CN104069200A - 一种三黄泻心汤配方颗粒及其制备方法和检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种三黄泻心汤配方颗粒及其制备方法和检测方法，所述三黄泻心汤配方颗粒由质量比为2：1：1的大黄、黄岑和黄连加水煎煮，滤过后，再将滤液浓缩干燥而成；所述检测方法包括通过薄层色谱法鉴定所述三黄泻心汤配方颗粒；通过高效液相色谱法测定所述三黄泻心汤配方颗粒的指纹图谱；通过热浸法测定所述三黄泻心汤配方颗粒的浸出物含量；通过高效液相色谱法测定所述三黄泻心汤配方颗粒中物质的含量。本发明的三黄泻心汤按传统方法合煎，充分发挥中药配伍的优势，体现了中医药整体观念，确保其达到减毒增效的目的，克服了目前单味配方颗粒服用时各药味简单相加带来的不足建立了三黄泻心汤配方颗粒的工艺条件和完善质量标准。

Description

一种三黄泻心汤配方颗粒及其制备方法和检测方法

技术领域

本发明属于中药领域。具体涉及一种中药及其制备方法和检测方法，尤其涉及一种三黄泻心汤配方颗粒及其制备方法和检测方法。

背景技术

三黄泻心汤又名大黄黄连泻心汤，出自张仲景《金匮要略》卷中，主治邪火内炽，迫血妄行，吐血，衄血，便秘溲赤；或湿热内蕴而成黄疸，胸痞烦热；三焦积热，眼目赤肿，口舌生疮，外证疮疡，心胸烦闷，大便秘绪；湿热黄疸，胸中烦热痞满，舌苔黄腻，脉数实者。常用的制剂有一清系列制剂及三黄片，三黄胶囊等，现代临床和药理研究表明三黄泻心汤具有明显的抗病原微生物、抗炎、保护胃黏膜、促凝血和止血等作用，近年来三黄泻心汤在血压、血糖、脑缺血再灌注和肥胖等方面的药理作用的研究有了一定的突破。

目前药典收录品种，如片剂、胶囊剂等，大多采用了乙醇提取有效成分，改变传统汤剂共煎的方式，虽然极大的减少了服药量，但在成型工艺时引入了大量的辅料，改变了传统防己的物质基础，如三黄片等。

中药配方颗粒是在中医药理论指导下，以规范炮制加工的中药饮片为原料，采用提取、低温浓缩和瞬间干燥等工艺技术而制成的颗粒剂。单味的配方颗粒最早出现在日本，20世纪80年代发展加快，约2/3的日本医生在临床中应有配方颗粒剂，在开发研究领域取得了瞩目的成就，其中研究的复方配方颗粒约有200种，单味中药浓缩颗粒200余种。我国于90年代初开始研制配方颗粒，以成功研制出400余种单味的中药配方颗粒，复方的配方颗粒剂未见报告。因此，复方配方颗粒的研究和开发具有很大的必要性和广泛的前景。

中医用药讲究整体，辩证施制。根据不同的病因，病机而灵活运用，配方颗粒正适应这一需要，即保留了原中药饮片的特征，又可随证加减。同时中药配方颗粒精选道地药材，遵循炮制规范，采用先进设备、多成分提取工艺，低温浓缩，喷雾干燥，减少了中药加热时间，避免了汤剂煎煮过程中的有效成分的挥发、破坏和变质已经先煎、后下、包煎和煎煮容器不规范导致临床疗效的减弱。同时中药配方颗粒采用铝箔袋包装，剂量准确，避免传统中药饮片贮藏中常见的走油、变色、虫蛀和霉变等难题，有利于药物储存和患者携带使用，省去了煎煮的麻烦，即使出差、旅游，也不会中断治疗。配方颗粒的生产过程中实施GMP监控，每个品种自原料、中间体、半成品及成品的各个环节分别建立了各自的生产和质量管理文件，确保产品质量的稳定。

尽管单味的中药配方颗粒具有很多优点，但在临床药效中也存在许多的不足，中药的临床运用体现了辩证统一的观点，各药物经适当配伍后，既能增强原来药物疗效，又能调和药物偏性，体现了“药有个性之特长，方有合群之妙用”。传统汤剂中的药物通过共同煎煮能相互促进，相互制约，增加疗效，缓和药性。而单味的中药配方颗粒，直接冲服，对它的药效具有一定的影响。同时由于患者受到传统思想的束缚，汤剂的应有在人们的脑中已根深蒂固，因此，需要加大配方颗粒的宣传突破这种格局。

本发明是在中医理论的基础上，选取《金匮要略》经典药方：三黄泻心汤，运用现代提取技术，低温浓缩，喷雾干燥制得复方配方颗粒，工艺稳定可行。既便于临床的使用，具有单味配方颗粒的优点，同时也克服了单味配方颗粒上的药效上的缺陷，充分发挥传统配伍的优势，有广泛的市场前景。

发明内容

因此，本发明的目的是针对现有技术中存在的三黄泻心汤配方颗粒单味配方颗粒药效上的缺陷，提供一种三黄泻心汤配方颗粒及其制备方法和检测方法，该三黄泻心汤配方颗粒充分发挥配伍的优势，具有广泛的市场前景，其制备方法简单，并通过该检测方法使其能够更为安全地使用。

针对上述目的，本发明提供的技术方案如下：

一方面，本发明提供一种三黄泻心汤配方颗粒，所述三黄泻心汤配方颗粒由质量比为2：1：1的大黄、黄岑和黄连加水煎煮，滤过后，再将滤液浓缩干燥而成。

另一方面，本发明提供一种上述本发明所述的三黄泻心汤配方颗粒的制备方法，所述方法包括以下步骤：

以2：1：1的质量比称取大黄、黄岑和黄连加水煎煮1～3次，每次提取1～2小时；过滤，合并滤液后，再将其浓缩成浸膏，干燥制粒，即得。

优选地，提取2次。

优选地，每次提取1小时。

优选地，第一次提取每克大黄、黄岑和黄连加8ml的水提取，或第二次提取每克大黄、黄岑和黄连加6ml的水提取。

优选地，在第一次煎煮前，还包括浸泡的步骤，更优选地，浸泡0.5～1.5小时，优选浸泡0.5小时。

优选地，所述干燥为喷雾干燥。

还一方面，本发明提供一种上述本发明所述的三黄泻心汤配方颗粒的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：

步骤1：通过薄层色谱法鉴定所述三黄泻心汤配方颗粒；

步骤2：通过高效液相色谱法测定所述三黄泻心汤配方颗粒的指纹图谱；

步骤3：通过热浸法测定所述三黄泻心汤配方颗粒的浸出物含量；

步骤4：通过高效液相色谱法测定所述三黄泻心汤配方颗粒中大黄和黄连的含量，优选地，所述大黄的含量通过测定大黄素和大黄酚确定，所述黄连的含量通过测定盐酸小檗碱确定。

优选地，所述步骤1包括以下步骤：

1）制备第一大黄样品溶液组和第一黄连样品溶液组，所述第一大黄样品溶液组包括第一大黄供试品溶液和大黄对照药材溶液，更优选地，所述第一大黄样品溶液组还包括第一大黄阴性对照样品溶液，所述大黄阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含大黄的样品，该样品不含大黄素和大黄酚；所述第一黄连样品溶液组包括第一黄连供试品溶液和第一盐酸小檗碱对照品溶液，更优选地，所述第一黄连样品溶液组还包括第一黄连阴性对照样品溶液，所述黄连阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含黄连的样品，该样品不含盐酸小檗碱；

优选地，所述第一大黄样品溶液组通过包括以下步骤的方法制得：

分别取所述三黄泻心汤配方颗粒、大黄对照药材和大黄阴性对照样品加甲醇溶解，超声处理，取上清液作为供试品溶液；还优选地，超声处理5分钟；更优选地，加甲醇5ml；再优选地，取所述三黄泻心汤配方颗粒0.20～0.30g，优选取0.25g，或优选地，取所述大黄阴性对照样品0.20～0.30g，优选取0.25g、或优选地，取所述大黄对照药材0.20～0.30g，优选取0.20g；

或优选地，所述第一黄连供试品溶液或第一黄连阴性对照样品溶液通过包括以下步骤的方法制得：

分别取所述三黄泻心汤配方颗粒、黄连阴性对照样品加甲醇溶解，超声处理，取上清液作为供试品溶液；还优选地，超声处理5分钟；更优选地，当制备所述第一黄连供试品溶液或第一黄连阴性对照样品溶液时，加甲醇5ml，或当制备第一盐酸小檗碱对照品溶液时，取盐酸小檗碱对照品，加甲醇定容，优选定容到20ml；再优选地，取所述三黄泻心汤配方颗粒0.20～0.30g，优选取0.25g、黄连阴性对照样品0.20～0.30g，优选取0.20g或盐酸小檗碱5～7mg，优选取5mg；

2）将第一大黄样品溶液组分别点于同一硅胶G薄层板上，将第一黄连样品溶液组分别点于同一硅胶G薄层板上，加展开剂展开，取出晾干，喷以显色剂至斑点显色，检测，即得；优选置于365nm紫外灯下检视；

优选地，所述第一大黄样品溶液组以环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂展开；更优选地，所述环己烷-乙酸乙酯-甲酸中环己烷、乙酸乙酯和甲酸的体积比为12：3：0.1；

或优选地，所述第一黄连样品溶液组以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂；更优选地，所述乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水中乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水的体积比为10：7：1：1。

优选地，所述步骤2或4通过包括以下步骤的方法进行：

制备待测样品溶液，通过高效液相色谱法测定；

优选地，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

优选地，当测定指纹图谱时，以甲醇为流动相A，以磷酸调pH=2.0的0.01mol/L磷酸二氢钾为流动相B按下述条件进行梯度洗脱：

0至10分钟：流动相A的浓度由10体积%匀速变为20体积%，流动相B浓度由90体积%匀速变为80体积%；

10至15分钟：流动相A的浓度由20体积%匀速变为30体积%，流动相B浓度由80体积%匀速变为70体积%；

15至30分钟：流动相A的浓度由30体积%匀速变为40体积%，流动相B浓度由70体积%匀速变为60体积%；

30至70分钟：流动相A的浓度由40体积%匀速变为60体积%，流动相B浓度由60体积%匀速变为40体积%；

70至90分钟：流动相A的浓度由60体积%匀速变为80体积%，流动相B浓度由40体积%匀速变为20体积%；

90至100分钟：流动相A的浓度由80%匀速变为90体积%，流动相B浓度由20体积%匀速变为10体积%；或

当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中大黄的含量时，以甲醇-0.1体积%磷酸为流动相，所述甲醇-0.1体积%磷酸中甲醇和0.1体积%磷酸的体积比为85：15；或

当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中黄连的含量时，以乙腈-水为流动相，所述乙腈-水中乙腈和水的体积比为1：1，其中每1000ml流动相中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g；

还优选地，当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中大黄的含量时，理论板数按大黄素峰计算应不低于2000，或当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中黄连的含量时，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；或当测定指纹图谱时，理论板数按黄岑苷峰计算应不低于3000；

进一步优选地，当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中黄连的含量或当测定指纹图谱时，检测波长为265nm，或当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中大黄的含量时，检测波长为254nm；

