CN103977163B - 一种具有抗心肌缺血作用的药物组合与制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药药物物质组合，及其抗心肌缺血作用。本发明中药药物物质组合由补心汤经过乙醇提取、大孔吸附树脂纯化得到，富集了补心汤中酚类、三萜皂苷类组成，同时大鼠急性心肌缺血实验验证，具有明显抗心肌缺血的作用，预防性给药后可降低模型大鼠血清中血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶的含量。

Description

一种具有抗心肌缺血作用的药物组合与制备方法及其应用

技术领域

本发明属于药物研究开发领域，涉及一种中药药物物质组合，特别涉及一种具有抗心肌缺血作用的中药药物物质组合，与可同时制备该组合的方法。

背景技术

心肌缺血，是指由于心脏血液灌注的减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。冠状动脉粥样硬化导致的冠脉狭小或凝塞是引起心肌缺血最主要、最常见的病因，进而导致心肌缺血缺氧，由此引起大家经常说的“冠心病”，所以冠心病是心肌缺血的“罪魁祸首”。临床上抗心肌缺血的药物有很多，作用机制也都不同。中药可以通过改善心肌细胞代谢、降低心肌耗氧量、调节NO/ET、抑制钙超载、抗氧化自由基、改善心肌缺血致细胞凋亡和促血管生成等途径起到抗心肌缺血的作用，中药强调整体观和辨证论治，呈现出一个多途径多靶点的作用方式，各作用机制是一个相互联系的过程，并不存在单一因素的影响，故结合心肌缺血发病机制和中药的特点对未来发现更有效的中药新药具有探索性意义。

本发明以经典方补心汤为方原，探索发现了一种具有抗心肌缺血用的中药药物物质组合，并以药效关联的类型成分及指标性成分为综合考量，建立了稳定可靠、适合实际生产的同时制备工艺和科学全面的质量控制方法，有利于进一步创新药物的研发。目前，未见从补心汤中纯化制备抗心肌缺血药物物质组合的相关报道，也未见有关该组合物在治疗心肌缺血疾病方面的相关研究报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗心肌缺血作用的中药药物物质组合，其药物体系主要由酚类、三萜皂苷类组成，其方原为人参、远志、茯苓、蒲黄等组成。

本发明的另一个目的在于提供其制备方法及工艺，本发明的第三个目的在于提供其质量检测及其控制方法。本发明的第四个目的在于提供其对心肌缺血大鼠的保护作用。本发明的第五个目的在于提供该中药药物物质组合物的制品及其在药品、食品领域的应用。

本发明的目的是通过如下途径实现的：

本发明中药药物物质组合可由如下4组药用植物及其代用品种，包括其药用部位及非药用部位，药材及其饮片组合制成，其药物体系主要由酚类、三萜皂苷类组成。

组1：大叶三七、假人参、姜状三七、人参、三七、西洋参、狭叶假人参、秀丽假人参、羽叶三七、竹节人参等同五加科植物，及其炮制品。

组2：远志、卵叶远志、尾叶远志、肾果远志、瓜子金、合叶草、大叶金牛、小扁豆、黄花倒水莲、西伯利亚远志等远志属，及黄叶树、蝉翼藤、齿果草等同远志科植物，及其炮制品。

组3：茯苓、猪苓、云芝、灰树花、硫磺菌等同多孔菌科植物，及其炮制品。

组4：香蒲、水烛、狭叶香蒲、宽叶香蒲、毛蜡烛、黑刀烛、水烛香蒲、东方香蒲等同香蒲科植物，及其炮制品。

本发明中药药物物质组合，可经上述原料药组合后以乙醇、或其他醇类、稀醇、或其他有机溶剂或水提取再通过大孔吸附树脂或其他色谱方法，如聚酰胺色谱法等，或溶剂萃取法等纯化得到。

本发明中药药物物质组合可由上述原料药的提取物经进一步富集纯化后或上述原料药的大孔树脂制备物混合而成。

本发明中药药物物质组合可经化学合成或结构修饰，生物合成或生物转等途径获得。

本发明中药药物组合优选由如下原料药制成：

人参 100-300重量份 茯苓 100-300重量份

远志 100-200重量份 蒲黄 100-200重量份。

本发明中药药物物质组合的制备方法包括如下步骤：

步骤l：选取上述原料药；

步骤2：乙醇提取；

步骤3：大孔吸附树脂纯化；

该中药药物物质组合由两部分构成，第一部分为黄棕色至黄褐色粉末，气略清香，味苦。其中总酚含量为10％-90％，3，6’-二芥子酰基含量为1％-10％，香蒲新苷含量为0.5％-5％，优选总酚含量为40％-80％，优选3，6’-二芥子酰基含量为2％-10％，优选香蒲新苷含量为0.8％-5％。由于第一部分酚类占据主要组成故称其为酚类药物物质；第二部分为黄褐色粉末，具特殊香气，味淡，称为萜类药物物质。其中人参皂苷Rb₁含量为2％-10％。

