CN104529813B - 一种2-乙酰基-2-去酰胺基四环素的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种2‑乙酰基‑2‑去酰胺基四环素的制备方法，该方法是以将盐酸四环素生产过程中的尿素复盐母液经减压浓缩后，注入高效液相色谱仪中，收集2‑乙酰基‑2‑去酰胺基四环素溶液；将分离出来的2‑乙酰基‑2‑去酰胺基四环素溶液pH调至中性，逐渐加入氯化钠，使乙腈与水分层，2‑乙酰基‑2‑去酰胺基四环素被萃取至乙腈层中，分取乙腈层，再往水层加入适量乙腈，振摇，静置，分取乙腈层，合并两次乙腈，置冰箱冷冻室中静置过夜，取出后立即过滤，取滤液减压浓缩并干燥，得2‑乙酰基‑2‑去酰胺基四环素纯品。本发明工艺简便，具有高效、快速、回收率高等特点。
Description
技术领域
本发明属于生物制药技术领域，特别是涉及一种2-乙酰基-2-去酰胺基四环素的制备方法。
背景技术
盐酸四环素(Tetracycline hydrochloride)是一种四环类抗生素，对革兰氏阳性菌、阴性菌、立克次体、滤过性病毒、螺旋体及原虫类都有很好的抑制作用。盐酸四环素是由金色链球菌在32℃发酵170小时，发酵液在pH1.7-1.9酸化处理，过滤，滤液调节pH结晶得四环素，四环素与尿素反应生成四环素尿素复盐，四环素尿素复盐在丁醇中加入盐酸后，反应生成盐酸四环素。盐酸四环素的制备过程中会产生杂质，主要包括4-差向四环素(4-epitetracycline)、4-差向脱水四环素(4-epianhydrotetracycline)、脱水四环素(Anhydrotetracycline)、土霉素(Oxytetracycline)和2-乙酰基-2-去酰胺基四环素(2-acetyl-2-decarbamoyltetracycline)，这些杂质毒性大，抗菌活性差。其中2-乙酰基-2-去酰胺基四环素在中国药典和美国药典中均未检测，欧洲药典中对该杂质采用4-差向四环素做对照进行了检测，限度为≤1.5％。
近年来，各国药典对原料药中杂质控制越来越严格，在此背景下，制备2-乙酰基-2-去酰胺基四环素对照品，对盐酸四环素中该杂质的定性及定量，显得越来越重要。
发明内容
本发明的目的就在于提供一种工艺简便，产品纯度高，可作为盐酸四环素定性及定量检测对照品的2-乙酰基-2-去酰胺基四环素的制备方法。
为实现上述发明目的所采取的技术方案为：
一种2-乙酰基-2-去酰胺基四环素的制备方法，其特征在于其工艺步骤为：
将盐酸四环素生产过程中的尿素复盐母液减压浓缩至原体积的1/4，后注入高效液相色谱仪中，收集2-乙酰基-2-去酰胺基四环素出峰时段的溶液；
将分离出来的2-乙酰基-2-去酰胺基四环素溶液pH调至中性，逐渐加入氯化钠，直至使乙腈与水分离，分取乙腈层，再往水层加入适量乙腈，振摇，静置，分取乙腈层，合并两次乙腈层，在-15℃～-30℃静置14-18小时，后立即过滤，所得滤液减压浓缩至近干，58℃～62℃干燥得2-乙酰基-2-去酰胺基四环素纯品。
所述高效液相色谱的色谱条件为：
流动相：体积比为80～85：20～15的0.05％磷酸溶液-乙腈溶液；
色谱柱：Sinochrom ODS-AP 10um；
流动相流速：20-30ml/min；
检测波长：254nm。
所述减压浓缩条件为：压力0.06～0.09MPa，58℃～62℃水浴中加热。
上述萃取过程，加入氯化钠后，使乙腈与水分层，2-乙酰基-2-去酰胺基四环素被萃取至乙腈层中，连续萃取两次，使水层接近无色。在-15℃～-30℃静置的目的是使溶解在乙腈中微量盐类结晶析出。
在上述体系中，乙腈层在减压浓缩干燥后，所得2-乙酰基-2-去酰胺基四环素的纯度高达85％。
本发明的优点在于：1、通过本方法可制备出2-乙酰基-2-去酰胺基四环素纯品，以它作为2-乙酰基-2-去酰胺基四环素定性的对照品，从而解决了分析人员在分析过程中该杂质定位问题。2、本发明工艺简便，具有高效、快速等特点。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面通过实施例对本发明作进行一步说明，但所举实施例并不限制本发明的保护范围。
下述实施例中盐酸四环素生产过程中的尿素复盐母液是四环素与尿素反应生成尿素复盐后的废液，其中4-差向四环素、2-乙酰基-2-去酰胺基四环素等杂质较多。
实施例1
色谱条件：色谱柱：Sinochrom ODS-AP 10um；流动相：以0.05％磷酸溶液-乙腈(85：15)；流速：24ml/min；检测波长：254nm。
仪器型号：大连依利特P230制备液相色谱仪。
制备方法：
将盐酸四环素生产过程中的尿素复盐母液经0.08MPa，60℃减压浓缩至原体积的1/4后，注入制备高效液相色谱仪中，收集2-乙酰基-2-去酰胺基四环素出峰时段的溶液。
将分离出来的2-乙酰基-2-去酰胺基四环素溶液用乙酸调至中性，逐渐加入氯化钠固体并搅拌，直至使乙腈与水分层，分取乙腈层，再往水层加入等体积乙腈，振摇，静置，分取乙腈层，合并两次乙腈，置-15℃～-30℃静置14-18小时，取出后立即过滤，取滤液在0.07MPa、58℃～62℃水浴条件下减压浓缩至近干，并在58℃～62℃干燥，得2-乙酰基-2-去酰胺基四环素纯品，经测定，含量为85.6％、87.4％。
实施例2
色谱条件：色谱柱：Sinochrom ODS-AP 10um；流动相：以0.05％磷酸溶液-乙腈(85：20)；流速：20ml/min；检测波长：254nm。
仪器型号：大连依利特P230制备液相色谱仪。
制备方法：
将盐酸四环素生产过程中的尿素复盐母液经0.06MPa，58℃减压浓缩至原体积的1/4后，注入制备高效液相色谱仪中，收集2-乙酰基-2-去酰胺基四环素出峰时段的溶液。
将分离出来的2-乙酰基-2-去酰胺基四环素溶液用乙酸调至中性，逐渐加入氯化钠固体并搅拌，直至使乙腈与水分层，分取乙腈层，再往水层加入等体积乙腈，振摇，静置，分取乙腈层，合并两次乙腈，置-15℃～-30℃静置14-18小时，取出后立即过滤，取滤液在0.09MPa、58℃～62℃水浴条件下减压浓缩至近干，并在58℃～62℃干燥，得2-乙酰基-2-去酰胺基四环素纯品，经测定，含量为86.2％、85.3％。
实施例3
色谱条件：色谱柱：Sinochrom ODS-AP 10um；流动相：以0.05％磷酸溶液-乙腈(85：20)；流速：20ml/min；检测波长：254nm。
仪器型号：大连依利特P230制备液相色谱仪。
制备方法：
将盐酸四环素生产过程中的尿素复盐母液经0.09MPa，62℃减压浓缩至原体积的1/4后，注入制备高效液相色谱仪中，收集2-乙酰基-2-去酰胺基四环素出峰时段的溶液。
将分离出来的2-乙酰基-2-去酰胺基四环素溶液用乙酸调至中性，逐渐加入氯化钠固体并搅拌，直至使乙腈与水分层，分取乙腈层，再往水层加入等体积乙腈，振摇，静置，分取乙腈层，合并两次乙腈，置-15℃～-30℃静置14-18小时，取出后立即过滤，取滤液在0.06MPa、58℃～62℃水浴条件下减压浓缩至近干，并在58℃～62℃干燥，得2-乙酰基-2-去酰胺基四环素纯品，经测定，含量为85.5％、87.0％。
Claims (3)
1.一种2-乙酰基-2-去酰胺基四环素的制备方法，其特征在于其工艺步骤为：
将盐酸四环素生产过程中的尿素复盐母液减压浓缩至原体积的1/4，后注入高效液相色谱仪中，收集2-乙酰基-2-去酰胺基四环素出峰时段的溶液；
将分离出来的2-乙酰基-2-去酰胺基四环素溶液pH调至中性，逐渐加入氯化钠，直至使乙腈与水分离，分取乙腈层，再往水层加入适量乙腈，振摇，静置，分取乙腈层，合并两次乙腈层，在-15℃～-30℃静置14-18小时，后立即过滤，所得滤液减压浓缩至近干，58℃～62℃干燥得2-乙酰基-2-去酰胺基四环素纯品。
2.按照权利要求1所述的2-乙酰基-2-去酰胺基四环素的制备方法，其特征在于所述高效液相色谱的色谱条件为：
流动相：体积比为80～85：20～15的0.05%磷酸溶液-乙腈溶液；
色谱柱：Sinochrom ODS-AP 10um；
流动相流速：20-30ml/min；
检测波长：254nm。
3.按照权利要求1所述的2-乙酰基-2-去酰胺基四环素的制备方法，其特征在于所述减压浓缩条件为：压力0.06～0.09MPa，58℃～62℃水浴中加热。
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| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |