CN102985138A - 用于治疗妇科疾病的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于局部治疗妇科疾病、尤其是外阴阴道感染的拉坦尼(rhatany)提取物、游离形式或与磷脂形成的复合物形式的18β-甘草次酸以及花椒(Zanthoxylum bungeanum)提取物的组合。
Description
发明概述
本发明涉及用于局部治疗妇科疾病、尤其是外阴阴道感染的拉坦尼(rhatany)提取物、游离形式或与磷脂形成的复合物形式的18β-甘草次酸以及花椒(Zanthoxylum bungeanum)提取物的组合。
介绍
细菌性阴道病是阴道感染最常见的形式之一。其归因于阴道菌群及其pH的改变,该改变会导致正常腐生菌群、尤其是乳酸杆菌(杆菌属)减少以及共生菌如阴道加德纳菌(Gardnerella vaginalis)、人型支原体(Mycoplasma hominis)和厌氧细菌(动弯杆菌属(Mobiluncus)、消化链球菌属(Peptostreptococcus)、拟杆菌属(Bacterioides)和真杆菌属(Eubacterium))异常生长。
细菌性阴道病比其它更经常地影响性活跃和妊娠女性,其表现为乳脂状或泡沫状的白色阴道分泌物,该分泌物由于存在由细菌代谢产生的胺而有种恶臭味(典型地为臭鱼味);细菌性阴道病还表现为阴道pH升高,阴道pH不是呈微酸性而是呈现超过4.5的改变的数值。显微镜检查显示出典型的“线索细胞”,即被细菌包围的细胞。
即使没有引起不适症状,细菌性阴道病也会引起妇科问题(化脓性宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎性疾病和不孕不育症)和心理问题(由于难闻的气味而对性生活产生抵触)。
而且,在孕期,阴道病还可导致流产和增加归因于羊膜绒毛膜感染的早产的风险和产后子宫内膜炎的风险。
阴道炎是阴道的急性或慢性炎症;如果炎症还扩展到外阴,则被称为外阴阴道炎。其主要症状(可能剧烈或不剧烈)主要是刺激性的:刺痛、外阴或阴道瘙痒、液态或半液态的分泌物。
病原由不同种类的微生物构成,最常见的为真菌如白色念珠菌(Candida albicans)(念珠菌病)、革兰氏(-)菌如阴道加德纳菌和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(阴道病)以及原生动物如阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)(毛滴虫病)。其它感染物有淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)、大肠杆菌(Bacterium coli)和单纯性疱疹(herpessimplex)。
阴道炎是一种非常常见的疾病,据估计100名女性中有75名至少患有一次由真菌感染引起的外阴阴道炎。
阴道炎的常见原因是腐生阴道菌落的缺乏(例如在抗生素治疗后),其导致机会性感染的发生。
细菌性阴道病和阴道炎的治疗通常是基于抗生素、使阴道菌落平衡恢复的物质或此二者的组合的治疗。
抗生素治疗(通常是局部给予克林霉素或者局部或全身给予甲硝唑)主要被推荐用于妊娠女性、有症状的患者和需要进行手术的女性,因为尽管抗生素起效快,但是使用抗生素可通过减少阴道菌落的繁殖而使其平衡恶化,导致疾病频繁地发作。
益生菌物质可恢复阴道菌群的平衡、刺激乳酸杆菌的增殖,因而可抑制致病菌的生长。基于乳酸杆菌和具有使阴道pH酸化的作用的化合物(通常基于乳酸或维生素C)的制备物可用于此目的。然而,这些物质的使用不能解决问题,这首先是因为改变的阴道pH可达到阻止乳酸杆菌存活的碱性水平,其次是因为酸化物质的作用通常是短暂的。
不幸的是,抗生素治疗对阴道病和阴道炎不是总有效,因为抗生素日益广泛的应用以及有时是滥用随着时间的推移已经导致这些药物所攻击的细菌产生了耐药性。
