CN103893816B - 含植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料制备方法 - Google Patents
含植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103893816B CN103893816B CN201410061448.4A CN201410061448A CN103893816B CN 103893816 B CN103893816 B CN 103893816B CN 201410061448 A CN201410061448 A CN 201410061448A CN 103893816 B CN103893816 B CN 103893816B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extracellular matrix
- bacteria cellulose
- containing natural
- natural plant
- plant composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 101
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 101
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 title claims abstract description 101
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 title abstract description 5
- 229920002749 Bacterial cellulose Polymers 0.000 title abstract 6
- 239000005016 bacterial cellulose Substances 0.000 title abstract 6
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title abstract 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 78
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 238000009736 wetting Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 120
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 113
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 113
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 88
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 55
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 46
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 30
- 235000015639 rosmarinus officinalis Nutrition 0.000 claims description 24
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 claims description 22
- 229940092258 rosemary extract Drugs 0.000 claims description 17
- 235000020748 rosemary extract Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000001233 rosmarinus officinalis l. extract Substances 0.000 claims description 17
- 239000002121 nanofiber Substances 0.000 claims description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 9
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 claims description 8
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 7
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 7
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 7
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 7
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 7
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 7
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 7
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 7
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 7
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- 244000235858 Acetobacter xylinum Species 0.000 claims description 5
- 235000002837 Acetobacter xylinum Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 241000590020 Achromobacter Species 0.000 claims description 3
