CN102864139A - 一种用于组织细胞基因组dna的核酸吸附快速分离方法 - Google Patents
一种用于组织细胞基因组dna的核酸吸附快速分离方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102864139A CN102864139A CN2012103327548A CN201210332754A CN102864139A CN 102864139 A CN102864139 A CN 102864139A CN 2012103327548 A CN2012103327548 A CN 2012103327548A CN 201210332754 A CN201210332754 A CN 201210332754A CN 102864139 A CN102864139 A CN 102864139A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- nucleic acid
- dna
- surplus
- deionized water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 27
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 27
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 title abstract 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 title abstract 8
- 210000003701 histiocyte Anatomy 0.000 title abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 17
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 11
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 abstract 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 abstract 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，采用核酸吸附离心套管，用DNA提取试剂从匀浆后的组织或消化后的细胞中快速分离DNA，DNA提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液、分离溶液组成。本发明操作简便，耗时短，提取的基因组DNA纯度高，无蛋白质及RNA污染。显示其较传统提取基因组DNA方法的优势，更体现出具有普及临床对疾病诊断和研究的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域中组织细胞基因组DNA分离方法，具体涉及一种用于组织细胞基因组DNA分离试剂及核酸吸附离心套管，采用该核酸吸附分离方法，能快速分离出组织细胞基因组DNA，分离出的DNA产量和纯度高，无蛋白质及RNA污染。
背景技术
目前，国内外提取组织细胞中基因组DNA，利用蛋白酶消化后采用有机溶剂抽提的方法。该方法实验周期长、操作繁琐，提取的基因组DNA纯度和产量不高，常含有蛋白质和RNA的污染，直接影响下游实验工作。
发明内容
针对上实验方法存在的缺陷或不足，本发明的目的在于，提供一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，该方法能快速分离组织细胞中基因组DNA，其分离的DNA纯度和产量高、无蛋白质及RNA污染。
为了实现上述任务，本发明采用如下的技术解决方案：
一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，其特征在于，该方法采用核酸吸附离心套管，用DNA提取试剂从匀浆后的组织或消化后的细胞中快速分离DNA，所述的DNA提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液、分离溶液组成，具体操作过程是：
收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮，然后用离解溶液将基因组DNA从组织或细胞中离解出来，通过核酸吸附管中吸附层的吸附，用清除溶液清除蛋白质及其他杂质，再用洗涤溶液清洗，最后用分离溶液使DNA与核酸吸附层脱离，从而获得超纯的DNA；
所述的DNA提取试剂各组分及物质浓度（摩尔/升）组成按终浓度体积为：
悬浮溶液：0.01-0.2mol/L C4H11NO3,0.001-0.5mol/L EDTA，0.0001-0.9mol/L C15H28NaNO3，余量为去离子水；
离解溶液：0.5-10mol/L胍盐，余量为去离子水；
清除溶液：0.1-10mol/L胍盐，0.01-4mol/L C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水的混合溶液（2:1，v/v）；
洗涤溶液：0.01-8mol/L NaCl，0.001-3mol/L C4H11NO3，余量为乙醇和去离子水的混合溶液（2:1，v/v）；
分离溶液：0.01-10mol/L EDTA，0.001-0.6mol/L C4H11NO3，余量为去离子水。
所述核酸吸附离心套管包括内层吸附管和外层收集管，其中，内层吸附管中含吸附介质层，外层套管为液体收集管，使用时将内层吸附管插入到外层收集管中。
本发明的用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，操作简便，耗时短，提取的基因组DNA纯度高，无蛋白质及RNA污染。显示其较传统提取血液DNA方法的优势，更体现出具有普及临床对疾病诊断和研究的应用价值。
附图说明
图1是实验流程图
下面结合附图和实施例对发明进一步详细说明。
具体实施方式
按照本发明的技术方案，本发明的用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，采用核酸提取试剂和核酸吸附离心套管。其中，核酸提取试剂包含：悬浮溶液，离解溶液，清除溶液，洗涤溶液和分离溶液。
所述的核酸提取试剂中，离解溶液的作用是使基因组DNA从组织或细胞中离解出来，通过核酸吸附管中吸附层的吸附，用清除溶液清除蛋白质及其他杂质，再用洗涤溶液清洗，最后用分离溶液使DNA与核酸吸附层脱离，从而获得超纯的DNA。
