CN104784109B - 紫杉烷类药物的温敏缓释药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及紫杉烷类药物的温敏缓释药物组合物。具体地说，本发明一方面涉及一种药物组合物，其中包含：紫杉烷类药物、壳聚糖、β‑甘油磷酸钠、乙醇和水。进一步地，本发明涉及制备该药物组合物的方法。本发明药物组合物可用于制备抗癌的药物；特别是该抗癌药物可通过定位注射途径用于恶性肿瘤的治疗或手术后防止复发，并可与放射、中药联合使用。

Description

紫杉烷类药物的温敏缓释药物组合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种用于肿瘤/癌症治疗用药物组合物，特别涉及一种含紫杉烷类药物成分的缓释温敏药物组合物。本发明组合物可通过瘤内注射、瘤周注射等局部定位注射方式给药用于多种肿瘤的治疗，特别是对于那些药物毒性大或无法用常规化疗、放射治疗的肿瘤，可通过定位后在肿瘤局部注射给药、增加药物浓度提高疗效、减少全身毒性。

背景技术

癌症是由控制细胞生长增殖机制失常而引起的疾病。癌细胞除了可以无限增殖外，还会局部侵入周遭正常组织甚至经由体内循环系统或淋巴系统转移到身体其他部分。据世界卫生组织(World Health Organization，WHO)统计，癌症是严重危害人类生命健康的重大疾病之一，导致全球大约13%的疾病死亡。肿瘤的治疗手段主要包括手术治疗，放射性治疗和化学治疗三种。其中，化疗一直占据着主要的地位。近十余年，抗恶性肿瘤的化疗药物中，紫杉烷类化合物是最有潜力的药物之一。紫杉烷类药物的细胞毒作用是通过抑制微管解聚从而防止细胞分化，而大量实验说明微管是抗癌研究中的一个重要靶点。其中的代表性药物紫杉醇和多烯紫杉醇，在临床上是卵巢癌和乳腺癌的一线用药，并且可以与顺铂联合用药用于治疗非小细胞肺癌，此外在荷尔蒙抵抗的前列腺癌治疗中也表现出重要的作用。不同紫杉烷药物之间虽然结构，微管结合能力和药代动力学特征不同，但是却有着类似的副作用，例如剂量依赖的免疫抑制作用，随之而来的就是神经毒，黏膜炎，脱发和胃肠道反应。并且由于紫杉烷类药物在水中溶解度较低，所以市售该类药物的注射剂中多采用非离子表面活性剂进行增溶，比如在紫杉醇注射液中利用聚氧乙基代蓖麻油增溶，而多烯紫杉醇注射液中利用吐温80增溶等等，而这些溶剂通常会导致超敏反应，带来病人的极大痛苦。在对生活品质要求越来越高的今天，如何提高癌症病人的用药顺应性、降低毒副作用、提高疗效、减少化疗次数等，已成为药剂学研究的重要内容。

缓释温敏凝胶注射剂，作为一种具有独特生理学和药剂学特性的新型给药系统，具有温度敏感的形态变化、缓控释药物等理想性能。它具有以下特点(1)可以随周围环境温度变化而调整药物在体内的状态(如释放、滞留等)以适应病情及时有效治疗；(2)可局部给药，且能较长时间地和用药部位紧密接触，有较好的生物黏附性，从而提高生物利用度；(3)三维网状结构高度亲水，可将所载的药物束缚于其中或者间隙中，控制药物释放；(4)组织相容性好，使用方便，等等。配合当前飞速发展的临床影像学技术，在癌症药物的靶向、定位甚至定时递送中，可以发挥重要的作用。在肿瘤的治疗尤其是一些固体瘤的治疗中，定向给药技术包括动脉栓塞技术、瘤内给药技术等的应用越来越多，利用该技术与适当的新型制剂递药系统相结合，可以实现给药、定位、停留、释放、维持等多种状态，有利于肿瘤的治疗。

壳聚糖(chitosan)是天然阳离子多糖，具有良好生物相容性、可生物降解性、来源丰富等特点，已广泛用于药物载体和生物医学领域，而且壳聚糖/β-甘油磷酸钠(β-glycerophosphate，GP，在本发明中亦可称为甘油磷酸钠)水凝胶具有温敏性，该体系中的β-甘油磷酸盐也是公认的无毒的生物相容性物质。壳聚糖/GP可以混合成一种良好的注射用支持系统。壳聚糖与GP的混合液在室温与低温状态下为液体状态，在人体的生理温度状态与人体的pH环境下，该混合液就会变成凝胶。近年许多关于壳聚糖/GP水凝胶支持系统的研究，并大大发展该水凝胶系统在给药系统上的应用。壳聚糖是甲壳素的脱乙酰衍生物，具有良好的生物降解性和生物相容性，同时壳聚糖具有生物黏附性能，可起到控制药物释放的作用，具有独特的性质，因此被广泛地应用于药物载体的研究中。

