CN103764905A

CN103764905A - 改进纸张材料的特性

Info

Publication number: CN103764905A
Application number: CN201280042787.7A
Authority: CN
Inventors: P.卡斯兰; H.许; H.伦德
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 2011-09-09
Filing date: 2012-09-10
Publication date: 2014-04-30
Also published as: EP2753749A2; PL2753749T3; WO2013036898A3; EP2753749B1; WO2013036898A2; ZA201402519B; CL2014000540A1; BR112014005290A2; BR112014005290B1; US9284687B2; CA2847879C; US20140262093A1; CA2847879A1

Abstract

GH61多肽的用途，用于处理纸浆、用于改进相应的纸张材料的撕裂强度和/或拉伸强度，这些相应的纸张材料如纸张、箱纸板、波纹纸板、棉纸、纸巾、波纹容器和盒。

Description

改进纸张材料的特性

序列表的参考

本申请包含一个呈计算机可读形式的序列表，所述序列表通过引用结合在此。

发明背景

发明领域

本发明涉及通过用糖苷水解酶家族61多肽处理来改进纸张材料的纸张强度。

相关技术说明

公认在纸张材料的制造中使用酶。用于这一目的的酶的实例是蛋白酶、脂肪酶、木聚糖酶、淀粉酶、纤维素酶以及不同的氧化酶（如漆酶和过氧化酶）。

这些酶的作用是广泛的，例如控制不同的沉积物（如沥青）、强度改进、脱墨、棉纸软化、漂白等。

发明概述

诸位发明人出人意料地发现，纸张材料的纸张强度可以通过在用于制造一种纸张材料的工艺期间使纸浆与一种糖苷水解酶家族61（GH61）多肽接触来改进。

发明详细说明

纸张和纸浆

术语“纸张材料”是指可以由纸浆制造的产品，如纸张、箱纸板、波纹纸板、棉纸、纸巾、包装材料、波纹容器或盒。

术语“纸浆”意指可以用于制造一种纸张材料的任何纸浆。举例来说，纸浆可以按一种原始纸浆形式供应，或可以衍生自一种再循环的来源。纸浆可以是一种木浆、一种非木浆或一种由废纸制成的纸浆。一种木浆可以由软木（如松树、红木、冷杉、云杉、雪松以及铁杉）或硬木（如枫树、桤木、桦树、山核桃木、山毛榉、白杨、相思树以及桉树）制成。一种非木浆可以由例如亚麻、大麻、甘蔗渣、竹子、棉或洋麻制造。一种废纸纸浆可以通过对废纸（如报纸、混合办公废纸、计算机印出、白色帐簿纸、杂志、牛奶纸箱、纸杯等）进行再制浆来制造。

在一个具体实施例中，待处理的纸浆包括硬木纸浆和软木纸浆两者。

待处理的木浆可以是机械纸浆（如磨木浆，GP）、化学纸浆（如牛皮纸浆或亚硫酸盐纸浆）、半化学纸浆（SCP）、热磨机械浆（TMP）、化学热磨机械浆（CTMP）或漂白化学热磨机械浆（BCTMP）。

机械纸浆通过研磨和精制方法来制造，其中原料经受周期性压力脉冲。TMP是热磨机械浆，GW是磨木浆，PGW是加压磨木浆，RMP是精制机械纸浆，PRMP是加压精制机械纸浆，并且CTMP是化学热磨机械浆。

化学纸浆通过碱法蒸煮，由此去除大部分木质素和半纤维素组分来制造。在牛皮纸制浆或硫酸盐蒸煮中，硫化钠或氢氧化钠用作主要蒸煮化学品。

待处理的牛皮纸浆可以是一种漂白牛皮纸浆，它可以由软木漂白牛皮纸（SWBK，也称为NBKP（针叶树漂白牛皮纸浆））、硬木漂白牛皮纸（HWBK，也称为LBKP（阔叶树漂白牛皮纸浆））或其混合物组成。

待用于本发明的工艺中的纸浆是机械或化学纸浆或其组合的悬浮液。举例来说，待用于本发明的工艺中的纸浆可以包括0%、10%-20%、20%-30%、30%-40%、40%-50%、50%-60%、60%-70%、70%-80%、80%-90%或90%-100%的化学纸浆。在一个具体实施例中，一种化学纸浆形成用于制造纸张材料的纸浆的一部分。在本文中，表述“形成……的一部分”意指在待用于本发明的工艺中的纸浆中，化学纸浆的百分比处于1%-99%的范围内。在具体实施例中，化学纸浆的百分比处于2%-98%、3%-97%、4-%96%、5%-95%、6%-94%、7%-93%、8%-92%、9%-91%、10%-90%、15%-85%、20%-80%、25%-75%、30%-70%、40%-60%或45%-55%的范围内。

在本发明的用途和工艺的一个具体实施例中，化学纸浆是一种牛皮纸浆、一种亚硫酸盐纸浆、一种半化学纸浆（SCP）、一种热磨机械浆（TMP）、一种化学热磨机械浆（CTMP）、一种漂白化学热磨机械浆（BCTMP）。在具体实施例中，牛皮纸浆是漂白牛皮纸浆，例如软木漂白牛皮纸（SWBK，也称为NBKP（针叶树漂白牛皮纸浆））、硬木漂白牛皮纸（HWBK，也称为LBKP（阔叶树漂白牛皮纸浆））或其混合物。

纸张强度

如本发明的方法、组合物以及用途中所定义的纸张强度通过由纸浆与造纸工业技术协会（Technical Association of the Pulp and Paper Industry，TAPPI）公开的标准来测量。

拉伸强度是一张纸当在相对端被牵拉时有多大可能性要断裂的一种量度。当运行通过高速卷筒纸印刷机时，这是非常重要的。拉伸强度可以由应力-应变图描述，并且通过TAPPI测试T-404和T-494测量。应力-应变曲线提供了纸张当经受拉伸应力时的机械特性的一种基础工程说明。TAPPI方法T-404使用一种摆锤型测试仪测量纸张和纸板的拉伸断裂强度和伸长率，并且T-494使用恒定伸长装置速率测量纸张和纸板的拉伸断裂特性。

