CN103284153B - 鳕鱼肝油软胶囊及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种鳕鱼肝油软胶囊及其制备方法，其特征是每1000粒的软胶囊中含有鳕鱼肝油450-540g、天然维生素E0.45-0.55g。由于鳕鱼肝油含有易氧化变质的ω-3脂肪酸，本品采用脂溶性的天然维生素E作抗氧化剂；为保证微生物指标符合要求，从称量、溶胶、配料、压丸、定型、干燥均在10万级的洁净区内完成。经长期稳定性试验表明，本品在有效期二年内稳定，有效成分分含量、微生物指标、性状等符合规定，软胶囊囊壳未发生硬化变质等现象。本发明经安全性实验表明本品30天喂养对大鼠未见明显毒副作用；经增强免疫力功能实验表明本品具有增强免疫力功能。

Description

鳕鱼肝油软胶囊及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种鳕鱼肝油软胶囊及其制备方法，属于医药保健食品技术领域。

背景技术

鳕鱼（学名：Gadus），是主要食用鱼类之一。鳕鱼原产于从北欧至加拿大及美国东部的北大西洋寒冷水域。目前鳕鱼主要出产国是加拿大、冰岛、挪威及俄罗斯，日本产地主要在北海道。鳕鱼是全世界年捕捞量最大的鱼类之一，具有重要的经济价值。鳕鱼大部分生活在太平洋、大西洋北方水温0℃～16℃的寒冷海里。只要会动的东西，什么都吃，吃得多，因此长得也快，约10年多就能长到1米大；繁殖力也强，体长1米左右的雌鱼，一次可产300万～400万粒卵之多。因集群性生活，捕捉很容易，自古就是有名的食用鱼。鳕鱼的营养价值天生就比其它鱼类高出一筹，尤其它的肝脏，含油量高达40%，鳕鱼肝油除富含普通的鱼肝油所有的维生素A，维生素D外，还含有人体大脑、眼睛发育所必需的DHA、DPA、ARA。因此，鳕鱼肝油成为鱼肝油中的极品，被誉为“液体黄金”。目前市场上的鳕鱼肝油软胶囊品种存在着有效成分易氧化变质且含量及比例不稳定；软胶囊有效期短、囊壳易硬化或软化变质等缺点。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明提供一种产品质量稳定，有效期长的鳕鱼肝油软胶囊及其制备方法。

本发明的技术方案为：

一种鳕鱼肝油软胶囊，其特征在于，每1000粒的软胶囊中由以下重量的原料制成：鳕鱼肝油450-540g、天然维生素E0.45-0.55g。

每1000粒胶囊皮配方用量：明胶270-330.0g、甘油123-150g和纯化水240-300g；所述鳕鱼肝油软胶囊的制备方法，其特征在于，制胶，制内容物，压丸工序在10万级洁净区生产，具体工艺步骤如下：

（1）制胶：

将甘油、纯化水投入化胶罐，加热至60～75℃，投入明胶，搅拌均匀，保温搅拌40-50分钟得胶液混合物料；将胶液混合物料抽真空控制真空度-0.06Mpa以上，关真空，开排气阀，检测胶液黏度在2.0～3.5万mPa·s；将胶液过80-100目滤袋；胶液50～65℃保温，备用；

（2）制内容物：

称取鳕鱼肝油、天然维生素E，备用；将鳕鱼肝油与天然维生素E投入配料罐中，搅拌15-30分钟，得总混合油，过80-120目滤袋得内容物，备用；

（3）压丸、定型、干燥：

压丸：将软胶囊内容物、胶液在滚模式软胶囊机中压成软胶囊，保持转速为2.0～4.2转/分钟，喷体温度保持38～55℃，胶皮厚度为0.55～0.70mm；压好的软胶囊定型2-5小时，通风干燥控制胶囊水分5.0～12.0%，制得鳕鱼肝油软胶囊。

本发明的鳕鱼肝油软胶囊具有增强免疫力保健功能，适宜人群：免疫力低下者；每日推荐用量：每日2粒，本发明经湖南省疾病预防控制中心安全性实验表明鳕鱼肝油软胶囊30天喂养对大鼠未见明显毒副作用；经增强免疫力功能实验表明本发明鳕鱼肝油软胶囊具有增强免疫力功能。

本发明的有益效果：本发明由于鳕鱼肝油含有丰富的ω-3脂肪酸，由于ω-3脂肪酸容易氧化变质，本发明采用脂溶性的天然维生素E作抗氧化剂，并通过实验优选了其比例用量，其与鳕鱼肝油能达到良好的混合均匀性，还可有效补充人体饮食缺少的维生素E，在有效期二年内可有效防止ω-3脂肪酸氧化变质；本品不适宜采取终产品杀菌，为保证微生物指标符合要求，并严格控制生产工艺，从称量、溶胶、配料、压丸、定型、干燥均在10万级的洁净区内完成。经长期稳定性试验表明，本品在有效期二年内稳定，有效成分分含量、微生物指标、性状等符合规定，其囊壳未发生硬化变质等现象。

附图说明

下面结合附图对本发明作进一步的说明。

附图1为本发明的鳕鱼肝油软胶囊的工艺流程图；

具体实施方式

下面结合附图与具体实施方式，对本发明做进一步说明。

实施例一：

（1）制胶：

将甘油123kg、纯化水300kg投入化胶罐，加热至60～75℃，再投入明胶330kg，搅拌均匀，保温搅拌40-50分钟，得胶液混合物料；将胶液混合物料抽真空控制真空度-0.06Mpa以上，关真空，开排气阀，检测胶液黏度在2.0～3.5万mPa·s；将胶液过80-100目滤袋；胶液50～65℃保温，备用；

（2）制内容物：

称取鳕鱼肝油450kg、天然维生素E0.55kg，备用；将鳕鱼肝油与天然维生素E投入配料罐中，搅拌15-30分钟，得总混合油，过80-120目滤袋，得内容物，备用；

（3）压丸、定型、干燥：

压丸：将软胶囊内容物、胶液在滚模式软胶囊机中压成软胶囊，保持转速为2.0～4.2转/分钟，喷体温度保持38～55℃，胶皮厚度为0.55～0.70mm：压好的软胶囊定型2-5小时；通风干燥，控制胶囊水分5.0～12.0%，制得鳕鱼肝油软胶囊A。

实施例二：将原料组成改为明胶300kg、甘油136.3kg、纯化水270kg、鳕鱼肝油499.5kg、天然维生素E0.5kg,按照实施例一所述方法，制得鳕鱼肝油软胶囊B。

实施例三：将原料组成改为明胶270kg、甘油150kg、纯化水240kg、鳕鱼肝油540kg、天然维生素E0.4kg,按照实施例一所述方法，制得鳕鱼肝油软胶囊C。

增强免疫力功能实验报告

1材料和方法

1.1样品：实施例二所得鳕鱼肝油软胶囊B，人口服推荐剂量为每日1g，成人体重按60kg计算，折合剂量0.0167g/kg·bw。

1.2实验动物与分组：长沙市开福区东创实验动物科技服务部（实验动物生产许可证号为SCXK（湘）2009-0012）提供的SPF级昆明种雌性小鼠200只，体重18g～22g。饲料由同一单位提供。每40只小鼠为一大组，共五大组。免疫Ⅰ组，进行碳廓清实验⑩免疫Ⅱ组，进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞的活性测定；免疫Ⅲ组，进行脏体比值测定、半数溶血值(HC₅₀)的测定和抗体生成细胞数的测定；免疫Ⅳ组，进行迟发型变态反应实验；免疫Ⅴ组，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。每大组40只小鼠按体重随机分为4小组，即对照组和低、中、高剂量组。

1.3实验条件:试验单位：湖南省疾病预防控制中心。为屏障坏境，实验期间环境温度23℃～24℃，湿度50%～56%，实验动物使用许可证号为SCXK（湘）2010-0011。

1.4剂量选择及样品处理：据人体口服推荐量，设鳕鱼肝油软胶囊B低、中、高剂量分别为0.083g/kg·bw、0.I67g/kg·bw、0.500g/kg·bw(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)。试验时，分别取鳕鱼肝油软胶囊B内容物1.66g、3.34g、10.00g加植物油定容至200ml，按0.1

mI/10g·bw体积给小鼠灌胃，每天一次，连续灌胃至少30天。对照组灌胃予以等体积的溶剂。

1.5主要仪器与试剂：动物台秤、分析天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、离心机、722分光光度计、恒温水浴箱、酶标仪、显微镜等。

无菌手术器械、游标卡尺、微量注射器、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板，96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片等。