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 claims description 3
- 241000589151 Azotobacter Species 0.000 claims description 3
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 claims description 3
- 241000190932 Rhodopseudomonas Species 0.000 claims description 3
- 241000192023 Sarcina Species 0.000 claims description 3
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 claims description 2
- 241001530490 Salvia rosmarinus Species 0.000 claims 3
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 abstract description 29
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 29
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 12
- 241001529742 Rosmarinus Species 0.000 abstract description 7
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 abstract description 6
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000012567 medical material Substances 0.000 abstract description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 abstract description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract 2
- 230000003068 static effect Effects 0.000 abstract 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 244000178231 Rosmarinus officinalis Species 0.000 description 21
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 12
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 12
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 12
- 208000008960 Diabetic foot Diseases 0.000 description 10
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 10
- 210000004493 neutrocyte Anatomy 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 208000005230 Leg Ulcer Diseases 0.000 description 5
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 5
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 206010007247 Carbuncle Diseases 0.000 description 3
- 206010017553 Furuncle Diseases 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 3
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 206010011985 Decubitus ulcer Diseases 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- 208000004210 Pressure Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 2
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 230000003570 biosynthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 2
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 2
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 241001313855 Bletilla Species 0.000 description 1
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 1
- 244000035851 Chrysanthemum leucanthemum Species 0.000 description 1
- 235000008495 Chrysanthemum leucanthemum Nutrition 0.000 description 1
- 102000002734 Collagen Type VI Human genes 0.000 description 1
- 108010043741 Collagen Type VI Proteins 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 244000286779 Hansenula anomala Species 0.000 description 1
