CN103463217B - 一种治疗肠炎痢疾的提取物、含其制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗肠炎痢疾的提取物、含其制剂及其制备方法和应用，该提取物是由以下重量份的中药制成：石榴皮620～1680份，白头翁178～267份，木香8～13份，盐酸小檗碱8～13份，其活性成分为：石榴皮醇提取物，白头翁醇水提取混合物，木香醇提取物，盐酸小檗碱。本发明提供的提取物有效成分含量高，制备方法简单，在治疗肠炎痢疾方面取得了意料不到的治疗效果。

Description

一种治疗肠炎痢疾的提取物、含其制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于中药制药领域，具体涉及一种治疗肠炎痢疾的提取

物、含其制剂及其制备方法和应用。

背景技术

肠炎痢疾在我国发病率高，四季均可发病，多发于夏秋季，全世界每年发病率约30至50亿人次，尤其以发展中国家发病率和病死率为高，特别是儿童，根据世界卫生组织统计，在发展中国家，感染性腹泻是儿童发病率最高的传染病，病死率约为20%。

引起肠炎痢疾的主要因素有饮食不注意、免疫力低下、滥用抗生素、遗传等。目前市面上治疗肠炎痢疾产品多，包括化学药和中成药，临床上治疗常采化学药有抗菌药如沙星类、磺胺等，抗菌药虽然作用明确，疗效好，但毒副作用大，常见不良反应有肝肾毒性、胃肠道反应等，严重者会引发致命的过敏反应和二重感染，同时，滥用抗菌药会使部分病菌产生变异，成为耐药菌株，后果严重。 中成药治疗肠炎痢疾主要从调理脾胃入手，常用白连止痢胶囊、白头翁汤、胃苓汤、炎可宁等，通过调节人体内阴阳平衡，通过药物内一些成分抗菌增强免疫力，从而达到治疗肠炎痢疾的目的，占领较大市场份额，其中，白连止痢胶囊，以石榴皮、木香、白头翁3味药材和盐酸小檗碱制成白连止痢胶囊，具有清热燥湿，涩肠止泻的作用，临床上主要用于痢疾、肠炎属大肠湿热证者。现有文献报道，白连止痢胶囊质量标准（WS-10463(DZ-0463)-2002）公开了制备方法为木香、盐酸小檗碱粉碎成细粉直接入药，石榴皮和白头翁水提取物入药，该方法提取工艺单一，有效成分不能充分提取利用，含量偏低，杂质多，服用剂量大、影响疗效等特点，使其在市场上应用有一定的局限性，因此，研制和开发出疗效迅速、有效成分含量高，服用剂量小中药制剂已越来越受到人们的重视，具有广阔的市场前景。

白连止痢胶囊四味药材中分别以某一成分或某些成分起主导作用，这些成分共同协调增效，对肠炎痢疾有一定效果。

石榴皮是石榴的干燥果皮，具有涩肠、止血、驱虫等功效，是《中国药典》历版收藏的品种。多年研究表明，石榴皮中含有多种化学成分，比如多酚、黄酮、生物碱、多种氨基酸、有机酸、糖类等，这些化学成分决定了其具有显著的抑菌、抗癌、抗病毒、抗氧化等作用。

白头翁出自《神农本草经》，为毛莨科植物，多年生草本，根状茎药用，具有清热解毒、凉血止痢、燥湿杀虫的功效。现代医学研究表明，白头翁具有抗阿米巴原虫、抗荫道滴虫、抗菌、镇静、镇痛等作用，并能降压，是心率变慢，心收缩增强，增进胃肠运动。药理研究表明，其主要成分白头翁素、白头翁总皂苷和白头翁总浸膏液均有不同程度的抑菌作用，对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和副伤寒杆菌较为敏感，其中白头翁素效果最佳。

木香始载于《神农本草经》，为菊科植物，以其根入药，味辛、苦、性温。归脾、胃、大肠、肝经。中医常用以治疗胃部胀痛、消化不良、呕吐、腹痛和腹泻等症，具有芳香健胃、行气止痛的功效，为常用理气药。临床研究表明木香具有调节胃肠运动、保护胃黏膜、抗腹泻抗炎、促进胆囊收缩、溶解纤维蛋白酶和抗菌等作用。木香的重要活性成分是挥发油成分去氢木香内酯和木香烃内酯，还含有氨基酸、菊糖和生物碱等。

