CN102688250A - 偶氮类衍生物做为rsk2抑制剂的合成及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及偶氮类衍生物的合成及其用途。具体而言，本发明涉及下式Ⅳ所示的化合物、含有下式Ⅳ化合物的药物组合物及所述化合物在制备治疗RSK2介导的疾病用的药物中的用途。

Description

偶氮类衍生物做为RSK2抑制剂的合成及应用

技术领域

本发明涉及偶氮类衍生物的合成及其用途，具体地说，涉及带不同取代基的偶氮类类化合物的合成和作为靶向RSK-2的抗肿瘤药物的应用。

背景技术

癌症即恶性肿瘤，是威胁人类生命健康的最重大的疾病之一。据统计，2008年全球有1200万人被确诊为癌症，760万人死于癌症。因此，抗肿瘤药物的研究与开发是当今生命科学中极富挑战性且意义重大的领域。

传统细胞毒类药物由于主要作用于DNA、RNA和微管蛋白等细胞共有部分，致使其选择性低，毒性大，其副作用往往导致患者无法继续治疗。相反新型抗肿瘤药物是根据多种信号转导通路在正常细胞和肿瘤细胞之间、不同类型的肿瘤细胞之间存在着很大差异进行研发的，正是这一差异使高选择性、高效和低毒的新型抗肿瘤药物：靶向性药物面临巨大机遇。

近期研究表明p90核糖体S6激酶2(RSK2)在人乳腺癌和前列腺癌细胞中有高表达现象(Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry，2008，8，710-716)，与头颈部鳞状细胞癌密切相关(The Journal of Clinical Investigation 120(4)，1165-1177，2010)，还与和精神障碍有关的CLS(Coffin-Lowry syndrome)综合症有关。另外，RSK2在骨髓瘤细胞的造血转移过程中也起着关键作用，因此被认为是与癌症发病关系最为密切的RSK激酶亚型，并且作为新一代抗癌药物靶点引起了国际制药公司广泛的重视和研究。

p90核糖体S6激酶(RSK)为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，包含了四个蛋白亚型：RSK1～4。作为Ras/MAPK信号通路中ERK1/2的下游分子，RSK激酶蛋白在Ras/MAPK信号通路中起着重要作用(Frontiers in Bioscience，2008，13，4258-4275)。RSK2具有两个激酶区域(CTKD，NTKD)这一特殊的分子结构，为研究人员提供了两个潜在的药物结合位点，即两个结构域的ATP结合位点。目前已有数个选择性ATP竞争性RSK2抑制剂报道(Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry，2008，8，710-716)，其中礼来公司的NTKD特异性RSK2抑制剂Enzastaurin已经进入了三期临床。但系统的RSK2抑制剂的筛选和合成研发还未见报道。因此，寻找新的RSK2高选择性抑制剂具有重要的临床意义和应用前景。

发明内容

本课题组采用计算机辅助药物设计手段建立了RSK2特异性小分子抑制剂的虚拟筛选平台，综合考虑药效团及分子对接方法，对商业化合物数据库(包括ACD-3D(化学品库)、ACD-SC、MDDR-3D(药物活性数据报道库)和CNPD)进行筛选，进行了体外RSK2抑制剂分子水平和细胞水平活性测试，发现了一批RSK2活性抑制剂先导化合物，其中的两个化合物I-2和I-19的抑制率和IC50值分别为33.17％，15.14μM和69.31％，3.47μM。

本发明以RSK2作为靶标，以上面两个化合物为先导化合物进行结构优化，设计并合成了一系列偶氮类衍生物三个系列化合物(通式I、II、III)。其中一些化合物是未见文献报道的新化合物，对合成实例中的化合物进行了结构表征，并对三个系列所有化合物进行了分子水平和细胞水平的活性实验，发现了一些对RSK2的抑制活性较好的化合物。

因此，本发明第一方面提供下式IV化合物：

式中，

R¹-R⁵各自独立选自氢，羟基、磺酸基，任选取代的C₁-C₄烷基，任选取代的C1-C6烷氧基羰基，CN，氨基磺酰基，羧基，N，N-二(任选取代的C1-C4烷基)氨基(例如，N，N-甲基氨基)，卤素，硝基，氨基，经任选取代的苄基、任选取代的呋喃基取代的酰胺基，任选取代的苯磺酰氨基，吡咯烷基磺酰基，任选取代的哌啶基磺酰基，NCO，NCS，脒基，氨基甲酰基，苯胺酰基和苯胺酰氨基；或者R²与R³或R³和R⁴与它们所连接的苯环一起形成如下基团(其中，R²、R³或R³、R⁴之外的基团即R¹、R⁴和R⁵或R¹、R²和R⁵的定义同上)：

R为任选取代的芳基或5～14元含氧和/或氮的杂芳基。

本文中，术语“芳基”指含有6到14个碳原子的单环、双环或三环芳族基团。有用的芳基包括C6-14芳基、更为优选的是C6-10芳基。典型的芳基包括苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、联苯基和茀基。本文中，芳基优选为苯基和萘基。

本文中，“含氧和/或氮的杂芳基”指环中含有1-3个选自O和N和任选的S的5-14元单环、双环或三环芳族基团。适用于本发明的含氮和/或氧的杂芳基的例子包括呋喃基、噁唑基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基(包括但不限制于2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基)、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、三唑基(例如)和

