CN102590367A

CN102590367A - 一种检测芒果苷元产品的方法

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Publication number: CN102590367A
Application number: CN2011100031379A
Authority: CN
Inventors: 高小惠; 张伟; 李鹏辉
Original assignee: Kunming Pharmaceutical Corp
Current assignee: Kunming Pharmaceutical Corp
Priority date: 2011-01-07
Filing date: 2011-01-07
Publication date: 2012-07-18

Abstract

本发明涉及分析化学领域，公开了一种检测芒果苷元产品的方法，具体为以十八烷基硅烷或八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以有机溶剂和酸性水溶液体积比为30～60∶70～40的混合溶液为流动相，理论板数按芒果苷元峰计算不低于5000，检测波长为240nm～270nm，对供试品溶液进行HPLC检测，外标法分析得到芒果苷元的含量。本发明还包括芒果苷元产品有关物质的检测和芒果苷元产品的红外检测。本发明所述检测方法能够检测产品中芒果苷元的含量、结构组成和有关物质含量，在制备芒果苷元过程中，对芒果苷元产品的质量进行准确评价，保证芒果苷元产品质量稳定，使芒果苷元产品在医药领域获得更好的应用。

Description

一种检测芒果苷元产品的方法

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体的说是涉及一种检测芒果苷元产品的方法。

背景技术

芒果苷元(Norathyriol)为四羟基吡酮类化合物，全称1，3，6，7-四羟基口山酮(1，3，6，7-tetrahydroxyxanthone)，其化学结构式如下：

现代药理研究表明芒果苷元有多种生理作用，如抗抑郁、抗炎、抗高血压、抗肿瘤、抗氧化及抑制结核杆菌生长等作用，其中抗炎作用的研究较为深入。此外，芒果苷元还具有明显的抗痛风作用。然而芒果苷元在植物中分布较少，仅存在于金丝桃属贯叶连翘和藤黄属小叶藤黄等植物，且量少不易得，极大限制了其在生物医药领域的开发利用。

专利CN200810196777.4以芒果苷为原料，在苯酚和氢碘酸条件下，使得碳-碳键断裂，制备得到芒果苷元粗品，再通过硅胶柱层析分离纯化得到芒果苷元产品。但是，目前尚无针对芒果苷元产品的检测方法，因此无法准确评价其中芒果苷元的含量、结构组成和有关物质含量，直接影响到芒果苷元产品的质量及其在医药领域应用。因此急需建立芒果苷元产品的检测方法，以对芒果苷元产品质量进行准确的评价。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种检测芒果苷元产品的方法，用以检测芒果苷元产品的含量、结构组成和有关物质含量，从而对芒果苷元产品质量进行准确的评价，保证芒果苷元产品的质量。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种检测芒果苷元产品的方法，为以十八烷基硅烷或八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以有机溶剂和酸性水溶液体积比为30～60∶40～70的混合溶液为流动相，理论板数按芒果苷元峰计算不低于5000，对供试品溶液进行HPLC检测，检测波长为240nm～270nm；外标法分析测定结果；其中，酸性水溶液为体积比为0.05～0.5％的磷酸或乙酸的水溶液，所述有机溶剂为甲醇、乙腈或二者的混合物，所述供试品溶液浓度为0.05mg/mL～0.5mg/mL。

优选的，所述有机溶剂和酸性水溶液体积比为40～50∶60～50。

优选的，所述理论板数按芒果苷元峰计算不低于8000。

优选的，所述检测波长为258nm。

优选的，所述供试品溶液浓度为0.15mg/mL～0.25mg/mL。

本发明所述检测方法还包括芒果苷元产品有关物质的检测。有关物质是指在药物制备和贮存过程中，根据药物性质和合成方法可能产生的杂质，多指有机杂质，也包括残留溶剂和手性化合物中无特殊毒性的对映体。药物中含有杂质会降低疗效和影响稳定性，有的甚至对人体健康有害或产生其他副作用，因此，检测有关物质、控制纯度是确保用药安全、有效，保证药物质量的一个重要方面。有关物质的检测主要是根据药物和杂质在理化性质上的差异来进行，包括对产品中残留合成原料、中间体、副产物及可能的降解产物的检测。

