CN103983593A - 一种测定壳聚糖与壳寡糖混合物的脱乙酰度的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于海洋化学工程技术，具体涉及一种测定壳聚糖与壳寡糖混合物的脱乙酰度的方法。将待检测的样品（10-20mg）用稀盐酸溶解，同时以全脱乙酰化壳寡糖为内标，分别测定在199nm的紫外光下吸光度，并根据标准曲线，得到样品脱乙酰度。本发明方法与传统的壳聚糖脱乙酰度方法相比，采用以全脱乙酰化壳寡糖作为内标，可以准确测定壳聚糖与壳寡糖混合物样品的脱乙酰度，相对误差控制在0.5%以内。
Description
技术领域
本发明属于海洋化学工程技术，具体涉及一种测定壳聚糖与壳寡糖混合物的脱乙酰度的方法。
背景技术
壳聚糖是一个天然的线性多糖，由氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖通过β-1,4糖苷键连接而成。壳聚糖含量巨大且来源丰富，并且安全无毒具有良好的生物兼容性，在食品医药，农业，材料科学领域具有很大的应用潜力。壳寡糖是壳聚糖的降解产物。壳寡糖水溶性大大增加，且具有抗肿瘤，抗菌，抗炎，抗氧化等多种生理活性。
脱乙酰度是衡量壳聚糖和壳寡糖质量的重要指标。目前已有成熟的方法对壳聚糖的脱乙酰度进行检测，但是对壳寡糖脱乙酰度的方法研究较少，且目前的方法都测不准壳寡糖的脱乙酰度，对于两者混合物的脱乙酰度的检测方法还没见报道。随着壳聚糖和壳寡糖产业的快速发展，大量的壳聚糖和壳寡糖混合物的产品问世，但是与之相关的脱乙酰度质量检测方法还没有对应的国家标准。因此，建立一种快速、方便并且准确的壳聚糖和壳寡糖混合物脱乙酰度的检测方法，有利于对壳聚糖和壳寡糖混合物产品的质量监控，从而保障其产品质量。
发明内容
本发明的目的是提供一种测定壳聚糖与壳寡糖混合物的脱乙酰度的方法。
为实现上述目的，本发明采取以下设计方案：
一种测定壳聚糖与壳寡糖混合物的脱乙酰度的方法，将待检测的样品用稀盐酸溶解，同时以全脱乙酰化壳寡糖为内标，分别测定在199nm的紫外光下吸光度，并根据标准曲线，得到样品脱乙酰度。
具体为，
将壳聚糖与壳寡糖混合物样品用稀盐酸溶解，测定在199nm的紫外光下吸光度（A2），采用全脱乙酰化壳寡糖为内标物测定在199nm的紫外光下吸光度（A1），并以一系列浓度的N-乙酰氨基葡萄糖作为标准溶液，测定在199nm的紫外光下吸光度绘制的标准曲线，根据标准曲线以及A1、A2，得到待测样品脱乙酰度。
所述出标准曲线绘制，将N-乙酰氨基葡萄糖溶液用0.001mol/L的HCl稀释成0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.03mg/mL、0.04mg/mL、0.05mg/mL的标准溶液，以0.001mol/L HCl为参比液，分别测定不同浓度下的标准溶液在199nm处的吸光度，而后根据浓度与吸光度绘制出曲线。
所述内标物紫外光下吸光度的测定，称取全脱乙酰化样品，用0.001mol/L HCl溶解后，以0.001mol/L HCl为参比液，测定其在199nm处的吸光度A1。
所述检测的样品可为壳聚糖与壳寡糖的混合物样品、壳聚糖样品或壳寡糖样品。
而后，将A1和A2分别带入标准曲线中，得到样品中的乙酰基浓度，从而求得脱乙酰度，即D.D./%=100%-(样品中乙酰基浓度/样品浓度)×100%，以全脱乙酰化壳寡糖为内标，可以计算得到检测结果的相对误差。
本发明所具有的优点：
1.本发明可以快速准确的测定壳聚糖与壳寡糖混合物的脱乙酰度，并以全脱乙酰化壳寡糖为内标品，得到测定结果的相对误差，保证测定结果的准确性。