或还优选地，当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中大黄和黄连的含量时，所述待测样品溶液包括第二大黄样品溶液组和第二黄连样品溶液组，所述第二大黄样品溶液组包括第二大黄供试品溶液和第二大黄对照品溶液，所述大黄对照品包括大黄素对照品和大黄酚对照品；更优选地，所述第二大黄样品溶液组还包括第二大黄阴性对照样品溶液，所述大黄阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含大黄的样品，该样品不含大黄素和大黄酚；或

所述第二黄连样品溶液组包括第二黄连供试品溶液和第二盐酸小檗碱对照品溶液；更优选地，所述第二黄连样品溶液组还包括第二黄连阴性样品溶液，还优选地，所述黄连阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含黄连的样品，该样品不含盐酸小檗碱；

还优选地，当测定指纹图谱时，所述待测样品溶液包括三黄泻心汤配方颗粒供试品溶液和黄岑苷对照品溶液；更优选地，所述待测样品溶液还包括阴性样品溶液组，所述阴性样品溶液组包括第三大黄阴性对照样品溶液、第三黄岑阴性对照样品溶液和第三黄连阴性对照样品溶液，所述大黄阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含大黄的样品，该样品不含大黄素和大黄酚；所述黄连阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含黄连的样品，该样品不含盐酸小檗碱；所述黄芩阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含黄芩的样品。

优选地，当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中大黄含量时，所述待测样品溶液通过包括以下步骤的方法制得：

分别取适量所述三黄泻心汤配方颗粒、大黄对照品或大黄阴性对照样品，加适量甲醇，即得；

优选地，当制备第二大黄供试品溶液或大黄阴性对照样品溶液时，加入甲醇后，还包括超声处理的步骤，优选超声处理10分钟；还优选地，取所述三黄泻心汤配方颗粒0.5～0.8g，大黄阴性对照样品0.5～0.8g，优选取0.7g，更优选加甲醇40ml；

更优选地，当制备第二大黄对照品溶液时，制成每1ml含20～25μg大黄素的对照品溶液、每1ml含5～20μg大黄酚的对照品溶液；或

优选地，当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中黄连含量时，所述第二盐酸小檗碱对照品溶液通过包括以下步骤的方法制得：

取适量盐酸小檗碱对照品，加适量甲醇，即得，还优选地，制成每1ml含95～105μg盐酸小檗碱的第二盐酸小檗碱对照品溶液；

还优选地，通过包括分别取适量所述三黄泻心汤配方颗粒或黄连阴性样品，加甲醇-盐酸，超声处理的步骤制得第二黄连供试品溶液或第二黄连阴性对照样品溶液，优选取甲醇-盐酸20ml，其中甲醇和盐酸的体积比为500：1；

优选地，取待测样品0.20～0.3g，优选取0.20g。

优选地，当测定指纹图谱时，所述待测样品溶液通过包括以下步骤的方法制得：

分别取所述三黄泻心汤配方颗粒、黄岑苷对照品或阴性对照样品，加适量甲醇，即得；

优选地，当制备三黄泻心汤配方颗粒供试品溶液或黄岑苷阴性对照样品溶液时，加入甲醇后，还包括超声处理的步骤，优选超声处理30分钟；

还优选地，分别取所述三黄泻心汤配方颗粒和阴性对照样品0.20～0.3g，优选取0.20g；

优选地，当制备黄岑苷对照品溶液时，取黄岑苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1～0.2mg黄岑苷对照品的黄岑苷对照品溶液。

优选地，所述步骤3中浸出物的质量百分比含量≥41.84%。

本发明所述的三黄泻心汤配方颗粒，清热解毒，泻火通便。用于三焦热盛所致的目赤肿痛、口鼻生疮、咽喉肿痛、牙龈肿痛、心烦口渴、尿黄和便秘；亦用于急性胃肠炎、痢疾。

【用法与用量】供配方用，遵医嘱。

【规格】每g相当于饮片3.4g。

【包装规格】每袋装1.5g。

【贮藏】密封，阴凉干燥处保存。

本发明所述的三黄泻心汤配方颗粒的有效期为24个月。

本发明所述的三黄泻心汤配方颗粒具有以下优点：

（1）三黄泻心汤按传统方法合煎，充分发挥中药配伍的优势，体现了中医药整体观念，确保其达到减毒增效的目的，克服了目前单味配方颗粒服用时各药味简单相加带来的不足；

（2）建立了三黄泻心汤配方颗粒的工艺条件和完善质量标准，可以有效地控制该配方颗粒的质量；

（3）三黄泻心汤配方颗粒便于药物储存和患者携带使用，患者在使用上省去了煎煮的麻烦；

（4）对促进传统中医药现代化有较大意义。

本发明应用于三黄泻心汤配方颗粒的制备和质量控制。

本发明在极大保留三黄泻心汤汤剂药效的基础上开发出一种服用方便便于保存的中药制剂。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1为本发明所述的三黄泻心汤配方颗粒的第一大黄样品溶液组的薄层层析色谱图，图中，1为大黄对照药材，2为大黄阴性对照样品，3-4为三黄泻心汤配方颗粒的大黄供试品1-2；

图2为本发明所述的三黄泻心汤配方颗粒的第一黄连样品溶液组的薄层层析色谱图；图中，1为盐酸小檗碱对照药材，2为盐酸小檗碱阴性对照样品，3-6为三黄泻心汤配方颗粒的盐酸小檗碱供试品1-3；

图3为本发明所述的三黄泻心汤配方颗粒的指纹图谱；

图4为本发明所述的黄岑阴性对照样品的指纹图谱；

图5为本发明所述的大黄阴性对照样品的指纹图谱；

图6为本发明所述的黄连阴性对照样品的指纹图谱；

其中上述图4-6中3号、7号、9号、11号、12号为黄连特征峰，6号、14号、15号、16号、17号为黄芩特征峰，1号、2号、4号、5号、10号、13号、18号、19号、20号为大黄特征峰；

图7a-图7c为本发明实施例5中大黄样品溶液组的专属性试验结果，其中，图7a为按处方制备的缺少大黄药材的阴性对照样品的高效液相色谱图；图7b为大黄素和大黄酚对照品的高效液相色谱图；图7c为所述的三黄泻心汤配方颗粒的高效液相色谱图；

图8为本发明所述的实施例5中大黄酚的标准曲线；

图9为本发明所述的实施例5中大黄素的标准曲线；

图10a-图10c为本发明实施例5中第二黄连样品溶液组的专属性试验结果，其中，图10a为按处方制备的缺少黄连药材的黄连阴性对照样品的指纹图谱；图10b为盐酸小檗碱对照药材的高效液相色谱图，图10c为所述的三黄泻心汤配方颗粒的高效液相色谱图；

图11为本发明所述的实施例5中盐酸小檗碱的标准曲线。

具体实施方式

除非特别指明，以下实施例中所用的大黄、黄岑和黄连均购自康美药业。

除非特别指明，以下实施例中所用的试剂均为分析纯试剂，且可从正规渠道商购获得。

除非特别指明，本文中的“本品”均指“三黄泻心汤配方颗粒”。

实施例1三黄泻心汤配方颗粒的制备

1.药材来源，如下述表1所示。

表1

2.仪器设备

B-290型喷雾干燥仪，瑞士步琦公司；RE-5205型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂。

3.制备方法

取大黄10g、黄连5g、黄芩5g加水后浸泡，然后煎煮，滤过，合并滤液，70℃减压浓缩，滤液浓缩至相对密度1.15(60℃)的清膏，喷雾干燥，进风温度为160℃，出风温度80℃，泵转速2%，干燥得干浸膏粉；然后将干浸膏粉投入干法制粒机中，制粒，颗粒分装，每袋3g，即得。

具体条件如下表2所示：

表2煎煮次数的选择

实验结果表明，以浸膏得率为指标，第三次水提所占浸膏比例为8.7质量%；以大黄素和小檗碱为考察指标，有所下降，说明水提两次基本已提取完全，因此采用水提两次的工艺。

水提工艺的影响因素有浸泡时间、煎煮时间、水的用量(均用药材量的倍量表示)。采用正交试验优选提取各溶媒用量的工艺，选择L9(34)正交表，重点考察上述三个因素，以大黄素的含量和大黄酚的含量为考察指标，因素水平表见表3。

表3正交实验因素水平表

试验方法：称取丹参药材各50g，编号1～9，按L9(34)正交表安排试验，试验结果见表4-6。

表4正交实验结果

表5浸膏得率的方差分析表

表6大黄素的含量方差分析表

以浸膏得率为指标分析，加水量和煎煮时间有显著影响，其影响的主次为A>C>B，最优化工艺条件均为：A₁B₂C₁；以大黄素为考察指标，煎煮时间有显著性影响，影响主次为C>A>B，最优化工艺为A₂B₁C₂，因B因素没有显著性影响，从节约时间，同时考虑到大黄素为重要的控制指标，选择工艺条件为A₂B₃C₂，即提取两次，加水量分别为8倍和6倍，浸泡0.5小时，每次提取1小时。

2、为确保药液中的成分在后工序处理工艺过程尽量不被破坏，浓缩工艺选用目前中药制药工业中广泛认可的、对有效成分保留较好的真空浓缩，真空度为-0.06MPa，浓缩温度为70℃。

3、本工艺采用喷雾干燥法制备浸膏粉。浸膏粉的含水量对制粒影响较大，应控制在质量百分比含量为3%以下为好。根据实际生产经验，采用控制药液的相对密度等方法，在相同工艺参数条件下，进行不同药液相对密度比较实验，结果表明：药液相对密度控制在1.10～1.20（60℃），喷雾效果较理想。

通过多次小试和中试实验，摸索出混合浸膏的喷雾干燥工艺参数为进风温度为160℃，出风温度为80℃，塔内负压为150pa。

4、制粒工艺考察

增加其流动性及减少吸湿性，故采用干压制粒后再装铝塑袋。在辅料的选择方面，主要从为保证干压制粒的成型和崩解性，选用加入质量百分比含量为0.5%的硬脂酸镁及适量的淀粉，混匀，在干压制粒机上进行干压，制成12～40目的颗粒，实验结果如下表7所示：

表7干法制粒工艺

表7的结果显示，最优干压制粒参数为：进料速度为960rpm，压辊转速为600rpm，制粒速度为580rpm。

实施例2薄层色谱法鉴定实施例1在工艺条件为A ₂ B ₃ C ₂ 时制得的三 黄泻心汤配方颗粒

1.三黄泻心汤配方颗粒中大黄的鉴别

1.1药材与试剂

大黄对照药材：批号为110715-200212，购于中国药品生物制品检定所；

供试品：按实施例1所述的方法制备的三黄泻心汤配方颗粒，批号为2011122601、2011122602，由康美药业股份有限公司制得。

薄层板：硅胶G板，购自康美药业股份有限公司。

1.2试验步骤

第一大黄供试品的制备：取本品0.25g，加甲醇5ml，超声处理5分钟，取上清液作为供试品溶液。

大黄对照药材溶液的制备：取对照药材0.2g，加甲醇3ml，超声处理5分钟，取上清液同法制成对照药材溶液。

第一大黄阴性对照样品溶液的制备：取大黄阴性对照样品（按照处方量称取黄芩和黄连，加水煎煮两次，第一次加8倍量水后浸泡半小时再煎煮提取，第二次加6倍量水，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15（60℃）的清膏，喷雾干燥，制成粉末，即得大黄阴性对照样品）0.25g，加甲醇5ml，超声处理5分钟，取上清液作为第一大黄阴性对照样品溶液。

照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(12∶3∶0.1，该比例为体积比)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，结果如图1所示，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.三黄泻心汤配方颗粒中黄连鉴别

2.1药材与试剂

盐酸小檗碱对照品：批号为110713-200208，购于中国药品生物制品检定所；

按实施例1所述的方法制备的三黄泻心汤配方颗粒，批号为2011122601、2011122602、2011122603，由康美药业股份有限公司自制。

2.2试验步骤

第一黄连供试品的制备：取本品0.25g，加甲醇5ml，超声处理5分钟，取上清液作为供试品溶液。

第一盐酸小檗碱对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱5mg，甲醇定容到20ml，作为盐酸小檗碱对照品溶液。

第一黄连阴性对照样品溶液的制备：取黄连阴性对照样品（按照处方量称取黄芩和大黄，加水煎煮两次，第一次加8倍量水后浸泡半小时再煎煮提取，第二次加6倍量水，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15（60℃）的清膏，喷雾干燥，制成粉末，即得大黄阴性对照样品）0.2519g，加甲醇5ml，超声处理5分钟，取上清液作为黄连阴性对照样品溶液，也即盐酸小檗碱阴性对照样品溶液。

照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10：7：1：1，该比例为体积比)为展开剂，展开，取出，晾干，结果如图2所示，供试品色谱中，在与小檗碱对照品色谱相应的位置上，紫外光灯(365nm)下显相同颜色的荧光斑点。

实施例3测定实施例1在工艺条件为A ₂ B ₃ C ₂ 时制得的三黄泻心汤配 方颗粒的指纹图谱

1.仪器与试药

1.1仪器：高效液相色谱仪：Agilent1100系列；色谱柱：Ecosil HPLCCOLUM C18(4.6×250mm，5μm)；电子分析天平：XP-6；FA2104；超声提取器：KQ-300VDB型双频数控超声清洗仪。

1.2试剂：甲醇为色谱纯，水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

1.3试药：按实施例1所述的方法制备的三黄泻心汤配方颗粒，批号为2011122602，黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110715-200212）。

2、色谱条件及系统适应性色谱条件与系统适应性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm）；以甲醇为流动相A，以0.01mol/L磷酸二氢钾（磷酸调pH=2.0）为流动相B，按下表8中的规定进行洗脱；检测波长为265nm；柱温为25℃；流速为每分钟1.0ml。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。

3、溶液的制备

黄芩苷对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量0.6mg，精密称定，加甲醇定容至5ml；

三黄泻心汤配方颗粒供试品溶液的制备取本品0.2094g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放置室温，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

第三大黄阴性对照样品溶液的制备取大黄阴性对照样品（按照处方量称取黄芩和黄连，加水煎煮两次，第一次加8倍量水后浸泡半小时再煎煮提取，第二次加6倍量水，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15（60℃）的清膏，喷雾干燥，制成粉末，即得大黄阴性对照样品）0.2001g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放置室温，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

第三黄连阴性对照样品溶液的制备取黄连阴性对照样品（按照处方量称取黄芩和大黄，加水煎煮两次，第一次加8倍量水后浸泡半小时再煎煮提取，第二次加6倍量水，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15（60℃）的清膏，喷雾干燥，制成粉末，即得黄连阴性对照样品）0.1987g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放置室温，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

第三黄芩阴性对照样品溶液的制备取黄芩阴性对照样品（按照处方量称取黄连和大黄，加水煎煮两次，第一次加8倍量水后浸泡半小时再煎煮提取，第二次加6倍量水，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15（60℃）的清膏，喷雾干燥，制成粉末，即得黄岑阴性对照样品）0.2057g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放置室温，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

表8梯度洗脱表

精密吸取各供试品溶液和对照品溶液适量，注入液相色谱中，记录100min的色谱图。根据多批样品的指纹图谱，在100min中类，20个共有峰，如图3所示。根据保留时间和峰高加高法确定12号峰为黄芩苷，可将其作为内参比峰。

将供试品指纹图谱对比各成分阴性对照指纹图谱可得到各成分的特征峰，3号、7号、9号、11号、12号为黄连特征峰，6号、14号、15号、16号、17号为黄芩特征峰，1号、2号、4号、5号、10号、13号、18号、19号、20号为大黄特征峰，如图4-6所示。

方法精密度的测定取同一批三黄泻心汤供试品溶液，按照2中色谱条件连续进样5次，计算各共有峰与内参比峰的相对保留时间和相对峰面积值。结果见表9。

表9共有峰的相对保留时间和相对峰面积

5次实验结果显示，相对保留时间的RSD值在0～0.001%，相对峰面积的RSD值在0.001%～0.162%，表明该方法精密度较好。

方法重现性的测定

取2011122602三黄泻心汤6份，按照3中的方法处理供试品溶液，按照2中色谱条件，分别进样，计算各共有峰与内参比峰的相对保留时间和相对峰面积值。结果见表10-11。

表10共有峰的相对保留时间

表11共有峰的相对峰面积

5次实验结果显示，相对保留时间的RSD值在0～0.029%，相对峰面积的RSD值在0.053%～1.994%，表明该方法重复性较好。

实施例4测定实施例1在工艺条件为A ₂ B ₃ C ₂ 时制得的三黄泻心汤配 方颗粒的浸出物

取按实施例1的方法制得的三黄泻心汤粉末2g，精密称定，精密加入乙醇100ml，照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（中国药典2010年版一部附录ⅩA）测定，浸出物的质量百分比含量不少于41.84%。

实施例5测定实施例1在工艺条件为A ₂ B ₃ C ₂ 时制得的三黄泻心汤配 方颗粒中物质含量—方法学考察

1.大黄

a.仪器与试药

仪器：高效液相色谱仪：Agilent1100系列；色谱柱：Ecosil HPLC COLUMC18(4.6×250mm，5μm)；电子分析天平：XP-6；FA2104；超声提取器：KQ-300VDB型双频数控超声清洗仪。

试剂：甲醇为色谱纯，水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

试药：三黄泻心汤配方颗粒6批样品；大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110796-200309)；大黄素对照品(中药固体制剂制造技术国家工程中心，批号：1038-040521)；

b.色谱条件及系统适应性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸(85﹕15)为流动相；检测波长为254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。

c.溶液的制备

第二大黄对照品溶液组的制备取大黄素对照品、大黄酚对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含大黄素22.24μg的溶液和每1ml含大黄酚16.9μg的溶液，即得。

第二大黄供试品溶液的制备取本品0.70g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

第二大黄阴性对照样品溶液的制备：取大黄阴性对照样品0.70g（按照处方量称取黄芩和黄连，加水煎煮两次，第一次加8倍量水后浸泡半小时再煎煮提取，第二次加6倍量水，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15（60℃）的清膏，喷雾干燥，制成粉末，即得大黄阴性对照样品），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

d.方法学验证

d.1准确度试验

取三黄泻心汤配方颗粒约0.70g（按实施例所述的方法制得，批号2011112601，大黄素和大黄酚的含量为0.05309%），加入精密称定，加入大黄素和大黄酚的对照品约1mg，置具塞锥形瓶中，加入精密加入甲醇40ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，结果见下表12。

表12加样回收实验结果

试验结果表明：平均回收率在95质量%～102质量%之间，加样回收良好。

d.2重复性试验

取2011122602批号的三黄泻心汤配方颗粒，制备供试品溶液6份，分别测定大黄素和大黄酚的含量，结果见表13。

表13重复性试验结果(n=6)

由上表可知本法重复性良好，符合含量测定的要求。

d.3精密度试验

取重复性项下的1份供试品溶液，按上述色谱条件，重复进样5次，测定大黄酚和大黄素的峰面积，结果见表14。

表14精密度试验结果

由上表可知本法精密度良好，符合含量测定的要求。

d.4专属性试验

按处方量制备了缺大黄药材的大黄阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照样品溶液。按以上色谱条件得到对照品、样品、阴性对照样品的色谱分离图，阴性对照样品的色谱中，在与大黄酚、大黄素对照品保留时间相应的位置均无干扰峰出现。结果见图7a-图7c。

d.5线性关系

分别精密吸取上述大黄素对照品液和大黄酚对照品液各2、4、6、8、10、12μl，按上述色谱条件测定峰面积，以各自峰面积积分值分别对大黄素和大黄酚对进样量进行回归处理，得出大黄素的回归方程为y=2895.5x-0.43，R²=0.9992，大黄酚的回归方程为y=4199.1x+1.9033，R²=1：结果见图8-9。

实验结果表明大黄素进样量在0.0447～0.2682μg范围内呈良好的线性关系，大黄酚在0.0338～0.2028μg范围内呈良好的线性关系。

d.6稳定性考察

取2011122603批次三黄泻心汤配方颗粒制备共试液，按上述色谱条件，分别于0，2，4，6，8，10，12小时进样，测定大黄素和大黄酚峰面积。结果见表15，结果表明大黄素和大黄酚在12小时内稳定。

表15稳定性试验结果

e.样品含量测定

取三黄泻心汤配方颗粒，按拟定含量测定方法操作，测定结果见表16。

表16样品含量测定结果

2.黄连

a.仪器与试药

仪器：高效液相色谱仪：Agilent1100系列；色谱柱：Ecosil HPLC COLUMC18(4.6×250mm，5μm)；电子分析天平：XP-6；FA2104；超声提取器：KQ-300VDB型双频数控超声清洗仪

试剂：乙腈为色谱纯，水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

试药：三黄泻心汤配方颗粒(按照实施例1所述的方法制得，批号：2011122601-06)，盐酸小檗碱(中国药品生物制品检定所，批号：110713-200208)

b.色谱条件及系统适应性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(1﹕1)(每1000ml中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g)为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。

c.溶液的制备

第二盐酸小檗碱对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含97μg的溶液；

第二黄连供试品溶液的制备取本品0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸（500﹕1）20ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。

第二黄连阴性对照样品溶液的制备取黄连阴性对照样品（按照处方量称取黄芩和大黄，加水煎煮两次，第一次加8倍量水后浸泡半小时再煎煮提取，第二次加6倍量水，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15（60℃）的清膏，喷雾干燥，制成粉末，即得黄连阴性对照样品。）0.2g，同供试品溶液制备成第二黄连阴性对照样品溶液，即盐酸小檗碱阴性对照样品溶液。

d.方法学验证

d.1准确度试验

精密称取2011122602批次样品约0.2g，加入盐酸小檗碱溶液1ml（0.097mg/ml），置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸(500﹕1)20ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。按照上述色谱条件进样分析，结果见表17。

表17加样回收实验

由上表可以看出，加样回收率在96质量%～104质量%之间，回收效果较好。

d.2重复性试验

取2011122602批号三黄泻心汤配方颗粒约0.2g，制备供试品溶液6份，分别测定盐酸小檗碱的含量，结果见表18。

表18重复性试验结果(n=6)

由上表可知本法重复性良好，符合含量测定的要求。

d.3精密度试验

取重复性项下的1号供试品溶液，按上述色谱条件，重复进样5次，测定盐酸小檗碱峰面积，结果见表19。

表19精密度试验结果

由上表可知本法精密度良好，符合含量测定的要求。

d.4专属性试验

按处方量制备了缺黄连药材的黄连阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制成黄连阴性对照样品溶液。按以上色谱条件得到对照品、样品、阴性对照样品的色谱分离图，阴性对照样品色谱中，在与盐酸小檗碱对照品保留时间相应的位置无干扰峰出现。结果见10a-10c。

由图10a-10c可以看出，阴性对照样品无明显干扰，专属性良好。

d.5线性关系

精密吸取上述盐酸小檗碱对照品液（0.097mg/ml）各2、4、6、8、10、12μl，按上述色谱条件测定峰面积，以各自峰面积积分值分别对盐酸小檗碱进样量进行回归处理，得回归方程为y=2204.2x-10.592，r=0.9999，如图11。

d.6稳定性考察

取2011122601批次三黄泻心汤配方颗粒供试液，按上述色谱条件，分别于0、2、4、6、8、10和12小时进样，测定盐酸小檗碱的峰面积。结果见表20，结果表明盐酸小檗碱在12小时内稳定。

表20稳定性试验结果

e.样品含量测定

取三黄泻心汤配方颗粒，按拟定含量测定方法操作，测定盐酸小檗碱的含量，结果见表21。

表21样品含量测定结果

Claims (10)

1.一种三黄泻心汤配方颗粒，所述三黄泻心汤配方颗粒由质量比为2：1：1的大黄、黄岑和黄连加水煎煮，滤过后，再将滤液浓缩干燥制成。

2.根据权利要求1所述的三黄泻心汤配方颗粒的制备方法，所述方法包括以下步骤：

以2：1：1的质量比称取大黄、黄岑和黄连加水煎煮1～3次，每次提取1～2小时；过滤，合并滤液后，再将其浓缩成浸膏，干燥制粒，即得。

3.根据权利要求2所述的三黄泻心汤配方颗粒的制备方法，其特征在于，提取2次，优选地，每次提取1小时；更优选地，在第一次煎煮前，还包括浸泡的步骤，还优选地，浸泡0.5～1.5小时，优选浸泡0.5小时。

4.根据权利要求2或3所述的三黄泻心汤配方颗粒的制备方法，其特征在于，第一次提取每克大黄、黄岑和黄连加8ml的水提取，或第二次提取每克大黄、黄岑和黄连加6ml的水提取，优选地，所述干燥为喷雾干燥。

5.根据权利要求1所述的三黄泻心汤配方颗粒的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：

步骤1：通过薄层色谱法鉴定所述三黄泻心汤配方颗粒；

步骤2：通过高效液相色谱法测定所述三黄泻心汤配方颗粒的指纹图谱；

步骤3：通过热浸法测定所述三黄泻心汤配方颗粒的浸出物含量；

步骤4：通过高效液相色谱法测定所述三黄泻心汤配方颗粒中大黄和黄连的含量，优选地，所述大黄的含量通过测定大黄素和大黄酚确定，所述黄连的含量通过测定盐酸小檗碱确定。

6.根据权利要求1所述的三黄泻心汤配方颗粒的检测方法，其特征在于，所述步骤1包括以下步骤：

1）制备第一大黄样品溶液组和第一黄连样品溶液组，所述第一大黄样品溶液组包括第一大黄供试品溶液和大黄对照药材溶液；优选地，所述第一大黄样品溶液组还包括第一大黄阴性对照样品溶液，所述大黄阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含大黄的样品；所述第一黄连样品溶液组包括第一黄连供试品溶液和第一盐酸小檗碱对照品溶液；优选地，所述第一黄连样品溶液组还包括第一黄连阴性对照样品溶液，所述黄连阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含黄连的样品；

优选地，所述第一大黄样品溶液组通过包括以下步骤的方法制得：

分别取所述三黄泻心汤配方颗粒、大黄对照药材或大黄阴性对照样品加甲醇溶解，超声处理，取上清液作为待测溶液；还优选地，超声处理5分钟；更优选地，加甲醇5ml；再优选地，取所述三黄泻心汤配方颗粒0.20～0.30g，优选取0.25g，或优选地，取所述大黄阴性对照样品0.20～0.30g，优选取0.25g、或优选地，取所述大黄对照药材0.20～0.30g，优选取0.20g；

或优选地，所述第一黄连供试品溶液或第一黄连阴性对照样品溶液通过包括以下步骤的方法制得：

取所述三黄泻心汤配方颗粒或黄连阴性对照样品加甲醇溶解，超声处理，取上清液作为待测溶液；还优选地，超声处理5分钟；

更优选地，当制备所述第一黄连供试品溶液或第一黄连阴性对照样品溶液时，加甲醇5ml，或当制备第一盐酸小檗碱对照品溶液时，取盐酸小檗碱对照品，加甲醇定容，优选定容到20ml；再优选地，取所述三黄泻心汤配方颗粒0.20～0.30g，优选取0.25g，或优选地，取所述黄连阴性对照样品0.20～0.30g，优选取0.20g，或优选地，取所述盐酸小檗碱5～7mg，优选取5mg；

2）将第一大黄样品溶液组分别点于同一硅胶G薄层板上，将第一黄连样品溶液组分别点于同一硅胶G薄层板上，加展开剂展开，取出晾干，喷以显色剂至斑点显色，检测，即得；优选置于365nm紫外灯下检视；

优选地，所述第一大黄样品溶液组以环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂展开，更优选地，所述环己烷-乙酸乙酯-甲酸中环己烷、乙酸乙酯和甲酸的体积比为12：3：0.1；

或优选地，所述第一黄连样品溶液组以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂；更优选地，所述乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水中乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水的体积比为10：7：1：1。

7.根据权利要求5所述的三黄泻心汤配方颗粒的检测方法，其特征在于，所述步骤2或4通过包括以下步骤的方法进行：

制备待测样品溶液，通过高效液相色谱法测定；

优选地，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

优选地，当测定指纹图谱时，以甲醇为流动相A，以磷酸调pH=2.0的0.01mol/L磷酸二氢钾为流动相B，按下述条件进行梯度洗脱：

0至10分钟：流动相A的浓度由10体积%匀速变为20体积%，流动相B浓度由90体积%匀速变为80体积%；

10至15分钟：流动相A的浓度由20%匀速变为30体积%，流动相B浓度由80体积%匀速变为70体积%；

15至30分钟：流动相A的浓度由30体积%匀速变为40体积%，流动相B浓度由70体积%匀速变为60体积%；

30至70分钟：流动相A的浓度由40体积%匀速变为60体积%，流动相B浓度由60体积%匀速变为40体积%；

70至90分钟：流动相A的浓度由60体积%匀速变为80体积%，流动相B浓度由40体积%匀速变为20体积%；

90至100分钟：流动相A的浓度由80体积%匀速变为90体积%，流动相B浓度由20体积%匀速变为10体积%；

当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中大黄的含量时，以甲醇-0.1体积%磷酸为流动相，所述甲醇-0.1体积%磷酸中甲醇和0.1体积%磷酸的体积比为85：15；或

当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中黄连的含量时，以乙腈-水为流动相，所述乙腈-水中乙腈和水的体积比为1：1，其中每1000ml流动相中加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g；

还优选地，当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中大黄的含量时，理论板数按大黄素峰计算应不低于2000，或当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中黄连的含量时，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；或当测定指纹图谱时，理论板数按黄岑苷峰计算应不低于3000；

进一步优选地，当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中黄连的含量或当测定指纹图谱时，检测波长为265nm，或当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中大黄的含量时，检测波长为254nm；

还优选地，当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中大黄和黄连的含量时，所述待测样品溶液包括第二大黄样品溶液组和第二黄连样品溶液组，所述第二大黄样品溶液组包括第二大黄供试品溶液和第二大黄对照品溶液组，所述大黄对照品包括大黄素对照品和大黄酚对照品，优选地，所述第二大黄样品溶液组还包括第二大黄阴性对照样品溶液，所述大黄阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含大黄的样品，或

所述第二黄连样品溶液组包括第二黄连供试品溶液和第二盐酸小檗碱对照品溶液，优选地，所述第二黄连样品溶液组还包括第二黄连阴性样品溶液，所述黄连阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含黄连的样品；

还优选地，当测定指纹图谱时，所述待测样品溶液包括三黄泻心汤配方颗粒供试品溶液和黄岑苷对照品溶液，优选地，所述待测样品溶液还包括阴性样品溶液组，所述阴性样品溶液组包括第三大黄阴性对照样品溶液、第三黄岑阴性对照样品溶液和第三黄连阴性对照样品溶液，所述大黄阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含大黄的样品；所述黄连阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含黄连的样品；所述黄芩阴性对照样品为按照所述三黄泻心汤配方颗粒的制备方法制得的不含黄芩的样品。

8.根据权利要求7所述的三黄泻心汤配方颗粒的检测方法，其特征在于，当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中大黄含量时，所述待测样品溶液通过包括以下步骤的方法制得：

分别取适量所述三黄泻心汤配方颗粒、大黄对照品或大黄阴性对照样品，加适量甲醇，即得；

优选地，当制备第二大黄供试品溶液或第二大黄阴性对照样品溶液时，加入甲醇后，还包括超声处理的步骤，优选超声处理10分钟；还优选地，取所述三黄泻心汤配方颗粒0.5～0.8g，大黄阴性对照样品0.5～0.8g，优选取0.7g，更优选地，加甲醇40ml；

更优选地，当制备第二大黄对照品溶液时，制成每1ml含20～25μg大黄素对照品的对照品溶液、每1ml含5～20μg大黄酚对照品的对照品溶液；

优选地，当测定所述三黄泻心汤配方颗粒中黄连含量时，所述第二盐酸小檗碱对照品溶液通过包括以下步骤的方法制得：

取适量盐酸小檗碱对照品，加适量甲醇，即得，还优选地，制成每1ml含95～105μg盐酸小檗碱的第二盐酸小檗碱对照品溶液；

还优选地，通过包括取适量所述三黄泻心汤配方颗粒或黄连阴性对照样品，加甲醇-盐酸，超声处理的步骤制得第二黄连供试品溶液或第二黄连阴性对照样品溶液，优选取甲醇-盐酸20ml，其中甲醇和盐酸的体积比为500：1；

再优选地，取待测样品0.20～0.3g，优选取0.20g。

9.根据权利要求8所述的三黄泻心汤配方颗粒的检测方法，其特征在于，当测定指纹图谱时，所述待测样品溶液通过包括以下步骤的方法制得：

分别取所述三黄泻心汤配方颗粒、黄岑苷对照品或阴性对照样品，加适量甲醇，即得；

优选地，当制备三黄泻心汤配方颗粒供试品溶液或黄岑苷阴性对照样品溶液时，加入甲醇后，还包括超声处理的步骤，优选超声处理30分钟；

还优选地，分别取所述三黄泻心汤配方颗粒和阴性对照样品0.20～0.3g，优选取0.20g；

优选地，当制备黄岑苷对照品溶液时，取黄岑苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1～0.2mg黄岑苷对照品的黄岑苷对照品溶液。

10.根据权利要求5至9中任一项所述的三黄泻心汤配配方颗粒的检测方法，其特征在于，所述步骤3中浸出物的质量百分比含量≥41.84%。