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CN102458463A - 针对ⅱ型单纯疱疹病毒的疫苗：诱发免疫应答的组合物和方法 - Google Patents

针对ⅱ型单纯疱疹病毒的疫苗：诱发免疫应答的组合物和方法 Download PDF

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CN102458463A
CN102458463A CN2010800332581A CN201080033258A CN102458463A CN 102458463 A CN102458463 A CN 102458463A CN 2010800332581 A CN2010800332581 A CN 2010800332581A CN 201080033258 A CN201080033258 A CN 201080033258A CN 102458463 A CN102458463 A CN 102458463A
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Abstract

II型单纯性疱疹病毒(HSV-2)感染是广受关注的健康问题。本发明提供了针对HSV-2的高效疫苗和免疫原性组合物。可以治疗性或预防性地使用抗原。

Description

针对Ⅱ型单纯疱疹病毒的疫苗:诱发免疫应答的组合物和方法
相关申请
本申请要求享受以下专利申请的优先权：申请号为61/180,784，申请日为2009年5月22日的美国临时专利申请；申请号为61/235,628，申请日为2009年8月20日的美国临时专利申请；申请号为61/240,587，申请日为2009年9月8日的美国临时专利申请；申请号为61/240,626，申请日为2009年9月8日的美国临时专利申请；申请号为61/305,918，申请日为2010年2月18日的美国临时专利申请。所引用的申请的全部教导内容明确地通过引用并入本申请中。
I.背景技术
Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)是造成生殖器疱疹的主要原因。HSV-2最通常的传播方式是性接触，感染该病毒通常会导致在生殖器和肛周区域的病变反复发作，并伴有病毒颗粒释放进入生殖道。在没有病变或其他症状时，也会发生病毒的释放。HSV-2还潜伏在感觉神经节。HSV-2感染会造成被感染的患者出现身体不适以及性心理病态，并引发其他健康风险。特别地，感染HSV-2的患者更容易感染HIV，并且妊娠期妇女会直接将HSV-2传播给胎儿。对于免疫低下的个体或者新生儿来说，HSV-2的感染可能致命。目前还不能治愈HSV-2。
HSV-2感染被广泛传播，有研究估计，在全世界有20％的人口被感染(Looker et al.，2008，Bulletin of the World Health Organization，October 2008，86(10))。女性感染者多于男性，并且患病率随着年龄增长而增加。大量的青少年被诊断感染有HSV-2，由于HSV-2的感染是终身的，因此可以预计HSV-2在人群中的的患病率将持续增加。
针对HSV-2症状的治疗选择有限。采用如泛西洛韦、缬昔洛韦或阿昔洛韦等化合物的抗病毒治疗能够限制症状的持续时间，并且在一些病例中能加快病变的愈合并减少病毒的释放率。然而，抗病毒药物无法治愈，且无法阻止复发或彻底清除病毒。此外，抗病毒药物的使用需要患者意识到HSV-2感染的症状，然后获得确诊，并且最终配合抗病毒方案的治疗。在不容易获得抗病毒药物的某些世界地区中，这些要求可能无法得到满足。此外，患者通常并未意识到其已被感染，要么因为他们并没有症状，要么因为初始感染的症状已经减轻，提示疾病已恢复。
为了解决HSV-2带来的医疗和社会问题，非常需要研制药物组合物来抑制或抵抗HSV-2造成的感染。可以使用有效的组合物来诱发更强的针对HSV-2的免疫应答，由此阻止最初的感染、阻断病毒在感觉神经节建立潜伏的能力、消除反复发作和/或阻止病毒释放。已知免疫系统能够产生对HSV-2的防御，这在复发感染中得到证实，复发感染表现出的症状较少、较轻，并且复发频率随时间而降低。
虽然HSV疫苗的最终目标是长期预防病毒感染，但对疾病症状的抑制也会有益于患者的健康。预防性或治疗性疫苗的当前目标之一就是减少临床发病并且在原发和潜伏感染中减少病毒释放。已经对三种预防性疫苗进行了临床试验但是结果均令人失望：i)全病毒ii)蛋白亚单位和iii)基于基因的亚单位疫苗(Stanberry et al.，Clinical Infect.Dis.，30(3)：549-566，2000)。在1970年代研究了一系列灭活病毒疫苗，但是无一有效。最近发现一种减毒的HSV具有较弱的免疫原性。在临床上评估了基于两种重组糖蛋白的亚单位疫苗与不同佐剂组分的组合。一种疫苗是由Chiron研发出的，其含有HSV-2糖蛋白D(gD2)和糖蛋白B(gB2)的截短形式，从转染的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中纯化获得并且用MF59佐剂进行制剂。另一种疫苗是由葛兰素史克公司(GSK)研发出的，其含有截短的gD2，用佐剂铝和3-O-脱酰单酰磷脂A(MPL)制剂。两种疫苗都具有免疫原性并且在I/II期临床试验中都具有较好的耐受性。但是在III期试验中，Chiron研制的疫苗对于HSV-2的血清转化并不具有总体上的效果，因此研究到此为止。GSK研制的疫苗对于HSV-1、HSV-2血清阴性的女性志愿者具有显著的效果(73-74％)，但是对于男性无效。
虽然即使是疫苗效果的有限，也能造福于HSV患者，但这些试验仅测试了疫苗可能性中的一小部分。这是因为疫苗的研发并不是系统的。全病毒疫苗的研究是假设将病原体自身呈现给免疫系统时能够产生最佳的免疫效果。确实，全病原体疫苗的免疫应答范围和持续时间在过去一直都优于亚单位疫苗。但是，必须考虑到疫苗株的致病性。由于亚单位疫苗被认为在感染过程中的疾病发病和免疫原性中发挥重要作用，因此目前选择亚单位疫苗用于疫苗测试。通过这些方式鉴定出针对HSV的候选疫苗，它们在某些制剂中具有有限的效果，但是在其他制剂中却没有效果。因此，需要有新的和改进的方法，来研发疱疹病毒疫苗以抵御疱疹疾病。
II.发明概述
HSV-2的感染和传播是重要的健康问题。本申请提供了，尤其是，一些高效的HSV-2疫苗。所述疫苗可用于治疗或预防。本申请还提供了特异性抗原和采用该抗原诱发针对HSV-2的免疫应答的方法。
一方面，本发明提供了一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和由SEQID NOS：2、3、4和5组成的至少一个多肽或其免疫原性片段，并且可选地进一步包括SEQ ID NO：1或其免疫原性片段。所述疫苗制剂可以包括由上述SEQID NOS之一组成的第一多肽，以及由上述SEQ ID NOS中的另一个组成的第二多肽。
本发明的另一方面提供了一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂、含有皂树皂苷的一个或多个纯化成分的佐剂，和至少一个多肽，其具有SEQ ID NOS：2、3、4和5中的任意一个或其免疫原性片段，并且可选地进一步包括SEQ IDNO：1或其免疫原性片段。
进一步地，本发明的一方面提供了一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和由SEQ ID NO：2或其免疫原性片段组成的多肽。SEQ ID NO：2中的残基可以被截短。多肽可以是糖基化的，或者可以是未糖基化的。
再进一步地，本发明的一方面提供了一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和包括SEQ ID NO：5的多肽，其中所述多肽缺失了跨越341-363位氨基酸残基的跨膜结构域中的全部或至少8个氨基酸残基。由此本发明的一个方面提供了一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和包括SEQ ID NO：4的多肽。该多肽可以是糖基化的，或者可以是未糖基化的。
本发明的另一方面提供了一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和包括SEQ ID NO：5的多肽。该多肽可以是糖基化的，或者可以是未糖基化的。
本发明的另一方面提供了一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和包括SEQ ID NO：3的多肽。该多肽可以是糖基化的，或者可以是未糖基化的。
在一些实施方式中，疫苗制剂中的多肽可以缀合在免疫原性载剂上，例如匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin)。在其他实施方式中，疫苗制剂进一步包含佐剂。佐剂可以是皂树皂苷的一个或多个纯化成分。
本发明提供了通过给药有效量的本发明所述的疫苗制剂，来治疗患有HSV-2感染或者HSV-2易感对象的方法。在一些实施方式中，所述方法抑制HSV-2的症状，例如减少疱疹性病变的数量、减少对象经受疱疹性病变的天数、抑制HSV-2感染未感染对象、增加针对一个或多个HSV-2抗原的IgG滴度和/或T细胞应答，和/或减少在HSV-2感染初期时的疱疹性病变数目。
在另一方面，本申请描述了高通量系统的结果，其用于体外筛选效应T细胞库，从而从HSV-2的完整蛋白质组中鉴定出T细胞特异性的靶抗原。该技术允许鉴定出可作为预防性或治疗性组分的单个抗原，其有望在体内发挥效果。一方面，本发明提供了若干关键的保护性T细胞抗原，可将其加入到诱导免疫应答的基于蛋白的组分中。
本发明的一个方面提供了药物组合物，其包括两种或更多分离的多肽，所述分离的多肽选自具有SEQ ID NOS：1-38中至少一个氨基酸序列的多肽，或其免疫原性片段。
另一方面，本发明提供了疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和具有SEQID NOS：1-38中至少一个的多肽或其免疫原性片段。在某些实施方式中，所述多肽由SEQ ID NOS：1-38中的至少一个组成。
本发明的另一方面提供了在对象中诱导免疫应答的方法，包括向所述对象给药有效量的疫苗制剂或药物组合物，其包含有效量的两种或更多分离的多肽，所述分离的多肽选自具有SEQ ID NOS：1-38中至少一个氨基酸序列的多肽，或其免疫原性片段。
本发明的另一方面还提供了在对象中减少HSV-2感染的一种或更多症状的方法，包括向所述对象给药有效量的疫苗制剂或药物组合物，其包含有效量的两种或更多分离的多肽，所述分离的多肽选自具有SEQ ID NOS：1-38中至少一个氨基酸序列的多肽，或其免疫原性片段。在一些实施方式中，HSV-2感染的症状包括一个或多个病变形成、疼痛、刺激、瘙痒、发热、不适、头痛、病毒释放和前驱症状。
进一步地，本发明的一方面提供了抑制HSV-2感染的初始阶段的方法，包括给药有效量的疫苗制剂或药物组合物，其包含有效量的两种或更多分离的HSV多肽，所述分离的多肽选自具有SEQ ID NOS：1-38中至少一个氨基酸序列的多肽，或其免疫原性片段。
申请人在此还披露了本发明的另一个方面，提供了在暴露于HSV-2的对象中抑制潜伏HSV-2感染发展的方法，包括给药有效量的疫苗制剂或药物组合物，其包含有效量的两种或更多分离的HSV-2多肽，所述分离的HSV-2多肽选自具有SEQ ID NOS：1-38中至少一个氨基酸序列的多肽，或其免疫原性片段。
在一个相关的方面，本发明提供了在HSV-2感染的对象中减少病毒释放的方法，包括给药有效量的疫苗制剂或药物组合物，其包含有效量的两种或更多分离的HSV-2多肽，所述分离的HSV-2多肽选自具有SEQ ID NOS：1-38中至少一个氨基酸序列的多肽，或其免疫原性片段。
进一步地，本发明一方面提供了在HSV-2感染的对象中减少反复发作的方法，包括给药有效量的疫苗制剂或药物组合物，其包含有效量的两种或更多分离的HSV-2多肽，所述分离的HSV-2多肽选自具有SEQ ID NOS：1-38中至少一个氨基酸序列的多肽，或其免疫原性片段。
本发明的另一个方面提供了生产任一上述药物组合物的方法，包括表达所述两种或更多的多肽，并且分离所述两种或更多的多肽。
申请人进一步披露了本发明的一个方面，提供了在HSV-2的感染对象中诊断症状的严重程度的方法，包括(i)检测对自体抗原提呈细胞(APC)应答产生的T细胞激活，所述抗原提呈细胞由一种或更多分离的HSV-2多肽致敏，所述HSV-2多肽选自SEQ ID NOS：1-38的多肽或其免疫原性片段，以及(ii)将检测到的水平与从经受频繁发作的被感染对象中获得的参照水平相比较；与参照水平相比，所述应答显著增强则表示所述对象具有较轻的症状(例如，对象无症状)。应答显著的增强可以是，例如包括1.5倍或更高、2倍或更高、3倍或更好、5倍或更高、10倍或更高或者甚至20倍或更高的增强。
本发明的另一方面提供了在HSV-2的感染对象中诊断症状的严重程度的方法，包括(i)检测来自天然感染对象或暴露于病毒的对象的T细胞对APC应答产生的激活，所述APC提呈一种或更多分离的HSV-2多肽，所述HSV-2多肽选自SEQ ID NOS：1-38的多肽或其免疫原性片段，以及(ii)将检测到的水平与从经受频繁发作的被感染对象中获得的参照水平相比较；与参照水平相比，所述激活显著减弱则表示所述对象具有较重的症状(例如，频繁发作)。
本发明的另一个方面提供了包含抗体的药物组合物，所述抗体结合一种或更多分离的HSV多肽或其免疫原性片段，所述HSV多肽选自由SEQ IDNOS：1-38组成的列表。
此外，本发明一个不同的方面提供了HSV-2的免疫原性组合物的鉴定方法，通过检测两种或更多多肽促进哺乳动物T细胞生成细胞因子的能力，所述多肽选自具有SEQ ID NOS1-38任一氨基酸序列的多肽或其免疫原性片段，其中免疫原性组合物能提高细胞因子水平，使其显著高于阴性哺乳动物T细胞生成的细胞因子水平。通常，显著提高的细胞因子水平是阴性细胞生成的水平的至少1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍或者甚至20倍。
本发明的另一个方面提供了在来源于对象的样本中检测HSV-2的方法，所述方法包括(i)将所述样本与一种或更多抗体接触，所述抗体针对一种或更多具有SEQ ID NOS：1-38中某一氨基酸序列的多肽或其免疫原性片段，并且(ii)检测所述一种或更多抗体与所述样本中的一种或更多HSV-2多肽的结合。
最后，本发明的一个方面提供了药物组合物，包括两种或更多分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸选自核酸序列SEQ ID NOS：1-38或其片段，所述片段编码免疫原性多肽。
III.附图说明
图1A和B是附图，分别显示了用gD2全长蛋白、gD2ΔTMR或截短至跨膜结构域上游的gD2蛋白(以306t表示)免疫后，CD4+和CD8+T细胞的免疫应答。
图2A和B是附图，分别显示了用混合、重叠的多肽免疫后的CD4+和CD8+T细胞的免疫应答，所述多肽跨越了由RS.1.1、RS1.3.1和RS1.3.2编码的gL2、ICP4.1或IPC4片段。
图3A和B是附图，分别显示了用gD2ΔTMR或gD2ΔTMR和ICP4.2免疫后的CD4+和CD8+T细胞的免疫应答。
IV.发明详述
本申请描述了针对HSV-2的疫苗和免疫原性组合物。疫苗制剂可以包括一种多肽，所述多肽具有表1中的序列或其免疫原性片段，或者包括至少两个多肽的组合，所述至少两个多肽具有表1中的序列或其免疫原性片段。在某些实施方式中，疫苗中的多肽具有SEQ ID NOS：1-26中至少一个的完整序列，或者由SEQ ID NOS：1-26中任意一个的完整序列组成。免疫原性组合物可以包括一种多肽，所述多肽具有表1或表2中的序列或其免疫原性片段，或者包括至少两种多肽的组合，所述至少两种多肽具有表1或表2中的序列或其免疫原性片段。在某些实施方式中，免疫原性组合物中的多肽具有SEQ ID NOS：1-38中任意一个的完整序列，或者由SEQ ID NOS：1-38的完整序列组成。表1或表2中的多肽可以是由SEQ ID NOS：39-46和117-134所示的序列编码，和/或可由在网址http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez可公开获得的cDNA序列编码。cDNA和蛋白序列还可以由任何已知的HSV-2病毒株中获得，包括HG52、333和Strain G。相应地，可以从NC_001798.1的基因组序列中以基因或蛋白名称登录获取cDNA序列，并且可以与NC_001798.1披露的序列有大约97％的保守度。在本申请的描述中，这些多肽可以由蛋白名称、SEQ ID NO和/或编码该蛋白的基因名称来指代。
可以在多种表达系统中制备这些多肽。适宜的表达系统包括基于大肠杆菌和基于杆状病毒的表达系统(例如在昆虫细胞中)。采用大肠杆菌制备的多肽通常是全长和未糖基化的多肽，但也能够制备截短的变体。在某些实施方式中，这些截短的变体保留全部或部分信号结构域。采用杆状病毒表达系统制备的多肽通常缺少N-端信号序列，但是被全部或部分糖基化。
表1.疫苗或免疫原性组合物的HSV-2抗原
Figure BPA00001498573000081
Figure BPA00001498573000091
表2.免疫原性组合物的其他的HSV-2抗原
Figure BPA00001498573000101
A.免疫原性HSV多肽
表1和/或表2所示的免疫原性多肽或多核苷酸可用于药物组合物。本发明提供的药物组合物包含药用载剂以及免疫原性多肽或编码这些免疫原性多肽的多核苷酸。可以通过筛选来源于HSV-2感染患者的免疫细胞来识别HSV-2的抗原。简言之，用细菌表达HSV-2的抗原库，并将其与抗原提呈细胞(APC)混合。然后APC将衍生自HSV-2的多肽处理并提呈给淋巴细胞，所述淋巴细胞分离自HSV-2感染的人类患者。患者属于以下人群：(1)暴露于HSV-2但是为血清反应阴性，(2)感染了HSV-2但无症状，(3)感染了HSV-2并且经受不频繁的发作，(4)感染了HSV-2并且经受频繁的发作，(5)从未感染，以及(6)HSV-2血清反应阴性(HSV-2-)但HSV-1血清反应阳性(HSV-1+)。比较每种人群的淋巴细胞对衍生自HSV-2多肽的反应性，通过筛选检测到一些抗原，这些抗原在一种患者人群中诱导产生反应性淋巴细胞的频率比在其他人群中高。感染但无症状的患者，以及暴露但血清反应阴性的患者可以激发出一些在经受频繁发作的患者中所没有的防御性免疫应答；尤其是，暴露但是血清反应阴性的患者被认为具有累积的对HSV-2感染的消除性免疫。认为一组独特的多肽能够激活来自这些患者人群的淋巴细胞。因此，本发明包括了特定的HSV-2多肽的组合物，其能够激活感染但无症状的患者、或暴露但血清反应阴性患者的淋巴细胞，或这些多肽的组合，用于抑制或抵抗HSV-2的感染。
基于在感染但无症状的患者、或暴露但血清反应阴性的患者中的免疫原性而鉴定出的抗原，同样地也被预期在任何对象中都具有免疫原性。
在一些实施方式中，多肽可以诱导产生先天免疫应答、体液免疫应答或细胞介导的免疫应答。细胞介导的免疫应答可以涉及TH1细胞，在某些实施方式中，涉及TH1细胞的免疫应答是一种TH1细胞被激活的免疫应答。在一些实施方式中，免疫原性多肽避免诱导TH2细胞因子。在一些实施方式中，细胞介导的免疫应答可以涉及TH17细胞，并且在某些实施方式中，涉及TH17细胞的免疫应答是一种TH17细胞被激活的免疫应答。
本发明的组合物中的多肽(或其免疫原性片段)可以在多种个体中诱导T细胞应答，不论这些个体是何种HLA单倍型。特别地，所述多肽的抗原决定簇可以在具有一个或多个下列HLA超型的个体中诱导T细胞应答：HLA-A2、-A3、-A24、-A1、-B7、-B8、-B27、-B44、-B58和B62，以及HLA-DQB01、-DQB02、-DQB03、-DQB-04和-DQB05。
在一些实施方式中，本发明的组合物中提供了表1和/或表2中的一种或更多多肽(或其免疫原性片段)，例如两种、三种、四种或更多。在一些实施方式中，本发明的组合物中提供了表1和/或表2中的两种多肽。在其他的实施方式中，本发明的组合物中提供了表1和/或表2中的三种多肽。
在一些实施方式中，提供了表1和/或表2中的两种、三种、四种或更多多肽(或其免疫原性片段)作为缀合物。在一些实施方式中，提供了表1和/或表2中的两种多肽，或者表1和/或表2中的三种多肽作为缀合物。在一些实施方式中，表1和/或表2中的两种、三种、四种或更多多肽彼此共价结合，例如，作为融合蛋白。在一些实施方式中，表1和/或表2中的两种、三种、四种或更多多肽彼此共价结合，例如，作为融合蛋白。在一些实施方式中，表1和/或表2中的两种多肽，或者表1和/或表2中的三种多肽，彼此共价结合，例如，作为融合蛋白。
在一些实施方式中，本发明的组合物含有两种或更多多肽，其选自由SEQID NOs.1-38组成的组，并且可以包含或可以不包含任何其他HSV-2多肽。
在某些实施方式中，申请人提供了与表1和/或表2中的基因编码的多肽至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％相同的多肽，或所述多肽的部分。在某些实施方式中，同源多肽的长度为至少8、10、15、20、30、40、50、60、80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、350、400、450或500个氨基酸。在一些实施方式中，如上文描述的多肽的长度不超过300、350、400、450或500个氨基酸。
免疫原性组合物还可以含有所述多肽或基因的部分，例如缺失突变体、截短突变体、寡核苷酸和多肽片段。在一些实施方式中，所述蛋白的部分具有免疫原性。
可以采用与测定全长蛋白免疫原性相同的检测方法，很容易地测定蛋白的一部分或其同源物的免疫原性。在一些实施方式中，蛋白的部分具有与全长蛋白基本相同的免疫原性。在一些实施方式中，与全长蛋白的免疫原性相比，所述免疫原性降低不超过10％、20％、30％、40％或50％。蛋白片段可以是，例如，线性的、环状的或支链的。在某些实施方式中，蛋白或蛋白的片段具有一个或多个非天然氨基酸(例如，在天然蛋白中通常发现的那20种以外的氨基酸)。非天然氨基酸可以具有非典型的侧链。除此之外，还可以采用模拟肽学；这些可以在肽骨架中引入改变。
本申请所描述的多肽组合物的一些实施方式包括含有膜转移序列(MTS)的免疫原性多肽，以促使多肽进入哺乳动物细胞并且随后激活细胞介导免疫应答。示例性的膜转移序列包括，Kaposi成纤维细胞生长因子的信号序列的疏水区、α-突触核蛋白、β-突触核蛋白或γ-突触核蛋白的MTS、触角基因(Antennapedia)同源结构域的第三螺旋、SN50、整合素β3h-区、HIV Tat、pAtnp、PR-39、abaecin、apidaecin、Bac5、Bac7、P.berghei CS蛋白，以及美国专利6,248,558、6,432,680和6,248,558中描述的MTS。
在某些实施方式中，免疫原性多肽缀合(例如，共价结合)于另一个分子。这样可以，例如，增加抗原的半衰期、可溶性、生物利用度或免疫原性。可缀合于免疫原性多肽的分子包括碳水化合物、生物素、聚乙二醇(PEG)、聚唾液酸、N-丙酰化聚唾液酸、核苷酸、多糖、和PLGA。有多种不同类型的PEG，分子量从300g/mol以下到10,000,000g/mol以上。PEG链可以是线性的、支链的或带有冠状或星状构型。
B.用于疫苗的免疫原性HSV-2多肽和核酸
在某些实施方式中，提供了一种或更多(例如两种、三种、四种或更多)免疫原性片段或其变体的混合物。例如，疫苗制剂可以包含SEQ ID NOS：1-26中的任意一种或更多。
在某些实施方式中，疫苗制剂可以包含ICP4、ICP4.2、gL2、gD2ΔTMR和gD2(SEQ ID NOS：1-5)中的任意一种、两种或三种，或其免疫原性片段。在某些实施方式中，组合包含ICP4(SEQ ID NO 1)和ICP4.2(SEQ ID NO 2)中的仅一种多肽或其免疫原性片段。在其他实施方式中，组合包含gD2ΔTMR(SEQ ID NO：4)和gD2(SEQ ID NO：5)中的仅一种多肽或其免疫原性片段。
示例性的ICP4、ICP4.2、gL2、gD2ΔTMR和gD2的组合包括：
以上描述的单个抗原和组合还可以包括其他的来源于或衍生于HSV-2的多肽，例如具有选自SEQ ID NO：6-26序列的多肽或其免疫原性片段。
1.RS1编码的ICP4(SEQ ID NO：1)
RS 1编码ICP4，一种转录反式激活因子，其可以与一般转录体系中的特定元件相互作用并且将其招募到病毒启动子处，并稳定其形成转录起始结构。ICP4包含不同的结构域，用于反式激活/磷酸化(该区域大约跨越SEQ ID NO：1的残基150-200)、DNA结合(该区域大约跨越SEQ ID NO：1的残基380-540)、核定位(该区域大约跨越SEQ ID NO：1的残基630-730)以及后期调控反式激活(该区域大约跨越SEQ ID NO：1的残基1220-1319)。可以在公众可获得的数据库Entrez Gene(见万维网中NCBINIH的网站，网址www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez？db＝gene)中，在人II型疱疹病毒的全基因组序列中通过搜索RS1获得RS1的DNA和蛋白序列。
在一些实施方式中，针对HSV-2的疫苗包括一多肽，其含有选自ICP4(SEQID NO：1)的残基383-766中的至少20个连续氨基酸残基，但不超过ICP4(SEQID NO：1)的1000个氨基酸。该多肽还可以是所述至少20个残基片段的变体。
在某些实施方式中，所述多肽含有ICP4的不超过950、900、850、800、750、700、650、600、550、500、450或者甚至400个连续氨基酸残基。示例性的多肽大约对应于全长ICP4的以下氨基酸残基：383-766(RS1.2)；1-400(RS1.1)；750-1024(RS1.3.1)；1008-1319(RS1.3.2)；750-1319(RS1.3)；280-785(具有全长DNA结合区域的RS1.4)；680-1319(具有糖基化酶/C-端区域的RS1.5)；208-1319(RS1.6，在其N-末端还可以具有一个甲硫氨酸残基)；1-380加上545-1319(RS1.7，其中缺失了大约跨越残基381-544的区域，移除了DNA结合区域)；1-785加上870-1319(RS1.8，其中缺失了大约跨越残基786-869的区域，移除了核定位结构域)，或者ICP4(SEQ ID NO.1)的1-766、383-1318、100-750、400-1300、250-766、383-900等等。
2.RS1.2编码的ICP4内部片段ICP4.2(SEQ ID NO：2)。
RS1.2编码384个氨基酸的片段，其对应于ICP4的残基383-766(或RS1序列的第1150-2398位核苷酸)，称为ICP4.2。可以在公众可获得的数据库EntrezGene(见万维网中NCBI NIH的网站，网址www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez？db＝gene)中，在人II型疱疹病毒的全基因组序列中，通过检索RS1获得RS1.2的DNA和蛋白序列。
在特定的实施方式中，针对HSV-2的疫苗包括一多肽，其具有ICP4.2(SEQ ID NO：2)的从50个到全部384个氨基酸残基，例如从100到384个，200到384个，或者250到350个残基。在特定的实施方式中，该多肽含有ICP4.2(SEQ ID NO：2)的全部，或者是ICP4.2(SEQ ID NO：2)本身。这些多肽可以，例如，含有本申请描述的ICP4.2(SEQ ID NO：2)的全长或片段，以及ICP4(SEQ ID NO.1)的残基1-382或767-1318或其片段，它们在某些实施方式中与所用的ICP4.2的氨基酸残基相连。前文描述了将SEQ ID NO：2的残基与选自SEQ ID NO：1中的1-382或767-1318残基结合的示例性片段。
ICP4.2的免疫原性片段具有至少一个实验测定的或算法识别的免疫原性部分。以此方法识别的肽包括如下序列：
GLAHVAAAV(SEQ ID NO：47)
FISGSVARA(SEQ ID NO：48)
QYALITRLL(SEQ ID NO：49)
RYDRAQKGF(SEQ ID NO：50)
GYAMAAGRF(SEQ ID NO：51)
PPHADAPRL(SEQ ID NO：52)
KPAAAAAPL(SEQ ID NO：53)
SEAAVAAV(SEQ ID NO：54)
FGWGLAHV(SEQ ID NO：55)
YALITRLLY(SEQ ID NO：56)
ALPRSPRLL(SEQ ID NO：57)
DLLFQNQSL(SEQ ID NO：58)
ADLLFQNQS(SEQ ID NO：59)
ARNSSSFIS(SEQ ID NO：60)
QACFRISGA(SEQ ID NO：61)
FVRDALVLM(SEQ ID NO：62)
FDGDLAAVP(SEQ ID NO：63)
GLGDSRPGL(SEQ ID NO：64)
WAPELGDAA(SEQ ID NO：65)
ECLAACRGI(SEQ ID NO：66)
RAWLRELRF(SEQ ID NO：67).
因此，在一些方面，本申请提供了ICP4.2的免疫原性片段。在某些实例中，这些片段的大小接近于全长多肽。例如，其可以在一端或两端缺失至多一个、两个、三个、四个、五个、十个或二十个氨基酸。在其他实施方式中，这些片段的长度为100-384个氨基酸，或150-384、200-384或者250-384个氨基酸。其他示例性的片段为，残基1-350、1-300、1-250、1-200、1-150、1-100、1-50、50-384、50-350、50-300、50-250、50-200、50-150、50-100、100-384、100-350、100-300、100-250、100-200、100-150、150-383、150-350、150-300、150-250、150-200、200-383、200-350、200-300、200-250、250-383、250-350、250-300、300-383和350-383。上述片段或其亚片段(例如，8-50、8-30或8-20个氨基酸残基的片段)优选具有下述的生物学活性之一，例如将T细胞应答增强至少1.5或2倍。片段可以用作本申请描述的所述疫苗中的所述多肽，或者可以与另一蛋白、蛋白片段或多肽融合。
在某些方面，本申请提供了与ICP4.2具有至少90％、95％、97％、98％、99％或99.5％相似性的免疫原性多肽或其免疫原性片段。
3.UL1编码的糖蛋白L-2(SEQ ID NO：3)
UL1编码糖蛋白L-2(gL-2)，一种病毒与细胞膜融合所必需的异二聚体糖蛋白，使病毒能够进入宿主细胞。可以在公众可获得的数据库Entrez Gene(见万维网中NCBI NIH的网站，网址www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez？db＝gene)中，在人II型疱疹病毒2的全基因组中检索获得UL1的DNA和蛋白序列。
在一些实施方式中，针对HSV-2的疫苗含有一多肽，其包含选自gL2(SEQID NO：3)的残基1-224中的至少20个连续氨基酸残基，但不超过gL2(SEQ IDNO：3)的224个氨基酸。该多肽还可以是所述至少20个残基片段的变体。
在一些实施方式中，所述多肽与SEQ ID NO：3的200-250个氨基酸的片段具有至少85％的相似性。
在某些实施方式中，所述多肽包括gL2的不超过200或100个连续氨基酸。示例性的多肽为gL2(SEQ ID NO：3)的残基1-20、21-40、41-60、61-80、81-100、101-120、121-140、141-160、161-180、181-200、201-221，等等。
在其他方面，本申请提供了gL2的免疫原性片段。gL2的免疫原性片段具有至少一个由实验测定的或算法识别的免疫原性部分。以此方法识别的肽包括如下序列：
AYLVNPFLF(SEQ ID NO：100)
PFLFAAGFL(SEQ ID NO：101)
TEYVLRSVI(SEQ ID NO：102)
GSQATEYVL(SEQ ID NO：103)
RIDGIFLRY(SEQ ID NO：104)
FLEDLSHSV(SEQ ID NO：105)
YVLRSVIAK(SEQ ID NO：106)
YVLRSVIAK(SEQ ID NO：107)
AYLVNPFLF(SEQ ID NO：108)
ETTTRRALY(SEQ ID NO：109)
RIDGIFLRY(SEQ ID NO：110)
YLVNPFLFA(SEQ ID NO：111)
FVCLFGLVV(SEQ ID NO：112)
LYKEIRDAL(SEQ ID NO：113)
GLDTFLWDR(SEQ ID NO：114)
RVSPTRGRR(SEQ ID NO：115)
YVLRSVIAK(SEQ ID NO：115)
GLDTFLWDR(SEQ ID NO：116)
DILRVPCMR(SEQ ID NO：117)
DRHAQRAYL(SEQ ID NO：118)
4.US6编码的糖蛋白D-2(SEQ ID NO：118)和US6ΔTMR编码的内部缺失的糖蛋白D-2
US6编码包膜糖蛋白D-2(gD2)，一种结合宿主细胞的进入受体并可以触发病毒和宿主细胞膜融合的包膜糖蛋白。gD2蛋白具有若干不同的结构域，包括从成熟蛋白中切除的信号结构域(氨基酸残基1-25)和跨膜结构域(大约跨越氨基酸残基340-363)。可以在公众可获得的数据库Entrez Gene(见万维网中NCBI NIH的网站，网址www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez？db＝gene)中，在人II型疱疹病毒2的全基因组中检索获得US6的DNA和蛋白序列。
在一些实施方式中，针对HSV-2的疫苗包括一多肽，其包含缺失了全部或部分跨膜结构域(大约跨越了氨基酸残基340-363，包括端值)以及信号序列的gD2。在其他实施方式中，缺失区域可以额外包括与跨膜结构域侧接的序列的5-10个氨基酸。缺失区域也可以包括跨膜结构域的一部分，例如，残基340-363之间的至少三个氨基酸。在一些实施方式中，跨膜结构域中的至少一个残基被修饰、缺失或取代，使得跨膜结构域不再具有功能。例如，变体可以具有内部缺失，其起始氨基酸残基336、337、338、339、340、341、342、343、344、345或346并终止于氨基酸残基358、359、360、361、362、363、364、365、366、367或368。
缺失氨基酸残基341-363(跨膜结构域)的gD2的编码构建体被称为US6ΔTMR(SEQ ID NO：40)。相应的蛋白被称为gD2ΔTMR(SEQ ID NO：4)。在其他实施方式中，gD2或gD2ΔTMR的免疫原性片段可以在跨膜结构域的某部分具有缺失，和/或在跨膜结构域以外的侧接序列中具有缺失。
在其他方面，本申请提供了gD2或gD2ΔTMR的免疫原性片段。gD2或gD2ΔTMR的免疫原性片段具有至少一个由实验测定或算法识别的免疫原性部分。以此方法识别的肽包括如下序列：
ALAGSTLAV(SEQ ID NO.68)
LLEDPAGTV(SEQ ID NO.69)
VIGGIAFWV(SEQ ID NO.70)
TVYYAVLER(SEQ ID NO.71)
KYALADPSL(SEQ ID NO.72)
AFETAGTYL(SEQ ID NO.73)
APSNPGLII(SEQ ID NO.74)
IPITVYYAV(SEQ ID NO.75)
APPSHQPLF(SEQ ID NO.76)
FLMHAPAFE(SEQ ID NO.77)
FSAVSEDNL(SEQ ID NO.78)
VYYAVLER(SEQ ID NO.79)
IGMLPRFI(SEQ ID NO.80)
YTECPYNKS(SEQ ID NO.81)
FLMHAPAFE(SEQ ID NO.82)
NLGFLMHAP(SEQ ID NO.83)
VIGGIAFWV(SEQ ID NO.84)
GIAFWVRRR(SEQ ID NO.85)
SEDNLGFLM(SEQ ID NO.86)
RTQPRWSYY(SEQ ID NO.87)
IAFWVRRRA(SEQ ID NO.88)
LVIGGIAFW(SEQ ID NO.89)
FWVRRRAQM(SEQ ID NO.90)
PYTSTLLPP(SEQ ID NO.91)
VGTAALLVV(SEQ ID NO.92)
TAALLVVAV(SEQ ID NO.93)
TSTLLPPEL(SEQ ID NO.94)
GTVSSQIPP(SEQ ID NO.95)
TAGTYLRLV(SEQ ID NO.96)
GVTVDSIGM(SEQ ID NO.97)
AFWVRRRAQ(SEQ ID NO.98)
RVYHIQPSL(SEQ ID NO.99)
因此，在某些方面，本申请提供了gD2(SEQ ID NO：5)或gDΔTMR(SEQID NO：4)的免疫原性片段。这些片段，在一些实例中，和全长多肽的大小接近。例如，它们可以在一端或两端缺失至多一个、两个、三个、四个、五个、十个或二十个氨基酸。其他实施方式中，这些片段的长度为100-384个氨基酸、或150-384、或200-384，或者250-384个氨基酸。其他示例性的片段为，氨基酸残基1-350、1-300、1-250、1-200、1-150、1-100、1-50、50-384、50-350、50-300、50-250、50-200、50-150、50-100、100-384、100-350、100-300、100-250、100-200、100-150、150-383、150-350、150-300、150-250、150-200、200-383、200-350、200-300、200-250、250-383、250-350、250-300、300-383和350-383。上述这些片段或其亚片段(例如，氨基酸残基8-50、8-30或8-20的片段)优选具有下述的生物学活性之一：例如将T细胞应答增强至少1.5或2倍。片段可以被用作本申请所述的疫苗中的所述多肽，或可以与另一个蛋白、蛋白片段或多肽融合。
