CN104726507A - 一种醛酮还原酶在催化生成(r)-4-氯-3羟基丁酸乙酯中的应用 - Google Patents
一种醛酮还原酶在催化生成(r)-4-氯-3羟基丁酸乙酯中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种醛酮还原酶在催化生成(R)-4-氯-3羟基丁酸乙酯中的应用。即以氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的醛酮还原酶为催化剂，以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物，以NADPH为辅因子，不对称还原制备(R)-4-氯-3羟基丁酸乙酯。本发明首次将氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的醛酮还原酶应用于4-氯乙酰乙酸乙酯不对称还原制备(R)-4-氯-3羟基丁酸乙酯中，取得很好的效果，其酶活高达8.1U/mg，在其对底物的转化率高达99.8%、产物的对映体过量值大于99％，且产量高，大大降低了生产成本。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种醛酮还原酶的应用，尤其涉及一种醛酮还原酶(aldo–keto reductase)在以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物不对称还原反应生产(R)-4-氯-3羟基丁酸乙酯中的应用。
背景技术
(R)-4-氯-3羟基丁酸乙酯（Ethyl 4-chloro-3-hydroxybutanoate， (R)-CHBE）是合成许多药物化合物的重要手性中间体，可用于多种活性药物的合成，如(-)-大内酰亚胺A((-)-macrolactin A) [1]、L-肉碱(L-carnitine) [2]、阿伐他汀钙[3]、R-Y-氨基-β-羟基丁酸(GABOB) [4]的关键手性中间体。
以4-氯乙酰乙酸乙酯(4-chloroacetoacetate Ethyl COBE)作为还原反应的潜手性底物，易于合成且价格低廉，以其为底物进行不对称还原反应获取(R)-CHBE是非常经济有效的制备途径。
迄今为止关于COBE不对称还原制备手性CHBE已有很多的研究报道。制备方法主要有化学法和生物法。
化学法以手性催化剂,如2,2’-二联苯磷基-1,1’-联萘钌配合物作为不对称还原催化剂,通过高温高压,达到还原的目的, 对映体过量(e.e.)值可达到97%。这一方法应用较多,但是缺点也是显而易见的：使用高压的氢,对反应器要求较高,而且所用的催化剂价格昂贵且不易获得,因此成本较高制约了其发展。
微生物法分为酶催化和全细胞催化法，全细胞法又分为采用野生酵母和基因工程菌催化COBE生成(R)-CHBE两种。生物催化因其反应条件温和,立体选择性强,反应速度快,在合成此类手性化合物中有很大的优势。许多微生物都能还原COBE,但绝大多数微生物的还原产物是S构型的,只有少数微生物能获得R型还原产物,如赭色掷孢酵母(Sporobolomyces salmonicolor) 、麦芽糖假丝酵母(Candida maltosa) 、卡斯太拉德巴利酵母(Debaryomyces castellii)及掷孢圆酵母(Torulaspora nagoyaensis)等，但其催化产物的手性选择性即对映体过量(e.e) 值只有8%～63%[5,6]。除此之外，筛选到高立体选择性的优良微生物菌株非常困难，所以近来的研究着重集中在使用基因工程手段，运用重组大肠杆菌不对称合成具有高光学纯度的(R)-CHBE。例如shimizu等人[7]用同时表达乙醛还原酶和葡萄糖脱氢酶的重组大肠杆菌细胞作为催化剂,使(R)-CHBE的摩尔转化率达到62.5%,对映体过量e.e.值达到95%。Hiroaki Yamamoto等[8]则将来自于Candida parapsilosis的醇脱氢酶基因在大肠杆菌E.coli W3110中表达，重组菌在水相体系中催化COBE不对称还原(辅底物为2-丙醇),得到产物(R)-CHBE，对映体过量（e.e.）值为99%。 公开号为CN 103160547 A的中国专利利用白色念珠菌来源的醇脱氢酶CADH转化50g/L的COBE，得率为93%。公开号为CN 102618513的中国专利利用羰基还原酶CgKR1转化2mol/L(329.2g/L)的COBE，收率为91%，产物光学纯度e.e.%为97%。
综上所述，现有催化COBE为(R)-CHBE的技术普遍存在底物得率低、产物光学活性低、成本高等问题。
本专利中涉及到的还原酶是醛酮还原酶，包含295个氨基酸，其在Genbank中的收录号为XP_719854.1 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/XP_719854.1)，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。编码该蛋白的基因含有888 个碱基对，其在Genbank中的收录号为XM_714761，(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/XM_714761)其基因序列如SEQ ID NO：1所示。至今未发现该醛酮还原酶用于COBE不对称还原制备(R)-CHBE的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种醛酮还原酶在COBE不对称还原制备(R)-CHBE中的应用。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的醛酮还原酶在4-氯乙酰乙酸乙酯（COBE）不对称还原制备(R)-4-氯-3羟基丁酸乙酯((R)-CHBE)中的应用。