- 235000014683 Hansenula anomala Nutrition 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 241000521257 Hydrops Species 0.000 description 1
- 208000032912 Local swelling Diseases 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000228153 Penicillium citrinum Species 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010040943 Skin Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000028990 Skin injury Diseases 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 208000033809 Suppuration Diseases 0.000 description 1
- 208000003443 Unconsciousness Diseases 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000009172 bursting Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 210000002219 extraembryonic membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000001365 lymphatic vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 231100000019 skin ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
本发明公开了一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法。涉及一种医用材料的制备技术。包括：选取能分泌细菌纤维素的菌株活化制备成种子醪液，然后将菌株浓度为30～50wt%的种子醪液与含有天然迷迭香冻干粉的培养基混合后置于培养容器中静置培养得到含有天然植物成分的细菌纤维素膜；取羊膜细胞外基质膜浸泡在培养基中，待其完全润湿后平铺于细菌纤维素膜上表面；继续静置培养1～6h，经纯化处理，灭菌后得到一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料。本发明制备工艺简单易行、成本低、材料来源广泛，制备的敷料具有杀菌、保湿、吸收伤口渗出液及加速伤口愈合等性能，适用于各类慢性皮肤创伤。
Description
技术领域
本发明涉及医用材料的制备技术领域，特别是指一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法。
背景技术
羊膜是从细胞滋养层衍化而来，是两层胎膜的内层。正常羊膜薄而明，不含有血管、神经和淋巴管等结构，厚度为20～500μm。羊膜具有5层结构可分为：上皮层、基底膜层、致密层、纤维母细胞层、海绵层。去除细胞后的羊膜细胞外基质材料中含有胶原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素和板层体等多种成分，表达多种生长因子及其mRNA的相关蛋白，能为细胞的增殖、分化提供丰富的营养成分，有利于细胞的生长繁殖；基底膜层较厚，有利于表皮细胞的贴附和迁移，促进上皮化，防止其凋亡；致密层与海绵层的胶原纤维形成疏松的三维立体构型；组织相容性好，不表达人类白细胞抗原，无诱导排斥反应；容易得到，且可塑性好，易于加工处理。大量研究证实，羊膜作为生物敷料对于治疗大面积烧伤、烫伤等皮肤损伤具有良好的效果。但由于羊膜薄而柔软、保温保水性差、创面渗出多是易溶失，同时生物力学性能较差，操作有一定难度，使其在生物敷料应用中受到限制。
细菌纤维素是一种天然的生物高聚物，具有超精细网状结构，由直径3～4纳米的微纤组合成40～60纳米粗的纤维束，并相互交织形成发达的超精细网络结构。且其化学纯度非常高，由于细菌纤维素具有良好的生物相容性、湿态时高的机械强度、良好的液体吸收性能和保湿性能，使其在医学生物材料发展中表现出极大的优势，可作为理想的可降解载体材料应用于伤口敷料、药物载体材料等诸多领域。国外采用单纯的细菌纤维素作为湿性敷料已有报道，并且已经产业化用于临床。
迷迭香(Rosmarinus officinatis L. )又名油安草，别名艾菊，系唇形科迷迭香属植物，多年生常绿亚灌木。迷迭香提取物中最重要是迷迭香抗氧化剂及迷迭香精油。迷迭香天然抗氧化剂结构稳定，不容易分解，耐190℃高温，其抗氧化效果好，且不具毒性。迷迭香植物中含有酚、酸、酮、萜等多种化合物，在食品、医药、工业上得到了广泛的应用。迷迭香提取物具有良好的抗菌性能，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、汉逊氏酵母菌、青霉、黑曲霉、黄曲霉和桔青霉均有很好的抑制效果；迷迭香提取物用于治疗慢性伤口可以减少炎症、增强伤口收缩、有助于上皮组织及肉芽组织的重建，并且能够提高伤口血管化和胶原蛋白的形成。综上所述，将含有天然迷迭香提取物成分的细菌纤维素与羊膜细胞外基质材料结合得到具有三维网络结构的复合材料，可以制备出兼具组织相容性、抗菌、保湿、吸收伤口渗出液、加速伤口愈合以及机械性能良好的湿性敷料。
本专利采用微生物发酵培养方法原位复合羊膜细胞外基质材料。含有天然迷迭香提取物成分的细菌纤维素材料与羊膜细胞外基质材料，通过细菌纤维素纳米纤维与羊膜细胞外基质材料致密层与海绵层的胶原纤维相互作用且纳米纤维相互贯穿，形成链接紧密的复合材料。本发明制备工艺简单易行、成本低、材料来源广泛，制备的敷料具有杀菌、保湿、吸收伤口渗出液及加速伤口愈合等性能，适用于各类慢性皮肤创伤。
发明内容
本发明的目的是提供一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法。涉及一种医用材料的制备技术。本发明制备工艺简单易行、成本低、材料来源广泛，制备的敷料具有杀菌、保湿、吸收伤口渗出液及加速伤口愈合等性能，适用于糖尿病足溃疡、下肢静脉性溃疡、压疮、供皮区伤口等各类慢性皮肤创伤。
本发明公开了一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，包括：选取能分泌细菌纤维素的菌株活化制备成种子醪液，然后将菌株浓度为30～50wt%的种子醪液与含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基混合后置于培养容器中静置培养得到含有天然植物成分的细菌纤维素膜；取羊膜细胞外基质膜浸泡在培养基中，待其完全润湿后平铺于细菌纤维素膜上表面；继续静置培养1～6h，经纯化处理，灭菌后得到一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料。
作为优选的技术方案：
其中，如上所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，所述的能分泌细菌纤维素的菌株是指木醋杆菌、根瘤菌属、八叠球菌属、假单胞菌属、无色杆菌属、产碱菌属、气杆菌属或固氮菌属中的一种或几种。
如上所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，所述的含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基是指每1L的乙醇水溶液中含有天然迷迭香冻干粉10～50g、磷酸氢二钠4～16g、磷酸二氢钾4～16g、酵母膏4～20g、蛋白胨4～20g，其中乙醇水溶液浓度为50～70wt%。
如上所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，所述的静置培养是指种子醪液与含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基混合后置于培养容器中静置培养5～7d，其中种子醪液与含有胶原溶液的发酵培养基混合后在培养容器内的液面高度为0.5～3cm。通常情况下，细菌纤维素膜漂浮于培养液的上方，细菌纤维素在发酵培养过程中会消耗一部分培养基，同时一部分培养基通过蒸发失去。本专利中所述的方法通过控制培养液用量在合理范围，培养基用量过少将影响细菌纤维素的生物合成，过多则影响羊膜细胞外基质材料有效平铺于细菌纤维素膜上表面。
如上所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，所述的含有天然植物成分的细菌纤维素膜是指静置培养得到的水凝胶细菌纤维素膜，厚度为1～3cm，其中细菌纤维素的三维网络纳米纤维上均匀附着有含天然迷迭香提取物成分的化学物质。发酵过程中细菌首先在培养基中大量扩增并生物合成纤维素微纤，含有天然迷迭香提取物成分的化学物质黏附在纤维素微纤上，随着发酵时间延长形成纤维素纳米纤维，并且在纳米纤维上均匀附着迷迭香提取物成分；最终形成含有天然迷迭香提取物成分的水凝胶状细菌纤维素膜。
如上所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，所述的羊膜细胞外基质材料是指来源安全，经处理去除细胞、脂肪和可溶性抗原并且干燥灭菌的脱细胞生物羊膜。新鲜羊膜取自健康剖宫产产妇的胎盘，产前血清学检查排除乙肝、丙肝、梅毒及获得免疫缺陷综合征，取材处理均在无菌操作下完成；经处理去除细胞、脂肪、可溶性抗原，一般采用冷冻干燥法进行干燥并经辐照灭菌。
如上所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，所述的铺于含有天然植物成分的细菌纤维素膜上表面是指羊膜细胞外基质材料的海绵层与含有天然植物成分的细菌纤维素膜上表面相接触。羊膜细胞外基质材料具有5层结构可分为：上皮层、基底膜层、致密层、纤维母细胞层、海绵层。其中致密层与海绵层的胶原纤维形成疏松的三维立体构型，有利于细菌纤维素膜中的纤维素纳米纤维与其形成相互贯穿的网络结构。基底膜层含有Ⅳ型和Ⅴ型胶原、层粘连蛋白、纤维连接蛋白及各种螯合蛋白，能够促进种子细胞的分化、增殖和迁移。因此，在制备敷料时将羊膜细胞外基质材料的海绵层与细菌纤维素膜上表面相接触，有利于细菌纤维素膜的纤维素纳米纤维进入海绵层的疏松胶原纤维内部，同时保持了基底膜层的生物活性。
如上所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，所述的纯化处理是指复合材料在1～3wt%的氢氧化钠水溶液30～60℃浸泡12～24h，并用去离子水清洗至中性。本专利中选用较低浓度的氢氧化钠在低温下对复合材料进行处理，氢氧化钠溶液浸泡能够彻底去除菌体蛋白和粘附在细菌纤维素膜上的残余培养基，确保复合材料的内毒素符合医用植入性材料的要求，同时低浓度氢氧化钠可以防止在处理过程中影响羊膜细胞外基质材料中含有的诸多蛋白及生长因子。
如上所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，所述的含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料是指含有天然植物成分的细菌纤维素膜与羊膜细胞外基质的复合材料，其中羊膜细胞外基质位于敷料的上层，含有天然植物成分的细菌纤维素膜位于敷料的下层，并且羊膜细胞外基质材料的致密层与海绵层中的胶原纤维与含有天然植物成分的细菌纤维素膜中的纳米纤维相互贯穿，形成链接紧密的复合材料。
如上所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料在使用时，位于敷料上层的羊膜细胞外基质与皮肤伤口接触。
本发明的另一目的是提供一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料，其特征是：包含细菌纤维素、迷迭香和羊膜细胞外基质。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本专利采用微生物发酵培养方法原位复合羊膜细胞外基质材料。含有天然迷迭香提取物成分的细菌纤维素材料与羊膜细胞外基质材料，通过细菌纤维素纳米纤维与羊膜细胞外基质材料致密层与海绵层的胶原纤维相互作用且纳米纤维相互贯穿，形成链接紧密的复合材料。在保证复合材料的组织相容性、生物活性的前提下，有效增强了材料的机械性能，抗菌性能；所含的天然迷迭香提取物成分可以减少伤口炎症、增强伤口收缩、有助于上皮组织及肉芽组织的重建，并且能够提高伤口血管化和胶原蛋白的形成。本发明制备工艺简单易行、成本低、材料来源广泛，制备的敷料具有杀菌、保湿、吸收伤口渗出液及加速伤口愈合等性能，适用于糖尿病足溃疡、下肢静脉性溃疡、压疮、供皮区伤口等各类慢性皮肤创伤。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1：
选取能分泌细菌纤维素的木醋杆菌活化制备成种子醪液，然后将菌株浓度为50wt%的种子醪液与含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基混合。所述的含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基是指每1L的乙醇水溶液中含有天然迷迭香冻干粉30g、磷酸氢二钠16g、磷酸二氢钾16g、酵母膏20g、蛋白胨20g，其中乙醇水溶液浓度为70wt%。混合后的溶液置于培养容器中，混合液在培养容器内的液面高度为3cm，静置培养5d得到膜厚度为3cm的水凝胶状含有天然迷迭香提取物成分的细菌纤维素膜。
将来源安全，经处理去除细胞、脂肪和可溶性抗原并且干燥灭菌的羊膜细胞外基质材料浸泡在培养基中，待其完全润湿后平铺于细菌纤维素膜上表面。其中，羊膜细胞外基质材料的海绵层与含有天然植物成分的细菌纤维素膜上表面相接触。继续静置培养1h，得到的复合材料置于1wt%的氢氧化钠水溶液60℃浸泡12h，并用去离子水清洗至中性，得到一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料。其中羊膜细胞外基质位于敷料的上层，含有天然植物成分的细菌纤维素膜位于敷料的下层，并且羊膜细胞外基质材料的致密层与海绵层中的胶原纤维与含有天然植物成分的细菌纤维素膜中的纳米纤维相互贯穿，形成链接紧密的复合材料。该敷料在使用时，位于敷料上层的羊膜细胞外基质与皮肤伤口接触。
实施例2：
选取能分泌细菌纤维素的根瘤菌属和假单胞菌属活化制备成种子醪液，然后将菌株浓度为40wt%的种子醪液与含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基混合。所述的含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基是指每1L的乙醇水溶液中含有天然迷迭香冻干粉20g、磷酸氢二钠14g、磷酸二氢钾14g、酵母膏18g、蛋白胨18g，其中乙醇水溶液浓度为70wt%。混合后的溶液置于培养容器中，混合液在培养容器内的液面高度为2cm，静置培养5d得到膜厚度为2.5cm的水凝胶状含有天然迷迭香提取物成分的细菌纤维素膜。
将来源安全，经处理去除细胞、脂肪和可溶性抗原并且干燥灭菌的羊膜细胞外基质材料浸泡在培养基中，待其完全润湿后平铺于细菌纤维素膜上表面。其中，羊膜细胞外基质材料的海绵层与含有天然植物成分的细菌纤维素膜上表面相接触。继续静置培养2h，得到的复合材料置于2wt%的氢氧化钠水溶液50℃浸泡12h，并用去离子水清洗至中性，得到一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料。其中羊膜细胞外基质位于敷料的上层，含有天然植物成分的细菌纤维素膜位于敷料的下层，并且羊膜细胞外基质材料的致密层与海绵层中的胶原纤维与含有天然植物成分的细菌纤维素膜中的纳米纤维相互贯穿，形成链接紧密的复合材料。该敷料在使用时，位于敷料上层的羊膜细胞外基质与皮肤伤口接触。
实施例3：
选取能分泌细菌纤维素的八叠球菌属和产碱菌属活化制备成种子醪液，然后将菌株浓度为30wt%的种子醪液与含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基混合。所述的含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基是指每1L的乙醇水溶液中含有天然迷迭香冻干粉10g、磷酸氢二钠12g、磷酸二氢钾12g、酵母膏16g、蛋白胨16g，其中乙醇水溶液浓度为60wt%。混合后的溶液置于培养容器中，混合液在培养容器内的液面高度为1cm，静置培养6d得到膜厚度为1cm的水凝胶状含有天然迷迭香提取物成分的细菌纤维素膜。
将来源安全，经处理去除细胞、脂肪和可溶性抗原并且干燥灭菌的羊膜细胞外基质材料浸泡在培养基中，待其完全润湿后平铺于细菌纤维素膜上表面。其中，羊膜细胞外基质材料的海绵层与含有天然植物成分的细菌纤维素膜上表面相接触。继续静置培养3h，得到的复合材料置于3wt%的氢氧化钠水溶液30℃浸泡16h，并用去离子水清洗至中性，得到一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料。其中羊膜细胞外基质位于敷料的上层，含有天然植物成分的细菌纤维素膜位于敷料的下层，并且羊膜细胞外基质材料的致密层与海绵层中的胶原纤维与含有天然植物成分的细菌纤维素膜中的纳米纤维相互贯穿，形成链接紧密的复合材料。该敷料在使用时，位于敷料上层的羊膜细胞外基质与皮肤伤口接触。
实施例4：
选取能分泌细菌纤维素的木醋杆菌、气杆菌属和固氮菌属活化制备成种子醪液，然后将菌株浓度为50wt%的种子醪液与含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基混合。所述的含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基是指每1L的乙醇水溶液中含有天然迷迭香冻干粉50g、磷酸氢二钠10g、磷酸二氢钾10g、酵母膏10g、蛋白胨10g，其中乙醇水溶液浓度为60wt%。混合后的溶液置于培养容器中，混合液在培养容器内的液面高度为0.5cm，静置培养6d得到膜厚度为2cm的水凝胶状含有天然迷迭香提取物成分的细菌纤维素膜。
将来源安全，经处理去除细胞、脂肪和可溶性抗原并且干燥灭菌的羊膜细胞外基质材料浸泡在培养基中，待其完全润湿后平铺于细菌纤维素膜上表面。其中，羊膜细胞外基质材料的海绵层与含有天然植物成分的细菌纤维素膜上表面相接触。继续静置培养3h，得到的复合材料置于1wt%的氢氧化钠水溶液30℃浸泡24h，并用去离子水清洗至中性，得到一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料。其中羊膜细胞外基质位于敷料的上层，含有天然植物成分的细菌纤维素膜位于敷料的下层，并且羊膜细胞外基质材料的致密层与海绵层中的胶原纤维与含有天然植物成分的细菌纤维素膜中的纳米纤维相互贯穿，形成链接紧密的复合材料。该敷料在使用时，位于敷料上层的羊膜细胞外基质与皮肤伤口接触。
实施例5：
选取能分泌细菌纤维素的木醋杆菌和无色杆菌属活化制备成种子醪液，然后将菌株浓度为40wt%的种子醪液与含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基混合。所述的含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基是指每1L的乙醇水溶液中含有天然迷迭香冻干粉40g、磷酸氢二钠4g、磷酸二氢钾4g、酵母膏4g、蛋白胨4g，其中乙醇水溶液浓度为50wt%。混合后的溶液置于培养容器中，混合液在培养容器内的液面高度为2cm，静置培养7d得到膜厚度为2cm的水凝胶状含有天然迷迭香提取物成分的细菌纤维素膜。
将来源安全，经处理去除细胞、脂肪和可溶性抗原并且干燥灭菌的羊膜细胞外基质材料浸泡在培养基中，待其完全润湿后平铺于细菌纤维素膜上表面。其中，羊膜细胞外基质材料的海绵层与含有天然植物成分的细菌纤维素膜上表面相接触。继续静置培养6h，得到的复合材料置于3wt%的氢氧化钠水溶液40℃浸泡18h，并用去离子水清洗至中性，得到一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料。其中羊膜细胞外基质位于敷料的上层，含有天然植物成分的细菌纤维素膜位于敷料的下层，并且羊膜细胞外基质材料的致密层与海绵层中的胶原纤维与含有天然植物成分的细菌纤维素膜中的纳米纤维相互贯穿，形成链接紧密的复合材料。该敷料在使用时，位于敷料上层的羊膜细胞外基质与皮肤伤口接触。
实施例6：
含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的皮下埋置实验
实验方法：取健康SD大鼠30只，性别不限，分为实验组和对照组，消毒，采用乙醚吸入麻醉，常规无菌操作，切开背部皮肤，实验组背部植入5张1×1cm2敷料（分别取实施例1-5所制备的含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料），对照组切开后即缝合。观察动物术后一般情况和伤口愈合情况。术后1、2、4周处死各组动物，取出植入敷料戊二醛固定，常规包埋切片，HE染色，光镜观察植入物周围淋巴细胞、巨噬细胞浸润情况。
实验表明：手术当天动物清醒后即可正常进食，伤口无红肿、渗液等炎性反应，所有创面均可良好愈合，手术切口无1例发生感染，动物无死亡、惊厥、中风等毒性反应，植入物周围软组织未见发黑、坏死、化脓、积液等表现，组织学观察术后1周，植入物周围有大量淋巴细胞，2周时，仅少量淋巴细胞，4周时，基本无淋巴细胞存在。证实本发明的敷料无生物学毒性，有良好的组织相容性。
实施例7
含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料对糖尿病足溃疡大鼠的治疗实验
运用高脂饲料配合链脲佐菌素诱导的大鼠2型糖尿病，使用烫伤仪制成深Ⅱ度烫伤诱导皮肤溃疡制成糖尿病足溃疡大鼠模型。大鼠为SD雄性大鼠，SPF级，体重(180±10)g，共30只，每组5只，共6组，其中一组为对照，另5组分别施用实施例1-5制备的含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料。高脂饲料的制备方法为：首先，将大麦15%，小麦31%，玉米15%，麸皮15%，鱼粉6%按比例搅拌混合均匀后，加入豆粕、油、盐混匀后加压成型制成基础饲料，然后，将基础饲料73％，猪油20％，奶粉2％，胆固醇1％，蔗糖4％按比例搅拌混合均匀后加压成型制成高脂饲料，成品为圆柱块状。高脂饲料喂养8周后，1.5％链脲佐菌素溶解于pH值4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液按35mg/kg的剂量左下腹注射。使用SQL-5Q烫伤仪，温度90℃，接触时间10S，压力9.8N，面积4cm2，麻醉后于后背部皮肤进行烫伤。造模成功后，用碘伏清洁创面，用本发明的含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料外敷创面，然后用无菌纱布包扎，1天换药1次，以溃疡面积和血白细胞总数为指标统计平均愈合时间，结果见表1。
表1 对糖尿病足溃疡大鼠的平均愈合时间比较（n=5）
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | |
| 平均愈合时间/天 | 18.5±1.4 | 17.8±0.8 | 18.4±1.2 | 19.2±1.0 | 17.0±1.2 |
实施例8：
含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的医院临床实验
本发明实施例1制备的含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料经医院临床实验治疗共102例。其中涉及糖尿病足溃疡37例、下肢静脉性溃疡21例、疮疡或痈疖44例，其治疗效果详见表2。
表2中各种糖尿病足溃疡、下肢静脉性溃疡、疮疡或痈疖的疗效判定标准为：
1.痊愈：全身症状消失，局部肿胀消散，或脓液吸收消散，或溃后疮面愈合，血白细胞总数正常。
2.显效：全身症状消失，肿胀、脓肿或疮口缩小了70%以上，血白细胞总数正常。
3.有效：全身症状减轻，肿胀、脓肿或疮口缩小了30%以上，70%以下，血白细胞总数接近正常。
4.无效：未达到有效标准。
表2 含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的临床实验
| 病例类型 | 病例数 | 痊愈 | 显效 | 有效 | 无效 | 治愈率 |
| 糖尿病足溃疡 | 37 | 36 | 1 | 0 | 0 | 97.3% |
| 下肢静脉性溃疡 | 21 | 19 | 1 | 1 | 0 | 90.5% |
| 疮疡或痈疖 | 44 | 42 | 1 | 1 | 0 | 95.5% |
其中具体的病例有：
周某，男，68岁，糖尿病史20年，空腹血糖14 mnol/l，早餐后2小时血糖17.9 mmol/L，糖化血红蛋白11.2 mg/dl，糖尿病足溃疡三级，皮肤红肿、溃烂，深度溃疡，形成溃疡腔，溃疡面积145.5 mm2，血白细胞总数1.8×109/l，中性粒细胞数77%。用碘伏清洁创面，清除坏死组织及脓性分泌物，用本发明的含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料填塞于腔内及外敷创面，然后用无菌纱布包扎，抬高患肢，勿使足部受压，1天换药1次，连续治疗一疗程12天，溃疡面积减至64.5 mm2，血白细胞总数降至0.7×109/l，中性粒细胞数55%。持续治疗至24天，肌肉组织层、脂肪层、真皮层、表皮层恢复原来组织结构，完全治愈。
王某，女，47 岁，空腹血糖8.1 mmol/L，早餐后2小时血糖10.4 mmol/L，糖化血红蛋白8.7 mg/dl，左足糖尿病足溃疡一级，溃疡面积123.3 mm2，伤口溃烂，血白细胞总数1.6×109/l，中性粒细胞数70%。用碘伏清洁创面，清除坏死组织及脓性分泌物，用本发明的含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料外敷创面，然后用无菌纱布包扎，抬高患肢，勿使足部受压，1天换药1次，连续治疗7天局部症状消失，血白细胞总数降至0.5×109/l，中性粒细胞数48%，溃疡面完全愈合。