细菌可通过各种机理而变得对抗生素不敏感,例如:
a)改变抗生素作用的靶,
b)产生去活化酶(例如β-内酰胺酶),
c)使细菌细胞的外层不可透过,
d)活跃的流出系统,其甚至在药物已经能够发挥其抗菌作用之前就可将抗生素从细菌细胞中排出。
各种细菌种属对抗生素的耐药性倾向于逐年不可避免地增强,近年来很少有研究致力于具有抗菌活性的新分子。
因此,研究集中于具有不同于所有其它抗生素的作用机理的物质,其可用于对抗致病微生物。
科学文献一直以来都关注植物衍生物在药物治疗中所起的作用。
基于盲筛,最近发现拉坦尼(Krameria trianda Ruiz)具有特别令人感兴趣的作用。它的根以及它们的衍生物自古以来就被秘鲁人用于治疗口腔炎症和损伤。约两个世纪前,该植物的医药用途被成功引入欧洲。
该植物目前被列在各药典中,这些药典推荐将其用于治疗侵害口腔、咽、扁桃体和皮肤的炎性和感染性疾病。
拉坦尼的亲脂性提取物的抗细菌和抗真菌作用归因于存在具有苯并呋喃结构的特定的新木脂体和去甲新木脂体(nor-neolignans),其中拉坦尼的亲脂性提取物进行了标准化,并且其有效地抑制多种微生物、尤其是革兰氏阳性细菌和真菌的繁殖。
18β-甘草次酸是通过甘草根(光果甘草(Glycyrrhiza glabra))的提取和水解而获得的五环三萜,其具有显著的抗炎活性。
EP 0283713中记载了18β-甘草次酸与磷脂的复合物,在本申请中该复合物以术语表示。当局部给药时,甘草次酸的也作为有用的抗炎剂起作用,抑制实验室动物的由接种巴豆油引起的爪水肿,其功效(约90%)高于常见的非甾体抗炎药(例如吲哚美辛)的功效。
其活性显示与将皮质醇从活性形式转化为非活性形式的组织11-β-羟基类固醇脱氢酶(11-β-HSD)的抑制有关:通过这种酶相互作用,甘草次酸延长了组织部位在受到炎性刺激后释放的皮质醇的正常抗炎活性。因此可以将18β-甘草次酸看做是天然来源的有效的局部抗炎剂,其活性相当于等摩尔浓度的地塞米松和氢化可的松所显示的活性的25%。
花椒皮提取物具有抗炎和镇痛活性,经皮给药时可用于治疗瘙痒。
发明描述
本发明涉及用于治疗妇科疾病、尤其是阴道病和阴道炎的组合物,其含有:
a)拉坦尼提取物,
b)游离形式或与磷脂形成的复合物形式的18β-甘草次酸,和
c)花椒提取物。
已经发现,本发明的组合物具有对抗革兰氏阳性(包括甲氧西林耐药性)微生物、革兰氏阴性微生物和念珠菌属的广谱抗菌活性以及抗炎作用,因此提供了治疗妇科疾病如阴道病和阴道炎的有用武器。本发明的组合物所具有的抗真菌和抗细菌活性是尤其重要的,因为主要引起妇科真菌感染的念珠菌属众所周知对目前使用的所有抗生素耐药,而甲氧西林耐药性葡萄球菌对临床实践中使用的大多数抗生素不敏感。本发明的组合物的令人惊讶的活性来自针对这些微生物的活性成分之间的协同作用,因此给医生提供了局部治疗阴道病和阴道炎的有效武器,其能够根除最常见的引起这些感染的病原体。已发现花椒提取物有助于消除瘙痒和/或疼痛。
根据本发明,所述组合物将含有在以下区间内的所述活性成分:
a)拉坦尼提取物:0.01至1%,和
b)游离形式或与磷脂形成的复合物形式的18β-甘草次酸:0.01至1%,和
c)花椒提取物:0.01至1%。
根据本发明的优选方面,花椒提取物如EP 1096944中所述来制备。
本发明的组合物的药理学实验如下文所述。
实验部分
体外活性
材料和方法
对从患有不同感染的患者的阴道分离的23份微生物株进行了检查。
这些微生物株如下:
-阴道加德纳菌(10份阴道分离株)
-白色念珠菌(5份阴道分离株)
-甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌(5份阴道分离株)
-阴道毛滴虫(4份阴道分离株)
将所有这些微生物株在特定的培养基上进行再分离,即:
-用于阴道加德纳菌的布氏肉汤
-用于葡萄球菌的甘露醇含盐琼脂
-用于念珠菌株的沙氏琼脂
-用于阴道毛滴虫株的Diamond培养基
播种后,将除沙氏琼脂外的全部培养基置于37℃的恒温器中孵育24小时,将沙氏琼脂于35℃孵育48小时。
在进行实验前将受试物质制成如下溶液:
-拉坦尼,15%干燥提取物,在DMSO中
-18β-甘草次酸,在95%乙醇中
-花椒提取物,在DMSO中
通过测定最小抑菌浓度(MIC)评价了本发明的组合物的体外抗微生物活性,然后与各组分的活性进行了比较。
通过参考CLSI文件M 7-A5的方法、采用在肉汤培养基中微量稀释的技术测定了甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌株的MIC。在Mueller-Hinton肉汤中进行物质的两倍系列稀释以获得介于1333和0.65mcg/ml之间的浓度。使接种物达到50,000CFU/ml。MIC定义为物质能够裸眼可见地阻止细菌增殖的最低浓度,前提是肉汤培养基不混浊。
用于测定阴道加德纳菌株的MIC的方法参照CLSI文件M11-A4(肉汤稀释法)。在此情况中,用于敏感性试验的培养基是含有2.5%已溶马血的布氏肉汤并添加有10%维生素复合物。在接种后,将带孔平板在CO2、37℃下孵育18/24小时。
按照参考CLSI文件M27-A(肉汤微量稀释法)的方法测定了念珠菌属菌株的MIC。用于稀释这些物质的培养基是含有2%葡萄糖的RPMI 1640肉汤并用0.165M MOPS(吗啉丙磺酸)缓冲至pH为7。接种物由在沙氏琼脂中培养的菌株在无菌盐水溶液中进行了制备。
最终的接种物为2500CFU/ml。接种后,将平板于35℃孵育24-48小时。MIC再次定义为物质能够可见地抑制生长的最低浓度。
对于阴道毛滴虫株,在96孔板上在Diamond培养基上一式三份测定了MIC,每孔含有20000个原生动物的接种物。加入待测试的各物质,起始浓度为500mcg/ml,随后是两倍系列稀释。
将96孔板于37℃孵育过夜,在光学显微镜下观察以评价它们的存活力,存活力也使用活体染色进行了确认。
阴道毛滴虫株的MIC定义为存在的原生动物在光学显微镜下显示缺少游动性的各物质的最高稀释。
基于分级抑制浓度(FIC)和FIC指数评价了组合的结果。
FIC表示组合的MIC与物质单独使用时的MIC之间的比率,而FIC指数鉴别两种物质之间的相互作用,是各物质的FIC的总和。
如下计算FIC和FIC指数:
FIC指数=物质A的FIC+物质B的FIC+物质C的FIC。
如果FIC指数等于或小于0.5,则认为两种物质的组合是协同的;如果大于0.5且小于2,则认为不相关;如果该值大于2,则认为是拮抗的。
结果
表格中给出的试验结果显示了组合物的成分具有令人惊讶的协同活性。对白色念珠菌菌株的结果是特别重要的,因为组合显示出令人惊讶的高于拉坦尼提取物的活性的活性,而其它成分基本上是无活性的。
鉴于相对于引起阴道感染的微生物株而言拉坦尼和18β-甘草次酸的体外活性和基本上呈惰性的花椒属提取物以及为了局部应用这些物质,将能够在感染部位达到远高于MIC的浓度,提供了消除在体外对这些物质敏感或适度敏感的病原体的优异能力。
表-本发明的组合物的抗微生物活性。MIC以mcg/ml表示。
体内活性
材料和方法
在22名阴道pH>6.5的女性(年龄为25~50岁)已经签署她们的知情同意书后,用一次用弃的配药器给她们每天一次应用制剂实施例2中所述的乳膏剂达两周。
在基线和治疗结束时进行诸如以下的仪器评价:测定pH和阴道湿度,阴道拭子以测定细菌和真菌计数。要求这些女性进行正常生活以及她们平常的性习惯,除了在擦拭前两天不进行性交。
结果
17名女性完成了试验,结果如下:
pH显著下降(p<0.01),从平均值7.89下降至5.01的值,表明调节为生理性阴道条件。
细菌计数显著降低,在治疗后从3.52x107降低至9.95x106(-72%)。真菌计数也显著降低了32%,从1.48x104降低至1.01x104。
47%的女性报告之前的阴道干燥状况得到改善,38%的女性报告之前的刺痛感/锐痛感减少。
