CN103869033A - 一种液相色谱法分离测定盐酸莫西沙星及其杂质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属分析化学领域，具体涉及采用反相色谱柱分离测定盐酸莫西沙星及其杂质的方法，本发明解决了盐酸莫西沙星及其8个杂质分离测定问题，从而保证了生产过程中盐酸莫西沙星及其制剂的质量可控。
Description
技术领域
本发明属分析化学领域，具体涉及分离测定盐酸莫西沙星及其杂质的方法。
背景技术
盐酸莫西沙星为8-甲氧基氟喹诺酮类抗菌药物，分子式为C21H25ClFN3O4，其化学名为：1-环丙基-7-{（S，S）-2，8-重氮-二环[4.3.0]壬-8-基}-6-氟-8-甲氧-1，4-二氢-4-氧-3-喹啉羧酸盐酸盐，结构式如下：
盐酸莫西沙星由德国拜耳公司开发，1999年9月在德国首次上次，同年12月在美国上市。莫西沙星对革兰阳性菌，革兰阴性菌，厌氧菌，抗酸菌，和非典型微生物如支原体，衣原体和军团菌有广谱抗菌活性。
盐酸莫西沙星产品根据合成路线有可能存在以下的杂质A、B、C、D、E、F、a、b，这些杂质结构式分别如下所示：
英国药典2009版收载的盐酸莫西沙星质量标准中需对过个有关物质逐一进行控制，分析方法采用HPLC法，但参照其标准采用苯基键合硅胶柱进行测定，在分离峰定位对照品中的5个杂质时分离度不是特别好，而且杂质a和杂质b在该洗脱时间内未能洗脱出峰，该药典提供的方法如下：色谱条件与系统适用性试验：甲醇-（0.5g/L的四丁基硫酸氢铵溶液，1.0g/L磷酸二氢钾溶液和3.4g/L磷酸溶液）（72:28）为流动相，检测波长为293nm，柱温为45℃，流速为1.3ml/min；结果：在此条件下，杂质B、C无法分离，杂质a、杂质b在此流动相条件下，无法从色谱柱中洗脱。
《中国药科大学学报》【2012，43（1）:46-50】公开了一种使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的HPLC分析方法，该方法同样存在上述问题。
对于盐酸莫西沙星的上述8个杂质，在生产盐酸莫西沙星过程中需要进行质量控制。因此，实现盐酸莫西沙星与其杂质的分离测定对于盐酸莫西沙星质量控制方面具有现实意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种以反相色谱柱分离测定盐酸莫西沙星及其8个杂质的高效液相色谱方法，从而实现盐酸莫西沙星与其杂质的分离测定。
本发明提供的液相色谱法分离测定莫西沙星及其杂质的方法，其特征在于：以苯基键合硅胶为填料的色谱柱，以甲醇-缓冲溶液为流动相，采用梯度洗脱，其中甲醇-缓冲溶液起始体积比为30：70～10：90，优选为22：78，所述的缓冲溶液含有以下缓冲盐的组合：四丁基季铵盐、四丁基磷酸盐或四丁基硫酸盐与磷酸盐、磷酸的组合。
所述的缓冲溶液优选由四丁基硫酸氢铵、磷酸二氢钾和磷酸所制成，优选含有的缓冲盐的浓度为四丁基硫酸氢铵0.5g/L、磷酸二氢钾1.0g/L以及磷酸3.4g/L。
所述的梯度洗脱优选为：
所述的方法，优选在于包括以下步骤：
1）取盐酸莫西沙星或含盐酸莫西沙星的制剂适量，用每1000ml中含四丁基硫酸氢铵0.5g、磷酸二氢钾1.0g、磷酸2ml和无水亚硫酸钠0.05g的水溶液，溶解样品，并配制成每1ml中含盐酸莫西沙星0.2～5mg的样品溶液；
2）设置流动相流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为210～350nm，色谱柱柱温箱温度为20～50℃，优选流动相的流速为1.0ml/min，色谱柱柱温箱温度为45℃，检测波长为293nm；
3）取1）的样品溶液2～50μl，注入高效液相色谱仪，进行梯度洗脱，完成莫西沙星及其杂质的分离测定。
所述的方法，色谱柱优选为选自牌号为Agilent Eclipse XDB-phenyl（优选.6mm×250mm，5μm）色谱柱。
该方法中，通过在样品溶液中含有无水亚硫酸钠，可以确保盐酸莫西沙星在水溶液中的稳定性。
本发明所述的分离测定方法，可按以下方法实现：
1）取盐酸莫西沙星或含盐酸莫西沙星的制剂适量，用每1000ml中含0.5g四丁基硫酸氢铵、1.0g磷酸二氢钾、2ml磷酸和0.05g无水亚硫酸钠的水溶液，溶解样品，并配制成每1ml中含盐酸莫西沙星0.2～5mg的样品溶液；
2）设置流动相的流速为0.5～1.5ml/min，流动相的流速优选为1.0ml/min；检测波长为200～350nm，最佳检测波长为293nm；色谱柱柱温箱温度为20～50℃，最佳柱温为45℃；
3)取1）的样品溶液2～50μl，注入高效液相色谱仪，完成莫西沙星性与其杂质的分离测定。
其中：
高效液相色谱仪：戴安U3000型高效液相色谱仪
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-phenyl
柱温：45℃
流动相：
流量：1.0ml/min
检测波长：293nm
进样体积：10μl