焦某，女，67岁，疮疡、顽固性溃疡患者，左下肢溃疡5个多月，局部呈现肿、硬的结节，顶高有根束，疮色红，疮顶有脓栓，疼痛明显，血白细胞总数及中性粒细胞数增高，血白细胞总数1.4×109/l，中性粒细胞数73%。用碘伏清洁创面，清除坏死组织及脓性分泌物，采用本发明的含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料外敷溃疡面上，然后用无菌纱布包扎，1天换药1次，用药7日后，红肿明显减轻，溃疡面缩小，血白细胞总数降至0.7×109/l, 中性粒细胞数60%。继续用药至第14日，左下肢无红、肿，无痛感，溃疡创面愈合，血白细胞总数降至0.6×109/l，中性粒细胞数53%，未留明显疤痕，治疗痊愈。
Claims (9)
1.一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，其特征是：选取能分泌细菌纤维素的菌株活化制备成种子醪液，然后将菌株浓度为30～50wt%的种子醪液与含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基混合后置于培养容器中静置培养得到含有天然植物成分的细菌纤维素膜；取羊膜细胞外基质膜浸泡在培养基中，待其完全润湿后平铺于细菌纤维素膜上表面；继续静置培养1～6h，经纯化处理，灭菌后得到一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料。
2.如权利要求1所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，其特征在于：所述的能分泌细菌纤维素的菌株是指木醋杆菌、根瘤菌属、八叠球菌属、假单胞菌属、无色杆菌属、产碱菌属、气杆菌属或固氮菌属中的一种或几种。
3.如权利要求1所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，其特征在于：所述的含有天然迷迭香冻干粉的发酵培养基是指每1L的乙醇水溶液中含有天然迷迭香冻干粉10～50g、磷酸氢二钠4～16g、磷酸二氢钾4～16g、酵母膏4～20g、蛋白胨4～20g，其中乙醇水溶液浓度为50～70wt%。
4.如权利要求1所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，其特征在于：含有天然植物成分的细菌纤维素膜是指静置培养得到的水凝胶细菌纤维素膜，厚度为1～3cm，其中细菌纤维素的三维网络纳米纤维上均匀附着有含天然迷迭香提取物成分的化学物质。
5.如权利要求1所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，其特征在于：所述的羊膜细胞外基质材料是指来源安全，经处理去除细胞、脂肪和可溶性抗原并且干燥灭菌的脱细胞生物羊膜。
6.如权利要求1所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，其特征在于：所述的平铺于含有天然植物成分的细菌纤维素膜上表面是指羊膜细胞外基质材料的海绵层与含有天然植物成分的细菌纤维素膜上表面相接触。
7.如权利要求1所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，其特征在于：所述的纯化处理是指复合材料在1～3wt%的氢氧化钠水溶液30～60℃浸泡12～24h，并用去离子水清洗至中性。
8.如权利要求1所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，其特征在于：所述的含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料是指含有天然植物成分的细菌纤维素膜与羊膜细胞外基质的复合材料，其中羊膜细胞外基质位于敷料的上层，含有天然植物成分的细菌纤维素膜位于敷料的下层，并且羊膜细胞外基质材料的致密层与海绵层中的胶原纤维与含有天然植物成分的细菌纤维素膜中的纳米纤维相互贯穿，形成链接紧密的复合材料。
9.如权利要求1所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料的制备方法，其特征在于：所述的一种含有天然植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料在使用时，位于敷料上层的羊膜细胞外基质与皮肤伤口接触。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410061448.4A CN103893816B (zh) | 2014-02-24 | 2014-02-24 | 含植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410061448.4A CN103893816B (zh) | 2014-02-24 | 2014-02-24 | 含植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103893816A CN103893816A (zh) | 2014-07-02 |
| CN103893816B true CN103893816B (zh) | 2015-06-10 |
Family
ID=50985594
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410061448.4A Active CN103893816B (zh) | 2014-02-24 | 2014-02-24 | 含植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103893816B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108888799A (zh) * | 2018-06-25 | 2018-11-27 | 东莞市联洲知识产权运营管理有限公司 | 一种具有驱虫性能的增强型复合纤维素医用敷料及其制备方法 |
| CN111481735A (zh) * | 2019-01-25 | 2020-08-04 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 一种医用抗菌护创水凝胶敷料及其制备方法 |