2.本发明利用紫外光谱法进行测定，所需时间短，结果准确。
具体实施方式
本发明的保护范围不仅局限于以下实施例。
实施例1：
待测样品为某公司壳聚糖与壳寡糖混合物保健产品。
将N-乙酰氨基葡萄糖溶液用0.001mol/L的HCl稀释成0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.03mg/mL、0.04mg/mL、0.05mg/mL的标准溶液，以0.001mol/L HCl为参比液，在199nm处测定标准系列溶液的吸光度，绘制出标准曲线为y=22.33x-0.0389，R=0.9984。
配制一定浓度的全脱乙酰化壳寡糖，以0.001mol/L HCl为参比液，测定其在199nm处的吸光度A1。
配制一定浓度的壳聚糖和壳寡糖混合物样品，以0.001mol/L HCl为参比液，测定其在199nm处的吸光度A2。
将A1和A2分别带入标准曲线中，得到样品中的乙酰基浓度，从而求得脱乙酰度，即D.D./%=100%-(样品中乙酰基浓度/样品浓度)×100%，以全脱乙酰化壳寡糖为内标，可以计算得到检测结果的相对误差，即误差/%=（内标品脱乙酰度测量值-内标品脱乙酰度）/内标平脱乙酰度×100%。结果参见表1。
表1
实施例2
待测样品为某公司壳聚糖样品，而后按照实施1的检测方式进行检测，结果参见表2。
表2
实施例3
待测样品为某公司壳聚糖样品，而后按照实施1的检测方式进行检测，结果参见表3。
表3
上述的具体实施例是为了说明本发明，并非对本发明进行了限制。其他相关技术人员可以在此基础上进行变化，但是其他所有等同的技术方案都应属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围由各权利要求限定。
Claims (5)
1.一种测定壳聚糖与壳寡糖混合物的脱乙酰度的方法，其特征在于：将待检测的样品用稀盐酸溶解，同时以全脱乙酰化壳寡糖为内标，分别测定在199nm的紫外光下吸光度，并根据标准曲线，得到样品脱乙酰度。
2.按权利要求1所述的测定壳聚糖与壳寡糖混合物的脱乙酰度的方法，其特征在于：具体为，
将壳聚糖与壳寡糖混合物样品用稀盐酸溶解，测定在199nm的紫外光下吸光度（A2），采用全脱乙酰化壳寡糖为内标物测定在199nm的紫外光下吸光度（A1），并以一系列浓度的N-乙酰氨基葡萄糖作为标准溶液，测定在199nm的紫外光下吸光度绘制的标准曲线，根据标准曲线以及A1、A2，得到待测样品脱乙酰度。
3.按权利要求1或2所述的测定壳聚糖与壳寡糖混合物的脱乙酰度的方法，其特征在于：所述出标准曲线绘制，将N-乙酰氨基葡萄糖溶液用0.001mol/L的HCl稀释成0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.03mg/mL、0.04mg/mL、0.05mg/mL的标准溶液，以0.001mol/L HCl为参比液，分别测定不同浓度下的标准溶液在199nm处的吸光度，而后根据浓度与吸光度绘制出曲线。
4.按权利要求1或2所述的测定壳聚糖与壳寡糖混合物的脱乙酰度的方法，其特征在于：所述内标物紫外光下吸光度的测定，称取全脱乙酰化样品，用0.001mol/L HCl溶解后，以0.001mol/L HCl为参比液，测定其在199nm处的吸光度A1。
5.按权利要求1或2所述的测定壳聚糖与壳寡糖混合物的脱乙酰度的方法，其特征在于：所述检测的样品可为壳聚糖与壳寡糖的混合物样品、壳聚糖样品或壳寡糖样品。
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