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CN104470919A - 作为pad4抑制剂的2-(氮杂吲哚-2-基)苯并咪唑 - Google Patents

作为pad4抑制剂的2-(氮杂吲哚-2-基)苯并咪唑 Download PDF

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CN104470919A CN201280074868.5A CN201280074868A CN104470919A CN 104470919 A CN104470919 A CN 104470919A CN 201280074868 A CN201280074868 A CN 201280074868A CN 104470919 A CN104470919 A CN 104470919A
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Abstract

式(I)的化合物，其中；R1是氢或C1- 6烷基；R2是氢、C1- 6烷基、全卤代甲基C0- 5烷基-O-或C1- 6烷氧基；R3是氢、C1- 6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基；R4是氢、C1-6烷基、全卤代甲基C1-6烷基；或未被取代的C3-6环烷基C1-6烷基；A是C-R5或N；B是C-R6或N；D是C-R7或N；前提条件是，A、B和D中的至少一个是N；R5是氢或C1- 6烷基；R6是氢或C1- 6烷基；R7是氢、C1- 6烷基、C1- 6烷氧基或羟基；R8是氢或C1- 6烷基，前提条件是，R4和R8中的一个是氢；R9是氢或羟基；R10是氢或C1- 6烷基；及其盐是PAD4抑制剂，且可用于治疗多种病症，例如类风湿性关节炎、血管炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤型红斑狼疮和银屑病。

Description

作为PAD4抑制剂的2-(氮杂吲哚-2-基)苯并咪唑
技术领域
本发明涉及作为PAD4抑制剂的某些新化合物、它们的制备方法、包含所述化合物的药物组合物、以及所述化合物或所述组合物在治疗多种病症中的用途。抑制PAD4的化合物可用于治疗多种病症，例如类风湿性关节炎、血管炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤型红斑狼疮和银屑病。
背景技术
PAD4是肽基精氨酸脱亚氨基酶(PAD)家族的一个成员，该家族的酶能够催化肽序列内的精氨酸瓜氨酸化为瓜氨酸。PAD4在体外和在体内负责多种蛋白的脱亚氨基或瓜氨酸化，在多种疾病中具有不同功能应答的后果(Jones　J.E.　等人 ,　Curr.　Opin.　Drug　Discov.　Devel.,　12(5),　(2009),　616-627)。示例疾病的例子包括类风湿性关节炎、对发病机制具有嗜中性粒细胞性贡献的疾病(例如血管炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎)以及肿瘤学指征。PAD4抑制剂还可以通过表观遗传机制作为人疾病的工具和治疗剂而具有较宽适用性。
PAD4的抑制剂可以对类风湿性关节炎(RA)具有效用。RA是影响大约1%的人口的自身免疫疾病(Wegner　N.　等人 ,　Immunol.　Rev.,　233(1)　(2010),　34-54)。它的特征在于导致骨和软骨的虚弱性破坏的关节炎症。在许多群体研究中已经提示PAD4多态性和对RA的易感性之间的弱遗传关联，尽管是不一致的(Kochi　Y.　等人 ,　Ann.　Rheum.　Dis.,　70,　(2011),　512-515)。已经在滑膜组织中检测到PAD4 (与家族成员PAD2一起)，在此处它负责多种关节蛋白的脱亚氨基。推测该过程会导致对RA关节中的瓜氨酸化的底物（诸如纤维蛋白原、波形蛋白和胶原）的耐受性的破坏和对所述底物的免疫应答的开始。这些抗-瓜氨酸化的蛋白抗体(ACPA)会促进疾病发病机制，且也可以用作RA的诊断试验(例如商购可得的CCP2或环状瓜氨酸化的蛋白2试验)。另外，增加的瓜氨酸化也可以通过它的直接影响几种关节和炎症介质(例如纤维蛋白原、抗凝血酶、多种趋化因子)的功能的能力而给疾病发病机制提供额外的直接贡献。在RA患者的较小子集中，可以测量抗-PAD4抗体，并且所述抗体可以与所述疾病的更侵蚀形式的相关联。
PAD4抑制剂也可以用于降低多种疾病中的病理性嗜中性粒细胞活性。研究提示，嗜中性粒细胞细胞外Trap (NET)形成（一种先天性防御机制，通过该机制，嗜中性粒细胞能够固定和杀死病原体）的过程与组蛋白瓜氨酸化有关，且在PAD4敲除的小鼠中是缺乏的(Neeli　I.　等人 ,　J.　Immunol.,　180,　(2008),　1895-1902 和 Li　P.　等人 ,　J.　Exp.　Med.,　207(9),　(2010),　1853-1862)。因此，PAD4抑制剂可以对这样的疾病具有适用性：其中组织中的NET形成促成局部损伤和疾病病理学。这样的疾病包括、但不限于：小血管血管炎(Kessenbrock　K.　等人 ,　Nat.　Med.,　15(6),　(2009),　623-625)、系统性红斑狼疮(Hakkim　A.　等人 ,　Proc.　Natl.　Acad.　Sci.　USA,　107(21),　(2010),　9813-9818和Villanueva　E.　等人 ,　J.　Immunol.,　187(1),　(2011),　538-52) 、溃疡性结肠炎(Savchenko　A.　等人 ,　Pathol.　Int.,　61(5),　(2011),　290-7)、囊性纤维化、哮喘(Dworski　R.　等人 ,　J.　Allergy　Clin.　Immunol.,　127(5),　(2011),　1260-6)、深静脉血栓形成(Fuchs　T.　等人 ,　Proc.　Natl.　Acad.　Sci.　USA,　107(36),　(2010),　15880-5)、牙周炎(Vitkov　L.　等人 ,　Ultrastructural　Pathol.,　34(1),　(2010),　25-30)、脓毒症(Clark　S.R.　等人 ,　Nat.　Med.,　13(4),　(2007),　463-9)、阑尾炎(Brinkmann　V.　等人 ,　Science,　303,　(2004),　1532-5)和中风。另外，有证据表明，NET可以促成影响皮肤的疾病中的病理学，例如在皮肤型红斑狼疮(Villanueva　E.　等人 ,　J.　Immunol.,　187(1),　(2011),　538-52)和银屑病(Lin　A.M.　等人 ,　J.　Immunol.,　187(1),　(2011),　490-500)中，所以PAD4抑制剂当通过全身或皮肤途径施用时可以表现出治疗NET皮肤疾病的益处。PAD4抑制剂可以影响嗜中性粒细胞内的其它功能，且对嗜中性粒细胞性疾病具有更宽的适用性。
研究已经证实了工具PAD抑制剂(例如氯-脒)在许多疾病的动物模型中的效力，所述模型包括胶原诱导的关节炎(Willis　V.C.　等人 ,　J.　Immunol.,　186(7),　(2011),　4396-4404)、硫酸葡聚糖钠(DSS)诱导的实验性结肠炎(Chumanevich　A.A.　等人 ,　Am.　J.　Physiol.　Gastrointest.　Liver　Physiol.,　300(6),　(2011),　G929-G938)、脊髓修复(Lange　S.　等人 ,　Dev.　Biol.,　355(2),　(2011),　205-14)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。DSS结肠炎报告也证实，氯-脒会在体外和在体内驱动炎症细胞的细胞凋亡，从而提示，PAD4抑制剂可以更一般地在泛发的炎性疾病中是有效的。
PAD4抑制剂也可以用于治疗癌症(Slack.J.L.　等人 ,　Cell.　Mol.　Life　Sci.,　68(4),　(2011),　709-720)。已经在众多癌症中证实了PAD4的过表达(Chang　X.　等人 ,　BMC　Cancer,　9,　(2009),　40)。以下观察结果已经提示PAD4抑制剂的抗增殖作用：PAD4在p53-靶基因（诸如p21，其牵涉细胞周期停滞和细胞凋亡的诱导）的启动子处将组蛋白中的精氨酸残基瓜氨酸化(Li　P.　等人 ,　Mol.　Cell　Biol.,　28(15),　(2008),　4745-4758)。
前述PAD4在将组蛋白中的精氨酸残基脱亚氨基中的作用，可以指示PAD4在基因表达的表现遗传调节中的作用。PAD4是被观察到停留在细胞核以及细胞质中的主要PAD家族成员。PAD4可以充当组蛋白脱甲基亚氨基酶（demethyliminase）以及脱亚氨基酶的早期证据是矛盾的和未经证实的。但是，它可以间接地通过可利用的精氨酸残基的耗竭（通过转化成瓜氨酸）而减少组蛋白精氨酸甲基化(和因此减少与该标记有关的表现遗传调节)。因此，PAD4抑制剂可以在其它疾病场合中用作用于影响多种靶基因的表达的表现遗传工具或治疗剂。通过这样的机制，PAD4抑制剂也可以在控制干细胞中的瓜氨酸化水平方面是有效的，且因此可以在治疗上影响不同干细胞（包括、但不限于，胚胎干细胞、神经干细胞、造血干细胞和癌症干细胞）的多能性状态和分化潜力。
发明内容
本发明涉及式(I)的化合物及其盐：
其中R1、R2、R3、R4、A、B、D、R8、R9和R10如下面所定义。
已经证实本发明的某些化合物是PAD4抑制剂，且也可以表现出相对于PAD2而言增强的对PAD4的选择性。例如，本发明的某些化合物显示对PAD4抑制的选择性是PAD2抑制的1000倍。抑制PAD4的化合物可用于治疗多种病症，例如类风湿性关节炎、血管炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤型红斑狼疮和银屑病。因此，本发明还涉及包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本发明又涉及使用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物治疗与其有关的病症的方法。本发明还进一步涉及制备本发明的化合物的方法。
具体实施方式
在第一方面，提供了式(I)的化合物及其盐：
其中；
R1是氢或C1-6烷基；
R2是氢、C1-6烷基、全卤代甲基C0-5烷基-O-或C1-6烷氧基；
R3是氢、C1-6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基；
R4是氢、C1-6烷基、全卤代甲基C1-6烷基；或未被取代的C3-6环烷基C1-6烷基；
A是C-R5或N；
B是C-R6或N；
D是C-R7或N；
前提条件是，A、B和D中的至少一个是N；
R5是氢或C1-6烷基；
R6是氢或C1-6烷基；
R7是氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基或羟基；
R8是氢或C1-6烷基，前提条件是，R4和R8中的一个是氢；
R9是氢或羟基；
R10是氢或C1-6烷基。
在一个实施方案中，R1是氢。
在一个实施方案中，R1是C1-6烷基。
在一个实施方案中，R2是氢或C1-6烷氧基。
在一个实施方案中，R2是C1-6烷氧基。
在一个实施方案中，R2是全卤代甲基C0-5烷基-O-。
在一个实施方案中，R2是三氟甲氧基。
在一个实施方案中，R3是氢。
在一个实施方案中，R3是C1-6烷氧基C1-6烷基。
在一个实施方案中，R3是C1-6烷基。
在一个实施方案中，R4是C1-6烷基、未被取代的C3-6环烷基C1-6烷基或全卤代甲基C1-6烷基。
在一个实施方案中，R4是C1-6烷基、未被取代的C3-6环烷基C1-6烷基或全氟甲基C1-6烷基。
在一个实施方案中，R5是氢。
在一个实施方案中，R6是氢。
在一个实施方案中，R7是氢、C1-6烷氧基或羟基。
在一个实施方案中，R7是氢。
在一个实施方案中，R8是氢。
在一个实施方案中，R9是氢。
在一个实施方案中，R9是羟基。
在一个实施方案中，R10是氢。
在一个实施方案中，R10是羟基。
在一个实施方案中，本发明的化合物选自由以下成员组成的列表：
1-{[2-(1-乙基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基]羰基}-3-哌啶胺；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
2-(5-{[(3R)-3-氨基-1-哌啶基]羰基}-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-醇；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-7-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(1-新戊基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
((R)-3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(1-(2-甲基丁基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；和
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-2-(1-(2-甲氧基-2-甲基丙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
及其盐。
在一个实施方案中，本发明的化合物选自由以下成员组成的列表：
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮盐酸盐；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮盐酸盐；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
(S)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-异丁基-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-异丁基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
((2R,5S)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；和
((2R,5S)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐。
在一个实施方案中，本发明的化合物选自由以下成员组成的列表：
((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(S)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-异丁基-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-异丁基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
((2R,5S)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；和
((2R,5S)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
及其盐。
在一个实施方案中，本发明的化合物选自由以下成员组成的列表：
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；和
((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
及其盐。
在一个实施方案中，本发明的化合物选自由以下成员组成的列表：
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐；和
((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐。
进一步提供了式(I)的化合物的子集，为式(I’)的化合物及其盐
其中；
R1’是氢或C1-6烷基；
R2’是氢、C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R3’是氢或C1-6烷基；
R4’是氢、C1-6烷基、全卤代甲基C1-6烷基；或未被取代的C3-6环烷基C1-6烷基；
A’是C-R5’或N；
B’是C-R6’或N；
D’是C-R7’或N；
前提条件是，A’、B’和D’中的至少一个是N；
R5’是氢或C1-6烷基；
R6’是氢或C1-6烷基；
R7’是氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基或羟基；
R8’是氢或C1-6烷基，前提条件是，R4’和R8’中的一个是氢。
应该理解，本文中对式(I)的化合物的提及同样适用于式(I’)的化合物，例如制备方法、组合物和使用方法。
术语和定义
式(I)的化合物及其盐在下文中被称作“本发明的化合物”。
“烷基”表示具有指定数目的碳原子的饱和烃链。例如，C1-6烷基表示具有1-6个碳原子（例如1-2个碳原子）的烷基。烷基可以是直链或支链。代表性的支链烷基具有1个、2个或3个支链。“烷基”包括甲基和乙基。
“烷氧基”表示通过单键与氧原子连接的、具有指定数目的碳原子的饱和烃链。例如，C1-6烷氧基表示具有1-6个碳原子（例如1-2个碳原子，例如1个碳原子）的烷氧基。烷氧基可以是直链或支链。代表性的支链烷氧基具有1个、2个或3个支链。“烷氧基”包括甲氧基。
“环烷基”表示具有指定数目的成员原子的饱和烃环。例如，C3-6环烷基表示具有3-6个成员原子（例如3个成员原子）的环烷基。“环烷基”包括环丙基。
“对映体过量”(ee)是表达为百分比的一种对映异构体超过其它对映异构体的过量。在外消旋变体中，由于两种对映异构体以相等的量存在，对映体过量为零(0%ee)。但是，如果一种对映异构体富集，以致其构成产物的95%，则对映体过量将为90%ee (富集的对映异构体的量，95%，减去其它对映异构体的量，5%)。
“对映异构地富集的”表示其对映体过量(ee)大于零的产物。例如，“对映异构地富集的”表示这样的产物，其对映体过量大于50%ee、大于75%ee和大于90%ee。
“对映异构纯的”表示其对映体过量为99%或更大的产物。
“半衰期”(或“半衰期”)表示在体外或在体内使一半量的物质转化成另一种化学上不同的物质所需要的时间。
“卤代”表示卤素基团，例如，氟、氯、溴或碘，例如溴、氯或氟。
“全卤代甲基”表示这样的甲基：其中所有氢原子已经被卤素基团替代。全卤代甲基的一个例子是全氟甲基即CF3-。
“杂环的”和“杂环基”表示含有5、6或7个环成员（包括1或2个杂原子）的饱和或不饱和的单环脂族环，或表示含有6、7或8个环成员（包括1或2个杂原子）的饱和或不饱和的二环脂族环。在某些实施方案中，“杂环基”是饱和的。在其它实施方案中，“杂环基”是不饱和的。含有超过一个杂原子的“杂环基”可以含有不同的杂原子。“杂环基”可以被一个或多个如本文中定义的取代基取代。“杂环基”包括哌啶基。
“杂芳基”表示在环中含有1-3个杂原子作为成员原子的芳族环。含有超过一个杂原子的“杂芳基”可以含有不同的杂原子。“杂芳基”可以被一个或多个取代基取代（如果本文中那样定义的话）。“杂芳基”环具有5或6个成员原子。“杂芳基”包括吡咯并吡啶基和苯并咪唑基。
“杂原子”表示氮、硫或氧原子，例如氮原子。
“成员原子”表示形成链或环的一个或多个原子。在超过一个成员原子存在于链中和环内的情况下，每个成员原子在链或环中与相邻成员原子共价结合。在链或环上组成取代基的原子不是链或环中的成员原子。
“取代的”在提及基团时指示，在基团中连接至成员原子的氢原子被替代。应当理解，术语“取代的”包括以下暗示性前提条件：这样的取代与被取代的原子和取代基所允许的化学价相符，且该取代导致稳定的化合物(即不会自发地经历转化（诸如重排、环化或消除）的化合物)。在某些实施方案中，单一原子可被一个以上的取代基取代，只要这样的取代与所述原子所允许的化学价相符即可。在本文中定义了每个取代的或任选地取代的基团的合适的取代基。
“药学上可接受的”表示这样的化合物、材料、组合物和剂型：在合理的医学判断范围内，其适用于接触人类和动物的组织，没有过度的毒性、刺激或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
贯穿说明书和随附的权利要求书，除非上下文另外要求，词语“包含”和变体诸如“包括”和“含有”应理解为表示包括所述的整数或步骤或整数的集合，但并不排除任意其它整数或步骤或整数或步骤的集合。
如在本文中使用的，用于这些方法、方案和实施例中的符号和惯例，与在当代科学文献（例如，Journal　of　the　American　Chemical　Society）中使用的那些相一致。除非另外指出，所有起始原料均从商业供应商得到，并不经进一步纯化而使用。具体地，以下缩写可用于实施例和本说明书中：
缩写
AcOH 乙酸
BH3-THF 硼烷四氢呋喃络合物
BOC/Boc 叔丁氧基羰基
BOC2O 二碳酸二叔丁酯
nBuLi 正丁基锂
BuOH 丁醇
cHex 环己烷
Cs2CO3 碳酸铯
CV 柱体积
DCM/CH2Cl2 二氯甲烷
二氧杂环己烷 1,4-二氧杂环己烷
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DMSO 二甲基亚砜
DMF N,N-二甲基甲酰胺
Et3N 三乙胺
Ether 乙醚
EtOAc 乙酸乙酯
GC 气相色谱法
h. 小时
HATU 邻-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HPLC 高效液相色谱法
K2CO3 碳酸钾
KOH 氢氧化钾
LiCl 氯化锂
LiOH 氢氧化锂
LCMS或LC/MS 液相色谱法-质谱法
MDAP 质量导向的自动化的制备型色谱法
MeOH 甲醇
MeNH2 甲胺
min. 分钟
Na2SO4 硫酸钠
NaHCO3 碳酸氢钠
NH4Cl 氯化铵
NMP 1-甲基-2-吡咯烷酮
Pd/C 炭载钯
PE 石油醚
rb 圆底(烧瓶)
r.t/rt. 室温
Rt 保留时间
SNAP Biotage™快速色谱筒
SP4 Biotage™快速纯化系统
TFA 三氟乙酸
THF/thf 四氢呋喃
TLC/tlc 薄层色谱法
TMEDA 四甲基乙二胺。
在“本发明的化合物”的范围内包括式(I)的化合物及其盐的所有溶剂合物(包括水合物)、络合物、多晶型物、前药、放射性标记的衍生物和立体异构体。
本发明的化合物可以以固体或液体形式存在。处于固体状态时，本发明的化合物可以以结晶或非结晶形式存在或作为它们的混合物存在。对于为结晶形式的本发明的化合物，技术人员会明白，可以形成药学上可接受的溶剂合物，其中溶剂分子在结晶过程中掺入晶体晶格中。溶剂合物可以包括非水性溶剂诸如乙醇、异丙醇、N,N-二甲基亚砜(DMSO)、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯，或它们可以包括水作为掺入到晶体晶格中的溶剂。其中水为掺入到晶体晶格中的溶剂的溶剂合物通常被称作“水合物”。水合物包括化学计量的水合物，以及含可变量的水的组合物。本发明包括所有这样的溶剂合物。
还将认识到，以结晶形式存在的本发明的某些化合物（包括其多种溶剂合物）可以表现出多晶型现象(即以不同结晶结构出现的能力)。这些不同的结晶形式通常被称为“多晶型物”。本发明包括所有这样的多晶型物。多晶型物具有相同的化学组成，但在结晶固体状态的堆积、几何排列和其它描述性特性方面存在差异。因此，多晶型物可以具有不同的物理性质，诸如形状、密度、硬度、可变形性、稳定性和溶解性质。多晶型物通常表现出可用于鉴定的不同熔点、IR谱和X-射线粉末衍射图样。应当理解，例如，通过改变或调整用于制备化合物的反应条件或试剂，可以生产不同的多晶型物。例如，温度、压力或溶剂的改变可以产生多晶型物。另外，在某些条件下，一种多晶型物可以自发地转化为另一种多晶型物。
本发明还包括同位素标记的化合物，其与式(I)的化合物及其盐相同，但是实际上一个或多个原子被原子质量或质量数不同于在自然界发现的最常见的原子质量或质量数的原子替代。可以掺入到本发明的化合物中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧和氟的同位素，诸如3H、11C、14C和18F。
根据式(I)的化合物含有一个或多个不对称中心(也被称作手性中心)，并因此可以作为各对映异构体、非对映异构体或其它立体异构形式或作为它们的混合物存在。手性中心（诸如手性碳原子）也可以存在于取代基（诸如烷基）中。在没有指定存在于式(I)中或本文例示的任何化学结构中的手性中心的立体化学的情况下，该结构意图包括任何立体异构体及其所有混合物。因此，含有一个或多个手性中心的根据式(I)的化合物可以用作外消旋变体，包括外消旋混合物和外消旋体、对映异构地富集的混合物，或者作为对映异构地纯的各立体异构体。例如，下面例示的式(I)的化合物的片段(Z)：
含有在氨基与环的连接部处的手性中心(用星号(*)标记)。在该手性中心处的立体化学可以是R立体异构体、S立体异构体、RS立体异构体、或R和S立体异构体的任意混合物。
通过本领域技术人员已知的方法，可以拆分含有一个或多个不对称中心的根据式(I)的化合物的各立体异构体。例如，这样的拆分可以如下进行：(1)通过形成非对映异构的盐、络合物或其它衍生物；(2)通过与立体异构体-特异性的试剂的选择性反应，例如通过酶促氧化或还原；或(3)通过在手性环境（例如，在手性支持物（诸如具有结合的手性配体的硅胶）上或在有手性溶剂存在下）中的气相-液相色谱法或液相色谱法。应当理解，在通过以上描述的分离方法之一将期望的立体异构体转化成另一种化学实体的情况下，需要再一个步骤以释放期望的形式。可替换地，通过使用光学活性的试剂、底物、催化剂或溶剂进行不对称合成，或通过不对称转化将一种对映异构体转化为其它对映异构体，可以合成特定的立体异构体。
应当理解，本文中对式(I)的化合物及其盐的提及覆盖作为游离碱或作为其盐（例如作为其药学上可接受的盐）的式(I)的化合物。因而，在一个实施方案中，本发明涉及作为游离碱的式(I)的化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物及其盐。在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物及其药学上可接受的盐。
应当理解，可以制备根据式(I)的化合物的药学上可接受的盐。实际上，在本发明的某些实施方案中，根据式(I)的化合物的药学上可接受的盐可以优于各种游离碱，因为这样的盐会给所述分子赋予更大的稳定性或可溶性，由此促进配制成剂型。因此，本发明还涉及式(I)的化合物及其药学上可接受的盐。
本文中使用的术语“药学上可接受的盐”表示这样的盐：其保留主题化合物的期望的生物活性且表现出最少的不希望的毒理学效应。这些药学上可接受的盐可以在所述化合物的最后分离和纯化期间原位制备，或可以通过使呈其游离碱形式的经纯化的化合物与合适的酸单独地反应来制备。
具有非药学上可接受的抗衡离子或有关的溶剂的盐和溶剂合物均在本发明范围内，例如，在制备其它式(I)的化合物和它们的药学上可接受的盐中用作中间体。因而本发明的一个实施方案包括式(I)的化合物及其盐。
根据式(I)的化合物含碱性官能团，并因此能够通过用合适的酸处理而形成药学上可接受的酸加成盐。合适的酸包括药学上可接受的无机酸和药学上可接受的有机酸。代表性的药学上可接受的酸加成盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、甲基硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、氨基磺酸盐、磷酸盐、乙酸盐、羟基乙酸盐、苯基乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、异丁酸盐、戊酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙烯酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、水杨酸盐、对氨基水杨酸盐、乙醇酸盐、乳酸盐、庚酸盐、邻苯二甲酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、邻乙酰氧基苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、萘甲酸盐、羟基萘甲酸盐、扁桃酸盐、鞣酸盐、甲酸盐、硬脂酸盐、抗坏血酸盐、棕榈酸盐、油酸盐、丙酮酸盐、扑酸盐、丙二酸盐、月桂酸盐、戊二酸盐、谷氨酸盐、依托酸盐、甲烷磺酸盐(甲磺酸盐)、乙烷磺酸盐(乙磺酸盐)、2-羟基乙磺酸盐、苯磺酸盐(苯磺酸盐)、对氨基苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐(甲苯磺酸盐)和萘-2-磺酸盐。
化合物制备
通过包括标准化学法在内的多种方法，可以制备本发明的化合物。除非另外指出，否则任何前面定义的变量将继续具有前面定义的含义。示例性的一般合成方法阐述在下述方案中，并且可以容易地改进以制备本发明的其它化合物。在实施例部分中制备本发明的具体化合物。
式(I)的化合物可以通过式(II)的化合物的去保护来制备。因此，在第一方面，提供了通过式(II)的化合物的去保护来制备式(I)的化合物的方法：
其中R1、R2、R3、R4、A、B、D、R8、R9和R10如在上文中所定义，且P是胺的合适保护基，例如叔-丁氧基羰基(Boc)，此后，如果需要的话，制备如此形成的化合物的盐。
例如，向式(II)的化合物在合适的溶剂（例如二氯甲烷）中的溶液中，加入三氟乙酸，并将反应物在合适的温度（例如环境温度）搅拌合适的时间段，例如1-3小时。然后将反应混合物在减压下浓缩。然后将粗产物溶解在合适的溶剂（例如甲醇）中，并加载到离子交换柱（例如强阳离子交换柱）上。然后用合适的溶剂（例如2M的氨在甲醇中的溶液）将产物洗脱为游离碱，并在减压下浓缩洗脱剂，得到式(I)的化合物。
式(II)的化合物可以通过式(III)的化合物：
其中R1、R2、R3、R9、R10和P如在上文中所定义，
与式(IV)的化合物的缩合来制备
其中R4、A、B、D和R8如在上文中所定义。
在另一个方面，提供了通过式(III)的化合物与式(IV)的化合物的反应来制备式(II)的化合物的方法。
例如，将式(IV)的化合物和合适的肽偶联剂例如邻-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)溶解在合适的溶剂（例如N,N-二甲基甲酰胺）中，并在合适的温度（例如环境温度）搅拌合适的时间段，例如5-10分钟。向其中加入式(III)的化合物和合适的受阻碍的碱（例如N,N-二-异丙基乙胺(DIPEA)）在合适的溶剂（例如N,N-二甲基甲酰胺）中的溶液，并将得到的混合物在氮气下在合适的温度（例如环境温度）搅拌合适的时间段，例如3-5小时。将反应混合物用水稀释，并用合适的有机溶剂（例如乙醚）分配。然后将有机层分离，并将水层用乙醚重萃取。将合并的有机层用水洗涤，然后经硫酸钠干燥，然后穿过疏水玻璃料并在减压下浓缩，得到粗制的酰胺中间体。将该固体在减压下干燥12-24小时，然后溶解在合适的溶剂（例如甲苯）中。将合适的有机酸（例如乙酸）加入反应混合物中，然后将混合物加热至回流保持合适的时间段，例如将其回流4-6小时。将合适的碱水溶液（例如碳酸氢钠溶液）加入反应混合物中，并分离有机层。将水层用合适的有机溶剂（例如甲苯）重萃取，并将合并的有机层在减压下浓缩，得到粗产物。所述粗制物质可以通过例如柱色谱法进行纯化。
式(II)的化合物也可以通过式(XX)的化合物：
其中R1、R2、R3、R4、A、B、D和R8如在上文中所定义，
与在下文中定义的式(X)的化合物的反应来制备。
例如，向式(XX)的化合物在合适的溶剂（例如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)）中的溶液中，加入合适的肽偶联剂，例如邻-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)，随后加入合适的受阻碍的碱，例如N,N-二-异丙基乙胺(DIPEA)，并将反应物在合适的温度（例如环境温度）搅拌合适的时间段，例如15-30分钟。将式(X)的化合物加入合适的溶剂（例如DMF）中，并将反应物在合适的温度（例如环境温度）搅拌合适的时间段，例如3-8小时。加入水和合适的有机溶剂（例如乙醚），并分离各层。将水层用其它有机溶剂（例如乙醚）萃取，并将合并的有机层用水洗涤，干燥（例如使用无水硫酸钠），并在减压下浓缩。可以将粗产物例如通过柱色谱法进行纯化。
式(III)的化合物可以通过式(VIII)的化合物的还原来制备：
其中R1、R2、R3、R9、R10和P如在上文中所定义。
例如，将式(VIII)的化合物溶解在合适的溶剂（例如乙醇）中，并加入含有合适的催化剂（例如炭载钯）的经吹扫的氢化烧瓶中。将得到的混合物用氮气/真空吹扫，然后在氢气氛下在合适的温度（例如环境温度）搅拌合适的时间段，例如24小时。然后将反应混合物用氮气/真空从氢气氛中吹扫。向该溶液中加入硅藻土（Celite），并将混合物搅拌合适的时间段，例如2-5分钟，然后在减压下过滤。将溶液在减压下浓缩，得到粗产物，其可以通过例如色谱法进行纯化。
式(VIII)的化合物可以通过式(IX)的化合物：
其中R1、R2和R3如在上文中所定义，
与式(X)的化合物的反应来制备：
其中R9、R10和P如在上文中所定义。
例如，向式(X)的化合物、式(IX)的化合物和合适的肽偶联剂（例如邻-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)）在合适的溶剂（例如N,N-二甲基甲酰胺）中的溶液中，加入合适的受阻碍的碱，例如N,N-二-异丙基乙胺(DIPEA)，并将反应物在合适的温度（例如环境温度）搅拌合适的时间段，例如12-18小时。加入水和合适的有机溶剂（例如乙醚），并分离各层。将水层用另外的有机溶剂（例如乙醚）萃取，并将合并的有机层用水洗涤，干燥，例如经无水硫酸钠干燥，并在真空中浓缩。使用常规技术诸如色谱法，可以纯化粗产物。
式(IX)的化合物可以通过式(XI)的化合物的水解来制备：
其中Rb是C1-6烷基，且R1、R2、R3如在上文中所定义。
例如，将式(XI)的化合物溶解在合适的溶剂（例如1:1（v/v）比例的四氢呋喃和水）中。向该溶液中加入合适的碱（例如氢氧化锂），并将反应物在合适的温度（例如环境温度）搅拌合适的时间段，例如12-18小时。将反应混合物冷却至合适的温度（例如0℃），并如下酸化：加入合适的无机酸水溶液（例如5M HCl溶液）直到pH达到约5。将浆料过滤，并将产物残余物用蒸馏水洗涤和干燥。
式(XI)的化合物可以通过式(XIV)的化合物：
其中Rb、R1和R2如在上文中所定义，且L是合适的离去基团，例如卤代基团，例如氯代，
与式(XIII)的化合物的反应来制备：
其中R3如在上文中所定义。
例如，将式(XIV)的化合物溶解在合适的溶剂（例如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)）中并在冰/水浴中冷却至合适的温度，例如约0℃。将式(XIII)的化合物在合适的溶剂（例如四氢呋喃）中的溶液在剧烈搅拌下逐滴加入，并将混合物用氮气吹扫，并加热至合适的温度（例如70-90℃）保持合适的时间段，例如3小时。将混合物经历合适的时间段（例如60-70小时）冷却至合适的温度（例如环境温度）。将反应混合物用水稀释，并在减压下过滤，得到式(XI)的化合物。
式(IV)的化合物（其中R4不是氢）可以通过式(V)的化合物的水解来制备：
其中Ra是C1-6烷基，R4不是氢，且A、B、D和R8如在上文中所定义。
例如，向式(V)的化合物在合适的溶剂（例如甲醇、四氢呋喃(THF)和水的混合物）中的混合物中，加入合适的碱（例如氢氧化锂一水合物），并将所述混合物在合适的温度（例如环境温度）在惰性气氛下（例如在氮气氛下）搅拌合适的时间段，例如1-2小时。将所述混合物在减压下浓缩，然后用合适的无机酸水溶液（例如2N HCl）处理，并通过过滤分离产物。
式(V)的化合物（其中R4不是氢）可以通过式(IV)的化合物（其中R4是氢，即式(VI)的化合物）的烷基化来制备：
其中A、B、D和R8如在上文中所定义。
例如，将合适的有机溶剂例如二甲亚砜(DMSO)加入含有合适的碱（例如氢氧化钾）的烧瓶中，并将所述混合物在惰性气氛（例如氮气氛）下搅拌合适的时间段，例如8-12分钟。加入式(VI)的化合物和合适的烷化剂（例如溴乙烷），并将所述混合物在合适的温度（例如环境温度）在惰性气氛下搅拌合适的时间段，例如18-24小时。通过缓慢地小心加入水，将反应物淬灭。加入合适的有机溶剂（例如乙醚），并将反应混合物分离进有机层和水层中。将水层用合适的有机溶剂（例如乙醚）进一步萃取，并将合并的有机层干燥（例如通过穿过疏水玻璃料），并在减压下浓缩，得到式(V)的化合物，其中R4不是氢。
式(II)的化合物也可以通过与式(VII)的化合物的缩合来制备。因此，在另一个方面，提供了通过式(VII)的化合物：
其中R4、A、B、D和R8如在上文中所定义，
与上文中定义的式(VIII)的化合物的反应来制备式(II)的化合物的方法。
例如，向式(VIII)的化合物和式(VII)的化合物在合适的溶剂（例如乙醇）中的溶液中，逐份加入合适的还原剂（例如连二亚硫酸钠）在合适的溶剂（例如水）中的溶液。将混合物用例如氮气吹扫，然后在合适的温度（例如100℃）加热合适的时间段，例如12-18小时。将反应混合物在真空下浓缩，然后用合适的溶剂（例如二氯甲烷）稀释，并加入水。将有机层收集，并将水层用另外溶剂（例如二氯甲烷）洗涤。将有机层合并，用水反洗，收集，用例如无水硫酸钠干燥，穿过疏水玻璃料过滤，并在真空下浓缩，得到粗产物。通过常规方式（例如色谱法），可以纯化粗产物。
式(VII)的化合物（其中R4不是氢）可以通过式(VII)的化合物（其中R4是氢）与式(XV)的化合物的反应来制备：
其中R4如在上文中所定义，且M是合适的离去基团，例如卤代基团，例如碘代，或烷基磺酰基，例如三氟甲磺酰基。
例如，向在惰性气氛（例如氮气氛）下在合适的温度（例如20℃）搅拌的式(VII)的化合物（其中R4是氢）和合适的碱（例如碳酸铯）在合适的有机介质（例如N,N-二甲基甲酰胺）中的混悬液中，经历合适的时间段（例如0.5-1分钟）逐滴加入式(XV)的化合物。将反应混合物在合适的温度（例如环境温度）搅拌合适的时间段，例如1小时。将反应混合物用水淬灭，在合适的有机溶剂（例如二氯甲烷）和水之间分配。将水相用合适的有机溶剂（例如二氯甲烷）萃取。将有机相用饱和盐水洗涤，经例如硫酸钠干燥，并在真空中蒸发，得到粗产物。通过常规方式（例如色谱法），可以纯化粗产物。
式(VII)的化合物（其中R4是氢）可以通过式(XVI)的化合物的去保护来制备：
其中Rc是芳基，例如苯基，且A、B、D和R8如在上文中所定义。
例如，向在合适的温度（例如环境温度）搅拌的合适的碱（例如氢氧化钾）在合适的有机溶剂（例如甲醇）中的溶液中，经历合适的时间段（例如0.5-1分钟）逐滴加入式(XVI)的化合物在合适的溶剂（例如甲醇）中的溶液。将混合物在合适的温度（例如环境温度）搅拌，直到起始原料耗尽。然后将反应混合物用水稀释，然后加入合适的有机溶剂（例如二氯甲烷）。将pH用合适的无机酸（例如浓盐酸）调至7，并用其它有机溶剂（例如二氯甲烷）萃取。然后将有机相洗涤、干燥，并除去溶剂，得到式(VII)的化合物。
式(XVI)的化合物可以从式(XVII)的化合物制备
其中Rc、A、B、D和R8如在上文中所定义。
例如，向在惰性气氛（例如氮气氛）下在合适的温度（例如-78℃）搅拌的合适的有机碱（例如二异丙胺）在合适的无水有机溶剂（例如无水四氢呋喃）中的溶液中，经历合适的时间段（例如10-20分钟）加入合适的碱（例如正丁基锂）。将反应混合物在合适的温度（例如-78℃）搅拌合适的时间段，例如20-40分钟，然后温热至合适的温度（例如环境温度）并搅拌合适的时间段，例如45-90分钟。向在惰性气氛（例如氮气氛）下在合适的温度（例如-30℃）搅拌的二异丙基氨基锂在合适的无水溶剂（例如无水四氢呋喃）中的该溶液中，经历合适的时间段（例如10-20分钟）逐滴加入式(XVII)的化合物和合适的碱（例如四甲基乙二胺）在合适的有机溶剂（例如四氢呋喃）中的溶液。将反应混合物在合适的温度（例如-30℃）搅拌合适的时间段，例如2-3小时，然后经历合适的时间段（例如1分钟）逐滴加入合适的有机溶剂，例如N,N-二甲基甲酰胺。将反应混合物在合适的温度（例如-30℃）搅拌另外合适的时间段，例如1.5-3小时。将反应混合物用水淬灭，并在合适的有机溶剂（例如二氯甲烷）和水之间分配。将有机相洗涤、干燥和蒸发，得到粗制的式(XVI)的化合物，其可以通过常规方式（例如，重结晶）进行纯化。
式(XVII)的化合物可以通过式(XVIII)的化合物：
其中A、B、D和R8如在上文中所定义，
与式(XIX)的化合物的反应来制备：
其中Rc如在上文中所定义，且Q是合适的离去基团，例如卤代基团，例如氯代。
例如，在惰性气氛（例如氮气氛）下在合适的温度（例如0℃），向式(XVIII)的化合物在合适的有机溶剂（例如四氢呋喃）中的溶液中，经历合适的时间段（例如5分钟）逐份加入合适的碱（例如氢化钠）。将反应物混合物在合适的温度（例如0℃）搅拌合适的时间段，例如30-45分钟，然后在惰性气氛（例如氮气氛）下在合适的温度（例如0℃）逐滴加入式(XIX)的化合物，然后在合适的温度（例如环境温度）搅拌合适的时间段，例如1.5-3小时，直到起始原料已经完全耗尽。将混合物倒入水中，并用合适的有机溶剂（例如乙酸乙酯）萃取。将有机相洗涤、干燥和蒸发，得到粗制的式(XVII)的化合物，其可以通过常规方式（例如，重结晶）进行纯化。
式(XX)的化合物可以通过式(XXI)的化合物的水解来制备：
其中R1、R2、R3、R4、A、B、D和R8如在上文中所定义，且Rd是烷基，例如C1-6烷基，
例如，将式(XXI)的化合物溶解在合适的溶剂中，所述溶剂是例如合适的有机溶剂和水的混合物，例如四氢呋喃(THF)和水的混合物，例如以1:1比率。向其中加入合适的碱，例如无水氢氧化锂，并将反应物在合适的温度（例如环境温度）搅拌合适的时间段，例如15-24小时。然后通过加入合适的酸（例如2M盐酸），将反应混合物中和。将混悬液过滤，并将残余物用水洗涤，并在真空中干燥，得到式(XX)的化合物。
式(XXI)的化合物可以通过上文中定义的式(VII)的化合物与上文中定义的式(XI)的化合物的反应来制备。
例如，将合适的还原剂（例如连二亚硫酸钠）在合适的溶剂（例如水）中的溶液加入到式(XI)的化合物和式(VII)的化合物在合适的介质（例如乙醇）中的混悬液中。将反应混合物加热（例如在微波炉中）至合适的温度（例如，90-110℃）保持合适的时间段，例如3-6小时。将反应混合物用合适的溶剂（例如二氯甲烷）稀释，干燥（例如使用无水硫酸钠），过滤并在减压下浓缩，得到粗产物。通过例如柱色谱法，可以纯化粗产物。
式(X)的化合物（其中R9是羟基）可以通过式(XXII)的化合物的氢解来制备：
其中P和R10如在上文中所定义，且P1是保护基，例如羧基苄基。
例如，在惰性气氛（例如氮气氛）下，将式(XXII)的化合物在合适的溶剂（例如乙醇）中的溶液加入到含有合适的催化剂（例如10%炭载钯）的氢化烧瓶中。然后将烧瓶抽真空，并用氢气回填。将系统封闭，并将混合物在氢气氛下搅拌合适的时间段，例如12-18小时。将反应混合物过滤，并用合适的溶剂（例如乙醇）洗涤，随后用其它溶剂（例如乙酸乙酯）洗涤。将合并的滤液在减压下浓缩，得到式(X)的化合物。
式(XXII)的化合物（其中-OH基团和-NHP基团相对于彼此而言是顺式的）可以通过式(XXIII)的化合物的水解来制备：
其中P和P1和R10如在上文中所定义，且P2是合适保护基，例如苯甲酰基。
例如，将合适的碱（例如碳酸钾）在合适的溶剂（例如水）中的溶液加入到式(XXIII)的化合物在合适的溶剂（例如乙醇）中的溶液中，并将所述混合物在合适的温度（例如60-70℃）搅拌18-24小时。将反应混合物在减压下浓缩，用水稀释，并使用合适的溶剂（例如二氯甲烷）萃取。将有机萃取物合并，并使用例如无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗制的式(XXII)的化合物，其中-OH基团和-NHP基团相对于彼此而言是顺式的。通过例如柱色谱法，可以纯化粗产物。
通过Mitsunobu反应，可以从式(XXII)的化合物（其中HO-和-NHP基团相对于彼此而言是反式的）制备式(XXIII)的化合物（其中P2O-和-NHP基团相对于彼此而言是顺式的）。
例如，向三苯基膦在合适的溶剂（例如四氢呋喃）中的溶液中，加入偶氮二甲酸二异丙酯，并将混合物在合适的温度（例如在冰水浴中）搅拌合适的时间段，例如10-15分钟，然后将其温热至环境温度。加入在合适的溶剂（例如四氢呋喃）中的式(XXII)的化合物（其中HO-和-NHP基团相对于彼此而言是反式的），随后加入合适的酸，例如苯甲酸。将反应物在合适的温度（例如环境温度）搅拌合适的时间段，例如18-24小时。然后将反应混合物浓缩，例如在减压下。然后使用例如柱色谱法，纯化粗产物。
式(XXII)的化合物（其中-OH基团和-NHP基团相对于彼此而言是反式的）可以通过式(XXIV)的化合物的水解来制备：
其中P1和R10如在上文中所定义。
将式(XIV)的化合物在合适的碱性溶剂混合物（例如氢氧化铵水溶液和合适的有机溶剂（例如乙醇）的混合物）中的溶液在合适的温度（例如60-80℃）搅拌合适的时间段，例如4-6小时。将反应混合物在减压下浓缩，用盐水稀释，并将有机层萃取进合适的溶剂（例如二氯甲烷）中。将合并的有机层干燥（使用例如无水硫酸钠），并在减压下浓缩，得到中间体伯胺。将残余物用合适的溶剂（例如二氯甲烷）和合适的碱（例如三乙胺）稀释，并将前体连接合适保护基，例如二碳酸二叔丁酯。将反应物搅拌合适的时间段，例如1-3小时，用例如饱和氯化铵水溶液淬灭，并分离各层。将合并的有机层干燥（使用例如疏水玻璃料）并在减压下除去溶剂，得到式(XXII)的化合物，其中-OH基团和-NHP基团相对于彼此而言是反式的。
式(XXIV)的化合物可以通过合适的过酸（例如3-氯过氧苯甲酸(3-chlorobenzoperoxoic acid)）与式(XXV)的化合物的反应来制备：
其中P1和R10如在上文中所定义。
例如，在冷却下，例如使用冰浴，在惰性气氛（例如氮气氛）下将合适的过酸（例如3-氯过氧苯甲酸）逐份加入式(XXV)的化合物(例如，可得自Fluorochem, Hadfield, Derbyshire, UK)在合适的无水溶剂（例如无水二氯甲烷）中的搅拌溶液中。使得到的混合物达到环境温度，并搅拌合适的时间段，例如12-24小时。将水加入反应混合物中，并分配各层。将有机层加入还原剂的搅拌溶液（例如焦亚硫酸钠的水溶液）中，以破坏多余的过酸。将各层分离，并将水层用合适的溶剂（例如二氯甲烷）洗涤。然后将合并的有机层干燥（例如使用无水硫酸钠），并在减压下浓缩，得到粗产物，其可以通过色谱法进行纯化。
在下述合成方案中总结了式(I)的化合物的制备：
方案 1
其中A=C、CH或N，前提条件是，至少一个A是N。
方案 2
。
方案 3
。
方案 4
。
方案 5
。
方案 6
。
方案 7
。
方案 8
。
方案 9
其中A = CH或N; R1 = CH2cPr、Et或CH2CF3；R2 = H或OMe。
方案 10
。
方案 11
其中R = iBu或CH2CH2OMe。
方案 12
。
式(VI)、(XIII)、(X)、(XIV)、(XV)、(XVIII)、(XIX)和(XXV)的化合物是在文献中已知的或商购可得的，例如得自Sigma-Aldrich,　UK,　Apollo　Scientific　Limited,　Alfa　Aesar,　Shanghai　Haoyuan　Chemexpress　Co.　Ltd,　Activate　Scientific　GmbH,　Lancaster　Synthesis　Ltd, Fluorochem,　Hadfield,　Derbyshire,　UK ，或可以通过类推用已知的方法制备，所述方法例如在合成方法的标准参考教材中公开的那些，所述标准参考教材是诸如J.　March,　Advanced　Organic　Chemistry,　第 6 版 (2007),　WileyBlackwell, 或 Comprehensive　Organic　Synthesis　(Trost　B.M.　和 Fleming　I.,　( 编 ),　Pergamon　Press,　1991)，每篇通过引用并入本文(当它涉及这样的方法时)。
可以用在本文描述的合成途径中的其它保护基的例子和它们的除去方式可以参见：T.　W.　Greene “ Protective　Groups　in　Organic　Synthesis”,　第 4 版 ,　J.　Wiley　and　Sons,　2006,　通过引用并入本文(当它涉及这样的方法时)。
对于在上文中描述的反应或方法中的任一种，可以使用加热和冷却的常规方法，分别例如控温油浴或控温热块和冰/盐浴或干冰/丙酮浴。可以使用常规分离方法，例如从水性或非水性溶剂中萃取或萃取进水性或非水性溶剂中。可以使用干燥有机溶剂、溶液或萃取物的常规方法，诸如与无水硫酸镁或无水硫酸钠一起摇动，或穿过疏水玻璃料。根据需要可以使用常规纯化方法，例如结晶和色谱法，例如硅胶(silica)色谱法或反相色谱法。使用常规溶剂诸如乙酸乙酯、甲醇、乙醇或丁醇或其含水混合物，可以进行结晶。应当理解，通常可以通过反应-监测技术（例如薄层色谱法和LC-MS）来确定具体的反应时间和温度。
在适当的情况下，使用常规方法诸如非对映异构衍生物的分步结晶或手性高效液相色谱法(手性HPLC)，可以将本发明的化合物的各种异构形式制备为各异构体。
使用常规方法，诸如X-射线晶体学或VCD (振动圆二色谱)分析，可以确定化合物的绝对立体化学。
使用方法
本发明的化合物是PAD4的抑制剂。抑制PAD4的化合物可用于治疗多种病症，例如类风湿性关节炎、血管炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤型红斑狼疮和银屑病。
本发明的治疗方法包括给有此需要的患者施用安全和有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的各实施方案包括通过给有此需要的患者施用安全和有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐来治疗任一种以上提到的病症的方法。
如本文中使用的，在提及病症时，“治疗”意指：(1)改善或预防病症或病症的一个或多个生物学表现，(2)干预(a)导致或引起病症的生物学反应级联中的一个或多个点，或(b)一个或多个病症的生物学表现，(3)缓解与病症相关的一种或多种症状或影响，或(4)减缓病症或病症的一种或多种生物学表现的进程。
如上指出的，病症的“治疗”包括病症的预防。应当理解，“预防”不是绝对的术语。在医学中，“预防”被理解为是指预防性施用药物以基本减少病症或其生物学表现的可能性或严重性，或延缓这样的病症或其生物学表现的发作。
如本文中使用的，在提及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其它药学活性剂时，“安全和有效量”意指在合理医学判断范围内足以治疗患者的状况、但低到足以避免严重的副作用(处于合理的利益/风险比)的化合物的量。化合物的安全和有效量将随以下因素而变化：所选择的具体化合物(例如，将考虑化合物的效能、效力和半衰期)；所选择的施用途径；被治疗的病症；被治疗的病症的严重程度；被治疗的患者的年龄、体格、体重和身体状况；待治疗患者的医疗史；治疗的持续时间；同时疗法的性质；期望的治疗效果；和类似的因素，但仍然可由专业技术人员常规地确定。
本文中使用的“患者”表示人(包括成人和儿童)或其它动物。在一个实施方案中，“患者”表示人。
通过任何合适的施用途径，包括全身施用和局部施用两者，可以施用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。全身施用包括口服施用、胃肠外施用、透皮施用和直肠施用。胃肠外施用表示除了肠或透皮之外的施用途径，且典型地通过注射或输注施用。胃肠外施用包括静脉内、肌内和皮下注射或输注。局部施用包括施用于皮肤以及眼内、耳、阴道内、吸入和鼻内施用。吸入表示施用至患者的肺中，不管是通过口腔还是通过鼻腔通路吸入。在一个实施方案中，可以口服施用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，可以局部施用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，可以通过吸入来施用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，可以鼻内施用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
可以一次性施用或根据给药方案施用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，在所述给药方案中，对于给定的时间段而言，在不同的时间间隔施用多个剂量。例如，每天可以施用一次、二次、三次或四次剂量。在一个实施方案中，每天施用一次剂量。在又一个实施方案中，每天施用两次剂量。可以施用剂量直至达到期望的治疗效果或无期限地施用以维持期望的治疗效果。式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的合适的给药方案取决于该化合物的药代动力学性质，例如吸收、分布和半衰期，其可以由专业技术人员确定。另外，对于式(I)的化合物或其药学上可接受的盐而言，合适的给药方案（包括施用这样的方案的持续时间）取决于被治疗的病症、被治疗的病症的严重程度、被治疗的患者的年龄和身体状况、被治疗的患者的医疗史、同时疗法的性质、期望的治疗效果和在专业技术人员的知识和专门技能内的类似因素。这样的专业技术人员还应该进一步理解，考虑到个体患者对给药方案的反应，或当随着时间推移个体患者需要变化时，可能需要调整合适的给药方案。
典型日剂量可以根据所选择的具体施用途径而变化。口服施用的典型日剂量范围为每kg总体重从0.1mg至10mg，例如每kg总体重从1mg至5mg。例如，口服施用的日剂量可以为每个患者从5mg至1g，例如每个患者5mg至500mg、或5mg至250mg。
另外，可以作为前药施用式(I)的化合物。如本文中使用的，式(I)的化合物的“前药”是所述化合物的功能性衍生物，其在施用给患者后，最终在体内释放式(I)的化合物。式(I)的化合物作为前药的施用可以使专业技术人员能做以下一项或多项：(a)修改化合物在体内的活性的起效；(b)修改化合物在体内的作用的持续时间；(c)修改化合物在体内的转运或分布；(d)修改化合物在体内的溶解性；和(e)克服使用化合物时所遇到的副作用或其它困难。用于制备前药的典型的功能性衍生物包括在体内化学地或酶促地可裂解的化合物的修饰。这样的修饰（包括磷酸酯、酰胺、酯、硫代酸酯、碳酸酯和氨基甲酸酯的制备）是本领域技术人员众所周知的。
本发明因而提供了一种治疗由不适当的PAD4活性介导的病症的方法，所述方法包括：给有此需要的患者施用安全和有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，由不适当的PAD4活性介导的病症选自：类风湿性关节炎、血管炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤型红斑狼疮和银屑病。在另一个实施方案中，由不适当的PAD4活性介导的病症是类风湿性关节炎。在另一个实施方案中，由不适当的PAD4活性介导的病症是系统性红斑狼疮。在另一个实施方案中，由不适当的PAD4活性介导的病症是血管炎。在另一个实施方案中，由不适当的PAD4活性介导的病症是皮肤型红斑狼疮。在另一个实施方案中，由不适当的PAD4活性介导的病症是银屑病。
在一个实施方案中，提供了一种治疗类风湿性关节炎、血管炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤型红斑狼疮或银屑病的方法，所述方法包括：给有此需要的人受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，提供了一种治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法包括：给有此需要的人受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了一种治疗系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括：给有此需要的人受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了一种治疗血管炎的方法，所述方法包括：给有此需要的人受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了一种治疗皮肤型红斑狼疮的方法，所述方法包括：给有此需要的人受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了一种治疗银屑病的方法，所述方法包括：给有此需要的人受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供了用在治疗中的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗由不适当的PAD4活性介导的病症的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗类风湿性关节炎、血管炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤型红斑狼疮或银屑病的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗类风湿性关节炎的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗系统性红斑狼疮的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗血管炎的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗皮肤型红斑狼疮的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗银屑病的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在药物制备中的用途，所述药物用于治疗由不适当的PAD4活性介导的病症。在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在药物制备中的用途，所述药物用于治疗类风湿性关节炎、血管炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤型红斑狼疮或银屑病。在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在药物制备中的用途，所述药物用于治疗类风湿性关节炎。在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在药物制备中的用途，所述药物用于治疗系统性红斑狼疮。在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在药物制备中的用途，所述药物用于治疗血管炎。在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在药物制备中的用途，所述药物用于治疗皮肤型红斑狼疮。在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在药物制备中的用途，所述药物用于治疗银屑病。在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于治疗或预防由不适当的PAD4活性介导的病症的药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于治疗或预防类风湿性关节炎、血管炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤型红斑狼疮或银屑病的药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于治疗或预防类风湿性关节炎的药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于治疗或预防系统性红斑狼疮的药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于治疗或预防血管炎的药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于治疗或预防皮肤型红斑狼疮的药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于治疗或预防银屑病的药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
组合物
在施用给患者之前，通常（但并不必须）将式(I)的化合物及其药学上可接受的盐配制成药物组合物。因此，在另一个方面，提供了一种药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在另一个方面，本发明涉及用于治疗或预防由不适当的PAD4活性介导的病症的药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
可以制备和以散装原料药形式(in bulk form)包装本发明的药物组合物，其中可以提取安全和有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，然后将其以例如粉剂或糖浆剂施用给患者。可替换地，可以制备和以单位剂型包装本发明的药物组合物，其中各个物理上离散的单位含有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。当以单位剂型制备时，本发明的药物组合物通常可以含有，例如，从0.25mg至1g、或从0.5mg至500mg、或从1mg至100mg式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的药物组合物通常含有一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
本文中使用的“药学上可接受的赋形剂”意指涉及给药物组合物提供形状或稠度的药学上可接受的材料、组合物或媒介物。当混合时，每种赋形剂必须与药物组合物的其它成分相容，从而避免当向患者施用时实质性降低式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的效力的相互作用和导致药学不可接受的药物组合物的相互作用。另外，每种赋形剂当然必须是药学上可接受的，例如具有足够高纯度。
通常将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂配制成适合通过期望的施用途径施用给患者的剂型。例如，剂型包括适合于以下施用途径的那些剂型：(1)口服施用，例如片剂、胶囊剂、小胶囊、丸剂、糖锭、粉剂、糖浆剂、酏剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、药囊剂和扁囊剂；(2)胃肠外施用，例如用于重构的无菌溶液、混悬液和粉剂；(3)透皮施用，例如透皮贴剂；(4)直肠施用，例如栓剂；(5)吸入，例如气雾剂、溶液剂和干粉剂；和(6)局部施用，例如乳膏剂、软膏剂、洗剂、溶液剂、糊剂、喷雾剂、泡沫剂和凝胶剂。
合适的药学上可接受的赋形剂将根据所选择的特定剂型而变化。另外，可以为了特定功能选择合适的药学上可接受的赋形剂，它们可以在组合物中起作用。例如，可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够促进均一剂型的生产。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为使它们能够促进稳定剂型的生产。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们一旦施用给患者后能够促进一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐从身体的一个器官或部分携带或转运到或身体的另一个器官或部分。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够增强患者顺应性。
合适的药学上可接受的赋形剂包括以下类型的赋形剂：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、造粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、矫味剂、气味遮蔽剂、着色剂、抗结块剂、保湿剂、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。专业技术人员会明白，某些药学上可接受的赋形剂可以提供不止一种功能，并可以起替代功能，这取决于多少赋形剂存在于制剂中和哪些其它赋形剂存在于制剂中。
专业技术人员拥有本领域的知识和技能，以使他们能够选择用于本发明的适当量的合适的药学上可接受的赋形剂。另外，专业技术人员可得到描述药学上可接受的赋形剂并可以用于选择合适的药学上可接受的赋形剂的多种资源。例子包括：Remington's　Pharmaceutical　Sciences　(Mack　Publishing　Company),　The　Handbook　of　Pharmaceutical　Additives　(Gower　Publishing　Limited),　和The　Handbook　of　Pharmaceutical　Excipients　(the　American　Pharmaceutical　Association　and　the　Pharmaceutical　Press) 。
使用本领域技术人员已知的技术和方法，制备本发明的药物组合物。在Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company)中描述了一些本领域中常用的方法。
因此，在另一个方面，本发明涉及制备包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物的方法，该方法包括混合诸成分。通过例如在环境温度和大气压下混合，可以制备包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
在一个实施方案中，将所述式(I)的化合物或其药学上可接受的盐配制成用于口服施用。在另一个实施方案中，将所述式(I)的化合物或其药学上可接受的盐配制成用于吸入施用。在另一个实施方案中，将所述式(I)的化合物或其药学上可接受的盐配制成用于鼻内施用。
在一个方面，本发明涉及包含安全和有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和稀释剂或填充剂的固体口服剂型，例如片剂或胶囊剂。合适的稀释剂和填充剂包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶化淀粉)、纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)、硫酸钙和磷酸氢钙。口服固体剂型还可以包含粘合剂。合适的粘合剂包括淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶化淀粉)、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、海藻酸、黄蓍胶、瓜尔胶、聚维酮和纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)。口服固体剂型还可以包含崩解剂。合适的崩解剂包括交聚维酮、淀粉羟乙酸钠、交联羧甲纤维素(croscarmelose)、海藻酸和羧甲基纤维素钠。口服固体剂型还可以包含滑润剂。合适的滑润剂包括硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙和滑石。
在适当时，可以将用于口服施用的剂量单位制剂微囊化。例如通过将微粒原料包衣或包埋在聚合物、蜡等中，也可以制备延长或维持释放的组合物。
式(I)的化合物或其药学上可接受的盐也可以与作为可靶向的药物载体的可溶性聚合物偶联。这样的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰残基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。此外，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可以偶联至在实现药物控释中有用的一类可生物降解的聚合物，例如，聚乳酸、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。
在另一个方面，本发明涉及一种液体口服剂型。可以以剂量单位形式制备口服液诸如溶液、糖浆剂和酏剂，使得给定的量含有预定量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。通过将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐溶解在适当地调味的水溶液中，可以制备糖浆剂，而酏剂通过使用无毒的醇性媒介物来制备。通过将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐分散在无毒的媒介物中，可以配制混悬剂。也可以加入增溶剂和乳化剂（诸如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚）、防腐剂、风味添加剂诸如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人工甜味剂等。
在另一方面，本发明涉及适合于通过吸入（例如作为干粉剂、气雾剂、混悬剂或溶液组合物）来施用给患者的剂型。
通过吸入递送至肺的干粉剂组合物通常包含与作为精细粉碎的粉末的一种或多种药学上可接受的赋形剂一起的、作为精细粉碎的粉末的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。特别适合用于干粉剂的药学上可接受的赋形剂为本领域技术人员已知，并且包括乳糖、淀粉、甘露醇和单糖、二糖和多糖。通过例如，微粉化和碾磨，可以制备精细粉碎的粉末。一般来说，尺寸减小的(例如微粉化的)化合物可以通过约1至约10微米的D50值(例如，如使用激光衍射法测量的)来定义。
可以经由储库干粉吸入器(RDPI)给患者施用干粉剂，所述储库干粉吸入器具有适宜储存干粉形式的药物的多剂量(未经计量的剂量)的储库。RDPI通常包括用于计量从储库至递送位置的每个药物剂量的装置。例如，计量装置可以包括计量杯，其可以从第一位置移动至第二位置，在所述第一位置，所述杯可以装载来自储库的药物，在所述第二位置，使计量的药物剂量可用于患者吸入。
可替换地，干粉剂可以存在于用于多剂量干粉吸入器(MDPI)的胶囊(例如明胶或塑料)、药筒或泡罩包装中。MDPI是这样的吸入器：其中将药物包含在多剂量包装中，所述多剂量包装含有(或以其它方式携带)多个确定剂量(或其部分)的药物。当干粉剂呈现为泡罩包装时，其包括多个用于容纳干粉形式的药物的泡罩。泡罩通常以规则的方式排列，以易于使药物从其中释放。例如，通常可以在圆盘型泡罩包装上以圆形方式排列泡罩，或可以将泡罩拉长呈例如包括条或带的形式。每个胶囊、药筒或泡罩可以例如含有200 μg-10mg式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
通过将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐悬浮或溶解于液化推进剂中，可以形成气雾剂。合适的推进剂包括卤代烃、烃类和其它液化气。代表性的推进剂包括：三氯氟甲烷(推进剂11)、二氯氟甲烷(推进剂12)、二氯四氟乙烷(推进剂114)、四氟乙烷(HFA-134a)、1,1-二氟乙烷(HFA-152a)、二氟甲烷(HFA-32)、五氟乙烷(HFA-12)、七氟丙烷(HFA-227a)、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟戊烷、丁烷、异丁烷和戊烷。通常经由计量剂量吸入器(MDI)将包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的气雾剂施用给患者。这样的装置是本领域技术人员已知的。
气雾剂可以含有通常与MDI一起使用的额外的药学上可接受的赋形剂，诸如表面活性剂、润滑剂、共溶剂和其它赋形剂，以改善制剂的物理稳定性、改善阀门性能、改善溶解性或改善味道。
因而，作为本发明的另一个方面，提供了药用气雾剂制剂，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和作为推进剂的碳氟化合物或含氢的含氯氟烃(任选地与表面活性剂和/或共溶剂组合)。
根据本发明的另一个方面，提供了药用气雾剂制剂，其中所述推进剂选自1,1,1,2-四氟乙烷、1,1,1,2,3,3,3-七氟-正丙烷及其混合物。
通过加入合适的缓冲剂，可以缓冲本发明制剂。
可以配制用在吸入器或吹入器中的胶囊和药筒（例如由明胶制成），所述胶囊和药筒含有用于吸入式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和合适的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。每个胶囊或药筒通常可以含有从200 μg至10mg式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。可替换地，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可以不与赋形剂(例如乳糖)一起存在。
式(I)的活性化合物或其药学上可接受的盐在本发明的局部组合物中的比例取决于将要制备的制剂的确切类型，但是通常将在0.01-10重量%的范围内。通常，对于大多数制剂类型而言，所用的比例将在0.05-1%（例如0.1-0.5%）的范围内。
优选地安排气雾剂制剂，使得每个计量的剂量或“一喷”的气雾剂含有20 μg至10mg、优选地20 μg至5mg、更优选约20 μg至0.5mg的式(I)的化合物。施用可以是每日一次或每日数次，例如2、3、4或8次，每次施用例如1、2或3个剂量。气雾剂的每日总剂量将在100 μg至10mg、例如200 μg至5mg的范围内。在吸入器或吹入器中由胶囊和药筒递送的每日总剂量和计量的剂量一般将为气雾剂制剂递送的二倍。
在混悬液气雾剂制剂的情况下，微粒(例如，微粉化的)药物的粒径应该例如在施用气雾剂制剂后允许基本上所有的药物吸入到肺中，并因而小于100微米，理想地小于20微米，和特别地在1-10微米，诸如1-5微米、更优选地2-3微米的范围内。
可以如下制备本发明的制剂：在适当容器中，例如，借助于声处理或高剪切混合器，将药物和式(I)的化合物或其药学上可接受的盐分散或溶解在选择的推进剂中。理想地在控制湿度的条件下实施该方法。
通过本领域技术人员众所周知的的技术，可以确定根据本发明的气雾剂制剂的化学和物理稳定性和药学可接受性。因而，例如，通过HPLC测定，例如，在产品的长期储存以后，可以确定组分的化学稳定性。例如，从其它常规分析技术，例如，通过泄漏试验、通过阀门递送测定(每次致动的平均射出重量)、通过剂量再现性测定(每次致动的活性成分)和喷雾分布分析，可以得到物理稳定性数据。
通过常规技术，例如，通过使用背光散射仪测量絮结产物尺寸分布，或通过使用分级冲撞法或使用“二室碰撞取样器”分析方法测量颗粒尺寸分布，可以测量根据本发明的混悬液气雾剂制剂的稳定性。如在本文使用的，对“二室碰撞取样器”测定的提及意指如在英国药典(British Pharmacopaeia)1988，第A204-207页，附录XVIIC中定义的“使用器械A确定发射剂量在加压吸入中的沉积（Determination of the deposition of the emitted dose in pressurised inhalations using apparatus A）”。这样的技术能够计算气雾剂制剂的“可吸入的分数(respirable fraction)”。一种用于计算“可吸入的分数”的方法是通过参考“细颗粒分数(fine particle fraction)”，其为使用以上描述的二室碰撞取样器法的每次致动在下碰撞室(lower impingement chamber)中收集的活性成分的量（表达为每次致动所递送的活性成分的总量的百分比）。
术语“计量剂量吸入器”或MDI意指包括罐、盖在罐上的安全帽(secured cap)和置于帽中的制剂计量阀的单元。MDI系统包括合适的导管装置(channeling device)。合适的导管装置包括，例如，阀致动器和圆柱形或锥样通道（药物可以穿过该通道从填充的小罐(canister)经由计量阀传递至患者的鼻或口），例如口器致动器。
MDI小罐一般包括能够经受住所用推进剂的蒸汽压的容器，例如塑料或塑料-涂敷的玻璃瓶或优选金属罐，例如，铝或其合金，可以任选对其进行阳极电镀处理、漆涂层和/或塑料-涂层处理(例如通过引用WO96/32099结合于本文，其中内表面的部分或全部用任选联合一种或多种非-碳氟聚合物的一种或多种碳氟聚合物涂敷)，其容器用计量阀闭合。经由超声波焊接、螺旋接头或卷边压接，可以将帽紧固在罐上。可以通过本领域的方法制备本文讲述的MDI(例如参见Byron(如上)和WO96/32099)。优选小罐配有帽部件，其中药物-计量阀安置在帽中，并将所述帽卷边压接在合适的位置。
在本发明的一个实施方案中，罐的金属内表面涂敷氟聚合物，所述氟聚合物更优选地与非-氟聚合物混合。在本发明的另一个实施方案中，罐的金属内表面涂敷聚四氟乙烯(PTFE)和聚醚砜(PES)的聚合物混合物。在本发明的再一个实施方案中，罐的全部金属内表面涂敷聚四氟乙烯(PTFE)和聚醚砜(PES)的聚合物混合物。
将计量阀设计为每次致动递送计量的量的制剂，并且包含垫圈以防止推进剂通过阀门渗漏。所述垫圈可以包括任何合适的弹性体材料，例如，低密度聚乙烯橡胶、氯丁基橡胶、溴丁基橡胶、EPDM橡胶、黑色和白色丁二烯-丙烯腈橡胶、丁基橡胶和氯丁橡胶。合适的阀门可商购得自气雾剂工业众所周知的制造商，例如，Valois, France (例如DF10, DF30, DF60)、Bespak plc, UK (例如BK300, BK357)和3M-Neotechnic Ltd, UK (例如SpraymiserTM)。
在不同的实施方案中，MDI也可以与其它结构结合使用，所述其它结构例如，但不限于，用于存储和容纳MDI的外包装包，包括在美国专利号6, 119, 853、6, 179, 118、6, 315, 112、6, 352, 152、6, 390, 291和6, 679, 374中描述的那些外包装包，以及剂量计数器单元，例如，但不限于，在美国专利号6,360,739和6,431,168中描述的那些剂量计数器单元。
可以采用药用气雾剂制备领域的技术人员众所周知的常规大批量制造方法和机器来制备大规模批次的填充小罐商品。从而，例如，在一种用于制备混悬液气雾剂制剂的大批量制造方法中，将计量阀卷边压接在铝罐上以形成空的小罐。将微粒药物加至装料容器中，并将液化推进剂与任选的赋形剂一起通过装料容器加压装填进制备容器中。在再循环至填充机之前将药物混悬物混合，然后将药物混悬液的一个等分试样通过计量阀填充进小罐中。在用于制备溶液气雾剂制剂的一个示例性大批量制造方法中，将计量阀卷边压接在铝罐上以形成空的小罐。将液化推进剂与任选的赋形剂和溶解的药物一起通过装料容器加压装填进制备容器中。
在一种替代方法中，在足够冷以确保制剂不会蒸发的条件下将液化制剂的一个等分试样加至开口小罐中，然后将计量阀卷边压接在小罐上。
通常，在为药用制备的批次中，对每个填充的小罐检核重量，打印批号，并在释放试验之前装入托盘中储存。
也可以经由喷雾器给患者施用包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的混悬液和溶液。用于喷雾法的溶剂或混悬液试剂可以为任何药学上可接受的液体，例如水、盐水溶液、醇或二醇，如乙醇、异丙醇、丙三醇、丙二醇、聚乙二醇等或其混合物。盐水溶液利用盐，所述盐在施用后几乎不或根本不显示药理活性。有机盐，诸如碱金属或铵卤素盐，例如，氯化钠、氯化钾，或有机盐，诸如钾、钠和铵盐或有机酸，例如，抗坏血酸、柠檬酸、乙酸、酒石酸等，可以用于该目的。
可以将其它药学上可接受的赋形剂加入混悬液或溶液中。通过加入以下物质，可以稳定式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：无机酸，例如，盐酸、硝酸、硫酸和/或磷酸；有机酸，例如，抗坏血酸、柠檬酸、乙酸和酒石酸等，络合剂诸如EDTA或柠檬酸及其盐；或抗氧化剂诸如抗氧化剂诸如维生素E或抗坏血酸。这些可以单独地或一起使用以稳定式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。可以加入防腐剂，诸如苯扎氯铵或苯甲酸及其盐。特别地，可以加入表面活性剂以改善混悬液的物理稳定性。这些包括卵磷脂、二辛基磺基琥珀酸二钠、油酸和脱水山梨糖醇酯。
在另一个方面，本发明涉及适合于鼻内施用的剂型。
用于向鼻施用的制剂可以包括加压的气雾剂制剂和通过加压泵向鼻施用的水性制剂。未加压的且适合局部施用至鼻腔的制剂是特别感兴趣的。为此目的，合适的制剂含有水作为稀释剂或载体。可以给用于向肺或鼻施用的水性制剂提供常规赋形剂，例如缓冲剂、张力调节剂等。也可以通过喷雾法向鼻施用水性制剂。
可以将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐配制为从流体分配器、例如具有分配喷嘴或分配孔口的流体分配器递送的流体制剂，在向流体分配器的泵机构施加使用者应用的力后，穿过所述分配喷嘴或分配孔口分配计量剂量的流体制剂。通常给这样的流体分配器提供多计量剂量的流体制剂的储库，所述剂量在连续泵致动后可分配。可以将分配喷嘴或孔口构造成用于插进使用者的鼻孔中，用于将流体制剂喷雾分配进入鼻腔中。在WO 05/044354 (其整个内容特此通过引用并入本文)中描述和例示了前述类型的流体分配器。该分配器具有容纳流体排出装置的壳体，所述流体排出装置具有安装在含流体制剂的容器上的压缩泵。所述壳体具有至少一个手指可操作的侧杆，所述侧杆可以相对于壳体向内移动，使壳体中的容器向上凸起，以造成泵压缩并通过壳体的鼻喷嘴从泵杆泵出计量剂量的制剂。在一个实施方案中，流体分配器具有在WO 05/044354的图30-40中例示的一般类型。
适合于鼻内施用的、其中载体是固体的药物组合物，包括具有例如在20至500微米范围内的粒径的粗粉，所述粗粉通过从保持靠近鼻子的粉末容器经鼻道快速吸入而施用。用于作为鼻喷雾剂或作为滴鼻剂施用的、其中的载体是液体的合适组合物，包括式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的水或油溶液。
适合于透皮施用的药物组合物可以呈现为不连续的贴剂，其意图与患者的表皮保持紧密接触延长的时间段。例如，可以通过如一般地在Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986)中描述的离子透入法从贴剂递送活性成分。
可以将适合于局部施用的药物组合物配制为软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。
例如，用水性或油性基质，加入合适的增稠剂和/或胶凝剂和/或溶剂，可以配制软膏剂、乳膏剂和凝胶剂。因而，这样的基质可以例如包括水和/或油，例如液体石蜡或植物油，例如花生油或蓖麻油，或溶剂，例如聚乙二醇。可以根据基质的性质使用的增稠剂和胶凝剂包括软石蜡、硬脂酸铝、鲸蜡硬脂醇、聚乙二醇、羊毛脂、蜂蜡、羧聚乙烯和纤维素衍生物，和/或单硬脂酸甘油酯和/或非离子型乳化剂。
洗剂可以用水性或油性基质配制，且通常也含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂或增稠剂。
借助于任何合适的粉剂基质，例如，滑石、乳糖或淀粉，可以形成外用的粉剂。可以用也包含一种或多种分散剂、增溶剂、助悬剂或防腐剂的水性或非水性基质配制滴剂。
通过向受影响的区域每天应用一次或多次，可以施用局部制剂；可以有利地在皮肤区域上面使用封闭敷料。通过粘附性储库系统可以实现连续的或延长的递送。
为了治疗眼或其它外部组织，例如口和皮肤，可以施用作为局部软膏剂或乳膏剂的组合物。当配制为软膏剂时，可以与石蜡族的或水可混溶的软膏剂基质一起使用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。可替换地，可以用水包油乳膏剂基质或油包水基质将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐配制在乳膏剂中。
适合于胃肠外施用的药物组合物包括水性的和非水性的无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得制剂与目标受者的血液等张的溶质；和水性的和非水性的无菌混悬液，其可以包括助悬剂和增稠剂。所述组合物可以呈现在单位剂量或多次剂量容器（例如密封的安瓿和管形瓶）中，并可以储存于冷冻干燥(低压冻干)条件(仅需要在临用之前加入无菌液体载体，例如注射用水)中。可以从无菌的粉剂、颗粒剂和片剂制备即用型注射溶液和混悬液。
通过下述非限制性实施例，现在将举例说明本发明。
一般方法
除非另外说明，起始原料是商购可得的。所有溶剂和市售的试剂都是实验室等级，且以原样使用。
在表示非对映异构体且仅提及相对立体化学的情况下，使用粗体或虚线键符号。在已知绝对立体化学且所述化合物是单一对映异构体的情况下，在适当时使用粗体或虚线楔形符号。
分析方法
方法 A
在40摄氏度在Acquity UPLC BEH C18柱(50mm x 2.1mm内径，1.7µm填充物直径)上进行LCMS，用10 mM的用氨溶液调至pH 10的碳酸氢铵水溶液(溶剂A)和乙腈(溶剂B)使用下述洗脱梯度洗脱：0-1.5min：1-97%B，1.5-1.9min：97%B，1.9-2.0min：100%B，流速为1ml/min。紫外检测是得自210nm至350nm的波长的总信号。使用交替扫描正和负电喷射，在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
方法 B
在40摄氏度在Acquity UPLC BEH C18柱(50mm x 2.1mm内径，1.7µm填充物直径)上进行LCMS，用0.1%v/v的甲酸在水中的溶液(溶剂A)和0.1%v/v的甲酸在乙腈中的溶液(溶剂B)使用下述洗脱梯度洗脱：0-1.5min：3 -100%B，1.5-1.9min：100%B，1.9-2.0min：3%B，流速为1ml/min。紫外检测是得自210nm至350nm的波长的总信号。使用交替扫描正和负电喷射，在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
方法 C
在40摄氏度在Acquity UPLC BEH C18柱(50mm x 2.1mm内径，1.7µm填充物直径)上进行LCMS，用0.1%v/v的三氟乙酸在水中的溶液(溶剂A)和0.1%v/v的三氟乙酸在乙腈中的溶液(溶剂B)使用下述洗脱梯度洗脱：0-1.5min：3-100%B，1.5-1.9min：100%B，1.9-2.0min：3%B，流速为1ml/min。紫外检测是得自210nm至350nm的波长的总信号。使用交替扫描正和负电喷射，在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
方法 D
在40摄氏度在HALO C18柱(50mm x 4.6mm内径，2.7µm填充物直径)上进行LCMS，用0.1%v/v的甲酸在水中的溶液(溶剂A)和0.1%v/v的甲酸在乙腈中的溶液(溶剂B)使用下述洗脱梯度洗脱：0-1.8min：5%B，1.8-2.01min：100%B，2.01-2.8min：5%B，流速为1.5ml/min。紫外检测是在以下波长的总信号：214nm和254nm。MS：离子源：ESI；检测器电压：1.4 KV；加热块温度：250℃；CDL温度：250℃；喷雾器气体流量：1.5 mL/min。
方法 E
在40摄氏度在HALO C18柱(50mm x 4.6mm内径，2.7µm填充物直径)上进行LCMS，用0.1%v/v的甲酸在水中的溶液(溶剂A)和0.1%v/v的甲酸在乙腈中的溶液(溶剂B)使用下述洗脱梯度洗脱：0-1min：5%B，1-2.01min：95%B，2.01-2.5min：5%B，流速为1.8ml/min。紫外检测是在以下波长的总信号：214nm和254nm。MS：离子源：ESI；干燥气体流量：10L/min；喷雾器压力：45psi；干燥气体温度：330℃；毛细管电压：4000V。
一般 GC 方法
在具有Agilent毛细管柱HP-5 (0.25um x 30m,内径0.25mm)的Agilent 6890/5973 GCMS设备上进行GCMS。初始温度是50℃。平衡时间是0.50min。初始时间是1.00min。然后将温度以10°/min的速率升高至180℃，然后以20℃/min的速率升高至240℃，然后在240℃保持5.00min。注射模式是无分流。气体流量是1.00ml/min，总流量是23.2ml/min。平均速度是36cm/秒。获取模式是扫描。电离方法是70eV EI (电子电离)。
使用Bruker DPX 400MHz或AV 600MHz波谱测定仪（参考四甲基硅烷），记录1H NMR谱。
硅胶色谱法技术包括自动化的(Flashmaster, Biotage SP4)技术或在预填充柱(SPE)或手工填充快速柱上的手工色谱法。
当在化合物或试剂的名称后面给出商业供应商的名称时，例如“化合物X (Aldrich)”或“化合物X/Aldrich”，这意味着，化合物X可得自某一商业供应商，诸如提及的商业供应商。
类似地，当在化合物的名称后面给出文献或专利参考文献时，例如“化合物Y (EP 0 123 456)”，这意味着，在提及的参考文献中描述了该化合物的制备。
使用在ChemBioDraw Ultra v12内的化合物命名程序，或可替换地使用“ACD Name Pro 6.02”，已经得到中间体和实施例的名称。
一般 MDAP 纯化方法
下面列出了在化合物纯化中已经使用或可以使用的、质量导向的自动制备型色谱法(MDAP)方法的实施例。
MDAP ( 方法 A). 在环境温度在Xbridge C18柱(100mm x 30mm内径，5 μm填充物直径)上进行HPLC分析，用10mM的用氨溶液调至pH 10的碳酸氢铵水溶液(溶剂A)和乙腈(溶剂B)使用下述洗脱梯度洗脱：
时间(min) 流速(ml/min) %A %B
0 40 85 15
1 40 85 15
10 40 45 55
11 40 1 99
15 40 1 99
紫外检测是得自210nm至350nm的波长的平均信号。使用交替扫描正和负电喷射，在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
MDAP ( 方法 B). 在环境温度在Xbridge C18柱(100mm x 30mm内径，5 μm填充物直径)上进行HPLC分析，用10mM的用氨溶液调至pH 10的碳酸氢铵水溶液(溶剂A)和乙腈(溶剂B)使用下述洗脱梯度洗脱：
时间(min) 流速(ml/min) %A %B
0 40 85 15
1 40 85 15
20 40 45 55
21 40 1 99
25 40 1 99
紫外检测是得自210nm至350nm的波长的平均信号。使用交替扫描正和负电喷射在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
MDAP ( 方法 C). 在环境温度在Sunfire C18柱(150mm x 30mm内径，5µm填充物直径)上进行HPLC分析，用0.1%v/v的三氟乙酸在水中的溶液(溶剂A)和0.1%v/v的三氟乙酸在乙腈中的溶液(溶剂B)使用下述洗脱梯度洗脱：
时间(min) 流速(ml/min) %A %B
0 40 100 0
3 40 100 0
3.5 30 100 0
24.5 30 70 30
25 30 1 99
32 30 1 99
紫外检测是得自210nm至350nm的波长的平均信号。使用交替扫描正和负电喷射在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
MDAP ( 方法 D). 在环境温度在Sunfire C18柱(150mm x 30mm内径，5µm填充物直径)上进行HPLC分析，用10mM的用氨溶液调至pH 10的碳酸氢铵水溶液(溶剂A)和乙腈(溶剂B)使用下述洗脱梯度洗脱：
时间(min) 流速(ml/min) %A %B
0 40 100 0
3 40 100 0
3.5 30 100 0
24.5 30 70 30
25 30 1 99
32 30 1 99
紫外检测是得自210nm至350nm的波长的平均信号。使用交替扫描正和负电喷射在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
MDAP ( 方法 E). 在环境温度在Xbridge C18柱(100mm x 30mm内径，5 μm填充物直径)上进行HPLC分析，用10mM的用氨溶液调至pH 10的碳酸氢铵水溶液(溶剂A)和乙腈(溶剂B)使用历时15或25分钟的0-100%溶剂B的洗脱梯度洗脱。
紫外检测是得自210nm至350nm的波长的平均信号。使用交替扫描正和负电喷射，在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
MDAP ( 方法 F). 在环境温度在Sunfire C18柱(150mm x 30mm内径，5µm填充物直径)上进行HPLC分析，用0.1%v/v的三氟乙酸在水中的溶液(溶剂A)和0.1%v/v的三氟乙酸在乙腈中的溶液(溶剂B)使用历时15或25分钟的0-100%溶剂B的洗脱梯度洗脱。
紫外检测是得自210nm至350nm的波长的平均信号。使用交替扫描正和负电喷射，在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
MDAP ( 方法 G). 在环境温度在Sunfire C18柱(150mm x 30mm内径，5µm填充物直径)上进行HPLC分析，用0.1%的甲酸在水中的溶液(溶剂A)和0.1%的甲酸在乙腈中的溶液(溶剂B)使用历时15或25分钟的0-100%溶剂B的洗脱梯度洗脱。
紫外检测是得自210nm至350nm的波长的平均信号。使用交替扫描正和负电喷射，在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
一般手性 HPLC 方法
方法 A: 手性分析色谱法
。
方法 B: 手性制备型色谱法
。
方法 C: 手性制备型色谱法
初始条件：
。
使用初始条件，取峰的前缘的最初截除物。这产生期望的首先洗脱的异构体的富集的截除物，然后使用第二种条件将其进一步纯化。
第二种条件：
。
方法 D: 手性制备型色谱法
。
中间体
中间体 1: 1-( 苯基磺酰基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
在氮气下在0℃，向1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(20 g, 169 mmol, (可得自，例如Sigma Aldrich)在四氢呋喃(THF) (250 mL)中的溶液中，历时5 min逐份加入氢化钠(10.16 g, 254 mmol)。将反应混合物在0℃搅拌30 min，然后在氮气下在0℃逐滴加入苯磺酰氯，然后在室温搅拌2 h，直到起始原料已经完全耗尽(TLC, EtOAc:PE = 1:1)。将混合物倒入H2O (200 mL)中，并用EtOAc (3×200 mL)萃取。将有机层用盐水(3 x 150 mL)洗涤，经Na2SO4干燥和过滤。将溶剂在真空中蒸发，得到粗产物，将其通过用(EtOAc和PE)重结晶进行纯化，得到作为白色固体的期望产物(30 g, 69%)。
LCMS (方法D): Rt = 1.76 min, MH+ = 259。
中间体 2: 1-( 苯基磺酰基 )-1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶
与中间体1类似地从1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(可得自，例如，Apollo Scientific Ltd)开始制备。
1H NMR (DMSO-d6): 9.24 (1H, s, CH), 8.40 (1H, d, CH), 8.11-8.08 (3H, m, CH), 7.82-7.62 (4H, m, CH), 6.95 (1H, d, CH)。
中间体 3: 1-( 苯基磺酰基 )-1H- 吡咯并 [3,2-c] 吡啶
与中间体1类似地从1H-吡咯并[3,2-c]吡啶(可得自，例如，Apollo Scientific Ltd)开始制备。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm: 8.91 (1H, s, CH), 8.46 (1H, d, CH), 8.07 (2H, d, CH), 7.96-7.92 (2H, m, CH), 7.74 (1H, t, CH), 7.64 (2H, t, CH), 6.99 (1H, d, CH)。
中间体 4: 1-( 苯基磺酰基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醛
向在氮气下在-78℃搅拌的二异丙胺(4.13 mL, 0.029 mol)在无水四氢呋喃(THF) (50 mL)中的溶液中，历时15 min加入nBuLi (10.42 mL, 0.026 mol)。将反应混合物在-78℃搅拌30 min。然后温热至室温并搅拌1 h。向在氮气下在-30℃搅拌的该LDA在无水四氢呋喃(THF)(250 mL)中的溶液中，历时15 min逐滴加入1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(5g, 19.36 mmol)和TMEDA (4.38 mL, 29.0 mmol)在四氢呋喃(THF) (150 mL)中的溶液。将反应混合物在-30℃搅拌2.5 h，然后历时1 min逐滴加入DMF (3 mL, 38.7 mmol)。将反应混合物在-30℃搅拌另外2 h，TLC和LC-MS表明完全转化。将反应混合物用水淬灭，并在二氯甲烷(700 mL)和水(100 mL)之间分配。将有机相用水(3 x 100 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，并在真空中蒸发，得到作为黄色固体的粗产物。将其通过重结晶(EtOAc和PE)进行纯化，得到作为黄色固体的期望产物——1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(4.8 g, 78%)。
1H NMR (DMSO-d6): 10.45 (1H, s, CH), 8.58 (1H, dd, CH), 8.24-8.16 (3H, m, CH), 7.74 (1H, t, CH), 7.66-7.58 (3H, m, CH), 7.41 (1H, dd, CH)。
中间体 5: 1-( 苯基磺酰基 )-1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -2- 甲醛
与中间体4类似地从1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶开始制备。
1H NMR (DMSO-d6): 10.43 (1H, s, CH), 8.68 (1H, dd, CH), 8.55 (1H, d, CH), 8.02 (2H, dd, CH), 7.76-7.72 (2H, m, CH), 7.62-7.56 (3H, m, CH)。
中间体 6: 1-( 苯基磺酰基 )-1H- 吡咯并 [3,2-c] 吡啶 -2- 甲醛
与中间体4类似地从1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶开始制备。
LCMS (方法D): Rt = 1.39 min, MH+ = 286.9。
中间体 7: 1 1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醛
向在氮气下在室温搅拌的1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(2.5 g, 8.73 mmol)在甲醇(50 mL)中的溶液中，历时1 min逐滴加入KOH (1.96 g, 34.9 mmol)在水(5 mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌30 min，TLC表明完全转化。将反应混合物用H2O (150 mL)稀释，用二氯甲烷(3 x 150 mL)萃取，并将有机相用饱和盐水(3 x 50 mL)、水100 mL洗涤，经硫酸钠干燥并在真空中蒸发，得到作为黄色固体的标题化合物(1 g, 54.9%收率)，将其不经进一步纯化用在下一反应中。
1H NMR (DMSO-d6): 12.51 (1H, br s, NH), 9.90 (1H, s, CH), 8.48 (1H, dd, CH), 8.21 (1H, d, CH), 7.41 (1H, s, CH), 7.20 (1H, dd, CH)。
中间体 8: 1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -2- 甲醛
与中间体7类似地从1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲醛开始制备。
1H NMR (DMSO-d6): 12.40 (1H, br s, NH), 9.99 (1H, s, CH), 8.87 (1H, s, CH), 8.19 (1H, d, CH), 7.74 (1H, dd, CH), 7.42 (1H, s, CH)。
中间体 9: 1H- 吡咯并 [3,2-c] 吡啶 -2- 甲醛
与中间体7类似地从1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛开始制备。
1H NMR (DMSO-d6): 12.34 (1H, br s, NH), 9.94 (1H, s, CH), 9.07 (1H, s, CH), 8.34 (1H, d, CH), 7.57 (1H, s, CH), 7.41 (1H, d, CH)。
中间体 10: 1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醛
向在氮气下在20℃搅拌的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(700 mg, 4.79 mmol)和Cs2CO3 (3121 mg, 9.58 mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(DMF) (20 mL)中的混悬液中，历时0.5 min逐滴加入碘乙烷(0.581 mL, 7.18 mmol)。将反应混合物在室温搅拌1 h，TLC表明完全转化。
在一个单独的反应中：向在氮气下在20℃搅拌的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(600 mg, 4.11 mmol)和Cs2CO3 (2675 mg, 8.21 mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(DMF) (20 mL)中的混悬液中，历时0.5 min逐滴加入碘乙烷(0.498 mL, 6.16 mmol)。将反应混合物在室温搅拌1 h，TLC表明完全转化。
将合并的反应混合物用水淬灭，在二氯甲烷(100 mL)和水(50 mL)之间分配。将水相用二氯甲烷(3 x 100mL)萃取。将有机相用饱和盐水(3 x 50 mL)洗涤，经硫酸钠干燥并在真空中蒸发，得到作为黄色油的粗产物。将粗产物通过硅胶柱(Hex/EtOAc, 10/1)纯化，得到标题化合物(511 mg, 32%)。
LCMS (方法E): Rt = 1.45 min, MH+ = 175.1。
中间体 11: 1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -2- 甲醛
与中间体10类似地从1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲醛开始制备。GCMS: Rt = 14.32 min, M+ = 174。
中间体 12: 1- 乙基 -1H- 吡咯并 [3,2-c] 吡啶 -2- 甲醛
与中间体10类似地从1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛开始制备。
LCMS (方法E): Rt = 0.61 min, MH+ = 175.1。
中间体 13: 1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醛
将氢化钠(60.2 mg, 1.51 mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20 mL)中的溶液在0℃搅拌10 min。加入1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(200 mg, 1.37 mmol)，将混合物在0℃搅拌30 min，并在室温搅拌30 min。加入(溴甲基)环丙烷(0.16 mL, 1.64 mmol，可得自例如Alfa Aesar)，将得到的混合物在0℃搅拌30 min，并在室温搅拌21 h。通过加入水(50 mL)，将反应混合物淬灭。加入Et2O (50 mL)以后，分离各层。将水层用Et2O (2 x 50 mL)进一步萃取，并将合并的有机层用H2O (2 x 35 mL)洗涤。将有机相穿过疏水玻璃料进行干燥，并在减压下浓缩得到棕色油，将其在DCM中加载到50 g SNAP硅胶柱上并通过SP4进行纯化，用0-20%的乙酸乙酯/环己烷的梯度(15CV)洗脱。将适当的级分合并和在减压下蒸发，得到作为无色油的所需产物1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(201 mg, 73.4%)。
LCMS (方法B): Rt = 0.99 min, MH+ = 201.0。
中间体 14: 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醛
在室温在氮气下将1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(1.8 g, 12.32 mmol)加入到氢化钠(0.54 g, 13.55 mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50 mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌1 h，然后将反应混合物冷却至0℃，并逐滴加入三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙酯(2.04 ml, 14.78 mmol，可得自例如Sigma Aldrich)。在氮气下，将反应混合物在0℃搅拌1 h，并在室温搅拌14 h。通过加入水(150 mL)，将反应物淬灭。加入Et2O (150 mL)以后，分离各层。将水层用Et2O (3 x 150 mL)进一步萃取，并将合并的有机层用H2O洗涤。将合并的水层用Et2O (150 mL)萃取。将收集的有机层合并，经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩。将残余物在二氯甲烷中加入到2个100g SNAP硅胶柱上，并通过SP4进行纯化，用0-30%乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱。将适当的级分合并和在减压下蒸发，得到作为白色固体的所需产物1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(2.6 g, 11.39 mmol, 93%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.92 min, MH+ = 229.14。
中间体 15: 1- 乙基 -5- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸乙酯
向5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(150 mg, 0.68 mmol，可得自例如Shanghai Haoyuan Chemexpress Co., Ltd)在DMSO (4 ml)中的溶液中，加入氢氧化钾粉末(115 mg, 2.04 mmol)，随后加入溴乙烷(0.071 ml, 0.95 mmol)。将混合物在室温搅拌2小时，然后加入另外的溴乙烷(0.020 ml)，并将混合物搅拌另外18小时。将反应物通过加入水进行淬灭，然后在水和乙醚之间分配。将有机相用水洗涤，然后穿过疏水玻璃料，并最后在减压下浓缩，得到作为橙色/棕色油的产物。将粗制物质用柱色谱法(用DCM和乙酸乙酯（0-10%）洗脱)纯化，得到作为澄清油的标题化合物(60 mg, 36%)。
LCMS (方法C): MH+ = 249.1, Rt = 1.15 min。
中间体 16: 1- 乙基 -5- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸
向1-乙基-5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(60 mg, 0.24 mmol)在THF (2 ml)和MeOH (0.5 ml)中的溶液中，加入氢氧化锂(35 mg, 1.45 mmol)在水(2 mL)中的溶液。由此形成的混浊溶液在30s后变澄清。将反应混合物在室温静置18小时，然后在氮气流下浓缩。将2M HCl (2ml，水溶液)加入粗产物中，并将得到的固体过滤，然后在减压下干燥，得到作为米色固体的标题化合物(32mg, 60%)。
LCMS (方法C): Rt = 0.80 min, MH+ = 221.1。
中间体 17: 1- 乙基 -5- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -2- 甲酸
向5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲酸(500 mg, 2.60 mmol) (可得自，例如，Activate Scientific GmbH)在二甲亚砜(DMSO) (5 mL)中的溶液中，加入氢氧化钾(438 mg, 7.81 mmol)和溴乙烷(0.427 mL, 5.72 mmol)。将反应物在室温搅拌18h，然后加入另外的氢氧化钾(120mg)和溴乙烷(0.13ml)。搅拌另外4h以后，将反应混合物在氮气下静置约66h。然后将它在水和乙醚之间分配。分离各层，并将水层用乙醚洗涤。将水层酸化至pH=3，并用乙酸乙酯萃取(2次)。将合并的乙酸乙酯萃取物用水洗涤，并在真空中浓缩，得到作为淡米色固体的标题化合物(148mg)。
LCMS (方法C): Rt = 0.46 min, MH+ = 221。
中间体 18: 4-( 甲基氨基 )-3- 硝基苯甲酸甲酯
在室温在氮气下，将甲胺(2M的在THF中的溶液) (23.19 mL, 46.4 mmol)加入到4-氯-3-硝基苯甲酸甲酯(5 g, 23.19 mmol) (可得自例如Lancaster Synthesis Ltd.)在N,N-二甲基甲酰胺(DMF) (8 mL)中的溶液中。将反应混合物加热至80℃并搅拌过夜。LCMS显示主峰产物，但是反应尚未结束。加入其它甲胺(2M的在THF中的溶液，10ml)，并将反应物加热至90℃保持6 h。加入其它甲胺(2M的在THF中的溶液，6ml)，并将反应物在室温搅拌1 h和在70℃搅拌72 h。加入其它甲胺(2M的在THF中的溶液，10ml)，并将反应物加热至80℃保持3 h。将反应物冷却至室温，然后通过加入水(50mL)来沉淀产物。将得到的混悬液冷却至0℃，然后过滤。将残余物用其它水(3 x 25mL)洗涤，并将其在滤垫上干燥~15min。将固体收集并在真空中干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(4.54 g, 21.60 mmol, 93%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.69 min, MH+ = 197.2。
中间体 19: 4-( 甲基氨基 )-3- 硝基苯甲酸
将4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(1.82 g, 8.66 mmol)溶解在1:1比例的四氢呋喃(THF) (41.4 mL)和水(41.4 mL)中。向其中加入氢氧化锂(1.817 g, 43.3 mmol)，并将反应物在室温搅拌16 h。将反应混合物冷却至0℃，并通过加入5M HCl (~20 mL, 直到pH达到~5)进行酸化——形成亮黄色沉淀物，将浆料过滤，并将残余物用蒸馏水(2 x 30 mL)洗涤。将残余物收集并在真空中在50℃干燥，得到作为黄色固体的产物(1.43 g, 7.29 mmol, 84%收率)。将其不经进一步纯化用在后续反应中。
LCMS (方法B): Rt = 0.92 min, MH+ = 211。
中间体 20: (R)-(1-(4-( 甲基氨基 )-3- 硝基苯甲酰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
向(R)-哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.460 g, 7.29 mmol) (可得自，例如，Apollo Scientific Ltd)、4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸(1.43 g, 7.29 mmol)和HATU (2.77 g, 7.29 mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(DMF) (50 mL)中的溶液中加入DIPEA (2.55 mL, 14.58 mmol)，并将反应物在室温搅拌16 h。加入水(200 mL)和Et2O (200 mL)，并分离各层。将水层用其它Et2O (2 x 200 mL)萃取，并将合并的有机层用水(2 x 50 mL)洗涤、干燥(Na2SO4)和在真空中浓缩，得到亮黄色油。使用40%EtOAc/环己烷-> 100%乙酸乙酯/环己烷的梯度，将粗产物在硅胶(100g)上纯化。将适当的级分合并和在真空下蒸发，得到作为橙色-金色固体的标题产物(2.76 g, 7.29 mmol, 100%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.96 min, MH+ = 379.3。
中间体 21:(1-(4-( 甲基氨基 )-3- 硝基苯甲酰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
与中间体20类似地从哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(可得自，例如，Apollo Scientific Ltd)和4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸制备。
LCMS (方法B): Rt = 0.96 min, MH+ = 379.2。
中间体 22: (R)-(1-(3- 氨基 -4-( 甲基氨基 ) 苯甲酰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
将(R)-(1-(4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3.79 g, 10.02 mmol)溶解在乙醇(75 mL)中，并加入到经吹扫的含有Pd/C (380 mg, 0.411 mmol)的氢化烧瓶中。将得到的混合物用氮气/真空吹扫3次，然后在氢气氛下在室温搅拌24小时。将反应混合物从氢气氛用氮气/真空吹扫3次。向该溶液中加入硅藻土(33g)并搅拌2 min。然后在真空下过滤。在真空下浓缩溶液，得到粗产物，将其使用SP4柱色谱法在100g SNAP柱上纯化。将柱用0-6%的2M NH3（在MeOH中）在DCM中的溶液洗脱25CV。将适当的级分合并，并在真空中浓缩，得到产物，将其使用SP4柱色谱法在100g SNAP柱上进一步纯化。将柱用0-100%的EtOAc在环己烷中的溶液洗脱15CV，随后用100%EtOAc洗脱5CV，随后用0-6%的2M NH3（在MeOH中）在DCM中的溶液洗脱15CV。将适当的级分合并，并在真空中浓缩，得到作为粉红色固体的标题化合物(1.26g)。
LCMS (方法B): Rt = 0.70 min, MH+ = 349.1。
中间体 23: 3- 甲氧基 -4-( 甲基氨基 )-5- 硝基苯甲酸甲酯
将4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(可得自，例如，Apollo Scientific Ltd) (14 g, 57.0 mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(DMF) (140 mL)中，并在冰/水浴中冷却至~0℃。在剧烈搅拌下，使用滴液漏斗逐滴加入甲胺(2M的在THF中的溶液) (114 mL, 228 mmol)，并将混合物用氮气吹扫和在80℃加热3小时。经历周末将混合物冷却至室温。将反应混合物用水(500 mL)稀释并在真空下过滤，得到作为橙色固体的标题化合物(13.69 g)。
LCMS (方法A): Rt = 1.04 min, MH+ = 241.05。
中间体 24: 3- 甲氧基 -4-( 甲基氨基 )-5- 硝基苯甲酸
向3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯(13.69 g, 57.0 mmol)在四氢呋喃(THF) (100 mL)和水(50.0 mL)中的溶液中，加入单独部分的氢氧化锂(4.09 g, 171 mmol)。将得到的混悬液在室温搅拌19小时。将反应物用2N HCl水溶液(~50mL)酸化，直到pH达到~4。将得到的混悬液过滤，并将橙色固体在高真空线上干燥过夜，得到作为橙色固体的标题化合物(11.09 g)。
LCMS (方法A): Rt = 0.51 min, MH+ = 227.0。
中间体 25: (R)-(1-(3- 甲氧基 -4-( 甲基氨基 )-5- 硝基苯甲酰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
向3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸(11.09 g, 49.0 mmol)和HATU (18.64 g, 49.0 mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(DMF) (300 mL)中的溶液中加入DIPEA (17.13 mL, 98 mmol)，并将混合物搅拌30分钟。加入DIPEA后，混合物在搅拌~1min后变混浊。然后加入(R)-哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(9.82 g, 49.0 mmol)并搅拌1.5小时，该时间以后，LCMS表明反应结束。向5mL反应混合物中加入饱和LiCl水溶液(5mL)和Et2O (10mL)并分离各层。将水层用Et2O (2 x 10mL)重萃取，并将合并的有机层用水(10mL)回洗，用Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，得到作为橙色胶质的粗产物。将所述胶质溶解在最小量的DCM中，并使用50-100%乙酸乙酯/环己烷通过Si SNAP 25g柱纯化。将适当的级分合并，并在真空中蒸发，然后与环己烷一起共沸，并在真空下干燥，得到281 mg作为橙色固体的所需产物。将剩余的反应混合物在真空中浓缩，以除去一些DMF。加入饱和的LiCl水溶液(300mL)和Et2O (700mL)，并将混合物分离。将水层用Et2O (2 x 700mL)重萃取，将合并的有机层用水(1L)回洗，用Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，得到作为橙色胶质的粗产物。将其在340g SNAP硅胶柱上纯化，用30%-60%的乙酸乙酯在环己烷中的溶液洗脱。将适当的级分合并，并在真空中浓缩，得到作为橙色固体的标题化合物(19.4g)。
LCMS: (方法B): Rt = 1.02 min, MH+ = 409.1。
中间体 26: (R)-(1-(2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
在室温在氮气下，将溶解在水(1 mL)中的连二亚硫酸钠(162 mg, 0.793 mmol)加入(R)-(1-(4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(100 mg, 0.264 mmol)和1-乙基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲醛(46.0 mg, 0.264 mmol)在乙醇(2 mL)中的溶液中。将反应混合物在微波中加热至100℃保持5h。将反应混合物用DCM (20mL)稀释，加入硫酸钠，并将得到的混悬液过滤在真空中浓缩，得到粗产物。将其通过Biotage SP4在SNAP 10g硅胶柱上进行纯化，使用0%(20%MeOH/DCM)/DCM -> 50%(20%MeOH/DCM)/DCM的梯度。将适当的级分合并，并在真空下蒸发，得到标题化合物(42 mg)。
LCMS (方法A): Rt = 0.71 min, MH+ = 503.3。
中间体 27: (1-(2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [3,2-c] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
在室温在5 ml微波瓶中，将溶解在水(1.5 mL)中的连二亚硫酸钠(277.4 mg, 1.275 mmol)加入到(1-(4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(143.2 mg, 0.378 mmol)和1-乙基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛(67.6 mg, 0.388 mmol)在乙醇(3.5 mL)中的搅拌溶液中。然后将反应混合物在微波中在100℃加热5小时。将甲醇加入反应混合物中，并使用Na2SO4干燥。然后使反应混合物在重力下穿过疏水玻璃料进行过滤，并将洗脱液收集，并在真空下浓缩。将粗产物溶解在最小体积的DCM中，并使用SP4在25g SNAP硅胶柱上纯化。使用0-100%的20%甲醇在DCM/DCM中的梯度洗脱柱。将适当的级分收集，并在真空下浓缩，得到作为黄色油的标题化合物(76mg)。
LCMS (方法B): Rt = 0.71 min, MH+ = 503.2。
中间体 28: (R)-(1-(1- 甲基 -2-(1-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
向(R)-(1-(4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(2.1 g, 5.55 mmol)和1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(1.3 g, 5.70 mmol)在乙醇(55 ml)中的混合物中，逐份加入连二亚硫酸钠(3.41 g, 16.65 mmol)在水(25 ml)中的溶液。将混合物用氮气吹扫，并在90℃过夜加热17小时。将反应混合物冷却至室温，并在真空中蒸发溶剂。将DCM加入残余物中，并将该异质溶液经硫酸钠干燥。将固体滤出，并将滤液在真空下浓缩。将残余物加载到二氯甲烷中，并使用25-80%(15 CV)的初始梯度和随后的80-100%(10 CV)乙酸乙酯/环己烷，通过SP4 SNAP在2个100g硅胶(Si)柱上纯化。将适当的级分合并，并在真空中蒸发，得到作为淡黄色固体的标题化合物(1.934 g)。
LCMS (方法B): Rt = 1.09 min, MH+ = 557.5。
中间体 29: (R)-(1-(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
将1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(2 g, 8.99 mmol)在乙醇(90 mL)中的溶液加入到含有(R)-(1-(4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3.4 g, 8.98 mmol)的圆底烧瓶中，并将得到的溶液在室温搅拌。将连二亚硫酸钠(3.14 g, 15.33 mmol)在水(45 mL)中的溶液逐份加入反应混合物中。将反应混合物加热至100℃，并在氮气下搅拌4小时。将反应混合物在真空下浓缩，然后用DCM (150ml)和水(150ml)稀释。将有机层收集，并将水层用DCM (3 x 100ml)洗涤。将有机层收集，并用水(2 x 100ml)回洗。将有机层收集，用Na2SO4干燥，穿过疏水玻璃料过滤，并在真空下浓缩，得到粗产物。将其溶解在最小体积的DCM中，并使用Biotage SP4在100g SNAP硅胶柱上纯化。将柱用70-100%的乙酸乙酯在DCM中的梯度洗脱10CV。将适当的级分收集并在真空下浓缩。将其在真空下干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(1.867g)。
LCMS (方法B): Rt = 1.08min, MH+ = 529.4。
中间体 30: (R)-(1-(2-(1- 乙基 -5- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
将1-乙基-5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-甲酸(200 mg, 0.908 mmol，报道在WO 2010/118208中)和HATU (380 mg, 0.999 mmol)溶解在DMF (2mL)中，并在室温搅拌5min。向其中加入(R)-(1-(4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(316 mg, 0.908 mmol)和DIPEA (0.476 ml, 2.72 mmol)在DMF (2 ml)中的溶液，并将得到的混合物在氮气下在室温搅拌3.5小时。将反应混合物用水(40 ml)稀释，并用乙醚(50 ml)分配。将有机层分离，然后将水层用乙醚(2 x 50 ml)重萃取。将合并的有机层用水(2 x 30 ml)洗涤，然后经硫酸钠干燥，然后穿过疏水玻璃料并在减压下浓缩，得到作为蓝色固体的粗制酰胺中间体。将固体在减压下干燥过夜，然后溶解在甲苯(12.5 ml)中。将乙酸(0.052 ml, 0.908 mmol)加入反应混合物中，将所述反应混合物回流5小时。将碳酸氢钠(40 ml)加入反应混合物中，并分离有机层。将水层用甲苯(2 x 40 ml)重萃取，并将合并的有机层在减压下浓缩，得到238mg作为棕红色胶质的粗产物。将粗制物质用柱色谱法(用100%EtOAc洗脱)纯化，然后通过高pH MDAP (方法E)进一步纯化，得到作为米色固体的标题化合物(106 mg, 22%)。
LCMS (方法A): MH+ = 533.4, Rt = 1.06 min。
中间体 31: (R)-(1-(2-(1- 乙基 -5- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
与中间体30类似地从1-乙基-5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸开始制备。
LCMS (方法A): Rt = 1.10 min, MH+ = 533.3。
中间体 32: (R)-(1-(2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
向(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(4.5 g, 11.02 mmol)和1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(2.015 g, 11.57 mmol)在乙醇(100 mL)中的溶液中，逐份加入连二亚硫酸钠(4.25 g, 20.75 mmol)在水(50 mL)中的溶液。将混合物用氮气吹扫，然后在100℃加热过夜(16小时)。将反应混合物在真空下浓缩，然后用DCM (150ml)和水(150ml)稀释。将有机层收集，并将水层用DCM (3 x 100ml)洗涤。将有机层合并，并用水(3 x 150ml)回洗，收集，用Na2SO4干燥，穿过疏水玻璃料过滤，并在真空下浓缩，得到5.5g作为白色固体的粗产物。将粗产物溶解在最小体积的DCM中，并使用Biotage SP4在SNAP 100g硅胶柱上纯化。将柱用70-100%的乙酸乙酯在DCM中的梯度洗脱10CV。将适当的级分收集并在真空中浓缩，得到作为白色固体的标题化合物(4.40g)。
LCMS (方法B): Rt = 1.05 min, MH+ = 533.4。
中间体 33: (R)-(1-(7- 甲氧基 -1- 甲基 -2-(1-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
向(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3.58 g, 8.76 mmol)和1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(2.61 g, 11.44 mmol)在乙醇(140 ml)中的溶液中，逐份加入连二亚硫酸钠(3.18 g, 15.53 mmol)在水(70 ml)中的溶液。将混合物用氮气吹扫，然后在100℃加热过夜(16小时)。将反应混合物在真空下浓缩，然后用DCM (150ml)和水(150ml)稀释。将有机层收集，并将水层用DCM (3 x 100ml)洗涤。将有机层收集，用Na2SO4干燥，穿过疏水玻璃料过滤，并在真空下浓缩，得到5.5g作为白色固体的粗产物。将其溶解在最小体积的DCM中，并使用Biotage SP4在100g SNAP硅胶柱上纯化。将柱用70-100%的乙酸乙酯在DCM中的梯度洗脱10CV。将适当的级分收集，并在真空下浓缩，得到作为白色固体的标题化合物(4.31g)。
LCMS (方法B): Rt = 1.17 min, MH+ = 587.4。
中间体 34: (R)-(1-(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
将1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(0.743 g, 3.71 mmol)在乙醇(60 mL)中的溶液加入到含有(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.529 g, 3.74 mmol)的圆底烧瓶中，并将得到的溶液在室温搅拌。将连二亚硫酸钠(1.375 g, 6.71 mmol)在水(30 mL)中的溶液逐份加入反应混合物中。将反应混合物加热至100℃，并在氮气下搅拌4小时。将反应混合物在真空下浓缩，然后用DCM (150ml)和水(150ml)稀释。将有机层收集，并将水层用DCM (3 x 100ml)洗涤。将有机层收集，用Na2SO4干燥，穿过疏水玻璃料过滤，并在真空下浓缩，得到~2g作为黄色固体的粗产物。将其溶解在最小体积的DCM中，并使用Biotage SP4在50g SNAP硅胶柱上纯化。将柱用70-100%的乙酸乙酯在DCM中的梯度洗脱10CV。将适当的级分收集，并在真空下浓缩，得到作为黄色固体的标题化合物(1.55g)。
LCMS (方法B): Rt = 1.15 min, MH+ = 559.4。
中间体 35: (1-(2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
在室温在氮气下，将溶解在水(1.500 mL)中的连二亚硫酸钠(235 mg, 1.150 mmol)加入到(1-(4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(145 mg, 0.383 mmol)和1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(66.7 mg, 0.383 mmol)在乙醇(3 mL)中的溶液中。将反应混合物在微波中加热至100℃保持5h。将反应混合物用DCM (20mL)稀释，加入Na2SO4，并将得到的混悬液过滤，并在真空中浓缩，得到作为黄色油的粗产物。使用0%(20%MeOH/DCM)/DCM -> 100%(20%MeOH/DCM)/DCM的梯度，将粗产物通过Biotage SP4在SNAP 25g硅胶柱上纯化。将适当的级分合并，并在真空下蒸发，得到作为黄色固体的标题化合物(104 mg)。
LCMS (方法B): Rt = 1.01 min, MH+ = 503.2。
中间体 36: 7- 氧杂 -3- 氮杂双环 [4.1.0] 庚烷 -3- 甲酸苄酯
在氮气氛下，将3-氯过氧苯甲酸(16.79 g, 97 mmol)逐份加入到使用冰浴冷却的5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸苄酯(15.1 g, 69.5 mmol) (可得自例如Fluorochem)在无水二氯甲烷(DCM) (100 mL)中的搅拌溶液中。使得到的混合物达到室温并搅拌18 h。将水(100 mL)加入反应混合物中，并分配各层。将有机层逐滴加入搅拌的5%的NaS2O5水溶液(200 mL)中。在加入结束时，将混合物搅拌另外1 h，然后分离各层，并将水层用DCM (50 mL x 2)反萃取。将有机物合并，并用5%K2CO3水溶液(100 mL x 3)洗涤，然后用盐水(100 mL)洗涤。在该阶段，过氧化物试验表明，在有机层中仍然存在25 mg/mL的过氧化物。因此，将该有机物加入到5%NaS2O5(水溶液) (200 mL)的搅拌溶液中，并将得到的两相混合物搅拌1 h。过氧化物试验现在表明<0.5 mg/mL的过氧化物。分离各层，并将水层用其它DCM (2 x 50 mL)洗涤。然后将合并的有机层干燥(Na2SO4)，并在真空中浓缩，得到作为淡金色油的粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法(340g Si)纯化，用30->80%EtOAc/环己烷洗脱。将适当的级分合并，并在真空中浓缩，得到作为无色油的标题化合物——7-氧杂-3-氮杂双环[4.1.0]庚烷-3-甲酸苄酯(12.75 g, 54.7 mmol, 79%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.88 min, MH+ = 234.2。
中间体 37: 反式 -3-(( 叔丁氧基羰基 ) 氨基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸苄酯
在下面概述的相同反应条件下进行三个单独反应。在试剂/溶剂量变化的情况下，在表中概述了使用的具体量。如指示的，将得自三个反应的粗制物质组合进行纯化：
试剂/溶剂: 反应1 反应2 反应3
7-氧杂-3-氮杂双环[4.1.0]庚烷-3-甲酸苄酯(A) 4.37 g, 18.73 mmol 4.45 g, 19.08 mmol 3.94 g, 16.89 mmol
DCM (B) 120 mL 100 ml 100 ml
三乙胺(C) 2.87 ml, 20.61 mmol 2.92 ml, 20.98 mmol 2.59 mL, 18.58 mmol
Boc2O (D) 4.35 ml, 18.73 mmol 4.43 ml, 19.08 mmol 3.92 mL, 16.89 mmol
将7-氧杂-3-氮杂双环[4.1.0]庚烷-3-甲酸苄酯(A)在25-30%氢氧化铵水溶液(150 ml, 3766 mmol)和乙醇(100 mL)中的溶液在HASTC合金筒（bomb）中在70℃搅拌5 h。将反应混合物转移至rb烧瓶并在真空中浓缩一半(小心：放出大量NH3)。将得到的溶液用盐水(50 mL)稀释，并将有机物萃取进DCM (100 mL)中。随后，将水层用10%MeOH/DCM (3 x 50 mL)进一步萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩，得到作为黄色油的中间体伯胺。将油状残余物用二氯甲烷(DCM) (B)和三乙胺(C)稀释，并逐滴加入Boc2O (D)。将反应物搅拌2 h。LCMS表明完全反应成具有类似保留时间（Rt）的2种区域异构体产物。将反应混合物用饱和NH4Cl (水溶液) (100 mL)淬灭，并分离各层。将水层用DCM (2 x 75 mL)进一步萃取。将合并的有机层穿过疏水玻璃料干燥并在真空下除去溶剂，得到白色胶质。
将得自三个反应的粗制物质合并用于纯化：将合并的残余物溶解在DCM中并分成2份，使用0-100%乙酸乙酯/环己烷的梯度在2个340g硅胶柱上通过柱色谱法纯化。将适当的级分合并，并在真空中蒸发，得到2种主产物：
首先从柱洗脱的峰：作为白色固体的反式-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(10.492 g, 29.9 mmol, 59%收率) (不希望的区域异构体)。
第二个从柱洗脱的峰：作为白色固体的反式-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(6.485 g, 18.51 mmol, 37%收率) (上面指出的期望的区域异构体)。
LCMS (方法B): Rt = 0.96 min, MH+ = 351.2。
中间体 38: 顺式 -4-( 苯甲酰氧基 )-3-(( 叔丁氧基羰基 ) 氨基 ) 哌啶 -1- 甲酸苄酯
向三苯基膦(5.83 g, 22.24 mmol)在四氢呋喃(THF) (60 mL)中的溶液中，加入DIAD (4.38 mL, 22.24 mmol)，并将混合物在冰水浴中搅拌15 min，然后温热至室温。向该混悬液中加入反式-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(6.495 g, 18.54 mmol)在四氢呋喃(THF) (75 mL)中的混悬液，然后加入苯甲酸(2.72 g, 22.24 mmol)。反应混合物澄清为黄色溶液，并搅拌2 h。LCMS分析表明产物形成，但是SM峰被副产物遮蔽，所以难以证实反应已经结束。将反应物搅拌过夜(20 h)。将反应混合物在真空下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物。将残余物在DCM中加载到340g硅胶柱上，并使用0-40%EtOAc/环己烷梯度纯化。将适当的级分合并，并在真空中蒸发，得到作为淡黄色油的粗产物顺式-4-(苯甲酰氧基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-甲酸苄酯(8.11 g, 17.84 mmol, 96%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 1.27 min, MH+ = 455.3。
中间体 39: 顺式 -3-(( 叔丁氧基羰基 ) 氨基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸苄酯
。
中间体 40: (3S,4R)-3-(( 叔丁氧基羰基 ) 氨基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸苄酯
。
中间体 41: (3R,4S)-3-(( 叔丁氧基羰基 ) 氨基 )-4- 羟基哌啶 -1- 甲酸苄酯
将碳酸钾(3.70 g, 26.8 mmol)在水(80 mL)中的溶液加入到顺式-4-(苯甲酰氧基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-甲酸苄酯(8.11 g, 17.84 mmol)在乙醇(160 mL)中的溶液中，并将混合物在70℃搅拌20 h。将反应混合物在真空中浓缩至1/3体积，并将得到的混悬液用水(50 mL)稀释，并使用DCM (3 x 70 mL)萃取。将收集的有机物合并和干燥(Na2SO4)，并在真空中浓缩，得到作为无色油的粗产物。然后使用0-100%乙酸乙酯/环己烷梯度通过柱色谱法在硅胶柱(340g)上纯化粗产物。将适当的级分合并，并在真空中蒸发，得到作为白色泡沫的所需产物顺式-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(5.54 g, 15.81 mmol, 89%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.98 min, MH+ = 351.2。
使用手性HPLC方法B，对1 g外消旋产物进行手性纯化色谱法。成功地拆分以下异构体：
异构体1，作为无色油得到——(3S,4R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(405 mg, 1.156 mmol, 6.48%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.97 min, MH+ = 351.2。
手性HPLC (方法A): 100%ee 。
异构体2，作为无色油得到——(3R,4S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(411 mg, 1.173 mmol, 6.57%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.99 min, MH+ = 351.2。
手性HPLC (方法A): 95%ee 。
使用手性HPLC方法C，也对剩余的4.5 g外消旋体进行手性纯化。成功地拆分以下异构体：
异构体1，作为无色油得到——(3S,4R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(1.94 g, 5.54 mmol, 31.0%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.98 min, MH+ = 351.2。
手性HPLC (方法A): 98.7%ee。
异构体2，作为无色油得到——(3R,4S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(1.92 g, 5.48 mmol, 30.7%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.97 min, MH+ = 351.1。
手性HPLC (方法A): 96,3%ee。
中间体 42: ((3S,4R)-4- 羟基哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
将(3S,4R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(1.94 g, 5.54 mmol)在乙醇(48 mL)中的溶液加入到含有10%Pd/C (0.059 g, 0.554 mmol)的氢化烧瓶中，所述氢化烧瓶已经被抽真空并用N2 (x3)回填。将烧瓶再次抽真空，然后用H2 (x3)回填。使足够的H2完全反应，然后引入至滴管中并封闭系统，将烧瓶在H2气氛下搅拌过夜。将反应混合物穿过硅藻土过滤，并用EtOH (2 x 20 mL)和乙酸乙酯(2 x 20 mL)洗涤。将合并的滤液在真空中浓缩，得到作为乳膏状油性固体的产物——((3S,4R)-4-羟基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.13 g, 5.22 mmol, 94%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.40 min, MH+ = 217.1。
中间体 43: ((3R,4S)-4- 羟基哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
使用H-cube (设置：25℃，完全H2模式，1 mL/min流速)和10%Pd/C CatCart 30作为催化剂，氢化3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(141 mg, 0.402 mmol)在甲醇(8.05 mL)中的溶液。将洗脱液在真空中蒸发，得到所需的作为澄清油的(4-羟基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(85.1 mg, 0.393 mmol, 98%收率)。
1H NMR (DMSO-d6, 393K): 5.60 (1H, br s, NH), 3.77 (1H, dt, CH), 3.45 (1H, ddd, CH), 2.80 (1H, ddd, CH AHB), 2.72 (1H, dd, CH AHB), 2.63 (1H, dd, CHA H B), 2.55-2.48 (1H, obs, CHA H B), 1.59-1.53 (2H, m, CH2), 1.42 (9H, s, 3 x CH3)。
中间体 42 和 43 的绝对立体化学的证据
使用从头计算的VCD分析，指定中间体42和43的绝对构型。据估测，该指定的置信水平> 99%。
理论分析：
· 构象检索：使用MMFF94x力场的MOE推测检索
· 模型化学: # opt freq=(noraman,vcd) b3lyp/dgdzvp
· 构象分析：使用玻耳兹曼统计法估计群体分数（Fractional population）
· Lorentzian带宽度：6 cm-1
· 频率标度因子：0.975
· 置信限的估计：CompareVOA (BioTools, Inc.)分析。
实验：
· 波谱测定仪：在4 cm-1运行的BioTools ChiralIR-2X　FT-VCD波谱测定仪
· 频率范围：2000-800 cm-1
· PEM校准：在1400 cm-1校准的PEM
· PEM滞后设置：PEM1 = 0.250*λ；PEM2 = 0.260*λ
· 扫描方法：单个4 h扫描；总数#= 3120 x 4 = 12480次扫描)扫描；t ~ 6 h.)