| CN111790000A (zh) * | 2020-06-23 | 2020-10-20 | 洛阳巴库生物科技有限公司 | 一种用于创面修复的干细胞羊膜敷料结构及其制备方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1618954A (zh) * | 2003-05-01 | 2005-05-25 | 四川大学华西医院 | 生物衍生羊膜、复合生物衍生羊膜及其制备方法 |
| CN102250378A (zh) * | 2011-03-30 | 2011-11-23 | 东华大学 | 一种细菌纤维素/聚合物复合膜及其制备方法 |
| CN103385896A (zh) * | 2013-07-23 | 2013-11-13 | 钟春燕 | 一种细菌纤维素复合黄酮类化合物的制备方法 |
| CN103481600A (zh) * | 2012-06-12 | 2014-01-01 | 钟春燕 | 一种细菌纤维素复合膜材的制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8871016B2 (en) * | 2011-08-03 | 2014-10-28 | The Johns Hopkins University | Cellulose-based hydrogels and methods of making thereof |
-
2014
- 2014-02-24 CN CN201410061448.4A patent/CN103893816B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1618954A (zh) * | 2003-05-01 | 2005-05-25 | 四川大学华西医院 | 生物衍生羊膜、复合生物衍生羊膜及其制备方法 |
| CN102250378A (zh) * | 2011-03-30 | 2011-11-23 | 东华大学 | 一种细菌纤维素/聚合物复合膜及其制备方法 |
| CN103481600A (zh) * | 2012-06-12 | 2014-01-01 | 钟春燕 | 一种细菌纤维素复合膜材的制备方法 |
| CN103385896A (zh) * | 2013-07-23 | 2013-11-13 | 钟春燕 | 一种细菌纤维素复合黄酮类化合物的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103893816A (zh) | 2014-07-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rosenbaum et al. | Advances in wound management | |
| US4414202A (en) | Composition for treatment of wounds | |
| CN103893825B (zh) | 含胶原蛋白的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质材料制备方法 | |
| US4778679A (en) | Method and composition for treatment of wounds | |
| CN103893816B (zh) | 含植物成分的细菌纤维素复合羊膜细胞外基质敷料制备方法 | |
| Lo et al. | Wound healing after cultured epithelial autografting in patients with massive burn injury: a cohort study | |
| CN110623792B (zh) | 一种医学敷料及其制备方法 | |
| CN104474573A (zh) | 一种生物敷膜及制备方法 | |
| CN105169464B (zh) | 一种天然蜂蜜伤口敷料及其制备方法与应用 | |
| Sikka et al. | Modern developments in burn wound dressing | |
| JP2009269904A (ja) | 外傷、褥瘡の治療用漢方薬組成物及びその製剤の製造方法 | |
| TWI825362B (zh) | 乳酸菌醱酵產物用於製備促進皮膚創傷癒合之外用組成物的用途 | |
| CN105664226A (zh) | 一种医用复合敷料及其制备方法 | |
| US20080102106A1 (en) | Wound Healing Composition Comprising Substances From Diptera Larvae | |
| CN101797376A (zh) | 改性胶原蛋白膜的制备方法 | |
| CN109432483B (zh) | 一种加速创面愈合的医用敷料及其制备方法和应用 | |
| EP0034504B1 (en) | Combinations for the treatment of wounds | |
| CN101288669A (zh) | 一种外用治疗压疮的药粉剂 | |
| SEID et al. | A review on equine wound management and healing process | |
| Furtado et al. | Wound healing concepts: contemporary practices and future perspectives | |
| Arbab et al. | Latest advance anti-inflammatory hydrogel wound dressings and traditional Lignosus rhinoceros used for wound healing agents | |
| CN107468715A (zh) | 蜡状芽孢杆菌cgmcc0601发酵液在制备治疗糖尿病创伤伤口药物中的应用 | |
| CN107583101A (zh) | 一种促进伤口愈合的生物膜制剂及其制备方法 | |
| Turriziani et al. | Dressing: Indications on Applications | |
| CN112245653B (zh) | 一种基于三种生物活性支架材料协同细胞营养因子助于伤口愈合的蛋白膜敷料 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |