CN103446167A

CN103446167A - 红景天苷在制备脑卒中药物中的应用

Info

Publication number: CN103446167A
Application number: CN2013103802531A
Authority: CN
Inventors: 陈立典; 洪桂祝; 吴晓华; 赖文芳; 张小琴; 魏艺聪; 褚克丹
Original assignee: FUJIAN MINDONG REJUVENATION PHARMACEUTICAL Co Ltd; Fujian University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: FUJIAN MINDONG REJUVENATION PHARMACEUTICAL Co Ltd; Fujian University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2013-08-28
Filing date: 2013-08-28
Publication date: 2013-12-18

Abstract

本发明涉及医药领域，特别涉及红景天苷在制备脑卒中药物中的应用。本发明在动物相关模型实验中显示良好的治疗效果，可以有效地提高减少神经功能损伤评分，减少脑梗死体积，延长脑卒中的治疗时间窗至48小时；并首次证明红景天苷可调控和神经突触可塑性有关的基因。

Description

红景天苷在制备脑卒中药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药用途，特别涉及红景天苷在制备治疗脑卒中药物中的应用。

背景技术

脑卒中，俗称脑血管意外、脑中风，是一种突然起病的脑血液循环障碍性疾病，也是脑血管疾病最严重的并发症。据统计，中国每年发生脑中风病人达200万，发病率高达120/10万。现（2012年）幸存中风病人700万，其中450万病人不同程度丧失劳动力和生活不能自理。致残率高达75%。中国每年中风病人死亡120万。有学者在对临床资料分析后发现，在门诊就诊的脑卒中患者中，约40%为复发病例，25-33%的脑卒中患者将在3-5年内再次发作。2012年，第三次全国死因调查显示，脑卒中致死率排名第一，高达22.45%。

脑卒中包括脑血栓、脑出血等，具有发病率高、致残率高、死亡率高和复发率高的“四高”特点。可在短时间内造成神经功能缺损，神经细胞坏死，使病情加重，甚至危及生命。根据2010年最新发布的《中国急性缺血性脑卒中诊治指南》，脑卒中患者治疗的“时间窗”已由原来的3小时扩大到4.5小时。

目前，神经保护剂作为脑卒中治疗的一种有效方法，针对急性缺血或再灌注后细胞损伤的药物（神经保护剂）可保护脑细胞，提高对缺血缺氧的耐受性。主要神经保护剂的临床研究情况如下：钙拮抗剂、兴奋性氨基酸拮抗剂、神经节苷脂和NXY-059等在动物实验中的疗效都未得到临床试验证实。

依达拉奉是一种抗氧化剂和自由基清除剂，国内外多个随机双盲安慰剂对照试验提示依达拉奉能改善急性脑梗死的功能结局并安全；胞二磷胆碱是一种细胞膜稳定剂，几项随机双盲安慰剂对照试验对其在脑卒中急性期的疗效进行了评价，单个试验都显示差异无统计学意义，但Meta分析（4个试验共1372例患者）提示：脑卒中后24小时内口服胞二磷胆碱的患者3个月全面功能恢复的可能性显著高于安慰剂组，安全性与安慰剂组相似。

已上市的治疗脑卒中神经保护剂虽然有一定的保护作用，但依然存在较大的个体差异，且时间窗较窄，通常为4.5-6小时；即使目前可见的最长的胞二磷胆碱钠的有效治疗时间窗也仅为24小时，其服用时间也要达到3个月才见效果。

发明内容

鉴于现有技术的以上缺点，本发明提供的应用，能在可以在脑卒中发生48小时内依然能减少梗死体积，降低神经功能缺损评分和死亡率，而且在使用6天后即可获得很好的效果。

本发明提供了红景天苷在制备脑卒中药物中的应用。红景天苷在药物中的重量比为1%-100%。所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、分散片、缓释片、冻干粉针剂、注射液、鼻饲溶液或口服液。所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、分散片、缓释片、冻干粉针剂、注射液、鼻饲溶液或口服液。

红景天苷，即2-(4-羟基苯基)乙基-β-D-葡萄糖苷，其结构式为。

大鼠脑中动脉缺血(MCAO)模型，造模后0， 24 和 48小时，静脉注射红景天苷6天（50mg/kg/day），治疗效果总结如下：

红景天苷治疗组的神经损伤程度明显小于模型组，具有显著性差异，且24 和48 小时治疗时间窗组的神经损伤程度与0小时治疗时间窗基本一致；

红景天苷治疗组的实验动物存活率明显高于模型组，具有显著性差异，且24 和48 小时治疗时间窗组的动物存活率与0小时治疗时间窗基本一致；

红景天苷促进神经修复，特别是神经突触可塑性的调控。

红景天苷提高包括Egr1, Egr2, Arc, Rgs4, Hbb-b1, Hmgcs1, Stard4, Rasl11a, Hbb, Nr4a1, Hba-a2, Rgc32, Cort, Tnn, Kcns等27个基因的表达；同时抑制Scara5, Phyhd1, Mosc1, Crisp1, Cd44, LOC498316, Tjp3, Slc6a5, Sult1a1, Crlf1, Pnpla2 and Ttcl2 等17个基因的表达。

附图说明

图 1-A：红景天苷减少脑梗死体积（t=0h）。 MCAO-再灌注后即刻注射红景天苷或载体，连续给药六天。之后取脑组织，用TTC方法染色后拍照。

图 1-B: 红景天苷降低神经功能损伤评分（t=0h）。 MCAO-再灌注后即刻注射红景天苷或载体，连续给药六天。神经功能损伤评分依照Bederson方法进行。N ≥ 12，**p < 0.01。