即以氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的醛酮还原酶为催化剂，以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（还原型辅酶II，NADPH）为辅因子，不对称还原制备(R)-4-氯-3羟基丁酸乙酯。
编码所述醛酮还原酶的核酸序列如SEQ ID NO：1所示。
一种重组表达载体，包含上述技术方案所述核酸的重组表达载体。
一种重组大肠杆菌，包含上述技术方案所述重组表达载体。
一种重组醛酮还原酶的制备方法，包括如下步骤：培养上述技术方案所述重组大肠杆菌，从培养物中获得重组醛酮还原酶。
具体反应是将表达基因序列如SEQ ID NO：1所示的重组菌，100g/L~350g/L的4-氯乙酰乙酸乙酯，200g/L~600g/L的葡萄糖，20KU/L~60KU/L的葡萄糖脱氢酶（glucose dehydrogenase，GDH），在pH6.5~7.5、恒温摇床25~30℃、180~220rpm条件下，反应12~30h，得到(R)-4-氯-3羟基丁酸乙酯。该反应无需额外添加氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（氧化型辅酶II，NADP），只需要利用重组菌粗酶液中含有的辅酶NADP即可， NADP和GDH生成NADPH供不对称还原使用，且使反应得以循环进行，极大地减少了生产成本。
本发明的应用运用现代生物信息学工具，结合分子生物学技术，采用基因工程的手段从白色念珠菌 Candida albicans克隆醛酮还原酶的基因，在大肠杆菌中表达后发现其在水相中能够高效的催化COBE为(R)-CHBE，且e.e.值>99%。同时，通过在水相和水/有机相中反应、分批添加底物COBE等方式，解除了底物和产物对细胞和酶的抑制作用，显著的提高了转化效果。通过对醛酮还原酶的基因进行重组表达，获得了具有新型催化功能的酶蛋白，开发了该条基因的新功能——催化非天然底物COBE为高立体选择性的(R)-CHBE。
有益效果：本发明首次将氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的醛酮还原酶应用于COBE不对称还原制备(R)-CHBE中，取得很好的效果，其酶活高达8.1U/mg。氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的醛酮还原酶对底物COBE的得率高（大于99%）、产物CHBE的光学活性高（e.e.值为>99％），且产量高，大大降低了生产成本。
附图说明：
图1 为醛酮还原酶基因的构建图。
图2 为实施例5中反应结束后测定体系中COBE和CHBE的谱图。
图3 为实施例5中反应结束后测定体系中(S)- CHBE和(R)-CHBE的谱图。
具体实施方式：
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1：重组大肠杆菌E.coli Rosetta(pET-22b-CAK)的构建
1、醛酮还原酶基因的获取
白色念珠菌 Candida albicans（购于 Centraalbureauvoor Schimmelcultures (CBS) Fungal Biodiversiry Centre），培养基YPD（g·L-1）：酵母提取物10，蛋白胨20，葡萄糖20，补蒸馏水至1L。
将白色念珠菌 Candida albicans接种于5mL YPD液体培养基中30℃培养至对数生长期，使用基因组DNA提取试剂盒（北京天为生物工程有限公司酵母基因组提取试剂盒，GD2415 Yeast gDNA Kit）提取基因组。
从基因组中扩增目的片段所用的引物加设酶切位点，引物序列如下：
上游引物(含NdeI)为：5'- GGAATTCCATATGCCAGCTCAATTGCA-3'
下游引物(含NcoI)为：5'- CATGCCATGGTTAATCATCAAAGTTGTTGA-3'
所有引物均南京金斯瑞公司合成。
基因的PCR条件：
94 ℃变性7 min，按如下参数循环30次：94 ℃变性1 min，60 ℃退火50 s，72 ℃延伸1 min。最后72 ℃延伸10 min。
2、表达载体的构建及重组大肠杆菌的构建
用Nde I 及NcoI分别酶切pET-22b （pET-22b购于Novagen(默克中国)）及所扩增含有两个酶切位点的目的基因，分别胶回收已双酶切的目的片段和表达载体，将已双酶切的表达载体pET-22b与目的基因用T4连接酶进行连接过夜， 将5 uL的连接产物pET-22b-CAK加入100uL的Rosetta(DE3)感受态细胞中，冰上放置20 min，42 ℃热激90 sec。冰上放置2min。加入预热的0.45mL LB。150 rpm 37℃ 1h。将200 uL菌液加入分别含有100 μg/mL的氨苄青霉素和34μg/mL氯霉素的LB平板上，37℃过夜培养12-16h，得到重组菌E.coli Rosseta（含pET-22b-CAK）。构建图谱见图1。
