CN103096927A

CN103096927A - 复合药物组合物以及治疗胃肠道功能性疾病或病症的方法

Info

Publication number: CN103096927A
Application number: CN2011800429401A
Authority: CN
Inventors: 奥列格·伊里奇·爱泼斯坦
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-07-15
Filing date: 2011-07-15
Publication date: 2013-05-08
Also published as: ES2425004R1; ES2425004A2; AU2011278032B2; WO2012007839A2; IL224215A; JP2013532181A; FR2962651A1; GB2496794B; WO2012007839A3; AR082245A1; CA2804964C; AU2011278032A1; MX2013000542A; GB201302654D0; CA2804964A1; KR20130060264A; KR101901465B1; BR112013000842A2; JP2016210787A; NZ606765A

Abstract

本发明提供一种复合药物组合物，所述复合药物组合物包含：a）活性强化形式的抗S-100蛋白抗体、b）活性强化形式的抗组胺抗体、以及c）活性强化形式的抗TNF-α抗体。提供了多种实施方式和变型。本发明提供了对胃肠道功能性病因的疾病或病症进行治疗的方法，所述方法包括向有需要的患者给予复合药物组合物，所述复合药物组合物包含：a）活性强化形式的抗组胺抗体、b）活性强化形式的抗S-100蛋白抗体、以及c）活性强化形式的抗TNF-α抗体。提供了多种实施方式和变型。

Description

复合药物组合物以及治疗胃肠道功能性疾病或病症的方法

技术领域

本发明涉及复合药物组合物和对胃肠道功能性疾病或病症进行治疗的方法。

背景技术

本发明涉及药物领域，并可用于治疗胃肠道(GIT)的功能性紊乱或病症，包括肠易激综合征(irritable bowel syndrome)以及GIT(包括肠)排泄(motor-evacuator)功能紊乱。

本领域已知基于极低剂量的组胺抗体对胃肠道糜烂性疾病和炎性疾病进行治疗(RU 2197266C1)。然而，这一药物制剂不能确保在任何情况下对功能性肠紊乱都具有足够的治疗效力。

Dr.Oleg I.Epshtein已发现了经顺势疗法技术强化的极度稀释形式(或极低形式)抗体(活性强化形式，activated potentiated form)的治疗效果。例如，美国专利号7,582,294公开了通过给予抗前列腺特异性抗原(PSA)的、顺势疗法活性形式的抗体来治疗良性前列腺增生症(BenignProstatic Hyperplasia)或前列腺炎(prostatitis)的药剂。极低剂量的抗γ干扰素抗体已证明在病毒病因疾病的治疗和治疗性预防中有用。参见美国专利号7,572,441，以引用的方式将其内容整体并入本文。

S-100蛋白是主要在脑灰质中(主要在神经胶质细胞和施旺细胞中)发现的细胞质酸性钙结合蛋白。所述蛋白质以由两种免疫学上不同的亚基(α和β)组成的多种均二聚体或异二聚体异构体存在。已经提出将S-100蛋白用作诊断的辅助，并用于对脑病变和由于脑损伤(如中风)而造成的神经伤害进行评价。Yardan等，Usefulness of S100B Protein inNeurological Disorders，J Pak Med Assoc Vol.61，No.3，2011年3月，以引用的方式将其内容并入本文。

已证明极低剂量的抗S-100蛋白抗体具有抗焦虑(anxiolytic)、抗衰弱(anti-asthenic)、抗攻击(anti-aggressive)、应激保护(stress-protective)、抗缺氧(anti-hypoxic)、抗局部缺血(anti-ischemic)、神经保护(neuroprotective)和促智(nootropic)活性。参见Castagne V.等，Antibodiesto S100proteins have anxiolytic-like activity at ultra-low doses in the adultrat，J Pharm Pharmacol.，2008，60(3)：309-16；Epstein O.I.，Antibodies tocalcium-binding S100B protein block the conditioning of long-termsensitization in the terrestrial snail，Pharmacol Biochem Behav.，2009，94(1)：37-42；Voronina T.A.等，第8章，Antibodies to S-100protein inanxiety-depressive disorders in experimental and clinical conditions，In“Animal models in biological p sychiatry”，Kalueff A.V.N-Y著，“NovaScience Publishers，Inc.”，2006，第137-152页；以引用的方式将上述文献内容全部并入本文。

本发明针对复合药物组合物以及将其用于对胃肠道功能性紊乱进行治疗的方法，所述胃肠道功能性紊乱包括肠易激综合征和排泄功能紊乱。

对现有问题的解决方案以用于对胃肠道功能性病因(functionaletiology)的疾病或病症进行治疗和预防的复合药物组合物形式存在，所述复合药物组合物包含：活性强化形式的抗组胺抗体、活性强化形式的抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体以及活性强化形式的抗脑特异性S-100蛋白抗体。

发明内容

在一个方面，本发明提供了复合药物组合物，所述复合药物组合物包含：a)活性强化形式的抗S-100蛋白抗体、b)活性强化形式的抗组胺抗体、以及c)活性强化形式的抗TNF-α抗体。在一个实施方式中，复合药物组合物进一步包含固态载体，其中，将所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体、所述活性强化形式的抗组胺抗体、以及所述活性强化形式的抗TNF-α抗体浸渍至固态载体上。在一个变型中，复合药物组合物处于片剂形式。

优选地，复合药物组合物包含所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体处于C12、C30和C200顺势疗法稀释液(homeopathic dilutions)的混合物形式。特别在考虑之列的是，将所述C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物浸渍至固态载体上。

优选地，复合药物组合物包含所述活性强化形式的抗组胺抗体，所述活性强化形式的抗组胺抗体处于C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物形式。特别在考虑之列的是，将所述C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物浸渍至固态载体上。

优选地，复合药物组合物包含所述活性强化形式的抗TNF-α抗体，所述活性强化形式的抗TNF-α抗体处于C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物的形式。特别在考虑之列的是，将所述C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物浸渍至固态载体上。

活性强化形式的抗组胺抗体可为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体。特别在考虑之列的是，活性强化形式的抗组胺抗体为多克隆抗体。活性强化形式的抗S-100蛋白抗体可为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体。特别在考虑之列的是，活性强化形式的抗S-100蛋白抗体为多克隆抗体。活性强化形式的抗TNF-α抗体可为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体。特别在考虑之列的是，活性强化形式的抗TNF-α抗体为多克隆抗体。本发明提供了针对抗原的活性强化形式的抗体，所述抗原具有说明书中所述和所附的权利要求书中所要求保护的序列。

在一个变型中，复合药物组合物包含通过连续的百倍稀释(successivecentesimal dilution)、且每次稀释时伴以振荡而制备的活性强化形式的抗组胺抗体。在一个变型中，复合药物组合物包含通过连续的百倍稀释、且每次稀释时伴以振荡而制备的活性强化形式的抗S-100蛋白抗体。在一个变型中，复合药物组合物包含通过连续的百倍稀释、且每次稀释时伴以振荡而制备的活性强化形式的抗TNF-α抗体。特别在考虑之列的是竖直振荡(vertical shaking)。

在另一方面，本发明提供了对胃肠道功能性病因疾病或病症进行治疗的方法，所述方法包括向有需要的患者给予：a)活性强化形式的抗组胺抗体、b)活性强化形式的抗S-100蛋白抗体、以及c)活性强化形式的抗TNF-α抗体。优选地，将活性强化形式的抗组胺抗体、活性强化形式的抗S-100蛋白抗体、以及活性强化形式的抗TNF-α抗体以复合药物组合物的形式给药。

在考虑之列的是，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症本质上是心身性的(psychosomatic)。优选地，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症为肠易激综合征。在考虑之列的是，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症是腹痛(abdominal pain)。在考虑之列的是，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症是腹泻(diarrhea)。在考虑之列的是，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症是便秘(constipation)。在考虑之列的是，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症是胃肠道排泄功能障碍。

在一个实施方式中，复合药物组合物以固体口服剂型的形式给药，所述固体口服剂型包含药学上可接受的载体和浸渍至所述载体上的所述活性强化形式的抗组胺抗体、浸渍至所述载体上的所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体、以及浸渍至所述载体上的所述活性强化形式的抗TNF-α抗体。在一个变型中，所述固体口服剂型是片剂。提供了变型和实施方式。

根据本发明的方法方面，可将复合药物组合物以1-2单位剂型给药，各剂型每日给药1-4次。在一个变型中，复合药物组合物每日给药2次，每次给药由2种口服剂型组成。在一个变型中，复合药物组合物以1-2单位剂型给药，各剂型每日给药2次。可将关于本发明组合物方面所述的所有变型与实施方式以本发明的方法方面进行使用。关于本发明的方法方面，特别在考虑之列的是，本发明复合物的给药在患者代表性群体中伴有HADS分数在统计学意义上的显著降低。