DNA提取试剂各组分及物质浓度（摩尔/升）组成按终浓度体积为：
悬浮溶液：0.01-0.2mol/L C4H11NO3,0.001-0.5mol/L EDTA，0.0001-0.9mol/L C15H28NaNO3，余量为去离子水；
离解溶液：0.5-10mol/L胍盐，余量为去离子水；
清除溶液：0.1-10mol/L胍盐，0.01-4mol/L C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水的混合溶液（乙醇：去离子水=2:1，v/v）；
洗涤溶液：0.01-8mol/L NaCl，0.001-3mol/L C4H11NO3，余量为乙醇和去离子水的混合溶液（乙醇：去离子水=2:1，v/v）；
分离溶液：0.01-10mol/L EDTA，0.001-0.6mol/L C4H11NO3，余量为去离子水。
核酸吸附材料为圆形纸片，核酸吸附离心套管包含内层吸附管和外层收集管，当每加一次试剂时需将内层吸附管插入到外层收集管中，经离心后弃去收集管中废液，再将吸附管插回收集管中，当最后加分离液时需将吸附管插入到一干净（新的）的收集管中，再经过离心获得纯化的DNA。
以下是发明人给出的具体实施例，操作流程参见图1所示：
1、收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮，室温放置5min。
2、加离解溶液混匀，室温放置5min。
3、将液体吸入吸附管中，室温放置2min，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。
4、加清除溶液，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。
5、加洗涤溶液，12000r，离心30s，弃去收集管中的废液。
6、将吸附管插入一干净的收集管中，加分离溶液室温放置2min后，12000r离心1min，获得超纯的DNA。
Claims (2)
1.一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，其特征在于，该方法采用核酸吸附离心套管，用DNA提取试剂从匀浆后的组织或消化后的细胞中快速分离DNA，所述的DNA提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液、分离溶液组成，具体操作过程是：
收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮，然后用离解溶液将基因组DNA从组织或细胞中离解出来，通过核酸吸附管中吸附层的吸附，用清除溶液清除蛋白质及其他杂质，再用洗涤溶液清洗，最后用分离溶液使DNA与核酸吸附层脱离，从而获得超纯的DNA；
所述的DNA提取试剂各组分及物质浓度（摩尔/升）组成按终浓度体积为：
悬浮溶液：0.01-0.2mol/L C4H11NO3，0.001-0.5mol/L EDTA，0.0001-0.9mol/L C15H28NaNO3，余量为去离子水；
离解溶液：0.5-10mol/L胍盐，余量为去离子水；
清除溶液：0.1-10mol/L胍盐，0.01-4mol/L C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水的混合溶液；
洗涤溶液：0.01-8mol/L NaCl，0.001-3mol/L C4H11NO3，余量为乙醇和去离子水的混合溶液；
分离溶液：0.01-10mol/L EDTA，0.001-0.6mol/L C4H11NO3，余量为去离子水。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸吸附离心套管包括内层吸附管和外层收集管，其中，内层吸附管中含吸附介质层，外层套管为液体收集管，使用时将内层吸附管插入到外层收集管中。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012103327548A CN102864139A (zh) | 2012-09-11 | 2012-09-11 | 一种用于组织细胞基因组dna的核酸吸附快速分离方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012103327548A CN102864139A (zh) | 2012-09-11 | 2012-09-11 | 一种用于组织细胞基因组dna的核酸吸附快速分离方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102864139A true CN102864139A (zh) | 2013-01-09 |
Family
ID=47443270
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2012103327548A Pending CN102864139A (zh) | 2012-09-11 | 2012-09-11 | 一种用于组织细胞基因组dna的核酸吸附快速分离方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102864139A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114929722A (zh) * | 2019-11-25 | 2022-08-19 | Emp生物技术股份有限公司 | 使用与固体表面结合的亲和配体分离和离析核酸 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1680422A (zh) * | 2003-05-01 | 2005-10-12 | 维里德克斯有限责任公司 | 从细胞和组织中快速提取rna |
| CN101115833A (zh) * | 2005-02-11 | 2008-01-30 | 恰根有限公司 | 分离核酸的方法，该核酸在提高的温度下固定于基质上 |
| CN101173274A (zh) * | 2006-10-30 | 2008-05-07 | 张伟 | 一种细菌和血液的基因组dna提取试剂盒 |
| CN101323852A (zh) * | 2007-06-11 | 2008-12-17 | 北京东胜创新生物科技有限公司 | 一种在自动化核酸提取工作站上进行基因组提取的试剂盒及方法 |
| CN101613697A (zh) * | 2009-08-05 | 2009-12-30 | 公安部物证鉴定中心 | 一种提取纯化dna的方法 |