然而以上述缓释温敏凝胶特别是以壳聚糖/甘油磷酸钠为基质制备的缓释温敏凝胶作为药物投递系统在紫杉烷类药物方面的应用仍是本领域技术人员所期待的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题之一是，提供一种以缓释温敏凝胶作为药物投递系统的紫杉烷类药物组合物，该组合物具有至少一个下列方面的优点：可用于定位给药(瘤内注射、瘤周注射等)、提高药效、减少给药次数、降低毒副作用、提高癌症病人的生活质量、贮藏使用便利(例如在遇高温胶凝后再回复到低温处时又可以以较快的速度转变成流动性良好的液态)。本发明人发现具有特定配方的紫杉烷类药物的温敏缓释药物组合物具有上述一个或多个方面的优点，并且可实现上述一个或多个方面的目的。本发明基于此发现而得以完成。

为此，本发明第一方面提供了一种药物组合物，其中包含：紫杉烷类药物、壳聚糖、β-甘油磷酸钠、乙醇和水。

根据本发明第一方面的药物组合物，其在低于或等于28℃的温度处放置1小时后呈可流动的液体。根据本发明第一方面的药物组合物，其在5～28℃的温度处放置1小时后呈可流动的液体。术语“可流动的液体”是指根据本发明流动性测定法测定并判断为可以流动的液体。

根据本发明第一方面的药物组合物，其在高于或等于33℃的温度处放置30min后呈不可流动的半固体水凝胶。根据本发明第一方面的药物组合物，其在33～42℃的温度处放置30min后呈不可流动的半固体水凝胶。术语“不可流动的半固体水凝胶”是指根据本发明流动性测定法测定并判断为不可流动的半固体水凝胶。

一般而言，本发明各种组合物在室温下例如在20±2℃的温度处放置足够长时间例如2小时以上或者例如5小时以上或者例如10小时以上或者更长例如24小时以上时，它们均可变化成可流动的液体。从而，在本发明中，流动性测定法是这样测定的：

(a)取适量测试物(例如本发明所述药物组合物，其可以是呈可流动的液体形式，亦可以是呈不可流动的半固体水凝胶形式)，使其在20±2℃的温度处放置适时(例如2小时以上或者例如5小时以上或者例如10小时以上或者更长例如24小时以上)以使其液化成呈可流动的液体；

(b)取该呈可流动的液体的测试物1g，置于10ml的具塞刻度试管底部(约占据1ml体积)，试管刻度自试管底向开口方向标注；

(c)将试管密塞，在规定的温度处静置适时以使该测试物呈现其在此温度下稳定的物理状态；

(d)接着将试管倒置，静置适时，肉眼观察测试物主体分部(即有50%以上量的测试物，可以容易的通过目测确定)是否沿着试管壁下流以判断是否可流动：

(d1)如果测试物主体分部至少下流到5ml刻度线时，则认为该测试物在步骤(c)所述规定温度处呈可流动的液体；

(d2)如果测试物主体分部至少下流不超过2ml刻度线时，则认为该测试物在步骤(c)所述规定温度处呈不可流动的半固体水凝胶。

根据本发明第一方面的药物组合物，其在用本发明流动性测定法时，在步骤(c)中，使密塞的试管在低于或等于28℃的温度处放置1小时，特别是在5～28℃的温度处放置1小时，然后再执行后续步骤并观察。一般而言，具有本发明特征的药物组合物如此测试后表明是可流动的液体。

根据本发明第一方面的药物组合物，其在用本发明流动性测定法时，在步骤(c)中，使密塞的试管在高于或等于33℃的温度处放置30min，特别是在33～42℃的温度处放置30min，然后再执行后续步骤并观察。一般而言，具有本发明特征的药物组合物如此测试后表明是不可流动的半固体水凝胶。

根据本发明上述流动性测定法，其简单地修改后还可以测定本发明药物组合物在规定温度条件下从可流动的液体变为不可流动的半固体水凝胶这一过程的胶凝时间(在本发明中可记为t1)，即：例如，在测定步骤(c)中，使组合物在规定的温度(T1)(例如高于或等于33℃的温度，特别是例如33～42℃)处静置一定的时间(t1)，直至组合物在步骤(d2)中呈现不可流动的半固体水凝胶，记录的上述时间t1即为在T1温度下的胶凝时间。

根据本发明第一方面的药物组合物，其在高于或等于33℃的温度(特别是例如在33～42℃的温度下，例如在37℃温度下)具有1～90min的胶凝时间，特别是具有5～60min的胶凝时间。

根据本发明上述流动性测定法，其简单地修改后还可以测定本发明药物组合物在规定温度条件下从不可流动的半固体水凝胶变为可流动的液体这一过程的解凝时间(在本发明中可记为t2)，即：例如，在测定步骤(c)中，先使组合物在可胶凝温度(例如高于或等于33℃的温度，特别是例如33～42℃)处静置使组合物充分胶凝(通常例如静置2小时以上即足够)，接着使组合物在规定的温度(T2)(通常是低于或等于28℃，特别是5～28℃)处静置一定的时间(t2)，直至组合物在步骤(d1)中呈现呈可流动的液体，记录的上述时间t2即为在T2温度下的解凝时间。

根据本发明第一方面的药物组合物，其在低于或等于28℃的温度(特别是例如在5～28℃的温度下，例如在20℃温度下具有5～90min的解凝时间，特别是具有10～60min的解凝时间。