盐酸小檗碱盐酸小檗碱主要植物来源于小檗科植物豪猪刺（Berberis Juli-ande Schneid）的根和茎，含量最高可达4.5%。对痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、金葡菌、链球菌、伤寒杆菌及阿米巴原虫有抑制作用。临床主要用于肠道感染及菌痢等。

本发明为了解决现有技术的不足，提供一种治疗肠炎痢疾的提取物、含其制剂及其制备方法和应用，该提取物有效成分含量高，制备方法简单，在治疗肠炎痢疾方面取得了良好的效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗肠炎痢疾的提取物。

本发明的另一个目的在于提供一种治疗肠炎痢疾的提取物的制备方法

本发明的另一目的在于提供一种治疗肠炎痢疾的药物制剂

本发明还提供上述提取物及其制剂在制备治疗肠炎痢疾的药物中的应用。

具体来说，本发明提供了如下的技术方案：

   本发明提供的一种治疗肠炎痢疾的提取物，该提取物由以下重量份的药物组成：石榴皮620～1680份，白头翁178～267份，木香8～13份，盐酸小檗碱8～13份，其活性成分为：石榴皮醇提取物，白头翁醇水提取混合物，木香醇提取物，盐酸小檗碱。

本发明提供的提取物，其中石榴皮醇提取物由以下方法制备：石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入5～10倍量65～90%乙醇浸泡1～3小时，加热回流2～4次，每次提取时间为2～5小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的5～10倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在50～70℃条件下相对密度为1.10～1.30，真空干燥得提取物备用。

本发明提供的提取物，其中白头翁醇水提取混合物由以下方法制

备：白头翁切片，加入5～10倍量70～90%乙醇，加热回流2～4次，每次提取时间为2～5小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/20～1/30倍，加入3～5倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入7～10倍量的水，煮沸提取3～4次，每次2～4小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.25的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物。

本发明提供的提取物，其中木香醇提取物由以下方法制备：木

香切片，加入5～7倍量70%～95%乙醇浸泡，浸泡时间为：0.5～1小时，加热至75～95℃，回流提取2～4次，每次提取时间1～3小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物。

 本发明提供的提取物，该提取物由以下方法制备：

1）石榴皮醇提物：石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入6～8倍量70～80%乙醇浸泡1～2小时，加热回流2～3次，每次提取时间为3～4小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的6～8倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在60～70℃条件下相对密度为1.15～1.25，真空干燥得提取物备用；

2）白头翁醇水提取混合物：白头翁切片，加入6～8倍量75～85%乙醇，加热回流2～3次，每次提取时间为3～4小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/25～1/30，加入3～4倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入8～10倍量的水，煮沸提取3～4次，每次3～4小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.25的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

3）木香醇提取物：木香切片，加入5～7倍量80%～90%乙醇浸泡，浸泡时间为：0.5～0.8小时，加热至80～90℃，回流提取3～4次，每次提取时间2小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物；

4）将步骤1）所得石榴皮醇提取物、步骤2）所得的白头翁醇水提取混合物和盐酸小檗碱混合均匀，加入步骤3）所得的木香醇提取物，混合均匀，即得治疗肠炎痢疾的提取物。

本发明提供的提取物的制剂，该制剂由所述提取物和药学上可接受的载体或稀释剂组成。

所述药学上可接受的载体或稀释剂是指药学领域常规的药物载体，选自填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂中的一种或几种，其中：所述填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素或葡糖糖等。

所述粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮等。

所述崩解剂选自微晶纤维素、羟甲基淀粉钠、交联聚乙烯比咯烷酮、低取代羟丙基纤维素或交联羧甲基纤维素纳。

所述的润滑剂选自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸氢钠、碳酸钙、微粉硅胶、滑石粉或硬脂酸镁。

所述矫味剂选自阿斯巴甜、蔗糖素或糖精钠。

本发明提供的提取物的制剂，所述制剂为固体制剂或液体制剂，所述固体制剂为片、胶囊、颗粒或丸剂；所述液体制剂为口服液或注射剂，所述注射剂为注射液、注射用冻干粉针或注射用无菌粉末。