本发明所述芒果苷元产品有关物质的检测具体步骤为：取供试品溶液和对照溶液进行HPLC检测，检测时间为芒果苷元主成分峰保留时间的1.5倍以上，使所述供试品溶液的有关物质峰全部显示，对比供试品溶液有关物质峰面积和对照溶液主峰面积，得到芒果苷元有关物质含量，其中所述对照溶液由供试品溶液稀释获得，对照溶液主成分峰高为记录仪满量程的10％。

优选的，所述供试品溶液和对照溶液进行HPLC检测以十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以有机溶剂和酸性水溶液的混合溶液为流动相，所述有机溶剂为甲醇、乙腈或二者的混合物。

优选的，所述供试品溶液浓度为1mg/mL～3mg/mL，所述对照溶液浓度为1μg/mL～30μg/mL。

优选的，所述供试品溶液浓度为2mg/mL，所述对照溶液浓度为1.5μg/mL～20μg/mL。

本发明所述检测方法还包括对芒果苷元产品的红外光谱检测，具体包括取芒果苷元产品供试品溶液进行红外检测，确定红外光谱图具有3347±2、3146±2、1652±2、1616±2、1506±2、1418±2、1373±2、1304±2、1225±2、1127±2、800±2、754±2、732±2、706±2、664±2、619±2、570±2、542±2和447±2cm^-1波数。

经由上述的技术方案可知，本发明所述检测芒果苷元产品的方法能够检测产品中芒果苷元的含量、结构组成和有关物质含量，该方法的建立能够在制备芒果苷元过程中，对芒果苷元产品的质量进行准确的评价，保证芒果苷元产品质量稳定，使得芒果苷元产品在医药领域获得更好的应用。

附图说明

图1所示为本发明实施例1中芒果苷元含量检测的色谱图；

图2所示为本发明实施例2中芒果苷元有关物质含量检测的供试品溶液色谱图；

图3所示为本发明实施例2中芒果苷元有关物质含量检测的对照溶液色谱图；

图4所示为本发明实施例3中芒果苷元产品的红外光谱图。

具体实施方式

本发明公开了一种检测芒果苷元产品的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

依照本发明，所述一种检测芒果苷元产品的方法，以十八烷基硅烷或八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以有机溶剂和酸性水溶液体积比为30～60∶40～70的混合溶液为流动相，理论板数按芒果苷元峰计算不低于5000，对供试品溶液进行HPLC检测，检测波长为240nm～270nm；外标法分析测定结果；其中，酸性水溶液为体积比为0.05～0.5％的磷酸或乙酸的水溶液，所述有机溶剂为甲醇、乙腈或二者的混合物，所述供试品溶液浓度为0.05mg/mL～0.5mg/mL。

高效液相色谱(high performance liquid chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱理论而迅速发展起来的，是目前应用最多的色谱分析方法。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱，又因分析速度快而称为高速液相色谱。HPLC检测具有检测速度快、分辨率和灵敏度高、应用范围广、色谱柱可反复使用、样品量少、容易回收等优点。

高效液相色谱系统中存在两相，一相是固定不动的叫做固定相，另一相则不断流过固定相叫做流动相。HPLC检测就是使用外力使含有待测样品的流动相通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面，待测样品中的各组分与固定相发生相互作用，然后利用待测样品中的组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，待测样品在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出，与适当的柱后检测方法结合，实现待测样品的检测。

本发明所述检测芒果苷元产品的方法以十八烷基硅烷或八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以有机溶剂和酸性水溶液的混合溶液为流动相，检测中待测样品的组分。其中，所述有机溶剂为甲醇、乙腈或二者的混合物，酸性水溶液为百分含量0.05～0.5％的磷酸或乙酸水溶液，有机溶剂和酸性水溶液体积比30～60∶40～70。

优选的，所述有机溶剂和酸性水溶液体积比为40～50∶50～60。

理论塔板数(theoretical plate number，N)，用于定量表示色谱柱的分离效率(简称柱效)，在单位长度色谱柱中就有越高的塔板数，则分离效果就越好。理论塔板数取决于固定相的种类、性质(粒度、粒径分布等)、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。本发明所述检测芒果苷元产品的方法所述理论板数按芒果苷元峰计算不低于5000。

优选的，所述理论板数按芒果苷元峰计算不低于8000。

目前HPLC的检测器有紫外光度检测器、光电二极管阵列检测器、荧光检测器和差示折光检测器等，其中，紫外光度检测器是最常用的检测器，应用最广，对大部分有机化合物有响应。它基于待测样品组分对特定波长紫外光的选择性吸收，检测待测样品。紫外检测的关键是波长的选择。本发明所述检测芒果苷元产品的方法采用紫外光度检测器，所述检测波长为240nm～270nm。