上述步骤2中，将原料药用8-12倍量，0-70％乙醇回流提取1-3次，每次提取1-2小时。合并两次提取液减压浓缩，至相对密度为1.15-1.20g/ml的清膏，加水分散，使上样液浓度为0.01-0.1g/mL。

上述步骤3中，上样液通过大孔吸附树脂，树脂径高比为l∶4-1∶10，上样液浓度为0.01-0.1g/mL，上样量以全方生药材计为0.2g/ml-0.5g/ml，吸附流速为1-4BV/h，水洗脱1-3倍树脂体积进行除杂，先以40-70％乙醇洗脱0-8倍树脂体积，洗脱流速为2-6BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得酚类药物物质；再以70-95％乙醇洗脱0-13倍树脂体积，洗脱流速为2-6BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得萜类药物物质。

上述步骤3中所用大孔吸附树脂优选为AB-8，DM130，HPD-100型等弱极性或非极性大孔树脂。

本发明中药药物物质组合，由2部分组成。酚类物质百分含量的总和达到50％-80％。萜类药物物质中含有人参皂苷Rb₁等三萜皂苷类成分及其他类型成分，萜类百分含量总和为50％-80％。

将以上所得两部分中药药物物质进行配伍组合，加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液等。

本发明中药药物物质组合由补心汤经过乙醇提取、大孔吸附树脂纯化得到，富集了补心汤中的酚类成分和萜类成分，同时经过大鼠急性心肌缺血实验验证，具有明显抗心肌缺血的作用。预防性给药后可降低模型大鼠血清中血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶的含量。

实验例1本发明对舌下静脉注射脑垂体后叶素造成大鼠急性心肌缺血的治疗作用。

1实验材料

1.1器材

UV-2000紫外分光光度计(上海尤尼柯公司)，

KQ-500DE型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)，

QL-901涡旋混合机(其林贝尔仪器制造公司)。

1.2试剂与药品

注射用脑垂体后叶素(南京新百药业有限公司)，

复方丹参滴丸(批号：131008；天士力制药集团股份有限公司)，

肌酸激酶(CK)试剂盒与乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所中药药物物质组合物：由酚类药物物质与萜类药物物质按出膏率比例组合而成。

2实验方法

2.1分组及给药的剂量和时间

SD大鼠按体重随机分为6组，分别为：正常对照组、模型对照组、复方丹参滴丸组、补心汤水提物组、补心汤醇提物组(按提取工艺提取)、补心汤富集物组(按制备工艺制备，并将两个部位按比例合并)。补心汤三组均换算成大鼠剂量按生药量3g/kg灌胃给药，每组10只，每天给药1次，连续给药3天。

2.2血清中有关生化指标的变化

各给药组大鼠末次给药后，腹腔注射10％水合氯醛麻醉，仰卧固定于手术台，每只舌下静脉给脑垂体后叶素0.6U/mL。注射完20min后，腹主动脉取血，分离血清，测定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量。

3结果

各组大鼠血清中CK、LDH的测定结果见表1。由表1可见模型对照组大鼠血清中CK、LDH含量远远高于各给药组和正常对照组大鼠(P＜0.01)。补心汤醇提物组和补心汤富集物组CK、LDH含量远远低于补心汤水提物组(P＜0.01)，但是补心汤醇提物组和富集物组之间无显著性差异。

表1心肌缺血大鼠血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)含量的变化

注：与模型对照组相比较：*P＜0.01；与补心汤水提物组相比较：^#P＜0.01，^▲P＜0.05

含有本发明提出的制备物的制剂可根据本领域公知的方法制备。可将本发明提出的制备物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅料结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。

含有本发明提出的制备物物的制剂，可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、透皮、皮下、皮内、腹膜、直肠等。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型，如液体剂型可以是真溶液剂型、胶体溶液剂型、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。液体剂型形式可以是糖浆剂、酒剂、注射溶液、非水溶液、悬浮液或乳液等；固体剂型例如片剂、锭剂、胶囊、滴丸剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、霜剂、栓剂、散剂、膏剂等。