拉伸指数是推荐的用于比较具有不同克重的纸张的拉伸强度的量度。拉伸指数通过将以牛顿/米（N/m）为单位测量的拉伸强度除以纸张的以克/平方米（g/m²）为单位的克重而获得。

破裂强度可能是最常测量的纸张强度特性。该测试明显起源于造纸者的旧日实践，该造纸者在对纸张强度进行一种人工质量控制评估时，将尝试将其拇指推动通过单张纸。TAPPI方法T-403是用于测量具有至多0.6mm的厚度的纸张的破裂强度的官方测试。它通常也称为缪纶测试（Mullen test）。类似TAPPI测试已经被用于测量较重纸板和波纹纤维板的破裂强度。

破裂指数是推荐的用于比较具有不同克重的纸张的破裂强度的量度。破裂指数通过将以千帕斯卡（kPa）为单位测量的破裂强度除以纸张的以克/平方米（g/m²）为单位的克重而获得。

撕裂强度是一张纸有多大可能性在一经开始后将继续撕裂的一种量度。最常用的撕裂测试T-414，通常也称为埃尔门多夫撕裂测试（Elmendorf teartest），测量纸张的内部撕裂抗性而非纸张的边缘撕裂强度，该边缘撕裂强度在T-470中进行描述。内部撕裂抗性是在已经开始撕裂之后撕裂单个单张纸经过一个规定距离所需的垂直于纸张平面的力的一种量度。

撕裂指数是推荐的用于比较具有不同克重的纸张的撕裂的量度。撕裂指数通过将以毫牛顿（mN）为单位测量的撕裂抗性除以纸张的以克/平方米（g/m²）为单位的克重而获得。

GH61多肽

术语“GH61多肽”意指根据亨利萨塔（Henrissat），1991，糖基水解酶基于氨基酸序列相似性的分类（A classification of glycosyl hydrolases based onamino-acid sequence similarities），《生物化学杂志》（Biochem.J.）280:309-316；和亨利萨塔和巴洛赫（Bairoch），1996，糖基水解酶的基于序列的分类的更新（Updating the sequence-based classification of glycosyl hydrolases），《生物化学杂志》316:695-696属于糖苷水解酶家族61中的一种多肽。

在本发明的组合物和方法中，可以使用任何GH61多肽。

在一个第一方面，该GH61多肽包含以下基序：

[ILMV]-P-x(4,5)-G-x-Y-[ILMV]-x-R-x-[EQ]-x(4)-[HNQ]和[FW]-[TF]-K-[AIV]，其中x是任何氨基酸，x(4,5)是任何四个或五个连续氨基酸，并且x(4)是任何四个连续氨基酸。

包含以上提到的基序的该GH61多肽可以进一步包含：

H-x(1,2)-G-P-x(3)-[YW]-[AILMV]，

[EQ]-x-Y-x(2)-C-x-[EHQN]-[FILV]-x-[ILV]，或

H-x(1,2)-G-P-x(3)-[YW]-[AILMV]和[EQ]-x-Y-x(2)-C-x-[EHQN]-[FILV]-x-[ILV]，

其中x是任何氨基酸，x(1,2)是任何一个或两个连续氨基酸，x(3)是任何三个连续氨基酸，并且x(2)是任何两个连续氨基酸。

在一个优选方面，该GH61多肽进一步包含H-x(1,2)-G-P-x(3)-[YW]-[AILMV]。在另一个优选方面，该GH61多肽进一步包含[EQ]-x-Y-x(2)-C-x-[EHQN]-[FILV]-x-[ILV]。在另一个优选方面，该GH61多肽进一步包含H-x(1,2)-G-P-x(3)-[YW]-[AILMV]和[EQ]-x-Y-x(2)-C-x-[EHQN]-[FILV]-x-[ILV]。

在一个第二方面，该GH61多肽包含以下基序：

[ILMV]-P-x(4,5)-G-x-Y-[ILMV]-x-R-x-[EQ]-x(3)-A-[HNQ]，

其中x是任何氨基酸，x(4,5)是任何4个或5个连续氨基酸，并且x(3)是任何3个连续氨基酸。在以上基序中，采用可接受的IUPAC单一字母氨基酸缩写。

在一个第三方面，该GH61多肽包含一种氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:1（太瑞斯梭孢壳霉（Thielavia terrestris））、SEQ ID NO:2（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:3（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:4（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:5（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:6（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:7（金黄色嗜热子囊菌（Thermoascus aurantiacus））、SEQID NO:8（里氏木霉（Trichoderma reesei））、SEQ ID NO:9（嗜热毁丝霉（Myceliophthora thermophila））、SEQ ID NO:10（嗜热毁丝霉）、SEQ ID NO:11（嗜热毁丝霉）、SEQ ID NO:12（嗜热毁丝霉）、SEQ ID NO:13（嗜热毁丝霉）、SEQ ID NO:14（金黄色嗜热子囊菌）、SEQ ID NO:15（烟曲霉（Aspergillus fumigatus））、SEQ ID NO:16（嗜松青霉（Penicilliumpinophilum））、SEQ ID NO:17（嗜热子囊菌属（Thermoascus sp.））、SEQ IDNO:18（青霉属（Penicillium sp.））、SEQ ID NO:19（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQID NO:20（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:21（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ IDNO:22（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:23（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:24（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:25（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:26（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:27（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:28（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:29（太瑞斯梭孢壳霉）、SEQ ID NO:30（甲壳嗜热子囊菌（Thermoascus crustaceus））、SEQ ID NO:31（甲壳嗜热子囊菌）、SEQ ID NO:32（甲壳嗜热子囊菌）或SEQ ID NO:33（柄篮状菌（Talaromycesstipitatus））的成熟多肽具有至少50%、例如至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%或至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或至少100%的一致性程度。

