CN102119986A - 一种具有抗痴呆作用的中药提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明中药提取物由开心散经过乙醇提取、大孔吸附树脂纯化得到，富集了开心散中的皂苷类成分和酚类成分，同时经过大鼠记忆障碍模型试验证明，本发明中药提取物可改善模型大鼠的学习记忆能力，使模型大鼠错误次数减少，潜伏期延长。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药提取物，特别涉及一种具有抗痴呆作用的中药提取物及其制备方法。
背景技术
开心散始见于《备急千金要方》，由人参、远志各四分，茯苓二两，石菖蒲一两组成，“主好忘”。为益气养心、安神定志之代表方剂，主治为中医情志性疾病：心气不足，神志不宁，健忘失眠，心怯怔忡等证。该方中人参益心气，安心神，可治疗心悸怔忡，失眠健忘；远志行气散郁、益智慧；茯苓归心、脾、肾等诸经，主治忧患、惊邪恐悸；石菖蒲开心孔、明耳目，发散药性、引药入经。目前临床上，开心散及其加减方多用于治疗老年痴呆症和抑郁症。
开心散各单味药中主要化学成分有：皂苷(人参，远志)、多糖(人参，茯苓)、寡糖酯(远志)、口山酮(远志)、挥发油(石菖蒲)、三萜、(茯苓、石菖蒲)、酚酸(石菖蒲)等；目前，未见从开心散中纯化制备抗痴呆活性部位的报道，本发明将开心散中的皂苷类成分和酚类成分采用大孔吸附树脂进行富集纯化，得到开心散抗痴呆活性部位，有利于进一步创新药物的研发。
发明内容
本发明的目的在于公开一种具有抗痴呆作用的中药提取物，本发明的另一个目的在于公开其制备方法，本发明的第三个目的在于提供其质量检测方法。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
本发明中药提取物由如下原料药制成：
茯苓 200-600重量份 人参 100-300重量份
远志 100-300重量份 石菖蒲 100-300重量份。
本发明中药提取物优选由如下原料药制成：
茯苓 400重量份 人参 200重量份
远志 200重量份 石菖蒲 200重量份。
本发明中药提取物优选由如下原料药制成：
茯苓 350重量份 人参 280重量份
远志 260重量份 石菖蒲 180重量份。
本发明中药提取物优选由如下原料药制成：
茯苓 560重量份 人参 160重量份
远志 180重量份 石菖蒲 270重量份。
本发明中药提取物的制备方法包括如下步骤：
步骤1：选取上述比例原料药；
步骤2：乙醇提取；
步骤3：大孔吸附树脂纯化；
该中药提取物中总皂苷含量为10-20％，总酚含量为30-60％，优选总酚含量为40-50％。
上述步骤2中，将原料药用40-80％乙醇回流提取2-4次，每次提取0.5-2小时；优选用50％乙醇回流提取3次，每次1.5小时；
上述步骤3中，将步骤2所得提取物加水分散溶解，使水溶液浓度为0.02-0.1g/mL，以2000-4000转/分钟的转速离心10-30min；优选使水溶液浓度为0.05g/mL，以3000转/分钟的转速离心10min；
上述步骤3中，离心后取上清液，通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，吸附流速为1.0-3.0mL/min，树脂柱径高比为0.5-1.5∶6.7-10.7，上样液浓度为0.02-0.1g/mL，水洗脱1-3倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.0-3.0mL/min，70-95％乙醇洗脱3-7倍树脂体积，洗脱流速为1.0-3.0mL/min，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得；优选80-95％乙醇洗脱；
上述步骤3中，优选1.25L 860021型大孔吸附树脂，吸附流速2.0mL/min，树脂柱径高比为1∶8.7，上样液浓度为0.05g/mL，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.0mL/min，90％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速为2.0mL/min，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得。
将以上所得提取物，加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液。
本发明中药提取物由开心散经过乙醇提取、大孔吸附树脂纯化得到，富集了开心散中的皂苷类成分和酚类成分，同时经过大鼠记忆障碍模型试验证明，本发明中药提取物可改善模型大鼠的学习记忆能力，使模型大鼠错误次数减少，潜伏期延长。
实验例1本发明抗痴呆活性部位致大鼠记忆障碍模型的改善作用
(一)实验材料
1.实验动物
SD大鼠，雄性，体重256.3±8.4g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2009-2010；
2.药品与试剂
受试药：开心散抗痴呆活性部位，按实施例5方法制备，给药前用0.5％CMC-Na溶解配成溶液。
东莨菪碱，购于Fluka公司，生产批号：2040506，大鼠剂量为0.5g/kg。
3.器材
大鼠跳台仪，箱内隔成2室，可同时测定2只大鼠。
(二)实验方法与结果
1.分组及给药
大鼠按体重随机分成4组，即模型对照组、正常对照组、开心散抗痴呆活性部位大、小剂量组，每组12只，开心散抗痴呆活性部位大、小剂量组连续给药4天，模型组与正常组给予等容积的0.5％CMC-Na。
2.实验方法
第四天给药后30分钟(准确计时)腹腔注射东莨菪碱造模，30分钟后进行训练(记忆获得实验)，24小时后测试(记忆巩固实验)。模型组注射东莨菪碱造模，30分钟进行训练，24小时后测试。正常组直接进行训练，24小时后测试。
跳台行为学实验过程
将同组2只大鼠同时放入跳台仪中，适应环境3分钟，训练5分钟，记录仪记录第一次跳上跳台的时间(潜伏期)，安全期时间，5分钟内的跳下次数(错误次数)。24小时后，进行记忆巩固测试，先将大鼠放到跳台上，记录第一次跳下时间(触电潜伏期)，安全期时间，5分钟内的跳下次数(错误次数)。
3.统计方法
使用SAS8.0统计软件进行分析，实验结果以均数±标准误表示。采用两样本t检验和非参数检验(Mann-Whitney Test)进行两两比较，采用单因素方差分析(ANOVA)进行多组间比较，组间差异采用LSD(方差齐)或者Games-Howell法(方差不齐)，分别将记忆巩固测试阶段各组给药大鼠与模型组大鼠和正常组大鼠进行比较，求得组间差异。
4.实验结果
表1 3-苯甲酰去氢土莫酸抗痴呆实验结果
注：&&P＜0.01，与对照组比较；**P＜0.01，与模型组比较；*P＜0.05，与模型组比较
(三)结论
与模型组相比，开心散抗痴呆活性部位大、小剂量组均可改善模型大鼠的学习记忆能力，使模型大鼠错误次数减少，潜伏期延长。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施方式
实施例1：胶囊剂
茯苓 400g 人参 200g
远志 200g 石菖蒲 200g
按上述比例取原料药饮片1kg，50％乙醇10L回流提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂，得提取物；加水分散溶解，使水溶液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，以3000转/分钟的转速离心10min，取上清液，通过1.25L860021型大孔吸附树脂，吸附流速2.0mL/min，树脂柱径高比为1∶8.7，上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.0mL/min，90％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速为2.0mL/min，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，加入常规辅料，按照常规工艺制成胶囊剂；
总皂苷的含量测定方法：
对照品：远志皂苷元；
试剂：0.5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸，冰醋酸；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于西林瓶中，蒸干后放冷，空白随行，依次加入0.2ml 5％香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后，于60℃恒温水浴中保温15min，取出放冷，加5ml冰醋酸后，摇匀，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总皂苷含量为14.94％；
总酚含量测定方法：
对照品：3，6’-二芥子酰基蔗糖；
试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，70％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中，加70％甲醇至5ml，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2ml，以及1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾混合溶液1ml，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线，摇匀，暗处放置30min，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总酚含量为45.36％。
实施例2：片剂
茯苓 350g 人参 280g
远志 260g 石菖蒲 180g
按上述比例取原料药饮片1kg，60％乙醇10L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得提取物；加水分散溶解，使水溶液浓度为0.08g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，以2500转/分钟的转速离心8min，取上清液，通过1.25L860021型大孔吸附树脂，吸附流速3.0mL/min，树脂柱径高比为1∶6.7，上样液浓度为0.02g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，水洗脱1.5倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2.0mL/min，95％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为1.0mL/min，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，加入常规辅料，按照常规工艺制成片剂；
总皂苷的含量测定方法：
对照品：远志皂苷元；
试剂：0.5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸，冰醋酸；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于西林瓶中，蒸干后放冷，空白随行，依次加入0.2ml 5％香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后，于60℃恒温水浴中保温15min，取出放冷，加5ml冰醋酸后，摇匀，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总皂苷含量为14.94％；
总酚含量测定方法：
对照品：3，6’-二芥子酰基蔗糖；
试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，70％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中，加70％甲醇至5ml，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2ml，以及1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾混合溶液1ml，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线，摇匀，暗处放置30min，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总酚含量为45.36％。
实施例3：丸剂
茯苓560g 人参160g
远志180g 石菖蒲270g
按上述比例取原料药饮片1kg，70％乙醇10L回流提取4次，每次提取1小时，减压回收溶剂，得提取物；加水分散溶解，使水溶液浓度为0.03g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，以3800转/分钟的转速离心12min，取使上清液，通过1.25L860021型大孔吸附树脂，吸附流速1.0mL/min，树脂柱径高比为1∶10.7，上样液浓度为0.1g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，水洗脱3倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2.0mL/min，85％乙醇洗脱6倍树脂体积，洗脱流速为3.0mL/min，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，加入常规辅料，按照常规工艺制成丸剂；
总皂苷的含量测定方法：
对照品：远志皂苷元；
试剂：0.5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸，冰醋酸；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于西林瓶中，蒸干后放冷，空白随行，依次加入0.2ml 5％香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后，于60℃恒温水浴中保温15min，取出放冷，加5ml冰醋酸后，摇匀，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总皂苷含量为14.94％；
总酚含量测定方法：
对照品：3，6’-二芥子酰基蔗糖；
试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，70％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中，加70％甲醇至5ml，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2ml，以及1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾混合溶液1ml，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线，摇匀，暗处放置30min，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总酚含量为45.36％。
实施例4：口服液体制剂
茯苓 400g 人参 200g
远志 200g 石菖蒲 200g
按上述比例取原料药取饮片1kg，80％乙醇10L回流提取4次，每次提取1小时，减压回收溶剂，得提取物；加水分散溶解，使水溶液浓度为0.1g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，以3800转/分钟的转速离心12min，取上清液，通过1.25L860021型大孔吸附树脂，吸附流速2.0mL/min，树脂柱径高比为1∶8.7，上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计，其中：皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.0mL/min，90％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速为2.0mL/min，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，加入常规辅料，按照常规工艺制成口服液体制剂；
总皂苷的含量测定方法：
对照品：远志皂苷元；
试剂：0.5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸，冰醋酸；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于西林瓶中，蒸干后放冷，空白随行，依次加入0.2ml 5％香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后，于60℃恒温水浴中保温15min，取出放冷，加5ml冰醋酸后，摇匀，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总皂苷含量为14.94％；
总酚含量测定方法：
对照品：3，6’-二芥子酰基蔗糖；
试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，70％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中，加70％甲醇至5ml，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2ml，以及1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾混合溶液1ml，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线，摇匀，暗处放置30min，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总酚含量为45.36％。
实施例5：注射剂
茯苓450g 人参160g
远志150g 石菖蒲250g
按上述比例取原料药饮片1kg，40％乙醇10L回流提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂，得提取物；加水分散溶解，使水溶液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，以3000转/分钟的转速离心10min，取上清液，通过1.25L860021型大孔吸附树脂，吸附流速2.0mL/min，树脂柱径高比为1∶8.7，上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计，其中：皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.0mL/min，90％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速为2.0mL/min，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，加入常规辅料，按照常规工艺制成注射剂；
总皂苷的含量测定方法：
对照品：远志皂苷元；
试剂：0.5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸，冰醋酸；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于西林瓶中，蒸干后放冷，空白随行，依次加入0.2ml 5％香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后，于60℃恒温水浴中保温15min，取出放冷，加5ml冰醋酸后，摇匀，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总皂苷含量为14.94％；
总酚含量测定方法：
对照品：3，6’-二芥子酰基蔗糖；
试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，70％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中，加70％甲醇至5ml，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2ml，以及1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾混合溶液1ml，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线，摇匀，暗处放置30min，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总酚含量为45.36％。
实施例6：
茯苓400g 人参200g
远志200g 石菖蒲200g
按上述比例取原料药饮片1kg，50％乙醇10L回流提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂，得提取物；加水分散溶解，使水溶液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，以3000转/分钟的转速离心10min，取上清液，通过1.25L860021型大孔吸附树脂，吸附流速2.0mL/min，树脂柱径高比为1∶8.7，上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.0mL/min，90％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速为2.0mL/min，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为本发明中药提取物；
总皂苷的含量测定方法：
对照品：远志皂苷元；
试剂：0.5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸，冰醋酸；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于西林瓶中，蒸干后放冷，空白随行，依次加入0.2ml 5％香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后，于60℃恒温水浴中保温15min，取出放冷，加5ml冰醋酸后，摇匀，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总皂苷含量为14.94％；
总酚含量测定方法：
对照品：3，6’-二芥子酰基蔗糖；
试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，70％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中，加70％甲醇至5ml，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2ml，以及1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾混合溶液1ml，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线，摇匀，暗处放置30min，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总酚含量为45.36％。
实施例7：
茯苓 350g 人参 280g
远志 260g 石菖蒲 180g
按上述比例取原料药饮片1kg，60％乙醇10L回流提取2次，每次提取2小时，减压回收溶剂，得提取物；加水分散溶解，使水溶液浓度为0.08g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，以2500转/分钟的转速离心8min，取上清液，通过1.25L860021型大孔吸附树脂，吸附流速3.0mL/min，树脂柱径高比为1∶6.7，上样液浓度为0.02g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，水洗脱1.5倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2.0mL/min，95％乙醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为1.0mL/min，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为本发明中药提取物；
总皂苷的含量测定方法：
对照品：远志皂苷元；
试剂：0.5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸，冰醋酸；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于西林瓶中，蒸干后放冷，空白随行，依次加入0.2ml 5％香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后，于60℃恒温水浴中保温15min，取出放冷，加5ml冰醋酸后，摇匀，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总皂苷含量为14.94％；
总酚含量测定方法：
对照品：3，6’-二芥子酰基蔗糖；
试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，70％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中，加70％甲醇至5ml，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2ml，以及1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾混合溶液1ml，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线，摇匀，暗处放置30min，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总酚含量为45.36％。
实施例8：
茯苓560g 人参160g
远志180g 石菖蒲270g
按上述比例取原料药饮片1kg，70％乙醇10L回流提取4次，每次提取1小时，减压回收溶剂，得提取物；加水分散溶解，使水溶液浓度为0.03g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，以3800转/分钟的转速离心12min，取使上清液，通过1.25L860021型大孔吸附树脂，吸附流速1.0mL/min，树脂柱径高比为1∶10.7，上样液浓度为0.1g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，水洗脱3倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2.0mL/min，85％乙醇洗脱6倍树脂体积，洗脱流速为3.0mL/min，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为本发明中药提取物；
总皂苷的含量测定方法：
对照品：远志皂苷元；
试剂：0.5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸，冰醋酸；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于西林瓶中，蒸干后放冷，空白随行，依次加入0.2ml 5％香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后，于60℃恒温水浴中保温15min，取出放冷，加5ml冰醋酸后，摇匀，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总皂苷含量为14.94％；
总酚含量测定方法：
对照品：3，6’-二芥子酰基蔗糖；
试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，70％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中，加70％甲醇至5ml，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2ml，以及1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾混合溶液1ml，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线，摇匀，暗处放置30min，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总酚含量为45.36％。
实施例9：
茯苓400g 人参200g
远志200g 石菖蒲200g
按上述比例取原料药取饮片1kg，80％乙醇10L回流提取4次，每次提取1小时，减压回收溶剂，得提取物；加水分散溶解，使水溶液浓度为0.1g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，以3800转/分钟的转速离心12min，取上清液，通过1.25L860021型大孔吸附树脂，吸附流速2.0mL/min，树脂柱径高比为1∶8.7，上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计，其中：皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.0mL/min，90％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速为2.0mL/min，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为本发明中药提取物；
总皂苷的含量测定方法：
对照品：远志皂苷元；
试剂：0.5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸，冰醋酸；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于西林瓶中，蒸干后放冷，空白随行，依次加入0.2ml 5％香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后，于60℃恒温水浴中保温15min，取出放冷，加5ml冰醋酸后，摇匀，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总皂苷含量为14.94％；
总酚含量测定方法：
对照品：3，6’-二芥子酰基蔗糖；
试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，70％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中，加70％甲醇至5ml，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2ml，以及1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾混合溶液1ml，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线，摇匀，暗处放置30min，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总酚含量为45.36％。
实施例10：
茯苓450g 人参160g
远志150g 石菖蒲250g
按上述比例取原料药饮片1kg，40％乙醇10L回流提取3次，每次提取1.5小时，减压回收溶剂，得提取物；加水分散溶解，使水溶液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计，其中皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，以3000转/分钟的转速离心10min，取上清液，通过1.25L860021型大孔吸附树脂，吸附流速2.0mL/min，树脂柱径高比为1∶8.7，上样液浓度为0.05g/mL(以折生药材量计，其中：皂苷浓度为0.4009mg/ml，酚类浓度为2.1626mg/ml)，水洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.0mL/min，90％乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速为2.0mL/min，收集90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为本发明中药提取物；
总皂苷的含量测定方法：
对照品：远志皂苷元；
试剂：0.5％香草醛-冰醋酸溶液，高氯酸，冰醋酸；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于西林瓶中，蒸干后放冷，空白随行，依次加入0.2ml 5％香草醛-冰醋酸溶液及0.8ml高氯酸后，于60℃恒温水浴中保温15min，取出放冷，加5ml冰醋酸后，摇匀，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于580±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总皂苷含量为14.94％；
总酚含量测定方法：
对照品：3，6’-二芥子酰基蔗糖；
试剂：0.6％三氯化铁溶液，0.9％铁氰化钾溶液，0.3％十二烷基硫酸钠溶液，70％甲醇溶液，0.1mol/L盐酸溶液；
显色方法：精密吸取样品溶液适量于25ml棕色容量瓶中，加70％甲醇至5ml，再加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2ml，以及1∶1的0.6％三氯化铁-0.9％铁氰化钾混合溶液1ml，暗处放置5min，用0.1mol/L盐酸加至25ml刻度线，摇匀，暗处放置30min，以备测定；
测定方法：将上述显色后样品于760±2nm波长范围内测定，记录其最大吸光度值，经测定总酚含量为45.36％。
Claims (10)
1.一种具有抗痴呆作用的中药提取物，其特征在于该中药提取物的主要由如下方法制成：
步骤1：选取如下原料药：
茯苓 200-600重量份 人参 100-300重量份
远志 100-300重量份 石菖蒲 100-300重量份；
步骤2：乙醇提取；
步骤3：弱极性或非极性大孔吸附树脂纯化；
其中总皂苷含量为10-20％，总酚含量为30-60％。
2.如权利要求1所述的中药提取物，其特征在于步骤1中原料药的组成为：
3.如权利要求1或2所述的中药提取物，其特征在于步骤2中，将原料药用40-80％乙醇回流提取2-4次，每次提取0.5-2小时。
4.如权利要求1或2所述的中药提取物，其特征在于步骤3中，将步骤2所得提取物加水分散溶解，使水溶液浓度为0.02-0.1g/mL，以2000-4000转/分钟的转速离心10-30min。
5.如权利要求1或2所述的中药提取物，其特征在于步骤3中，离心后取上清液，通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，吸附流速为1.0-3.0mL/min，树脂柱径高比为0.5-1.5∶6.7-10.7，上样液浓度为0.02-0.1g/mL，水洗脱1-3倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.0-3.0mL/min，70-95％乙醇洗脱3-7倍树脂体积，洗脱流速为1.0-3.0mL/min，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得。
6.一种具有抗痴呆作用的中药提取物的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
步骤1：选取如下原料药：
茯苓 200-600重量份 人参 100-300重量份
远志 100-300重量份 石菖蒲 100-300重量份；
步骤2：乙醇提取；
步骤3：弱极性或非极性大孔吸附树脂纯化。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于步骤2中，将原料药用40-80％乙醇回流提取2-4次，每次提取0.5-2小时。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于步骤3中，将步骤2所得提取物加水分散溶解，使水溶液浓度为0.02-0.1g/mL，以2000-4000转/分钟的转速离心10-30min。
9.如权利要求6所述的方法，其特征在于步骤3中，离心后取上清液，通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，吸附流速为1.0-3.0mL/min，树脂柱径高比为0.5-1.5∶6.7-10.7，上样液浓度为0.02-0.1g/mL，水洗脱1-3倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.0-3.0mL/min，70-95％乙醇洗脱3-7倍树脂体积，洗脱流速为1.0-3.0mL/min，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得。
10.如权利要求1-5任一所述的中药提取物在制备具有抗痴呆作用药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201110053682 CN102119986B (zh) | 2011-03-07 | 2011-03-07 | 一种具有抗痴呆作用的中药提取物及其制备方法 |
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