SRBC、生理盐水、Hank’s液、RPMI1640培养液、小牛血清、青链霉素、ConA、1％冰醋酸、1mol/L溶液，酸性异丙醇、MTT、PBS缓冲液（pH7.2-7.4）、补体（豚鼠血清）、SA缓冲液、琼脂糖、都氏试剂、YAC-1细胞、乳酸钠、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶Ⅰ、0.2mol/L的Tris-HCL缓冲液、2.5％Triton、印度墨汁、0.1%的碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液等。

1.6实验方法：

1.6.1脏器/体重比值测定：称重后处死小鼠，取出脾脏和胸腺，在电子分析天平上称重，计算脏/体比值。

1.6.2迟发型变态反应(DTH)(足拓增厚法)

小鼠腹腔注射2％(v/v)SRBC(0.2ml每鼠)致敏后4天，测量左后足跎部厚度，然后在测量部位皮下注射20％(v/v)SRBC(0.2ul每鼠)，于注射后24h测量左足跎部厚度，同一部位测量三次，取平均值。以攻击前后足跎厚度差值（足跎肿胀度）来表示(DTH)的程度。

1.6.3ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)

无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank's液的小平皿中，制成细胞悬液，经200目筛网过滤。用Hank's液洗2次，每次离心10分钟(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL完全培养液中，计数活细胞数，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为3X10⁶个/ml。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，在其中一孔加75ulConA液（相对于7.5ug/ml），另一孔作为对照，置5%二氧化碳，37℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL,加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50u L/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔作3个平行孔，用酶标仪，以570nm波长测定光密度值。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加CanA孔的光密度值表示。

1.6.4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)

取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min，将压积SRBC用生理盐水配成2%(v/v)的细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2ml。4天后将小鼠处死，取脾，轻轻磨碎，用Hank’s液制成细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤、离心2次。最后将细胞悬浮在8mlHank’s液中，计数细胞，并将细胞浓度调整为5×10⁶个/mL。将表层培养基加热溶解后与等量的pH7.4，2倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5mI，再向管内加入用SA液配制的10%SRBC50ul(v/v)、20u1脾细胞悬液(5x10⁶个/ml)，迅速混匀后倾倒于已刷薄层琼脂糖的玻片上，待琼脂糖凝固后将玻片水平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，然后用SA液稀释的补体(1：8)加入到玻片凹槽内，继续温育1.5h后计数溶血空斑数。

1.6.5半数溶血值(HC₅₀)的测定

取羊血，用生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2%(v/v，用生理盐水配制)SRBC0.2mL进行免疫。4天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约Ih，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000rpm离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释为200倍，取1mL置试管内，依次加入10％(v/v，用SA缓冲液配制)SRBC0.5mL，补体1mL(用SA缓冲液按1:8稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温30min后，冰浴终止反应。2000rpm离心10min，取上清ImL，加都氏试剂3mL。同时取10%(vlv，用SA缓冲液配制)SRBC0.25mL，加都氏试剂至4mL于另一试管中，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC₅₀)表示，按下式计算：

半数溶血值(HC₅₀)=样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值X稀释倍数

1.6.6小鼠碳廓清实验

小鼠尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁，每10g体重注射0.1mL，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min，分别从内眦静脉丛取血20u1，加入到2mI0.1％Na₂C0₃溶液中，摇匀。以0.1％Na₂C0₃溶液作空白对照，用722型分光光度计在600nm波长处比色测光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝、脾，称重，计算吞噬指数a。

1.6.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)

小鼠腹腔注射200(vlv，用生理盐水配制)的鸡红细胞(2000rpm,10min)悬液1mL，间隔30min，颈椎脱臼处死，仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min。取腹腔巨噬细胞洗液1mL，滴于载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，置37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗以除去未贴片细胞。晾干，以甲醇:丙酮(1：1)固定，4％(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色，用蒸馏水漂洗晾干。油镜下每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：

吞噬率%＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100

吞噬指数＝被吞噬鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数

1.6.8NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶测定法)

受试小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，用Hank's液洗2次，每次离心10min(1000转Imin)，弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mI灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5mI2倍Hank's液及8mlHank's液，1000rpm离心10min，用1mL含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用1%冰醋酸稀释后计数，用台酚兰染色计数活细胞数(活细胞数应在95%以上)，调整细胞浓度为2X10⁷个/mL此为效应细胞，取传代后24h生长良好的YAC-1细胞用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4X10⁵个/mL此为靶细胞；取靶细胞和效应细胞各100ul(效靶比50：1)，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100u1，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5%Triton各100u1;上述各项均设三个平行孔，于37℃，5%二氧化碳培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100uI置平底95孔培养板中，同时加入LDH基质液100uI，根据室温反应3-10min,每孔加入1moI/L的HCI30ul，在酶标仪490nm处测定光密度(OD)。