在一个第六方面，该GH61多肽是包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33或一种其同源序列的成熟多肽的一个或多个（或若干）氨基酸的取代、缺失和/或插入的一种人工变异体。

优选地，氨基酸变化是一种次要性质的变化，即并不显著影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地具有一个到约30个氨基酸的小缺失；小氨基-或羧基-末端延伸，如一种氨基-末端蛋氨酸残基；具有至多约20-25个残基的一种小连接肽；或通过改变净电荷促进纯化或另一种功能的一种小延伸，如一种聚组氨酸段、一种抗原表位或一种结合域。

保守取代的实例在以下群组内进行：碱性氨基酸（精氨酸、赖氨酸以及组氨酸）、酸性氨基酸（谷氨酸和天冬氨酸）、极性氨基酸（谷氨酰胺和天冬酰胺）、疏水性氨基酸（亮氨酸、异亮氨酸以及缬氨酸）、芳香族氨基酸（苯丙氨酸、色氨酸以及酪氨酸）以及小氨基酸（甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸以及蛋氨酸）。通常不改变比活性的氨基酸取代在本领域中已知，并且例如由H.诺伊拉特（H.Neurath）和R.L.希尔（R.L.Hill），1979，《蛋白质》（The Proteins），学术出版社（Academic Press），纽约（New York）描述。最常发生的交换是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu以及Asp/Gly。

可替代地，氨基酸变化是这样一种性质的变化，多肽的物理-化学特性被改变。举例来说，氨基酸变化可以改进多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变pH最佳值等。

一种母体多肽中的必需氨基酸可以根据本领域中已知的程序来识别，所述程序如定点突变诱发或丙氨酸扫描突变诱发（坎宁安（Cunningham）和韦尔斯（Wells），1989，《科学》（Science）244:1081-1085）。在后一种技术中，在分子中的每个残基处引入单一丙氨酸突变，并且测试所得突变分子的纤维素分解增强活性以识别对分子的活性关键的氨基酸残基。也参看希尔顿（Hilton）等人，1996，《生物化学杂志》（J.Biol.Chem.）271:4699-4708。酶活性位点或其他生物相互作用还可以通过物理结构分析结合推定的接触位点氨基酸的突变来测定，该物理结构分析如通过如核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和性的技术测定。参看例如德沃斯（de Vos）等人，1992，《科学》255:306-312；史密斯（Smith）等人，1992，《分子生物学杂志》（J.Mol.Biol.）224:899-904；沃尔达韦尔（Wlodaver）等人，1992，《欧洲生物化学学会联盟通讯》（FEBS Lett.）309:59-64。还可以从与母体多肽相关的多肽的一致性分析推断必需氨基酸的一致性。

单个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入可以使用已知的突变诱发、重组和/或改组之后加一种相关筛选程序来制造和测试，该相关筛选程序如由雷达尔-奥尔森（Reidhaar-Olson）和索尔（Sauer），1988，《科学》241:53-57；鲍威（Bowie）和索尔，1989，《美国国家科学院院刊》（Proc.Natl.Acad.Sci.USA）86:2152-2156；WO95/17413；或WO95/22625披露的程序。可以使用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示（例如洛曼（Lowman）等人，1991，《生物化学》（Biochemistry）30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO92/06204）以及区域定向突变诱发（德贝夏（Derbyshire）等人，1986，《基因》（Gene）46:145；内尔（Ner）等人，1988，《DNA》7:127）。

突变诱发/改组方法可以与高通量自动筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的经诱变处理的多肽的活性（内斯（Ness）等人，1999，《自然-生物技术》（Nature Biotechnology）17:893-896）。编码活性多肽的经诱变处理的DNA分子可以从宿主细胞回收并且使用本领域中的标准方法进行快速测序。这些方法允许快速确定一种多肽中单独的氨基酸残基的重要性。

SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33的成熟GH61多肽的氨基酸取代、缺失和/或插入的总数不超过4个，例如是1个、2个、3个或4个。

在一个方面，该GH61多肽在一种如WO2008/151043中所述的可溶活化二价金属阳离子（例如硫酸锰）存在下使用。

在一个方面，该GH61多肽在一种二氧基化合物、一种双环化合物、一种杂环化合物、一种含氮化合物或一种含硫化合物存在下使用。

二氧基化合物可以包括包含两个或更多个氧原子的任何适合化合物。在一些方面，二氧基化合物包含一个如在此所述的被取代的芳基部分。二氧基化合物可以包括一个或多个（若干）羟基和/或羟基衍生物，而且包括缺乏羟基和羟基衍生物的被取代的芳基部分。二氧基化合物的非限制性实例包括邻苯二酚或儿茶酚；咖啡酸；3,4-二羟基苯甲酸；4-叔丁基-5-甲氧基-1,2-苯二醇；连苯三酚；没食子酸；3,4,5-三羟基苯甲酸甲酯；2,3,4-三羟基二苯甲酮；2,6-二甲氧基苯酚；芥子酸；3,5-二羟基苯甲酸；4-氯-1,2-苯二醇；4-硝基-1,2-苯二醇；丹宁酸；没食子酸乙酯；羟乙酸甲酯；二羟基富马酸；2-丁炔-1,4-二醇；克酮酸；1,3-丙二醇；酒石酸；2,4-戊二醇；3-乙氧基-1,2-丙二醇；2,4,4'-三羟基二苯甲酮；顺-2-丁烯-1,4-二醇；3,4-二羟基-3-环丁烯-1,2-二酮；二羟基丙酮；丙烯醛缩醛；4-羟基苯甲酸甲酯；4-羟基苯甲酸；以及3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸甲酯；或其盐或溶剂化物。