含有本发明提出的制备物的制剂，可以是普通制剂，也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统等。

为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子包括，赋形剂如碳酸钙、乳糖、磷酸钙、磷酸钠；稀释剂与吸收剂如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝、葡聚糖、胶态二氧化硅、阿拉伯胶、明胶、三硅酸镁、角蛋白等；湿润剂与粘合剂如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂如干燥淀粉、海藻酸钠、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可酯、氢化植物油等；吸收促进剂如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂如滑石粉、三乙胺硬脂酸镁、三乙胺硬脂酸、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片等。

为了将单位给药剂型制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可酯、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄耆胶、明胶、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等；崩解剂如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸钠、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

为了将单位给药剂型制成胶囊，可将本发明提出的制备物与上述各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬明胶胶囊或软胶囊中。也可将本发明提出的制备物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

为了将单位给药剂型制成口服液体制剂，如乳液、溶液、悬浮液、糖浆等，可根据需要任选添加剂如着色剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、矫味剂(如薄荷、冬青油等)、甜味剂(如蔗糖、乳糖等)或其他材料。

为了将单位给药剂型制成注射用含水或非水制剂，如溶液剂、混悬型溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体，如稀释剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂，以及常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。稀释剂可选白水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、植物油(如橄榄油、玉米油等)、明胶、可注射用有机酯(如油酸乙酯、脂肪酸酯等)、聚氧乙烯山梨醇等。为了制备等渗注射剂，还可以添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油。

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例1：抗心肌缺血中药药物物质组合制备工艺

人参 300g 茯苓 300g

远志 200g 蒲黄 200g

按上述比例取原料药饮片1kg，以6倍量50％乙醇回流提取3次，每次提取1.5小时，合并两次提取液(共20L)减压浓缩，至相对密度为1.15-1.20g/ml的清膏，加水分散，使上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计)，将上样液通过DM130型大孔吸附树脂进行吸附，上样量与树脂体积比为0.25g∶1mL，树脂柱径高比为1∶8.7，吸附流速为1bv/h；吸附完毕后，用2倍树脂体积水洗脱除杂，水洗流速为2bv/h；水洗除杂完毕后，用40％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为2bv/h，收集40％乙醇洗脱液，回收溶剂，用90％乙醇洗脱3倍树脂体积，洗脱流速为2bv/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，真空干燥，即得基于药物体系的补心汤酚类有效物质和萜类有效物质。

总酚含量测定方法：

对照品溶液的制备：精密称取3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品2.15mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至10mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.2150mg/mL的3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品溶液；

试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，50％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；

显色方法：精密移取样品溶液适量置于25ml茶色容量瓶中，加50％甲醇至5mL，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2mL，摇匀，加入1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾新制混合溶液1.0mL，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25mL刻度线，摇匀后于暗处静置30min，并随行做空白对照，以备测定；

测定方法：将上述显色后样品于770±5nm波长范围内测定吸光度值，酚类药物物质按干燥品计算，含总酚以3，6`-二芥子酰基蔗糖计，不少于40.0％。

萜类含量测定方法：

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rb₁对照品3.00mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.1200mg/mL的人参皂苷Rb1对照品溶液；

试剂：5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸溶液，冰醋酸溶液；

显色方法：精密吸取补心汤提取物样品液1mL5份，分别置于西林瓶中，沸水浴蒸干后，冷却至室温，各加5％香草醛-冰醋酸溶液(显色剂)0.2mL，，然后加高氯酸0.8mL，摇匀，于60℃水浴加热15min，取出置冷水中冷却，加冰醋酸5mL，随行做空白对照，以备测定；

测定方法：将上述显色后样品于560±5nm波长范围内测定吸光度值，萜类药物物质按干燥品计算，含萜类以人参皂苷Rb₁计，不少于50.0％。

指标性成分3，6`-二芥子酰基蔗糖、香蒲新苷同时含量测定方法

对照品溶液的制备：精密称取3，6’二芥子酰基蔗糖对照品3.09mg，用甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，精密吸取2mL加甲醇稀释3倍，摇匀，即得浓度为0.0412mg/mL的3，6’-二芥子酰基蔗糖对照品溶液；精密称取香蒲新苷对照品3.09mg，用甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，精密吸取2mL加甲醇稀释18倍，摇匀，即得浓度为0.006867mg/mL的香蒲新苷对照品溶液；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相(A)，以0.1％甲酸水为流动相(B)，按下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为330nm；柱温30℃，流速为1.0ml/min；

标准曲线的制备：分别精密吸取3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品溶液3.0、6.0、9.0、12.0、15.0、18.0μL，香蒲新苷对照品溶液10、20、30、40、50、60、70μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定3，6`-二芥子酰基蔗糖、香蒲新苷色谱峰峰面积。以对照品进样量为横坐标，以色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并分别进行线性回归，得回归方程为：