本发明的制剂可以用适宜的赋形剂、按照熟知的常规方法如“Remington’s Pharmaceutical Handbook”(Mack Publishing Co.,N.Y.,USA)中记载的方法来制备。
本发明的组合物将方便地在水/油乳剂和其它相容的赋形剂中配制,用于处置生殖器粘膜;对于内部治疗,化合物可以被配制成阴道栓,其在置入阴道口后可容易地崩解。
本发明的制剂的实例包括乳膏剂、软膏剂、洗剂、阴道栓或等同制剂,包括在体内温度下溶解的胶囊剂。
下文给出了本发明的制剂的一些实例。
制剂实施例1
阴道灌洗剂
成分(INCI) | %: |
水 | 81.11750 |
辛酸/辛酰葡萄糖苷 | 3.00000 |
月桂酰肌氨酸钠 | 2.40000 |
椰油酰小麦氨基酸钠 | 1.50000 |
Peg-18甘油基油酸酯/椰油酸酯 | 1.50000 |
椰油酰脯氨酸 | 1.40000 |
欧洲七叶树(Aesculus hippocastanum)提取物 | 1.00000 |
月桂酰燕麦氨基酸钠 | 0.60000 |
苯氧乙醇 | 0.50000 |
乳酸 | 0.36000 |
十一碳烯酰基水解大豆蛋白钾 | 0.30000 |
咪唑烷基脲 | 0.30000 |
油醇 | 0.16000 |
薰衣草(Lavandula angustifolia)油 | 0.10000 |
丙二醇 | 0.09800 |
水解植物蛋白 | 0.08750 |
秘鲁拉坦尼(Krameria triandra)提取物 | 0.05000 |
花椒提取物 | 0.04000 |
18β-甘草次酸 | 0.07500 |
制剂实施例2
阴道乳膏剂
成分(常用名) | %w/w |
水 | 55.000 |
苯甲酸钠 | 0.500 |
D-泛醇 | 0.500 |
甘草次酸Phytosome | 0.125 |
黄原胶 | 0.300 |
Veegum Ultra | 2.000 |
Brij 72 | 6.000 |
Brij 721 | 3.000 |
Lanette 16 | 2.000 |
白蜡 | 0.500 |
18β-甘草次酸 | 0.375 |
醋酸维生素E | 0.500 |
Silkflo 364 | 6.000 |
Cosmacol ELI | 5.000 |
二氧化钛 | 3.000 |
Optiphen | 1.500 |
植物甘油FU | 5.000 |
丙二醇USP | 7.000 |
干燥拉坦尼提取物 | 0.200 |
花椒提取物 | 0.500 |
Simulgan INS 100 | 1.000 |
制剂实施例3
阴道栓
成分(常用名) | %w/w |
18β-甘草次酸与磷脂的复合物 | 0.5g |
干燥拉坦尼提取物 | 0.2g |
花椒提取物 | 0.05g |
脂肪酸甘油酯 适量至 | 20g |
Claims (5)
1.组合物,其包含:
a)拉坦尼提取物,
b)游离形式或与磷脂形成的复合物形式的18β-甘草次酸,和
c)花椒(Zanthoxylum bungeanum)提取物。
2.根据权利要求1的组合物,其中活性成分在下述范围内存在(以相对于每个单位剂量的重量计算):
a)拉坦尼提取物:0.01至1%,
b)游离形式或与磷脂形成的复合物形式的18β-甘草次酸:0.01至1%,和
c)花椒(Zanthoxylum bungeanum)提取物:0.01至1%。
3.权利要求1和2的制剂,为油/水乳剂、软明胶胶囊剂、阴道栓或等同制剂、乳膏剂、软膏剂或洗剂的形式。
4.下述物质在制备用于治疗阴道疾病的局部用制剂中的用途:
a)拉坦尼提取物,
b)游离形式或与磷脂形成的复合物形式的18β-甘草次酸,和
c)花椒(Zanthoxylum bungeanum)提取物。
5.根据权利要求4的用途,其中阴道疾病为阴道病和阴道炎。
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