双环化合物可以包含如在此所述的任何适合被取代的稠合环系统。化合物可以包含一个或多个（若干）另外的环，并且除非另有说明，否则不限于具体数目的环。在一个方面，双环化合物是一种类黄酮。在另一个方面，双环化合物是一种任选地被取代的异黄酮。在另一个方面，双环化合物是一种任选地被取代的花色羊离子，如一种任选地被取代的花色素或任选地被取代的花色素苷，或其衍生物。双环化合物的非限制性实例包括表儿茶素；槲皮酮；杨梅黄酮；紫杉叶素；堪非醇；桑色素；刺槐素；柚皮素；异鼠李素；芹黄素；矢车菊素；矢车菊素苷；黑豆多酚；花青素鼠李葡糖苷；或其盐或溶剂化物。

杂环化合物可以是如在此所述的任何适合化合物，如包含一个杂原子的一种任选地被取代的芳香族或非芳香族环。在一个方面，杂环是包含一个任选地被取代的杂环烷基部分或一个任选地被取代的杂芳基部分的一种化合物。在另一个方面，任选地被取代的杂环烷基部分或任选地被取代的杂芳基部分是一个任选地被取代的5元杂环烷基或一个任选地被取代的5元杂芳基部分。在另一个方面，任选地被取代的杂环烷基或任选地被取代的杂芳基部分是一个选自以下的任选地被取代的部分：吡唑基、呋喃基、咪唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡咯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、噻唑基、三唑基、噻吩基、二氢噻吩并吡唑基、硫茚基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、异喹啉基、异吲哚基、吖啶基、苯并异唑基、二甲基乙内酰脲、吡嗪基、四氢呋喃基、吡咯啉基、吡咯烷基、吗啉基、吲哚基、二氮呯基、氮呯基、噻呯基、哌啶基以及氧呯基。在另一个方面，任选地被取代的杂环烷基部分或任选地被取代的杂芳基部分是一个任选地被取代的呋喃基。杂环化合物的非限制性实例包括(1,2-二羟基乙基)-3,4-二羟基呋喃-2(5H)-酮；4-羟基-5-甲基-3-呋喃酮；5-羟基-2(5H)-呋喃酮；[1,2-二羟基乙基]呋喃-2,3,4(5H)-三酮；α-羟基-γ-丁内酯；核糖酸γ-内酯；己糖醛酸（aldohexuronicaldohexuronic acid）γ-内酯；葡萄糖酸δ-内酯；4-羟基香豆素；二氢苯并呋喃；5-(羟基甲基)糠醛；联糠醛；2(5H)-呋喃酮；5,6-二氢-2H-吡喃-2-酮；以及5,6-二氢-4-羟基-6-甲基-2H-吡喃-2-酮；或其盐或溶剂化物。

含氮化合物可以是具有一个或多个氮原子的任何适合化合物。在一个方面，含氮化合物包含一个胺、亚胺、羟胺或氮氧化物部分。含氮化合物的非限制性实例包括丙酮肟；紫尿酸；吡啶-2-醛肟；2-氨基苯酚；1,2-苯二胺；2,2,6,6-四甲基-1-哌啶基氧基；5,6,7,8-四氢生物蝶呤；6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢蝶呤；以及顺丁烯酰胺酸；或其盐或溶剂化物。

醌化合物可以是包含一个如在此所述的醌部分的任何适合化合物。醌化合物的非限制性实例包括1,4-苯醌；1,4-萘醌；2-羟基-1,4-萘醌；2,3-二甲氧基-5-甲基-1,4-苯醌或辅酶Q₀；2,3,5,6-四甲基-1,4-苯醌或杜醌；1,4-二羟基蒽醌；3-羟基-1-甲基-5,6-吲哚啉二酮或肾上腺素红；4-叔丁基-5-甲氧基-1,2-苯醌；吡咯并喹啉醌；或其盐或溶剂化物。

含硫化合物可以是包括一个或多个硫原子的任何适合化合物。在一个方面，含硫化合物包含一个选自以下的部分：亚硫酰基、硫醚、亚磺酰基、磺酰基、硫酰胺、磺酰胺、磺酸以及磺酸酯。含硫化合物的非限制性实例包括乙硫醇；2-丙硫醇；2-丙烯-1-硫醇；2-巯基乙磺酸；苯硫酚；苯-1,2-二硫醇；半胱氨酸；蛋氨酸；谷胱甘肽；胱氨酸；或其盐或溶剂化物。

在一个实施例中，该GH61多肽以2-1000微克/g干燥固体（DS）、例如5-100、10-40或20-40微克/g DS的量存在。

组合物、方法以及用途

在一个第一方面，本发明提供了一种用于改进由纸浆制成的纸张材料的纸张强度的方法，包括在一种用于制造一种纸张材料的工艺中使该纸浆与一种GH61多肽接触。纸张强度可以被定义为拉伸强度、撕裂强度或破裂强度。

本发明的方法赋予纸张材料的经改进的特性。纸张材料的经改进的特性与在不使该纸浆与一种GH61多肽接触的情况下制造的一种纸张材料相比得到改进。

在一个实施例中，该GH61多肽的氨基酸序列包含以下一种或多种基序：

[ILMV]-P-x(4,5)-G-x-Y-[ILMV]-x-R-x-[EQ]-x(4)-[HNQ]和/或

[FW]-[TF]-K-[AIV]和/或

H-x(1,2)-G-P-x(3)-[YW]-[AILMV]和/或

[EQ]-x-Y-x(2)-C-x-[EHQN]-[FILV]-x-[ILV]。

在另一个实施例中，该GH61多肽的氨基酸序列包括一种氨基酸序列或由其组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少50%一致性；与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7或SEQID NO:33的成熟多肽具有优选地至少55%一致性、更优选地至少60%一致性、更优选地至少65%一致性、更优选地至少70%一致性、更优选地至少75%一致性、更优选地至少80%一致性、更优选地至少85%一致性、更优选地至少90%一致性并且最优选地至少95%一致性。