供试品溶液的制备：精密称取补心汤提取物60.0mg，70％甲醇超声溶解后，用70％甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得补心汤提取物供试品溶液。

指标性成分人参皂苷Rb₁含量测定方法

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rb1对照品3.10mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.1240mg/mL的人参皂苷Rb₁对照品溶液；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相(A)，以0.1％甲酸水为流动相(B)，按下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm；柱温30℃，流速为1.0ml/min；

标准曲线的制备：分别精密吸取人参皂苷Rb₁对照品溶液10、20、30、40、50、60、70μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定人参皂苷Rb₁色谱峰峰面积。以对照品进样量为横坐标，以色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并分别进行线性回归，得回归方程；

供试品溶液的制备：精密称取补心汤提取物60.0mg，70％甲醇超声溶解后，用70％甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得补心汤提取物供试品溶液；

测定法：精密吸取酚类供试品溶液20ul，萜类供试品溶液20ul，注入液相色谱仪，测定，将峰面积代入标准曲线，经计算即得到各指标性成分的量。

酚类药物物质按干燥品计算，含3，6`-二芥子酰基蔗糖不得少于3.0％，含香蒲新苷不得少于0.8％。萜类药物物质按干燥品计算，含人参皂苷Rb₁不得少于2.0％。

实施例2：

人参 300g 茯苓 300g

远志 200g 蒲黄 200g

按上述比例取原料药饮片1kg，以6倍量50％乙醇回流提取3次，每次提取1.5小时，合并两次提取液(共20L)减压浓缩，至相对密度为1.15-1.20g/ml的清膏，加水分散，使上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计)，将上样液通过DM130型大孔吸附树脂进行吸附，上样量与树脂体积比为0.25g∶1mL，树脂柱径高比为1∶8.7，吸附流速为1bv/h；吸附完毕后，用2倍树脂体积水洗脱除杂，水洗流速为2bv/h；水洗除杂完毕后，用40％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为2bv/h，收集40％乙醇洗脱液，回收溶剂，用90％乙醇洗脱3倍树脂体积，洗脱流速为2bv/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，真空干燥，即得基于药物体系的补心汤酚类有效物质和萜类有效物质。

总酚含量测定方法：

对照品溶液的制备：精密称取3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品2.15mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至10mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.2150mg/mL的3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品溶液；

试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，50％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；

显色方法：精密移取样品溶液适量置于25ml茶色容量瓶中，加50％甲醇至5mL，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2mL，摇匀，加入1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾新制混合溶液1.0mL，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25mL刻度线，摇匀后于暗处静置30min，并随行做空白对照，以备测定；

测定方法：将上述显色后样品于770±5nm波长范围内测定吸光度值，酚类药物物质按干燥品计算，含总酚以3，6`-二芥子酰基蔗糖计，不少于40.0％。

萜类含量测定方法：

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rb₁对照品3.00mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.1200mg/mL的人参皂苷Rb1对照品溶液；

试剂：5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸溶液，冰醋酸溶液；

显色方法：精密吸取补心汤提取物样品液1mL5份，分别置于西林瓶中，沸水浴蒸干后，冷却至室温，各加5％香草醛-冰醋酸溶液(显色剂)0.2mL，，然后加高氯酸0.8mL，摇匀，于60℃水浴加热15min，取出置冷水中冷却，加冰醋酸5mL，随行做空白对照，以备测定；

测定方法：将上述显色后样品于560±5nm波长范围内测定吸光度值，萜类药物物质按干燥品计算，含萜类以人参皂苷Rb₁计，不少于50.0％。

指标性成分3，6`-二芥子酰基蔗糖、香蒲新苷同时含量测定方法

对照品溶液的制备：精密称取3，6’二芥子酰基蔗糖对照品3.09mg，用甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，精密吸取2mL加甲醇稀释3倍，摇匀，即得浓度为0.0412mg/mL的3，6’-二芥子酰基蔗糖对照品溶液；精密称取香蒲新苷对照品3.09mg，用甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，精密吸取2mL加甲醇稀释18倍，摇匀，即得浓度为0.006867mg/mL的香蒲新苷对照品溶液；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相(A)，以0.1％甲酸水为流动相(B)，按下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为330nm；柱温30℃，流速为1.0ml/min；

标准曲线的制备：分别精密吸取3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品溶液3.0、6.0、9.0、12.0、15.0、18.0μL，香蒲新苷对照品溶液10、20、30、40、50、60、70μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定3，6`-二芥子酰基蔗糖、香蒲新苷色谱峰峰面积。以对照品进样量为横坐标，以色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并分别进行线性回归，得回归方程为：