1，2-氧萘酮基(例如，)、喹啉基(例如

)、和

本文中，术语“任选取代的”指其所修饰的基团可任选地被1-3个选自下组的取代基取代：羟基、磺酸基，任选取代的C₁-C₄烷基，任选取代的C1-C6烷氧基羰基，CN，氨基磺酰基，羧基，N，N-二(任选取代的C1-C4烷基)氨基(例如，N，N-甲基氨基)，卤素，硝基，氨基，经任选取代的苄基、任选取代的呋喃基取代的酰胺基，任选取代的苯磺酰氨基，吡咯烷基磺酰基，任选取代的哌啶基磺酰基，NCO，NCS，脒基，氨基甲酰基，苯胺酰基，苯胺酰氨基，芳基，和杂芳基(如噻吩基等)。

芳基还可以被基团＝O所取代。因此，当芳基被＝O所取代时，可形成例如以下的R基团：

在优选的实施例中，当“任选取代的烷基”和“任选取代的烷氧基”指烷基或烷氧基中的碳链部分可以任选地被1-3个选自卤素和羟基的基团取代。取代的烷基和烷氧基的例子包括但不限于三氟甲基、CF₃CH₂O-等基团。

在一优选实施方式中，本发明式IV化合物为下式I化合物：

式中，R¹-R¹⁰各自独立选自氢，羟基、磺酸基，任选取代的C₁-C₄烷基，任选取代的C1-C6烷氧基羰基，CN，氨基磺酰基，羧基，N，N-二(任选取代的C1-C4烷基)氨基(例如，N，N-甲基氨基)，卤素，硝基，氨基，经任选取代的苄基、任选取代的呋喃基取代的酰胺基，任选取代的苯磺酰氨基，吡咯烷基磺酰基，任选取代的哌啶基磺酰基，NCO，NCS，脒基，氨基甲酰基，苯胺酰基和苯胺酰氨基。

在优选的实施例中，式I化合物中，R¹-R¹⁰各自独立选自H、羟基、任选取代的C₁-C₄烷基、任选取代的C1-C6烷氧基羰基、CN、氨基磺酰基、氨基甲酰基、和脒基。

在优选的实施例中，R¹，R²，R⁴，R⁵，R⁹，R¹⁰为氢原子；R⁸为羟基；R⁶，R⁷可以为氢或甲基；R³为羧基，氨基甲酰基，脒基，磺酸基，氨基磺酸基。

本发明优选的式I化合物选自：

在另一优选实施方式中，本发明式Ⅳ化合物选自下式II的化合物：

式中，R¹-R⁵各自独立选自氢，任选取代的C₁-C₄烷基，卤素，羟基，C₁-C₄烷氧基，硝基，氨基，苯酰氨基，CN，NCO，NCS，羧基，C1-C6烷氧基羰基，脒基，氨基甲酰基，氨基磺酰基，苯胺酰基和苯胺酰氨基；

R⁶-R⁸各自独立选自氢，任选取代的C1-C6烷基，CN，羟基，氨基，任选取代的苯基，任选取代的吡唑酮，氨基硫代甲酰基，三氟甲基，任选取代的苯胺基，和苯胺甲酰(或硫代甲酰)氨基。

在优选的实施例中，R¹-R⁵各自独立选自氢，R⁶，R⁸为羟基，氨基，CN。

在优选的实施例中，R³为羟基，氨基，乙氧基，R⁶，R⁸为羟基，氨基，CN。

在更优选的实施例中，R³为羟基，R⁷为氨基硫代甲酰基。

本发明优选的式II化合物选自：

在另一优选实施方式中，本发明式IV化合物选自下式III的化合物：

式中，R¹-R⁵各自独立选自氢，任选取代的C₁-C₄烷基，卤素，羟基，C₁-C₄烷氧基，硝基，氨基，苯酰氨基，CN，NCO，NCS，羧基，C1-C6烷氧基羰基，脒基，氨基甲酰基，氨基磺酰基，苯胺酰基和苯胺酰氨基；

R⁶-R⁹各自独立选自氢，任选取代的C1-C6烷基，氨基，苯基，噻吩基，CN，NCO，NCS，C1-C6烷氧基羰基，任选取代的苯胺基，和苯胺甲酰(或硫代甲酰)氨基。

在优选的实施例中，R³为氨基，R²，R³为羟基，R²，R³形成5元环。

本发明优选的式III化合物为III-64，III-75，III-76。

在另一优选实施例中，本发明的式IV化合物具有下式V结构：

式中，R¹-R⁵的定义同式I中的定义；R¹¹和R¹²独立选自H、羟基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤素、羧基和硝基；n和m各自独立为0、1或2。

在优选的实施例中，式V中，R¹-R⁵独立选自H、羟基、任选取代的C₁-C₄烷基、任选取代的C1-C6烷氧基羰基、CN、氨基甲酰基和脒基；R¹¹和R¹²独立选自H、羟基和C1-C4烷基，n和m独立为0或1。