本发明还提供提取物的制剂在制备治疗痢疾肠炎的药物中的应用。

本发明提供一种提取物的制备方法，该方法包括以下步骤：

1）石榴皮醇提物：石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入5～10倍量65～90%乙醇浸泡1～3小时，加热回流2～4次，每次提取时间为2～5小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的5～10倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在50～70℃条件下相对密度为1.10～1.30，真空干燥得提取物备用；

2）白头翁醇水提取混合物：白头翁切片，加入5～10倍量70～90%乙醇，加热回流2～4次，每次提取时间为2～5小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/20～1/30，加入3～5倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入7～10倍量的水，煮沸提取3～4次，每次2～4小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.25的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

3）木香醇提取物：木香切片，加入5～7倍量70%～95%乙醇浸泡，浸泡时间为：0.5～1小时，加热至75～95℃，回流提取2～4次，每次提取时间1～3小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物；

4）将步骤1）所得石榴皮醇提取物、步骤2）所得的白头翁醇水提取混合物和盐酸小檗碱混合均匀，加入步骤3）所得的木香醇提取物即得治疗肠炎痢疾的提取物。

本发明提供一种提取物的制备方法，该方法优选包括以下步骤：

1）石榴皮醇提物：石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入8倍量70%乙醇浸泡1小时，加热回流3次，每次提取时间为3小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的5倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在50℃条件下相对密度为1.12，真空干燥得提取物备用；

2）白头翁醇水提取混合物：白头翁切片，加入8倍量80%乙醇，加热回流3次，每次提取时间为3小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/20倍，加入3倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入7倍量的水，煮沸提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

3）木香醇提取物：木香切片，加入6倍量80%乙醇浸泡，浸泡时间为 1小时，加热至80℃，回流提取3次，每次提取时间2小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物；

4）将步骤1）所得石榴皮醇提取物、步骤2）所得的白头翁醇水提取混合物和盐酸小檗碱混合均匀，加入步骤3）所得的木香醇提取物，混合均匀，即得治疗肠炎痢疾的提取物。本发明还提供了制备上述含治疗肠炎痢疾的提取物的制剂的方法，将提取物与药学上可接受的载体或稀释剂混匀，采用常规制剂方法制成各种剂型。

本发明提供的提取物及其制剂通过明显的抗菌活性和对肠道的保护作用，对治疗肠炎痢疾取得了良好的效果，制备方法简单，对有效成分提取充分，含量高，解决了传统提取工艺制得的药物使用剂量大，杂质多，有效成分偏低等问题。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明。

实施例1：胶囊剂的制备

组成：石榴皮820g，白头翁240g，木香12g，盐酸小檗碱11g。

制备方法：

1）石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入6倍量90%乙醇浸泡1小时，加热回流3次，每次提取时间为3小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的8倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在65～70℃条件下相对密度为1.10～1.30，真空干燥，得提取物备用；

2）白头翁切片，加入7倍量80%乙醇，加热回流3次，每次提取时间为2小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/25倍，加入4倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入8倍量的水，煮沸提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.25的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

3）木香切片，加入6倍量80%乙醇浸泡，浸泡时间为 1小时，加热至80℃，回流提取3次，每次提取时间2小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物；

4）将步骤1）所得石榴皮醇提取物、步骤2）所得的白头翁醇水提取混合物、盐酸小檗碱混合均匀，加入步骤3）所得的木香醇提取物，混匀，粉碎，过100目筛，混匀，在过100筛，用80%乙醇制成软材，过14目筛，制粒，于60℃左右干燥，整粒，装胶囊，即得胶囊剂1000粒。

用法用量：一日3次，每次2粒。

实施例2：片剂的制备

组成：石榴皮620g，白头翁178g，木香13g，盐酸小檗碱13g

制备方法：

1）石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入8倍量70%乙醇浸泡2小时，加热回流3次，每次提取时间为3小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的7倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在60～70℃条件下相对密度为1.15～1.25，真空干燥得提取物备用；

2）白头翁切片，加入7倍量785%乙醇，加热回流3次，每次提取时间为3小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/30倍，加入4倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入9倍量的水，煮沸提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.25的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

3）木香切片，加入6倍量90%乙醇浸泡，浸泡时间为：0.5小时，加热至80℃，回流提取4次，每次提取时间2小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物；