供试品溶液的制备：精密称取补心汤提取物60.0mg，70％甲醇超声溶解后，用70％甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得补心汤提取物供试品溶液。

指标性成分人参皂苷Rb₁含量测定方法

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rb1对照品3.10mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.1240mg/mL的人参皂苷Rb₁对照品溶液；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相(A)，以0.1％甲酸水为流动相(B)，按下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm；柱温30℃，流速为1.0ml/min；

标准曲线的制备：分别精密吸取人参皂苷Rb₁对照品溶液10、20、30、40、50、60、70μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定人参皂苷Rb₁色谱峰峰面积。以对照品进样量为横坐标，以色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并分别进行线性回归，得回归方程；

供试品溶液的制备：精密称取补心汤提取物60.0mg，70％甲醇超声溶解后，用70％甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得补心汤提取物供试品溶液；

测定法：精密吸取酚类供试品溶液20ul，萜类供试品溶液20ul，注入液相色谱仪，测定，将峰面积代入标准曲线，经计算即得到各指标性成分的量。

酚类药物物质按干燥品计算，含3，6`-二芥子酰基蔗糖不得少于3.0％，含香蒲新苷不得少于0.8％。萜类药物物质按干燥品计算，含人参皂苷Rb₁不得少于2.0％。

实施例3：

人参 300g 茯苓 300g

远志 200g 蒲黄 200g

按上述比例取原料药饮片1kg，以6倍量50％乙醇回流提取3次，每次提取1.5小时，合并两次提取液(共20L)减压浓缩，至相对密度为1.15-1.20g/ml的清膏，加水分散，使上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计)，将上样液通过DM130型大孔吸附树脂进行吸附，上样量与树脂体积比为0.25g∶1mL，树脂柱径高比为1∶8.7，吸附流速为1bv/h；吸附完毕后，用2倍树脂体积水洗脱除杂，水洗流速为2bv/h；水洗除杂完毕后，用40％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为2bv/h，收集40％乙醇洗脱液，回收溶剂，用90％乙醇洗脱3倍树脂体积，洗脱流速为2bv/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，真空干燥，即得基于药物体系的补心汤酚类有效物质和萜类有效物质。

总酚含量测定方法：

对照品溶液的制备：精密称取3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品2.15mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至10mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.2150mg/mL的3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品溶液；

试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，50％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；

显色方法：精密移取样品溶液适量置于25ml茶色容量瓶中，加50％甲醇至5mL，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2mL，摇匀，加入1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾新制混合溶液1.0mL，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25mL刻度线，摇匀后于暗处静置30min，并随行做空白对照，以备测定；

测定方法：将上述显色后样品于770±5nm波长范围内测定吸光度值，酚类药物物质按干燥品计算，含总酚以3，6`-二芥子酰基蔗糖计，不少于40.0％。

萜类含量测定方法：

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rb₁对照品3.00mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.1200mg/mL的人参皂苷Rb1对照品溶液；

试剂：5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸溶液，冰醋酸溶液；

显色方法：精密吸取补心汤提取物样品液1mL5份，分别置于西林瓶中，沸水浴蒸干后，冷却至室温，各加5％香草醛-冰醋酸溶液(显色剂)0.2mL，，然后加高氯酸0.8mL，摇匀，于60℃水浴加热15min，取出置冷水中冷却，加冰醋酸5mL，随行做空白对照，以备测定；

测定方法：将上述显色后样品于560±5nm波长范围内测定吸光度值，萜类药物物质按干燥品计算，含萜类以人参皂苷Rb₁计，不少于50.0％。

指标性成分3，6`-二芥子酰基蔗糖、香蒲新苷同时含量测定方法

对照品溶液的制备：精密称取3，6’二芥子酰基蔗糖对照品3.09mg，用甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，精密吸取2mL加甲醇稀释3倍，摇匀，即得浓度为0.0412mg/mL的3，6’-二芥子酰基蔗糖对照品溶液；精密称取香蒲新苷对照品3.09mg，用甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，精密吸取2mL加甲醇稀释18倍，摇匀，即得浓度为0.006867mg/mL的香蒲新苷对照品溶液；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相(A)，以0.1％甲酸水为流动相(B)，按下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为330nm；柱温30℃，流速为1.0ml/min；

标准曲线的制备：分别精密吸取3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品溶液3.0、6.0、9.0、12.0、15.0、18.0μL，香蒲新苷对照品溶液10、20、30、40、50、60、70μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定3，6`-二芥子酰基蔗糖、香蒲新苷色谱峰峰面积。以对照品进样量为横坐标，以色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并分别进行线性回归，得回归方程为：

供试品溶液的制备：精密称取补心汤提取物60.0mg，70％甲醇超声溶解后，用70％甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得补心汤提取物供试品溶液。

指标性成分人参皂苷Rb₁含量测定方法

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rb1对照品3.10mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.1240mg/mL的人参皂苷Rb₁对照品溶液；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相(A)，以0.1％甲酸水为流动相(B)，按下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm；柱温30℃，流速为1.0ml/min；

标准曲线的制备：分别精密吸取人参皂苷Rb₁对照品溶液10、20、30、40、50、60、70μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定人参皂苷Rb₁色谱峰峰面积。以对照品进样量为横坐标，以色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并分别进行线性回归，得回归方程；

供试品溶液的制备：精密称取补心汤提取物60.0mg，70％甲醇超声溶解后，用70％甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得补心汤提取物供试品溶液；

测定法：精密吸取酚类供试品溶液20ul，萜类供试品溶液20ul，注入液相色谱仪，测定，将峰面积代入标准曲线，经计算即得到各指标性成分的量。

酚类药物物质按干燥品计算，含3，6`-二芥子酰基蔗糖不得少于3.0％，含香蒲新苷不得少于0.8％。萜类药物物质按干燥品计算，含人参皂苷Rb₁不得少于2.0％。

实施例4：

人参 300g 茯苓 300g

远志 200g 蒲黄 200g

按上述比例取原料药饮片1kg，以6倍量50％乙醇回流提取3次，每次提取1.5小时，合并两次提取液(共20L)减压浓缩，至相对密度为1.15-1.20g/ml的清膏，加水分散，使上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计)，将上样液通过DM130型大孔吸附树脂进行吸附，上样量与树脂体积比为0.25g∶1mL，树脂柱径高比为1∶8.7，吸附流速为1bv/h；吸附完毕后，用2倍树脂体积水洗脱除杂，水洗流速为2bv/h；水洗除杂完毕后，用40％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为2bv/h，收集40％乙醇洗脱液，回收溶剂，用90％乙醇洗脱3倍树脂体积，洗脱流速为2bv/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，真空干燥，即得基于药物体系的补心汤酚类有效物质和萜类有效物质。

总酚含量测定方法：

对照品溶液的制备：精密称取3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品2.15mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至10mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.2150mg/mL的3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品溶液；

试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，50％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；

显色方法：精密移取样品溶液适量置于25ml茶色容量瓶中，加50％甲醇至5mL，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2mL，摇匀，加入1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾新制混合溶液1.0mL，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25mL刻度线，摇匀后于暗处静置30min，并随行做空白对照，以备测定；

测定方法：将上述显色后样品于770±5nm波长范围内测定吸光度值，酚类药物物质按干燥品计算，含总酚以3，6`-二芥子酰基蔗糖计，不少于40.0％。

萜类含量测定方法：

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rb₁对照品3.00mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.1200mg/mL的人参皂苷Rb1对照品溶液；

试剂：5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸溶液，冰醋酸溶液；

显色方法：精密吸取补心汤提取物样品液1mL5份，分别置于西林瓶中，沸水浴蒸干后，冷却至室温，各加5％香草醛-冰醋酸溶液(显色剂)0.2mL，，然后加高氯酸0.8mL，摇匀，于60℃水浴加热15min，取出置冷水中冷却，加冰醋酸5mL，随行做空白对照，以备测定；

测定方法：将上述显色后样品于560±5nm波长范围内测定吸光度值，萜类药物物质按干燥品计算，含萜类以人参皂苷Rb₁计，不少于50.0％。

指标性成分3，6`-二芥子酰基蔗糖、香蒲新苷同时含量测定方法

对照品溶液的制备：精密称取3，6’二芥子酰基蔗糖对照品3.09mg，用甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，精密吸取2mL加甲醇稀释3倍，摇匀，即得浓度为0.0412mg/mL的3，6’-二芥子酰基蔗糖对照品溶液；精密称取香蒲新苷对照品3.09mg，用甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，精密吸取2mL加甲醇稀释18倍，摇匀，即得浓度为0.006867mg/mL的香蒲新苷对照品溶液；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相(A)，以0.1％甲酸水为流动相(B)，按下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为330nm；柱温30℃，流速为1.0ml/min；

标准曲线的制备：分别精密吸取3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品溶液3.0、6.0、9.0、12.0、15.0、18.0μL，香蒲新苷对照品溶液10、20、30、40、50、60、70μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定3，6`-二芥子酰基蔗糖、香蒲新苷色谱峰峰面积。以对照品进样量为横坐标，以色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并分别进行线性回归，得回归方程为：

供试品溶液的制备：精密称取补心汤提取物60.0mg，70％甲醇超声溶解后，用70％甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得补心汤提取物供试品溶液。