根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述的紫杉烷类药物选自：紫杉醇、多烯紫杉醇、2’-羟基紫杉醇、10-去乙酰紫杉醇、7-表-紫杉醇及其组合。

根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含0.05～1%(w/v，下同)的紫杉烷类药物。根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含0.05～0.75%的紫杉烷类药物。根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含0.05～0.5%的紫杉烷类药物。

根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含0.5-5%的壳聚糖。根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含0.75-4%的壳聚糖。根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含1%-3%的壳聚糖。

根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含2-20%的β-甘油磷酸钠。根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含3-18%的β-甘油磷酸钠。根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含5-15%的β-甘油磷酸钠。

根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含0.5-10%乙醇。根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含0.75-7.5%乙醇。据本发明第一方面的药物组合物，其中包含1-5%乙醇。

根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含0.05～1%的紫杉烷类药物、0.5-5%的壳聚糖、2-20%的β-甘油磷酸钠、0.5-10%乙醇、和平衡量的水(即加至100%量的水)。

根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含0.05～0.75%的紫杉烷类药物、0.75-4%的壳聚糖、3-18%的β-甘油磷酸钠、0.75-7.5%乙醇、和平衡量的水。

根据本发明第一方面的药物组合物，其中包含0.05～0.5%的紫杉烷类药物、1%-3%的壳聚糖、5-15%的β-甘油磷酸钠、1-5%乙醇、和平衡量的水。

根据本发明第一方面的药物组合物，其中还包含有机酸或其盐。根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述有机酸是选自枸橼酸或酒石酸。根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述的有机酸的盐是其钠盐。根据本发明第一方面的药物组合物，其中还包含枸橼酸、枸橼酸钠、酒石酸、酒石酸钠。根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述有机酸或其盐与所述β-甘油磷酸钠的摩尔比为0.1～5：100，例如所述有机酸或其盐与所述β-甘油磷酸钠的摩尔比为0.2～2.5：100，例如所述有机酸或其盐与所述β-甘油磷酸钠的摩尔比为0.5～2：100。已经出人意料地发现，在本发明药物组合物中添加适量的有机酸或其盐，可以有利于获得具有本发明特征的组合物，例如该组合物在遇高温胶凝后再回复到低温处时又可以以较快的速度转变成流动性良好的液态，避免药物在偶遇高温胶凝后难以回复到有良好流动性的液体状态并造成后续用药困难例如注射给药时无法用注射器顺利取药。

根据本发明第一方面的药物组合物，其在20℃并呈液体的状态下测定，其pH值为5.5～7.5，例如其pH值为6.0～7.5，例如其pH值为6.5～7.5。为获得期待的pH值，可以在必要时向本发明组合物中添加适量的酸碱调节剂，优选的是氢氧化钠和盐酸，通常以它们的水溶液使用，其量是足以调节到目标pH值即可。

由于壳聚糖通常在偏酸性的条件下溶解效果较好，因此在配制本发明组合物时，可以先用适量偏酸性的试剂使壳聚糖溶解，优先的是盐酸水溶液例如浓度约0.1mol/L的盐酸水溶液、醋酸水溶液例如浓度约0.1mol/L的醋酸水溶液等。酸性试剂以能达到使配方用量的壳聚糖溶解的量或者稍高的量使用。但是由于本发明组合物需要调节到本文所述的目标pH值，因此这些酸性试剂最终被中和。

根据本发明第一方面的药物组合物，其是可注射使用的制剂。

根据本发明第一方面的药物组合物，其是可注射使用的无菌制剂。

根据本发明第一方面的药物组合物，其基本上是通过包括以下步骤的方法制备得到的：

a)将壳聚糖用酸性试剂的水溶液溶解制成壳聚糖溶液；

b)将紫杉烷类药物溶解于乙醇中，接着将其缓缓添加到上述壳聚糖溶液中，热压灭菌，置冰水浴中冷却至少30min、备用；

c)将β-甘油磷酸钠溶解于适量注射用水中，制成浓度为60%的溶液，过0.22μm滤膜除菌，置冰水浴中冷却至少30min、备用；

d)在冰浴中，将步骤c)所得溶液在搅拌下缓缓添加到步骤b)所得溶液中，补加水至全量，充分搅拌混合，必要时调节溶液的pH值至规定范围，密封包装，即得。

根据本发明第一方面的药物组合物，其中各步骤是在无菌条件下进行操作的。特别是，其中步骤d)是在无菌条件下进行操作的。在一个实施方案中，在步骤d)最后添加全部物料并将其搅拌均匀后，将所得药液进行0.22μm滤膜除菌。