特别在考虑之列的是，将复合药物组合物与另外的活性成分共同给药。在一个变型中，另外的活性成分被批准用于治疗肠易激综合征。变型和实施方式也在考虑之列。

具体实施方式

参考所附的权利要求书对本发明进行限定。考虑到权利要求书，下述术语汇编提供了有关定义。

本文所使用的术语“抗体”意味着特异性地结合至另一分子的特定空间和极性结构、并因此被定义为与另一分子的特定空间和极性结构互补的免疫球蛋白。权利要求书中所列举的抗体可包括完整免疫球蛋白或其片段，可为天然抗体、多克隆抗体或单克隆抗体，并可包括多个类及同种型，例如IgA、IgD、IgE、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3、IgM等。免疫球蛋白的片段可包括Fab、Fv和F(ab′)2以及Fab′等。单数“抗体(antibody)”包括复数“抗体(antibodies)”。

相对于本文所列举的抗体，术语“活性强化形式”或“强化形式”分别用于表示任意的抗体初始溶液的顺势疗法强化产物。“顺势疗法强化”表示利用顺势疗法的方法对有关物质的初始溶液赋予顺势疗法效力(potency)。尽管不限于此，但是“顺势疗法强化”可包括例如结合外部处理、尤其是竖直(机械)振荡的重复的连续稀释。换句话说，根据顺势疗法技术，对抗体的初始溶液进行连续的重复稀释并对每次获得的溶液进行多次竖直振荡。抗体处于溶剂(优选水或水-乙醇混合物)中的初始溶液的优选浓度范围为约0.5mg/ml至约5.0mg/ml。制备各组分(即抗体溶液)的优选过程为：使用抗体初级基质溶液(primary matrix solution)(原始酊剂，mother tincture)分别被稀释100¹²、100³⁰和100²⁰⁰倍的3种水稀释液或水-醇稀释液的混合物，相当于百倍的顺势疗法稀释液(C12、C30和C200)；或者使用抗体初级基质溶液分别被稀释100¹²、100³⁰和100⁵⁰倍的3种水稀释液或水-醇稀释液的混合物，相当于百倍的顺势疗法稀释液(C12、C30和C50)。在美国专利号7,572,441和7,582,294中描述了顺势疗法强化的实例，以引用的方式将其内容整体并入本文并用于所述目的。同时，术语“活性强化形式”用在权利要求书中，术语“极低剂量”用在实施例中。术语“极低剂量”在通过研究和使用顺势疗法稀释和强化形式的物质而产生的领域中成为行业术语。术语“极低剂量”意味着完全支持并与权利要求书中所使用的术语“活性强化”形式基本上同义。

换句话说，当存在三个因素时，抗体处于“活性强化”或“强化”形式。首先，“活性强化”形式的抗体为顺势疗法领域广泛接受的制备方法的产品。其次，“活性强化”形式的抗体必须具备通过现代药物学广泛接受的方法确定的生物活性。第三，“活性强化”形式的抗体所表现出的生物活性不能由顺势疗法方法终产物中的抗体分子形式的存在加以解释。

例如，抗体的活性强化形式可通过使处于分子形式的初始独立抗体经受伴以外部作用(如机械振荡)的连续多重稀释而制备。浓度降低过程中的外部处理还可通过例如暴露至超声、电磁或其它物理因素来完成。V.Schwabe，“Homeopathic medicines”，M.，1967，美国专利号7,229,648和4,311,897(以引用的方式将其内容整体并入本文并用于所述目的)描述了顺势疗法领域中广泛接受的顺势疗法强化方法。这一过程使得初始分子形式抗体的分子浓度均匀降低。重复这一过程直至获得期望的顺势疗法效力。对于单独的抗体，可通过将中间稀释液在期望的药理学模型中进行生物测试来确定所需的顺势疗法效力。尽管不限于此，但是“顺势疗法强化”可包括例如与外部处理、尤其是竖直(机械)振荡相结合的重复的连续稀释。换句话说，根据顺势疗法技术，对抗体的初始溶液进行连续的重复稀释并对每次获得的溶液进行多次竖直振荡。抗体处于溶剂(优选水或水-乙醇混合物)中的初始溶液的优选浓度范围为约0.5mg/ml至约5.0mg/ml。制备各组分(即抗体溶液)的优选过程为：使用抗体初级基质溶液(原始酊剂)分别被稀释100¹²、100³⁰和100²⁰⁰倍的3种水稀释液或水-醇稀释液的混合物，相当于百倍的顺势疗法稀释液C12、C30和C200；或者使用抗体初级基质溶液分别被稀释100¹²、100³⁰和100⁵⁰倍的3种水稀释液或水-醇稀释液的混合物，相当于百倍的顺势疗法稀释液C12、C30和C50。例如在美国专利号7,229,648和4,311,897中，也提供了如何获得期望效力的实例，以引用方式将其并入本文用于所述目的。在下文将更加详细地描述适用于本文所述的“活性强化”形式抗体的过程。

关于用顺势疗法对人类受试者进行治疗已有许多争议。虽然本发明依靠已接受的顺势疗法方法来获得“活性强化”形式的抗体，但是其并不仅仅依赖于在人类受试者中进行顺势疗法来证明其活性。本申请的发明人出乎预料地发现、并在已接受的药理学模型中充分证明，由起始分子形式的抗体进行连续多次稀释而最终得到的溶剂具有明确的活性，且与痕量分子形式抗体在目标稀释液中的存在无关。将本文所提供的“活性强化”形式的抗体在广泛接受的药理学活性模型中(在适当的体外实验中或在体内于合适的动物模型中)测试其生物活性。下文进一步提供的实验提供了在此类模型中的生物活性的证据。人类临床研究也提供了如下证据：在动物模型中观察到的活性被很好地转换至人类治疗。人类研究还提供了如下证据：本文所述的“活性强化”形式可用于对在医学科学中作为病理症状而广泛接受的具体人类疾病或紊乱进行治疗。

同样，所要求保护的“活性强化”形式的抗体仅涵盖溶液或固体制剂，所述溶液或固体制剂的生物活性不能由初始、起始溶液中余留的分子形式抗体的存在进行解释。换句话说，虽然“活性强化”形式的抗体可包含痕量的初始分子形式抗体也在考虑之列，但是由于连续稀释后余留的分子形式抗体的浓度极低，因此本领域技术人员不能以任何程度的合理性将在已接受的药理学模型中观察到的生物活性归因于余留的分子形式抗体。虽然本发明并不受任何具体理论的限制，但是本发明的“活性强化”形式抗体的生物活性并不归因于初始分子形式的抗体。优选“活性强化”形式的抗体处于液体形式或固体形式，其中，分子形式抗体的浓度低于所接受的分析技术(如毛细管电泳和高效液相色谱)的检测限。特别优选“活性强化”形式的抗体处于液体形式或固体形式，其中，分子形式抗体的浓度低于阿伏伽德罗常数。在分子形式治疗物质的药物学中，通常制作剂量-响应曲线，在该曲线中，以药理学响应水平对所给予受试者或在体外进行测试的活性药物的浓度作图。产生任何可检测响应的药物最低水平被称为阈剂量(threshold dose)。特别在考虑之列并优选的是，“活性强化”形式的抗体以低于所给定生物学模型中的分子形式抗体的阈剂量的浓度包含分子抗体(如果有的话)。

当存在以任意显著程度干扰患者机能的GIT功能紊乱时，术语“胃肠道功能性病因的疾病或病症”或“功能性肠紊乱(functional boweldisorder)”应理解为涵盖了此类GIT(包括肠)疾病或病症。然而特别地，这一术语意味着对如下紊乱或病症进行定义：并不是由于组织损伤而观察和体验到的紊乱或病症，而是在消化道活动的调节中(例如，当肠的组织损伤完全不存在或在疾病病因和/或患者体验中起次要作用时)，在神经、心身性和/或体液扰动(humoral disturbance)方面的紊乱或症状。功能性肠紊乱的特征在于不存在形态改变(通过这一点能够解释临床症状)，还在于其与下述方面的联系：(1)增高的兴奋性、(2)感觉超敏性、(3)社会心理因素影响下的内脏器官对中枢神经系统信号的不充分反应。

功能性肠紊乱是胃肠道功能性病因的最常见形式，并在40-70％的胃肠病性质(gastroenterological profile)患者中注意到。认为功能性肠紊乱的发病受遗传因素、环境因素、社会心理学因素、内脏超敏性以及传染的影响。功能性肠紊乱是涉及功能性病因的众多胃肠道疾病中的一部分，并且根据功能性肠紊乱的分类(罗马共识，1999)，功能性肠紊乱包括如肠易激综合征(IBS)、功能性胀气、功能性便秘、功能性腹泻及非特异性功能性肠紊乱这些临床病症。

在这些疾病的病因中，胃和肠的运动机能障碍被认为起实质性作用。患有功能性肠紊乱的患者的特别特征是运动和感觉反应增强、以及应答应激(stress)时表现出腹痛。功能性肠紊乱的症状包括下述疾患：腹痛(通常在排便后减轻)、胀气、腹鸣(grumbling)、感觉肠未完全排空、排便急迫感、便秘、腹泻或上述疾患的交替和/或组合。所有胃肠道功能性紊乱的特征性临床表现包括：持久(通常数年)而无显著进展的疾病过程；临床现象所呈现的宽泛性(breadth)及多样性，胃痛、消化不良紊乱和肠功能扰动与偏头痛型头痛、睡眠紊乱、伴随摄食的昏迷感、吸入不满(dissatisfaction of inhalation)、不能左侧卧睡眠、较频繁排尿、多种结肠痉挛反应以及其它植物性紊乱的组合；可变性质的疾患；健康恶化与心理-情绪因素的联系。

肠易激综合征(IBS)是最常见的功能性肠紊乱之一，如近年的观察所示，在第三世界国家与发达国家均发现了肠易激综合征。世界上大多数国家的IBS患病率平均为20％，根据不同研究的数据在9-48％间变化。在年轻的劳动年龄(30-40岁)期间发病达到峰值。女性与男性的比例为1∶1至2∶1。IBS在50岁以上的男性中与在女性中的分布程度相同。患者的平均年龄为24-41岁。肠易激综合征(IBS)为现代人群最常见疾病之一。

IBS的病因和发病机理很复杂，并未彻底明白。大多数研究人员认为心理情绪压力在IBS发病中可能起重要作用。根据主要症状，IBS的三种可能过程可分为：主要为腹痛与胀气、主要为腹泻、以及主要为便秘。

1988年之前，IBS由不同的名称进行描述，例如痉挛性结肠炎(spasticcolitis)、粘液性绞痛(mucous colic)、神经性腹泻(nervous diarrhea)、大肠易激(irritated large intestine)和功能性肠伤害综合征(functionalintestinal distress syndrome)等。这些名称反映了所述疾病的不同症状，并未反映出对问题的统一理解。1988年在罗马，胃肠道(GIT)功能性紊乱的国际研究小组首次官方确认了“肠易激综合征”这一表述，给出了其定义并确立了进行诊断的标准，这随后被称为“IBS的罗马标准”。1999年，增补了所述标准，并将其称为“IBS的罗马II标准”。根据“罗马II标准”，IBS为在最近12个月内持续不少于12周的一系列功能性紊乱，显示出胃痛和/或不适(排便后停止)，伴有大便稠度和频率的改变，并在25％的发病时间内与如下肠功能扰动的至少两项稳定症状结合：大便频率、粪便稠度、排便的现时表现(急迫感、里急后重(tenesmus)、排不尽感、排便费力)的改变；胀气以及随粪便分泌粘液。

在治疗这一综合征时，常用的其它制剂为肠运动活性调节剂以及解痉药(spasmolytic agent)。

本发明提供了复合药物组合物，所述复合药物组合物包含：活性强化形式的抗组胺抗体、活性强化形式的抗TNF-α抗体以及活性强化形式的抗脑特异性蛋白S-100抗体，如下文中更加详细的描述，各抗体均可根据强化的顺势疗法技术通过重复、持续的稀释和中间产物的外部振荡作用来制备。本发明的复合药物组合物在功能性肠紊乱的治疗方面特别有用。如实施例中所示，本发明的复合药物组合物具备预料不到的协同治疗效果，这显示了复合药物组合物本身特别是在功能性肠紊乱、尤其是肠易激综合征、GIT(包括肠)排泄功能紊乱、便秘、腹泻及其它类似病因的紊乱的治疗方面具有疗效。如广泛接受且合适的实验模型中所示，所述复合药物组合物的作用显示了复合药物组合物本身例如使肠功能的神经性、心身性和体液调节正常化、降低内脏对大肠感受器扩张的超敏感性(hypersensitivity)并使肠内运动系统扰动复原、减轻腹胀感和胃胀感、减弱腹痛综合征的表现。同时，存在弱化平滑肌、降低胃肠道(GIT)壁张力、降低孔内压(intra-aperture pressure)、使大便稠度、其频率和相关症状(减轻急迫感、虚假的排便急迫感、排不尽感、排便费力及其它)正常化。

特别在考虑之列的是，本发明的复合药物组合物可与其它活性成分、特别是用于治疗GIT疾病或病症的活性成分组合使用。适当的另外的活性成分的非限制性实例包括：5-HT3拮抗剂，如阿洛司琼(Alosetron)、西兰司琼(Cilansetron)、雷莫司琼(Ramosetron)；5-HT4拮抗剂，如替加色罗(Tegaserod)；5-HT4激动剂/5-HT3拮抗剂混合物，如伦扎必利(Renzapride)和莫沙必利(Mosapride)；阿片类药剂，如爱维莫潘(alvimopan)和阿西玛多林(asimadoline)；促肾上腺皮质素释放激素(CRH)受体拮抗剂；氯离子通道活化剂，如鲁比前列酮(Lubiprostone)；胆囊收缩素(CCK)拮抗剂，如右氯谷胺(Dexloxiglumide)；神经激肽拮抗剂；抗抑郁剂、包括三环类抗抑郁剂(tricyclic antidepressants)，如阿米替林(Amitriptyline)、氯米帕明(Clomipramine)、地美替林(Demexiptiline)、丙咪嗪(Imipramine)、洛非帕明(Lofepramine)、美他帕明(Metapramine)、硝沙西平(Nitroxazepine)、去甲替林(Nortriptyline)、哌泊非嗪(Pipofezine)、丙吡西平(Propizepine)、普罗替林(Protriptyline)以及奎纽帕明(Quinupramine)；选择性5-羟色胺重摄取抑制剂(SSRIs)，如西酞普兰(citalopram)、达泊西丁(dapoxetine)、依他普仑(escitalopram)、氟西汀(fluoxetine)、氟伏沙明(fluvoxamine)、帕罗西汀(paroxetine)、舍曲林(sertraline)、维拉佐酮(vilazodone)；解痉药；抗胆碱能剂/抗毒蕈碱剂(anticholinergics/antimuscarinic agents)，如莨菪碱(hyoscyamine)、双环胺(dicyclomine)、西托溴铵(cimetropium)；直接平滑肌松弛剂(direct smooth muscle relaxing agent)，如美贝维林(mebeverine)、pinaverine、奥替溴铵(octylonium bromide)；止泻药，如洛哌丁胺(loperamide)；苯二氮

类物质，如bextofisopam；以及抗生素，如林可酰胺(lincosamides)、头孢菌素(cephalosporins)、安莎霉素(ansamycin)、氨基糖苷(aminoglycoside)、青霉素、喹诺酮、磺酰胺、四环素、大环内酯、林可酰胺、单酰胺菌素(monobactam)和硝基呋喃。

本发明的药物组合物扩展了可用于对功能性肠紊乱进行预防与治疗的制剂库。

可通过使用佐剂和工业上制造的二盐酸组胺作为免疫原(抗原)对兔进行免疫来获得抗组胺多克隆抗体，所述组胺为生物胺(化学式为C₅H₉N₃的β-咪唑基乙胺或4-(2-氨基乙基)-咪唑)。

在取血之前，在7-9日内静脉注射1-3次以提高抗体水平。在兔免疫过程中，抽少量血样以评估抗体数量。针对所引入的大多数可溶性抗原的免疫应答在首次注射40-60天后达到最高水平。在第一个兔免疫周期结束后，在30天内使之恢复健康并进行再次免疫，包括1-3次静脉注射。为了从经免疫的兔中获得抗血清，将血液收集于容积为50ml的离心试管中。借助于木质药匙，从试管壁移除所形成的凝块，将搅拌棒(stick)放置于试管中心所形成的凝块中。将血液放置于冷却器(温度40℃)中过夜。第二天，将固定至药匙的血块移除，将剩余液体在13000g下离心10min。上清液(上清液体)为抗血清。所获得的抗血清应为黄色。向抗血清中加入20wt％的NaN₃至其终浓度为0.02％，将所述抗血清贮存于温度为-20℃的冷冻条件下至使用，或者不加入NaN₃并贮存于-70℃下至使用。为了分离组胺抗体的抗血清，按以下顺序进行固相吸附：