指标性成分人参皂苷Rb₁含量测定方法

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rb1对照品3.10mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.1240mg/mL的人参皂苷Rb₁对照品溶液；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相(A)，以0.1％甲酸水为流动相(B)，按下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm；柱温30℃，流速为1.0ml/min；

标准曲线的制备：分别精密吸取人参皂苷Rb₁对照品溶液10、20、30、40、50、60、70μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定人参皂苷Rb₁色谱峰峰面积。以对照品进样量为横坐标，以色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并分别进行线性回归，得回归方程；

供试品溶液的制备：精密称取补心汤提取物60.0mg，70％甲醇超声溶解后，用70％甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得补心汤提取物供试品溶液；

测定法：精密吸取酚类供试品溶液20ul，萜类供试品溶液20ul，注入液相色谱仪，测定，将峰面积代入标准曲线，经计算即得到各指标性成分的量。

酚类药物物质按干燥品计算，含3，6`-二芥子酰基蔗糖不得少于3.0％，含香蒲新苷不得少于0.8％。萜类药物物质按干燥品计算，含人参皂苷Rb₁不得少于2.0％。

实施例5：抗心肌缺血中药药物物质组合制备工艺

人参 300g 茯苓 300g

远志 200g 蒲黄 200g

按上述比例取原料药饮片1kg，以6倍量50％乙醇回流提取3次，每次提取1.5小时，合并两次提取液(共20L)减压浓缩，至相对密度为1.15-1.20g/ml的清膏，加水分散，使上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计)，将上样液通过DM130型大孔吸附树脂进行吸附，上样量与树脂体积比为0.25g∶1mL，树脂柱径高比为1∶8.7，吸附流速为1bv/h；吸附完毕后，用2倍树脂体积水洗脱除杂，水洗流速为2bv/h；水洗除杂完毕后，用40％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为2bv/h，收集40％乙醇洗脱液，回收溶剂，用90％乙醇洗脱3倍树脂体积，洗脱流速为2bv/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，真空干燥，即得基于药物体系的补心汤酚类有效物质和萜类有效物质。

总酚含量测定方法：

对照品溶液的制备：精密称取3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品2.15mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至10mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.2150mg/mL的3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品溶液；

试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，50％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；

显色方法：精密移取样品溶液适量置于25ml茶色容量瓶中，加50％甲醇至5mL，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2mL，摇匀，加入1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾新制混合溶液1.0mL，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25mL刻度线，摇匀后于暗处静置30min，并随行做空白对照，以备测定；

测定方法：将上述显色后样品于770±5nm波长范围内测定吸光度值，酚类药物物质按干燥品计算，含总酚以3，6`-二芥子酰基蔗糖计，不少于40.0％。

萜类含量测定方法：

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rb₁对照品3.00mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.1200mg/mL的人参皂苷Rb1对照品溶液；

试剂：5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸溶液，冰醋酸溶液；

显色方法：精密吸取补心汤提取物样品液1mL5份，分别置于西林瓶中，沸水浴蒸干后，冷却至室温，各加5％香草醛-冰醋酸溶液(显色剂)0.2mL，，然后加高氯酸0.8mL，摇匀，于60℃水浴加热15min，取出置冷水中冷却，加冰醋酸5mL，随行做空白对照，以备测定；

测定方法：将上述显色后样品于560±5nm波长范围内测定吸光度值，萜类药物物质按干燥品计算，含萜类以人参皂苷Rb₁计，不少于50.0％。

指标性成分3，6`-二芥子酰基蔗糖、香蒲新苷同时含量测定方法

对照品溶液的制备：精密称取3，6’二芥子酰基蔗糖对照品3.09mg，用甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，精密吸取2mL加甲醇稀释3倍，摇匀，即得浓度为0.0412mg/mL的3，6’-二芥子酰基蔗糖对照品溶液；精密称取香蒲新苷对照品3.09mg，用甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，精密吸取2mL加甲醇稀释18倍，摇匀，即得浓度为0.006867mg/mL的香蒲新苷对照品溶液；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相(A)，以0.1％甲酸水为流动相(B)，按下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为330nm；柱温30℃，流速为1.0ml/min；

标准曲线的制备：分别精密吸取3，6`-二芥子酰基蔗糖对照品溶液3.0、6.0、9.0、12.0、15.0、18.0μL，香蒲新苷对照品溶液10、20、30、40、50、60、70μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定3，6`-二芥子酰基蔗糖、香蒲新苷色谱峰峰面积。以对照品进样量为横坐标，以色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并分别进行线性回归，得回归方程为：

