CN103223144A - 一种防治肝癌的中药组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种防治肝癌的中药组合物，由姜黄和白芍按质量比为1:0.1-10混合后的乙醇-水共煎提取物组成。经试验证明，本发明的中药组合物可显著抑制BEL-7402等肝癌细胞株的生长;对肝癌荷瘤小鼠模型试验显示，抑瘤率分别均在45%以上，可提高小鼠脾指数与胸腺指数;对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌试验显示，组合物可更有效抑制肝癌的发生和发展。与单独应用原药材相比，该药物组合物活性更高且作用明确，对肝癌及肝癌的发生都有很好的抑制作用和防御功能。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种防治肝癌的中药组合物。
背景技术
姜黄始载于《唐本草》，为姜科植物姜黄Curcuma longaL.的干燥根茎，其性味辛、苦、温，归脾、肝经，具有破血行气，通经止痛之功效，可用于胸胁刺痛，胸痹心痛，痛经经闭，癥瘕，风湿肩臂疼痛，跌扑肿痛等病症的治疗。姜黄含有多种化学成分，主要成分为姜黄素类化合物:姜黄素、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、二氢姜黄素等;倍半萜类化合物:姜黄新酮、姜黄酮醇A、B等;挥发油(4.2%):姜黄酮、姜黄烯、莪术醇等。姜黄素等有效成分的药理作用广泛，其抗炎、抗氧化、抗动脉粥样硬化、抗抑郁、抗肿瘤等作用己被普遍认可，其中抗肿瘤作用自1985年首次提出后，己有大量的实验研究证实，作用机制主要包括诱导肿瘤细胞凋亡，抑制血管生成，有阻滞细胞周期进程，逆转肿瘤细胞多药耐药等万面。黄东生等研究发现，姜黄素能够增强caspase-8的表达，从而启动外源性凋亡途径，诱导人肺癌细胞凋亡。方悦等报道姜黄素具有抗食道癌、胃癌、肝癌、结肠癌等消化系统肿瘤的作用。中国专利CNl931353A公开了姜黄素提取及其药物组合物制备方法。
白芍是毛茛科植物芍药属的去皮干燥根，性微寒，味苦、酸。有养血柔肝、缓中止痛、敛阴收汗的功效。白芍的药效成分包括芍药苷、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药内酯苷，苯甲酰芍药苷等，统称为白芍总苷(total glucosides of peony，TGP)。研究发现，其可以在多个环节影响自身免疫疾病的细胞免疫、体液免疫以及炎症过程，并有镇痛、保肝的作用。芍药苷作为占TGP90%以上的化合物，近年来发现亦有抗肿瘤活性。其作用机制除了增强机体的免疫力，还有体内外引起肿瘤细胞周期停滞、诱导肿瘤细胞凋亡、对化疗药物减毒增效等。杨加域等发现白芍醇提液超滤膜分离药效部位在体外具有抗肿瘤活性;詹可顺等报道TGP联合化疗治疗非小细胞肺癌优于单纯化疗，并能提高患者生存质量、改善患者细胞免疫功能和升高外周血象。200510045840.0公开了一种具有升高白细胞作用的芍药苷与芍药内酯苷的组合物，适合用于制备治疗各种原因引起的白细胞减少、血小板和血红球蛋白降低的病症的药物。高小蓉等采用水提醇沉、膜分离、DEAE-纤维素柱层析分离纯化等方法得到白芍多糖BSP，对小鼠Lewis肺癌和S180肉瘤模型均有较好的抑制率。
目前为止尚未发现具有防治肝癌的且由姜黄和白芍的共煎提取物组成的中药组合物见诸报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种防治肝癌的中药组合物。
本发明的技术方案概述如下:
一种防治肝癌的中药组合物，用下述方法制成:
(1)按质量为1:0.1～10的比例称取原料姜黄和白芍，加入原料质量7～9倍的体积浓度为60%～90%的乙醇水溶液，浸泡0.5～1.5小时，加热回流提取，每次提取1～3小时，提取1～3次，合并提取液;
(2)提取液经减压浓缩至提取液体积的1/10～1/8，干燥，得到一种防治肝癌的中药组合物。
所述步骤(1)优选为:按质量为1:5的比例称取原料姜黄和白芍，加入原料质量8倍的体积浓度为65%的乙醇水溶液，浸泡1小时，加热回流提取，每次提取2小时，提取2次，合并提取液。
所述步骤(2)优选为:提取液经减压浓缩至提取液体积的1/9，干燥，得到一种防治肝癌的中药组合物。
本发明的优点:
经试验证明，本发明的中药组合物可显著抑制BEL-7402等肝癌细胞株的生长;对肝癌荷瘤小鼠模型试验显示，抑瘤率分别均在45%以上，提高小鼠脾指数与胸腺指数;对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌试验显示，组合物可更有效抑制肝癌的发生和发展。与单独应用原药材相比，本发明的组合物防治肝癌的中药组合物活性更高且作用明确，对肝癌及肝癌的发生都有很好的抑制作用和防御功能。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
下面的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本发明，但并不对本发明作任何限制。
实施例1
一种防治肝癌的中药组合物，用下述方法制成:
(1)按质量为1:5的比例称取原料姜黄和白芍，加入原料质量8倍的体积浓度为65%的乙醇水溶液，浸泡1小时，加热回流提取，每次提取2小时，提取2次，合并提取液;
(2)提取液经减压浓缩至提取液体积的1/9，干燥，得到一种防治肝癌的中药组合物。
实施例2
一种防治肝癌的中药组合物，是用下述方法制成:
(1)按质量为1:0.1的比例称取原料姜黄和白芍，加入原料质量7倍的体积浓度为90%的乙醇水溶液，浸泡0.5小时，加热回流提取，每次提取1小时，提取1次，合并提取液;
(2)提取液经减压浓缩至提取液体积的1/8，干燥，得到一种防治肝癌的中药组合物。
实施例3
一种防治肝癌的中药组合物，是用下述方法制成:
(1)按质量为1:5的比例称取原料姜黄和白芍，加入原料质量8倍的体积浓度为80%的乙醇水溶液，浸泡1小时，加热回流提取，每次提取2小时，提取2次，合并提取液;
(2)提取液经减压浓缩至提取液体积的1/9，干燥，得到一种防治肝癌的中药组合物。
实施例4
一种防治肝癌的中药组合物，是用下述方法制成:
(1)按质量为1:10的比例称取原料姜黄和白芍，加入原料质量9倍的体积浓度为60%的乙醇水溶液，浸泡1.5小时，加热回流提取，每次提取3小时，提取3次，合并提取液;
(2)提取液经减压浓缩至提取液体积的1/10，干燥，得到一种防治肝癌的中药组合物。
本发明的中药组合物的药效试验如下:
1.体外抗肿瘤活性试验
1.1细胞株及培养
BEL-7402肝癌细胞株，培养于含10%灭活胎牛血清，100U/mL青霉素，100ug/mL链霉素的RPMn640培养基中，于37°C，5%CO2培养箱及饱和湿度条件下培养，3-4天传代一次。
Hep-3B肝癌细胞株，培养于含10%灭活胎牛血清，100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素的DMEM培养基中，于37℃，5%CO2培养箱及饱和湿度条件下培养，3～4天传代一次。
SMMC-7721肝癌细胞株，培养于含10%灭活胎牛血清，100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素的DMEM培养基中，于37℃，5%CO2培养箱及饱和湿度条件下培养，3～4天传代一次。
药物抗肿瘤活性测定
受试药物的制备:将原料姜黄、白芍按与实施例1相同方法分别单独提取，得到姜黄提取物和白芍提取物。将两种提取物以及各实施例获得的一种防治肝癌的中药组合物分别粉碎，加水混合摇匀，超声处理使各提取物均完全溶解。
MTT法:将对数生长期细胞用胰酶消化后配制成浓度为3×104个/mL的细胞悬液，接种于96孔酶标板，每孔加200μL。24h后换不含血清培养液使细胞同步化生长，每孔200μL。第三天向孔中加入受试药，即分别加入姜黄单独提取物水溶液(简称姜黄组，)，白芍单独提取物水溶液(简称白芍组，)和本发明4个实施例制备的组合物水溶液;另设对照组:0.1%二甲基亚砜(DMSO)，每孔加200μL。受试药每组分别设0.01，0.1，1，10，100，1000μg/mL六个浓度，每个浓度设8个平行孔，于37℃下培养24h后，每孔加无血清无酚红培养液新鲜配制的0.5mg/mLMTTl00μL，继续培养4h，然后，每孔加100μLDMSO溶解MTT甲臜颗粒，用微型振荡器振荡混匀后，于酶标仪上测定光密度值(OD)，实验重复三次，取平均值。以溶剂对照处理肿瘤细胞为对照组，由OD值计算抑制率，公式为:细胞生长抑制率=(对照组OD值—实验组OD值)/对照组ODX100%，并以药物浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制细胞生长曲线，并求得IC50(半数抑制率)，IC50=细胞生长抑制率为50%的药物浓度。结果见表1。
表1体外抗肿瘤活性试验结果
2.体内抗肿瘤活性试验
2.1HepA肝癌模型实验
2.1.1动物造模
将昆明小鼠(雌性，18-20g)110只随机分成11组，每组10只(各组名称见2.1.2)，给予实施例1制备的药物组合物进行小鼠HepA肝癌模型体内药效试验。造模方法如下:
取接种HepA肝癌细胞后腹水饱满的荷瘤小鼠，消毒腹部，于超净工作台中抽取乳白色腹水为瘤源，生理盐水洗涤，腹水5.5mL，腹水与生理盐水的比例为1:1，生理盐水5.5mL，配成细胞悬液，以无菌注射器抽取0.lmL，分别接种于110只小鼠腋下。整个操作在无菌条件下进行。
2.1.2动物分组及给药
接种次日开始给药，每日1次:(1)模型组，灌服生理盐水，每只0.2mL;(2)化疗组:按20mg/kg·bw腹腔注射环磷酰胺;(3)姜黄高剂量组:按12.5g/kg·bw灌服;(4)姜黄中剂量组:按2.5g/kg·bw灌服;(5)姜黄低剂量组:按0.5g/kg·bw灌服;(6)白芍高剂量组:按12.5g/kg·bw灌服;(7)白芍中剂量组:按2.5g/kg·bw灌服;(8)白芍低剂量组:按0.5g/kg·bw灌服;(9)药物组合物(实施例1)高剂量:按12.5g/kg·bw灌服;(10)药物组合物(实施例1)中剂量组:按2.5g/kg·bw灌服(11)药物组合物(实施例1)低剂量组:按0.5g/kg·bw灌服。各组连续给药两周，于给药结束后次日颈部脱臼处死小鼠，解剖取其瘤组织，摘取肝，脾，胸腺并称重。
测抑瘤率:(i)抑瘤率(%)=(1-给药组平均瘤重/生理盐水组平均瘤重)×100%，摘肝，脾，胸腺并称重。肝指＝(肝脏重量/体重)*1000，脾指＝(脾脏重量/体重)*1000，胸腺指数=(胸腺重量/体重)*1000。结果见表2和表3。
表2组合物对HepA肝癌荷瘤小鼠抑瘤率试验结果
表3组合物对HepA肝癌荷瘤小鼠免疫器官重量指数比较
注:和模型组相比有显著差异，*P＜0.05
实验结果表明，实施例2、实施例3和实施例4的组合物对HepA肝癌荷瘤小鼠抑瘤率、对HepA肝癌荷瘤小鼠免疫器官的影响与实施例1相似。
2.2H22肝癌模型实验
2.2.1动物分组及给药
用昆明小鼠(雌性，18-20g)110只(随机分成11组，每组10只，各组名称见2.1.2)各组预先给药1周，每日1次:(1)模型组，灌服生理盐水，每只0.2mL;(2)化疗组:按20mg/kg·bw腹腔注射环磷酰胺;(3)姜黄高剂量组:按12.5g/kg·bw灌服;(4)姜黄中剂量组:按2.5g/kg·bw灌服;(5)姜黄低剂量组:按0.5g/kg·bw灌服;(6)白芍高剂量组:按12.5g/kg·bw灌服;(7)白芍中剂量组:按2.5g/kg·bw灌服;(8)白芍低剂量组:按0.5g/kg·bw灌服;(9)药物组合物(实施例1)高剂量:按12.5g/kg·bw灌服;(10)药物组合物(实施例1)中剂量组:按2.5g/kg·bw灌服(11)药物组合物(实施例1)低剂量组:按0.5g/kg·bw
2.2.2动物造模
取接种H22肝癌细胞后腹水饱满的荷瘤小鼠，消毒腹部，于超净工作台中抽取乳白色腹水为瘤源，生理盐水洗涤，腹水5.5mL，腹水与生理盐水的比例为1:1，生理盐水5.5mL，配成细胞悬液，以无菌注射器抽取0.lmL，分别接种于预先给予药物的110只小鼠腋下。整个操作在无菌条件下进行。
2.2.3造模后再给药
造模后各组继续灌服与2.2.1所述相同的药物，连续两周，于末次给药结束后次日颈部脱臼处死小鼠，解剖取其瘤组织，摘取肝，脾，胸腺并称重。
测抑瘤率:(i)抑瘤率(%)=(1-给药组平均瘤重/生理盐水组平均瘤重)×100%，摘肝，脾，胸腺并称重。肝指=(肝脏重量/体重)*1000，脾指＝(脾脏重量/体重)*1000，胸腺指数=(胸腺重量/体重)*1000，结果见表4和表5。
表4组合物对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤率试验结果
表5组合物对H22肝癌荷瘤小鼠免疫器官重量指数比较
注:和模型组相比有显著差异，*P＜0.05