实施例2：醛酮还原酶的表达及粗酶液的制备
挑取重组菌E.coli Rosseta（pET-22b-CAK）及出发大肠杆菌Rosseta（DE3）至含100μg/mL氨苄青霉素和34μg/mL氯霉素的LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜。然后按2 %接种量分别接种到含100μg/mL氨苄青霉素和34μg/mL氯霉素的LB新鲜培养基中，37 ℃培养至OD600约为0.6时，加入IPTG至终浓度0.8 mmol·L-1，25℃，200rpm，诱导表达10 h后，低温离心(4℃，5000rpm，15min)，菌泥用100mM磷酸纳缓冲(pH7.0)重悬，超声破碎细胞(功率300W，超声2s，间歇1s，共5min)，低温离心(4℃，12000rpm，15min)，上清液即为醛酮还原酶粗酶液。
实施例3：醛酮还原酶酶活测定
酶反应体系包括100mM 磷酸钠缓冲液(pH7.0)，5mM NADPH，20mM COBE，于30℃，340nm处测定吸光值的下降变化。酶活定义为每分钟内氧化1μmol NADPH所需要的酶量为一个酶活单位U。蛋白浓度采用Brandford法进行测定。结果显示，重组菌E.coli Rosseta（pET22b-CAK）的比酶活为8.1U/mg protein。
实施例4：产物的检测方法
对于水相反应：反应结束后， 8000 rpm离心10 min分离有机层和水层。小心吸取上层乙酸乙酯过有机滤膜，加入内标，保存测样。
对于水/有机两相反应：反应结束后8000 rpm离心10 min分离有机层和水层。小心吸取上层乙酸乙酯过有机滤膜，保存测样。
检测产物旋光性的样品处理（乙酰化）：取5-10 ul 样品，加入乙酸酐0.2 mL，无水吡啶0.1mL，密闭条件下沸水浴中保持l h，冷却至室温，加入l mL乙酸乙酯，用水洗涤两次(每次l mL)，然后用同样体积的饱和食盐水洗涤两次，分出有机层用无水硫酸钠干燥过夜。
测定COBE和CHBE浓度以及产物的旋光性都使用气相7820A(Agilent)进行检测。测定COBE和CHBE浓度，色谱柱为PEG-20M 毛细管柱（HP-FFAP；30m×0.32mm×0.25mm；Agilent），检测器FID温度220℃，汽化室温度220℃，柱温130℃。COBE和CHBE的出峰时间分别为：8.223min和12.548min。对产物的旋光性进行分析，色谱柱CP-Chirasil-Dex CB （25m*25mm*25um；Aglilent)，检测器FID温度250℃，汽化室温度250℃，柱温120℃，R型和S型CHBE的出峰时间分别为：16.813min和17.413min。 产物CHBE的对映体过量值（e.e.%）值由如下公式计算：
对映体过量值（e.e.%）=((R-S)/(R+S))*100%
式中R为 (R)-CHBE的浓度，S为(S)-CHBE的浓度。
实施例5
在25mL磷酸钠缓冲液(pH=7.0, 100mM)中，加入实施例2制备的醛酮还原酶粗酶液20KU/L，葡萄糖200g/L，GDH20KU/L，COBE100g/L，于恒温摇床30℃，180rpm，反应6h。产物(R)-CHBE的浓度为99.8g/L，产物的得率为：99.8％，光学纯度e.e.%为>99％。反应结束后测定COBE和CHBE的图谱见图2，测定产物对映体过量值（e.e.%）的图谱见图3。
实施例6：
在25mL磷酸钠缓冲液(pH=7.0, 100mM)中，加入实施例2制备的醛酮还原酶粗酶液60KU/L、葡萄糖600g/L，GDH60KU/L，COBE350g/L，于恒温摇床30℃，180rpm，反应30h。产物(R)-CHBE的产量为306g/L，产物的得率为：87.4％，光学纯度e.e.%为>99％。
实施例7：
在25mL磷酸钠缓冲液(pH=7.0, 100mM)中，加入实施例2制备的醛酮还原酶粗酶液60KU/L,葡萄糖600g/L，GDH60KU/L，COBE350g/L（于2h、4h、6h、8h、10h各加入70g/L），于恒温摇床30℃，180rpm,反应24h。产物(R)-CHBE的产量为318g/L，产物的得率为：90.9％，光学纯度e.e.%为>99％。
实施例8：
在25mL磷酸钠缓冲液(pH=7.0, 100mM)中，加入乙酸丁酯25ml（可促进底物COBE的溶解并解除底物和产物对酶和细胞的抑制作用），实施例2制备的醛酮还原酶粗酶液60KU/L，葡萄糖600g/L，GDH60KU/L，COBE350g/L，于恒温摇床30℃，200rpm，反应30h。产物(R)-CHBE的产量为331g/L，产物的得率为：94.6％，光学纯度e.e.%为>99％。
<110> 南京工业大学
<120> 一种醛酮还原酶在生产(R)-4-氯-3羟基丁酸乙酯中的应用
<130> njut150206
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 888
<212> DNA
<213> 白色念珠菌（Candida albicans）
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(888)
<400> 1
atgccagctc aattgcaagt taacactgat tatttcactt taaacaatgg aaacaaaatc 60