1.将10ml兔抗血清用0.15M的NaCl稀释2倍，加入6.26g Na₂SO₄，混合并在4℃下孵育12-16小时；

2.将下沉的沉淀经离心移除，溶于10ml的磷酸盐缓冲液中，然后用相同的缓冲液在室温下透析过夜；

3.经离心移除沉淀后，将溶液加样至DEAE-纤维素柱，用磷酸盐缓冲液进行平衡；

4.在280nm处对洗脱液的光学密度进行测量，确定抗体馏分。

随后，由亲和色谱法通过将所得抗体固定至处于不溶性基质中的组胺、随后用浓的盐溶液进行洗脱，来对抗体进行纯化。

将由此获得的针对抗原纯化的多克隆兔抗组胺抗体缓冲液(浓度为0.5-5.0mg/ml、优选为2.0-3.0mg/ml)用作基质(初级)溶液，用于随后制备活性强化形式。

可通过上述获得多克隆组胺抗体的方法、使用具有以下序列的肿瘤坏死因子α的整个分子来获得抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)多克隆抗体：

SEQ.ID.NO.1

Met Ser Thr Glu Ser Met Ile Arg Asp Val Glu Leu Ala Glu Glu

1 5 10 15

Ala Leu Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Gln Gly Ser Arg Arg Cys

16 20 25 30

Leu Phe Leu Ser Leu Phe Ser Phe Leu Ile Val Ala Gly Ala Thr

31 35 40 45

Thr Leu Phe Cys Leu Leu His Phe Gly Val Ile Gly Pro Gln Arg

46 50 55 60

Glu Glu Phe Pro Arg Asp Leu Ser Leu Ile Ser Pro Leu Ala Gln

61 65 70 75

Ala Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala

76 80 85 90

His Val Val Ala Asn Pro Gln Ala Glu Gly Gln Leu Gln Trp Leu

91 95 100 105

Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg

106 110 115 120

Asp Asn Gln Leu Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr

121 125 130 135

Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val

136 140 145 150

Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln Thr

151 155 160 165

Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gln Arg Glu

166 170 175 180

Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr

181 185 190 195

Leu Gly Gly Val Phe Gln Leu Glu Lys Gly Asp Arg Leu Ser Ala

196 200 205 210

Glu Ile Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly Gln

211 215 220 225

Val Tyr Phe Gly Ile Ile Ala Leu

226 230 233

为了获得抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)多克隆抗体，还可使用选自例如以下序列的肿瘤坏死因子的多肽片段：

SEQ.ID.NO.2

Pro Ser Asp Lys Pro

84 88

SEQ.ID.NO.3

Val Ala Asn Pro Gln

93 97

SEQ.ID.NO.4

Arg Asp Leu Ser Leu Ile Ser Pro Leu Ala Gln

65 70 75

Ala Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala

76 80 85 90

His Val Val Ala Asn Pro Gln Ala Glu Gly Gln Leu Gln Trp Leu

91 95 100 105

Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg

106 110 115 120

Asp Asn Gln Leu Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr

121 125 130 135

Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val

136 140 145 150

Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln Thr

151 155 160 165

Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gln Arg Glu

166 170 175 180

Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr

181 185 190 195

Leu Gly Gly Val

196 199

SEQ.ID.NO.5

Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala

77 80 85 90

His Val Val

91 93

SEQ.ID.NO.6

Phe Leu Ser Leu Phe Ser Phe Leu Ile Val Ala Gly Ala Thr

32 35 40 45

Thr Leu Phe Cys Leu Leu His Phe Gly

46 50 54

SEQ.ID.NO.7

56-73

Ile Gly Pro Gln Arg

56 60

Glu Glu Phe Pro Arg Asp Leu Ser Leu Ile Ser Pro Leu

61 65 70 73

SEQ.ID.NO.8

123-160

Gln Leu Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr

123 125 130 135

Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val

136 140 145 150

Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala

151 155 160

SEQ.ID.NO.9

176-190

Pro Cys Gln Arg Glu

176 180

Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp

181 185 190

SEQ.ID.NO.10

5-45

Ser Met Ile Arg Asp Val Glu Leu Ala Glu Glu

5 10 15

Ala Leu Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Gln Gly Ser Arg Arg Cys

16 20 25 30

Leu Phe Leu Ser Leu Phe Ser Phe Leu Ile Val Ala Gly Ala Thr

31 35 40 45

SEQ.ID.NO.11

150-184

Val

150

Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln Thr

151 155 160 165

Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gln Arg Glu

166 170 175 180

Thr Pro Glu Gly

181 184

SEQ.ID.NO.12

77-233

Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala

77 80 85 90

His Val Val Ala Asn Pro Gln Ala Glu Gly Gln Leu Gln Trp Leu

91 95 100 105

Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg

106 110 115 120

Asp Asn Gln Leu Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr

121 125 130 135

Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val

136 140 145 150

Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln Thr

151 155 160 165

Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gln Arg Glu

166 170 175 180

Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr

181 185 190 195

Leu Gly Gly Val Phe Gln Leu Glu Lys Gly Asp Arg Leu Ser Ala

196 200 205 210

Glu Ile Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly Gln

211 215 220 225

Val Tyr Phe Gly Ile Ile Ala Leu

226 230 233

由神经元细胞与神经胶质细胞(星形细胞和少突胶质细胞)表达的脑特异性S-100蛋白，直接或通过与其它蛋白相互作用在CNS中执行许多针对维持正常脑部机能的功能，包括影响学习和记忆过程、神经元的生长和生存力、神经元组织中代谢过程的调节及其它。为了制备活性强化形式的抗体，可按如下步骤从牛的脑组织中移出抗脑特异蛋白S-100抗血清并进行处理：

-使用专门的研磨装置将液氮冷冻的牛脑组织磨成粉末；

-以1∶3(重量/体积)的比例使用提取缓冲液经匀化作用提取蛋白；

-将匀浆在60℃下加热10min，然后在冰浴中冷却至4℃；

-通过离心移除热不稳定蛋白；

-分阶段进行硫酸铵分级分离，然后移除沉淀的蛋白；

-使用通过将pH降至4.0实现的100％饱和硫酸铵对含S-100蛋白的馏分进行沉淀；通过离心收集期望的馏分；

-将沉淀物溶于含EDTA和巯基乙醇的最小体积缓冲液中，将沉淀物用去离子水进行透析，然后冻干；

-随后通过离子交换介质色谱、DEAE-纤维DE-52色谱以及DEAE-sephadex A-50色谱对酸性蛋白分级分离；

-将经收集并透析的馏分(含S-100蛋白)根据分子量在sephadexG-100上通过凝胶过滤进行分离；

-将纯化的S-100蛋白进行透析和冻干。

纯化的脑特异蛋白S-100的分子量为21000D。

还可通过类似于所述的用于组胺抗体的方法，使用佐剂来获得抗S-100蛋白多克隆抗体。可将S-100蛋白的整个分子用作兔免疫的免疫原(抗原)。

牛S100B(SEQ.ID.NO.13)

Met Ser Glu Leu Glu Lys Ala Val Val Ala Leu Ile Asp Val Phe

1 5 10 15

His Gln Tyr Ser Gly Arg Glu Gly Asp Lys His Lys Leu Lys Lys

16 20 25 30

Ser Glu Leu Lys Glu Leu Ile Asn Asn Glu Leu Ser His Phe Leu

31 35 40 45

Glu Glu Ile Lys Glu Gln Glu Val Val Asp Lys Val Met Glu Thr

46 50 55 60

Leu Asp Ser Asp Gly Asp Gly Glu Cys Asp Phe Gln Glu Phe Met

61 65 70 75

Ala Phe Val Ala Met Ile Thr Thr Ala Cys His Glu Phe Phe Glu

76 80 85 90

His Glu

91 92

人S100B(SEQ.ID.NO.14)

Met Ser Glu Leu Glu Lys Ala Met Val Ala Leu Ile Asp Val Phe

1 5 10 15

His Gln Tyr Ser Gly Arg Glu Gly Asp Lys His Lys Leu Lys Lys

16 20 25 30

Ser Glu Leu Lys Glu Leu Ile Asn Asn Glu Leu Ser His Phe Leu

31 35 40 45

Glu Glu Ile Lys Glu Gln Glu Val Val Asp Lys Val Met Glu Thr

46 50 55 60

Leu Asp Asn Asp Gly Asp Gly Glu Cys Asp Phe Gln Glu Phe Met

61 65 70 75

Ala Phe Val Ala Met Val Thr Thr Ala Cys His Glu Phe Phe Glu

76 80 85 90

His Glu

91 92

人S100A1(SEQ.ID.No.15)