· 溶剂：CDCl3
· 浓度：~ 10 mg/250 uL
· 基线校正方法：经修饰的差异半数(VCDE1 (经校正) = VCDE1 - VCDE2；VCDE2 (经校正) = VCDE2 - VCDE1)
· 额外处理：Savitsky-Golay 9-点平滑。
估计的可靠性水平
使用CompareVOATM (BioTools, Inc.)估计在该研究中的置信限，所述CompareVOATM是用于定量2组波谱数据之间的一致水平的自动化工具。
使用2个参数的绝对值评估可靠性程度(置信限)：VCD关联的总邻近相似性(TNS (VCD))和对映异构体相似性指数(ESI)。
基于CompareVOA分析的可靠性程度如下：
可靠性 *TNS (VCD)(范围) *ESI(范围) 置信限(CL)(范围)
高 ≥70 ≥60 > 99%
中 60 - 70 50 - 60 95 - 99%
低 50 - 60 40 - 50 90 - 95%
不可靠 < 50 < 40 < 90%
*绝对值。
CompareVOA 结果：光谱范围：1760-950 cm-1
· 省略的区域：无
· 统计分析范围(最小400 cm-1)：810 cm-1
· 三角形加权函数的宽度：20 cm-1
· TNS (VCD)：85.1 (绝对值)
· ESI：82.8 (绝对值)
· 优化的标度因子：0.975
· 估计的置信水平：> 99%。
中间体 44: 2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 甲酸甲酯
在微波瓶中，将连二亚硫酸钠(512 mg, 2.498 mmol)在水(3.25 mL)中的溶液加入到3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯(200 mg, 0.833 mmol)和1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(167 mg, 0.833 mmol)在乙醇(6.5 mL)中的溶液中。将反应混合物在微波中在100℃加热5 h。将反应混合物用DCM (20 mL)稀释，干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩，得到作为无色油的粗产物。使用60%EtOAc/环己烷-> 100%EtOAc/环己烷的梯度，将粗产物通过硅胶柱(25 g)上的柱色谱法纯化(洗脱的产物接近溶剂前沿)。将适当的级分合并和在真空下蒸发，得到作为黄色油的产物——2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(260 mg, 0.666 mmol, 80%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 1.17分钟, MH+ = 391.3。
中间体 45: 2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 甲酸甲酯
使用4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(89 mg, 0.424 mmol)和1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(85 mg, 0.424 mmol)，以与中间体44类似的方式制备。
LCMS (方法B): Rt = 1.05分钟, MH+ = 361.1。
中间体 46: 2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 甲酸
将2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(260 mg, 0.666 mmol)溶解在1:1比例的四氢呋喃(THF) (3.2 mL)和水(3.2 mL)中。向其中加入氢氧化锂一水合物(140 mg, 3.33 mmol)，并将反应物在室温搅拌16 h。将反应混合物通过加入2M HCl(水溶液) (20 mL)进行酸化，并将有机物萃取进10%MeOH/DCM (20 mL)中。将水层用10%MeOH/DCM (2 x 20 mL)洗涤，并将合并的有机层干燥(Na2SO4)，并在真空中浓缩，得到在静置后固化的黄色油(44 mg)。由于差的回收率，假定产物的剩余部分保留在水层中。将水层用EtOAc (20 mL)、DCM (2 x 20 mL)和10%MeOH/DCM (8 x 10 mL)进一步萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩。将粗产物合并到一起，以形成2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(105 mg, 0.279 mmol, 41.9%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 1.00分钟, MH+ = 377.1。
中间体 47: 2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 甲酸
以与中间体46类似的方式从2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(111 mg, 0.308 mmol)制备。
LCMS (方法B): Rt = 0.90分钟, MH+ = 347.1。
中间体 48: ((3S,4R)-1-(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 )-4- 羟基哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
向2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(105 mg, 0.279 mmol)在DMF (1.5 mL)中的溶液中，加入HATU (106 mg, 0.279 mmol)，随后加入DIPEA (0.097 mL, 0.558 mmol)，并将反应物在室温搅拌15 min。加入在DMF (1.5 mL)中的((3S,4R)-4-羟基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(60.3 mg, 0.279 mmol)，并将反应物在室温搅拌16 h。LCMS表明完全反应。加入水(20 mL)和Et2O (20 mL)，并分离各层。将水层用其它Et2O (2 x 20 mL)萃取，并将合并的有机层用水(2 x 20 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩，得到黄色油。使用DCM -> 100%(20%MeOH/DCM)/DCM的梯度，将粗产物通过硅胶(10 g)上的快速色谱法纯化。将适当的级分合并和在真空下蒸发，得到作为黄色油的产物-　((3S,4R)-1-(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-4-羟基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(146 mg, 0.254 mmol, 91%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 1.03 min, MH+ = 575.3。
中间体 49: ((3S,4R)-1-(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 )-4- 羟基哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
以与中间体48类似的方式从(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5- 4-甲酸和((3S,4R)-4-羟基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯制备。
LCMS (方法B): Rt = 0.94分钟, MH+ = 545.2。
中间体 56: (R)-(1-(3- 甲氧基 -4-((2- 甲氧基乙基 ) 氨基 )-5- 硝基苯甲酰基 ) 哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯
在室温在氮气下，将2-甲氧基乙胺(0.15 mL, 1.741 mmol)加入到(R)-(1-(4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(280 mg, 0.406 mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(DMF) (1.5 mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物加热至80℃，并在氮气下搅拌过夜(16 h)。LC/MS表明，已经形成具有55%纯度的期望产物。将水(75 mL)和乙醚(75 mL)加入到反应混合物中并分离各层。将水层用乙醚(2 x 50 mL)进一步萃取。将有机层收集，干燥(Na2SO4)，穿过疏水玻璃料，并在真空下浓缩，得到330mg作为橙色油的粗产物。将粗产物溶解在最小体积的DCM中，并通过柱色谱法(25g硅胶)纯化。将柱用60-100%乙酸乙酯/环己烷的梯度洗脱。使用TLC确定产物级分，并将适当的级分收集，并在真空下浓缩，得到(R)-(1-(3-甲氧基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)-5-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(165.7 mg, 0.366 mmol, 90%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 1.04分钟, MH+ = 453.3。
中间体 59: 4- 溴 -N- 甲基 -2- 硝基 -6-( 三氟甲氧基 ) 苯胺
将4-溴-2-硝基-6-(三氟甲氧基)苯胺(1.962 g, 6.52 mmol, 可商购得自，例如，Apollo Scientific)在N,N-二甲基甲酰胺(DMF) (80 mL)中的溶液用冰/水浴冷却至~0℃保持10 min。然后加入碳酸铯(4.25 g, 13.04 mmol)并搅拌，颜色从黄色变成红色。10 min以后，加入碘代甲烷(0.408 mL, 6.52 mmol)，并在氮气下在搅拌下使混合物恢复至室温保持3 h。LCMS表明向期望产物的~90%转化率，没有剩余起始原料，并有~10%的杂质形成。将反应混合物使用水(400 mL)和EtOAc (400 mL)分配，并将水层用EtOAc (2 x 400 mL)重萃取。将合并的有机物用水(400 mL)回洗，然后穿过疏水玻璃料并在真空中浓缩，得到作为黄色油的粗产物。将样品加载进二氯甲烷中，并使用100%环己烷在硅胶(Si) (100 g)上纯化。将适当的级分合并，并在真空中蒸发，得到作为橙色固体的所需产物(1.368 g, 67%)。
LCMS (方法A): Rt = 1.33 min, MH+ = 314.9。
中间体 60: 5- 溴 -2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -7-( 三氟甲氧基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑
向4-溴-N-甲基-2-硝基-6-(三氟甲氧基)苯胺(1.368 g, 4.34 mmol)和1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(0.756 g, 4.34 mmol)在乙醇(20 mL)中的溶液中，加入在水(10 mL)中的连二亚硫酸钠(2.67 g, 13.03 mmol)。将混合物用氮气吹扫，然后在搅拌下加热至80℃保持17 h。LCMS表明向期望产物的~52%转化率，没有剩余起始原料。将反应混合物在盐酸水溶液(0.25 M, 100 mL)之间分配，并用二氯甲烷(3 x 100 mL)萃取。将有机物合并，使用疏水玻璃料干燥，并在真空下蒸发，得到作为黄色固体的粗产物。将样品加载进二氯甲烷中，并使用0-30%环己烷-乙酸乙酯的梯度通过柱色谱法在硅胶(100 g)上纯化。将适当的级分合并，并在真空中蒸发，得到作为黄色胶质的所需产物(628 mg, 33%)，其发生固化。
LCMS (方法A): Rt = 1.46 min, MH+ = 439.1。
中间体 61: 2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -7-( 三氟甲氧基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 甲酸甲酯
在微波瓶中将5-溴-2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-7-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑(314 mg, 0.715 mmol)、六羰基钼(94 mg, 0.357 mmol)、甲醇(0.434 mL, 10.72 mmol)、DIPEA (0.250 mL, 1.430 mmol)、DMAP (175 mg, 1.430 mmol)和反式-双(乙酸根合(acetato))双[邻-(二-邻-甲苯基膦基)苄基]二钯(II) (34 mg, 0.036 mmol)溶解在1,4-二氧杂环己烷(12 mL)中。将反应容器密封，并在Biotage Initiator微波中加热至190℃保持2 h。使反应混合物冷却以后，LCMS表明向期望产物的~37%转化率，以及向水解产物的~12%转化率。将反应混合物在真空中浓缩，得到作为棕色胶质的粗产物2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-7-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(512 mg, 1.224 mmol, 171%收率)，其不经进一步纯化地使用。
LCMS (方法A): Rt = 1.32分钟, MH+ = 419.2。
中间体 71: (( 顺式 )-1-(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 )-6- 甲基哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 这是一种具有顺式 - 相对立体化学的未知的单一对映异构体，中间体 72 的对映异构体 ) 。
中间体 72: (( 顺式 )-1-(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 )-6- 甲基哌啶 -3- 基 ) 氨基甲酸叔丁酯 ( 具有顺式 - 相对立体化学的中间体 71 的对映异构体 ) 。
向2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(250 mg, 0.498 mmol)在DMF (2.3 mL)中的溶液中，加入HATU (189 mg, 0.498 mmol)，随后加入DIPEA (0.174 mL, 0.996 mmol)，并将反应物在室温搅拌15min。加入在DMF (2.3 mL)中的(6-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(107 mg, 0.498 mmol)，并将反应物在室温搅拌16 h。加入水(20 mL)和Et2O (20mL)，并分离各层。将水层用其它Et2O (2 x 20 mL)萃取，并将合并的有机物用水(2 x 20 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩，得到黄色油。使用DCM -> 100%(20%MeOH/DCM)/DCM的梯度，将粗产物通过快速色谱法在硅胶(25 g)上纯化。将适当的级分合并和在真空下蒸发，得到作为黄色油的产物。通过高pH MDAP (方法E)，进一步纯化该材料。因此，将样品(160 mg)溶解在DMSO/MeOH (1:1, 1.8mL)中，并分两批注射。将适当的级分收集，并在真空中浓缩，得到白色固体——(1-(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-6-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(93 mg, 0.162 mmol, 32.6%收率)。对该物质进行手性拆分。成功地拆分了4种组分。但是，分析显示仅1-2%的假定次要非对映异构体。将混合物进行手性制备型色谱法(手性方法D)，并仅收集2种主要组分：
中间体 71: 异构体1: ((顺式)-1-(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-6-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(50 mg, 0.087 mmol, 17.53%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 1.19 min, MH+ = 573.4。
中间体 72: 异构体2: ((顺式)-1-(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-6-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(47 mg, 0.082 mmol, 16.48%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 1.19 min, MH+ = 573.4。
实施例
实施例 1: 1-{[2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [3,2-c] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并咪唑 -5- 基 ] 羰基 }-3- 哌啶胺
在室温，将TFA (0.25 mL, 3.24 mmol)加入(1-(2-(1-乙基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(72.8 mg, 0.145 mmol)在二氯甲烷(DCM) (3 mL)中的搅拌溶液中，并搅拌1小时30分钟。将反应混合物在真空下浓缩。将浓缩的混合物溶解在甲醇中，加载到5g SCX柱上。将柱用甲醇(3CV)洗脱，然后用2M的氨在甲醇中的溶液(3CV)将产物洗脱为游离碱。将产物级分收集并在真空下浓缩，然后在40℃在真空干燥箱中干燥，得到黄色固体(56mg)。
LCMS (方法A): Rt = 0.71 min, MH+ = 403.3。
实施例 2A: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮
在5ml微波瓶中，将连二亚硫酸钠(353 mg, 1.722 mmol)在水(1.5 ml)中的溶液加入到(R)-(1-(4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(261 mg, 0.689 mmol)和1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(100 mg, 0.574 mmol)在乙醇(3.5 ml)中的溶液中。将反应混合物在微波中在100℃加热5小时。将甲醇加入反应混合物中。使用Na2SO4干燥反应混合物。然后将该混合物在真空下过滤。将粗产物加载进DCM中，上50g SNAP Si-柱，通过SP4纯化，用0-5%的甲醇在DCM中的溶液(15CV)洗脱。将适当的级分合并，并将溶剂在真空下蒸发，得到不纯的产物。将其通过SP4进一步纯化：加载到DCM中，上50g SNAP Si-柱，用0-5%的甲醇在DCM中的溶液(15CV)洗脱。将适当的级分合并，并在真空中蒸发溶剂，得到BOC-保护的产物。将BOC-保护的产物溶解于二氯甲烷(DCM) (5 ml)中并用TFA (0.663 ml, 8.61 mmol)处理。将反应混合物在室温搅拌30min，并在没有搅拌的情况下放置15h。然后将反应混合物在减压下浓缩，并将残余物在甲醇中加载到10g SCX柱(用MeOH预调节)上。将柱用MeOH (3CV)洗涤，并用含甲醇的氨(2N) (4CV)洗脱。将含甲醇的氨级分合并，并在真空中蒸发溶剂，得到作为黄色油的标题化合物(178 mg)。
LCMS (方法B): Rt = 0.63 min, MH+ = 403.2。
实施例 2B: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮盐酸盐
将(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮(170 mg)溶解于MeOH (5 mL)中，并用HCl (1M的在乙醚中的溶液) (165 μL)处理，并在氮气下吹扫，得到作为奶油状固体的(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐(187 mg, 0.43 mmol, 74.2%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.63 min, MH+ = 403.1。
实施例 3: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮
向(R)-(1-(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(42 mg, 0.084 mmol)在二氯甲烷(DCM) (1 mL)中的溶液中，加入TFA (0.258 mL, 3.34 mmol)，并将反应物在室温搅拌2h。将反应混合物在真空中浓缩，得到黄色油。将其溶解在甲醇中，并加载到SCX柱(5g)上。将它用甲醇(3柱体积)洗脱，并用2M的氨在甲醇中的溶液将产物洗脱为游离碱。将得自氨级分的滤液在真空中浓缩，得到作为黄色固体的标题化合物(34 mg)。
LCMS (方法A): Rt = 0.73 min, MH+ = 403.2。
实施例 4A: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(1- 甲基 -2-(1-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮
向(R)-(1-(1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.9336 g, 3.47 mmol)在二氯甲烷(DCM) (5.5 ml)中的搅拌溶液中，逐滴加入TFA (5.05 ml, 66.0 mmol)。将反应混合物搅拌45 min。将混合物在真空中浓缩，溶解在甲醇中，并通过SPE在预调节的磺酸(SCX) 70g柱上纯化。将柱用甲醇(5 CV)洗涤，并将产物用2M的氨在甲醇中的溶液(4 CV)洗脱。将适当的级分合并，并在真空中蒸发溶剂，得到粗产物，将其通过制备型HPLC (MDAP方法E)进行纯化。将适当的级分合并，并在真空中浓缩，得到标题化合物(1.35g)。
LCMS (方法B): Rt = 0.71 min, MH+ = 457.2。
实施例 4B: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(1- 甲基 -2-(1-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮盐酸盐
将HCl在Et2O中的溶液(1 M) (0.15 mL, 0.15 mmol)逐滴加入到(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮(60 mg, 0.13 mmol)在甲醇(1 mL)和乙醚(1 mL)中的溶液中。在室温搅拌2.5 h以后，将反应混合物在氮气流下干燥，得到所需产物(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮盐酸盐(64 mg, 0.13 mmol, 99%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.85 min, MH+ = 457.2。
实施例 5A: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮
向(R)-(1-(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3.402 g, 6.44 mmol)在二氯甲烷(DCM) (40 ml)中的溶液中，逐滴加入TFA (9 ml, 118 mmol)。将反应混合物搅拌3小时。将反应混合物在真空下浓缩，得到黄色油。将油溶解在甲醇中，并加载到70g SCX柱上。将柱用MeOH (2CV)洗涤，并用2M的氨在甲醇中的溶液(3CV)收集作为游离碱的产物。将产物在真空中浓缩和在真空下干燥，得到黄色固体。将其溶解在热乙醇中并在真空中浓缩。将它再溶解在热乙醇中，在真空中浓缩和在真空下干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(2.61g)。
LCMS (方法A): Rt = 0.89 min, MH+ = 429.3。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm: 8.24 (1 H, d), 7.96 (1 H, d), 7.51 - 7.62 (2 H, m), 7.21 (1 H, d), 7.05 (1 H, dd), 6.96 (1 H, s), 4.41 (2 H, d), 3.82 (3 H, s), 3.28 - 4.26 (2 H, m), 2.40 - 2.66 (1 H, m), 2.37-2.64 (2 H, m), 1.62 - 1.77 (1 H, m), 1.15 - 1.60 (4 H, m), 0.92 - 1.15 (2 H, m), 0.07- 0.16 (2 H, m), 0.03 - 0.04 (2 H, m)。
实施例 5B: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 , 盐酸盐
向(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮(2.61g, 6.09 mmol)在二氯甲烷(DCM) (1.5 mL)中的溶液中加入HCl (2M的在乙醚中的溶液) (3 ml, 6.00 mmol)。将混合物声处理2分钟，然后在真空下浓缩，得到黄色固体。将其溶解在最小体积的热乙醇中。在氮气下除去溶剂，并将产物在真空枪（pistol）中在50℃干燥过夜，然后在60℃度过周末，得到作为黄色固体的标题化合物(2.7g)。
LCMS (方法A): Rt = 0.88min, MH+ = 429.3。
实施例 6: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1- 乙基 -5- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮
在连续搅拌下，向(R)-(1-(2-(1-乙基-5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(24 mg, 0.045 mmol)在DCM (2 mL)中的搅拌溶液中，逐滴加入TFA (2 mL, 26.0 mmol)。将反应物在氮气下在室温搅拌1h。将反应混合物在真空中浓缩，然后溶解在MeOH中，并通过SPE在1g磺酸(SCX)上纯化，首先用MeOH洗涤，然后使用10%NH3/MeOH溶液洗脱，得到产物的游离碱。将适当的级分合并，并在真空中蒸发，然后与环己烷一起共沸，得到作为淡黄色固体的标题化合物(13mg)。
LCMS (方法A): Rt = 0.84 min, MH+ = 433.3。
实施例 7: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1- 乙基 -5- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮
在连续搅拌下，向(R)-(1-(2-(1-乙基-5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(106 mg, 0.199 mmol)在二氯甲烷(DCM) (3 mL)中的搅拌溶液中，逐滴加入TFA (3 mL, 38.9 mmol)。将反应物在氮气下在室温搅拌1小时。LCMS表明反应结束，没有剩余起始原料。将反应混合物在真空中浓缩，然后溶解在MeOH中，并通过SPE在5g磺酸(SCX)上纯化，首先用MeOH洗涤，然后使用10%NH3/MeOH溶液洗脱，得到产物的游离碱。将适当的级分合并，并在真空中蒸发，然后与cHex一起共沸，并在高真空线上干燥，得到作为白色固体的所需产物(69 mg)。
LCMS (方法A): Rt = 0.80 min, MH+ = 433.2。
实施例 8: 2-(5-{[(3R)-3- 氨基 -1- 哌啶基 ] 羰基 }-1- 甲基 -1H- 苯并咪唑 -2- 基 )-1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -5- 醇