在更优选的实施例中，式V的代表性化合物包括表1中的I-21、I-24和I-25。

在另一优选实施例中，式IV的化合物具有下式VI所示的结构：

式中，R¹-R⁵如式I所定义，R¹³可独立选自H、C1-C4烷基、羟基、硝基和卤素，p为0、1或2。

在优选的实施例中，R¹³为H，R¹-R⁵各自独立为H、C1-C4烷基和羟基。

在一优选实施例中，式VI的代表性化合物如表1中的化合物I-18所示。

在其它优选的实施例中，本发明的化合物还包括：

本文中，芳基优选为苯基，其可任选地被上文所定义的1-4个取代基取代。

本文中，卤素包括氟、氯、溴和碘。

在优选的实施例中，上述定义中的烷基其自身或作为其它基团的一部分，碳原子数可以是1-6个，优选为1-3个。例如，优选C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基。且所述烷基优选包括直链或支链烷基。

本文中，酰胺基自身或作为其它基团的一部分，指“C₁-C₆烷基-CO-NH-”基团。示例性的酰胺基包括但不限于甲酰胺基、乙酰胺基等。

本文中，酰氨基自身或作为其它基团的一部分，指“-C₁-C₆烷基-CO-NH₂”基团。示例性的酰氨基包括但不限于甲酰氨基、乙酰氨基等。

本文中，酰基自身或作为其它基团的一部分，可含有1-6个碳原子，优选1-3个碳原子。示例性的酰基包括但不限于甲酰基、乙酰基等。

本发明代表性的化合物如表1所示。尤其优选的是表1中抑制率大于40％、更优选大于50％、大于60％、大于70％或大于80％的化合物。

本发明也包括式I-VI化合物的药学上可接受的盐、前药或溶剂化物。

“药学上可接受的盐”在本文中指任何通式I化合物的药学上可接受的盐。可由药学上可接受的无毒性的酸和碱包括无机和有机酸和碱来制备盐。酸包括：醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烯磺酸、二氯醋酸、反丁烯二酸、葡糖酸、谷氨酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、巴莫酸、泛酸、膦酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、草酸、对甲苯磺酸等。尤其优选盐酸、氢溴酸、膦酸、硫酸和甲磺酸，最优选甲磺酸盐。可接受的碱盐包括碱金属(如钠、钾)、碱土金属(如钙、镁)和铝盐。

“前药”在本文中包括本发明化合物的衍生物，其在体内通过酶或非酶过程如水解，进行代谢生物转化，形成本发明化合物。可利用前药以改善药物或生物特性，例如，溶解度、熔点、稳定性和相关的物理化学性质，吸收度、药动学性质和其它递送相关的特性。例如，可以前药的形式制备通式I化合物，其中，用合适的基团(该基团可包括如烷基、芳基、磷酸酯、糖、胺、乙二醇、磺酸酯或酸官能团)衍生化(例如，通过酯键、酰胺键或磷酸酯键)例如游离的-OH制备，衍生化后的基团不稳定，给药后某个时间或接触所需的生物环境后可被除去/断裂(例如水解)，以暴露通式I化合物。此外，本发明化合物或其制药学中允许的盐可形成水合物、乙醇等溶剂化物或多晶形。

本发明的化合物可采用以下方法制备获得：

上述制备流程中，R¹-R⁹的定义如上文所述。其它化合物可采用类似的方法和原料制备获得。本领域技术人员可根据实际制备需要，采用本领域常规获得的各种起始化合物为原料，制备本发明的化合物。

本发明第二方面包括一种药物组合物，该组合物含有治疗或预防有效量的本发明式I、II、III、IV、V和/或VI的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。“治疗或预防有效量”指当给予需要该治疗的哺乳动物时，该药物的量足以治疗或预防RSK2介导的疾病。

虽然每个人的需求各不相同，本领域技术人员可确定本发明药物组合物中每种活性成分的最佳剂量。一般情况下，本发明的化合物或其药学上可接受的盐，对哺乳动物每天口服给药，药量按照约0.0025到50毫克/公斤体重。但最好是每公斤口服给药约0.01到10毫克。例如，单位口服剂量可以包括约0.01到50毫克，最好是约0.1到10毫克的本发明化合物。单位剂量可给予一次或多次，每天为一片或多片，每片含有约0.1到50毫克，合宜地约0.25到10毫克的本发明化合物或其溶剂化物。

本发明的药物组合物可被配制成适合各种给药途径的制剂形式，包括但不限于被配制成用于肠外，皮下，静脉，肌肉，腹腔内，透皮，口腔，鞘内，颅内，鼻腔或外用途径给药的形式，用于治疗肿瘤和其他疾病。给药量是有效地改善或消除一个或多个病症的药量。对于特定疾病的治疗，有效量是足以改善或以某些方式减轻与疾病有关的症状的药量。这样的药量可作为单一剂量施用，或者可依据有效的治疗方案给药。给药量也许可治愈疾病，但是给药通常是为了改善疾病的症状。一般需要反复给药来实现所需的症状改善。药的剂量将根据病人的年龄，健康与体重，并行治疗的种类，治疗的频率，以及所需治疗效益来决定。

本发明的药物制剂可以给予任何哺乳动物，只要他们能获得本发明化合物的治疗效果。在这些哺乳动物中最为重要的是人类。

本发明的化合物或其药物组合物可用于治疗或预防各种由p90核糖体S6激酶(RSK)介导的疾病，更优选用于治疗或预防由p90核糖体S6激酶2(RSK2)介导的疾病。本文中，由RSK2介导的疾病为各种癌症和与精神障碍有关的疾病。所述癌症包括但不限于乳腺癌，前列腺癌，头颈部鳞状细胞癌和多发性骨髓癌；所述与精神障碍有关的疾病包括但不限于CLS综合症(Coffin-Lowry syndrome)。