图 1-C：红景天苷有效地提高动物成活率（t=0h）。MCAO-再灌注即刻注射红景天苷或载体，连续给药六天, 每天统计动物成活只数。 N ≥ 12。

图 2-A：红景天苷减少脑梗死体积（t=24h）。 MCAO-再灌注后24小时注射红景天苷或载体，连续给药六天。之后取脑组织，用TTC方法方法染色后拍照。

图 2-B: 红景天苷降低神经功能损伤评分（t=24h）。 MCAO-再灌注24小时后注射红景天苷或载体，连续给药六天。神经功能损伤评分依照Bederson方法进行。N ≥ 12，**p < 0.01。

图 2-C：红景天苷有效地提高动物成活率（t=24h）。MCAO-再灌注后24小时注射红景天苷或载体，连续给药六天, 每天统计动物成活只数。 N ≥ 12。

图 3-A：红景天苷减少脑梗死体积（t=48h）。 MCAO-再灌注48小时后注射红景天苷或载体，连续给药六天。之后取脑组织，用TTC方法方法染色后拍照。

图 3-B: 红景天苷降低神经功能损伤评分（t=48h）。 MCAO-再灌注48小时后注射红景天苷或载体，连续给药六天。神经功能损伤评分依照Bederson方法进行。N ≥ 12，**p < 0.01。

图 3-C：红景天苷有效地提高动物成活率（t=48h）。MCAO-再灌注48小时后注射红景天苷或载体，连续给药六天, 每天统计动物成活只数。 N ≥ 12。

具体实施方式

为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。

实施例 1

药品的制备

取红景天苷100g，甘露醇50g，用注射用水1000ml溶解，再用注射用水加至1500g，溶液中加入活性炭8g，搅拌加热至60℃保持15分钟，用0.45um、0.22um过滤膜串联过滤，得澄清液；澄清液在无菌环境中按照每瓶1.56g分装置注射用管制玻璃瓶中，置冷冻干燥箱中冷东干燥，其冷冻工艺为溶液冷冻至-40℃，并保持3hr，抽真空至10帕以下，打开加热系统，使制品温度在-15℃以下升华15小时至制品水分升华至80%以上，再提高制品温度至0℃进行二次干燥4小时，最后制品温度在25℃干燥至制品水分低于3%；冷冻干燥好的制品在干燥箱中压塞，出箱，最后加铝盖，扎紧，制品经检验合格后入库。

实施例2

大鼠脑中动脉缺血(MCAO)再灌注模型，造模后0，24和48小时，静脉注射红景天苷6天（50mg/kg/day），每天统计成活率和神经功能损伤评分。实验完成取脑组织，进行TTC染色和基因芯片分析（microarray）。

TTC染色方法见文献Shen H, Wu X, Zhu Y, Sun H. PLoS One. 2013;8(2):e57055

神经功能损伤评分方法见文献Bederson JB, Pitts LH, Tsuji M, Nishimura MC, Davis RL, Bartkowski H. Stroke. 1986;17(3):472-6

基因芯片分析方法见文献Mengozzi M, Cervellini I, Villa P, Erbayraktar Z,

, Yilmaz O, Erbayraktar S, Manohasandra M, Van Hummelen P, Vandenabeele P, Chernajovsky Y, Annenkov A, Ghezzi P. Proc Natl Acad Sci. 2012 12;109(24):9617-22.。

实验结果：

在造模0小时后，注射红景天苷6天后减少脑梗死体积和神经功能损伤评分, 能有效地提高成活率（表1和表2-A；图1-A， 1-B 和1C）。

在造模24小时后，注射红景天苷6天后减少脑梗死体积和神经功能损伤评分, 能有效地提高成活率，（表1和表2-B；图2-A， 2-B 和2C）。

在造模48小时后，注射红景天苷6天后减少脑梗死体积和神经功能损伤评分, 能有效地提高成活率（表1和表2-C；图3-A， 3-B 和3C）。

红景天苷作用机制研究：促进神经修复，特别是神经突触可塑性的调控。

红景天苷提高包括Egr1, Egr2, Arc, Rgs4, Hbb-b1, Hmgcs1, Stard4, Rasl11a, Hbb, Nr4a1, Hba-a2, Rgc32, Cort, Tnn, Kcns等27个基因的表达；同时抑制Scara5, Phyhd1, Mosc1, Crisp1, Cd44, LOC498316, Tjp3, Slc6a5, Sult1a1, Crlf1, Pnpla2 and Ttcl2 等17个基因的表达 (表 3) 。

表1：不同治疗窗口条件下给药6天后的动物神经功能损伤评分

N ≥ 12，**p < 0.01

表2-A: 造模后即刻给药（t=0h）的动物存活率（%； N=30）

表2-B: 造模后24小时给药（t=24h）的动物存活率（%； N=30）

表2-C: 造模后48小时给药（t=48h）的动物存活率（%； N=30）

表3：基因芯片分析红景天苷调控基因表达^*

Figure 2013103802531100002DEST_PATH_IMAGE001

*以基因表达变化2-倍或2-倍以上，p值<0.01为标准

** p值为结果可信程度的一个递减指标。通常， p值≤0.05被认为是统计学意义的边界线， 0.05≥p>0.01被认为是具有统计学意义，而p值≤0.01被认为具有高度统计学意义。

Claims

1.红景天苷在制备脑卒中药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于红景天苷在药物中的重量比为1%-100%。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、分散片、缓释片、冻干粉针剂、注射液、鼻饲溶液或口服液。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于成人日使用剂量为含红景天苷10mg—1000mg。