在氮气下，使用冰水浴，将(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮(11 mg, 0.025 mmol)在二氯甲烷(DCM) (3 mL)中的溶液冷却至~0℃。在剧烈搅拌下，将三溴化硼(8µL, 0.085 mmol)逐滴加入反应物中。在搅拌下，历时4小时将反应混合物恢复至室温。将反应混合物用水(5 mL)分配，将有机层使用疏水玻璃料分离，并将水层用DCM (2 x 10 mL)重萃取。将合并的有机层在真空中蒸发，但是LCMS表明不存在产物。将水层通过逐滴加入NaHCO3进行中和，用DCM分配，并分离。将水层用DCM (2 x 15mL)重萃取，并将合并的有机层在真空中浓缩，得到粗产物。将残余物溶解在1 mL DMSO中，并通过使用碳酸氢铵改性剂的MDAP (方法E)进行纯化。将适当的级分在真空中蒸发，得到作为黄色胶质的标题化合物(12mg)。
LCMS (方法A): Rt = 0.67 min, MH+ = 419.25。
实施例 9A: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮
向(R)-(1-(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(4.4 g, 8.26 mmol)在二氯甲烷(DCM) (20 ml)中的溶液中，逐滴加入TFA (9 ml, 118 mmol)。将反应混合物搅拌1小时30分钟。LC/MS表明，已经形成期望产物，没有剩余起始原料。将反应混合物在真空下浓缩，得到油。将油溶解在甲醇中，并分成2个相等批料，穿过2个单独的70g SCX柱。将柱用MeOH (2CV)洗涤，并用2M的氨在甲醇中的溶液(3CV)从两个柱收集作为游离碱的产物。将产物在真空下浓缩和在真空下干燥，得到作为白色固体的标题化合物(3.46g)。
LCMS (方法A): Rt = 0.89 min, MH+ = 433.4。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm: 8.42 (dd, 1H), 8.12 (dd, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.22 (dd, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.87 (s, 1H), 4.62 (q, 2H), 4.14 (s, 3H), 3.99 (s, 3H), 3.50 - 4.43 (m, 2H), 2.63 - 2.71 (m, 1H), 2.58 - 3.11 (m, 2H), 1.82 - 1.91 (m, 1H), 1.61 - 1.76 (m, 1H), 1.52 - 1.59 (m, 2H), 1.39 - 1.50 (m, 1H), 1.25 (t, 3H), 1.20 - 1.26 (m, 1H)。
实施例 9B: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 , 盐酸盐
将(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮(2.365g)溶解在DCM (6ml)中，并将HCl (2M的在乙醚中的溶液) (2.735 ml, 5.47 mmol)加入溶液中。然后在氮气下除去溶剂，并在真空下浓缩，得到作为白色固体的标题化合物(2.43 g)。
LCMS (方法A): Rt = 0.89 min, MH+ = 433.3。
实施例 10A: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮
向(R)-(1-(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.5587 g, 2.79 mmol)在DCM (10 ml)中的溶液中，逐滴加入TFA (5 mL, 65.3 mmol)。将反应混合物搅拌30分钟，然后在真空下浓缩，得到油。将油溶解在甲醇中，并加载到70g SCX柱上。将柱用MeOH (2CV)洗涤，并用2M的氨在甲醇中的溶液(3CV)收集作为游离碱的产物。将产物在真空中浓缩，得到粗产物。将其通过高pH MDAP (方法E)进行纯化。将适当的级分合并，并在真空中浓缩，得到作为白色固体的标题化合物, 1.127g。
LCMS (方法A): Rt = 0.96 min, MH+ = 459.3。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm: 8.27 (1 H, dd), 7.99 (1 H, dd), 7.22 (1 H, s), 7.08 (1 H, dd), 6.94 (1 H, s), 6.76 (1 H, s), 4.36 (2 H, d), 4.00 (3 H, s), 3.86 (3 H, s), 3.45 - 4.27 (4 H, m), 2.80 - 2.97 (1 H, m), 2.64-2.80(2 H, m), 1.71 - 1.87 (1 H, m), 1.50 - 1.66 (1 H, m), 1.28 - 1.44 (1 H, m), 1.14 - 1.29 (1 H, m), 0.84 - 1.07 (1 H, m), 0.08 - 0.22 (2 H, m), -0.08 - 0.05 (2 H, m)。
实施例 10B: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 , 盐酸盐
将(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮(2.2g)溶解在最小体积的DCM中，并将HCl (2M的在乙醚中的溶液) (2.4 ml, 4.80 mmol)加入该溶液中。将得到的混悬液声处理2分钟，并将溶液在真空下浓缩，得到作为白色固体的标题化合物(2.57g)。
LCMS (方法A): Rt = 0.95 min, MH+ = 459.3。
实施例 11A: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(7- 甲氧基 -1- 甲基 -2-(1-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮
在0℃，向(R)-(1-(7-甲氧基-1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(4.31g, 7.35 mmol)在二氯甲烷(DCM) (20 ml)中的溶液中，逐滴加入TFA (9 ml, 118 mmol)。将反应混合物搅拌5分钟，并将其温热至室温和搅拌3小时。将反应混合物在真空下浓缩，得到油。将油溶解在甲醇中，并分成2个相等批料。将这些穿过2个单独的70g SCX柱。将柱用MeOH (2CV)洗涤，并用2M的氨在甲醇中的溶液(3CV)从两个柱收集作为游离碱的产物。将产物浓缩和在真空下干燥，得到作为白色固体的标题化合物(2.53g)。
LCMS (方法A): Rt = 0.97 min, MH+ = 487.1。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm: 8.48 (dd, 1H), 8.21 (dd, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.32 - 7.33 (m, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.74 (q, 2H), 4.19 (s, 3H), 4.00 (s, 3H), 3.51 - 4.39 (m, 2H), 2.64 - 2.73 (m, 1H), 2.62 - 3.01 (m, 2H), 1.83 - 1.90 (m, 1H), 1.62 - 1.77 (m, 1H), 1.49 - 1.59 (m, 2H), 1.39 - 1.50 (m, 1H), 1.17 - 1.30 (m, 1H)。
实施例 11B: (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(7- 甲氧基 -1- 甲基 -2-(1-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 , 盐酸盐
将(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮(1.5073g)溶解在DCM (5ml)中，并将HCl (2M的在乙醚中的溶液) (1.5 ml, 3.00 mmol)加入到该溶液中。然后在氮气下除去溶剂，并在真空下浓缩，得到作为白色固体的标题化合物(1.61g)。
LCMS (方法A): Rt = 0.96 min, MH+ = 487.2。
实施例 12: (3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮
向(1-(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(104 mg, 0.207 mmol)在二氯甲烷(DCM) (1 mL)中的溶液中，加入TFA (0.367 mL, 4.76 mmol)，并将反应物在室温搅拌2h。LCMS (A1)表明没有期望的产物，但是反应已经进行至1种主要产物。将反应混合物在真空中浓缩，得到无色油。将其溶解在甲醇中，并加载到SCX柱(5g)上。将它用甲醇(3柱体积)洗脱，并用2M的氨在甲醇中的溶液洗脱作为游离碱的产物。将得自氨级分的滤液在真空中浓缩，得到黄色固体- (3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮(81 mg, 0.201 mmol, 97%收率)。
LCMS (方法B): Rt = 0.64 min, MH+ = 403.2。
实施例 13: ((3S,4R)-3- 氨基 -4- 羟基哌啶 -1- 基 )(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 , 盐酸盐
向含有((3S,4R)-1-(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-4-羟基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(37 mg, 0.068 mmol)在二氯甲烷(DCM) (1 mL)中的溶液的烧瓶中，加入TFA (0.199 mL, 2.58 mmol)，并将反应物搅拌1 h。将反应混合物在真空中浓缩，得到棕色油。将其溶解在甲醇中，并加载到SCX柱(5 g)上。将它用甲醇(3柱体积)洗脱，并用2M的氨在甲醇中的溶液洗脱作为游离碱的产物。将得自氨级分的滤液在真空中浓缩，得到黄色油- ((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮(32 mg, 0.068 mmol, 100%收率)。在管形瓶中将其溶解在二氯甲烷(DCM) (1 mL)中，并加入HCl (2 M的在Et2O中的溶液) (0.034 mL, 0.068 mmol)。将得到的混悬液声处理5 min，并将其静置15 min。然后在氮气正压下除去溶剂，并在真空中干燥产物，得到作为白色固体的((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐(32 mg, 0.067 mmol, 98%收率)。
LCMS (方法A): Rt = 0.83分钟, MH+ = 445.3。
实施例 14: ((3S,4R)-3- 氨基 -4- 羟基哌啶 -1- 基 )(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 , 盐酸盐
向含有((3S,4R)-1-(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-4-羟基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(143 mg, 0.249 mmol)在二氯甲烷(DCM) (1.5 mL)中的溶液的烧瓶中，加入TFA (0.307 mL, 3.98 mmol)，并将反应物搅拌1 h。LCMS表明完全反应。将反应混合物在真空中浓缩，得到棕色油。将其溶解在甲醇中，并加载到SCX柱(5g)上。将它用甲醇(3柱体积)洗脱，并用2M的氨在甲醇中的溶液洗脱作为游离碱的产物。将得自氨级分的滤液在真空中浓缩，得到黄色油- 通过LCMS确定97%纯度。将粗产物(104 mg)溶解于DMSO/MeOH (1:1, 1.8mL)中，并通过MDAP (方法E, 2次注射)进一步纯化。将适当的级分合并，并在真空中浓缩，得到作为无色油的期望产物- ((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮(71 mg, 0.150 mmol, 60.1%收率)。在管形瓶中，将游离碱(71 mg)溶解在二氯甲烷(DCM) (1 mL)中，并加入HCl (2M的在Et2O中的溶液) (0.075 mL, 0.15 mmol)。将得到的混悬液声处理5 min，并将其静置15min。然后在氮气正压下除去溶剂，并在真空中干燥产物，得到作为米色固体的((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐(78 mg, 0.153 mmol, 61.3%收率)。
LCMS (方法A): Rt = 0.74 min, MH+ = 475.3。
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.41 (dd, J=4.6, 1.7 Hz, 1H), 8.13 (dd, J=7.9, 1.7 Hz, 1H), 7.94 - 8.11 (m, 3H), 7.44 (s, 1H), 7.22 (dd, J=7.9, 4.6 Hz, 1H), 7.08 (s, 1 H) 6.96 (s, 1H), 5.71 (br. s., 1 H), 4.50 (d, J=6.9 Hz, 2H), 4.14 (s, 3H), 4.05 - 4.10 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.79 - 3.99 (m, 1H), 3.40 - 3.62 (m, 3H), 3.28 - 3.35 (m, 1H), 1.68 - 1.86 (m, 2H) 1.07 - 1.18 (m, 1H), 0.24 - 0.35 (m, 2H), 0.08 - 0.18 (m, 2H)。
实施例 18 (R)-(3- 氨基哌啶 -1- 基 )(2-(1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1-(2- 甲氧基乙基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 , 盐酸盐
向(R)-(1-(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(110 mg, 0.191 mmol)在二氯甲烷(DCM) (2 mL)中的溶液中，加入TFA (0.35 mL, 4.57 mmol)。将反应混合物搅拌40分钟。LCMS表明，已经形成具有98%纯度的期望产物。将反应混合物在真空下浓缩，得到黄色油。将油溶解在甲醇中，并加载到SCX柱(10 g)上。将柱用MeOH (3CV)洗涤，并用2M的氨在甲醇中的溶液(8CV)收集作为游离碱的产物。将产物在真空中浓缩，得到无色油。将产物溶解在1:1 DMSO/MeOH (1.8 mL)中，并通过MDAP (方法E)纯化2个0.9 mL样品。将产物级分收集，并在真空下浓缩，得到作为无色油的(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮。将无色油溶解在二氯甲烷(DCM) (2 mL)中，并转移至管形瓶，并将HCl (2M的在乙醚中的溶液) (0.06 mL, 0.120 mmol)加入到该溶液中。在氮气下除去溶剂，然后将样品在真空枪（pistol）中干燥过夜，得到作为白色固体的(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐(75.8 mg, 0.148 mmol, 77%收率)。
LCMS (方法A): Rt = 0.88分钟, MH+ = 477.4。
实施例 23: (( 顺式 )-5- 氨基 -2- 甲基哌啶 -1- 基 )(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 , 盐酸盐 ( 具有顺式 - 相对立体化学的实施例 24 的对映异构体 )
向含有((3S,6R)-1-(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-6-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(47 mg, 0.082 mmol)在二氯甲烷(DCM) (1 mL)中的溶液的烧瓶中，加入TFA (0.253 mL, 3.28 mmol)，并将反应物搅拌2.5 h。将反应混合物在真空中浓缩，得到棕色油。将其溶解在甲醇中，并加载到SCX柱(5g)上。将它用甲醇(3柱体积)洗脱，并用2M的氨在甲醇中的溶液洗脱作为游离碱的产物。将得自氨级分的滤液在真空中浓缩，得到黄色油- ((2R,5S)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮(35 mg, 0.074 mmol, 90%收率)。在管形瓶中将游离碱(35mg)溶解在二氯甲烷(DCM) (1 mL)中，并加入HCl (2M的在Et2O中的溶液) (0.037 mL, 0.074 mmol)。将得到的混悬液声处理5 min，并将其静置15 min。然后在氮气正压下除去溶剂，并在真空中干燥产物，得到作为米色固体的((2R,5S)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮, 盐酸盐(37 mg, 0.073 mmol, 89%收率)。
LCMS (方法A): Rt = 0.98 min, MH+ = 473.3。
实施例 24: (( 顺式 )-5- 氨基 -2- 甲基哌啶 -1- 基 )(2-(1-( 环丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 , 盐酸盐 ( 具有顺式 - 相对立体化学的实施例 23 的对映异构体 )
以与实施例23类似的方式从((3S,6R)-1-(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-6-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯制备。
LCMS (方法A): Rt = 0.98 min, MH+ = 473.3。
生物学数据
PAD4 酶表达
将重组人PAD4 (残基1-663)在大肠杆菌中表达为N-端GST-标记的融合蛋白。在蛋白的纯化过程中，通过用PreScission蛋白酶(GE Healthcare)切割来除去GST标记。使用FLINT NH3释放测定，确定终产物的活性。
PAD4 酶测定：条件 A
将8 μl PAD4酶在以下测定缓冲液中稀释至75nm的测定浓度：测定缓冲液(a).: (100mM HEPES, 50mM NaCl, 2mM DTT和0.6mg/ml BSA pH 8)，或测定缓冲液(b).: (100mM HEPES, 50mM NaCl, 2mM DTT, 7.5%甘油和1.5mM CHAPS pH 8)，并加入到在Greiner高容积384孔黑色板内的、含有0.1 μl不同浓度的化合物或DMSO媒介物(0.8%终浓度)的孔中。在室温预温育30min以后，通过加入4 μl底物缓冲液来开始反应，所述底物缓冲液含有3mM N-a-苯甲酰基-L-精氨酸乙酯(BAEE)、100mM HEPES、50mM NaCl、600uM CaCl2 (2H2O)和2mM DTT，pH 8.0。在100min以后，通过加入38 μl含有50mM EDTA、2.6mM苯二醛和2.6mM DTT的停止/检测缓冲液，停止反应。将测定物在室温温育90min，然后在Envision平板读数器(Perkin Elmer Life Sciences, Waltham, MA, USA)上测量荧光信号(λex 413/λem 476)。
PAD4 酶测定：条件 B
将8 μl PAD4酶在测定缓冲液(100mM HEPES, 50mM NaCl, 2mM DTT和0.6mg/ml BSA pH 8)中稀释至30nM的测定浓度，并加入到在Greiner高容积384孔黑色板内的、含有0.1 μl不同浓度的化合物或DMSO媒介物(0.8%终浓度)的孔中。在室温预温育30min以后，通过加入4 μl底物缓冲液来开始反应，所述底物缓冲液含有3mM N-a-苯甲酰基-L-精氨酸乙酯(BAEE)、100mM HEPES、50mM NaCl、600uM CaCl2 (2H2O)和2mM DTT，pH 8.0。在60min以后，通过加入38 μl含有50mM EDTA、2.6mM苯二醛和2.6mM DTT的停止/检测缓冲液，停止反应。将测定物在室温温育90min，然后在Envision平板读数器(Perkin Elmer Life Sciences, Waltham, MA, USA)上测量荧光信号(λex 405/λem 460)。
PAD2 酶表达
将重组人PAD2 (残基1-665)在杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中表达为N-端6His-FLAG-标记的融合蛋白。使用FLINT NH3释放测定，确定终产物的活性。
PAD2 酶测定
将8 μl PAD2酶在测定缓冲液(100mM HEPES, 50mM NaCl, 2mM DTT, 7.5%甘油和1.5mM CHAPS pH 8)中稀释至30nM的测定浓度，并加入到在Greiner高容积384孔黑色板内的、含有0.1 μl不同浓度的化合物或DMSO媒介物(0.8%终浓度)的孔中。在室温预温育30min以后，通过加入4 μl底物缓冲液来开始反应，所述底物缓冲液含有180uM N-a-苯甲酰基-L-精氨酸乙酯(BAEE)、100mM HEPES、50mM NaCl、240uM CaCl2 (2H2O)和2mM DTT，pH 8.0。在90min以后，通过加入38 μl含有50mM EDTA、2.6mM苯二醛和2.6mM DTT的停止/检测缓冲液，停止反应。将测定物在室温温育90min，然后在Envision平板读数器(Perkin Elmer Life Sciences, Waltham, MA, USA)上测量荧光信号(λex 405/λem 460)。
结果
在上面的PAD4酶测定或类似的测定中试验了实施例1、2A、2B、3、4A、4B、5B、6、7、8、9A、9B、10B、11A、11B、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23和24，它们具有在5-7.5的范围内的平均pIC50。实施例5B的平均pIC50为6.7；实施例9B的平均pIC50为6.7；实施例10B的平均pIC50为7.3；实施例11B的平均pIC50为6.9；实施例14的平均pIC50为7.1。
为了评估与PAD2相比对PAD4的选择性，在上面的PAD2酶测定或类似的测定中试验了下述实施例2B、5B、9B、10B、11B、13、16、19和22，它们具有在<4.1-4.2的范围内的平均pIC50。实施例5B、9B、10B、11B和14的平均pIC50值都<4.1。

Claims (22)

1. 式(I)的化合物或其盐：
其中；
R1是氢或C1-6烷基；
R2是氢、C1-6烷基、全卤代甲基C0-5烷基-O-或C1-6烷氧基；
R3是氢、C1-6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基；
R4是氢、C1-6烷基、卤代甲基C1-6烷基；或未被取代的C3-6环烷基C1-6烷基；
A是C-R5或N；
B是C-R6或N；
D是C-R7或N；
前提条件是，A、B和D中的至少一个是N；
R5是氢或C1-6烷基；
R6是氢或C1-6烷基；
R7是氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基或羟基；
R8是氢或C1-6烷基，前提条件是，R4和R8中的一个是氢；
R9是氢或羟基。
2. 根据权利要求1所述的式(I)的化合物或其盐，其中R1是氢。
3. 根据权利要求1或权利要求2所述的式(I)的化合物或其盐，其中R2是氢或C1-6烷氧基。
4. 根据前述权利要求中的任一项所述的式(I)的化合物或其盐，其中R3是C1-6烷基。
5. 根据前述权利要求中的任一项所述的式(I)的化合物或其盐，其中R4是C1-6烷基、未被取代的C3-6环烷基C1-6烷基或全卤代甲基C1-6烷基。
6. 根据前述权利要求中的任一项所述的式(I)的化合物或其盐，其中R5是氢。
7. 根据前述权利要求中的任一项所述的式(I)的化合物或其盐，其中R6是氢。
8. 根据前述权利要求中的任一项所述的式(I)的化合物或其盐，其中R7是氢、C1-6烷氧基或羟基。
9. 根据前述权利要求中的任一项所述的式(I)的化合物或其盐，其中R7是氢。
10. 根据前述权利要求中的任一项所述的式(I)的化合物或其盐，其中R8是氢。
11. 根据前述权利要求中的任一项所述的式(I)的化合物或其盐，其中R9是氢。
12. 根据前述权利要求中的任一项所述的式(I)的化合物或其盐，其中R9是羟基。
13. 根据前述权利要求中的任一项所述的式(I)的化合物或其盐，其中R10是氢。
14. 根据前述权利要求中的任一项所述的式(I)的化合物或其盐，其中R10是羟基。
15. 选自由以下成员组成的列表的式(I)的化合物或其盐：
1-{[2-(1-乙基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基]羰基}-3-哌啶胺；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
2-(5-{[(3R)-3-氨基-1-哌啶基]羰基}-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-醇；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-7-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(1-新戊基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
((R)-3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(1-(2-甲基丁基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；和
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-2-(1-(2-甲氧基-2-甲基丙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
及其盐。
16. 选自由以下成员组成的列表的式(I)的化合物：
((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(S)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-异丁基-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-异丁基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
((2R,5S)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；和
((2R,5S)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
及其盐。
17. 选自由以下成员组成的列表的式(I)的化合物：
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
(R)-(3-氨基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；和
((3S,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮；
及其盐。
18. 作为药学上可接受的盐的根据权利要求1-17中的任一项所述的式(I)的化合物。
19. 一种治疗类风湿性关节炎、血管炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤型红斑狼疮或银屑病的方法，所述方法包括：给有此需要的人受试者施用治疗有效量的如在权利要求1-17中的任一项中定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
20. 用在治疗中的如在权利要求1-17中的任一项中定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
21. 用于治疗类风湿性关节炎、血管炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤型红斑狼疮或银屑病的如在权利要求1-17中的任一项中定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
22. 一种药物组合物，其包含如在权利要求1-17中的任一项中定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
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