在另一个实施例中，该GH61多肽的氨基酸序列包括一种氨基酸序列或由其组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:33的成熟多肽相比具有至多10个、至多9个、至多8个、至多7个、至多6个、至多5个、至多4个、至多3个、至多2个或至多1个取代。

在另一个实施例中，该GH61多肽的氨基酸序列包括以下或由以下组成：SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:33的成熟多肽。

在另一个实施例中，该GH61多肽的氨基酸序列包括以下或由以下组成：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32或SEQ IDNO:33或一种其同源序列的成熟多肽。

在另一个实施例中，该GH61多肽在硫酸锰（或锰离子）、硫酸铜（或铜离子）和/或抗坏血酸存在下使用。上文提及可以与该GH61多肽一起使用的其他适合化合物，如连苯三酚（1,2,3-三羟基苯）。

在另一个实施例中，纸张材料是纸张、箱纸板、波纹纸板、棉纸、纸巾、包装材料或波纹容器或盒。

在另一个实施例中，纸浆是一种化学纸浆。优选地，纸浆是牛皮纸浆或亚硫酸盐纸浆。纸浆可以是一种木浆，如一种硬木纸浆，例如桉树纸浆；或软木纸浆，例如松树纸浆。

本发明还提供了一种由纸浆制成的纸张材料，其中该纸浆已经经受本发明的方法。

在一个第二方面，本发明提供了一种用于制造纸张材料的组合物，包含一种纸浆和一种GH61多肽。该纸浆和该GH61多肽是如本发明的方法中所述的相同组分。

[ILMV]-P-x(4,5)-G-x-Y-[ILMV]-x-R-x-[EQ]-x(4)-[HNQ]和/或

[FW]-[TF]-K-[AIV]和/或

H-x(1,2)-G-P-x(3)-[YW]-[AILMV]和/或

[EQ]-x-Y-x(2)-C-x-[EHQN]-[FILV]-x-[ILV]。

在另一个实施例中，该组合物包括硫酸锰、硫酸铜和/或抗坏血酸。上文提及可以包含在该组合物中并且与该GH61多肽一起使用的其他适合化合物，如连苯三酚（1,2,3-三羟基苯）。

在另一个实施例中，该组合物是一种具有约4到约8的一个pH值的水性组合物，优选地该组合物具有约5到约7的一个pH值。

第二方面的组合物可以用于制造与由该组合物在没有GH61多肽的情况下制成的一种纸张材料相比具有改进的拉伸强度、撕裂强度或破裂强度的一种纸张材料。

工艺条件

本发明的工艺特别适用于改进由纸浆制成的纸张材料的纸张强度。

在纸张和纸浆加工的情况下根据本发明的工艺可以在任何纸浆制造阶段进行。该GH61多肽可以被添加到任何储料槽中，例如到一种纸浆储存容器（储存柜）、储存塔、混合柜或计量柜。GH61多肽处理可以在纸浆漂白之前、结合纸浆漂白工艺或在漂白之后执行。当结合纸浆漂白进行时，该GH61多肽制剂可以与漂白化学品（如氯或二氧化氯）一起添加。应用氧气、过氧化氢或臭氧或其组合也可以实施纸浆漂白。该GH61多肽制剂还可以与这些物质一起添加。优选地，该GH61多肽制剂在漂白之前进行添加。该GH61多肽还可以被添加到源自漂白的循环工艺用水（白色水）和源自机械或化学机械制浆工艺的工艺用水（褐色水）中。在一种牛皮纸制浆工艺的一个具体实施例中，该GH61多肽在褐色纸料洗涤期间进行添加。

在本文中，术语“工艺用水”除其他之外包括1)作为一种原料被添加到造纸工艺中的水；2)由用于制造纸张材料的工艺的任何步骤产生的中间水产物；以及3)作为工艺的一种排出物或副产物的废水。在一个具体实施例中，工艺用水被、已经被、正被或预期被循环（再循环），即在工艺的另一个步骤中再使用。术语“水”又意指与常用于造纸工艺中的不同的添加剂和佐剂混杂的任何水性介质、溶液、悬浮液（例如普通自来水）以及自来水。在一个具体实施例中，工艺用水具有低含量的固体（干燥）物质，例如少于20%、18%、16%、14%、12%、10%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、20%或少于1%干燥物质。

本发明的工艺可以在纸张和纸浆加工中的常规条件下进行。工艺条件将是所应用的一种或多种多肽、反应时间以及给定条件的一个函数。

本发明的GH61多肽应以一种有效量添加。术语“有效量”意指足以达成所希望的并且预期的作用（如改进纸张强度）的量。

在一个具体实施例中，该GH61多肽和另外的酶（如果存在的话）的用量是从（每种多肽的）约0.1mg酶蛋白质到约100,000mg酶蛋白质/吨纸浆。

在其他具体实施例中，该GH61多肽和另外的酶（如果存在的话）的量在0.00001-20或0.0001-20mg多肽（以纯蛋白质形式计算）/克（干重）纸浆材料范围内，如0.0001-10mg/g、0.0001-1mg/g、0.001-1mg/g、0.001-0.1或0.01-0.1mg多肽/克纸浆材料。再次，这些量是指每种多肽的量。

该GH61多肽处理可以在常规稠度（例如0.5-10%干燥物质）下进行。在具体实施例中，稠度在0.5%-45%、0.5%-40%、0.5-%35%、0.5%-30%、0.5%-25%、0.5%-20%、0.5%-15%、0.5%-10%、0.5%-8%、0.5%-6%或0.5%-5%干燥物质的范围内。