本发明的药物制剂可用已知的方式制造。例如，由传统的混合，制粒，制锭，溶解，或冷冻干燥过程制造。制造口服制剂时，可结合固体辅料和活性化合物，选择性研磨混合物。如果需要或必要时加入适量助剂后，加工颗粒混合物，获得片剂或锭剂芯。

合适的辅料特别是填料，例如糖类如乳糖或蔗糖，甘露醇或山梨醇；纤维素制剂或钙磷酸盐，例如磷酸三钙或磷酸氢钙；以及粘结剂，例如淀粉糊，包括玉米淀粉，小麦淀粉，大米淀粉，马铃薯淀粉，明胶，黄芪胶，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可增加崩解剂，比如上面提到的淀粉，以及羧甲基淀粉，交联聚乙烯吡咯烷酮，琼脂，或褐藻酸或其盐，如海藻酸钠；辅助剂特别是流动调节剂和润滑剂，例如，硅石，滑石，硬脂酸盐类，如镁硬脂酸钙，硬脂酸或聚乙二醇。如果需要，可以給锭剂核芯提供可以抵抗胃液的合适包衣。为此，可以应用浓缩糖类溶液。这个溶液可以含有阿拉伯树胶，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化钛，漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了制备耐胃液的包衣，可使用适当的纤维素溶液，例如醋酸纤维素邻苯二甲酸或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸。可向药片或锭剂核芯的包衣加入染料或色素。例如，用于识别或为了表征活性成分剂量的组合。

因此，本发明第三方面提供一种治疗或预防RSK2介导的疾病的方法，该方法包括给予需要的对象以本发明式I、II、III、IV、V和/或VI的化合物或药物组合物。

给药方法包括但不限于本领域周知的各种给药方法，可根据患者的实际情况加以确定。这些方法包括但不限于肠外，皮下，静脉，肌肉，腹腔内，透皮，口腔，鞘内，颅内，鼻腔或外用途径给药。

本发明也包括本发明式I、II、III、IV、V和VI的化合物在制备治疗或预防RSK2介导的疾病用的药物中的用途。

本发明也涉及本发明式I、II、III、IV、V和VI化合物在制备抑制RSK2活性用的药物中的用途。本发明还涉及一种体外抑制RSK2活性的方法，该方法包括使表达RSK2活性的系统，例如细胞或其培养物、组织、器官等，与本发明式I、II、III、IV、V和/或VI化合物接触的步骤，从而抑制所述系统中的RSK2活性。所述细胞或其培养物、组织、器官可以是例如各自癌细胞、组织、器官，包括但不限于乳腺癌，前列腺癌，头颈部鳞状细胞癌和多发性骨髓癌的癌细胞、组织和器官。

具体实施方式

合成部分

化合物4-((4-羟苯基)二氮烯基)-苯磺酸(I-1)的合成

先将对氨基苯磺酸(173mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将苯酚(94mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。黄色固体，质量：125mg，产率：45％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.80(t，J＝8.4Hz 6H)，6.96(d，J＝8.4Hz 2H)。

化合物4-((4-羟基-2，3-二甲基苯基)二氮烯基)-苯磺酸(I-2)的合成

先将对氨基苯磺酸(173mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将2，3-二甲基苯酚(122mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。土黄色固体，质量：196mg，产率：64％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ10.13(s，1H)，7.79(s，4H)，7.48(d，J＝8.8Hz 1H)，6.80(d，J＝8.8Hz 1H)，2.63(s，3H)，2.16(s，3H)；¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ159.08，152.8，149.67，143.93，140.32，127.12，123.69，122.12，114.13，113.37，13.89，12.10。

化合物4-((4-羟基-2，3-二甲基苯基)二氮烯基)-苯甲酸(I-3)的合成

先将对氨基苯甲酸(137mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将2，3-二甲基苯酚(122mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。土黄色固体，质量：189mg，产率：70％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.09(d，J＝8.4Hz 2H)，7.85(d，J＝8.4Hz 2H)，7.51(d，J＝8.8Hz 1H)，6.81(d，J＝8.8Hz 1H)，2.62(s，3H)，2.16(s，3H)；¹³CNMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ167.40，159.78，155.43，144.03，140.96，132.47，130.98，123.82，122.52，114.28，113.53，13.88，12.07。

化合物4-((4-羟基-2，3-二甲基苯基)二氮烯基)-苯甲酸乙酯(I-4)的合成

先将对氨基苯甲酸乙酯(165mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将2，3-二甲基苯酚(122mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。淡黄色固体，质量：137mg，产率：46％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ10.26(s，1H)，8.10(d，J＝7.6Hz 2H)，7.88(d，J＝7.6Hz 2H)，7.51(d，J＝8.4Hz 1H)，6.80(d，J＝8.8Hz 1H)，4.33(t，J＝6.4Hz 2H)，2.63(s，3H)，2.16(s，3H)，1.34(t，J＝6.8Hz 3H)；¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ165.73，159.76，155.67，144.06，141.15，130.98，130.86，123.83，122.71，114.31，113.48，61.42，14.61，13.90，12.07。

化合物4-((4-羟基-2，3-二甲基苯基)二氮烯基)-苯甲酸三氟乙酯(I-5)的合成

先将对氨基苯甲酸三氟乙酯(219mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将2，3-二甲基苯酚(122mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。黄色固体，质量：179mg，产率：51％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.15(d，J＝8.4Hz 2H)，7.93(d，J＝8.4Hz 2H)，7.53(d，J＝9.2Hz 1H)，6.81(d，J＝8.8Hz 1H)，5.03(m，J＝8.8Hz 2H)，2.64(s，3H)，2.17(s，3H)。

化合物4-((4-羟基-2，3-二甲基苯基)二氮烯基)-苯腈(I-6)的合成

先将对氨基苯腈(118mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmo1)配成水溶液，然后将2，3-二甲基苯酚(122mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。黄色固体，质量：138mg，收率：55％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.93(m，J＝8Hz 4H)，7.49(d，J＝8.8Hz1H)，6.78(d，J＝8.4Hz 1H)，2.57(s，3H)，2.13(s，3H)；¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ160.20，155.16，143.99，141.55，134.03，123.91，123.22，119.09，114.41，113.57，112.21，13.86，12.02。

化合物4-((4-羟基-2，3-二甲基苯基)二氮烯基)-苯磺酰胺(I-7)的合成

先将对氨基苯磺酰胺(172mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将2，3-二甲基苯酚(122mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。黄色固体，质量：189mg，收率：62％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ10.26(s，1H)，7.97(dd，J＝8.4Hz 4H)，7.52(d，J＝9.2Hz 1H)，7.50(s，2H)，6.81(d，J＝8.8Hz 1H)，2.63(s，3H)，2.17(s，3H)；¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ159.93，154.66，145.12，143.97，141.15，127.45，123.90，122.94，114.34，113.58，13.93，12.10。

化合物4-((4-羟基-2-甲基苯基)二氮烯基)-苯甲酸(I-8)的合成

先将对氨基苯甲酸(137mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将2-甲基苯酚(108mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。橙红色固体，质量：169mg，收率：66％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.10(d，J＝8.4Hz 2H)，7.87(d，J＝8.4Hz 2H)，7.70(m，J＝8Hz 2H)，7.00(d，J＝8.8Hz 1H)，2.22(s，3H)；¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ167.19，160.23，155.16，145.67，132.11，131.02，125.66，125.37，124.32，122.49，115.42，16.39。

化合物4-((4-羟基-2-甲基苯基)二氮烯基)-苯甲酸乙酯(I-9)的合成

先将对氨基苯甲酸乙酯(165mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将2-甲基苯酚(108mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。橙色固体，质量：170mg，收率：60％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ10.43(s，1H)，8.10(d，J＝8.4Hz 2H)，7.87(d，J＝8.4Hz 2H)，7.71(t，J＝8.8Hz 2H)，6.98(d，J＝8.4Hz 1H)，4.33(m，J＝6.8Hz2H)，2.22(s，3H)，1.34(t，J＝7.2Hz)；¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ165.69，160.27，155.27，145.68，131.20，130.84，125.65，125.42，124.37，122.59，115.39，61.43，16.38，14.60。

化合物4-((4-羟基-2-甲基苯基)二氮烯基)-苯甲酸三氟乙酯(I-10)的合成

先将对氨基苯甲酸三氟乙酯(219mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将2-甲基苯酚(108mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。黄色固体，质量：186mg，收率：55％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ10.48(s，1H)，8.15(d，J＝8.8Hz 2H)，7.92(d，J＝8.4Hz 2H)，7.73(t，J＝8.0Hz 2H)，7.00(d，J＝8.8Hz 1H)，5.03(m，J＝8.8Hz2H)，2.22(s，3H)；¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ164.26，160.47，155.83，145.71，131.34，129.23，125.73，125.50，124.56，122.87，115.44，61.18，60.83，16.36。

化合物4-((4-羟基-3-甲基苯基)二氮烯基)-苯甲酸(I-11)的合成

先将对氨基苯甲酸(137mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将3-甲基苯酚(108mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。橙黄色固体，质量：179mg。收率：70％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.10(d，J＝8.4Hz 2H)，7.87(d，J＝8.4Hz 2H)，7.63(d，J＝8.0Hz 1H)，6.81(d，J＝1.6Hz 1H)，6.73(m，J＝2.4Hz 1H)，2.64(s，3H)；¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ167.21，161.93，155.51，143.92，142.25，131.98，131.02，122.62，117.53，114.53，17.76。

化合物4-((4-羟基-3-甲基苯基)二氮烯基)-苯甲酸乙酯(I-12)的合成

先将对氨基苯甲酸乙酯(165mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将3-甲基苯酚(108mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。橙黄色固体，质量：159mg，产率：56％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.10(d，J＝8.4Hz 2H)，7.88(d，J＝8.8Hz 2H)，7.63(d，J＝8.8Hz)，6.81(s，1H)，6.73(dd，J＝2.2Hz 1H)，4.34(m，J＝7.2Hz2H)，2.64(s，3H)，1.34(t，J＝6.8Hz 3H)；¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ165.72，162.01，155.63，143.92，142.34，131.10，130.85，122.72，117.55，114.55，61.43，17.76，14.61。

化合物4-((4-羟基-3-甲基苯基)二氮烯基)-苯甲酸三氟乙酯(I-13)的合成

先将对氨基苯甲酸三氟乙酯(219mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将3-甲基苯酚(108mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。橙色固体，质量：223mg，收率：66％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.15(d，J＝8.4Hz 2H)，7.93(d，J＝8.4Hz2H)，7.64(d，J＝9.2Hz 1H)，6.82(s，1H)，6.73(dd，J＝2.0Hz 1H)，5.03(m，J＝8.8Hz2H)，2.65(s，3H)；¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ164.27，162.21，156.18，143.95，142.59，131.33，129.10，122.99，117.62，117.57，114.60，61.17，60.82，17.75。

化合物5-((4-羧基苯基)二氮烯基)-2-羟基苯甲酸(I-14)的合成

先将对氨基苯甲酸(137mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将水杨酸(138mg，1mmol)加到碱溶液中，使水杨酸完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。橙黄色固体，质量：137mg，收率：48％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.34(d，J＝2.4Hz 1H)，8.10(m，J＝10.8Hz 3H)，7.90(d，J＝8.8Hz 2H)，7.15(d，J＝9.2Hz 1H)。

化合物4-((2，4-二羟基苯基)二氮烯基)-苯甲酸(I-15)的合成

先将对氨基苯甲酸(137mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将间苯二酚(110mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。土黄色固体，质量：113mg，产率：44％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.07(d，J＝8.4Hz 2H)，7.91(d，J＝8.4Hz2H)，7.68(d，J＝8.8Hz 1H)，6.51(dd，J＝2.2Hz 1H)，6.37(d，J＝2.4Hz 1H)；¹³CNMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ167.26，164.47，157.95，153.72，133.25，131.76，131.04，130.15，122.02，110.16，103.50。

化合物4-((4-羟基-2，3-二甲基苯基)二氮烯基)-苯脒(I-16)的合成

先将对氨基苯脒(135mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将2，3-二甲基苯酚(122mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。黄色固体，质量：182mg，收率：68％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.01(d，J＝8.8Hz 2H)，7.95(d，J＝8.4Hz 2H)，7.53(d，J＝8.8Hz 1H)，2.64(s，3H)，2.17(s，3H)；¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ165.51，160.30，156.11，143.99，141.41，130.05，129.08，123.95，122.72，114.36，113.69，13.95，12.09。

化合物4-((4-羟基-2，3-二甲基苯基)二氮烯基)-苯甲酰胺(I-17)的合成

先将对氨基苯甲酰胺(136mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将2，3-二甲基苯酚(122mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。黄色固体，质量：215mg，产率：80％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ10.18(s，1H)，8.03(d，J＝8.4Hz 2H)，7.84(d，J＝8.4Hz 2H)，7.50(d，J＝8.8Hz 1H)，6.79(d，J＝8.8Hz 1H)，2.64(s，3H)，2.17(s，3H)。

化合物5-((4-羟基-2，3-二甲基苯基)二氮烯基)-香豆素(I-18)的合成

先将6-氨基香豆素(161mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，在加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液到反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钠(80mg，2mmol)配成水溶液，然后将2，3-二甲基苯酚(122mg，1mmol)加到碱溶液中，使酚完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。黄色固体，质量：200mg，产率：68％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ10.19(s，1H)，8.18(d，J＝9.6Hz 1H)，8.13(s，1H)，8.00(d，J＝8.8Hz 1H)，7.48(dd，J＝8.8Hz 2H)，6.80(d，J＝9.2Hz 1H)，6.55(d，J＝8.8Hz 1H)，2.61(s，3H)，2.14(s，3H)。

化合物4-((8-羟基-喹啉基-5-)二氮烯基)-苯甲酸(I-19)的合成

先将对氨基苯甲酸(137mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，再加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液至反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钾(112mg，2mmol)配成水溶液，然后将8-羟基喹啉(145mg，1mmol)加到碱溶液中，使8-羟基喹啉完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。深红色固体，质量：228mg，产率：78％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ9.26(d，J＝8.4Hz 1H)，8.86(d，J＝3.6Hz 1H)，8.05(d，J＝8.0Hz 3H)，7.89(d，J＝7.2Hz 2H)，7.69(dd，J＝4.0Hz1H)，7.02(d，J＝8.0Hz 1H)，3.17(s，1H)。

化合物4-((8-羟基-喹啉基-5-)二氮烯基)-苯甲酸乙酯(I-20)的合成

先将对氨基苯甲酸乙酯(165mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，再加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液至反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钾(112mg，2mmol)配成水溶液，然后将8-羟基喹啉(145mg，1mmol)加到碱溶液中，使8-羟基喹啉完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。深红色固体，质量：225mg，产率：70％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ9.18(d，J＝8.0Hz 1H)，8.71(s，1H)，8.02(m，J＝8.0Hz 5H)，7.60(t，J＝4.0Hz 1H)，6.71(d，J＝8.8Hz 1H)，4.34(t，J＝6.8Hz 2H)，1.34(s，3H)。

化合物4-((8-羟基-喹啉基-5-)二氮烯基)-苯甲酸三氟乙酯(I-21)的合成

先将对氨基苯甲酸三氟乙酯(219mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，再加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液至反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钾(112mg，2mmol)配成水溶液，然后将8-羟基喹啉(145mg，1mmol)加到碱溶液中，使8-羟基喹啉完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。深红色固体，质量：300mg，产率：80％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ9.27(d，J＝8.4Hz1H)，8.98(d，J＝2.4Hz 1H)，8.18(d，J＝8Hz 2H)，8.09(m，J＝5.0Hz 3H)，7.78(dd，J＝4Hz 1H)，7.20(d，J＝8.8Hz 1H)，5.04(m，J＝9.2Hz 2H)。

化合物4-((8-羟基-喹啉基-5-)二氮烯基)-苯腈(I-22)的合成

先将对氨基苯腈(118mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，再加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液至反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钾(112mg，2mmol)配成水溶液，然后将8-羟基喹啉(145mg，1mmol)加到碱溶液中，使8-羟基喹啉完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。红色固体，质量：216mg，产率：79％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ9.27(d，J＝5.2Hz 1H)，8.98(d，J＝2.0Hz 1H)，8.07(t，J＝9.2Hz 5H)，7.77(dd，J＝4.0Hz 1H)，7.21(d，J＝8.0Hz 1H)。

化合物4-((8-羟基-喹啉基-5-)二氮烯基)-苯磺酰胺(I-23)的合成

先将对氨基苯磺酸胺(172mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，再加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液至反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钾(112mg，2mmol)配成水溶液，然后将8-羟基喹啉(145mg，1mmol)加到碱溶液中，使8-羟基喹啉完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。红色固体，质量：252mg，产率：77％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ9.24(d，J＝8.4Hz 1H)，8.80(d，J＝3.2Hz 1H)，8.08(d，J＝8.8Hz 1H)，7.99(d，J＝8.0Hz 4H)，7.65(t，J＝4.0Hz 1H)，7.46(s，2H)，6.93(t，J＝4.4Hz 1H)；¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ168.10，155.31，148.16，143.23，140.85，135.33，131.99，129.98，127.41，123.76，122.06，118.71，115.00。

化合物4-((8-羟基-喹啉基-5-)二氮烯基)-苯脒(I-24)的合成

先将对氨基苯脒(135mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，再加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液至反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钾(112mg，2mmol)配成水溶液，然后将8-羟基喹啉(145mg，1mmol)加到碱溶液中，使8-羟基喹啉完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。深红色固体，质量：224mg，产率：77％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ9.31(m，J＝2.0Hz 1H)，9.19(s，2H)，9.00(d，J＝2.8Hz 1H)，8.13(d，J＝6.4Hz 3H)，8.03(d，J＝4.4Hz 2H)，7.79(m，J＝4.0Hz 1H)，7.23(d，J＝8.0Hz 1H)。

化合物4-((8-羟基-喹啉基-5-)二氮烯基)-苯甲酰胺(I-25)的合成

先将对氨基苯甲酰胺(136mg，1mmol)置于100mL的圆底瓶中，再加入20mL的水和浓盐酸(0.2mL，2.5mmol)，然后于冰浴中搅拌，称取亚硝酸钠(76mg，1.1mmol)配成水溶液，待反应液充分冷却后，逐滴滴加亚硝酸钠的水溶液至反应液中，滴加结束后，冰浴条件下搅拌半小时。称取氢氧化钾(112mg，2mmol)配成水溶液，然后将8-羟基喹啉(145mg，1mmol)加到碱溶液中，使8-羟基喹啉完全溶解，将溶液往上述反应液中滴加，滴加同时可以观察到反应液的颜色有明显变化，且有固体不溶物析出，滴加结束后，冰浴搅拌2小时，然后室温搅拌2小时。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应液的pH值调至中性，将反应液抽滤，得到滤饼，然后干燥，即得粗产品。用无水乙醇重结晶得到纯产品。深红色固体，质量：195mg，产率：67％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ9.63(d，J＝8.4Hz 1H)，9.09(d，J＝3.2Hz 1H)，8.14(d，J＝8.4Hz 1H)，8.07(m，J＝8.8Hz 4H)，7.99(dd，J＝4.8Hz1H)，7.53(s，2H)，7.43(d，J＝8.4Hz 1H)。

RSK2活性测试部分

筛选方法：S6 peptide(AKRRRLSSLRA)在RSK2存在下发生磷酸化并消耗ATP生成ADP，通过检测ADP来测定酶的活性。筛选靶标：RSK2(癌症靶标)。

RSK2的活性是通过检测激酶反应过程产生ADP从而确定酶的活性。使用DiscoveRx公司的ADP Quest^TM Assay kit可以检测在激酶反应过程中积累的ADP的含量。在40μl的反应体系中，包含25μM S6peptide(AKRRRLSSLRA)底物，10ng酶。化合物和酶在室温下孵育20min。接着加入10μlATP(终浓度为10μM)启动反应。在室温反应1h后加入20μl reagent A和40μl reagent B，室温孵育30min后使用Ex530nm和Em590nm来检测荧光值。

按上述方法制备了表1中其它的化合物，并根据活性测试部分所述的筛选方法测试了其活性。结果显示在下表1：

表1：偶氮类唑衍生物对RSK2体外抑制活性筛选结果

根据上述活性测试部分所述的方法进行的测试，化合物I-2的IC50值为11.64μM，化合物I-3的IC50值为5.05μM，化合物I-8的IC50值为8.85μM，化合物I-16的IC50值为11.4μM，化合物I-17的IC50值为7.36μM，化合物II-41的IC50值为7.04μM，化合物II-42的IC50值为5.5μM，化合物II-47的IC50值为1.22μM，化合物II-51的IC50值为0.508μM，化合物II-55的IC50值为12.5μM，化合物II-56的IC50值为5.15μM，化合物II-57的IC50值为1.85μM，化合物II-60的IC50值为4.88μM，化合物III-75的IC50值为6.02μM。

上文以具体实施例的方式阐述了本发明。但应理解，上述实施例仅仅是阐述性的，而非限制性的。在不偏离本发明精神和范围的情况下，可对本发明做出适当的修改和变动。这些修改和变动都在本发明的范围之内。

Claims (10)

1.下式Ⅳ化合物在制备治疗或预防RSK2介导的疾病用的药物中的用途：

式中，

R¹-R⁵各自独立选自氢，羟基、磺酸基，任选取代的C₁-C₄烷基，任选取代的C1-C6烷氧基羰基，CN，氨基磺酰基，羧基，N，N-二(任选取代的C1-C4烷基)氨基，卤素，硝基，氨基，经任选取代的苄基、任选取代的呋喃基取代的酰胺基，任选取代的苯磺酰氨基，吡咯烷基磺酰基，任选取代的哌啶基磺酰基，NCO，NCS，脒基，氨基甲酰基，苯胺酰基和苯胺酰氨基；或者R²与R³或R³和R⁴与它们所连接的苯环一起形成如下基团：

R为任选取代的芳基或5～14元含氧和/或氮的杂芳基。

2.下式Ⅳ化合物在制备抑制RSK2活性用的药物中的用途：

式中，

R¹-R⁵各自独立选自氢，羟基、磺酸基，任选取代的C₁-C₄烷基，任选取代的C1-C6烷氧基羰基，CN，氨基磺酰基，羧基，N，N-二(任选取代的C1-C4烷基)氨基，卤素，硝基，氨基，经任选取代的苄基、任选取代的呋喃基取代的酰胺基，任选取代的苯磺酰氨基，吡咯烷基磺酰基，任选取代的哌啶基磺酰基，NCO，NCS，脒基，氨基甲酰基，苯胺酰基和苯胺酰氨基；或者R²与R³或R³和R⁴与它们所连接的苯环一起形成如下基团：

R为任选取代的芳基或5～14元含氧和/或氮的杂芳基。

3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述式IV化合物选自下式I、V或VI化合物：

式中，

R¹-R¹⁰各自独立选自氢，羟基、磺酸基，任选取代的C₁-C₄烷基，任选取代的C1-C6烷氧基羰基，CN，氨基磺酰基，羧基，N，N-二(任选取代的C1-C4烷基)氨基，卤素，硝基，氨基，经任选取代的苄基、任选取代的呋喃基取代的酰胺基，任选取代的苯磺酰氨基，吡咯烷基磺酰基，任选取代的哌啶基磺酰基，NCO，NCS，脒基，氨基甲酰基，苯胺酰基和苯胺酰氨基；

R¹¹和R¹²独立选自H、羟基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤素、羧基和硝基；

R¹³独立选自H、C1-C4烷基、羟基、硝基和卤素；

m、n和p独立为0、1或2。

4.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述式IV化合物选自下式II化合物：

式中，

R¹-R⁵各自独立选自氢，任选取代的C₁-C₄烷基，卤素，羟基，C₁-C₄烷氧基，硝基，氨基，苯酰氨基，CN，NCO，NCS，羧基，C1-C6烷氧基羰基，脒基，氨基甲酰基，氨基磺酰基，苯胺酰基和苯胺酰氨基；

R⁶-R⁸各自独立选自氢，任选取代的C1-C6烷基，CN，羟基，氨基，任选取代的苯基，任选取代的吡唑酮，氨基硫代甲酰基，三氟甲基，任选取代的苯胺基，和苯胺甲酰(或硫代甲酰)氨基。

5.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述式IV化合物选自下式III化合物：

式III中，

R¹-R⁵各自独立选自氢，任选取代的C₁-C₄烷基，卤素，羟基，C₁-C₄烷氧基，硝基，氨基，苯酰氨基，CN，NCO，NCS，羧基，C1-C6烷氧基羰基，脒基，氨基甲酰基，氨基磺酰基，苯胺酰基和苯胺酰氨基；

R⁶-R⁹各自独立选自氢，任选取代的C1-C6烷基，氨基，苯基，噻吩基，CN，NCO，NCS，C1-C6烷氧基羰基，任选取代的苯胺基，和苯胺甲酰(或硫代甲酰)氨基。

6.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述化合物选自：

7.如权利要求1、3-6中任一项所述的用途，其特征在于，所述疾病选自癌症和与精神障碍有关的疾病。

8.选自下式I、V和VI的化合物：

式中，

R¹-R¹⁰各自独立选自氢，羟基、磺酸基，任选取代的C₁-C₄烷基，任选取代的C1-C6烷氧基羰基，CN，氨基磺酰基，羧基，N，N-二(任选取代的C1-C4烷基)氨基，卤素，硝基，氨基，经任选取代的苄基、任选取代的呋喃基取代的酰胺基，任选取代的苯磺酰氨基，吡咯烷基磺酰基，任选取代的哌啶基磺酰基，NCO，NCS，脒基，氨基甲酰基，苯胺酰基和苯胺酰氨基；

R¹¹和R¹²独立选自H、羟基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤素、羧基和硝基；

R¹³独立选自H、C1-C4烷基、羟基、硝基和卤素；

m、n和p独立为0、1或2；

或其药学上可接受的盐、前药和溶剂化物。

9.如权利要求8所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自：

10.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有权利要求8-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、前药和溶剂化物，和药学上可接受的载体或赋形剂。