4）将步骤1）所得石榴皮醇提取物、步骤2）所得的白头翁醇水提取混合物和盐酸小檗碱混合均匀，干燥，粉碎，加入步骤3）所得的木香醇提取物，充分混匀，制粒，用16目筛整粒，加1%硬脂酸镁为润滑剂，加微晶纤维素，可压缩性淀粉充分混匀，压制成1000片，包薄膜衣，即得。

用法用量：一日3次，每次2片。

实施例3：颗粒剂的制备

组成：石榴皮1680g，白头翁267g，木香8g，盐酸小檗碱8g

制备方法：

1）石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入10倍量90%乙醇浸泡2小时，加热回流3次，每次提取时间为5小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的10倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在60～70℃条件下相对密度为1.10～1.30，真空干燥得提取物备用；

2）白头翁切片，加入10倍量70%乙醇，加热回流4次，每次提取时间为2小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/30倍，加入4倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入10倍量的水，煮沸提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.25的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

3）木香切片，加入5倍量95%乙醇浸泡，浸泡时间为： 1小时，加热至80℃，回流提取4次，每次提取时间1小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物；

4）将步骤1）所得石榴皮醇提取物、步骤2）所得的白头翁醇水提取混合物、盐酸小檗碱混合均匀，干燥，粉碎，加入步骤3）所得的木香醇提取物，混匀，加入糊精至总量1000g,粉碎，混匀，制粒，干燥，整粒，包装，每袋1g即得。

用法用量：一日3次，每次1袋。

实施例4：滴丸的制备

组成：石榴皮750g，白头翁240g，木香12g，盐酸小檗碱10g

制备方法：

1）石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入8倍量70%乙醇浸泡1小时，加热回流3次，每次提取时间为3小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的5倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在50℃条件下相对密度为1.12，真空干燥得提取物备用；

2）白头翁切片，加入8倍量80%乙醇，加热回流3次，每次提取时间为3小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/20倍，加入3倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入7倍量的水，煮沸提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

3）木香切片，加入6倍量80%乙醇浸泡，浸泡时间为 1小时，加热至80℃，回流提取3次，每次提取时间2小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物；

4）将步骤1）所得石榴皮醇提取物、步骤2）所得的白头翁醇水提取混合物和盐酸小檗碱混合均匀，加入步骤3）所得的木香醇提取物,混匀，加入熔融状态的聚乙二醇M6000中，搅拌，使其分散均匀，保温备用，将混合均匀的熔融基质置于保温装置滴丸机中并保持基质于搅拌状态，开机滴注，用液体石蜡或硅油做滴丸成型的冷却剂。将制成的滴丸冲冷却剂中取出，用少量无水乙醇进行快速清洗后置于摊盘中于30到40℃条件下鼓风干燥，拣丸，上光，包装，得滴丸剂1000粒。

实施例5：口服液的制备

组成：石榴皮750g，白头翁240g，木香12g，盐酸小檗碱10g

制备方法：

1）石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入8倍量70%乙醇浸泡1小时，加热回流3次，每次提取时间为3小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的5倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在50℃条件下相对密度为1.12，真空干燥得提取物备用；

2）白头翁切片，加入8倍量80%乙醇，加热回流3次，每次提取时间为3小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/20倍，加入3倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入7倍量的水，煮沸提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

3）木香切片，加入6倍量80%乙醇浸泡，浸泡时间为 1小时，加热至80℃，回流提取3次，每次提取时间2小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物；

4）将步骤1）所得石榴皮醇提取物、步骤2）所得的白头翁醇水提取混合物和盐酸小檗碱混合均匀，加入步骤3）所得的木香醇提取物,混匀，加入5000ml水，用慢火煎熬80分钟，过滤，取滤液保存, 滤液约为400ml。药料再加入4000ml水，用慢火煎熬60分钟，过滤出滤液保存，滤液为300ml。药料再加入4000ml水，用慢火煎熬60分钟，过滤出滤液保存，滤液为300ml。将三次所得的滤液混合均匀，分装制成口服液。

用法用量：一日3次，每次5ml。

实施例6：注射剂的制备

组成：石榴皮750g，白头翁240g，木香12g，盐酸小檗碱10g

制备方法：

1）石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入8倍量70%乙醇浸泡1小时，加热回流3次，每次提取时间为3小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的5倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在50℃条件下相对密度为1.12，真空干燥得提取物备用；