该GH61多肽处理可以在从约10℃到约100℃的一个温度下进行。温度范围（所有“从约”和“到约”）的其他实例是以下：20℃-120℃、30℃-120℃、35℃-120℃、37℃-120℃、40℃-120℃、50℃-120℃、60℃-120℃、70℃-120℃、10℃-100℃、10℃-90℃、10℃-80℃、10℃-70℃、10℃-60℃以及30℃-60℃，以及此处指示的上限和下限值的任何组合。一个典型的温度是从约20℃到90℃或20℃到95℃，优选地从约40℃到70℃或40℃到75℃。通常，该GH61多肽处理在大气压下进行。但当温度超过100℃时，该处理在1-2巴（高于大气压至多1巴）的一个压力下进行。

该GH61多肽处理在从约3到约10的一个pH值下、优选地在从约3.5到约9的一个pH值下、更优选地在从约4到约8的一个pH值下并且最优选地在从约5到约7的一个pH值下进行。

该GH61多肽处理的一个适合持续时间可以在从几秒到几小时的范围内，例如从约30秒到约48小时，或从约1分钟到约24小时，或从约1分钟到约18小时，或从约1分钟到约12小时，或从约1分钟到5小时，或从约1分钟到约2小时，或从约1分钟到约1小时，或从约1分钟到约30分钟。一个典型的反应时间是从约10分钟到3小时、10分钟到10小时，优选地15分钟到1小时、或15分钟到2小时。

如果需要的话，来自大气的分子氧通常将以充足量存在。因此，反应可以便利地在一个开口反应器中、即在大气压下进行。

超出并且高于该GH61多肽和另外的酶（如果存在的话）的不同的添加剂可以用于本发明的工艺或用途中。表面活性剂和/或分散剂通常存在于一种纸浆中，和/或被添加到一种纸浆中。因此，本发明的工艺和用途可以在一种常规地用于一种纸浆中的阴离子型、非离子型、阳离子型和/或两性离子型表面活性剂和/或分散剂存在下进行。阴离子型表面活性剂的实例是烷基、被取代的烷基或芳基的羧酸盐、硫酸盐、磺酸盐或磷酸盐。非离子型表面活性剂的实例是聚氧乙烯化合物，如醇乙氧基化物、丙氧基化物或混合乙氧基化物/丙氧基化物、聚甘油和其他多元醇以及某些嵌段共聚物。阳离子型表面活性剂的实例是水溶性阳离子聚合物，如季铵硫酸盐和某些胺，例如表氯醇/二甲胺聚合物（EPI-DMA）和其交联溶液、聚二烯丙基二甲基氯化铵（DADMAC）、DADMAC/丙烯酰胺共聚物以及紫罗烯聚合物，如美国专利号5,681,862和5,575,993中披露的那些。两性离子型或两性表面活性剂的实例是甜菜碱、甘氨酸盐、氨基丙酸盐、亚氨基丙酸盐以及不同的咪唑啉衍生物。也可以使用美国专利号5,256,252中披露的聚合物。

同样根据本发明，如上述、包括其任何组合的表面活性剂可以与一种如在此定义的GH61多肽一起用于一种造纸工艺中，并且与这种多肽一起包含在一种组合物中。这种组合物中每种表面活性剂的量可以量达从约1到约1000ppm的该组合物。在具体实施例中，每种表面活性剂的量是从约10到约1000ppm，或从约10到约500ppm，或从约50到约500ppm。

在另一个具体实施例中，上述范围中的每一者都是指表面活性剂的总量。

在以上方法和本发明的工艺的其他具体实施例中，该GH61多肽以0.005-50ppm（mg/L）或0.01-40、0.02-30、0.03-25、0.04-20、0.05-15、0.05-10、0.05-5、0.05-1、0.05-0.8、0.05-0.6或0.1-0.5ppm的量使用。GH61多肽的量是指一种定义明确的多肽制剂的mg。

在本发明的工艺中，该GH61多肽可以单独或与一种另外的酶一起应用。术语“一种另外的酶”意指至少一种另外的酶，例如一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或甚至更多种另外的酶。

术语“与……一起应用”（或“与……一起使用”）意指另外的酶可以应用在本发明的工艺的同一个或另一个步骤中。另一工艺步骤在造纸工艺中与使该纸浆与一种GH61多肽接触的步骤相比可以在上游或下游。

在具体实施例中，该另外的酶是具有蛋白酶、脂肪酶、木聚糖酶、角质酶、氧化还原酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、淀粉酶、甘露聚糖酶、固醇酯酶和/或胆固醇酯酶活性的一种酶。氧化还原酶的实例是具有漆酶和/或过氧化酶活性的酶。在一个优选实施例中，该另外的酶是脂肪酶。

术语一种工艺的“一个步骤”意指至少一个步骤，并且它可以是一个、两个、三个、四个、五个或甚至更多个工艺步骤。换句话说，本发明的GH61多肽可以应用于至少一个工艺步骤中，并且一种或多种另外的酶也可以应用于至少一个工艺步骤中，该工艺步骤与使用该GH61多肽的该步骤相比可以是同一个或一个不同的工艺步骤。

术语“多肽制剂”意指一种包含至少一种GH61多肽的产品。该多肽制剂还可以包含具有其他酶活性的酶，优选地是脂解酶。除了该酶活性之外，这种制剂优选地包含至少一种佐剂。用于纸张和纸浆工业的酶制剂中所用的佐剂的实例是缓冲剂、聚合物、表面活性剂以及稳定剂。

另外的酶

具有蛋白酶、脂肪酶、木聚糖酶、角质酶、漆酶、过氧化酶、氧化酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、淀粉酶、甘露聚糖酶、固醇酯酶和/或胆固醇酯酶活性的任何酶都可以用作本发明的用途和工艺中的另外的酶。以下列举此类另外的酶的一些非限制性实例。以大写字母书写的酶是可获自诺维信公司（Novozymes A/S），克罗格休约尔36（Krogshoejvej36），DK-2880巴格斯维尔德（DK-2880Bagsvaerd），丹麦（Denmark）的商业酶。那些另外的酶中的任一者的活性可以使用本领域中已知的用于所讨论酶的任何方法来分析，该方法包括所引用的参考文献中提及的方法。

角质酶的实例是衍生自以下的那些：特异腐质霉（Humicola insolens）（US5,827,719）；镰孢菌属（Fusarium）的一种菌株，例如大刀粉红镰孢菌（F.roseumculmorum）或特别是豌豆腐皮镰孢菌（F.solani pisi）（WO90/09446、WO94/14964、WO94/03578）。角质酶还可以衍生自：丝核菌属（Rhizoctonia）的一种菌株，例如立枯丝核菌（R.solani），或链格孢菌属（Alternaria）的一种菌株，例如甘蓝链格孢菌（A.brassicicola）（WO94/03578），或其变异体，如WO00/34450或WO01/92502中所述的那些。

蛋白酶的实例是ALCALASE、ESPERASE、SAVINASE、NEUTRASE以及DURAZYM蛋白酶。其他蛋白酶衍生自诺卡氏土壤菌属（Nocardiopsis）、曲霉属（Aspergillus）、根霉属（Rhizopus）、嗜碱芽孢杆菌（Bacillusalcalophilus）、蜡状芽孢杆菌（B.cereus）、纳豆芽孢杆菌（B.natto）、普通芽孢杆菌（B.vulgatus）、蕈状芽孢杆菌（B.mycoide）以及来自芽孢杆菌属（Bacillus）的枯草杆菌蛋白酶，尤其是来自诺卡氏土壤菌种（Nocardiopsis sp.）和达松维尔诺卡氏土壤菌（Nocardiopsis dassonvillei）的蛋白酶，如WO88/03947中披露的那些，以及其突变体，例如WO91/00345和EP415296中披露的那些。

淀粉酶的实例是BAN、AQUAZYM、TERMAMYL以及AQUAZYM超淀粉酶。一种脂肪酶的一个实例是RESINASE A2X脂肪酶。一种木聚糖酶的一个实例是PULPZYME HC半纤维素酶。内切葡聚糖酶的实例是NOVOZYM613、342以及476酶产品。

甘露聚糖酶的实例是斯塔尔布兰德

等人，《生物技术杂志》（J.Biotechnol.）29(1993),229-242中所述的里氏木霉内-β-甘露聚糖酶。

固醇酯酶、过氧化酶、漆酶以及胆固醇酯酶的实例披露于此处背景技术部分中提及的参考文献中。氧化还原酶的其他实例是EP730641、WO01/98469、EP719337、EP765394、EP767836、EP763115以及EP788547中披露的过氧化酶和漆酶。在本文中，每当提及需要或受益于受体（例如氧气或过氧化氢）、增强剂、介体和/或活化剂的存在的一种氧化还原酶时，此类化合物应视为包含在内。增强剂和介体的实例披露于EP705327、WO98/56899、EP677102、EP781328以及EP707637中。如果希望的话，可以通过将一种氧化还原酶系统（例如一种漆酶，或一种过氧化酶系统）定义为所讨论酶与其受体、任选地还与用于所讨论酶的一种增强剂和/或介体的组合来加以区别。

在此描述和要求的本发明不由在此披露的具体实施例限制范围，这是因为这些实施例旨在作为本发明的若干方面的说明。任何等效实施例都旨在属于本发明的范围内。实际上，根据前述说明，本领域的普通技术人员将变得显而易知本发明的除了在此展示和描述的那些之外的不同的修改。此类修改还旨在属于所附权利要求书的范围内。在有矛盾的情况下，将以本披露（包括定义）为准。

在此引用不同的参考文献，其披露内容通过引用以其全文结合。

实例

实例1中所用的金黄色嗜热子囊菌GH61的氨基酸序列是SEQ ID NO:7的成熟氨基酸序列。

实例2中所用的太瑞斯梭孢壳霉GH61E的氨基酸序列是SEQ ID NO:4的成熟氨基酸序列。

实例2中所用的柄篮状菌GH61的氨基酸序列是SEQ ID NO:33的成熟氨基酸序列（也参看专利申请号PCT/US12/031521的SEQ ID NO:2）。

实例1

用GH61多肽改进牛皮纸浆的造纸特性

评估金黄色嗜热子囊菌GH61处理对由桉树牛皮纸浆制成的手抄纸的物理特性的作用。

在1000ml Lab-O-Mat烧杯（沃尔纳马西斯股份公司（Werner MathisAG））中在pH6和50℃下在1mM硫酸锰(II)和0.2%（w/v）抗坏血酸存在下对未漂白桉树牛皮纸浆进行金黄色嗜热子囊菌GH61处理持续1小时。纸浆稠度是4%并且GH61用量从10到1000mg EP（酶产品）/kg干纸浆变化。将样品用去离子水稀释到2l，并且在一台标准TAPPI粉碎机（型号8-3，洛伦岑与韦特公司（Lorenzen&Wettre））中使用15,000转将浆料粉碎。以相同方式处理参照纸浆（阴性对照），但无GH61添加。

根据TAPPI测试方法,“形成用于纸浆的物理测试的手抄纸（Forminghandsheets for physical testing of pulp）”T-205sp-95制备手抄纸。

为了测定拉伸指数（英斯特朗（Instron）型号5564）和撕裂指数（数字埃尔门多夫撕裂测试仪（Digital Elmendorf Tear Tester）），对应地根据TAPPI测试方法T-494om-96和T-414om-98进行测试。

表1显示，GH61具有显著改进由未漂白桉树牛皮纸浆制备的手抄纸的拉伸指数和撕裂指数的能力。

与对照样品相比，用10、100、500以及1000mg GH61EP/kg干纸浆与1mM硫酸锰(II)和0.2%（w/v）抗坏血酸组合处理未漂白桉树牛皮纸浆对应地导致手抄纸拉伸指数有约12%、27%、35%以及42%增加。

与对照样品相比，当在1mM硫酸锰(II)和0.2%（w/v）抗坏血酸存在下使用100mg GH61EP/kg干纸浆时，手抄纸撕裂指数增加42%。

表1.经处理的手抄纸的拉伸和撕裂指数分析。

实例2

用GH61多肽改进漂白软木亚硫酸盐纸浆的造纸特性

为了验证除来自金黄色嗜热子囊菌的GH61以外的GH61多肽可以增强除桉树牛皮纸浆以外的纸浆类型的拉伸和撕裂强度，研究了太瑞斯梭孢壳霉GH61E和柄篮状菌GH61对漂白软木纸浆纸张特性的作用。

在1000ml Lab-O-Mat烧杯（沃尔纳马西斯股份公司）中在pH6和50℃下在1mM硫酸锰(II)和0.2%（w/v）抗坏血酸存在下对漂白软木纸浆进行太瑞斯梭孢壳霉GH61E和柄篮状菌GH61处理持续1小时。纸浆稠度是4%并且GH61用量变为500mg EP（酶产品）/kg干纸浆。将样品用去离子水稀释到2l，并且在一台标准TAPPI粉碎机（型号8-3，洛伦岑与韦特公司）中使用15,000转将浆料粉碎。以相同方式处理参照纸浆（阴性对照），但无GH61添加。

根据TAPPI测试方法，“形成用于纸浆的物理测试的手抄纸”T-205sp-95制备手抄纸。

为了测定拉伸指数（英斯特朗型号5564）和撕裂指数（数字埃尔门多夫撕裂测试仪），对应地根据TAPPI测试方法T-494om-96和T-414om-98进行测试。

来自经太瑞斯梭孢壳霉GH61E和柄篮状菌GH61处理的软木纸浆的手抄纸显示拉伸和撕裂指数的改进（表2）。用太瑞斯梭孢壳霉GH61E和柄篮状菌GH61（0.5g EP/kg DM）与1mM硫酸锰(II)和0.2%（w/v）抗坏血酸组合处理对应地增加手抄纸拉伸指数23%和16%，以及对应地增加手抄纸撕裂指数27%和26%（表2）。另外，来自柄篮状菌GH61的GH61能够增加由漂白软木纸浆制成的手抄纸的破裂指数26%（表2）。

表2.经处理的手抄纸的拉伸和撕裂指数分析。

Claims

1.一种用于改进由纸浆制成的纸张材料的纸张强度的方法，包括在一种用于制造一种纸张材料的工艺中使该纸浆与一种GH61多肽接触，其中该GH61多肽的氨基酸序列包含以下一种或多种基序：

[ILMV]-P-x(4,5)-G-x-Y-[ILMV]-x-R-x-[EQ]-x(4)-[HNQ]和/或，

H-x(1,2)-G-P-x(3)-[YW]-[AILMV]和/或，

[EQ]-x-Y-x(2)-C-x-[EHQN]-[FILV]-x-[ILV]。

2.如权利要求1所述的方法，其中纸张强度被定义为拉伸强度、撕裂强度或破裂强度。

3.如权利要求1到2中任一项所述的方法，其中该GH61多肽的氨基酸序列包括一种氨基酸序列或由其组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:7或SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少50%一致性。

4.如权利要求1到3中任一项所述的方法，其中该GH61多肽的氨基酸序列包括一种氨基酸序列或由其组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:7或SEQ ID NO:33的成熟多肽具有至少60%一致性；优选地与SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:33的成熟多肽具有至少65%一致性、更优选地至少70%一致性、更优选地至少75%一致性、更优选地至少80%一致性、更优选地至少85%一致性、更优选地至少90%一致性并且最优选地至少95%一致性。

5.如权利要求1到4中任一项所述的方法，其中该GH61多肽的氨基酸序列包括一种氨基酸序列或由其组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:7或SEQ ID NO:33的成熟多肽相比具有至多10个、至多9个、至多8个、至多7个、至多6个、至多5个、至多4个、至多3个、至多2个或至多1个取代。

6.如权利要求1到5中任一项所述的方法，其中该GH61多肽的氨基酸序列包括以下或由以下组成：SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:33的成熟多肽。

7.如权利要求1到2中任一项所述的方法，其中该GH61多肽的氨基酸序列包括以下或由以下组成：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ IDNO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33或一种其同源序列的成熟多肽。

8.如权利要求1到7中任一项所述的方法，其中该GH61多肽在铜离子、连苯三酚、硫酸锰和/或抗坏血酸存在下使用。

9.如权利要求1到8中任一项所述的方法，其中该纸张材料是纸张、箱纸板、波纹纸板、棉纸、纸巾、包装材料或波纹容器或盒。

10.如权利要求1到9中任一项所述的方法，其中该纸浆是一种化学纸浆，如牛皮纸浆或亚硫酸盐纸浆。

11.如权利要求1到10中任一项所述的方法，其中该纸浆是木浆，优选地是硬木纸浆，如桉树纸浆；或软木纸浆，如松树纸浆。

12.如权利要求1到11中任一项所述的方法，其中该纸张材料的特性与在不使该纸浆与一种GH61多肽接触的情况下制造的一种纸张材料相比得到改进。

13.一种用于制造纸张材料的组合物，包含一种纸浆和一种GH61多肽，其中该GH61多肽的氨基酸序列包含以下一种或多种基序：

[ILMV]-P-x(4,5)-G-x-Y-[ILMV]-x-R-x-[EQ]-x(4)-[HNQ]和/或，

H-x(1,2)-G-P-x(3)-[YW]-[AILMV]和/或，

[EQ]-x-Y-x(2)-C-x-[EHQN]-[FILV]-x-[ILV]；

或其中该GH61多肽如权利要求1到7中任一项所定义。

14.如权利要求13所述的组合物的用途，用于制造与由该组合物在没有GH61多肽的情况下制成的一种纸张材料相比具有改进的拉伸强度、撕裂强度或破裂强度的一种纸张材料。

15.一种由纸浆制成的纸张材料，其中该纸浆已经经受如权利要求1到12中任一项所述的方法。