在其他实施方式中，所述多肽含有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5的全长序列，或者由SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5的全长序列组成。在某些实施方式中，gD2的免疫原性片段保留了全部或部分的信号结构域(氨基酸残基1-25)和/或跨膜结构域(氨基酸残基339-363)。
在某些实施方式中，多肽与人类自身抗原具有低于20％、30％、40％、50％、60％或70％的同源性。这样的自身抗原的例子包括HSV-1的UL6和HSV-2的gK或UL53。
在某些方面，本申请提供了与gDΔTMR具有至少90％、95％、97％、98％、99％或99.5％相似性的免疫原性多肽或其免疫原性片段。
C.HSV-2多肽的其他性质
通常来说，在本申请中描述的疫苗制剂或药物组合物中存在的多肽具有免疫原性，可以是在单独存在时或者在作为变体时，变体包括与另一个多肽融合的多肽，或与佐剂混合或复合的多肽。变体还包括本申请中描述的具有低于100％序列同一性的序列。此外，还可以采用具有合适免疫原性的片段、前体和类似物。
这些多肽可以在哺乳动物例如，小鼠、豚鼠或人类中具有免疫原性。免疫原性多肽通常能够在实验或在对象中产生显著的免疫应答。或者，免疫原性多肽可以(i)诱导抗体生成，例如结合该多肽的中和抗体，(ii)诱导TH1免疫，(iii)激活CD8+CTL应答，例如通过增加CD8+T细胞和/或增加CD8+T细胞在感染或再感染位点的定位，(iv)诱导TH17免疫，和/或(v)激活先天免疫。在一些实施方式中，免疫原性多肽所产生的针对该抗原的抗体的量可以被检测到。
在某些实施方式中，多肽与人类自身抗原的同源性低于20％、30％、40％、50％、60％或70％。
多肽可以含有一个或多个免疫原性部分和一个或多个非免疫原性部分。免疫原性部分可以采用多种方法识别，包括蛋白芯片、ELISPOT/ELISA技术、和/或对待测多肽的不同缺失突变体(例如，片段)进行的特定实验。免疫原性部分还可以通过计算机算法识别。某些此类算法，例如EpiMatrix(EpiVax)，采用计算矩阵的方法。其他识别抗原决定簇的计算工具包括PEPVAC(Promiscuous EPitope-based VACcine，由Dana Farber Cancer Institute在万维网上提供，网址immunax.dfci.harvard.edu/PEPVAC)、MHCPred(采用部分最小二乘法，由The Jenner Institute在万维网上提供，网址为www.jenner.ac.uk/MHCPred)，和Syfpeithi，在万维网上提供，网址为www.syfpeithi.de/。
在一些实施方式中，疫苗或药物组合物可以包含融合蛋白和/或融合DNA构建体。上述相关的DNA序列可以采用不影响其编码蛋白产物序列的方式来修饰。例如，可以对DNA序列进行密码子优化，从而改进在宿主例如大肠杆菌或昆虫细胞系(例如采用杆状病毒表达系统)或哺乳动物细胞系(例如中国仓鼠卵巢细胞)中的表达。在特定的实施方式中，例如当采用较小的相关多肽时，包括分子量小于大约5000道尔顿，例如1500到5000道尔顿，可以通过修饰来诱导所需的免疫应答。例如，可以将较小的多肽缀合到适当的免疫原性载剂，如来自其他致病微生物或病毒的蛋白(例如，破伤风类毒素)，或者大蛋白(例如，钥孔血蓝蛋白)等等。可以直接或间接(如通过接头)缀合。在其他特定的实施方式中，融合蛋白可以含有以上披露的多肽或其免疫原性片段或其变体和标签。标签可以位于N-端或C-端。例如，标签可以加在核酸或多肽上以促进纯化、检测、溶解，或使蛋白或核酸具有其他期望的性质。例如，纯化标签可以是可用于亲和纯化的肽、寡肽、或多肽。此类范例包括His、GST、TAP、FLAG、myc、HA、MBP、VSV-G、硫氧还原蛋白、V5、亲和素、链霉亲和素、BCCP、钙调蛋白、Nus、S标签、脂蛋白D和β半乳糖苷酶。在某些实施方式中，融合部分是短的。因此，在一些例子中，融合蛋白含有在上述多肽的，例如表1中任意多肽的连续氨基酸，一端或两端的不超过1、2、3、4、5、10、20、或50个额外的氨基酸。
在某些实施方式中，标签、分泌信号或其他信号序列可以加在多肽的C-末端和/或N-末端。可以使用标签来辅助表达多肽的纯化。示例性的标签包括HHHHHH(SEQ ID NO：130)和MSYYHHHHHH(SEQ ID NO：131)。分泌信号可以为了在非哺乳动物细胞——例如昆虫细胞——中使用而进行优化。一个示例性的分泌信号是MKFLVNVALVFMVVYISYIYA(SEQ ID NO：132)。
检测标签可用于标签的检测，并且因此检测任何与之融合的氨基酸序列。检测标签包括荧光蛋白、与荧光标记物结合的蛋白、和与高电子密度基团结合的蛋白。荧光蛋白的例子包括dsRed、mRFP、YFP、GFP、CFP、BFP和Venus。与荧光或高电子密度标记物的蛋白的一个例子是FlAsH。
本申请披露的另一个方面是针对本发明的组合物(例如，含有表1中列出的一个或多个或者两个或更多多肽的组合物)而产生的抗体制剂。包括了多种抗体中的任意抗体。此类抗体包括，例如多克隆的、单克隆的、重组的、人源化或部分人源化的、单链的、Fab，及其片段，等等。该抗体可以是任意同种型，例如IgA，IgG，各种IgG同种型例如IgG1、IgG2、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgG4等等；其可以来源于任意产生抗体的动物物种，包括山羊、兔子、小鼠、鸡等等。在一些实施方式中，在遗传转化的宿主例如大肠杆菌中表达和组装Fab分子。Lambda载体系统可用于表达Fab的种群，其潜在的多样性等于或高于产生前体抗体的对象。参见Huse et al.(1989)，Science 246，1275-81。
D.疫苗和药物组合物的成分
在某些实施方式中，疫苗和药物组合物具有一个或多个上述的多肽和核酸，以及一个或多个的如下成分：佐剂、稳定剂、缓冲液、表面活性剂、控释组分、盐、防腐剂和针对所述抗原的特异性抗体。
1.佐剂
在此描述的疫苗制剂和药物组合物的每一种都可以包含佐剂。佐剂可以根据作用机理大致分为两类：疫苗递送系统和免疫激活佐剂(参见，例如Singhet al.，Curr.HIV Res.1：309-20，2003)。疫苗递送系统通常是颗粒化的制剂，例如乳剂、微粒、免疫激活复合物(ISCOM)，其可以为，例如，颗粒和/或基质，和脂质体。与其不同的是，免疫激活佐剂某些情况下是由病原体衍生而来并且可以呈现病原相关分子模式(PAMP)，例如，脂多糖(LPS)、单磷酸脂质(MPL)或含CpG的DNA，其可以激活先天免疫系统的细胞。
此外，佐剂还可以分为有机佐剂和无机佐剂。无机佐剂包括铝盐，例如磷酸铝，无定形羟基磷酸硫酸铝和氢氧化铝，常用于人疫苗中。有机佐剂含有有机分子，包括大分子。一个有机佐剂的例子是霍乱毒素。
佐剂还可以根据其诱导的反应来分类，并且佐剂可以激活一种以上的反应。在一些实施方式中，佐剂诱导CD4+T细胞的激活。佐剂可以诱导TH1细胞和/或TH17细胞和/或TH2细胞的激活。另外，佐剂可以诱导TH1细胞和/或TH17细胞的激活但是不会诱导TH2细胞的激活，反之亦然。在一些实施方式中，佐剂诱导CD8+T细胞的激活。在进一步的实施方式中，佐剂诱导自然杀伤T(NKT)细胞的激活。在一些实施方式中，佐剂诱导TH1细胞或TH17细胞或TH2细胞的激活。在其他实施方式中，佐剂诱导B细胞的激活。在其他实施方式中，佐剂诱导抗原提呈细胞的激活。这些策略不是互相排斥的；在一些方案中，佐剂激活一种以上的细胞。
在某些实施方式中，佐剂是提高抗原提呈细胞如树枝状细胞的数量或活性的物质。在某些实施方式中，佐剂促进抗原提呈细胞如树枝状细胞的成熟。在一些实施方式中，佐剂是皂苷或者含有皂苷。典型的皂苷是三萜苷，例如分离自皂树皂苷树皮的三萜苷。自生物来源提取的皂苷可以被进一步分馏(例如，通过色谱)，以分离得到具有最佳佐剂活性和可接受毒性的提取物部分。皂树皂苷提取物中作为佐剂的典型成分是成分A和C。一个示例性的皂苷佐剂为QS-21，可以从Antigenics处获得。QS-21是缀合了低聚寡糖的小分子。可选地，QS-21可以与脂质混合，例如3D-MPL或胆固醇。
本申请描述的疫苗制剂中可以使用的皂苷的一种特定形式是免疫激活复合物(ISCOM)。ISCOM是本领域公知的一类佐剂，通常含有皂树皂苷成分和脂质(例如胆固醇，磷脂类如磷脂酰胆碱)。在某些实施方式中，ISCOM与感兴趣的多肽或核酸组装在一起。但是，不同的皂苷成分可以以不同的比例使用。另外，不同的皂苷成分可以在同一个颗粒中共同存在，或者在每个颗粒中基本上只有一种成分(由此，通过将带有不同成分的颗粒混合在一起而生成所示的成分A和C的比例)。在这样的情况下，“基本上”是指少于20％、15％、10％、5％、4％、3％、2％或者甚至1％。这样的佐剂可以包含成分A和成分C，混合比例为70-95A∶30-5C，例如70A∶30C至75A∶5C、75A∶5C至80A∶20C、80A∶20C至85A∶15C、85A∶15C至90A∶10C、90A∶10C至95A∶5C、或95A∶5C至99A∶1C。CSL生产的ISCOMatrix和Isconova生产的AbISCO 100和300，是含有皂苷、胆固醇和磷脂(来源于细胞膜的脂质)的ISCOM基质，可形成笼形结构，直径通常为40-50nm。Nordic Vaccines生产的Posintro是一种ISCOM基质，其中免疫原可以通过多种不同的机理结合在颗粒上，例如，通过电荷修饰的静电相互作用、掺入螯合基团或直接结合。
在一些实施方式中，佐剂是TLR配体。TLR是蛋白，可以存在于白细胞的细胞膜，并可识别外来抗原(包括微生物抗原)。示例性的TLR配体为IC-31，可以从Intercell处获得。IC31包含抗微生物肽，KLK，以及免疫刺激性的寡聚脱氧核苷酸，ODN1a。IC31具有TLR9激动剂活性。另一个例子是含CpG的DNA，可以从Prizer(Coley)处获得不同种类的含CpG的DNA：VaxImmune是CpG 7909(一种含有CpG的寡聚脱氧核苷酸)，和Actilon是TLR9激动剂(一种含有CpG的寡聚脱氧核苷酸)。
在一些实施方式中，佐剂是纳米乳剂。一个示例性的纳米乳剂佐剂是Nanostat Vaccine，由Nanobio生产。此纳米乳剂是高能水包油乳剂。这种纳米乳剂通常的大小为150-400纳米，并含有表面活性剂以提供稳定性。更多关于Nanostat的信息可在美国专利6,015,832、6,506,803、6,559,189、6,635,676、和7,314,624中获得。
佐剂可以共价结合于抗原(例如，上述的多肽)。在一些实施方式中，佐剂可以是一种能够通过激活抗原提呈细胞(APC)而诱导炎症反应的蛋白。在一些实施方式中，一个或多个这样的蛋白可以通过重组与选择的蛋白融合，从而使得到的融合分子能够促进树枝状细胞成熟、激活树枝状细胞产生细胞因子和趋化因子，并且最终增加抗原向T细胞的提呈并且引发T细胞应答(参见Wu et al.，Cancer Res 2005；65(11)，pp 4947-4954)。其他可以共价结合于抗原的示例性的佐剂包括多糖、合成肽、脂肽和核酸。
佐剂可以单独使用或两种或更多联合使用。佐剂可以直接与抗原缀合。佐剂还可以组合使用，以增强对于抗原的免疫应答的强度。通常，在疫苗的每一剂中都含有同一或混合的佐剂。然而，可选地，可以在首剂疫苗中给药佐剂，而不在后续的剂量中(例如，强化注射)。或者，可以在首剂疫苗中给药强佐剂，而在后续的剂量中给药较弱的佐剂或较低剂量的强佐剂。佐剂在对象中的给药可以在抗原给药之前、在抗原给药的同时或者在抗原给药之后(某些情况下在1、2、6或12小时之内，某些情况下在1、2或5天之内)。某些佐剂适用于人类患者，非人类动物或两者都适用。
2.疫苗和药物组合物的其他成分
除上述的抗原和佐剂之外，疫苗制剂或药物组合物可以包含一种或更多其他成分。
在某些实施方式中，疫苗制剂或药物组合物可以包含一种或更多稳定剂，例如糖(例如蔗糖、葡萄糖或果糖)、磷酸盐(例如磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾或磷酸二氢钠)、谷氨酸盐(例如L-谷氨酸一钠)、明胶(例如处理过的明胶、水解明胶或猪明胶)、氨基酸(例如精氨酸、天冬酰胺、组氨酸、L-组氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸及其烷基酯)、肌苷或硼酸钠。
在某些实施方式中，疫苗制剂或药物组合物包含一种或更多缓冲液，例如碳酸氢钠和抗坏血酸的混合物。在一些实施方式中，疫苗制剂可以以盐水给药，例如磷酸盐缓冲液(PBS)或蒸馏水。
在某些实施方式中，疫苗制剂或药物组合物包含一种或更多表面活性剂，例如聚山梨醇酯80(吐温80)、Triton X-100、聚乙烯乙二醇叔-辛基苯基醚叔-辛基苯氧基聚乙氧基乙醇4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯基-聚乙烯乙二醇(TRITONX-100)、聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯聚乙烯乙二醇山梨醇单月桂酸酯(吐温20)；以及4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯基与甲醛和环氧乙烷形成的聚合物(TYLOXAPOL)。表面活性剂可以是离子的或非离子的。
在某些实施方式中，疫苗制剂或药物组合物包含一种或更多盐类，例如氯化钠、氯化铵、氯化钙或氯化钾。
在某些实施方式中，疫苗中含有防腐剂。在其他实施方式中，不使用防腐剂。防腐剂多用于含有多剂量疫苗的管中，较少用于含单一剂量疫苗的管中。在某些实施方式中，防腐剂是2-苯氧乙醇、甲基和丙基对羟苯甲酸酯、苯甲醇和/或山梨酸。
在某些实施方式中，疫苗制剂或药物组合物是控释制剂。
E.DNA疫苗
在某些方面，疫苗含有本发明所述的核酸之一。当对患者给药核酸疫苗时，在患者体内产生相应的基因产物(例如所需抗原)。在一些实施方式中，包含优化的重组多核苷酸的核酸疫苗载体可以被递送到哺乳动物体内(包括人类)，以诱导治疗性或预防性免疫应答。核酸可以是，例如，DNA、RNA或合成核酸。核酸可以是单链或双链的。
核酸疫苗载体(例如，腺病毒、脂质体、乳头瘤病毒、逆转录病毒等)可以直接给药于哺乳动物，以在体内进行细胞转导。可以将核酸疫苗制剂成药物组合物，用于任何适宜的给药方式，包括肠道外给药。
为了确定给药的载体在治疗或预防感染或其他状况时的有效量，医师需评价载体的毒性、疾病进展情况，以及产生的抗载体的抗体，如果有的话。通常，对于70公斤体重的患者，其剂量为从约1μg到1mg，以来自载体的裸核酸的等量计，计算用于递送此核酸的载体剂量，以产生等量的治疗性核酸。可以通过单剂量或分次剂量完成给药。可以在细胞培养或实验动物中采用标准药学规程来评估核酸疫苗载体的毒性和疗效。
核酸疫苗可以包含DNA、RNA、修饰的核酸或其组合。在一些实施方式中，疫苗含有一个或多个克隆或表达载体；例如，疫苗可以含有多个表达载体，每个都能在哺乳动物细胞中自发表达核酸的编码区以产生至少一个免疫原性多肽。表达载体通常包括真核启动子序列，例如强真核启动子的核苷酸序列，操作性地连接于一个或多个编码区。本发明中的组合物和方法可以使用任意特定的真核启动子，已知有很多种类的真核启动子，例如CMV或RSV启动子。使用的启动子可以是，但不必需是，与宿主细胞异源的。使用的启动子可以是组成型启动子。
可用于本发明的组合物和方法的启动子可以是环状的或线性的、单链的或双链的，并且可以是质粒、粘粒或附加体(episome)。在适宜的实施方式中，每个核苷酸编码区都在各自单独的载体上；然而，应理解，一个或多个编码区可以存在于单个载体上，并且这些编码区可以在一个或多个启动子的控制下。
多种质粒可用于生产核酸疫苗。核酸疫苗的适宜实施方式中采用的构建体使用质粒VR1012(Vical Inc.，San Diego Calif.)、pCMVI.UBF3/2(S.Johnston，University of Texas)或pcDNA3.1(InVitrogen Corporation，Carlsbad，Calif.)作为载体。此外，载体构建体可以含有免疫激活序列(ISS)，例如未甲基化的dCpG基序，其能够激活动物的免疫系统。核酸疫苗还可以编码包含免疫原性多肽的融合产物。还可以采用弱化的细菌作为递送系统来递送质粒DNA，这种方法适用于口服给药的DNA疫苗。细菌用独立复制的质粒转化，当弱化的细菌在宿主细胞中死亡后，质粒就被释放到宿主细胞的胞质中。
向动物中递送核酸的另一种途径涉及使用病毒或细菌载体。适宜的病毒载体的例子包括腺病毒、脊髓灰质炎病毒、痘病毒，例如甲病毒属、牛痘病毒、金丝雀痘病毒和家禽痘病毒，疱疹病毒，包括鲶鱼疱疹病毒、腺病毒相关载体和逆转录病毒。病毒样载体包括病毒小体和病毒样颗粒。示例性的细菌载体包括弱化的沙门氏菌、志贺氏菌、爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)、耶尔森氏菌(Yersinia ruckerii)、和李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)。在一些实施方式中，核酸是载体，例如质粒，其能够自体表达编码免疫原性多肽的核酸。
F.疫苗的用途
本发明所述的疫苗可用于预防性和/或治疗性地治疗疱疹，包括HSV-1，特别是HSV-2。接种疫苗的对象可以是雄性或雌性，可以为幼儿或成年。在一些实施方式中，治疗的对象是人类。在其他实施方式中，对象为非人动物。
1.预防性用途
预防性实施方式中，在对象中给药HSV-2疫苗，以诱导免疫应答，帮助免受HSV-2的建立。
在一些实施方式中，本发明的疫苗组合物提供保护性免疫力，使得接种个体由于暴露于疫苗(例如，记忆应答)，而表现出症状延迟发生，或症状严重程度减轻(例如，减少感染发生时病变的数量)。在某些实施方式中，症状严重程度的减轻是至少25％、40％、50％、60％、70％、80％或者甚至90％。一些接种个体在接触HSV-2后，可能显示无症状或者甚至没有被HSV-2感染。保护性免疫通常通过一种或更多以下机理实现：粘膜免疫、体液免疫或细胞免疫。粘膜免疫主要是呼吸系统、胃肠道系统和生殖泌尿系统的粘膜表面分泌IgA(sIGA)抗体的结果。sIGA抗体产生于一系列由抗原提呈细胞、B和T淋巴细胞介导的事件之后，这些事件导致机体粘膜组织中的B淋巴细胞产生sIGA。体液免疫通常由血清中IgG抗体和IgM抗体产生。例如，在本申请所述疫苗制剂给药后，IgG抗体的滴度可升高1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍或者甚至100倍或更高。细胞免疫可通过细胞毒性T淋巴细胞产生，或通过涉及巨噬细胞和T细胞的迟发超敏反应产生，和通过其他涉及T细胞而不需要抗体的机制来实现。特别地，细胞免疫可以由TH1细胞或TH17细胞介导。可以通过IFN-γ的分泌，相对于针对不产生免疫应答的多肽产生的IFN-γ释放水平的比值，来测定TH1细胞的激活。在某些实施方式中，IFN-γ的释放量高出1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍或者甚至100倍。保护性免疫的主要结果是破坏HSV-2病毒颗粒或者抑制HSV-2的复制能力。在一些实施方式中，在暴露于HSV-2之前通过提呈抗原所赋予的保护性免疫，能够降低向HSV-2阳性状态进行血清型转换的可能性。
保护性免疫的持续时间优选为尽可能的长。在某些实施方式中，疫苗制剂产生的保护性免疫持续6个月、一年、两年、五年、十年、二十年或者甚至终生。
2.治疗用途
在治疗性应用中，可以在感染HSV-2的患者中给药含有本发明多肽或核酸的疫苗，给药剂量足以治疗该患者。在这样的情况下，治疗患者可以指在感染个体中延迟或减少HSV-2症状。在一些实施方式中，治疗患者指的是减少病变的持续时间、减少病变的数量、减少每次发作的症状持续时间，和/或降低每次发作症状的严重程度。在某些实施方式中，疫苗减少较轻症状的持续时间或严重程度；在一些实施方式中，疫苗减少较重症状的持续时间和严重程度。在一些实施方式中，疫苗减少病毒的释放并且因此降低HSV-2从接种患者中的传播。在某些实施方式中，上述的减少是至少25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或者甚至90％。在某些实施方式中，上述的减少包括症状、病毒释放和/或未来的发作的完全停止(例如，通过阻断病毒在感觉神经节中建立潜伏的能力)。
在治疗性实施方式中，在感染后对个体给药HSV-2疫苗。HSV-2疫苗可以在感染后很快给药，例如在症状出现之前，或可以在症状显示时或显示后给药。在一些实施方式中，HSV-2可以阻止早期感染的内源再激活。在一些实施方式中，可以向高风险人群中的患者给药感染后疫苗。
本申请提供的疫苗制剂优选具有尽可能长的治疗效果的持续时间。在一些实施方式中，疫苗制剂产生的治疗效果持续一个月、两个月、三个月、六个月、一年、两年、五年、十年、二十年或者甚至终生。
3.接种效果的测定
可以以多种方式测定本发明疫苗的接种效果。
可以以多种模型系统检测疫苗的效果。用于研究HSV-2的合适的模型系统包括如下文实施例中描述的豚鼠模型和小鼠模型。简单地说，接种动物，然后用HSV-2攻击，或者将疫苗给药于已感染的动物。采用上文所述的测定方式之一，比较动物与对照动物对HSV-2攻击或疫苗的应答。可采用相似的检测方法来对人类进行临床试验。上文所述的治疗和预防效果代表了测定疫苗效果的其他方式。
此外，可以通过体外免疫阴性人外周血单核细胞(PBMC)来评估效果，将APC暴露于疫苗，然后将APC与来源于同一供体的阴性T细胞共培养，从而在试管中评估对免疫接种的初级应答。在某些实施方式中，与采用未暴露于疫苗的APC得到的T细胞激活相比，T细胞激活高1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍或更高的，则认为是足够的应答。
还可采用病毒中和实验进一步测定疫苗的效果。简单地说，免疫动物，在免疫后的不同天数收集血清。将系列稀释的血清与病毒预培养，在此期间，血清中针对病毒的抗体会与其病毒结合。然后将病毒/血清混合物加入易感细胞，通过噬菌斑实验测定感染性。如果血清中的抗体中和病毒，则与对照相比，噬菌斑较少。
G.药物组合物的用途
1.防御HSV感染
本发明的药物组合物被设计用来诱导针对HSV-2的免疫应答。本申请所述的组合物可以在其所给药的对象中激活先天免疫应答、抗体应答或细胞介导的免疫应答，或这些应答的组合。在某些实施方式中，组合物刺激在外周感染位点或感觉神经节的免疫细胞，例如中性粒细胞、巨噬细胞和NK细胞。组合物可以激活巨噬细胞的浸润；刺激中性粒细胞产生抗病毒化合物，包括一氧化氮、TNF-α、干扰素(IFN)和白介素12(IL-12)；和/或刺激NK细胞产生IFN-γ。本发明组合物中的多肽还可以触发IL-2、IFN-α和IFN-β的生成，它们被认为有助于控制感染。
在一些实施方式中，组合物含有刺激产生中和抗体的抗原。中和抗体可以靶向作用于病毒包膜糖蛋白，其介导毒粒和宿主细胞相互作用并且负责HSV-2附着、结合和进入细胞。相应地，示例性组合物含有如上文所描述的、或者由上文所描述的核酸编码的一种或更多糖蛋白。在本申请中所述的免疫原性抗原和/或表位可以分别地、连续地或者彼此组合给药。
在一些实施方式中，组合物诱导细胞介导的应答，其可涉及CD4+T细胞、CD8+T细胞和/或抗病毒细胞因子的产生。组合物可以触发IFN-γ的分泌，例如通过激活先天免疫应答，和介导CD8+T细胞清除病毒。IFN-γ还可以由TH1细胞、(TH17细胞？)TC细胞、树枝状细胞和NK细胞分泌，组合物可以触发任意这些细胞类型分泌IFN-γ。CD8+T细胞的此类活性可以溶解细胞，或者可以被神经元表面的阻止神经元杀伤的抑制分子所调节。CD4+和/或CD8+T细胞可能参与维持病毒的潜伏期，从而阻止病毒的再活化。在一些实施方式中，组合物增强CD4+T细胞应答和/或CD8+T细胞应答，这些应答阻止病毒从其潜伏状态再活化。
在一些实施方式中，组合物阻断HSV避开宿主免疫应答的能力，或者增强通常被HSV避开的免疫应答。在一些实施方式中，组合物抑制HSV向HSV抗原耐受的方向转移免疫平衡。HSV-2能够通过TH2细胞介导免疫耐受。首先，HSV-2可以诱导抑制性T细胞，例如CD4+CD25+细胞和分泌IL-10，一种TH2细胞因子，的Tr1细胞。TH2细胞因子下调免疫共刺激分子，并且抑制树枝状抗原提呈细胞的成熟和功能。此外，HSV-2的感染抑制对于CTL的充分启动所必须的树枝状细胞的成熟和迁移。值得注意的是，TH2细胞因子是在HVS-2感染的复发期间产生的，这与TH1细胞因子相反，其在无复发期间产生。因此，在某些实施方式中，本发明的组合物压制抑制性T细胞，和/或诱导树枝状细胞的成熟和/或迁移。
在一些实施方式中，在哺乳动物中诱导针对HSV-2的免疫应答的方法包括给药前述的组合物。组合物可以用于在不同时间点诱导免疫应答，例如在暴露于HSV-2之前、HSV-2的初始感染之后、HSV-2建立潜伏之前或之后、HSV-2发生释放之前或之后，和/或复发之前或之后。在一些实施方式中，针对HSV-2的免疫应答可以在上述一个或多个时间点诱导。组合物可以诱导TH1应答和/或TH17应答，但是不诱导TH2应答，或者可以同时或者在不同时间点激活这些应答。
在一些实施方式中，组合物的给药可减轻与HSV初始感染、潜伏期或复发感染相关的症状。这样的组合物可以减少与HSV感染或发作相关的病变、伤痛、疼痛、刺激、瘙痒、发热、不适、头痛、病毒释放或前驱症状的发生率和/或严重程度。
在一些实施方式中，可以对个体给药针对HSV-2抗原的一种或更多抗体，以产生被动免疫。被动免疫是以现成抗体的形式，从一个个体向另一个个体转移活性的体液免疫。当存在高感染风险且没有足够时间让个体产生自身免疫时，或者为减轻正在进行的症状或免疫抑制疾病，可使用被动免疫。可以通过T细胞的过继转移，提供另一种在患者体内引发针对HSV-2抗原的免疫应答的方法。在一个实施方式中，可以通过APC提呈上述多肽衍生的抗原而扩增自体T细胞。随后，将扩增的HSV-2特异性T细胞转移回到T细胞来源的患者体内。
2.诊断用途
本申请提供了，尤其是，在患者中快速、经济、敏感并且特异地检测HSV-2的方法。在这方面，医院和医师可以使用该方法检查和治疗感染有HSV-2或处于HSV-2感染风险的患者。在本申请中的“患者”指的是感染有HSV-2或可能感染HSV-2的个体(例如人类)。
在一些实施方式中，可以采用针对本发明中的多肽之一的抗体，例如表1和/或表2中的多肽，来检测个体中的HSV-2。本发明还提供了对疑似感染HSV-2的患者的生物样本进行表型分析的方法，包括：(a)如有需要，使生物样本适用于免疫检测；(b)在允许抗体或抗原结合部分与HSV-2的表位结合的条件下，将生物样本与适合的HSV-2特异性抗体或其抗原结合部分接触；以及(c)测定样本与对照组织相比，是否存在有HSV-2；其中如果测试组织显示存在有HSV-2，则该患者被鉴定为可能具有HSV-2感染。
或者，也可以采用前文描述的多肽来检测个体中的抗HSV-2抗体。本发明还提供了对疑似感染HSV-2的患者的生物样本进行表型分析的方法：(a)如有需要，使生物样本适用于免疫检测；(b)在允许抗原与样本中存在的任意宿主抗体结合的条件下，将样本与HSV-2特异性抗原或其部分结合；以及(c)测定样本与对照组织相比，是否存在有HSV-2；其中如果测试组织显示存在有HSV-2，则该患者被鉴定为可能具有HSV-2感染。可以对前面提到的检测进行适当调整，以用于检测其他病毒感染，例如可以采用前文例如表1和/或表2中描述的蛋白的同源物(来自另一个病毒种属)。
本领域已知多种方法可用来测定抗原抗体结合，包括ELISA(酶联免疫吸附实验)、Western印迹、竞争性实验和斑点印迹。检测步骤可以是，例如，化学发光、荧光或比色。检测抗体蛋白结合的一种适宜方法是Luminex xMAP系统，其中将肽缀合于含染料的微球。某些系统，包括xMAP系统，可用于测定多重复合物中的若干不同标记，并且可以用于一次测定抗体水平。在一些实施方式中，采用其他系统来检测多重复合物中的多种标记。例如，可以采用以下任意一种系统进行谱学检测(profiling)：抗原微阵列、小珠微阵列、纳米条码颗粒技术、来自cDNA表达库的蛋白阵列、蛋白原位阵列、活转化体的蛋白阵列、全能蛋白阵列、微流控芯片实验室和针尖上的肽(peptide on pins)。另一种临床检测是用于检测抗体结合的化学发光实验。在某些此类实验中，包括VITROSEci抗-HCV实验，抗体结合于在液体悬液中的由微粒制成的固相支持物上，采用表面荧光计定量酶促生成的荧光产物。
在其他实施方式中，可以采用前文描述的多肽，例如表1和/或表2中的多肽，来检测特异性针对HSV-2的T细胞。本发明还提供了对疑似感染HSV-2的患者的生物样本进行表型分析的方法：(a)如有需要，使生物样本适用于免疫检测；(b)在允许APC处理多肽的条件下，将样本与HSV-2特异性多肽或其部分接触；以及(c)测定HSV-2特异性多肽导致的T细胞激活，其中与未感染患者相比，T细胞激活升高则表示有HSV-2感染。该诊断实验旨在检测HSV-2特异性T细胞是否存在于任何患者中，包括那些曾暴露于HSV-2但是没有转换血清型以产生可检测水平的抗HSV-2抗体的患者。
T细胞激活的检测可以采用多种增殖实验，包括细胞因子特异性的ELISA、通过掺入氚化胸腺嘧啶或者通过插入细胞膜(membrane intercolating)的染料(PKH-67)或通过胞质(CFSE)染料来测定细胞增殖、ELISPOT、流式细胞术和珠阵列。此外，可以检测在T细胞系中或来自小鼠或人的T细胞杂交瘤中的特异性针对抗原的T细胞应答。激活的T细胞的读出信号(readout)包括，在抗原激活T细胞或T细胞杂交瘤时所诱导的增殖、细胞因子的生成，或者杂交瘤表达的代用酶的读出信号。例如，可以用经改造而产生β-半乳糖苷酶的T细胞杂交瘤来检测T细胞应答的激活。可以通过使用β-半乳糖苷酶的有色底物，例如氯苯基红β-D吡喃半乳糖苷(CPRG)，来检测β-半乳糖苷酶。
HSV-2的感染可以是急性的或潜伏的。在一些实施方式中，如果生物样本显示存在有HSV-2，则可以对患者给药治疗有效量的本发明的组合物或疗法。生物样本可以包括，例如，血液、精液、尿液、阴道分泌液、粘液、唾液、粪便、尿液、脑脊液或者组织样本。在一些实施方式中，生物样本是准备移植的器官。在一些实施方式中，在检测步骤实施前，生物样本被置于促进HSV-2生长的条件下培养。
本申请中的诊断性检测可以用于检测在多种样本中的HSV-2，包括由患者处获得的样本或者其他来源的样本。例如，诊断检测可以用于检测在物品如医疗设备上的HSV-2。在一些实施方式中，可以对来源于动物的样本进行检测，例如农业动物(奶牛、猪、鸡、山羊、马等)、宠物(狗、猫、鸟等)或者野生动物。在一些实施方式中，可以对来源于细胞培养物的样本进行检测，例如产生治疗性蛋白的人类细胞培养物、为了生产有用的生物分子的细菌培养物，或者为研究目的而培养的细胞培养物。
本发明还包括检测在患者中HSV-2感染位置的方法，包括(a)向患者给药标记的HSV-2抗体或其抗原结合部分；(b)检测该标记；以及(c)测定与对照相比患者是否具有HSV-2。在某些实施方式中，所述方法进一步包括，如果患者具有HSV-2感染，向患者给药治疗有效量的本发明组合物。所述方法可以进一步包括测定被感染的细胞类型，和/或患者体内HSV-2的量。所述方法可以用于评估HSV-2在患者体内的传播，并且验证实施的疗法是否得当。
在一些实施方式中，本发明的多肽可以用于感染病程的预测。在一些实施方式中，可以在来自患者的样本中检测特异性针对本发明多肽的T细胞或者抗体应答。如果抗体或T细胞显示出正常水平，则表明患者对于病原体产生了有效的免疫应答。如果没有出现抗体或T细胞，或者出现的水平较低，则表明患者没有针对病原体产生足够的应答，应建议采用更积极的治疗手段。在一些实施方式中，抗体或T细胞出现的水平较低是指，出现的应答比具有保护性免疫应答的患者中通常的水平低50％、20％、10％、5％、2％或者1％。T细胞应答可以通过本领域已知的方法检测，例如T细胞增殖、ELISPOT或ELISA，可以采用本领域已知的方法，例如ELISA，利用与本发明中任一抗原的亲和性来检测抗体。
在一些实施方式中，可以通过检测对HSV-2抗原特异性的T细胞，来预测在患者中HSV-2感染的发展和症状。感染HSV-2后，一些患者仍然无症状，但是病毒可能建立了潜伏。其他患者显示有HSV-2感染症状，并且可能经受复发。在无症状患者中发现的HSV-2抗原可能不同于在有症状和/或复发的患者中发现的那些抗原。因而，本发明的检测方法可以用于在感染HSV-2的患者群中区分出亚群。可进一步将亚群分为，经受频繁发作的患者和经受不频繁或未经受发作的患者，或者病毒释放水平较高的患者和病毒释放水平低或者不释放的患者。根据针对某些HSV-2抗原而不是其他抗原的T细胞应答的存在与否及其水平对患者进行分类，可以帮助医生确定适宜的治疗方案。相似地，也可以根据T细胞应答的强度差异和/或T细胞产生的细胞因子组合和水平的差异，预测在患者中HSV-2感染的发展和症状。因此，如果在被感染患者中，T细胞应答对应的HSV-2抗原预示有较重的症状、频繁发作和/或高水平病毒释放，那么这样的患者可能比HSV-2抗原预示无症状感染的患者需要更强的抗病毒治疗和/或更长期的治疗。
所属领域技术人员能够理解，本发明的方法不局限于HSV-2的检测。其他实施方式包括检测相关的病毒，包括具有与前文所述蛋白(如表1和/或表2中的蛋白)的同源蛋白的病毒。此类相关病毒包括，例如，疱疹病毒家族的其他成员。取决于同源性，这些相关病毒还可以包括疱疹病毒家族以外的成员。
3.在具有增加的HSV-2感染风险的群体中的用途
在本质上，任何个体都有一定的感染HSV-2的风险。但是，某些亚群具有增加的感染风险。在一些实施方式中，接受针对HSV-2的组合物的患者是免疫功能低下的。
由于药物治疗导致的免疫功能低下状态很可能将该个体暴露于更高的感染风险中。在个体接受已知能够造成免疫功能低下状态的治疗之前或期间，可以对其进行感染预防性治疗。在已知能够造成免疫功能低下状态的治疗之前或期间，通过以抗原对其进行预防性治疗，可以阻止继发感染或降低个体由于免疫功能低下而被感染的风险。如果个体已经被感染，例如在接受导致免疫功能低下状态的治疗之后，也可以通过对个体给药抗原组合物来治疗感染。
在某些实施方式中，可以对儿童或成年患者给药组合物。在其他实施方式中，组合物适用于在怀孕前感染的孕妇，或在妊娠期间感染的孕妇，例如以抑制胎儿或婴儿的感染。还可以对在子宫内或分娩期间感染的新生儿或婴儿给药组合物。
H.剂量和给药途径
1.剂量和时间点
每剂疫苗中抗原的量被选择为有效量，其以单剂量或多剂量使用时，可诱导如前文所述的预防或治疗反应。优选地，剂量在通常的接种者中不会有明显的不良反应。该剂量根据采用的特异性抗原的不同而变化。大体上，预期每份剂量含有1-1000μg蛋白，在一些实例中含2-100μg，例如4-40μg。可以通过标准的研究，包括观测抗体滴度、T细胞激活水平和对象中的其他应答，来确定某特定疫苗的最佳量。在一些实施方式中，抗原的适宜递送量取决于对象的年龄、体重和健康状况(例如，处于免疫功能低下状态)。当含有佐剂时，其通常的用量为从1μg-250μg每剂量，例如50-150μg、75-125μg或100μg。
在一些实施方式中，仅给药一份剂量的疫苗来达到上述的结果。在其他实施方式中，在初始接种之后，对象接受一次或更多的增强接种，总计两次、三次、四次或五次接种。优选地，接种次数是三次或更少。增强接种可以在初始接种后，例如约一个月、两个月、四个月、六个月或十二个月后进行，这样一个接种方案涉及在第0、0.5-2和4-8个月给药。优选用分割剂量的疫苗给药，其可以相同或不同的途径给药。
本申请所述的药物组合物可以采用多种剂型。在某些实施方式中，组合物以固体或粉末(例如，冻干的)形式提供；还可以以液体形式提供。在某些实施方式中，提供的剂型是一剂量的冻干组合物和至少一个单独的含稀释剂的无菌容器。
在一些实施方式中，按照每剂量1μmol的量将抗原递送给患者。在一些实施方式中，按照每剂量10nmol到100nmol的量抗原递送给患者。可由本领域技术人员确定适宜的抗原递送量。在一些实施方式中，适宜的抗原递送量取决于对象的年龄、体重和健康状况(例如，处于免疫功能低下状态)。
本发明提供的药物组合物(在一些实施方式中)的给药量足以诱发作为免疫应答一部分的抗体生成。在一些实施方式中，组合物可以被制成含有5mcg/0.5mL抗原或抗原含量在10mcg/1mL至200mcg/1mL的制剂。在其他实施方式中，组合物可以包含抗原的组合。多种抗原可以是相同浓度或可以是不同浓度。
在一些实施方式中，组合物以剂量递增的方式给药，使得组合物的后续给药比在先给药具有更高的组合物浓度。在一些实施方式中，组合物的给药方式使得组合物的后续给药比在先给药具有更低的组合物浓度。
在治疗性应用中，对正在遭受疾病的患者给药的组合物的量足以治愈或至少部分地限制疾病及其并发症。
本发明所述组合物的治疗性应用包括在已经感染HSV-2的患者中减少传播、延缓疾病进展，减少病毒释放或消除复发性感染，例如与没有以组合物治疗的个体相比，其水平降低90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或10％。组合物还可以降低被感染个体释放的HSV-2的量、在感染者中抑制病毒从潜伏期到再激活所需的蛋白表达、和/或抑制HSV-2在感染患者神经元中的复制，例如与没有以组合物治疗的个体相比，其水平降低90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或10％。
在预防性实施方式中，对人或其他哺乳动物给药组合物，以诱导免疫应答，其可以抑制感染性疾病或其他疾病的建立。在一些实施方式中，组合物可以部分地阻断病毒建立潜伏或降低其建立潜伏的效率。