根据本发明第一方面的药物组合物，其中步骤a)中所述酸性试剂的水溶液是浓度0.1mol/L的醋酸水溶液或者浓度0.1mol/L的盐酸水溶液。

根据本发明第一方面的药物组合物，其具有下文实施例1-8任一项所述配方。

根据本发明第一方面的药物组合物，其具有下文实施例1-8任一项所述配方和制法。

进一步地，本发明第二方面提供了制备药物组合物的方法，所述药物组合物中包含：紫杉烷类药物、壳聚糖、β-甘油磷酸钠、乙醇和水；所述方法包括以下步骤：

a)将壳聚糖用酸性试剂的水溶液溶解制成壳聚糖溶液；

b)将紫杉烷类药物溶解于乙醇中，接着将其缓缓添加到上述壳聚糖溶液中，热压灭菌，置冰水浴中冷却至少30min、备用；

c)将β-甘油磷酸钠溶解于适量注射用水中，制成浓度为60%的溶液，过0.22μm滤膜除菌，置冰水浴中冷却至少30min、备用；

d)在冰浴中，将步骤c)所得溶液在搅拌下缓缓添加到步骤b)所得溶液中，补加水至全量，充分搅拌混合，必要时调节溶液的pH值至规定范围，密封包装，即得。

根据本发明第二方面的方法，其中步骤a)中溶解所述壳聚糖的所述酸性试剂的水溶液是浓度0.1mol/L的醋酸水溶液或者浓度0.1mol/L的盐酸水溶液。酸性试剂以能达到使配方用量的壳聚糖溶解的量或者稍高的量使用。但是由于本发明组合物需要调节到本文所述的目标pH值，因此这些酸性试剂最终被中和。

根据本发明第二方面的方法，其中各步骤是在无菌条件下进行操作的。特别是，其中步骤d)是在无菌条件下进行操作的。在一个实施方案中，在步骤d)最后添加全部物料并将其搅拌均匀后，将所得药液进行0.22μm滤膜除菌。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物是可注射使用的制剂。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物是可注射使用的无菌制剂。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物在低于或等于30℃的温度处放置1小时后呈可流动的液体。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物在5～30℃的温度处放置1小时后呈可流动的液体。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物在高于或等于35℃的温度处放置30min后呈不可流动的半固体水凝胶。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物在35～42℃的温度处放置30min后呈不可流动的半固体水凝胶。

根据本发明第二方面的方法，其中所述的紫杉烷类药物选自：紫杉醇、多烯紫杉醇、2’-羟基紫杉醇、10-去乙酰紫杉醇、7-表-紫杉醇及其组合。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含0.05～1%(w/v，下同)的紫杉烷类药物。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含0.05～0.6%的紫杉烷类药物。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含0.05～0.5%的紫杉烷类药物。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含0.5-5%的壳聚糖。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含0.75-4%的壳聚糖。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含1%-3%的壳聚糖。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含2-20%的β-甘油磷酸钠。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含3-18%的β-甘油磷酸钠。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含5-15%的β-甘油磷酸钠。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含0.5-10%乙醇。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含0.75-7.5%乙醇。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含1-5%乙醇。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含0.05～1%的紫杉烷类药物、0.5-5%的壳聚糖、2-20%的β-甘油磷酸钠、0.5-10%乙醇、和平衡量的水(即加至100%量的水)。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含0.05～0.6%的紫杉烷类药物、0.75-4%的壳聚糖、3-18%的β-甘油磷酸钠、0.75-7.5%乙醇、和平衡量的水。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中包含0.05～0.5%的紫杉烷类药物、1%-3%的壳聚糖、5-15%的β-甘油磷酸钠、1-5%乙醇、和平衡量的水。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中还包含有机酸或其盐。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中所述有机酸是选自枸橼酸或酒石酸。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中所述的有机酸的盐是其钠盐。根据本发明第一方面的药物组合物，其中还包含枸橼酸、枸橼酸钠、酒石酸、酒石酸钠。根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物中所述有机酸或其盐与所述β-甘油磷酸钠的摩尔比为0.1～5：100，例如所述有机酸或其盐与所述β-甘油磷酸钠的摩尔比为0.2～2.5：100，例如所述有机酸或其盐与所述β-甘油磷酸钠的摩尔比为0.5～2：100。已经出人意料地发现，在本发明药物组合物中添加适量的有机酸或其盐，可以有利于获得具有本发明特征的组合物，例如该组合物在遇高温胶凝后再回复到低温处时又可以以较快的速度转变成流动性良好的液态，避免药物在偶遇高温胶凝后难以回复到有良好流动性的液体状态并造成后续用药困难例如注射给药时无法用注射器顺利取药。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物在25℃并呈液体的状态下测定，其pH值为5.5～7.5，例如其pH值为6.0～7.5。为获得期待的pH值，可以在必要时向本发明组合物中添加适量的酸碱调节剂，优选的是氢氧化钠和盐酸，通常以它们的水溶液使用，其量是足以调节到目标pH值即可。

根据本发明第二方面的方法，其所制得的药物组合物具有本发明第一方面任一实施方案的特征。

再进一步地，本发明第三方面提供了本发明第一方面任一实施方案的药物组合物或者本发明第二方面任一项所述方法制备得到的药物组合物在制备抗癌的药物中的用途。

根据本发明第三方面的用途，其中所述抗癌药物定位注射途径用于恶性肿瘤的治疗或手术后防止复发，并可与放射、中药联合使用。

根据本发明第三方面的用途，其中所述抗癌药物是通过肿瘤定位注射给药的方式施用的。在一个实施方案中，所述肿瘤定位注射给药的方式选自：瘤内注射、瘤周注射、皮下注射、腔内(腹腔，胸腔及椎管内)注射、选择性动脉注射、淋巴结内及骨髓内注射等。