供试品溶液的制备：精密称取补心汤提取物60.0mg，70％甲醇超声溶解后，用70％甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得补心汤提取物供试品溶液。

指标性成分人参皂苷Rb₁含量测定方法

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rb1对照品3.10mg，用70％甲醇溶液超声溶解，定容至25mL刻度线，摇匀，即得浓度为0.1240mg/mL的人参皂苷Rb₁对照品溶液；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相(A)，以0.1％甲酸水为流动相(B)，按下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm；柱温30℃，流速为1.0ml/min；

标准曲线的制备：分别精密吸取人参皂苷Rb₁对照品溶液10、20、30、40、50、60、70μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定人参皂苷Rb₁色谱峰峰面积。以对照品进样量为横坐标，以色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并分别进行线性回归，得回归方程；

供试品溶液的制备：精密称取补心汤提取物60.0mg，70％甲醇超声溶解后，用70％甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得补心汤提取物供试品溶液；

测定法：精密吸取酚类供试品溶液20ul，萜类供试品溶液20ul，注入液相色谱仪，测定，将峰面积代入标准曲线，经计算即得到各指标性成分的量。

酚类药物物质按干燥品计算，含3，6`-二芥子酰基蔗糖不得少于3.0％，含香蒲新苷不得少于0.8％。萜类药物物质按干燥品计算，含人参皂苷Rb₁不得少于2.0％。

实施例6：胶囊剂的制备

取本发明中药药物物质组合200g，粉碎，过80目筛，与微晶纤维素100g混合均匀，以95％乙醇制粒，干燥，以20目筛整粒，灌装胶囊。

实施例7：片剂的制备

取本发明中药药物物质组合50g，粉碎，过80目筛，与微晶纤维素70g、羧甲基淀粉钠5g混合均匀，以5％PVP制粒，干燥，以20目筛整粒，加入硬脂酸镁2g，压片。

实施例8：滴丸剂的制备

取本发明中药药物物质组合60g，粉碎，过80目筛，混合均匀，投入180g加热熔融的聚乙二醇6000中，搅拌至溶解，转移至贮液瓶中，密闭并保温在80～90℃，调节滴丸机液滴定量阀门，由上往下滴入10～15℃的液体石蜡中，将形成的滴丸沥干并擦除液体石蜡，干燥。

实施例9：口服液的制备

取本发明中药药物物质组合70g，粉碎，过80目筛，混合均匀，与蜂蜜1000g、蔗糖200g、苯甲酸钠10g及蒸馏水2000ml混合，加热至85～90℃，搅拌使溶解，保温30min，滤过，滤液加水稀释至4000ml，搅拌均匀，灌封，灭菌。

实施例10：注射液的制备

取本发明中药药物物质组合100g，加注射用水适量使溶解，加配置量的0.02％的活性炭搅拌5～10min，滤过，滤液稀释至10L左右，加氯化钠调节渗透压至等渗，调节pH7.5～8.0，超滤，灌封，100℃灭菌30min。

实施例11：粉针剂的制备

取本发明中药药物物质组合100g，加注射用水及稀氢氧化钠适量使溶解，加配置量的0.02％的活性炭搅拌5～10min，滤过，滤液稀释至1L，调节pH6.5～7.8，超滤，喷雾干燥，干粉无菌分装。每支100mg，临用前加注射用水适量使溶解，用氯化钠输液250～500ml稀释后缓慢静脉滴注。

Claims (3)

1.一种具有抗心肌缺血作用的中药组合物，其特征在于，其制备方法具体包括如下步骤：选取原料药人参300g、茯苓300g、远志200、蒲黄200g；按上述比例取原料药饮片1kg，以6倍量50％乙醇回流提取3次，每次提取1.5小时，合并提取液减压浓缩，至相对密度为1.15-1.20g/ml的清膏，加水分散，使上样液浓度以折生药材量计为0.05g/mL，将上样液通过DM130型大孔吸附树脂进行吸附，上样量与树脂体积比为0.25g∶1mL，树脂柱径高比为1∶8.7，吸附流速为1bv/h；吸附完毕后，用2倍树脂体积水洗脱除杂，水洗流速为2bv/h；水洗除杂完毕后，用40％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为2bv/h，收集40％乙醇洗脱液，回收溶剂得酚类药物物质，用90％乙醇洗脱3倍树脂体积，洗脱流速为2bv/h，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，真空干燥，即得萜类药物物质；将酚类药物物质与萜类药物物质按出膏率比例组合即得。

2.如权利要求1所述中药组合物制成的制剂，其特征在于，加入本领域公知的各种药用辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型。

3.如权利要求1所述中药组合物在制备抗心肌缺血药物中的应用。