本发明采用Agilent Eclipse XDB-phenyl色谱柱，能够有效分离测定莫西沙星与其8个杂质；选用1000ml中含0.5g四丁基硫酸氢铵、1.0g磷酸二氢钾、2ml磷酸和0.05g无水亚硫酸钠的水溶液溶解样品，确保了溶液的稳定性；选用进样体积为10μl，柱温为45℃，提高了色谱峰的对称性。本发明解决了分离测定莫西沙星与其杂质的测定问题，从而保证了盐酸莫西沙星及其制剂的质量可控。经反复试验发现，用Agilent Eclipse XDB-phenyl（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，以甲醇、缓冲液为流动相，在起始比例为甲醇-缓冲液（22：78）条件下，采用梯度洗脱。可以将莫西沙星与其杂质有效分离，从而可以准确控制盐酸莫西沙星的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分离、检测出盐酸莫西沙星及其杂质。附图
图1：盐酸莫西沙星、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质b及杂质a的液相分离色谱图。
具体实施方式
实施例1
仪器与条件
戴安U3000型高效液相色谱系统及工作站；自动进样；以Agilent Eclipse XDB-phenyl色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）为分离柱；紫外检测波长：293nm；流动相：甲醇-缓冲溶液（含0.5g/L四丁基硫酸氢铵、1.0g/L磷酸二氢钾和3.4g/L磷酸水溶液）起始体积比为（22：78），采用梯度洗脱；柱温45℃；进样体积为10μl，流速为1.0ml/min。
实验步骤
取盐酸莫西沙星及其杂质（杂质A、B、C、D、E、F、a、b）各适量，用1000ml中含0.5g四丁基硫酸氢铵、1.0g磷酸二氢钾、2ml磷酸和0.05g无水亚硫酸钠的水溶液溶解并稀释制成每1ml中约含盐酸莫西沙星1.0mg和各杂质约含10μg的溶液，作为系统适用性试验溶液。
再取盐酸莫西沙星原料药适量（含盐酸莫西沙星50mg，南京长澳医药科技有限公司生产，批号111101），置50ml量瓶中，加1000ml中含0.5g四丁基硫酸氢铵、1.0g磷酸二氢钾、2ml磷酸和0.05g无水亚硫酸钠的水溶液适量，振摇使主药溶解，并用此溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密量取供试品溶液适量，加此溶液并稀释制成每1ml中约含1μg的溶液，作为对照溶液。
梯度洗脱表如下：
精密量取系统适用性试验溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品主峰与杂质F、杂质A的分离度应符合规定，理论板数按莫西沙星峰计算应不低于1000。取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10％～25％；再分别精密量取供试品溶液及对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按自身对照法以峰面积计算盐酸莫西沙星的含量，应不得过0.1％。杂质F、莫西沙星、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质b、杂质a的色谱峰依次试验出峰顺序结果见图1。
实施例2
检测条件：紫外检测波长：250nm；流动相：甲醇-缓冲溶液（含0.5g/L四丁基硫酸氢铵、1.0g/L磷酸二氢钾和3.4g/L磷酸水溶液）起始体积比为（30：70）；柱温30℃；进样体积为10μl，流速为0.8ml/min。
梯度洗脱表：
检测仪器及其他试验测定方法同实施例1。
Claims (10)
1.一种液相色谱法分离测定莫西沙星及其杂质的方法，其特征在于：以苯基键合硅胶为填料的色谱柱，以甲醇-缓冲溶液为流动相，采用梯度洗脱，其中甲醇-缓冲溶液起始体积比为30：70～10：90，缓冲溶液含有四丁基季铵盐、四丁基磷酸盐或四丁基硫酸盐与磷酸盐、磷酸的组合。
2.权利要求1所述的方法，所述的缓冲溶液由四丁基硫酸氢铵、磷酸二氢钾和磷酸所制成。
3.权利要求2所述的方法，所述的缓冲溶液含有的缓冲盐的浓度为四丁基硫酸氢铵0.5g/L、磷酸二氢钾1.0g/L以及磷酸3.4g/L。
4.权利要求3所述的方法，所述的甲醇-缓冲液溶液起始体积比为22：78。
5.权利要求4所述的方法，所述的梯度洗脱为：
6.权利要求5所述的方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取盐酸莫西沙星或含盐酸莫西沙星的制剂适量，用每1000ml中含四丁基硫酸氢铵0.5g、磷酸二氢钾1.0g、磷酸2ml和无水亚硫酸钠0.05g的水溶液，溶解样品，并配制成每1ml中含盐酸莫西沙星0.2～5mg的样品溶液；
2）设置流动相流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为210～350nm，色谱柱柱温箱温度为20～50℃；
3）取1）的样品溶液2～50μl，注入高效液相色谱仪，进行梯度洗脱，完成莫西沙星及其杂质的分离测定。
7.根据权利要求6所述的分离测定方法，步骤2）所说的流动相的流速为1.0ml/min。
8.根据权利要求6所述的分离测定方法，步骤2）所说的色谱柱柱温箱温度为45℃。
9.根据权利要求6所述的分离测定方法，步骤2）所说的检测波长为293nm。
10.根据权利要求1-9所述的方法，色谱柱选自牌号为Agilent Eclipse XDB-phenyl的色谱柱。
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