Met Gly Ser Glu Leu Glu Thr Ala Met Glu Thr Leu Ile Asn Val

1 5 10 15

Phe His Ala His Ser Gly Lys Glu Gly Asp Lys Tyr Lys Leu Ser

16 20 25 30

Lys Lys Glu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Thr Glu Leu Ser Gly Phe

31 35 40 45

Leu Asp Ala Gln Lys Asp Val Asp Ala Val Asp Lys Val Met Lys

46 50 55 60

Glu Leu Asp Glu Asn Gly Asp Gly Glu Val Asp Phe Gln Glu Tyr

61 65 70 75

Val Val Leu Val Ala Ala Leu Thr Val Ala Cys Asn Asn Phe Phe

76 80 85 90

Trp Glu Asn Ser

91 94

牛S100A1(SEQ.ID.NO.16)

Met Gly Ser Glu Leu Glu Thr Ala Met Glu Thr Leu Ile Asn Val

1 5 10 15

Phe His Ala His Ser Gly Lys Glu Gly Asp Lys Tyr Lys Leu Ser

16 20 25 30

Lys Lys Glu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Thr Glu Leu Ser Gly Phe

31 35 40 45

Leu Asp Ala Gln Lys Asp Ala Asp Ala Val Asp Lys Val Met Lys

46 50 55 60

Glu Leu Asp Glu Asn Gly Asp Gly Glu Val Asp Phe Gln Glu Tyr

61 65 70 75

Val Val Leu Val Ala Ala Leu Thr Val Ala Cys Asn Asn Phe Phe

76 80 85 90

Trp Glu Asn Ser

91 94

为获得脑特异性抗血清以分离出脑特异性蛋白S-100，经纯化S-100蛋白(抗原)的混合物可被制备成通过甲基化牛血清白蛋白作为介质与完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant)络合，将其以1-2ml的量经皮下注射入实验动物(兔)的脊柱区域。抗血清可具有1∶500-1∶1000的效价(titer)。

为制备复合药物组合物的组分，优选使用通过采用浓度为0.5-5.0mg/ml(优选2.0-3.0mg/ml)的初始基质(初级)溶液得到的抗组胺多克隆抗体、抗TNF-α多克隆抗体及脑特异蛋白S-100多克隆抗体。随后，如下文中更加详细的描述，将基质溶液稀释以制备活性强化形式的组分。

复合药物组合物可处于液态或固态形式。药物组合物中所含的各活性强化形式抗体由初始分子形式的抗体通过顺势疗法领域所接受的方法制备。起始抗体可为根据已知方法制备的单克隆抗体或多克隆抗体，所述已知方法例如Immunotechniques，G.Frimel，M.，“Meditsyna”，1987，第9-33页；“Hum.Antibodies.Monoclonal and recombinant antibodies，30years after”，Laffly E.，Sodoyer R.著，2005，Vol.14.，N1-2.，第33-55页中所述，以引用的方式将其内容并入本文。

单克隆抗体可通过如杂交瘤技术获得。所述方法的初始步骤包括基于已在多克隆抗血清制备过程中开发出的原则进行免疫。工作的进一步步骤包括制备出产生具有相同特异性的抗体克隆的杂交细胞。其各自的分离使用与多克隆抗血清制备的情况中相同的方法进行。

多克隆抗体可通过动物的主动免疫获得。为了这一目的，例如使合适的动物(如兔)接受适当抗原的一系列注射。动物的免疫系统产生相应的抗体，以已知方法从动物中进行收集。这一过程使得能够制备富含单特异性抗体的血清。

如果需要的话，包含抗体的血清例如可通过使用亲和色谱、盐沉淀分级分离或离子交换色谱进行纯化。可将所得到的经纯化的、富含抗体的血清用作制备活性强化形式抗体的起始材料。所得到的处于溶剂(优选水或水-乙醇混合物)中的初始抗体溶液的优选浓度范围为约0.5mg/ml至约5.0mg/ml。

制备本发明所述复合药物的各组分的优选过程为：使用抗体初级基质溶液分别被稀释100¹²、100³⁰和100⁵⁰倍的3种水-醇稀释液的混合物，相当于百倍的顺势疗法稀释液C12、C30和C50；或者使用抗体初级基质溶液分别被稀释100¹²、100³⁰和100²⁰⁰倍的3种水-醇稀释液的混合物，相当于百倍的顺势疗法稀释液C12、C30和C200。为制备固体剂型，将固态载体通过顺势疗法方法用所获得的期望稀释液进行处理。为获得本发明复合物的固体单位剂型，用各稀释液对载体物质进行浸渍。特别在考虑之列的是，以任意顺序对固态载体进行浸渍以制备期望的复合固体剂型，包括用必需的终稀释液或稀释液混合物以任意顺序依次对载体进行浸渍，以及用所有组分的液体混合物对载体进行浸渍。

在优选的实施方式中，用于制备包含本发明所述复合物的活性强化形式的起始材料是针对相应抗原的动物产多克隆抗体。

制备起始多克隆抗体的示例性过程可描述如下。在采血前7-9天，将期望抗原经1-3次静脉注射至兔，以增高兔血流中的多克隆抗体水平。一旦免疫后，采集血样以测试抗体水平。通常，可溶性抗原免疫反应在抗原第一次注射后40-60天内达到最高水平。第一个免疫周期结束后，兔具有30天的康复期，之后经另外的1-3次静脉注射进行再次免疫。

为获得包含期望抗体的抗血清，从兔中收集免疫后的兔血液并置于50ml离心管中。用木质药匙将试管壁上所形成的产物凝块移除，将搅拌棒置于试管中心的凝块中。然后将血液放置于冷却器中于40℃的温度下过夜。第二天，将药匙上的血块移除，将剩余液体在13000转/分下离心10min。上清液体为目标抗血清。所获得的抗血清通常为黄色。向抗血清加入20wt％的NaN₃至最终浓度为0.02％并在-20℃的温度下于冷冻状态贮存至使用，或者不加入NaN₃而在-70℃的温度下贮存至使用。为了从抗血清中分离目标抗体，下述固相吸附顺序很适合：

将10ml兔抗血清用0.15M的NaCl稀释2倍，之后加入6.26g Na₂SO₄，混合并在4℃下孵育12-16小时。将沉淀物经离心移除，在10ml磷酸盐缓冲液中稀释并使用相同的缓冲液在环境温度下透析过夜。移除沉淀物后，将溶液加样至用磷酸盐缓冲液平衡后的DEAE-纤维素柱。通过在280nm处对洗脱液的光密度进行测量来确定抗体馏分。

使用亲和色谱法，通过将所获得的抗体附至色谱介质的不溶性基质、并随后用浓盐水溶液洗脱，对所分离出的粗抗体进行纯化。

将所得的缓冲溶液用作顺势疗法稀释方法的起始溶液，所述顺势疗法稀释方法用来制备活性强化形式的抗体。

活性强化形式的复合物各组分可由初始溶液经顺势疗法强化来制备，优选使用通过连续稀释来成比例降低浓度的如下方法：将1份的各在先溶液(preceding solution)(由初始溶液开始)连续稀释于9份(十倍稀释)、或连续稀释于99份(百倍稀释)、或连续稀释于999份(千倍稀释)的中性溶剂中，用浓度范围为约0.5mg/ml至约5.0mg/ml的处于溶剂(优选水或水-乙醇混合物)中的初始抗体溶液伴以外部作用来起始。所述外部作用优选包括每次稀释时的多次竖直振荡(稀释增效法，dynamization)。优选将单独的容器用于后续各次稀释直至所需效力水平或稀释系数。这一方法在顺势疗法领域中被广泛接受。参见例如V.Schwabe，“Homeopathic medicines”，M.，1967，第14-29页，以引用的方式将其并入本文用于所述目的。