根据本发明第三方面的用途，其中所述恶性肿瘤是实体肿瘤。所述实体肿瘤例如但不限于卵巢癌、胃癌、肝癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、肾癌、非小细胞肺癌、头颈癌、食管癌、宫颈癌、结肠直肠癌、皮肤癌、黑色素癌或其它表皮癌及癌性溃疡等。

根据本发明第三方面的用途，其中所述药物用于瘤内注射治疗卵巢癌，胃癌，肝癌，前列腺癌，胰腺癌，乳腺癌，肾癌，非小细胞肺癌，头颈癌，食管癌，宫颈癌及癌性溃疡或手术后防止复发；可与放射、中药联合使用。

根据本发明第三方面的用途，其中所述药物用于瘤周注射治疗卵巢癌，乳腺癌，非小细胞肺癌，胃癌，肝癌，前列腺癌，胰腺癌或手术后防止复发；可与放射、中药联合使用。

根据本发明第三方面的用途，其中所述药物用于腹腔注射治疗卵巢癌，胃癌，肝癌，前列腺癌，胰腺癌，肾癌，腹腔恶性淋巴瘤，宫颈癌，结肠直肠癌或手术后防止复发；可与放射、中药联合使用。

根据本发明第三方面的用途，其中所述药物用于表皮外用及皮下注射治疗皮肤癌、黑色素癌或其它表皮癌或手术后防止复发；可与放射、中药联合使用。

本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

总体而言，本发明涉及一种含紫杉烷类药物的缓释温敏凝胶的设计和制备，及其应用。尤其是以紫杉醇、多烯紫杉醇等常用抗肿瘤药作为主药，通过调整壳聚糖、β-甘油磷酸钠及类似辅料的种类和用量，制备温度敏感的凝胶制剂，使之在室温下为可流动性液体，而在生理温度下可转变成可生物降解吸收的半固体凝胶，实现药物的缓慢释放；从而通过瘤内注射、皮下注射等局部定位注射方式给药用于多种肿瘤的治疗。本发明所制备的紫杉烷类药物缓释凝胶，凝胶化温度为33-42℃，可实现室温流体、体温半固体的转变；体外释放试验表明，该凝胶可缓慢释放，20天的累积释放率约为80%；体内药动学试验表明，该凝胶在肿瘤组织的驻留时间较长，并持续缓慢释放，21天时仍在有效浓度之上；药效学试验结果显示，该凝胶能够有效抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长；与平行给药的普通溶液剂的对比显示，该凝胶制剂能够提高疗效，降低整体的毒性反应，在肿瘤的治疗上具有明显的优势。

另外，需要特别关注的是药用的临床适用性，因此药物在制备之后的贮藏、运输过程中有可能偶尔曝露于高温下，例如高达35℃的温度下，而此短时间的曝露于高温会使得原本呈液态的药物制剂胶凝形成不可流动的半固体。本发明人出人意料地发现，向本发明组合物中添加适量特定的有机酸或其盐时，可以使得因曝露于高温而胶凝并呈现为不可流动的组合物，再次在较低温度下处置时，可以在较短的时间内重新形成可自由流动的液体，这对于注射给药而言是极有价值的，因此临床医护人员无法通过注射途径给患者施用不可流动的半固凝胶，而只有容易回复至可自由流动的液体才是极具临床价值的。

在本发明组合物中，尤其是以紫杉醇、多烯紫杉醇等常用抗肿瘤药作为主药，通过调整壳聚糖、β-甘油磷酸钠及类似辅料的种类和用量，制备温度敏感的凝胶制剂，使之在室温下为可流动性液体，而在生理温度下可转变成半固体凝胶，实现药物的缓慢释放；从而通过瘤内注射、瘤周注射等局部定位注射方式给药用于多种肿瘤的治疗。属于制剂新技术及肿瘤治疗技术领域。本发明的新型制剂，有独特的温度敏感性能和优良的物理化学稳定性，具有药物缓释性能，荷瘤小鼠实验表明，该制剂具有良好的抗肿瘤作用。

紫杉醇是本发明紫杉烷类药物的典型代表，其分子式为C47H51NO14，分子量853.9，具有如下化学结构式

本发明人总体上提供了一种紫杉烷类药物的新型温度敏感型制剂，其同时具备缓释性能以及温度敏感性能(即在本发明中可称它们为缓释温敏凝胶注射剂)，通过定位给药(瘤内注射、瘤周注射等)，用于各种肝癌、胰腺癌等恶性肿瘤的治疗，以期能实现提高药效、减少给药次数、降低毒副作用、提高癌症病人的生活质量等目的。