在一些实施方式中，仅有给药一剂量(给药)的组合物。在其他实施方式中，给药多剂量的组合物。在多种实施方式中，给药一次、两次、三次或多于三次的组合物。向对象给药的剂量数取决于抗原、疾病的程度或对疾病的预期暴露和对象对组合物的应答。
在一些实施方式中，组合物与抗微生物分子组合给药。抗微生物分子可以包括抗病毒分子。本领域目前已知多种抗病毒分子，靶向作用于病毒生命周期的一个或多个阶段，包括病毒在宿主细胞的附着、病毒基因和/或酶释放进入宿主细胞、病毒元件利用宿主细胞机制的复制、病毒元件组装成为完整病毒颗粒和病毒颗粒释放以感染新宿主。
2.给药途径
本申请的疫苗制剂和药物组合物可通过对个体给药来递送，通常可通过全身用药(例如，静脉的、腹膜内的、肌肉内的、皮内的、皮下的、透皮的、皮下的、颅内的、鼻内的、粘膜的、肛门的、阴道的、口服的、舌下的、口腔的途径或也可被吸入)或局部用药途径来递送。
在一些实施方式中，组合物可直接给药到可能的感染位点。在女性患者中，可以将组合物局部应用于粘膜，或者使用本领域已知的器械和方法经阴道或经直肠递送。阴道或直肠递送途径允许对组合物剂量的缓释、持续或脉冲式的递送和给药，并且可以在暴露于HSV之前或之后给药，取决于预防性或治疗性组合物的用途。在男性患者中，可以将组合物在皮肤或粘膜局部应用，或经直肠递送。在两种患者人群中，还可以将组合物靶向作用于感觉神经节。
HSV-2疫苗或药物组合物通常通过肌内途径给药。通常，在此途径中，疫苗被注射入肌肉组织的可接近区域。在一些实施方式中，在三角肌、股外肌、腹侧臀肌或背侧臀肌进行肌肉注射。通常与皮肤表面成大约90°角进行注射，以使疫苗穿透肌肉。
HSV-2疫苗还可以皮下给药。通常与皮肤表面成45°角进行注射，以使疫苗给药到皮下组织但不穿透肌肉。
在一些实施方式中，通过皮内给药HSV-2疫苗。皮内给药与皮下给药相似，但是注射不那么深，且靶皮肤层为真皮层。通常与皮肤表面成10-15°角进行注射，以使疫苗刚好被递送到表皮以下。
3.制剂
疫苗制剂可适用于对人类患者给药，并且疫苗的制备可符合USFDA的指南。在一些实施方式中，疫苗制剂适用于对非人类的动物给药。在一些实施方式中，疫苗基本不含内毒素和外毒素。内毒素包括热原，如脂多糖(LPS)分子。疫苗还应该基本不含有无活性的蛋白片段。在一些实施方式中，疫苗中的热原水平低于工业用水，自来水或者蒸馏水。其他疫苗成分可采用本领域已知的方法纯化，如离子交换层析，超滤或蒸馏。在其他实施方式中，可在向患者给药前灭活或破坏热原。疫苗的原料，如水，缓冲液，盐和其他化学试剂也应该被筛选并去除热原。疫苗中的所有材料都可以是无菌的，并且每批疫苗都可以做无菌检测。因此，在某些实施方式中，疫苗的内毒素水平低于USFDA设定的水平，例如0.2内毒素(EU)/kg鞘内注射的组合物产品；5EU/kg非鞘内注射的组合物产品，以及0.25-0.5EU/mL无菌水。
在一些实施方式中，含有多肽的疫苗所含有的其他不需要的非多肽的量低于需要的多肽的量的5％、2％、1％、0.5％、0.2％、0.1％。在一些实施方式中，疫苗包含低于5％、2％、1％、0.5％、0.2％、0.1％的DNA和/或RNA。
优选在合理的风险-收益比内，毒性低或无毒的疫苗。
适用于传递药物组合物的制剂根据给药途径而有所不同。适用于肠道外给药，例如，由关节(关节内)，静脉内，肌内，皮内，腹膜内，鼻内，以及皮下途径给药的制剂，包括水性或非水性的、等渗无菌注射溶剂，其包含抗氧化剂，缓冲液，抑菌剂和溶质，使制剂与预期的接受者的血液等渗，以及水性或非水性的无菌混悬剂，其包含助悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。可以在单剂量或多剂量的密封容器中，如安瓿和小瓶中，提供制剂。
注射溶液和混悬液可以通过之前所述的无菌粉末，颗粒和片剂来制备。包装核酸转导的细胞也可以由静脉或肠道外给药。
适合于口服给药的制剂可以由以下组成：(a)液体溶液，例如有效量的多肽或包装核酸，混悬在如水、盐或PEG 400等的稀释液中；(b)胶囊、囊剂或片剂，均包含预设量的活性成分，如液体、固体，颗粒或凝胶；(c)在适当液体中的混悬剂；和(d)适当的乳剂。片剂剂型可以包含一种或更多下列成分：乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、磷酸钙、玉米淀粉、马铃薯淀粉、西黄蓍胶、微晶纤维素、阿拉伯胶、明胶、胶体二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸、和其他辅料、着色剂、填充剂、粘合剂、稀释剂、缓冲剂、湿润剂、防腐剂、矫味剂、染料、崩解剂，和可药用的载剂中。锭剂剂型可以包含活性成分，其在矫味剂中，通常是蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶，以及包含软锭剂，其活性成分在惰性基质中，如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶乳剂，以及凝胶等等，除含有活性成分外，还含有本领域公知的载剂。药物组合物可被包裹在，例如，脂质体中，或在可以使活性成分缓慢释放的制剂中。
抗原，在单独存在或者与其他适宜的成分组合时，可制成通过吸入给药的气雾剂(例如，它们可以被“雾化”)。气雾剂可置于可加压的推进剂中，如二氯二氟甲烷、丙烷、氮等等。
适用于阴道或直肠给药的制剂包括，例如，栓剂，其由多肽或包装核酸与栓剂基质组成。适合的栓剂基质包括，天然的或合成的甘油三酯或石蜡碳氢化合物。另外，还可以使用明胶直肠胶囊，其由多肽或包装核酸与基质组合组成，基质包括，例如，液态甘油三酯、聚乙二醇和石蜡碳氢化合物。制剂可适合用于人类患者给药，并且其制备可以符合US FDA的指南。在一些实施方式中，制剂适用于对非人类动物给药。在一些实施方式中，组合物基本不含内毒素和外毒素。内毒素可包括热原，如脂多糖(LPS)分子。组合物还可以基本上不含有可以引起发热或其他副作用的无活性蛋白片段。在一些实施方式中，组合物含有低于1％、低于0.1％、低于0.01％、低于0.001％、或低于0.0001％的内毒素、外毒素、和/或无活性的蛋白片段。在一些实施方式中，组合物含有的热原低于工业用水，自来水或者蒸馏水。其他成分可采用本领域已知的方法纯化，如离子交换层析，超滤或蒸馏。在其他实施方式中，可在给患者给药前灭活或破坏热原。组合物的原料，如水、缓冲液、盐和其他化学试剂也应该筛选并去除热原。组合物中的所有材料可以是无菌的，并且每批组合物都要做无菌检测。因此，在某些实施方式中，组合物中的内毒素水平低于USFDA设定的水平：0.2内毒素(EU)/kg鞘内注射的组合物产品；5EU/kg非鞘内注射的组合物产品，以及0.25-0.5EU/mL无菌水。
在某些实施方式中，制剂包含低于50％、20％、10％、或5％(以干重计)的污染的蛋白质。在某些实施方式中，所需的分子基本上不含有其他生物大分子，如其他蛋白质(特别那些可能基本上遮蔽、降低、混淆或改变作为纯化制剂的组分蛋白质的性质，或者组分蛋白质在对象复溶混合物中的功能的其他蛋白质)。在某些实施方式中，存在至少80％、90％、95％、99％、或99.8％(以干重计)的同一类型的生物大分子(但可以存在水、缓冲液、和其他小分子，特别是分子量小于5000的分子)。
优选在合理的风险-收益比内，毒性低或无毒的组合物。在一些实施方式中，组合物包含的成分的浓度低于以此组合物治疗的动物中的LD50测量值。可以在小鼠或其他实验模型系统中获得LD50测量值，并外推至人类和其他动物。本领域公知用于估算在人类和其他动物中的化合物LD50的方法。组合物，以及其中的任何组分，在大鼠中的LD50值可以是，大于100g/kg、大于50g/kg、大于20g/kg、大于10g/kg、大于5g/kg、大于2g/kg、大于1g/kg、大于500mg/kg、大于200mg/kg、大于100mg/kg、大于50mg/kg、大于20mg/kg、或大于10mg/kg。在一些实施方式中，组合物的治疗指数(以50％群体的毒性剂量(TD50)除以50％群体的最小有效剂量(ED50)测得)大于1、大于10、或大于100。
I.疫苗制剂和免疫原性组合物的制备和储藏
可以使用多种技术生产本申请所述的HSV-2疫苗。例如，可以在适当的宿主细胞中使用重组DNA技术生产多肽。适当的宿主细胞可以是细菌、酵母、哺乳动物或其他种类的细胞。宿主细胞可以被改造以表达相关多肽基因之一的外源拷贝。通常，基因被操作性连接于适当的调控序列，如强启动子和多腺苷酸化序列。在一些实施方式中，启动子是可诱导或可抑制的。其他调控序列可以使感兴趣的多肽分泌或排出，或使感兴趣的多肽保留在细胞质中或细胞膜上，取决于所期望的多肽纯化方式。基因可以存在于染色体外的质粒上，或可以整合在宿主基因组上。本领域技术人员会理解，不是必须使用与天然存在的序列100％相同的核酸。相反，对这些序列的某些改变是可以被耐受并且可以是优选的。例如，可以利用遗传密码的简并性来改变核酸，使得编码的多肽仍然相同。在一些实施方式中，对基因进行密码子优化，以提高其在特定宿主中的表达。可通过，如PCR或化学合成来生产核酸。
一旦产生了重组细胞系，则可以由此分离多肽。可以通过，例如，亲和纯化技术或物理分离技术(例如，尺寸柱)实现分离。
在本申请的进一个方面，提供了制备方法，包括将一种或更多多肽或其免疫原性片段或其变体与载剂和/或佐剂混合。在一些实施方式中，佐剂能够激活TH1细胞应答。
在一些实施方式中，在本发明的组合物中包含的抗原可以在细胞培养中生产。一种方法包括，提供一种或更多哺乳动物表达载体，和克隆核苷酸，其编码两个或更多选自具有SEQ ID NOS：1-38任一的氨基酸序列的多肽，随后表达和分离多肽。
本申请所述的免疫原性多肽和表达该多肽的核酸组合物可以包装成小包、分配器装置和用于将核酸组合物给药到哺乳动物的试剂盒。例如，提供了含有一个或多个单位的剂型的小包或分配器装置。通常，可以随包装提供化合物给药的说明书，在说明书上适当注明该化合物适用于治疗某适应症，例如在本申请中披露的那些适应症。
V.实施例
实施例1.HSV-2抗原的鉴定。
制备HSV-2抗原库(来自HSV-2Strain G，Lot#7C0013，来自AdvancedBiotechnologies Inc，Maryland)，并用捐赠人的外周血单核细胞(PBMC)对其进行筛选。简单地说，用细菌表达HSV抗原库，并与抗原提呈细胞(APC)混合。APC反过来将衍生自HSV的肽提呈给分离自HSV-2感染患者中的淋巴细胞。患者分属于几种人群，如下文所述。比较每个人群中的淋巴细胞应答对每个表达蛋白的反应性，该筛选检测到一些抗原，其在一个患者人群中诱导出反应性淋巴细胞的频率高于在其他人群中的频率。被感染但无症状，以及暴露但血清阴性的患者可能会激活那些在经历频繁发作的患者中不会激活的保护性免疫应答；特别是，暴露但血清阴性的患者被推定为积累了对HSV-2感染的消除性免疫。认为有一组独特的多肽能够激活来自这些患者人群的淋巴细胞。
暴露于候选抗原后，通过ELISA检测从每个人群的CD4+T细胞和CD8+T细胞中释放的IFN-γ。根据与每年经历四次以上发作的频繁复发者释放的IFN-γ水平相比，释放的IFN-γ增加的倍数来筛选抗原。
A.识别由UL10、UL19、UL40、US4、US6、RS1(RS1.1、RS1.2、RS1.3)、UL 36(UL36.3、UL36.4、UL36.5)、UL32、和RL2编码的抗原
从属于以下几个人群的患者中分离淋巴细胞：无症状(n＝40)，暴露(n＝40)，每年经历4次或以上发作的频繁复发者(n＝43)，每年经历少于4次发作的低频率复发者(n＝19)，阴性(n＝10)，和HSV-2-/HSV-1+(n＝10)。表3显示了暴露患者群体与每年2次及以上发作的复发者相比，由UL10、UL19、UL40、US4、US6、RS1(RS1.1、RS1.2、RS1.3)、UL36(UL36.3、UL 36.4、UL36.5)、UL32、和RL2编码的13种HSV-2抗原的频率分析。
表3.由UL10、UL19、UL40、US4、US6、RS1(RS1.1、RS1.2、RS1.3)、UL36(UL36.3、UL36.4、UL36.5)、UL32和RL2编码的抗原的频率分析
Figure BPA00001498573000441
Figure BPA00001498573000451
B.识别由UL1、UL49.5、和UL54编码的抗原
从属于以下几个人群的患者中分离淋巴细胞：无症状(n＝40)，暴露(n＝40)，每年经历4次及以上发作的频繁复发者(n＝43)，每年经历少于4次发作的低频率复发者(n＝19)，阴性(n＝10)，和HSV-2-/HSV-1+(n＝10)。
表4显示了暴露患者群体与每年2次及以上发作的复发者相比，由UL1、UL49.5和UL54编码的3种HSV-2抗原的频率分析。
表4.由UL1、UL49.5、和UL54编码的抗原的频率分析
Figure BPA00001498573000452
C.识别由RL1、Ul1、和UL11编码的抗原
从属于以下几个人群的患者中分离淋巴细胞：无症状(n＝40)，暴露(n＝40)，每年经历4次及以上发作的频繁复发者(n＝43)，每年经历少于4次发作的低频率复发者(n＝19)，阴性(n＝10)，和HSV-2-/HSV-1+(n＝10)。
表5显示了暴露患者群体与每年2次及以上发作的复发者相比，由RL1、Ul1、和UL11编码的3种HSV-2抗原的频率分析。
表5.由RL1、Ul1、和UL11编码的抗原的频率分析
实施例2.体内数据
A.[实验A]豚鼠接种治疗实验
以5x105pfu的HSV-2菌株MS对雌性Hartley豚鼠进行阴道攻毒，以建立生殖道感染。在感染后第一天用阴道拭子来监测动物的感染，并在感染后3-14天监测急性疾病。在第14天，在原发性疾病恢复后，将动物随机分为12只一组，用抗原(15μg剂量的HSV-2多肽)加佐剂(50μg剂量的ISCOM基质和比例为91∶9的皂树皂苷成分A和C的混合物)进行皮下免疫。在感染后第14、21和34天，对每组接种总共3次疫苗。在疫苗接种期间，收集生殖器拭子以监测病毒的释放，记录每日观测结果。按照严重程度在0-4的标准内对症状进行评分，0＝无症状；1＝发红或肿胀；2＝少量小囊泡；3＝若干大囊泡；4＝若干浸渍的大囊泡。此外，病变介于上述评分之间的动物被评分为0.5、1.5、2.5、或3.5。
1.用ICP4.2、gD2ΔTMR、和gD2进行治疗性接种的研究结果
研究结果见下表6-10。在感染后第41天以及第三次免疫后的第7天，在每组12只动物中平均用4只来确定IgG滴度。从感染后的第15到63天，确定平均复发病变评分和平均病变天数。病变评分代表从第15到60天每组总的病变，然后计算出平均数。平均病变天数代表免疫或非免疫动物在感染后存在疱疹性病变的平均天数。在感染后第20到59天之间，收集12天所有动物的阴道拭子样品，保存于-80℃，直至采用实时定量PCR检测病毒释放的滴度。
表6.用ICP4.2(SEQ ID NO：2)进行治疗性接种的研究结果：病变
Figure BPA00001498573000471
表7.用ICP4.2(SEQ ID NO：2)进行治疗性接种的研究结果：病毒释放
表8.用gD2ΔTMR(SEQ ID NO：4)进行治疗性接种的研究结果：病变
Figure BPA00001498573000473
表9.用gD2(SEQ ID NO：5)进行治疗性接种的研究结果：病变
Figure BPA00001498573000481
表10.用gD2(SEQ ID NO：5)进行治疗性接种的研究结果：病毒释放
B.[实验B]小鼠预防接种实验
在第0天和第9天，用抗原(HSV-2多肽)加佐剂(12μg剂量的ISCOM基质和比例为82∶18的皂树皂苷成分A和C的混合物)对6到8周龄的雌性C57BL/6小鼠进行皮下免疫。在第11天，用长效孕酮(depo provera)使小鼠发情期同步化，然后在第16天，在麻醉状态下用10倍于其LD50的HSV-2菌株333通过阴道沉积对小鼠攻毒。监测所有动物的发病率(临床评分)和死亡率，在感染后第17到28天之间测量体重并收集阴道拭子。临床评分按照下列标准记录：0＝无症状，1＝阴道红斑，2＝阴道红斑和水肿，3＝阴道疱疹性病变，4＝单侧瘫痪或严重的生殖器溃烂，和5＝双侧瘫痪或死亡。
1.用ICP4.2、VP5、gD2ΔTMR和gD2ΔTMR和ICP4.2对小鼠进行
预防性接种的研究结果
在实验组中，在第0天和第9天用5μg或10μg抗原加佐剂(12μg剂量的ISCOM基质和比例为82∶18的皂树皂苷成分A和C的混合物)对小鼠进行皮下免疫。对照组小鼠仅给药磷酸盐缓冲液(PBS)，或仅佐剂。
仅给药PBS或仅佐剂的小鼠在攻毒后9天全部死亡(无存活者)。相反，给药抗原的小鼠大部分都存活至第9天，20-75％存活到攻毒后12天。在攻毒后第9天或第10天，还对疾病症状(生殖器和神经系统疾病)的严重程度进行了评分。与仅给药PBS或仅佐剂的组相比，用ICP4.2、VP5、gD2ΔTMR、或gD2ΔTMR和ICP4.2与ISCOM佐剂一起免疫的小鼠在疾病症状上表现出显著的降低。
表11.对小鼠进行预防性接种的研究结果
*Student’s t检验
C.[实验C]豚鼠预防接种
在第0天和第14-21天用15μg抗原加佐剂(50μg剂量的ISCOM基质和比例为91∶9的皂树皂苷成分A和C的混合物)对250-350克(体重)的雌性Hartley豚鼠进行皮下免疫。加强免疫后2-3周剪掉脚趾甲取血清，然后用5x105PFU的HSV-2菌株MS通过阴道沉积对豚鼠攻毒。在第30和32天收集所有动物的阴道拭子样品，保存于-80℃，直到用实时定量PCR测定病毒滴度。每天(第1-14天)对豚鼠进行评估，根据病变严重程度使用评分标准1-4来定量原发性生殖道皮肤病。具体疾病特征的评分级别如下：0，无疾病；1，发红或肿胀；2，少量小囊泡；3，若干大囊泡；4，若干浸渍的大囊泡。在研究结束时，将豚鼠处死，并收集背根神经结(DRG)，保存于-80℃，直至将其用于实时定量PCR分析。
表12.用gD2ΔTMR和VP5对豚鼠进行预防性接种的研究结果
Figure BPA00001498573000501
D.[实验D]免疫原性实验I(标准)
用溶于100μl盐水的5μg抗原加佐剂(12μg剂量的ISCOM基质和比例为82∶18的皂树皂苷成分A和C的混合物)在颈背皮下免疫小鼠。小鼠接受一次或两次注射，间隔7天。分析在最后一次注射的7天后产生的对注射的免疫原性。
免疫原性实验采用离体的IFN-γELISPOT。从脾内富集CD4+和CD8+T细胞并分别分析。对于ELISPOT实验，用捕获抗体包被膜板过夜，再用补充培养基在37℃封闭至少2小时。将小鼠处死，并收集它们的脾脏。然后用磁珠分选脾细胞中的CD4+和CD8+T细胞，以制备T细胞。洗去ELISPOT板上的封闭液，并将T细胞接种到封闭板上。将板放回培养箱使T细胞生长。在37℃将阴性T-耗竭脾细胞用抗原致敏2小时，以制备APC。对于CD4+ELISPOT，用全蛋白来致敏APC。对于CD8+ELISPOT，用大肠杆菌表达的蛋白加cLLO来致敏APCs。培养基对照是在37℃不加抗原培养2小时的APC。致敏的APC被照射，洗涤，调整为2x106个细胞/ml。将APC加入到含有T细胞的板的适当的孔中。再将豆蔻酸佛波醇乙酸酯(PMA)和离子霉素加入到对照孔，作为阳性对照。培养板在5％CO2，37℃条件下培养18小时。接着用生物素标记的二抗，辣根过氧化物酶(HRP)和3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)底物，使培养板显色。
1.ICP4.2免疫原性实验I的结果
在免疫原性实验I中，用ICP4.2进行一次或两次注射的方案都显示出很强的免疫原性应答。对于一次注射的方案，在每200,000T细胞中和在CD4+和CD8+细胞中的IFN-γ斑点数分别为8和101。对于两次注射的方案，分别为50和70个斑点。相反，当只有培养基或佐剂时，CD4+或CD8+细胞中观察到的斑点都少于15个。
2.gD2ΔTMR和gD2免疫原性实验I的结果
免疫原性实验I的结果如图1A和B所示。全长的gD2以及gD2ΔTMR都显示出很强的CD4+和CD8+T细胞应答。相反，截短至跨膜结构域上游(图1表示为306t)的gD2抗原表现出的应答明显减弱。
E.[实验E]免疫原性实验II(快速)
来自于Genocea的HSA-2orfeome专有库的重组大肠杆菌被诱导表达gL2或ICP4蛋白的片段(ICP4.2，由RS1.1，RS1.3.1和RS 1.3.2编码的多肽)。蛋白保留在细菌细胞中。细菌先用PFA固定，然后用PBS充分清洗，保存于-80C直到用于免疫接种。
每组的三只小鼠通过腹腔注射接种溶解于PBS中的细菌，每只接种1x108个细菌。每隔一周，对小鼠进行1-2次附加的加强免疫。最后一次加强免疫后7天，收集血清并用HSV-2中和实验进行分析。在96孔圆底平板上，准备5倍系列稀释的血浆或血清样品，然后每孔加入50PFU HSV-2(菌株333)。盖上平板，在37℃培养1小时。200μl的病毒血清稀释液一式两份转移至生长在48孔组织培养平板上的Vero细胞中，在37℃培养1小时。然后在每孔中加入300μl含有2％FBS的DMEM，平板在37℃培养48小时。为观察毒斑，用结晶紫对平板染色。
表13.用gL2、ICP4.2和由RS1.1、RS1.3.1和RS1.3.2编码的多肽进行HSV-2中和实验的结果
  免疫原  HSV-2中和IgG滴度*
  大肠杆菌//gL2  1∶50
  大肠杆菌//RS1.1  ＜1∶20
  大肠杆菌//ICP4.2  ＜1∶20
  大肠杆菌/RS1.3.1  1∶100
  大肠杆菌//RS1.3.2  ＜1∶20
  阳性对照(DL11Mab)  1∶2500
  阴性对照(阴性小鼠血清)  ＜1∶20
*抑制50％的病毒对照的血清稀释
F.[实验F]免疫原性实验III(重叠肽池)
每只小鼠用2μg的混合重叠肽(OLP)免疫，重叠肽跨越gL2、ICP4的整个序列和由RS1.3.1和RS1.3.2编码的ICP4片段。用TiterMax佐剂(AlexisBiochemical)将OLP制剂成每只小鼠100μl的总体积，其中佐剂为皮下剂量的1/3。在第0天免疫小鼠，第6天加强免疫并且在第11天收集脾脏和血液。从脾脏中制备单细胞悬液，并且将红细胞裂解。然后将脾细胞悬液分为两半。第一半分成抗原提呈细胞、CD4+和CD8+T细胞；在IFN-γELISPOT平板的每个孔中接种200,000个T细胞，并用100,000个APC和对应于免疫接种的OLP池、无关的肽、阳性以及阴性对照，进行刺激。细胞在平板中培养过夜，然后将平板显色，并对每孔的斑进行计数。将另一半脾细胞悬液作为未分离的脾细胞(400,000/孔)进行实验，使用多肽进行刺激，依上述方法检测。
图2A和B中显示的结果表示为每个免疫接种组的应答大小。
G.[实验G]用至少两种抗原接种
实施例1.C57BL/6小鼠中gD2ΔTMR和ICP4或ICP4.2的免疫原性
将纯化的蛋白与佐剂混合，然后免疫阴性小鼠，以评估其对蛋白抗原产生CD4+和CD8+T细胞应答的能力。简单地说，将单抗原(gD2ΔTMR(5μg))，或者抗原组合(gD2ΔTMR和ICP4.2(10μg))与佐剂(12μg剂量的ISCOM基质和比例为82∶18的皂树皂苷成分A和C的混合物)混合，并皮下给药于小鼠，给药两次，间隔9天。第二次免疫接种后七天，将小鼠处死并收集脾脏用于离体IFNγELISPOT实验。用抗体包被的磁珠将脾细胞群中的CD4+和CD8+T细胞分选出来，然后在96孔板中的IFNγ-特异性抗体包被的膜上，与阴性脾细胞共培养，其中脾细胞用特异性或非特异性抗原(如所述)致敏以及经x-射线辐射器辐射。培养18小时后，用生物素化的IFNγ-特异性二抗检测捕获到的IFNγ，并用辣根过氧化物酶和3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)底物进行观察。数据表示为每2x105个T细胞中IFN-γ斑点的形成单位数±每组中三只小鼠的标准差。图3显示了每2x105个CD4+或CD8+T细胞中IFN-γ斑点形成的单位数±每组三只小鼠的标准差。如图3A和B所示，在用gD2ΔTMR抗原结合ICP4.2免疫的小鼠中，每CD4+T细胞或CD8+T细胞中的IFN-γ斑点形成的单位数高于只用gD2ΔTMR抗原免疫的小鼠。
实施例2.用gD2和ICP4.2的组合加佐剂进行的免疫降低了小鼠的疾病症状和死亡率
在致死性HSV-2攻毒的小鼠模型中，评价用ICP4.2蛋白和gD2的组合加佐剂进行免疫接种后，引发保护性免疫的能力。简单地说，每组中的8只C57BL/6小鼠用gD2(2μg)或ICP4.2(10μg)单抗原加佐剂，或者用两种抗原混合加佐剂进行免疫。在颈背皮下给药制剂两次，间隔9天。在病毒感染前5天，用长效孕酮(depo provera)使发情期同步化，在用20倍于其LD50的HSV-2菌株333进行第二次免疫接种的7天后，对动物进行阴道攻毒。感染后对疾病症状评分，并监控存活率。疾病严重度评分如下：0＝无症状，1＝发红，2＝发红和肿胀，3＝疱疹性病变，4＝严重溃烂或单侧瘫痪，5＝双侧瘫痪或死亡。
表14.HSV-2蛋白gD2和ICP4.2对疾病症状、病毒复制和死亡率的作用
Figure BPA00001498573000541
*EC；**Student’s t-检验
实施例3.用gD2ΔTMR和ICP4.2的组合加佐剂进行免疫降低了小鼠的疾病症状和死亡率
在病毒攻毒的10天后，用gD2ΔTMR和ICP4.2抗原组合免疫的小鼠表现出的平均疾病评分低于接受单抗原加佐剂的动物的评分。
表15.HSV-2蛋白gD2ΔTMR和ICP4.2对小鼠的疾病症状和存活率的作用
Figure BPA00001498573000542
实施例4.在HSV-2感染的豚鼠中，当用gD2和ICP4.2的组合加佐剂免疫进行治疗性给药时，降低了复发病变的严重度
评估了用抗原加佐剂进行治疗性免疫后，在HSV-2感染的豚鼠中影响HSV-2再激活的能力。简单地说，用5x105pfu的HSV-2菌株MS通过阴道感染豚鼠，对原发性疾病监控14天，之后随机分为免疫组(N＝15)。在感染后第14、21和35天，用抗原(15μg)加佐剂(50μg)或仅佐剂，或溶剂对照，对动物进行3次皮下免疫，每天对局部疾病严重度进行评分。评分系统如下：0＝无症状，1＝发红，2＝单个病变，3＝大的或融合病变，4＝严重溃烂或单侧瘫痪，5＝双侧瘫痪或死亡。
表16显示的数据表示为，在豚鼠从急性疾病中恢复后，每周的平均复发病变评分。用gD2和ICP4.2的抗原组合治疗的豚鼠在它们最后一次免疫接种的7天(第42天)和14天(第49天)后的平均病变评分低于只接受单抗原和佐剂的动物的评分。
表16.HSV-2蛋白gD2和ICP4.2疫苗对复发阴道皮肤病的作用
Figure BPA00001498573000551
序列
SEQ ID NO：1＝ICP4，全长
SAEQRKKKKTTTTTQGRGAEVAMADEDGGRLRAAAETTGGPGSPDPADGPPPTPNPDR
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SEQ ID NO：2＝ICP4内部片段
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DAEAMGWLQNPRVAPGDVALDQACFRISGAARNSSSFISGSVARAVPHLGYAMAAGRFGWGLAHVAAA
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SEQ ID NO：3＝gL2细胞质的
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SEQ ID NO：6＝ICP34.5
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SEQ ID NO：7＝ICP0
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SEQ ID NO：8＝ICP4内部片段(RS1.1，#1-400)
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SEQ ID NO：9＝ICP4内部片段(RS1.3.1，#750-1024)
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SEQ ID NO：10＝ICP4内部片段(RS1.3.2，#1008-1319)
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SEQ ID NO：11＝ICP4内部片段(RS1.3，#750-1319)
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SEQ ID NO：12＝ICP4内部片段(RS1.4，#340-883)
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SEQ ID NO：13＝ICP4内部片段(RS1.5，#775-1318)
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SEQ ID NO：14＝ICP4内部片段(RS1.6，#209-1318)
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SEQ ID NO：15＝ICP4内部片段(RS1.7，391-544缺失)
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SEQ ID NO：16＝ICP4内部片段(RS1.8，786-864缺失)
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adddddddgaggggggrraeagrvaveclaacrgilealaegfdgdlaavpglagarpaapprpgpag
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lssaaaaaadllfqnqslrplladtvaaadslaapastpapsaaaleaycapravaeltdhplfpapw
rpalmfdpralaslaarcaapppggapaafgplrasgplrraaawmrqvpdpedvrvvilysplpged
laagragggpppewsaergglscllaalgnrlcgpataawagnwtgapdvsalgaqgvlllstrdlaf
agaveflgllagacdrrlivvnavraadwpadgpvvsrqhaylacevlpavqcavrwpaardlrrtvl
asgrvfgpgvfarveaaharlypdapplrlcrganvryrvrtrfgpdtlvpmspreyrravlpaldgr
aaasgagdamapgapdfcedeahshracarwglgaplrpvyvalgrdavrggpaelrgprrefcaral
lepdgdapplvlrddadagpppqirwasaagragtvlaaagggvevvgtaaglatpprrepvdmdael
eddddglfge
SEQ ID NO：17＝尿嘧啶DNA糖基化酶预测序列(UL2编码)
MFSASTTPEQPLGLSGDATPPLPTSVPLDWAAFRRAFLIDDAWRPLLEPELANPLTARLLAEYDRRCQ
TEEVLPPREDVFSWTRYCTPDDVRVVIIGQDPYHHPGQAHGLAFSVRADVPVPPSLRNVLAAVKNCYP
DARMSGRGCLEKWARDGVLLLNTTLTVKRGAAASHSKLGWDRFVGGVVQRLAARRPGLVFMLWGAHAQ
NAIRPDPRQHYVLKFSHPSPLSKVPFGTCQHFLAANRYLETRDIMPIDWSV
SEQ ID NO：18＝UL11编码的壳皮蛋白预测序列
MGLAFSGARPCCCRHNVITTDGGEVVSLTAHEFDVVDIESEEEGNFYVPPDVRVVTRAPGPQYRRASD
PPSRHTRRRDPDVARPPATLTPPLSDSE
SEQ ID NO：19＝分泌的gL2
NRWGFVCLFGLVVMGAWGAWGGSQATEYVLRSVIAKEVGDILRVPCM
RTPADDVSWRYEAPSVIDYARIDGIFLRYHCPGLDTFLWDRHAQRAYLVNPFLFAAGFLEDLSHSVFP
ADTQETTTRRALYKEIRDALGSRKQAVSHAPVRAGCVNFDYSRTRRCVGRRDLRPANTTSTWEPPVSS
DDEASSQSKPLATQPPVLALSNAPPRRVSPTRGRRRHTRLRRN
SEQ ID NO：20＝UL19编码的VP5预测序列
DYDIPTTENLYFQGMAAPARDPPGYRYAAAMVPTGSILSTIEVASHRRLFDFFARVRS
DENSLYDVEFDALLGSYCNTLSLVRFLELGLSVACVCTKFPELAYMNEGRVQFEVHQPLIARDGPHPV
EQPVHNYMTKVIDRRALNAAFSLATEAIALLTGEALDGTGISLHRQLRAIQQLARNVQAVLGAFERGT
ADQMLHVLLEKAPPLALLLPMQRYLDNGRLATRVARATLVAELKRSFCDTSFFLGKAGHRREAIEAWL
VDLTTATQPSVAVPRLTHADTRGRPVDGVLVTTAAIKQRLLQSFLKVEDTEADVPVTYGEMVLNGANL
VTALVMGKAVRSLDDVGRHLLEMQEEQLEANRETLDELESAPQTTRVRADLVAIGDRLVFLEALEKRI
YAATNVPYPLVGAMDLTFVLPLGLFNPAMERFAAHAGDLVPAPGHPEPRAFPPRQLFFWGKDHQVLRL
SMENAVGTVCHPSLMNIDAAVGGVNHDPVEAANPYGAYVAAPAGPGADMQQRFLNAWRQRLAHGRVRW
VAECQMTAEQFMQPDNANLALELHPAFDFFAGVADVELPGGEVPPAGPGAIQATWRVVNGNLPLALCP
VAFRDARGLELGVGRHAMAPATIAAVRGAFEDRSYPAVFYLLQAAIHGSEHVFCALARLVTQCITSYW
NNTRCAAFVNDYSLVSYIVTYLGGDLPEECMAVYRDLVAHVEALAQLVDDFTLPGPELGGQAQAELNH
LMRDPALLPPLVWDCDGLMRHAALDRHRDCRIDAGEHEPVYAAACNVATADFNRNDGRLLHNTQARAA
DAADDRPHRPADWTVHHKIYYYVLVPAFSRGRCCTAGVRFDRVYATLQNMVVPEIAPGEECPSDPVTD
PAHPLHPANLVANTVNAMFHNGRVVVDGPAMLTLQVLAHNMAERTTALLCSAAPDAGANTASTANMRI
FDGALHAGVLLMAPQHLDHTIQNGEYFYVLPVHALFAGADHVANAPNFPPALRDLARHVPLVPPALGA
NYFSSIRQPVVQHARESAAGENALTYALMAGYFKMSPVALYHQLKTGLHPGFGFTVVRQDRFVTENVL
FSERASEAYFLGQLQVARHETGGGVSFTLTQPRGNVDLGVGYTAVAATATVRNPVTDMGNLPQNFYLG
RGAPPLLDNAAAVYLRNAVVAGNRLGPAQPLPVFGCAQVPRRAGMDHGQDAVCEFIATPVATDINYFR
RPCNPRGRAAGGVYAGDKEGDVIALMYDHGQSDPARPFAATANPWASQRFSYGDLLYNGAYHLNGASP
VLSPCFKFFTAADITAKHRCLERLIVETGSAVSTATAASDVQFKRPPGCRELVEDPCGLFQEAYPITC
ASDPALLRSARDGEAHARETHFTQYLIYDASPLKGLSL
SEQ ID NO：21＝UL19ΔTEV编码的VP5
MAAPARDPPGYRYAAAMVPTGSILSTIEVASHRRLFDFFARVRSDENSLYDVEFDALL
GSYCNTLSLVRFLELGLSVACVCTKFPELAYMNEGRVQFEVHQPLIARDGPHPVEQPVHNYMTKVIDR
RALNAAFSLATEAIALLTGEALDGTGISLHRQLRAIQQLARNVQAVLGAFERGTADQMLHVLLEKAPP
LALLLPMQRYLDNGRLATRVARATLVAELKRSFCDTSFFLGKAGHRREAIEAWLVDLTTATQPSVAVP
RLTHADTRGRPVDGVLVTTAAIKQRLLQSFLKVEDTEADVPVTYGEMVLNGANLVTALVMGKAVRSLD
DVGRHLLEMQEEQLEANRETLDELESAPQTTRVRADLVAIGDRLVFLEALEKRIYAATNVPYPLVGAM
DLTFVLPLGLFNPAMERFAAHAGDLVPAPGHPEPRAFPPRQLFFWGKDHQVLRLSMENAVGTVCHPSL
MNIDAAVGGVNHDPVEAANPYGAYVAAPAGPGADMQQRFLNAWRQRLAHGRVRWVAECQMTAEQFMQP
DNANLALELHPAFDFFAGVADVELPGGEVPPAGPGAIQATWRVVNGNLPLALCPVAFRDARGLELGVG
RHAMAPATIAAVRGAFEDRSYPAVFYLLQAAIHGSEHVFCALARLVTQCITSYWNNTRCAAFVNDYSL
VSYIVTYLGGDLPEECMAVYRDLVAHVEALAQLVDDFTLPGPELGGQAQAELNHLMRDPALLPPLVWD
CDGLMRHAALDRHRDCRIDAGEHEPVYAAACNVATADFNRNDGRLLHNTQARAADAADDRPHRPADWT