例如，为了制备第12百倍稀释液(表示为C12)，将1份浓度为3.0mg/ml的抗组胺抗体的初始基质溶液稀释于99份中性水溶剂或水-醇溶剂(优选15％乙醇)中，并随后进行多次(10次以上)竖直振荡以制成第1百倍稀释液(表示为C1)。第2百倍稀释液(C2)由第1百倍稀释液C1制备。将这一过程重复11次，从而制得第12百倍稀释液C12。因此，第12百倍稀释液C12表示通过将1份浓度为3.0mg/ml的抗体的初始基质溶液在处于不同容器内的99份中性溶剂中连续稀释12次所获得的溶液，相当于百倍顺势疗法稀释液C12。以相应的稀释系数进行类似过程，获得期望的稀释液。可将中间稀释液在期望的生物模型中进行测试以检测活性。用于本发明复合物中的抗体的优选活性强化形式为各活性强化形式的C12、C30和C200稀释液。当将活性物质的多种顺势疗法稀释液(主要为百倍稀释液)的混合物用作生物活性液体组分时，组合物的各组分(如，C12、C30、C50、C200)分别根据上述过程制备，直至获得倒数第二份稀释液(例如，分别直至C11、C29和C199)，然后根据混合物组成将1份的各组分加入一个容器中，并与所需量的溶剂(如，用97份以进行百倍稀释)进行混合。

可将活性物质作为多种顺势疗法稀释液、例如十倍和/或百倍稀释液(D20、C30、C100或C12、C30、C50或C12、C30、C200等)的混合物来使用，其效力通过在合适的生物模型、例如本文实施例所述的模型中对稀释液进行测试，从而以实验的方式确定。

在强化和浓度降低的过程中，可将竖直振荡替代为外部暴露至超声、电磁场、或顺势疗法领域中接受的任何类似的外部作用过程。

可通过使用活性强化形式的活性组分水溶液或水-醇溶液的混合物对药学上可接受的固态载体进行浸渍，来制备本发明药物组合物的固体单位剂型，所述活性组分水溶液或水-醇溶液主要以1∶1∶1的比例进行混合并以液态剂型加以使用。或者，可用各所需稀释液对载体进行连续浸渍。

优选处于固体单位剂型的药物组合物由药学上可接受的载体的颗粒制备，所述颗粒预先用活性强化形式抗体的水稀释液或水-醇稀释液饱和。固体剂型可为药学领域中已知的任何剂型，包括片剂、胶囊、锭剂及其它。作为非活性药物成分，可使用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉、异麦芽糖、异麦芽酮糖醇(isomalt)及制药中使用的其它单糖、寡糖和多糖，还可使用上述非活性药物成分与其它药学上可接受的赋形剂的工艺混合物，所述赋形剂如异麦芽酮糖醇、交联聚维酮、甜蜜素(sodiumcyclamate)、糖精钠、无水柠檬酸等，包括润滑剂、崩解剂、粘结剂和着色剂。优选的载体为乳糖和异麦芽酮糖醇。药物剂型可进一步包含标准的药物赋形剂，例如微晶纤维素和硬脂酸镁。

制备固体单位剂型的实施例如下所述。为制备固体口服剂型，将乳糖的100-300μm颗粒用活性强化形式的抗组胺抗体、活性强化形式的抗TNF-α抗体或活性强化形式的抗S-100蛋白抗体的水溶液或水-醇溶液、以1kg抗体溶液对5kg或10kg乳糖(1∶5至1∶10)的比例进行浸渍。为有效浸渍，使乳糖颗粒在沸腾床设备(如，Hüttlin GmbH的“HüttlinPilotlab”)中的流化床中接受饱和灌洗(saturation irrigation)，随后经由加热的空气流在低于40℃的温度下进行干燥。将用活性强化形式抗体饱和的估计量的干燥颗粒(10-34重量份)置于混合器内，并与25-45重量份的“非饱和”纯乳糖(用于在不降低治疗功效的情况下，降低成本、简化和加速工艺方法的目的)、以及0.1-1重量份的硬脂酸镁和3-10重量份的微晶纤维素一起进行混合。将所获得的片状物质进行均匀混合，并通过直接干压成型(如，在Korsch-XL400压片机中)进行压片，从而形成150-500mg、优选300mg的圆丸。压片后，获得300mg的丸剂，所述丸剂用活性强化形式抗体的复合物的水-醇溶液饱和(3.0-6.0mg/丸)。用于浸渍载体的各复合物组分均处于百倍顺势疗法稀释液、优选C12、C30和C200的混合物的形式。

尽管本发明并不受任何具体理论限制，但是认为，本文所述的活性强化形式抗体并不包含足够具有归因于此类分子形式的生物活性的量的分子形式抗体。本发明复合药物(复合药物组合物)的生物活性在所附的实施例中得以充分说明。

为了治疗目的，本发明复合物优选每日给药1-4次，优选每日给药2次，每次给药包括1-2单位复合剂型。

参考所附的非限制性实施例对本发明进行进一步的说明。

实施例

实施例1

通过三个实验性研究对以下抗体的作用进行了研究：i)极低剂量的抗组胺抗体(His Ab)，用抗原进行亲和纯化，通过初始基质溶液的高度稀释(100¹²、100³⁰和100²⁰⁰稀释液(C12、C30和C200)的混合物)而获得；以及ii)如下抗体的复合物(S100Ab+TNF Ab+His Ab)：a)极低剂量的抗组胺抗体(His Ab)，用抗原进行亲和纯化，通过初始基质溶液的高度稀释(100¹²、100³⁰和100²⁰⁰稀释液(C12、C30和C200)的混合物)而获得、b)极低剂量的抗S-100蛋白抗体(S-100Ab)，用抗原进行亲和纯化，通过初始基质溶液的高度稀释(100¹²、100³⁰和100²⁰⁰稀释液(C12、C30和C200)的混合物)而获得、以及c)极低剂量的抗肿瘤坏死因子α抗体(TNF Ab)，用抗原进行亲和纯化，通过初始基质溶液的高度稀释(100¹²、100³⁰和100²⁰⁰稀释液(C12、C30和C200)的混合物)而获得。

研究1：对小鼠胃肠道(GIT)排泄功能的作用

在5天内，向31只远系杂交种雄性小鼠(重17.5-26.3g，1.5-2月龄)的经胃注射蒸馏水(对照组，15ml/kg)、或His Ab(15ml/kg)、或S100Ab+TNF Ab+His Ab(15ml/kg)。通过“标记物”法对胃和肠的排泄功能的状态进行研究[Coopman，G.P.，Kennis，H.M.，Two Methods to Assess thegastrointestinal transit-time in mice//Z.Vershuchstierk，Vol.19，No.5，第298-303页，1977，以引用的方式将其并入本文]。在最后一次注射1小时后，将基于2％马铃薯淀粉粘液制备的活性炭10％悬浮液以0.5ml/鼠的量注入小鼠消化道内作为“标记物”。在注入“标记物”10分钟内，取出胃和肠并于玻璃板上展开。对填充有标记物的肠的总长进行测量(即，活性炭填充部分的肠的长度与总长的比值，以百分比表示)。

已确定以15ml/kg的剂量注射S100Ab+TNF Ab+His Ab复合物使得活性炭沿肠的总长度在统计学上的显著增长，分别为His Ab组和蒸馏水(对照)组相应值的1.3倍及1.2倍(表1)。对于S100Ab+TNF Ab+HisAb复合物，肠的碳填充部分与总长的比值也超出了His Ab组(p＜0.05)和对照组(p＜0.05)的类似指标。

因此，显示出S100Ab+TNF Ab+His Ab复合物增强了小鼠GIT排泄活性，其作用超过了His Ab的效力。

表1.测试制剂对远系杂交种雄性小鼠GIT排泄活性的作用

*与对照组相比，差异在统计学上显著(p＜0.05)

#与His Ab组相比，差异在统计学上显著(p＜0.05)。

研究2：对小鼠GIT分泌功能的作用

向33只远系杂交种雄性小鼠(重17.5-26.3g，1.5-2月龄)经胃注射四次蒸馏水(对照，15ml/kg)、或His Ab(15ml/kg)、或S100Ab+TNFAb+His Ab(15ml/kg)。用G.V.Obolentsev方法对肠分泌功能的状态进行研究(G.V.Oboletsev，Y.I.Hadzhai，Pharmacological investigation ofplantagluside，Pharmacology and toxicology(俄文)，No.4，第469-472页，1996，以引用的方式将其并入本文)。以10mg/kg的剂量将各测试制剂与活性炭一起进行注射。粪便外观由碳染成黑色视为阳性。实验起始3小时、6小时和24小时后进行测量。将对各动物作用的大小和/或性质表示如下：“+”-外观为良好形成的暗黑色粪便；“++”-外观为软的暗黑色粪便；“+++”-外形为液态暗黑色粪便。通过根据具有阳性反应的动物百分比所得到的该组总分数对通便活性(laxative activity)进行评价。

表2.测试制剂对远系杂交种雄性小鼠肠排泄功能的作用

在注射S100Ab+TNF Ab+His Ab的首个3小时后观测到的一定程度增强的蠕动，具体如下：复合物25分、His Ab组18分以及对照组22分(表2)。S100Ab+TNF Ab+His Ab组的作用维持6小时后观测到：复合物24分、His Ab组和对照组18分。24小时后，全部三个实验组中的排泄活性均明显降低，包括45％的动物不再排便。