NK细胞活性=[(反应孔OD-自然释放孔OD/最大释放孔OD-自然释放孔OD)]x100%

1.7实验数据统计：

用Excel2003、Spss11.0软件进行数据转化和统计分析。用Spss11.0软件分析时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐，则改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhane'sT2检验进行两两比较。

2.1样品对小鼠体重的影响

见表1-5。各剂量组实验初期、实验中期、实验末小鼠体重及实验期间

小鼠体重增长与对照组比较，差异均无显著性(P＞0.05)。

2.2样品对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

见表6。样品各剂量对小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值无显著影响(P＞0.05)。

2.3样品对小鼠细胞免疫功能的影响

2.3.1样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

见表7。中、高剂量组小鼠迟发型变态反应能力与对照组比较显著提高(P＜0.05)。

2.3.2样品对小鼠ConA诱导的淋巴细胞转化能力的影响

见表8。样品各剂量对小鼠淋巴细胞转化能力无显著影响(P＞0.05)。

2.4样品对体液免疫的影响

2.4.1样品对小鼠抗体生成细胞数的影响

见表9。中、高剂量组小鼠抗体生成细胞数与对照组比较显著提高(P＜0.05)。

2.4.2样品对小鼠半数溶血值（HC₅₀）的影响

见表10。样品各剂量对小鼠半数溶血值（HC₅₀）无显著影响(P＞0.05)。

2.5样品对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

2.5.1样品对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的影响

见表11。样品各剂量对小鼠碳廓清无显著影响(P＞0.05)。

2.5.2样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

见表12-1、12-2。样品各剂量对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无显著影响(P＞0.05)。

2.6样品对小鼠NK细胞活性的影响

见表13。中、高剂量组小鼠NK细胞活性与对照组比较显著提高(P＜0.05)。

分别用本发明鳕鱼肝油软胶囊A、本发明鳕鱼肝油软胶囊C代替本发明鳕鱼肝油软胶囊B，重复上述动物实验，所得结果无实质差别，略。

3结论

在本实验室条件下，经口灌胃给予小鼠0.083g/kg·bw、0.167g/kg·bw、0.500g/kg·bw剂量的本发明鳕鱼肝油软胶囊30天，与对照组比较，0.167g/kg·bw、0.500g/kg·bw剂量能显著提高小鼠迟发型变态反应能力、抗体生成细胞数、NK细胞活性(P＜0.05)，各剂量对小鼠体重增长、胸腺/体重比值、脾脏/体重比值、半数溶血值、淋巴细胞转化能力、碳廓清及巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力均无显著影响(P＞0.05)。提示本发明鳕鱼肝油软胶囊具有增强免疫力功能。

本发明包括但不限于上述实施方式，任何符合本权利要求书描述的产品、方法，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种鳕鱼肝油软胶囊，其特征在于，所述鳕鱼肝油软胶囊用于增强免疫力，每1000粒的软胶囊中由以下重量的原料制成内容物：鳕鱼肝油450-540g、天然维生素E0.45-0.55g；

每1000粒胶囊皮配方用量：明胶270-330.g、甘油123-150g和纯化水240-300g；

所述鳕鱼肝油软胶囊的制备方法由如下步骤组成：

制胶，制内容物，压丸、定型、干燥；

所述制备方法在10万级洁净区生产，具体工艺步骤如下：

(1)制胶：

将甘油、纯化水投入化胶罐，加热至60～75℃，再投入明胶，搅拌均匀，保温搅拌40-50分钟，得胶液混合物料；将胶液混合物料抽真空控制真空度-0.06Mpa以上，关真空，开排气阀，检测胶液黏度在2.0～3.5万mPa·s；将胶液过80-100目滤袋；胶液50～65℃保温，备用；

(2)制内容物：

称取鳕鱼肝油、天然维生素E，备用；将鳕鱼肝油与天然维生素E投入配料罐中，搅拌15-30分钟，得总混合油，过80-120目滤袋，得内容物，备用；

(3)压丸、定型、干燥：

压丸：将软胶囊内容物、胶液在滚模式软胶囊机中压成软胶囊，保持转速为2.0～4.2转/分钟，喷体温度保持38～55℃，胶皮厚度为0.55～0.70mm；

压好的软胶囊定型2-5小时；

通风干燥，控制胶囊水分5.0～12.0％，制得鳕鱼肝油软胶囊。