VHHKIYYYVLVPAFSRGRCCTAGVRFDRVYATLQNMVVPEIAPGEECPSDPVTDPAHPLHPANLVANT
VNAMFHNGRVVVDGPAMLTLQVLAHNMAERTTALLCSAAPDAGANTASTANMRIFDGALHAGVLLMAP
QHLDHTIQNGEYFYVLPVHALFAGADHVANAPNFPPALRDLARHVPLVPPALGANYFSSIRQPVVQHA
RESAAGENALTYALMAGYFKMSPVALYHQLKTGLHPGFGFTVVRQDRFVTENVLFSERASEAYFLGQL
QVARHETGGGVSFTLTQPRGNVDLGVGYTAVAATATVRNPVTDMGNLPQNFYLGRGAPPLLDNAAAVY
LRNAVVAGNRLGPAQPLPVFGCAQVPRRAGMDHGQDAVCEFIATPVATDINYFRRPCNPRGRAAGGVY
AGDKEGDVIALMYDHGQSDPARPFAATANPWASQRFSYGDLLYNGAYHLNGASPVLSPCFKFFTAADI
TAKHRCLERLIVETGSAVSTATAASDVQFKRPPGCRELVEDPCGLFQEAYPITCASDPALLRSARDGE
AHARETHFTQYLIYDASPLKGLSL
SEQ ID NO：22＝UL36编码的ICP1/2预测序列
MIPAALPHPTMKRQGDRDIVVTGVRNQFATDLEPGGSVSCMRSSLSFLSLLFDVGPRDVLSAEAIEGC
LVEGGEWTRAAAGSGPPRMCSIIELPNFLEYPAARGGLRCVFSRVYGEVGFFGEPTAGLLETQCPAHT
FFAGPWAMRPLSYTLLTIGPLGMGLYRDGDTAYLFDPHGLPAGTPAFIAKVRAGDVYPYLTYYAHDRP
KVRWAGAMVFFVPSGPGAVAPADLTAAALHLYGASETYLQDEPFVERRVAITHPLRGEIGGLGALFVG
VVPRGDGEGSGPVVPALPAPTHVQTPGADRPPEAPRGASGPPDTPQAGHPNRPPDDVWAAALEGTPPA
KPSAPDAAASGPPHAAPPPQTPAGDAAEEAEDLRVLEVGAVPVGRHRARYSTGLPKRRRPTWTPPSSV
EDLTSGERPAPKAPPAKAKKKSAPKKKAPVAAEVPASSPTPIAATVPPAPDTPPQSGQGGGDDGPASP
SSPSVLETLGARRPPEPPGADLAQLFEVHPNVAATAVRLAARDAALAREVAACSQLTINALRSPYPAH
PGLLELCVIFFFERVLAFLIENGARTHTQAGVAGPAAALLDFTLRMLPRKTAVGDFLASTRMSLADVA
AHRPLIQHVLDENSQIGRLALAKLVLVARDVIRETDAFYGDLADLDLQLRAAPPANLYARLGEWLLER
SRAHPNTLFAPATPTHPEPLLHRIQALAQFARGEEMRVEAEAREMREALDALARGVDSVSQRAGPLTV
MPVPAAPGAGGRAPCPPALGPEAIQARLEDVRIQARRAIESAVKEYFHRGAVYSAKALQASDSHDCRF
HVASAAVVPMVQLLESLPAFDQHTRDVAQRAALPPPPPLATSPQAILLRDLLQRGQPLDAPEDLAAWL
SVLTDAATQGLIERKPLEELARSIHGINDQQARRSSGLAELQRFDALDAALAQQLDSDAAFVPATGPA
PYVDGGGLSPEATRMAEDALRQARAMEAAKMTAELAPEARSRLRERAHALEAMLNDARERAKVAHDAR
EKFLHKLQGVLRPLPDFVGLKACPAVLATLRASLPAGWTDLADAVRGPPPEVTAALRADLWGLLGQYR
EALEHPTPDTATALAGLHPAFVVVLKTLFADAPETPVLVQFFSDHAPTIAKAVSNAINAGSAAVATAS
PAATVDAAVRAHGALADAVSALGAAARDPASPLSFLAVLADSAAGYVKATRLALEARGAIDELTTLGS
AAADLVVQARRACAQPEGDHAALIDAAARATTAARESLAGHEAGFGGLLHAEGTAGDHSPSGRALQEL
GKVIGATRRRADELEAAVADLTAKMAAQRARGSSERWAAGVEAALDRVENRAEFDVVELRRLQALAGT
HGYNPRDFRKRAEQALAANAEAVTLALDTAFAFNPYTPENQRHPMLPPLAAIHRLGWSAAFHAAAETY
ADMFRVDAEPLARLLRIAEGLLEMAQAGDGFIDYHEAVGRLADDMTSVPGLRRYVPFFQHGYADYVEL
RDRLDAIRADVHRALGGVPLDLAAAAEQISAARNDPEATAELVRTGVTLPCPSEDALVACAAALERVD
QSPVKNTAYAEYVAFVTRQDTAETKDAVVRAKQQRAEATERVMAGLREALAARERRAQIEAEGLANLK
TMLKVVAVPATVAKTLDQARSVAEIADQVEVLLDQTEKTRELDVPAVIWLEHAQRTFETHPLSAARGD
GPGPLARHAGRLGALFDTRRRVDALRRSLEEAEAEWDEVWGRFGRVRGGAWKSPEGFRAMHEQLRALQ
DTTNTVSGLRAQPAYERLSARYQGVLGAKGAERAEAVEELGARVTKHTALCARLRDEVVRRVPWEMNF
DALGGLLAEFDAAAADLAPWAVEEFRGARELIQYRMGLYSAYARAGGQTGAGAESAPAPLLVDLRALD
ARARASSSPEGHEVDPQLLRRRGEAYLRAGGDPGPLVLREAVSALDLPFATSFLAPDGTPLQYALCFP
AVTDKLGALLMRPEAACVRPPLPTDVLESAPTVTAMYVLTVVNRLQLALSDAQAANFQLFGRFVRHRQ
ATWGASMDAAAELYVALVATTLTREFGCRWAQLGWASGAAAPRPPPGPRGSQRHCVAFNENDVLVALV
AGVPEHIYNFWRLDLVRQHEYMHLTLERAFEDAAESMLFVQRLTPHPDARIRVLPTFLDGGPPTRGLL
FGTRLADWRRGKLSETDPLAPWRSALELGTQRRDVPALGKLSPAQALAAVSVLGRMCLPSAALAALWT
CMFPDDYTEYDSFDALLAARLESGQTLGPAGGREASLPEAPHALYRPTGQHVAVLAAATHRTPAARVT
AMDLVLAAVLLGAPVVVALRNTTAFSRESELELCLTLFDSRPGGPDAALRDVVSSDIETWAVGLLHTD
LNPIENACLAAQLPRLSALIAERPLADGPPCLVLVDISMTPVAVLWEAPEPPGPPDVRFVGSEATEEL
PFVATAGDVLAASAADADPFFARAILGRPFDASLLTGELFPGHPVYQRPLADEAGPSAPTAARDPRDL
AGGDGGSGPEDPAAPPARQADPGVLAPTLLTDATTGEPVPPRMWAWIHGLEELASDDAGGPTPNPAPA
LLPPPATDQSVPTSQYAPRPIGPAATARETRPSVPPQQNTGRVPVAPRDDPRPSPPTPSPPADAALPP
PAFSGSAAAFSAAVPRVRRSRRTRAKSRAPRASAPPEGWRPPALPAPVAPVAASARPPDQPPTPESAP
PAWVSALPLPPGPASARGAFPAPTLAPIPPPPAEGAVVPGGDRRRGRRQTTAGPSPTPPRGPAAGPPR
RLTRPAVASLSASLNSLPSPRDPADHAAAVSAAAAAVPPSPGLAPPTSAVQTSPPPLAPGPVAPSEPL
CGWVVPGGPVARRPPPQSPATKPAARTRIRARSVPQPPLPQPPLPQPPLPQPPLPQPPLPQPPLPQPP
LPQPPLPQPPLPQPPLPQPPLPPVTRTLTPQSRDSVPTPESPTHTNTHLPVSAVTSWASSLALHVDSA
PPPASLLQTLHISSDDEHSDADSLRFSDSDDTEALDPLPPEPHLPPADEPPGPLAADHLQSPHSQFGP
LPVQANAVLSRRYVRSTGRSALAVLIRACRRIQQQLQRTRRALFQRSNAVLTSLHHVRMLLG
SEQ ID NO：23＝UL36.3.4.1编码的ICP1/2内部片段
AAQRARGSSERWAAGVEAALDRVENRAEFDVVELRRLQALAGTHGYNPRDFRKRAEQA
LAANAEAVTLALDTAFAFNPYTPENQRHPMLPPLAAIHRLGWSAAFHAAAETYADMFRVDAEPLARLL
RIAEGLLEMAQAGDGFIDYHEAVGRLADDMTSVPGLRRYVPFFQHGYADYVELRDRLDAIRADVHRAL
GGVPLDLAAAAEQISAARNDPEATAELVRTGVTLPCPSEDALVACAAALERVDQSPVKNTAYAEYVAF
VTRQDTAETKDAVVRAKQQRAEATERVMAGLREALAARERRAQIEAEGLANLKTMLKVVAVPATVAKT
LDQARSVAEIADQVEVLLDQTEKTRELDVPAVIWLEHAQRTFETHPLSAARGDGPGPLARHAGRLGAL
FDTRRRVDALRRSLEEAEAEWDEVWGRFGRVRGGAWKSPEGFRAMHEQLRALQDTTNTVSGLRAQPAY
ERLSARYQGVLGAKGAERAEAVEELGARVTKHTALCARLRDEVVRRVPWEMNFDALGGLLAEFDAAAA
DLAPWAVEEFRGARELIQYRMGLYSAYARAGGQTGAGAESAPAPLLVDLRALDARARASSSPEGHEVD
PQLLRRRGEAYLRAGGDPGPLVLREAVSALDLPFATSFLAPDGTPLQYALCFPAVTDKLGALLMRPEA
ACVRPPLPTDVLESAPTVTAMYVLTVVNRLQLALSDAQAANFQLFGRFVRHRQATWGASMDAAAELYV
ALVATTLTREFGCRWAQLGWASGAAAPRPPPGPRGSQRHCVAFNENDVLVALVAGVPEHIYNFWRLDL
VRQHEYMHLTLERAFEDAAESMLFVQRLTPHPDARIRVLPTFLDGGPPTRGLLFGTRLADWRRGKLSE
TDPLAPWRSALELGTQRRDVPALGKLSPAQALAAVSVLGRMCLPSAALAALWTCMFPDDYTEYDSFDA
LLAARLESGQTLGPAGGREASL
SEQ ID NO：24＝UL36.4.2.5编码的ICP1/2内部片段
EYDSFDALLAARLESGQTLGPAGGREASLPEAPHALYRPTGQHVAVLAAATHRTPAAR
VTAMDLVLAAVLLGAPVVVALRNTTAFSRESELELCLTLFDSRPGGPDAALRDVVSSDIETWAVGLLH
TDLNPIENACLAAQLPRLSALIAERPLADGPPCLVLVDISMTPVAVLWEAPEPPGPPDVRFVGSEATE
ELPFVATAGDVLAASAADADPFFARAILGRPFDASLLTGELFPGHPVYQRPLADEAGPSAPTAARDPR
DLAGGDGGSGPEDPAAPPARQADPGVLAPTLLTDATTGEPVPPRMWAWIHGLEELASDDAGGPTPNPA
PALLPPPATDQSVPTSQYAPRPIGPAATARETRPSVPPQQNTGRVPVAPRDDPRPSPPTPSPPADAAL
PPPAFSGSAAAFSAAVPRVRRSRRTRAKSRAPRASAPPEGWRPPALPAPVAPVAASARPPDQPPTPES
APPAWVSALPLPPGPASARGAFPAPTLAPIPPPPAEGAVVPGGDRRRGRRQTTAGPSPTPPRGPAAGP
PRRLTRPAVASLSASLNSLPSPRDPADHAAAVSAAAAAVPPSPGLAPPTSAVQTSPPPLAPGPVAPSE
PLCGWVVPGGPVARRPPPQSPATKPAARTRIRARSVPQPPLPQPPLPQPPLPQPPLPQPPLPQPPLPQ
PPLPQPPLPQPPLPQPPLPQPPLPPVTRTLTPQSRDSVPTPESPTHTNTHLPVSAVTSWASSLALHVD
SAPPPASLLQTLHISSDDEHSDADSLRFSDSDDTEALDPLPPEPHLPPADEPPGPLAADHLQSPHSQF
GPLPVQANAVLSRRYVRSTGRSALAVLIRACRRIQQQLQRTRRALFQRSNAVLTSLHHVRMLLG
SEQ ID NO：25＝UL40编码的还原酶预测序列
MDPAVSPASTDPLDTHASGAGAAPIPVCPTPERYFYTSQCPDINHLRSLSILNRWLET
ELVFVGDEEDVSKLSEGELGFYRFLFAFLSAADDLVTENLGGLSGLFEQKDILHYYVEQECIEVVHSR
VYNIIQLVLFHNNDQARRAYVARTINHPAIRVKVDWLEARVRECDSIPEKFILMILIEGVFFAASFAA
IAYLRTNNLLRVTCQSNDLISRDEAVHTTASCYIYNNYLGGHAKPEAARVYRLFREAVDIEIGFIRSQ
APTDSSILSPGALAAIENYVRFSADRLLGLIHMQPLYSAPAPDASFPLSLMSTDKHTNFFECRSTSYA
GAVVNDL
SEQ ID NO：26＝US12编码的ICP47
MSWALKTTDMFLDSSRCTHRTYGDVCAEIHKREREDREAARTAVTDPELPLLCPPDVRSDPASRNPTQ
QTRGCARSNERQDRVLAP
SEQ ID NO：27＝UL1O编码的gM2
MGRRAPRGSPEAAPGADVAPGARAAWWVWCVQVATFIVSAICVVGLLVLASVFRDRFPCLYAPATSYA
KANATVEVRGGVAVPLRLDTQSLLATYAITSTLLLAAAVYAAVGAVTSRYERALDAARRLAAARMAMP
HATLIAGNVCAWLLQITVLLLAHRISQLAHLIYVLHFACLVYLAAHFCTRGVLSGTYLRQVHGLIDPA
PTHHRIVGPVRAVMTNALLLGTLLCTAAAAVSLNTIAALNFNFSAPSMLICLTTLFALLVVSLLLVVE
GVLCHYVRVLVGPHLGAIAATGIVGLACEHYHTGGYYVVEQQWPGAQTGVRVALALVAAFALAMAVLR
CTRAYLYHRRHHTKFFVRMRDTRHRAHSALRRVRSSMRGSRRGGPPGDPGYAETPYASVSHHAEIDRY
GDSDGDPIYDEVAPDHEAELYARVQRPGPVPDAEPIYDTVEGYAPRSAGEPVYSTVRRW
SEQ ID NO：28＝UL15编码的切割/包装蛋白预测序列
MFGQQLASDVQQYLERLEKQRQQKVGVDEASAGLTLGGDALRVPFLDFATATPKRHQTVVPGVGTLHD
CCEHSPLFSAVARRLLFNSLVPAQLRGRDFGGDHTAKLEFLAPELVRAVARLRFRECAPEDAVPQRNA
YYSVLNTFQALHRSEAFRQLVHFVRDFAQLLKTSFRASSLAETTGPPKKRAKVDVATHGQTYGTLELF
QKMILMHATYFLAAVLLGDHAEQVNTFLRLVFEIPLFSDTAVRHFRQRATVFLVPRRHGKTWFLVPLI
ALSLASFRGIKIGYTAHIRKATEPVFDEIDACLRGWFGSSRVDHVKGETISFSFPDGSRSTIVFASSH
NTNGIRGQDFNLLFVDEANFIRPDAVQTIMGFLNQANCKIIFVSSTNTGKASTSFLYNLRGAADELLN
VVTYICDDHMPRVVTHTNATACSCYILNKPVFITMDGAVRRTADLFLPDSFMQEIIGGQARETGDDRP
VLTKSAGERFLLYRPSTTTNSGLMAPELYVYVDPAFTANTRASGTGIAVVGRYRDDFIIFALEHFFLR
ALTGSAPADIARCVVHSLAQVLALHPGAFRSVRVAVEGNSSQDSAVAIATHVHTEMHRILASAGANGP
GPELLFYHCEPPGGAVLYPFFLLNKQKTPAFEYFIKKFNSGGVMASQELVSVTVRLQTDPVEYLSEQL
NNLIETVSPNTDVRMYSGKRNGAADDLMVAVIMAIYLAAPTGIPPAFFPITRTS
SEQ ID NO：29＝UL26.5编码的ICP35预测序列
MNPVSASGAPAPPPPGDGSYLWIPASHYNQLVTGQSAPRHPPLTACGLPAAGTVAYGHPGAGPSPHYP
PPPAHPYPGMLFAGPSPLEAQIAALVGAIAADRQAGGLPAAAGDHGIRGSAKRRRHEVEQPEYDCGRD
EPDRDFPYYPGEARPEPRPVDSRRAARQASGPHETITALVGAVTSLQQELAHMRARTHAPYGPYPPVG
PYHHPHADTETPAQPPRYPAKAVYLPPPHIAPPGPPLSGAVPPPSYPPVAVTPGPAPPLHQPSPAHAH
PPPPPPGPTPPPAASLPQPEAPGAEAGALVNASSAAHVNVDTARAADLFVSQMMGSR
SEQ ID NO：30＝UL30编码的聚合酶预测序列
MFCAAGGPASPGGKPAARAASGFFAPHNPRGATQTAPPPCRRQNFYNPHLAQTGTQPKALGPAQRHTY
YSECDEFRFIAPRSLDEDAPAEQRTGVHDGRLRRAPKVYCGGDERDVLRVGPEGFWPRRLRLWGGADH
APEGFDPTVTVFHVYDILEHVEHAYSMRAAQLHERFMDAITPAGTVITLLGLTPEGHRVAVHVYGTRQ
YFYMNKAEVDRHLQCRAPRDLCERLAAALRESPGASFRGISADHFEAEVVERADVYYYETRPTLYYRV
FVRSGRALAYLCDNFCPAIRKYEGGVDATTRFILDNPGFVTFGWYRLKPGRGNAPAQPRPPTAFGTSS
DVEFNCTADNLAVEGAMCDLPAYKLMCFDIECKAGGEDELAFPVAERPEDLVIQISCLLYDLSTTALE