2）白头翁切片，加入8倍量80%乙醇，加热回流3次，每次提取时间为3小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/20倍，加入3倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入7倍量的水，煮沸提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

3）木香切片，加入6倍量80%乙醇浸泡，浸泡时间为 1小时，加热至80℃，回流提取3次，每次提取时间2小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物；

4）将步骤1）所得石榴皮醇提取物、步骤2）所得的白头翁醇水提取混合物和盐酸小檗碱混合均匀，加入步骤3）所得的木香醇提取物,混匀，粉碎成80目，加入注射用水溶解至5000ml,并灌封，于115℃下热压灭菌2次以上，每次30分钟，即得。

用法用量：肌肉注射，一日3次，每次5ml。

为了使本领域普通技术人员更好的理解本发明，本申请人进行了一系列药效学试验，以证明本发明的效果。

一、本发明提取物对正常小鼠小肠运动的影响

1、试验材料

试验动物：由贵阳医学院实验动物中心小鼠50 只，雌雄各半，体重18 ～ 20g。

本发明制剂，按照本发明的制备方法制备成胶囊剂（按实施例1制备），用蒸馏水配制成0.12、0.15、0.18g /ml 的混悬液待用；对照品1：白连止痢胶囊，由安徽精方药业有限公司提供，每粒含盐酸小檗碱9.0mg,使用前用蒸馏水配制成含盐酸小檗碱1.5g/ml的混悬液待用；对照品2 硫酸阿托品注射液( 天津市人民制药厂生产)，使用前用生理盐水稀释成0.01mg/ml 溶液；活性炭；阿拉伯胶( 制成含10％阿拉伯树胶，5％活性炭的炭末蒸馏水混悬液)。

试验设备：T-500 电子天平( 常熟双杰测试仪器厂，编号：256)，PL203 精密电子天平( 梅特勒—托利多仪器( 上海) 有限公司制造)。

、试验方法

选用18 ～ 20g 体重小鼠，按体重随机分层的方法分为5 组，即空白对照组、阳性药( 阿托品) 组、含本发明提取物的制剂高、中、低剂量组。每组10 只，雌雄各半。空白对照组和阿托品组灌胃蒸馏水30ml/kg，高、中、低剂量组分别灌胃本发明混悬液10ml，1次/d。灌胃7 天后，于实验前一天傍晚禁食不禁水18h，于第8 天末次给药1h( 阿托品ip阿托品稀释液0.1mg/kg 5min) 后，各组灌胃炭末混悬液0.2ml/ 只。20min 后处死动物，打开腹腔分离肠系膜，剪取前端至幽门，后端至回盲部的肠管，置于托盘上。轻轻将小肠摆成直线，测量肠管长度作为“小肠总长度”。从幽门至墨汁前沿的距离作为“墨汁在肠内推进的距离”。公式计算墨汁推进率：墨汁推进率＝ ( 墨汁在肠内推进距离/ 小肠全长)×100％。

spss11.5 统计学软件做方差分析统计处理。

、试验结果

与对照组比较，阳性药阿托品组炭末前沿推进率明显减少(P ＜ 0.05)，含本发明提取物的制剂0.12g/ml 组有一定的使炭末前沿推进的作用，但随剂量增高，则使炭末前沿推进率加大，并与剂量相关的呈高于对照组的趋势，但无统计学意义。见表1-1。

表1-1  含本发明提取物的制剂对小鼠小肠运动的影响

组别	例数	前沿推进率（5）
			正常对照组	10	60.23±8.56
阿托品组	10	41.52±14.89**
			含本发明提取物的制剂0.12g/ml	10	65.71±14.42
含本发明提取物的制剂0.15g/ml	10	75±10.25.
			含本发明提取物的制剂0.18g/ml	10	86±14.63

注：与正常对照组比较：**P<0.01

4、试验结论

    与正常对照组比较，含本发明提取物的制剂0.12g/ml有一定的促进正常小肠运动作用；0.15-0.18g/ml灌胃给药，随剂量增加而表现有促进正常小鼠小肠碳末推进的趋势，因此能促进食物的消化和吸收，但均无明显的统计学意义。