优选的，所述检测波长为258nm。

高效液相色谱分析方法包括内标法、外标法、主成分自身对照法、面积归一化法等，其中，内标法、主成分自身对照法、面积归一化法主要用于测定供试品中杂质的总量限度，外标法用于分析供试品中某个杂质或主成分含量。本发明所述检测芒果苷元产品的方法用外标法分析测定结果，按下式计算芒果苷元含量：含量(c_X)＝c_R(A_X/A_R)。其中，c_X为供试品的浓度；c_R为对照品的浓度；A_X为供试品峰面积或峰高；A_R为对照品的峰面积或峰高。

本发明所述检测芒果苷元产品的方法所述供试品溶液浓度为0.05mg/mL～0.5mg/mL。

优选的，所述供试品溶液浓度为0.15mg/mL～0.25mg/mL。

本发明所述检测方法还包括芒果苷元产品有关物质的检测。有关物质检测常用的方法是HPLC主成分自身对照法，即将HPLC色谱图中杂质峰面积与主成分自身对照液峰面积进行比较，以确定杂质限度是否合格。在供试溶液色谱图中，不计主成分的峰，若任何其它峰的峰面积之和不超过对照溶液主峰的峰面积，则表明供试样品中有关物质的含量的重量比小于1％，有关物质限度合格。

本发明所述芒果苷元产品有关物质的检测具体步骤为：取供试品溶液和对照溶液进行HPLC检测，检测时间为芒果苷元主成分峰保留时间的1.5倍以上，以使所述供试品溶液的有关物质峰全部显示；对比供试品溶液有关物质峰面积和对照溶液主峰面积，得到芒果苷元有关物质含量；所述对照溶液由供试品溶液稀释获得，对照溶液主成分峰高为记录仪满量程的10％。

由于有的药物与其有关物质分子结构的极性相差较大，因此，在HPLC分析中，有关物质的保留时间可能在主成分峰之后出现，如果在主峰的保留时间刚完毕即停止检测，可能致使一些比主成分峰保留时间大的有关物质不能检出或进样量过小杂质检不出，故检测时间应比主成分峰的保留时间长。本发明所述芒果苷元产品有关物质检测的检测时间为芒果苷元主成分峰保留时间的1.5倍以上，以使所述供试品溶液的有关物质峰全部显示。

优选的，所述芒果苷元产品有关物质的检测所述供试品溶液浓度为1mg/mL～3mg/mL，所述对照溶液浓度为1μg/mL～30μg/mL。

更优选地是，所述供试品溶液浓度为2mg/mL，所述对照溶液浓度为1.5μg/mL～20μg/mL。

为避免与芒果苷元结构相似物质对色谱检测的干扰，本发明所述方法还包括对芒果苷元产品的红外光谱检测，具体包括取芒果苷元产品测试溶液进行红外检测，确定红外光谱图具有3347±2、3146±2、1652±2、1616±2、1506±2、1418±2、1373±2、1304±2、1225±2、1127±2、800±2、754±2、732±2、706±2、664±2、619±2、570±2、542±2和447±2cm^-1波数。

下面结合实施例，进一步阐述本发明。以下实施例中所用试剂均为市售色谱纯试剂，水为超纯水。

实施例1：芒果苷元的含量检测

使用仪器为Agilent1200高效液相色谱仪，包括G1311A四元梯度泵，G1322A真空脱气机，G1329A自动进样器，G1315D紫外检测器，G1316A柱温箱，Agilent1200化学工作站，色谱柱为Agilent SB-C18 150×4.6mm。

以十八硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-0.2％磷酸水溶液的混合溶液为流动相，所述混合液中，甲醇、乙腈与0.2％磷酸水溶液的体积比为10∶30∶60，检测波长为258nm，理论板数按芒果苷元峰计算为5000。

取芒果苷元对照品(芒果苷元含量为100％)，加入甲醇溶解并稀释得到浓度为0.2mg/mL的溶液，作为对照品溶液，量取所述对照品溶液5μL注入液相色谱仪，记录色谱图。

取芒果苷元产品的供试产品，加入甲醇溶解并稀释得到浓度为0.2mg/mL的溶液作为供试品溶液，量取所述供试品溶液5μL注入液相色谱仪，色谱图如图1所示，色谱分析结果如表1。

表1芒果苷元供试品溶液的色谱分析结果

峰编号	保留时间(min)	面积	面积百分比(％)	峰高度
					1	7.982	3502	100.00	287

使用外标法计算含量，通过计算所述供试品溶液和对照品溶液的峰面积的比值即得所述供试产品的芒果苷元含量。按干燥品计算，供试产品的芒果苷元重量比为99.3％。

实施例2：芒果苷元有关物质的检测

所用色谱仪、填充剂、流动相等色谱检测条件与实施例1相同。

取芒果苷元供试产品，用甲醇溶解制成2.0mg/mL的供试品溶液，然后取部分所述供试品溶液用甲醇稀释制成20.0μg/mL的对照溶液。

取所述对照溶液5μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录满量程的10％。取所述供试品溶液和对照溶液各5μL注入液相色谱仪检测，记录主成分峰保留时间的1.5倍以上的液相色谱检测结果。供试品溶液和对照溶液色谱图见图2和图3，对应的色谱分析结果见表2和表3，其中，供试品溶液色谱图有关物质峰已全部显示，对照溶液色谱图只显示了主峰。

表2芒果苷元供试品溶液的色谱分析结果

峰编号	保留时间(min)	面积	面积百分比(％)	峰高度
					1	7.952	29899	100.00	1895

表3芒果苷元对照溶液的色谱分析结果

峰编号	保留时间(min)	面积	面积百分比(％)	峰高度
					1	7.997	278	100.00	22

本发明采用主成分自身对照法，在供试溶液色谱图中，不计主成分的峰，其它峰的峰面积之和不超过对照溶液主峰的峰面积，供试样品中有关物质的含量的重量比小于1％，有关物质限度合格。

实施例3：芒果苷元产品的红外检测

取供试产品进行红外光谱分析，所用仪器为Shimadzu FTIR-8400S红外光谱仪，压片为溴化钾压片，结果见图4。

图4所示红外光谱波数(cm^-1)为：3347±2、3146±2、1652±2、1616±2、1506±2、1418±2、1373±2、1304±2、1225±2、1127±2、800±2、754±2、732±2、706±2、664±2、619±2、570±2、542±2和447±2cm^-1波数。

结果表明，供试产品具有与所述要求的芒果苷元相同的基团。

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims

1.一种检测芒果苷元产品的方法，其特征在于，以十八烷基硅烷或八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以有机溶剂和酸性水溶液体积比为30～60∶40～70的混合溶液为流动相，理论板数按芒果苷元峰计算不低于5000，对供试品溶液进行HPLC检测，检测波长为240nm～270nm；外标法分析测定结果；其中，酸性水溶液为体积比为0.05～0.5％的磷酸或乙酸的水溶液，所述有机溶剂为甲醇、乙腈或二者的混合物，所述供试品溶液浓度为0.05mg/mL～0.5mg/mL。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述有机溶剂和酸性水溶液体积比为40～50∶50～60。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述理论板数按芒果苷元峰计算不低于8000。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述检测波长为258nm。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述供试品溶液浓度为0.15mg/mL～0.25mg/mL。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，还包括芒果苷元产品有关物质的检测，具体步骤为：取供试品溶液和对照溶液进行HPLC检测，检测时间为芒果苷元主成分峰保留时间的1.5倍以上，使所述供试品溶液的有关物质峰全部显示，对比供试品溶液有关物质峰面积和对照溶液主峰面积，得到芒果苷元有关物质含量，其中所述对照溶液由供试品溶液稀释获得，对照溶液主成分峰高为记录仪满量程的10％。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述供试品溶液和对照溶液进行HPLC检测以十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以有机溶剂和酸性水溶液的混合溶液为流动相，所述有机溶剂为甲醇、乙腈或二者的混合物。

8.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述供试品溶液浓度为1mg/mL～3mg/mL，所述对照溶液浓度为1μg/mL～30μg/mL。

9.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述供试品溶液浓度为2mg/mL，对照溶液浓度为1.5μg/mL～20μg/mL。

10.根据权利要求1所述方法，其特征在于，还包括对芒果苷元产品的红外光谱检测，具体包括取芒果苷元产品供试品溶液进行红外检测，确定红外光谱图具有3347±2、3146±2、1652±2、1616±2、1506±2、1418±2、1373±2、1304±2、1225±2、1127±2、800±2、754±2、732±2、706±2、664±2、619±2、570±2、542±2和447±2cm^-1波数。