ccagctgttg gattaggtac ttggcaagca accaatgaag acgaagctta cagagccgtc 120
ttagcagctc ttaagaacgg atacaagcac attgataccg ctgcaattta tggaaatgaa 180
gaacaagtcg gtaaagccat caaggactct ggagttccaa gagaagaatt gtttgttact 240
actaaattgt ggaatgctga ccataaaaat attgaagaag ccttagagac ttcattgaaa 300
aaattgggtc ttaactatgt tgacttgtac ttgatccatt ggccagcttc aattgacaag 360
tcaactaata aaccatatac tgattttgat tatgttgata cttatagagg tttacaaaaa 420
gtttataaga acagcaagaa aatcagagca attggtgttt ctaatttcac caaaaagaaa 480
ttggaaaggt tattgtcttc ggaaggtgtc gatgttgttc ctgctgtcaa ccaaattgaa 540
gctcacccat tgttgactca gcctgaattg tatgattatt tgaaagaaaa aggtatcgtt 600
ttggaagctt attcaccatt gggttctaca aactctccat tattcaagaa cgaaaccatc 660
gttaaaatcg ctgaaaagaa tggtgttgaa ccagctcaag ttttggtatc ttgggcaatt 720
caaagaaaga ctgtggtttt gcctaaatcc gtcaccgaat caagagttat ttctaacttg 780
aaaacattca ctttaccttc agaagatttc gaaacattga acaaattgtc tgaaaaagat 840
ggtgttgtca gaacttgtaa cccagctttc aacaactttg atgattaa 900
<210> 2
<211> 295
<212> PRT
<213> 白色念珠菌（Candida albicans）
<400> 2
Met Pro Ala Gln Leu Gln Val Asn Thr Asp Tyr Phe Thr Leu Asn Asn
1 5 10 15
Gly Asn Lys Ile Pro Ala Val Gly Leu Gly Thr Trp Gln Ala Thr Asn
20 25 30
Glu Asp Glu Ala Tyr Arg Ala Val Leu Ala Ala Leu Lys Asn Gly Tyr
35 40 45
Lys His Ile Asp Thr Ala Ala Ile Tyr Gly Asn Glu Glu Gln Val Gly
50 55 60
Lys Ala Ile Lys Asp Ser Gly Val Pro Arg Glu Glu Leu Phe Val Thr
65 70 75 80
Thr Lys Leu Trp Asn Ala Asp His Lys Asn Ile Glu Glu Ala Leu Glu
85 90 95
Thr Ser Leu Lys Lys Leu Gly Leu Asn Tyr Val Asp Leu Tyr Leu Ile
100 105 110
His Trp Pro Ala Ser Ile Asp Lys Ser Thr Asn Lys Pro Tyr Thr Asp
115 120 125
Phe Asp Tyr Val Asp Thr Tyr Arg Gly Leu Gln Lys Val Tyr Lys Asn
130 135 140
Ser Lys Lys Ile Arg Ala Ile Gly Val Ser Asn Phe Thr Lys Lys Lys
145 150 155 160
Leu Glu Arg Leu Leu Ser Ser Glu Gly Val Asp Val Val Pro Ala Val
165 170 175
Asn Gln Ile Glu Ala His Pro Leu Leu Thr Gln Pro Glu Leu Tyr Asp
180 185 190
Tyr Leu Lys Glu Lys Gly Ile Val Leu Glu Ala Tyr Ser Pro Leu Gly
195 200 205
Ser Thr Asn Ser Pro Leu Phe Lys Asn Glu Thr Ile Val Lys Ile Ala
210 215 220
Glu Lys Asn Gly Val Glu Pro Ala Gln Val Leu Val Ser Trp Ala Ile
225 230 235 240
Gln Arg Lys Thr Val Val Leu Pro Lys Ser Val Thr Glu Ser Arg Val
245 250 255
Ile Ser Asn Leu Lys Thr Phe Thr Leu Pro Ser Glu Asp Phe Glu Thr
260 265 270
Leu Asn Lys Leu Ser Glu Lys Asp Gly Val Val Arg Thr Cys Asn Pro
275 280 285
Ala Phe Asn Asn Phe Asp Asp
290 295 300
Claims (7)
1.一种醛酮还原酶在4-氯乙酰乙酸乙酯不对称还原制备(R)-4-氯-3羟基丁酸乙酯中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于以氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的醛酮还原酶为催化剂，以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物，以NADPH为辅因子，催化还原生成(R)-4-氯-3羟基丁酸乙酯。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，编码所述醛酮还原酶的核酸序列如SEQ ID NO：1所示。
4.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求3所述核酸。
5.一种重组大肠杆菌，其特征在于，包含权利要求4所述重组表达载体。
6.一种重组醛酮还原酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：培养如权利要求5所述重组大肠杆菌，从培养物中获得重组醛酮还原酶。
7.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，如权利要求2所述的醛酮还原酶与20KU~60KU/L的GDH（葡萄糖脱氢酶）、200g/L ~600g/L的葡萄糖、100g/L~350g/L的4-氯乙酰乙酸乙酯，在pH6.5~7.5的缓冲溶液，或者在乙酸丁酯与pH6.5~7.5的缓冲溶液组成的双相体系中，于恒温摇床25~30℃、180~220rpm的条件下反应6~30h，得到(R)-4-氯-3羟基丁酸乙酯。
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| CN (1) | CN104726507A (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105821013A (zh) * | 2016-04-05 | 2016-08-03 | 华东理工大学 | 羰基还原酶及其在制备手性n-保护-羟基氮杂环中的应用 |
| CN106929521A (zh) * | 2017-01-21 | 2017-07-07 | 浙江工业大学 | 一种醛酮还原酶基因重组共表达载体、工程菌及其应用 |
| CN109943482A (zh) * | 2019-03-06 | 2019-06-28 | 泰州市惠利生物科技有限公司 | 一种利用酶膜反应器耦合萃取制备r-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的方法 |
| CN111041010A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-21 | 南京朗恩生物科技有限公司 | 一种酮还原酶及其在(r)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯生产中的应用 |
| CN111454921A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-07-28 | 南京朗恩生物科技有限公司 | 一种酶活提高的酮还原酶突变体及其应用 |
| CN111575256A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-08-25 | 南京朗恩生物科技有限公司 | 一种用于生产(r)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的酮还原酶突变体 |
| CN113528588A (zh) * | 2021-06-15 | 2021-10-22 | 海南卓科制药有限公司 | 一种左卡尼汀的制备方法 |
| CN114525291A (zh) * | 2022-02-10 | 2022-05-24 | 南京桦冠生物技术有限公司 | 一种羰基还原酶及利用该酶制备(r)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103255183A (zh) * | 2013-01-08 | 2013-08-21 | 南京昌信嘉生物技术有限公司 | 一种利用羰基还原酶不对称还原制备(s)-4-氯-3羟基丁酸乙酯的方法及应用 |
| CN103290072A (zh) * | 2013-02-28 | 2013-09-11 | 南京工业大学 | 一种酶法不对称还原制备(s)-4-氯-3羟基丁酸乙酯的方法 |
-
2015
- 2015-04-01 CN CN201510150710.7A patent/CN104726507A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103255183A (zh) * | 2013-01-08 | 2013-08-21 | 南京昌信嘉生物技术有限公司 | 一种利用羰基还原酶不对称还原制备(s)-4-氯-3羟基丁酸乙酯的方法及应用 |
| CN103290072A (zh) * | 2013-02-28 | 2013-09-11 | 南京工业大学 | 一种酶法不对称还原制备(s)-4-氯-3羟基丁酸乙酯的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| JONES,T.等: "hypothetical protein CaO19.6757 [Candida albicans SC5314]", 《GENBANK DATABASE》 * |
| 叶婷婷: "R型醛酮还原酶的克隆、鉴定及其催化制备（R）-CHBE的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）基础科学辑》 * |
| 蒋晓霞等: "酵母不对称还原4-氯乙酰乙酸乙酯的研究", 《第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集》 * |
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105821013B (zh) * | 2016-04-05 | 2019-05-03 | 华东理工大学 | 羰基还原酶及其在制备手性n-保护-羟基氮杂环中的应用 |
| CN105821013A (zh) * | 2016-04-05 | 2016-08-03 | 华东理工大学 | 羰基还原酶及其在制备手性n-保护-羟基氮杂环中的应用 |
| CN106929521B (zh) * | 2017-01-21 | 2020-08-21 | 浙江工业大学 | 一种醛酮还原酶基因重组共表达载体、工程菌及其应用 |
| CN106929521A (zh) * | 2017-01-21 | 2017-07-07 | 浙江工业大学 | 一种醛酮还原酶基因重组共表达载体、工程菌及其应用 |
| CN109943482A (zh) * | 2019-03-06 | 2019-06-28 | 泰州市惠利生物科技有限公司 | 一种利用酶膜反应器耦合萃取制备r-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的方法 |
| CN109943482B (zh) * | 2019-03-06 | 2022-03-29 | 江苏惠利生物科技有限公司 | 一种利用酶膜反应器耦合萃取制备r-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的方法 |
| CN111454921A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-07-28 | 南京朗恩生物科技有限公司 | 一种酶活提高的酮还原酶突变体及其应用 |
| CN111041010A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-21 | 南京朗恩生物科技有限公司 | 一种酮还原酶及其在(r)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯生产中的应用 |
| CN111575256A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-08-25 | 南京朗恩生物科技有限公司 | 一种用于生产(r)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的酮还原酶突变体 |
| CN111041010B (zh) * | 2019-12-30 | 2022-03-04 | 南京朗恩生物科技有限公司 | 一种酮还原酶及其在(r)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯生产中的应用 |
| CN111454921B (zh) * | 2019-12-30 | 2022-07-12 | 南京朗恩生物科技有限公司 | 一种酶活提高的酮还原酶突变体及其应用 |
| CN111575256B (zh) * | 2019-12-30 | 2022-07-12 | 南京朗恩生物科技有限公司 | 一种用于生产(r)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的酮还原酶突变体 |
| CN113528588A (zh) * | 2021-06-15 | 2021-10-22 | 海南卓科制药有限公司 | 一种左卡尼汀的制备方法 |
| CN114525291A (zh) * | 2022-02-10 | 2022-05-24 | 南京桦冠生物技术有限公司 | 一种羰基还原酶及利用该酶制备(r)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的方法 |
| CN114525291B (zh) * | 2022-02-10 | 2023-11-07 | 南京桦冠生物技术有限公司 | 一种羰基还原酶及利用该酶制备(r)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的方法 |
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