| CN101724625A (zh) * | 2009-11-25 | 2010-06-09 | 陕西北美基因股份有限公司 | 一种用金磁微粒纯化总核酸的方法 |
| CN102146374A (zh) * | 2011-01-27 | 2011-08-10 | 四川农业大学 | 一种动物dna提取的细胞裂解液、试剂盒和方法 |
| CN102286468A (zh) * | 2011-08-30 | 2011-12-21 | 江苏百帝生物科技有限公司 | 一种循环血dna提取方法和相关的循环血dna提取试剂盒 |
| CN102533724A (zh) * | 2010-12-30 | 2012-07-04 | 上海复星医学科技发展有限公司 | 一种用于生物样品中核酸提取纯化的细胞裂解试剂 |
-
2012
- 2012-09-11 CN CN2012103327548A patent/CN102864139A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1680422A (zh) * | 2003-05-01 | 2005-10-12 | 维里德克斯有限责任公司 | 从细胞和组织中快速提取rna |
| CN101115833A (zh) * | 2005-02-11 | 2008-01-30 | 恰根有限公司 | 分离核酸的方法，该核酸在提高的温度下固定于基质上 |
| CN101173274A (zh) * | 2006-10-30 | 2008-05-07 | 张伟 | 一种细菌和血液的基因组dna提取试剂盒 |
| CN101323852A (zh) * | 2007-06-11 | 2008-12-17 | 北京东胜创新生物科技有限公司 | 一种在自动化核酸提取工作站上进行基因组提取的试剂盒及方法 |
| CN101613697A (zh) * | 2009-08-05 | 2009-12-30 | 公安部物证鉴定中心 | 一种提取纯化dna的方法 |
| CN101724625A (zh) * | 2009-11-25 | 2010-06-09 | 陕西北美基因股份有限公司 | 一种用金磁微粒纯化总核酸的方法 |
| CN102533724A (zh) * | 2010-12-30 | 2012-07-04 | 上海复星医学科技发展有限公司 | 一种用于生物样品中核酸提取纯化的细胞裂解试剂 |
| CN102146374A (zh) * | 2011-01-27 | 2011-08-10 | 四川农业大学 | 一种动物dna提取的细胞裂解液、试剂盒和方法 |
| CN102286468A (zh) * | 2011-08-30 | 2011-12-21 | 江苏百帝生物科技有限公司 | 一种循环血dna提取方法和相关的循环血dna提取试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 饶国洲等: "高纯化RNA分离方法的建立与应用", 《现代检验医学杂志》, vol. 20, no. 6, 30 November 2005 (2005-11-30), pages 4 - 6 * |
| 饶国洲等: "高纯化质粒DNA分离方法", 《现代检验医学杂志》, vol. 18, no. 5, 31 October 2003 (2003-10-31), pages 40 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114929722A (zh) * | 2019-11-25 | 2022-08-19 | Emp生物技术股份有限公司 | 使用与固体表面结合的亲和配体分离和离析核酸 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102888397A (zh) | 一种利用磁珠提取全血基因组dna的试剂盒及应用 | |
| CN103614371A (zh) | 一种同时提取血清、双拭子中动物dna病毒和rna病毒核酸的方法 | |
| CN104630204A (zh) | 一种油藏微生物基因组dna提取方法 | |
| CN102352351B (zh) | 一种用磁性微粒从含微量核酸的样本中纯化dna的方法 | |
| CN112195175A (zh) | 基于氧化石墨烯的核酸提取方法 | |
| CN106701741A (zh) | 一种羊水、绒毛样本中核酸快速提取试剂盒 | |
| CN101748116A (zh) | 磁性微粒大量提取dna的方法 | |
| CN204185484U (zh) | 一种用于核酸的快速提取装置 | |
| CN102690806A (zh) | 一种简单、快速提取柳枝稷组织总rna的方法 | |
| CN102864139A (zh) | 一种用于组织细胞基因组dna的核酸吸附快速分离方法 | |
| CN103882006A (zh) | 适用于多种样本的dna提取试剂配制方法和提取方法 | |
| CN103146569B (zh) | 硅珠法提取dna用的离心管结构 | |
| CN102864140A (zh) | 微量血液rna核酸吸附快速分离方法 | |
| CN109234271A (zh) | 一种磁珠法口腔拭子基因组dna提取试剂盒 | |
| CN203159612U (zh) | 硅珠法提取dna用的离心管结构 | |
| CN102836698B (zh) | 用于dna和rna分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法 | |
| CN104130941B (zh) | 分离提取dna用的离心套管结构 | |
| CN203200257U (zh) | 一种固液分离核酸亲和结合的复合装置 | |
| CN116355724A (zh) | 一种核酸提取装置及核酸提取方法 | |
| CN102350090A (zh) | 用于中药连续提取的装置 | |
| CN202263417U (zh) | 用于中药连续提取的装置 | |
| CN206279200U (zh) | 一种联排管及配套使用的废液收集装置 | |
| CN205133629U (zh) | 一种用于体液微量核酸提取的纯化柱 | |
| CN205223192U (zh) | 一种核酸提取装置 | |
| CN110904095B (zh) | 一种提高小片段核酸纯化得率的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20130109 |