因此，显示出复合物S100Ab+TNF Ab+His Ab具有超越His Ab效力的通便作用。

研究3：解痉活性

在五天内向30只远系杂交种雄性小鼠(重17.5-26.3g，1.5-2月龄)经胃注射蒸馏水(对照，15ml/kg)、或His Ab(15ml/kg)、或S100Ab+TNFAb+His Ab(15ml/kg)。制剂的解痉活性根据J.Setnicar方法(1959)进行评价[Setnicar J.，Da Re P.，3-methyl-6-(N-diethyl-amino-methyl)-Flavone-a new smooth muscle relaxant//Arzneimittel-Forsch，No.9，第653-697页(1959)，以引用的方式将其并入本文]。在最后一次注射1小时后，向小鼠经腹腔注射0.2ml的0.1％BaCl₂溶液并经胃注射0.5ml基于2％马铃薯淀粉粘液制备的活性炭10％悬浮液。10分钟后将鼠处死。然后测定肠的总长与碳填充部分的长度的比值。将比值用百分比进行表示，并将其作为主要的实验结果。

在接受S100Ab+TNF Ab+His Ab复合物的组中，碳沿肠推进的最大长度为His Ab组和对照组的1.3倍(表3)。由注射BaCl₂引起的GIT痉挛造成的活性炭沿肠推进速度的降低在S100Ab+TNF Ab+His Ab组中表现的最弱。

表3由“碳标记物”法(使用BaCl₂)对测试制剂的解痉作用进行评价

*与对照组相比，差异在统计学上显著(p＜0.05)

#与His Ab组相比，差异在统计学上显著(p＜0.05)

因此，显示出复合物S100Ab+TNF Ab+His Ab具有超越His Ab效力的解痉作用。

实施例2

通过以极低剂量的亲和纯化的抗人肿瘤坏死因子α多克隆兔抗体(TNF Ab)、抗脑特异性蛋白S-100多克隆兔抗体(S100Ab)以及抗组胺多克隆兔抗体(His Ab)的水-醇溶液(6mg/片)对乳糖载体进行浸渍，来制备300mg的片剂。用于浸渍的各组分通过浓度为2.5mg/ml的初始基质溶液100¹²、100³⁰、100²⁰⁰倍的高度稀释而获得(百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C200的混合物)。对于对比组，使用了300mg其它片剂，用极低剂量的、用抗原进行纯化的抗组胺多克隆兔抗体(FisAb)的水-醇溶液(3mg/片)饱和，所述水-醇溶液通过浓度为2.5mg/ml的初始基质溶液100¹²、100³⁰、100²⁰⁰倍的高度稀释而获得(百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C200的混合物)。

根据罗马标准III(2006)，参与研究的52位患者被确诊患有肠易激综合征(IBS)。加入研究的患者在12周内参与门诊观察和治疗过程。24名研究参与者被归入测试制剂组(TNF Ab+S100Ab+His Ab，每日两次两片)。28名患者被归入对比组(His Ab，每日两次两片)。两个组的患者在有关的初始人口统计、人体测量和临床检验指标方面均相当。18名患者患有伴便秘的IBS(在全部肠排泄物中包含多于25％的固态或块状粪便和少于25％的液态粪便)，14名患者患有伴腹泻的IBS(在全部肠排泄物中包含多于25％的糊状或液态粪便和少于25％的固态粪便)，20名患者患有混合型IBS(在全部肠排泄物中包含多于25％的块状粪便和液态粪便)。治疗效力标准考虑了以下参数：相比于初始状态在疼痛/不适强度方面的降低(周平均值，0-10分)，VAS-IBS量表上的其它消化不良症状的动态(视觉模拟量表-肠易激综合征(VAS-IBS)：Guidance for IndustryIrritable Bowel Syndrome-Clinical Evaluation Products for Treatment，U.S.Department of Health and Human Services，Food and Drug Administration；Center for Drug Evaluation and Research(CDER)-2010年3月；Muller-Lissner，S.，Koch，G.，Talley，N.J.等，2004，Subject’s GlobalAssessment of Relief：An Appropriate Method to Assess the Impact ofTreatment on IB S-Related Symptoms in Clinical Trials，J Clin.Epidemiol，56：310-316；CPMP/EWP/785/97，2003，Points to Consider on the Evaluationof Medicinal Products for483the Treatment of Irritable Bowel Syndrome，London，Available at：484http://www.emea.europa.eu/pdfs/human/ewp/078597en.pdf)；VSI量表上的内脏敏感度指数变化(最坏-15，最好-90)(内脏敏感度指数(VSI)：Labus，S.Jennifer等，The Central Role of Gastrointestinal-Specific Anxiety inIrritable Bowel Syndrome：Further Validation of the Visceral SensitivityIndex，Psychomotor Medicine，2007，69：89-98)以及基于HADS量表进行的评价(医院焦虑抑郁量表(HADS)：Snaith，R.Philip，The HospitalAnxiety and Depression Scale，Health and Quality of Life Outcomes2003，1：1-4，http://www.hqlo.com/content/1/1/29)。在患有伴明显腹泻的IBS的患者中，基于粪便形状Bristol量表，该部分患者在粪便类型方面的改变经计算至多为5(然而周平均不低于≤2)(粪便形状Bristol量表：Guidancefor Industry Irritable Bowel Syndrome-Clinical Evaluation of Products forTreatment，U.S.Department of Health and Human Services，Food and DrugAdministration，Center for Drug Evaluation and Research(CDER)-2010年3月)；在患有明显便秘的IBS小组中的患者中，与患者初始状态相比，排便行为的次数平均每周增加1次的患者百分比。

在两个组的疾病临床现象中，腹痛综合征占主要地位(根据VAS-IBS，复合物组中平均为7.56±0.26分，在对照组中为7.21±0.24分)(见下表)。这一症状在初始检查时见于100％的患者。在消化不良的表现中，腹泻(见于活性制剂组中54％的患者中，见于对比组中57％的患者中)与便秘(分别为62％和57％)同样频繁，胃胀与胀气(分别为46％和36％)在两个组中的表现也大致相同(见下表)。恶心和呕吐较少见(分别为30％和32％)。内脏敏感指数(VSI)和HADS量表指数的平均值对两个组来说很相似(见下表)，意味着中枢神经系统扰动在IBS发病过程中的重要作用。允许两个组的患者服用分别用于便秘或腹泻的通便药

和止泻药

还允许服用用于降低胃痉挛痛表现的制剂No-

这些制剂在患者需要时服用。各研究组的全部患者都在研究方案确定的时间段内完成治疗，没有患者提前退出。

表4.取决于治疗形式的基本指标的动态

*TNF-αAb+S100Ab+His Ab组与His Ab组之间的差异在统计学上显著(p＜0.05)

**与初始指标的差异在统计学上显著(p＜0.05)。

数据分析显示出，在12周的治疗中，作为IBS基本临床表现所表示出的腹痛综合征与患者的初始病症相比，在服用复合物His Ab+S100Ab+TNF Ab组的患者中减轻了多于50％(3.32±0.13分)。这一减轻程度与通过仅使用His Ab获得的治疗结果相比显著不同，后者也促进了疼痛/不适表现的减轻，但减轻程度显著较低(少于30％)。

测试复合物有利地作用于患者的其它消化不良紊乱，包括腹泻(由初始值5.52±0.18分降至治疗结束时的3.34±0.22分)、便秘(分别为5.79±0.26分和4.41±0.33分)、胃胀和胀气(分别为4.98±0.34分和3.84±0.24分)。此外，与后两种症状患者的初始病症以及与单独的His Ab的效力相比，相对于后两种症状的效力在统计学上显著。

在患有主要伴有腹泻的IBS患者小组(n＝14)中，基于粪便形状Bristol量表在粪便类型方面表现出的变化至多为5分以下的部分患者占复合物组的57％；在主要伴有便秘的IBS小组(n＝18)中，排便行为的次数每周平均增加一次的患者百分比达到94％；在患有混合型IBS的患者中(n＝20)，类似的指标分别为45％和75％。在对比组的患者中，所研究的指标并不能被视为显著。

对内脏超敏性的积极作用表明了复合制剂的治疗效力，所述内脏超敏性在12周内显著减轻，同时VSI指数从22.3±1.6增高至68.7±2.4(相对而言，在对比组中分别为25.4±1.8与33.9±1.7)。HADS量表上总分的下降(从19.3±1.4至12.8±0.6)也表明了用复合制剂观测到的积极变化，这证实了初始亚临床上表现的焦虑和抑郁减少。