实验结果表明，实施例2、实施例3和实施例4的组合物对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤率、对H22肝癌荷瘤小鼠免疫器官的影响与实施例1相似。
2.3二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌实验
2.3.1动物分组及给药
将120只大鼠随机分为11组，除B组20只外，其余各组10只，按照下列药物及剂量分别给药于各组大鼠，连续5周:(1)正常组(A组):自由饮水、吃食;(2)模型组(B组):自由饮水、吃食;(3)姜黄高剂量组(C组):按12.5g/kg·bw灌服;(4)姜黄中剂量组(D组):按2.59/kg·bw灌服;(5)姜黄低剂量组(E组):按0.5g/kg·bw灌服;(6)白芍高剂量组(F组):按12.5g/kg·bw灌服;(7)白芍中剂量组(G组):按2.5g/kg·bw灌服;(8)白芍低剂量组(H组):按0.5g/kg·bw灌服;(9)药物组合物(实施例1制备)高剂量组(I组):按12.5g/kg·bw灌服;(10)药物组合物(实施例1制备)中剂量组(J组):按2.5g/kg·bw灌服。(11)药物组合物(实施例1制备)低剂量组(K组):按0.59/kg·bw灌服。
2.3.2造模及再给药
给药5周后，开始造模。A组动物自由饮水、吃食，B组动物将二乙基亚硝胺(DEN)配制成1%水溶液，每周每鼠定时一次灌胃，周剂量按70mg/kg计算，连续灌胃15周。C至H组动物除按上述剂量方法给予DEN外，同时继续给予2.3.1所述的各组中药，连续灌胃15周。
2.3.3检测方法及指标
上述各组动物于第15周末处死，取血分离血清并自动生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)等肝功能指标，肝组织在10%甲醛溶液中固定24h。固定后行脱水、透明、浸蜡、常规石蜡包埋，制备切片，采用HE染色法于光镜下观察肝脏的组织学变化。结果见表6和表7。
表6各组大鼠肝功能检测指标结果比较
注:和模型组相比有显著差异，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01
表7各组大鼠肝组织病理结果比较
用上面相同的方法对实施例2、实施例3和实施例4制备的组合物进行实验，实验结果表明，实施例2、实施例3和实施例4的组合物也具有上述相似的作用。
3.结论
本发明提供的抗肝癌发生的中药组合物制备方法简单，经体外MTT试验证明，此药物组合物可显著抑制BEL-7402等肝癌细胞株生长;肝癌荷瘤小鼠模型试验显示，配伍后抑瘤率显著提高(45%以上)，小鼠脾指数与胸腺指数也有所增加;对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌试验显示，组合物可更有效抑制肝癌的发生和发展。与单独应用原药材相比，该药物组合物活性更高且作用明确，对肝癌的治疗及预防肝癌的发生都有很好的抑制作用和防御功能。
Claims (3)
1.一种防治肝癌的中药组合物，其特征是用下述方法制成:
(1)按质量为1:0.1～10的比例称取原料姜黄和白芍，加入原料质量7～９倍的体积浓度为60%～90%的乙醇水溶液，浸泡0.5～1.5小时，加热回流提取，每次提取1～3小时，提取1～3次，合并提取液;
(2)提取液经减压浓缩至提取液体积的1/10～1/8，干燥，得到一种防治肝癌的中药组合物。
2.根据权利要求1所述的一种防治肝癌的中药组合物，其特征是所述步骤(1)为:按质量为1:5的比例称取原料姜黄和白芍，加入原料质量8倍的体积浓度为65%的乙醇水溶液，浸泡1小时，加热回流提取，每次提取2小时，提取2次，合并提取液。
3.根据权利要求1所述的一种防治肝癌的中药组合物，其特征是所述步骤(2)为:提取液经减压浓缩至提取液体积的1/9，干燥，得到一种防治肝癌的中药组合物。
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| 方悦等: "姜黄素抗消化系肿瘤作用研究", 《浙江中西医结合杂志》 * |
| 王世宏等: "白芍总苷对HepG2细胞增殖的抑制作用", 《安徽医科大学学报》 * |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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