本发明缓释温敏凝胶注射剂由具有良好的生物相容性和生物可降解性的壳聚糖作为主要载体材料，与其它相应辅料制备而成。该水凝胶在室温条件下为液态，在33-42摄氏度时可变为不流动的半固体水凝胶。体外释放试验结果表明，这种温敏凝胶对抗癌药物有很好的缓控释效果。该凝胶注射后能有效覆盖肿瘤，形成的半固体药库能有效延长药物释放时间使其维持在药物有效浓度。该缓释温敏水凝胶不但有制备简单，载药量高，稳定性好的优点，还可原位注射并在体内降解。经过体内药动学试验的验证，该凝胶在肿瘤组织的驻留时间较长，并持续缓慢释放，21天时仍在有效浓度之上；药效学试验结果也显示，该凝胶能够有效抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长；与平行给药的普通溶液剂的对比显示，该凝胶制剂能够提高疗效，降低整体的毒性反应，在肿瘤的治疗上具有明显的优势。

附图说明

图1显示了各组小鼠体重变化图。

图2显示了各组小鼠肿瘤相对体积变化图。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。在本发明上下文中，Cit表示枸橼酸，Cit-Na表示枸橼酸钠，Tar表示酒石酸，Tar-Na表示酒石酸钠；在下面各实例中，表示它们的量时，是以其相对于甘油磷酸钠的摩尔比表示的，例如Cit用量为1/100表示Cit：甘油磷酸钠=1：100(mol/mol)。在本发明下面的实例中，当需要调节药液的pH值(20℃条件下测定值)时，使用0.1mol/L盐酸溶液或者0.1mol/L氢氧化钠溶液按制剂配制领域技术人员公知的经验调节至规定值。

A、实施例部分

实施例1：制备本发明药物组合物

配方

紫杉醇	0.2g
		壳聚糖	2g
β-甘油磷酸钠	10g
		乙醇	2.5g
Cit	1/100
		水	适量，加至100g
最终药液pH值	7.0

制备：以配制无菌制剂的条件，照以下步骤配制：

a)将壳聚糖用酸性试剂的水溶液(0.1M醋酸)溶解制成2.5%壳聚糖溶液；

b)将紫杉烷类药物溶解于乙醇中，接着将其缓缓添加到上述壳聚糖溶液中，热压灭菌，置冰水浴中冷却至少30min、备用；

c)将β-甘油磷酸钠溶解于适量注射用水中，制成浓度为60%的溶液，过0.22μm滤膜除菌，置冰水浴中冷却至少30min、备用；

d)在冰浴中，将步骤c)所得溶液在搅拌下缓缓添加到步骤b)所得溶液中，补加水至全量，充分搅拌混合，必要时调节溶液的pH值至规定范围，密封包装，即得。

流动性测定法测定结果：胶凝时间(t1，37℃)=18min，解凝时间(t2，20℃)=43min。

实施例2：制备本发明药物组合物

配方：

紫杉醇	0.05g
		壳聚糖	3g
β-甘油磷酸钠	5g
		乙醇	5g
Cit	0.5/100
		水	适量，加至100g
最终药液pH值	6.5

制备：参照实施例1的方法进行，步骤a)中使用0.1M盐酸溶解壳聚糖。

流动性测定法测定结果：胶凝时间(t1，37℃)=7min，解凝时间(t2，20℃)=56min。

实施例3：制备本发明药物组合物

配方：

紫杉醇	0.5g
		壳聚糖	1g
β-甘油磷酸钠	15g
		乙醇	1g
Cit	2/100
		水	适量，加至100g
最终药液pH值	7.5

制备：参照实施例1的方法进行。

流动性测定法测定结果：胶凝时间(t1，37℃)=57min，解凝时间(t2，20℃)=12min。

实施例4：制备本发明药物组合物

配方：

多烯紫杉醇	0.75g
		壳聚糖	0.75g
β-甘油磷酸钠	18g
		乙醇	0.75g
Cit-Na	0.75/100
		水	适量，加至100g
最终药液pH值	6.9

制备：参照实施例1的方法进行，步骤a)中使用0.1M盐酸溶解壳聚糖。

流动性测定法测定结果：胶凝时间(t1，37℃)=35min，解凝时间(t2，20℃)=23min。

实施例5：制备本发明药物组合物

配方：

多烯紫杉醇	0.05g
		壳聚糖	4g
β-甘油磷酸钠	3g
		乙醇	7.5g
Tar	1.5/100
		水	适量，加至100g
最终药液pH值	7.3

制备：参照实施例1的方法进行。

流动性测定法测定结果：胶凝时间(t1，37℃)=45min，解凝时间(t2，20℃)=33min。

实施例6：制备本发明药物组合物

配方

2’-羟基紫杉醇	0.2g
		壳聚糖	2g
β-甘油磷酸钠	8g
		乙醇	2.5g
Tar-Na	1.2/100
		水	适量，加至100g
最终药液pH值	6.0

制备：参照实施例1的方法进行。

流动性测定法测定结果：胶凝时间(t1，37℃)=28min，解凝时间(t2，20℃)=36min。

实施例7：制备本发明药物组合物

配方

10-去乙酰紫杉醇	0.2g
		壳聚糖	2g
β-甘油磷酸钠	8g

乙醇	2.5g
		Tar-Na	1.2/100
水	适量，加至100g
		最终药液pH值	6.0

制备：参照实施例1的方法进行。

流动性测定法测定结果：胶凝时间(t1，37℃)=14min，解凝时间(t2，20℃)=24min。

实施例8：制备本发明药物组合物

配方

7-表-紫杉醇	0.2g
		壳聚糖	2g
β-甘油磷酸钠	8g
		乙醇	2.5g
Tar-Na	1.2/100
		水	适量，加至100g
最终药液pH值	6.0

制备：参照实施例1的方法进行。

流动性测定法测定结果：胶凝时间(t1，37℃)=26min，解凝时间(t2，20℃)=42min。

另外，本发明上述实施例1～实施例8所提供的组合物在33～42℃温度范围内测定(分别在33℃、35℃、39℃、42℃下测定)的胶凝时间均在5～60min范围内；这些组合物在5～28℃温度范围内测定(分别在5℃、10℃、15℃、28℃下测定)的胶凝时间均在12～60min范围内。可见，本发明实施例1～实施例8所提供的组合物具有良好的胶凝-解凝性能。

实施例11：制备药物组合物

配方和制法参照实施例1，不同的是将其中的有机酸Cit改为以下不同用量，得到以下各配方/样品：

样品C111	C112	C113	C114	C115	C116	C117	C118	C119
									Cit*0	0.05%	0.2%	0.5%	1.5%	2%	3%	4%	5%

*Cit用量是相对于β-甘油磷酸钠的摩尔百分比，下同。

结果：C111、C112、C113三个Cit用量低于/等于0.2%的试样，尽管它们的胶凝时间(t1，37℃)均在5～60min的范围内；但是，它们的解凝时间(t2，20℃)均在180min以上，特别是C111不加Cit的试样的解凝时间(t2，20℃)达14小时以上，这在临床上是不可接受的。C114、C115、C116三个Cit用量为0.5～2%的试样，它们的胶凝时间(t1，37℃)均在5～60min的范围内，解凝时间(t2，20℃)均在10～60min的范围内。但是对于C117、C118、C119三个Cit用量为过高的试样，尽管它们的解凝时间(t2，20℃)均在10～60min的范围内，但是完全出人意料的是胶凝时间过长，胶凝时间(t1，37℃)达230min以上，显示添加过多Cit会降低产品的胶凝效果。

参照以上实施例11，但是将活性成分改为多烯紫杉醇，结果显示在解凝时间(t2，20℃)和胶凝时间(t1，37℃)方面呈现与C111～C119各样品相同的结果。

另外，照以上实施例1的方法，但是改用其它有机酸代替Cit，结果未发现有其它有机酸能够获得低于60min的解凝时间(t2，20℃)的效果，例如使用醋酸、乳酸等均无法达到此效果。

实施例12：制备药物组合物

配方和制法参照实施例1，不同的是将其中的有机酸Cit改为Cit-Na，并且使用以下不同用量，得到以下各配方/样品：

样品	C121	C122	C123	C124	C125	C126	C127	C128	C129
										Cit-Na	0	0.05%	0.2%	0.5%	1.5%	2%	3%	4%	5%

结果：C121、C122、C123三个Cit-Na用量低于/等于0.2%的试样，尽管它们的胶凝时间(t1，37℃)均在5～60min的范围内；但是，它们的解凝时间(t2，20℃)均在160min以上，特别是C121不加Cit-Na的试样的解凝时间(t2，20℃)达12小时以上，这在临床上是不可接受的。C124、C125、C126三个Cit-Na用量为0.5～2%的试样，它们的胶凝时间(t1，37℃)均在5～60min的范围内，解凝时间(t2，20℃)均在10～60min的范围内。但是对于C127、C128、C129三个Cit-Na用量为过高的试样，尽管它们的解凝时间(t2，20℃)均在10～60min的范围内，但是完全出人意料的是胶凝时间过长，胶凝时间(t1，37℃)达205min以上，显示添加过多Cit-Na会降低产品的胶凝效果。

实施例13：制备药物组合物

配方和制法参照实施例1，不同的是将其中的有机酸Cit改为Tar，并且使用以下不同用量，得到以下各配方/样品：

样品	C131	C132	C133	C134	C135	C136	C137	C138	C139
										Tar	0	0.05%	0.2%	0.5%	1.5%	2%	3%	4%	5%

结果：C131、C132、C133三个Tar用量低于/等于0.2%的试样，尽管它们的胶凝时间(t1，37℃)均在5～60min的范围内；但是，它们的解凝时间(t2，20℃)均在195min以上，特别是C131不加Tar的试样的解凝时间(t2，20℃)达16小时以上，这在临床上是不可接受的。C134、C135、C136三个Tar用量为0.5～2%的试样，它们的胶凝时间(t1，37℃)均在5～60min的范围内，解凝时间(t2，20℃)均在10～60min的范围内。但是对于C137、C138、C139三个Tar用量为过高的试样，尽管它们的解凝时间(t2，20℃)均在10～60min的范围内，但是完全出人意料的是胶凝时间过长，胶凝时间(t1，37℃)达190min以上，显示添加过多Tar会降低产品的胶凝效果。

参照以上实施例13，但是将Tar改为Tar-Na，结果显示在解凝时间(t2，20℃)和胶凝时间(t1，37℃)方面呈现与C131～C139各样品相同的结果。

B、试验例部分

试验例1：缓释效果考察

荷瘤(S180肉瘤)小鼠(n=10)瘤内注射(25mg/kg)含有紫杉醇的实施例1所得组合物，30天后仍可在血浆中检测到紫杉醇(>15ng/ml)。而同剂量的普通的市售紫杉醇注射液(安素泰)在给药2天后血浆内便无法检测(<1ng/L)。说明该凝胶明显延长了紫杉醇的在体内的释放，并且其体内释放与体外释放结果(参考CN102399377A说明书实施例2所述体外释药实验方法测定)相一致。

试验例2

荷瘤(S180肉瘤)小鼠(n=10)瘤内注射(25mg/kg)含有多烯紫杉醇的实施例4所得组合物，21天后仍可在血浆中检测到多烯紫杉醇(>15ng/ml)，而同剂量的普通多烯紫杉醇注射液(泰索帝)在给药2天后血浆内便无法检测(<1ng/L)。说明该凝胶明显延长了多烯紫杉醇的在体内的释放，并且其体内释放与体外释放结果(参考CN102399377A说明书实施例2所述体外释药实验方法测定)相一致。

试验例3

以昆明种雄性ICR小白鼠为试验对象，将2×10⁶个H22肿瘤细胞皮下注射于其右侧背部，待肿瘤生长至200-300mm³，将小鼠分为五组(表1)，除生理盐水组注射生理盐水，其他组都按20mg/kg给药。多烯紫杉醇注射液为泰索帝，多烯紫杉醇凝胶为实施例4所得组合物，空白凝胶参考实施例4制备但不加药物。

表1：分组及给药方式

组别	给药方式
		a组(空白组)	接种后d7瘤内注射生理盐水
b组(空白凝胶i.t.)	接种后d7瘤内注射空白凝胶
		c组(多烯紫杉醇iv)	接种后d7静脉注射多烯紫杉醇注射液
d组(多烯紫杉醇it)	接种后d7瘤内注射多烯紫杉醇注射液
		e组(多烯紫杉醇凝胶it)	接种后d7瘤内注射多烯紫杉醇凝胶

给药后每日观察裸鼠的活动、进食情况，每3天测量小鼠体重以及肿瘤体积。结果表明，多烯紫杉醇凝胶可显著抑制肿瘤生长并且基本没有毒性。各组小鼠体重及肿瘤体积变化情况如图1、2所示。

图1显示了各组小鼠体重变化图，表明各组之间体重变化趋势基本一致；图中各曲线分别表示：a)生理盐水组，b)空白凝胶组，c)静脉注射多烯紫杉醇注射液组，d)瘤内注射多烯紫杉醇注射液组，e)瘤内注射多烯紫杉醇凝胶组。

图2显示了各组小鼠肿瘤相对体积变化图，表明瘤内注射本发明多烯紫杉醇凝胶组动物的肿瘤增长速度明显比其它组动物缓慢。图中各曲线分别表示：a)生理盐水组，b)空白凝胶组，c)静脉注射多烯紫杉醇注射液组，d)瘤内注射多烯紫杉醇注射液组，e)瘤内注射多烯紫杉醇凝胶组。

Claims (13)

1.一种药物组合物，其组成为：0.05~0.75%的紫杉烷类药物、0.75-4%的壳聚糖、3-18%的β-甘油磷酸钠、0.75-7.5%乙醇、有机酸或其盐、和平衡量的水；所述有机酸选自枸橼酸或酒石酸，所述有机酸或其盐与所述β-甘油磷酸钠的摩尔比为0.5~2：100。

2.根据权利要求1的药物组合物，其在5~28℃的温度处放置1小时后呈可流动的液体。

3.根据权利要求1的药物组合物，其在33~42℃的温度处放置30min后呈不可流动的半固体水凝胶。

4.根据权利要求1的药物组合物，其在37℃温度下具有5~60min的胶凝时间。

5.根据权利要求1的药物组合物，其在20℃温度下具有10~60min的解凝时间。

6.根据权利要求1的药物组合物，其中所述的紫杉烷类药物选自：紫杉醇、多烯紫杉醇、2’-羟基紫杉醇、10-去乙酰紫杉醇、7-表-紫杉醇及其组合。

7.根据权利要求1的药物组合物，其在20℃并呈液体的状态下测定，其pH值为6.0~7.5。

8.根据权利要求1的药物组合物，其在20℃并呈液体的状态下测定，其pH值为6.5~7.5。

9.根据权利要求1的药物组合物，其是可注射使用的无菌制剂。

10.权利要求1-9任一项的药物组合物在制备抗癌的药物中的用途。

11.权利要求10的用途，所述抗癌药物定位注射途径用于恶性肿瘤的治疗或手术后防止复发。

12.权利要求11的用途，所述肿瘤定位注射给药的方式选自：瘤内注射、瘤周注射、皮下注射、腔内注射、选择性动脉注射、淋巴结内及骨髓内注射。

13.权利要求11的用途，所述恶性肿瘤选自：卵巢癌、胃癌、肝癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、肾癌、非小细胞肺癌、头颈癌、食管癌、宫颈癌、结肠直肠癌、皮肤癌、黑色素癌。