二、本发明提取物体外抗菌实验

1. 试验材料

试验药物：按照本发明的制备方法制备成颗粒剂（按实施例3制备），淀粉，实验前用少量无菌生理盐水调成糊状待用；大蒜片；硫酸阿米卡星注射液

试验供试菌：金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，绿脓杆菌，均购自中国药品生物制品检定所。

试验培养基：牛肉膏琼脂培养基

试验仪器：游标卡尺；MLS-3750 高压蒸汽灭菌器；HHB II-600电热恒温培养箱

2. 试验方法

供试菌制备：先将各供试菌在其对应的试管斜面培养基上活化，保存在4℃冰箱中。

平板镶嵌法观察抑菌圈：取琼脂平板，无菌条件下切去平板一侧的琼脂2 条，将本发明组合物、淀粉分别倾注于切去琼脂的平板槽内；将浸泡过硫酸阿米卡星注射液的无菌纸片和大蒜片分别贴于已涂布了细菌的琼脂表面。放入电热恒温培养箱，18 ～ 24h 后取出。游标卡尺测量抑菌圈直径。

试验结果

含本发明提取物的制剂对大肠杆菌和金葡菌有一定抗菌作用。数据如下1-2。

表1-2 ：含本发明提取物的制剂体外抑菌实验( 抑菌圈直径mm)

组别	例数	大肠杆菌	金葡菌	绿脓杆菌
					淀粉对照组	6	0.00±0.00	0.00±0.00	0.00±0.00
含本发明提取物的制剂	6	13.10±0.13*	9.22±4.15***	12.63±0.89
					阿米卡星组	6	12.12±4.23***	10.25±4.23***	13.23±0.24***
大蒜片组	6	8.58±3.86***	6.49±3.45***	6.79±0.19***

注：与淀粉对照组比较：*P<0.05，***P<0.001。

、试验结论：

含本发明提取物的制剂对大肠杆菌、金葡菌和绿脓杆菌有一定的抑菌作用。

三、本发明提取物对正常大鼠尿液中木糖和淀粉酶的影响

1、试验材料

试验动物：由贵阳医学院实验动物中心购入wistar 大鼠60 只，雌雄各半，体重130 ～ 145g。

试验药物：按照本发明的制备方法制备成片剂（按实施例2制备），用蒸馏水配制成0.10、0.17、0.20g /ml 的混悬液待用；思密达( 博福益普生天津制药有限公司)，用蒸馏水配制成0.3g/ml 混悬液待用； 1.2.3D- 木糖( 天津市光复精细化工研究所)，用蒸馏水配制成10％ D- 木糖溶液待用；淀粉酶试剂盒( 由南京建成生物工程研究所提供) ；D- 木糖试剂盒( 由南京建成生物工程研究所提供)。

试验设备：T-1000 电子天平( 常熟双杰测试仪器厂) ；大鼠代谢笼；紫外分光光度计。

、试验方法

大鼠按体重分层随机的方法分为5 组，即空白对照组、阳性药组、本发明制剂高、中、低剂量组。每组10 只，雌雄各半。高、中、低剂量组分别灌胃含本发明提取物的制剂混悬液0.10、0.17、0.20g /ml，灌胃相应剂量的混悬液10ml，阳性药组灌服同体积盐酸思密达溶液，空白对照组灌胃蒸馏水，1 次/d。连续给药2d 后，于实验前一天傍晚禁食不禁水18h，转天末次给药1h 后，按摩大鼠腹部以排空膀胱内储尿，每只大鼠灌服10％ D- 木糖溶液5mL，放入代谢笼中，收集5h 尿液。测定尿中木糖和淀粉酶含量。

、试验结果

含本发明提取物的制剂0.17g/ml 组尿淀粉酶活性和D- 木糖排泄量与对照组比较明显升高，数据见表1-3。

表1-3 含本发明提取物的制剂对正常大鼠木糖和淀粉酶含量的影响

组别	例数	5h尿木糖含量（g）	淀粉酶含量（ul）
				对照组	10	10.23±0.36	3769.89±229.89
思密达组	10	16±3.89**	3055.64±1458.34
				含本发明提取物的制剂0.10g/ml	10	11.56±4.19	3986.25±1579.56
含本发明提取物的制剂0.17g/ml	10	12.36±2.35	4536.46±1985.18
				含本发明提取物的制剂0.20g/ml	10	13.56±3.79*	8025±1979.36***

