硫熏当归。

实施例五：

样品制备：：硫熏及非硫熏当归药材细粉0.1g，各加甲醇10ml，室温超声提取40min，提取液经0.2μm聚四氟乙烯膜过滤，进样，记录色谱图。

色谱条件：Waters ACQUTIY BEH C₁₈柱(2.1mm×100mm,1.7μm)；流动相为A:0.1％甲酸水溶液；B:0.1％甲酸甲醇溶液，梯度洗脱(见表2)；流速为0.4ml/min；柱温为35℃；样品室温度为10℃；进样体积为2μl。

表2梯度洗脱表

质谱条件：同实施例一

结论：非硫熏当归在正离子模式下未提取到质核比为273.08的离子(见图7-1)，且在负离子模式下未提取到质核比为271.06的离子；硫熏当归能在正离子模式下提取到质核比为273.08的离子(见图7-2)，在负离子模式下提取到质核比为271.06的，；表明该方法可鉴别硫熏当归。

Claims

1.一种判断当归是否经过硫磺熏蒸的鉴定方法，其特征包括以下步骤：当归药材细粉加极性溶剂提取，提取液采用反相液相色谱-质谱联用仪测定，记录色谱图和质谱图，若在正离子模式下提取到质核比为273.08离子，或者在负离子模式下提取到质核比为271.06的离子，则表示该当归经硫磺熏蒸；若在正离子模式下未提取到质核比为273.08的离子，且在负离子模式下未提取到质核比为271.06的离子，则表示该当归未经过硫磺熏蒸。

2.如权利要求1所述的一种判断当归是否采用硫磺熏蒸的鉴定方法，其特征为提取溶剂为水，甲醇，乙醇中的任一种。

3.如权利要求1所述的一种判断当归是否采用硫磺熏蒸的鉴定方法，其特征为当归药材细粉加5～500倍极性溶剂提取。

4.如权利要求1所述的一种判断当归是否采用硫磺熏蒸的鉴定方法，其特征为质谱采用电喷雾离子化方式，扫描模式为正离子和负离子扫描。

5.如权利要求1所述的一种判断当归是否采用硫磺熏蒸的鉴定方法，其特征为反相液相色谱方法的色谱柱填料为碳十八或碳八键合硅胶。

6.如权利要求1所述的一种判断当归是否采用硫磺熏蒸的鉴定方法，其特征为反相液相色谱流动相为水相与甲醇有机相。

7.如权利要求6所述的一种判断当归是否采用硫磺熏蒸的鉴定方法，其特征为反相液相色谱流动相中含有0～1％的甲酸或乙酸，水相的变化范围为97％～3％。