基于治疗期间不良事件的记录和后续的实验室指标研究对治疗的安全性进行了评价，证明了制剂的良好耐受性。安全性分析包括了参与研究的所有患者(n＝52)的数据。在12周的治疗过程中，任何组的患者都未表现出“可能”或“明显”与服用药物相关的任何不良事件。包括血常规分析和血生化分析以及临床尿检在内的实验室研究也未记录治疗过程中的任何病理偏差(pathologic deviation)。

因此，所述研究显示了极低剂量TNF Ab+S-100Ab+His Ab的复合物在IBS患者治疗中的效力和安全性。显示出，服用复合物12周促进了腹痛综合征的减轻，还促进了IBS患者中的消化不良表现的显著减弱。通过高百分比的患者肠排泄指标的改善证实了治疗效果。在胃肠道部分基本症状的积极动态基础之上，患者的身体和心理条件均显著、自然地正常化，这表现在焦虑和抑郁症状的平复以及内脏灵敏度的积极变化。与患者的初始病症相比，极低剂量的TNF Ab+S100Ab+His Ab复合物的治疗效果比起仅用His Ab具有显著差异。

Claims

1.一种复合药物组合物，所述复合药物组合物包含：a）活性强化形式的抗S-100蛋白抗体、b）活性强化形式的抗组胺抗体、以及c）活性强化形式的抗TNF-α抗体。

2.如权利要求1所述的复合药物组合物，所述复合药物组合物进一步包含固态载体，其中，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体、所述活性强化形式的抗组胺抗体、以及所述活性强化形式的抗TNF-α抗体浸渍至所述固态载体上。

3.如权利要求2所述的复合药物组合物，所述复合药物组合物处于片剂形式。

4.如权利要求1所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体处于C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物形式。

5.如权利要求4所述的复合药物组合物，其中，所述C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物浸渍至固态载体上。

6.如权利要求1所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗组胺抗体处于C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物形式。

7.如权利要求6所述的复合药物组合物，其中，所述C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物浸渍至固态载体上。

8.如权利要求1所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗TNF-α抗体处于C12、C30及C200顺势疗法稀释液的混合物形式。

9.如权利要求8所述的复合药物组合物，其中，所述C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物浸渍至固态载体上。

10.如权利要求1所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗组胺抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体。

11.如权利要求10所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗组胺抗体为多克隆抗体。

12.如权利要求1所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体。

13.如权利要求12所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体为多克隆抗体。

14.如权利要求1所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗TNF-α抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体。

15.如权利要求14所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗TNF-α抗体为多克隆抗体。

16.如权利要求1所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗TNF-α抗体针对的是具有SEQ ID NO.1的TNF-α整个分子。

17.如权利要求1所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗TNF-α抗体针对的是具有下述序列的TNF-α片段，所述序列选自于由以下序列所组成的组：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12。

18.如权利要求1所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体为抗牛S-100蛋白抗体。

19.如权利要求1所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体针对的是具有SEQ ID NO.13的整个S-100蛋白。

20.如权利要求1所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体针对的是具有SEQ ID NO.16的整个S-100蛋白。

21.如权利要求1所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗体通过连续的百倍稀释、且每次稀释时均伴以振荡而制备。

22.一种对胃肠道功能性病因的疾病或病症进行治疗的方法，所述方法包括向有需要的患者基本上同时给予a）活性强化形式的抗组胺抗体、b）活性强化形式的抗S-100蛋白抗体以及c）活性强化形式的抗TNF-α抗体。

23.如权利要求22所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗组胺抗体、所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体和所述活性强化形式的抗TNF-α抗体以复合药物组合物的形式给药。

24.如权利要求23所述的方法，其中，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症本质上是心身性的。

25.如权利要求23所述的方法，其中，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症为肠易激综合征。

26.如权利要求23所述的方法，其中，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症为腹痛。

27.如权利要求23所述的方法，其中，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症为腹泻。

28.如权利要求23所述的方法，其中，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症为便秘。

29.如权利要求23所述的方法，其中，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症为胃肠道排泄功能障碍。

30.如权利要求23所述的方法，其中，所述复合药物组合物以固体口服剂型的形式给药，所述固体口服剂型包含：药学上可接受的载体；以及浸渍至所述载体上的所述活性强化形式的抗组胺抗体、浸渍至所述载体上的所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体、和浸渍至所述载体上的所述活性强化形式的抗TNF-α抗体。

31.如权利要求30所述的方法，其中，所述固体口服剂型为片剂。

32.如权利要求30所述的方法，其中，所述载体为乳糖或者异麦芽酮糖醇。

33.如权利要求31所述的方法，其中，所述复合药物组合物以1-2单位剂型给药，各剂型每日给药1-4次。

34.如权利要求33所述的方法，其中，所述复合药物组合物每日给药2次，每次给药由两种口服剂型组成。

35.如权利要求33所述的方法，其中，所述复合药物组合物以1-2单位剂型给药，各剂型每日给药2次。

36.如权利要求23或30所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体处于C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物形式。

37.如权利要求23或30所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗组胺抗体处于C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物形式。

38.如权利要求23或30所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗TNF-α抗体处于C12、C30及C200顺势疗法稀释液的混合物形式。

39.如权利要求23或30所述的方法，其中，所述活性强化形式的各抗体选自于由单克隆抗体、多克隆抗体和天然抗体所组成的组。

40.如权利要求39所述的方法，其中，所述活性强化形式的各抗体为多克隆抗体。

41.如权利要求23所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗TNF-α抗体针对的是具有SEQ ID NO.1的TNF-α整个分子。

42.如权利要求23所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗TNF-α抗体针对的是具有下述序列的TNF-α片段，所述序列选自于由以下序列所组成的组：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ IDNO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12。

43.如权利要求23所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体针对的是牛脑S-100蛋白。

44.如权利要求23所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体针对的是具有SEQ ID NO.13的整个S-100蛋白。

45.如权利要求24所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗S-100蛋白抗体针对的是具有SEQ ID NO.16的整个S-100蛋白。

46.如权利要求24所述的方法，其中，所述活性强化形式的各抗体通过连续的百倍稀释、且每次稀释时均伴以振荡而制备。

47.如权利要求23、24、25、26、27、28或29所述的方法，其中，在所述患者的代表性群体中，所述给药伴有HADS得分在统计学上的显著降低。

48.如权利要求23所述的方法，所述方法进一步包括将所述复合药物组合物与适用于治疗胃肠道紊乱或病症的、另外的活性成分共同给药。

49.如权利要求48所述的方法，其中，所述另外的活性成分已被批准用于治疗肠易激综合征。

50.如权利要求48所述的方法，其中，所述另外的活性成分选自于由下述物质所组成的组：5-HT3拮抗剂、5-HT4拮抗剂、5-HT4激动剂/5-HT3拮抗剂混合物、阿片类药剂、CRH受体拮抗剂、氯离子通道活化剂、CCK拮抗剂、神经激肽拮抗剂、抗抑郁剂、解痉药、抗胆碱能剂/抗毒蕈碱剂、直接平滑肌松弛剂、止泻药、苯二氮

类物质、质子泵抑制剂和抗生素。

51.如权利要求25所述的方法，其中，所述肠易激综合征主要特征在于腹痛和胀气。

52.如权利要求25所述的方法，其中，所述肠易激综合征主要特征在于腹泻。

53.如权利要求26所述的方法，其中，所述肠易激综合征主要特征在于便秘。

54.一种用于对患有胃肠道功能性病因的疾病或病症的患者进行治疗的药物组合物，所述组合物通过如下步骤获得：提供a）活性强化形式的抗组胺抗体、b）活性强化形式的抗S-100蛋白抗体以及c）活性强化形式的抗TNF-α抗体，各抗体通过根据顺势疗法技术对所获得的各溶液进行连续重复稀释并伴以多次振荡而制备；然后通过混合将强化后的溶液进行复合，或者用所述复合后的溶液或用单独的溶液浸渍载体物质。

55.如权利要求54所述的药物组合物，其中，所述胃肠道功能性病因的疾病或病症为肠易激综合征。

56.如权利要求55所述的药物组合物，其中，所述肠易激综合征主要特征在于腹痛和胀气。

57.如权利要求55所述的药物组合物，其中，所述肠易激综合征主要特征在于腹泻。

58.如权利要求55所述的药物组合物，其中，所述肠易激综合征主要特征在于便秘。

59.如权利要求54所述的药物组合物，其中，所述活性强化形式的各抗体为C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物。