注：与对照组比较：*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01，***P ＜ 0.001。

、试验结论

淀粉酶活性测定和木糖吸收试验是较公认的反映肠道消化、吸收功能的指标。淀粉酶是人体消化过程的一种重要消化酶，分泌不足会影响食物消化，本实验结果表明，含本发明提取物的制剂能增强淀粉酶活性，有助于人体消化功能的提高。D- 木糖内服后主要由十二指肠与空肠经易化扩散而吸收，因其为单糖，在吸收前没有先行消化、分解的必要，吸收后也不被肝脏和周围组织所代谢，加之其水溶性，可大部分以原型从尿中排出，故可借口服定量木糖后从尿中排出量来测知小肠的吸收功能。本实验结果表明，本发明组合物能够提高肠消化吸收功能。

四、本发明提取物对小鼠腹泻的影响

1、试验材料

试验动物：由贵阳医学院实验动物中心购入ICR 小鼠72 只，雌雄各半，体重18 ～ 20g。

试验药物：按照本发明的制备方法制备成胶囊剂（按实施例1制备），将含本发明提取物的制剂用蒸馏水配制成0.10、0.19、1.1g /ml混悬液待用； 大黄粉( 祈州饮片厂)，用蒸馏水配制成10％大黄粉水混悬液待用；白连止痢胶囊(安徽精方药业有限公司)。

试验设备：T-500 电子天平( 常熟双杰测试仪器厂)，PL203 精密电子天平( 梅特勒—托利多仪器( 上海) 有限公司制造)。

、试验方法

小鼠按体重分层随机的方法分为6 组，即空白对照组、模型对照组、阳性药组、含本发明提取物的制剂高、中、低剂量组，每组12 只。动物随机分组后，除空白对照组外，其余各组每天灌服10％大黄粉水混悬液0.5ml/ 只，给大黄7d 后动物出现食欲减退、活动减少、泄泻、竖毛拱背、毛色失泽等症状。后每日继续灌服大黄粉水混悬液0.5ml/ 只，1h 后本发明组分别灌胃本发明混悬液0.10、0.19、1.1g /ml，给药体积为10ml/只，空白对照组和模型组灌服同体积蒸馏水。按此方法给药3d 后，傍晚各组动物禁食不禁水。转日晨起同前法给药，给药1h 后，灌胃大黄粉水混悬液0.5ml/ 只( 空白对照组给予同体积蒸馏水)。各小鼠分别置于垫有洁净滤纸的鼠笼内，1h 更换垫纸一次，观察并记录6h 湿粪粒数，并经SPSS11.5统计软件统计。

、试验结果

排便2h 内，模型组稀粪粒数比对照组明显增多，说明泄泻模型成功，本发明三个剂量组湿粪粒数均高于模型组，未显示止泻作用。而在排便第2 ～ 6h 之间，本发明组合物三个剂量组与模型对照组比较，湿粪粒数明显减少(P ＜ 0.05)。数据见表1-4。

表1-4 含本发明提取物的制剂对泄泻小鼠稀粪粒数的影响

注：与正常对照组比较：+<0.05,+++p<0.001

与模型组比较：*P<0.05。

、试验结论

含本发明提取物的制剂在泄泻初期并不表现单纯止泻作用，反而促进湿粪排出，但服用本发明组合物后症状缓解时间较模型组提前，从而达到止泻的作用。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (7)

1.一种治疗肠炎痢疾的药物组合物，该药物组合物由以下重量份的原料制成：石榴皮620～1680份、白头翁178～267份、木香8～13份、盐酸小檗碱8～13份，其特征在于：

所述的石榴皮为石榴皮醇提取物,由以下方法制备：石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入5～10倍量65～90％乙醇浸泡1～3小时，加热回流2～4次，每次提取时间为2～5小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的5～10倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在50～70℃条件下相对密度为1.10～1.30，真空干燥得提取物备用；

所述的白头翁为白头翁醇水提取混合物，由以下方法制备：白头翁切片，加入5～10倍量70～90％乙醇，加热回流2～4次，每次提取时间为2～5小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/20～1/30倍，加入3～5倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入7～10倍量的水，煮沸提取3～4次，每次2～4小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.25的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

所述的木香为木香醇提取物,由以下方法制备：木香切片，加入5～7倍量70％～95％乙醇浸泡，浸泡时间为：0.5～1小时，加热至75～95℃，回流提取2～4次，每次提取时间1～3小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物由以下方法制备：

1)石榴皮醇提物：石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入6～8倍 量70～80％乙醇浸泡1～2小时，加热回流2～3次，每次提取时间为3～4小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的6～8倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在60～70℃条件下相对密度为1.15～1.25，真空干燥得提取物备用；

2)白头翁醇水提取混合物：白头翁切片，加入6～8倍量75～85％乙醇，加热回流2～3次，每次提取时间为3～4小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/25～1/30，加入3～4倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入8～10倍量的水，煮沸提取3～4次，每次3～4小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.25的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

3)木香醇提取物：木香切片，加入5～7倍量80％～90％乙醇浸泡，浸泡时间为：0.5～0.8小时，加热至80～90℃，回流提取3～4次，每次提取时间2小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物；

4)将步骤1)所得石榴皮醇提取物、步骤2)所得的白头翁醇水提取混合物和盐酸小檗碱混合均匀，加入步骤3)所得的木香醇提取物，混合均匀，即得治疗肠炎痢疾的药物组合物。

3.含权利要求1所述的药物组合物的制剂，其特征在于，该制剂由所述药物组合物和药学上可接受的载体或稀释剂组成。

4.根据权利要求3所述药物组合物的制剂，其特征在于，所述药物组合物的制剂为固体制剂或液体制剂，所述固体制剂为片、胶囊、颗粒或丸剂；所述液体制剂为口服液或注射剂，所述注射剂为注射液、注射用冻干粉针或注射用无菌粉末。

5.根据权利要求1所述的药物组合物及权利要求3所述含药物组合物的制剂在制备治疗肠炎痢疾的药物中的应用。

6.一种制备权利要求1所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)石榴皮醇提物：石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入5～10倍量65～90％乙醇浸泡1～3小时，加热回流2～4次，每次提取时间为2～5小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的5～10倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在50～70℃条件下相对密度为1.10～1.30，真空干燥得提取物备用；

2)白头翁醇水提取混合物：白头翁切片，加入5～10倍量70～90％乙醇，加热回流2～4次，每次提取时间为2～5小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/20～1/30，加入3～5倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入7～10倍量的水，煮沸提取3～4次，每次2～4小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.25的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

3)木香醇提取物：木香切片，加入5～7倍量70％～95％乙醇浸泡，浸泡时间为：0.5～1小时，加热至75～95℃，回流提取2～4次，每次提取时间1～3小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物；

4)将步骤1)所得石榴皮醇提取物、步骤2)所得的白头翁醇水提取混合物和盐酸小檗碱混合均匀，加入步骤3)所得的木香醇提取物即得治疗肠炎痢疾的药物组合物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：该方 法包括以下步骤：

1)石榴皮醇提物：石榴皮粉碎成粗粉，过24目筛，加入8倍量70％乙醇浸泡1小时，加热回流3次，每次提取时间为3小时，第2次及以后次数的乙醇用量为药材重量的5倍，过滤，合并滤液，滤液浓缩至在50℃条件下相对密度为1.12，真空干燥得提取物备用；

2)白头翁醇水提取混合物：白头翁切片，加入8倍量80％乙醇，加热回流3次，每次提取时间为3小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至滤液体积的1/20倍，加入3倍量丙酮，析出白色粉质，即得乙醇提取物备用；收集药渣，药渣加入7倍量的水，煮沸提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10的浸膏，真空干燥即得水提取物备用，将乙醇提取物与水提取物混合，得醇水提取混合物；

3)木香醇提取物：木香切片，加入6倍量80％乙醇浸泡，浸泡时间为1小时，加热至80℃，回流提取3次，每次提取时间2小时，合并提取液，抽滤，收集滤液，水蒸气蒸出滤液中的溶剂，得木香醇提取物；

4)将步骤1)所得石榴皮醇提取物、步骤2)所得的白头翁醇水提取混合物和盐酸小檗碱混合均匀，加入步骤3)所得的木香醇提取物，混合均匀，即得治疗肠炎痢疾的药物组合物。