HILLFSLGSCDLPESHLSDLASRGLPAPVVLEFDSEFEMLLAFMTFVKQYGPEFVTGYNIINFDWPFV
LTKLTEIYKVPLDGYGRMNGRGVFRVWDIGQSHFQKRSKIKVNGMVNIDMYGIITDKVKLSSYKLNAV
AEAVLKDKKKDLSYRDIPAYYASGPAQRGVIGEYCVQDSLLVGQLFFKFLPHLELSAVARLAGINITR
TIYDGQQIRVFTCLLRLAGQKGFILPDTQGRFRGLDKEAPKRPAVPRGEGERPGDGNGDEDKDDDEDG
DEDGDEREEVARETGGRHVGYQGARVLDPTSGFHVDPVVVFDFASLYPSIIQAHNLCFSTLSLRPEAV
AHLEADRDYLEIEVGGRRLFFVKAHVRESLLSILLRDWLAMRKQIRSRIPQSTPEEAVLLDKQQAAIK
VVCNSVYGFTGVQHGLLPCLHVAATVTTIGREMLLATRAYVHARWAEFDQLLADFPEAAGMRAPGPYS
MRIIYGDTDSIFVLCRGLTAAGLVAMGDKMASHISRALFLPPIKLECEKTFTKLLLIAKKKYIGVICG
GKMLIKGVDLVRKNNCAFINRTSRALVDLLFYDDTVSGAAAALAERPAEEWLARPLPEGLQAFGAVLV
DAHRRITDPERDIQDFVLTAELSRHPRAYTNKRLAHLTVYYKLMARRAQVPSIKDRIPYVIVAQTREV
EETVARLAALRELDAAAPGDEPAPPAALPSPAKRPRETPSHADPPGGASKPRKLLVSELAEDPGYAIA
RGVPLNTDYYFSHLLGAACVTFKALFGNNAKITESLLKRFIPETWHPPDDVAARLRAAGFGPAGAGAT
AEETRRMLHRAFDTLA
SEQ ID NO：31＝UL5编码的解旋酶/引发酶复合物预测序列
MAASGGEGSRDVRAPGPPPQQPGARPAVRFRDEAFLNFTSMHGVQPIIARIRELSQQQLDVTQVPRLQ
WFRDVAALEVPTGLPLREFPFAAYLITGNAGSGKSTCVQTLNEVLDCVVTGATRIAAQNMYVKLSGAF
LSRPINTIFHEFGFRGNHVQAQLGQHPYTLASSPASLEDLQRRDLTYYWEVILDITKRALAAHGGEDA
RNEFHALTALEQTLGLGQGALTRLASVTHGALPAFTRSNIIVIDEAGLLGRHLLTTVVYCWWMINALY
HTPQYAGRLRPVLVCVGSPTQTASLESTFEHQKLRCSVRQSENVLTYLICNRTLREYTRLSHSWAIFI
NNKRCVEHEFGNLMKVLEYGLPITEEHMQFVDRFVVPESYITNPANLPGWTRLFSSHKEVSAYMAKLH
AYLKVTREGEFVVFTLPVLTFVSVKEFDEYRRLTQQPTLTMEKWITANASRITNYSQSQDQDAGHVRC
EVHSKQQLVVARNDITYVLNSQVAVTARLRKMVFGFDGTFRTFEAVLRDDSFVKTQGETSVEFAYRFL
SRLMFGGLIHFYNFLQRPGLDATQRTLAYGRLGELTAELLSLRRDAAGASATRAADTSDRSPGERAFN
FKHLGPRDGGPDDFPDDDLDVIFAGLDEQQLDVFYCHYALEEPETTAAVHAQFGLLKRAFLGRYLILR
ELFGEVFESAPFSTYVDNVIFRGCELLTGSPRGGLMSVALQTDNYTLMGYTYTRVFAFAEELRRRHAT
AGVAEFLEESPLPYIVLRDQHGFMSVVNTNISEFVESIDSTELAMAINADYGISSKLAMTITRSQGLS
LDKVAICFTPGNLRLNSAYVAMSRTTSSEFLHMNLNPLRERHERDDVISEHILSALRDPNVVIVY
SEQ ID NO：32＝UL8编码的解旋酶/引发酶复合物预测序列
MEAPGIVWVEESVSAITLYAVWLPPRTRDCLHALLYLVCRDAAGEARARFAEVSVGSSDLQDFYGSPD
VSAPGAVAAARAATAPAASPLEPLGDPTLWRALYACVLAALERQTGRWALFVPLRLGWDPQTGLVVRV
ERASWGPPAAPRAALLDVEAKVDVDPLALSARVAEHPGARLAWARLAAIRDSPQCASSASLAVTITTR
TARFAREYTTLAFPPTRKEGAFADLVEVCEVGLRPRGHPQRVTARVLLPRGYDYFVSAGDGFSAPALV
ALFRQWHTTVHAAPGALAPVFAFLGPGFEVRGGPVQYFAVLGFPGWPTFTVPAAAAAESARDLVRGAA
ATHAACLGAWPAVGARVVLPPRAWPAVASEAAGRLLPAFREAVARWHPTATTIQLLDPPAAVGPVWTA
RFCFSGLQAQLLAALAGLGEAGLPEARGRAGLERLDALVAAAPSEPWARAVLERLVPDACDACPALRQ
LLGGVMAAVCLQIEQTASSVKFAVCGGTGAAFWGLFNVDPGDADAAHGAIQDARRALEASVRAVLSAN
GIRPRLAPSLAPEGVYTHVVTWSQTGAWFWNSRDDTDFLQGFPLRGAAYAAAAEVMRDALRRILRRPA
AGPPEEAVCAARGVMEDACDRFVLDAFGRRLDAEYWSVLTPPGEADDPLPQTAFRGGALLDAEQYWRR
VVRVCPGGGESVGVPVDLYPRPLVLPPVDCAHHLREILREIQLVFTGVLEGVWGEGGSFVYPFDEKIR
FLFP
SEQ ID NO：33＝UL15.5编码的未知蛋白预测序列
MDGAVRRTADLFLPDSFMQEIIGGQARETGDDRPVLTKSAGERFLLYRPSTTTNSGLMAPELYVYVDP
AFTANTRASGTGIAVVGRYRDDFIIFALEHFFLRALTGSAPADIARCVVHSLAQVLALHPGAFRSVRV
AVEGNSSQDSAVAIATHVHTEMHRILASAGANGPGPELLFYHCEPPGGAVLYPFFLLNKQKTPAFEYF
IKKFNSGGVMASQELVSVTVRLQTDPVEYLSEQLNNLIETVSPNTDVRMYSGKRNGAADDLMVAVIMA
IYLAAPTGIPPAFFPITRTS
SEQ ID NO：34＝UL32编码的切割和包装蛋白预测序列
MATSAPGVPSSAAVREESPGSSWKEGAFERPYVAFDPDLLALNEALCAELLAACHVVGVPPASALDED
VESDVAPAPPRPRGAAREASGGRGPGSARGPPADPTAEGLLDTGPFAAASVDTFALDRPCLVCRTIEL
YKQAYRLSPQWVADYAFLCAKCLGAPHCAASIFVAAFEFVYVMDHHFLRTKKATLVGSFARFALTIND
IHRHFFLHCCFRTDGGVPGRHAQKQPRPTPSPGAAKVQYSNYSFLAQSATRALIGTLASGGDDGAGAG
AGGGSGTQPSLTTALMNWKDCARLLDCTEGKRGGGDSCCTRAAARNGEFEAAAGALAQGGEPETWAYA
DLILLLLAGTPAVWESGPRLRAAADARRAAVSESWEAHRGARMRDAAPRFAQFAEPQPQPDLDLGPLM
ATVLKHGRGRGRTGGECLLCNLLLVRAYWLAMRRLRASVVRYSENNTSLFDCIVPVVDQLEADPEAQP
GDGGRFVSLLRAAGPEAIFKHMFCDPMCAITEMEVDPWVLFGHPRADHRDELQLHKAKLACGNEFEGR
VCIALRALIYTFKTYQVFVPKPTALATFVREAGALLRRHSISLLSLEHTLCTYV
SEQ ID NO：35＝UL36.4.2编码的ICP1/2预测序列
MEYDSFDALLAARLESGQTLGPAGGREASLPEAPHALYRPTGQHVAVLAAATHRTPAARVTAMDLVLA
AVLLGAPVVVALRNTTAFSRESELELCLTLFDSRPGGPDAALRDVVSSDIETWAVGLLHTDLNPIENA
CLAAQLPRLSALIAERPLADGPPCLVLVDISMTPVAVLWEAPEPPGPPDVRFVGSEATEELPFVATAG
DVLAASAADADPFFARAILGRPFDASLLTGELFPGHPVYQRPLADEAGPSAPTAARDPRDLAGGDGGS
GPEDPAAPPARQADPGVLAPTLLTDATTGEPVPPRMWAWIHGLEELASDDAGGPT
SEQ ID NO：36＝UL54编码的ICP27预测序列
MATDIDMLIDLGLDLSDSELEEDALERDEEGRRDDPESDSSGECSSSDEDMEDPCGDGGAEAIDAAIP
KGPPARPEDAGTPEASTPRPAARRGADDPPPATTGVWSRLGTRRSASPREPHGGKVARIQPPSTKAPH
PRGGRRGRRRGRGRYGPGGADSTPKPRRRVSRNAHNQGGRHPASARTDGPGATHGEARRGGEQLDVSG
GPRPRGTRQAPPPLMALSLTPPHADGRAPVPERKAPSADTIDPAVRAVLRSISERAAVERISESFGRS
ALVMQDPFGGMPFPAANSPWAPVLATQAGGFDAETRRVSWETLVAHGPSLYRTFAANPRAASTAKAMR
DCVLRQENLIEALASADETLAWCKMCIHHNLPLRPQDPIIGTAAAVLENLATRLRPFLQCYLKARGLC
GLDDLCSRRRLSDIKDIASFVLVILARLANRVERGVSEIDYTTVGVGAGETMHFYIPGACMAGLIEIL
DTHRQECSSRVCELTASHTIAPLYVHGKYFYCNSLF
SEQ ID NO：37＝UL49.5编码的病毒列子蛋白
MTGKPARLGRWVVLLFVALVAGVPGEPPNAAGARGVIGDAQCRGDSAGVVSVPGVLVP
FYLGMTSMGVCMIAHVYQICQRALAAGSA
SEQ ID NO：38＝US4编码的gG2
NRWGSGVPGPINPPNSDVVFPGGSPVAQYCYAYPRLDDPGPLGSADA
GRQDLPRRVVRHEPLGRSFLTGGLVLLAPPVRGFGAPNATYAARVTYYRLTRACRQPILLRQYGGCRG
GEPPSPKTCGSYTYTYQGGGPPTRYALVNASLLVPIWDRAAETFEYQIELGGELHVGLLWVEVGGEGP
GPTAPPQAARAEGGPCVPPVPAGRPWRSVPPVWYSAPNPGFRGLRFRERCLPPQTPAAPSDLPRVAFA
PQSLLVGITGRTFIRMARPTEDVGVLPPHWAPGALDDGPYAPFPPRPRFRR
SEQ ID NO：39＝RS1(ICP4)的全长核酸序列
ATGTCGTACTACCATCACCATCACCATCACAGTGCCGAACAGCGTAAAAAGAAAAAAACCACCACCAC
GACCCAAGGACGTGGAGCTGAAGTTGCTATGGCGGATGAGGATGGAGGCCGCTTGAGAGCTGCTGCTG
AGACTACTGGAGGACCTGGATCACCGGACCCTGCCGATGGACCCCCCCCTACACCAAACCCCGATCGT
AGACCGGCTGCTAGACCTGGATTCGGATGGCATGGAGGACCCGAGGAAAACGAGGACGAGGCGGACGA
CGCCGCTGCCGACGCCGACGCCGATGAGGCTGCCCCTGCTTCTGGAGAGGCGGTAGACGAACCTGCTG
CCGATGGAGTTGTTAGCCCTAGGCAATTGGCTTTGTTGGCGAGCATGGTAGACGAGGCTGTGAGAACA
ATCCCTTCCCCTCCCCCTGAACGTGATGGAGCACAAGAGGAGGCGGCTAGGAGTCCCTCACCACCCCG
TACACCTTCTATGAGAGCGGATTACGGCGAGGAAAACGACGACGACGACGATGATGATGACGACGATG
ATCGTGATGCCGGACGCTGGGTTAGGGGACCTGAAACCACTTCTGCTGTCCGTGGAGCATACCCCGAT
CCTATGGCGAGTTTGAGCCCTAGACCACCTGCCCCGAGGAGACACCACCACCACCACCATCATAGGCG
TAGACGTGCTCCTAGACGTCGTTCTGCCGCTAGTGACTCTTCCAAATCTGGCTCTTCTTCATCTGCCT
CTTCCGCTTCATCTTCGGCCTCATCGTCCTCTTCGGCATCCGCTTCGAGTAGTGATGATGATGATGAC
GACGACGCTGCTAGAGCCCCCGCTTCTGCTGCCGACCACGCTGCTGGCGGAACTTTGGGAGCCGACGA
CGAGGAGGCGGGAGTTCCTGCTCGTGCCCCGGGAGCTGCTCCGAGGCCTTCTCCACCCCGTGCTGAAC
CTGCTCCGGCTAGAACACCGGCCGCTACTGCTGGTAGACTGGAGCGTAGACGTGCCCGTGCTGCTGTG
GCTGGTAGAGATGCTACTGGCCGCTTCACTGCTGGCCGTCCTAGACGTGTTGAACTGGACGCCGATGC
TGCTTCTGGTGCTTTCTACGCCCGTTACCGTGATGGTTACGTGTCTGGTGAACCTTGGCCTGGCGCTG
GTCCACCTCCGCCCGGACGTGTACTCTACGGTGGATTGGGCGATTCTCGCCCTGGTCTGTGGGGCGCT
CCGGAGGCTGAGGAGGCTAGAGCCCGTTTCGAGGCTTCTGGTGCCCCTGCTCCTGTTTGGGCTCCTGA
ATTGGGCGACGCTGCTCAACAATACGCCCTCATCACACGCTTGCTGTACACTCCCGACGCCGAGGCTA
TGGGATGGCTCCAAAACCCTAGAGTTGCCCCTGGTGATGTTGCTCTGGATCAGGCTTGTTTCCGTATC
TCCGGCGCTGCTCGTAACTCTTCTTCGTTCATCTCCGGTTCTGTGGCTAGAGCTGTGCCTCACTTGGG
ATACGCCATGGCCGCTGGACGTTTCGGCTGGGGACTGGCTCATGTTGCTGCCGCTGTAGCAATGTCTA
GACGCTACGACCGTGCTCAAAAAGGATTCTTGCTCACGTCACTGAGGCGTGCTTACGCCCCTTTGTTG
GCCCGTGAAAACGCTGCCCTCACTGGCGCCCGTACCCCCGATGACGGTGGCGACGCCAACCGCCACGA
TGGTGATGATGCTAGAGGCAAACCCGCTGCCGCTGCTGCTCCTTTGCCCTCTGCCGCCGCTTCCCCTG
CCGATGAACGTGCTGTTCCTGCCGGTTACGGTGCCGCTGGTGTGTTGGCTGCTTTGGGACGCTTGAGT
GCTGCCCCGGCTAGTGCCCCCGCTGGTGCCGATGACGATGACGATGACGATGGTGCTGGCGGAGGCGG
TGGCGGTAGACGTGCTGAGGCTGGACGTGTTGCTGTTGAATGCCTGGCTGCCTGTAGAGGAATCTTGG
AGGCTCTGGCCGAGGGATTCGACGGAGACTTGGCGGCTGTACCGGGACTGGCGGGAGCGAGGCCTGCC
GCTCCACCTCGCCCCGGTCCTGCTGGTGCTGCCGCTCCTCCTCATGCCGACGCTCCTAGACTCCGTGC
TTGGCTCCGTGAACTCCGTTTCGTTCGTGACGCTTTGGTTCTGATGAGACTGAGAGGCGACTTGAGAG
TGGCTGGAGGATCCGAGGCTGCTGTTGCTGCTGTCCGTGCTGTTTCTTTGGTTGCTGGTGCTTTGGGC
CCTGCTTTGCCGAGATCTCCCCGTTTGTTGTCGAGTGCCGCCGCTGCTGCCGCCGATTTGTTGTTCCA
AAACCAATCCCTCCGCCCTCTGCTCGCCGACACTGTTGCCGCTGCCGATTCTCTGGCTGCTCCGGCTT
CTGCCCCACGTGAAGCTCGTAAACGTAAATCACCCGCTCCGGCTCGTGCTCCCCCTGGTGGCGCCCCT
AGACCCCCTAAAAAATCCCGTGCCGATGCCCCTAGACCTGCTGCTGCTCCCCCCGCTGGTGCTGCTCC
CCCCGCTCCCCCTACTCCCCCCCCACGCCCACCTCGTCCCGCTGCCCTCACACGCCGTCCTGCTGAGG
GACCCGATCCACAAGGCGGCTGGCGTAGACAACCTCCTGGCCCATCCCATACACCGGCACCATCTGCC
GCTGCTTTGGAGGCTTACTGTGCTCCTCGTGCTGTGGCTGAACTCACCGATCATCCGCTGTTCCCTGC
TCCCTGGCGTCCCGCCCTCATGTTCGATCCTAGAGCTTTGGCTTCCTTGGCCGCTCGTTGTGCTGCCC
CTCCCCCTGGCGGTGCTCCGGCTGCTTTCGGTCCTCTCCGTGCCTCTGGTCCACTCCGCCGTGCCGCT
GCCTGGATGAGACAAGTTCCCGACCCTGAGGATGTTAGAGTTGTGATCTTGTACTCGCCCTTGCCTGG
CGAGGATTTGGCCGCTGGTAGAGCTGGCGGTGGCCCCCCTCCTGAATGGTCTGCTGAACGTGGTGGTT
TGTCTTGCTTGTTGGCCGCCCTGGGAAACCGTCTGTGTGGTCCTGCTACTGCTGCTTGGGCTGGAAAC
TGGACTGGCGCTCCCGATGTTTCTGCTCTCGGTGCTCAAGGAGTTTTGCTGCTCTCTACTCGTGACTT
GGCATTCGCTGGAGCTGTTGAATTCCTGGGACTCTTGGCTGGCGCTTGTGATAGGAGACTCATCGTCG
TAAACGCTGTGAGAGCTGCCGATTGGCCTGCCGATGGTCCTGTTGTGTCTCGTCAACACGCTTACTTG
GCTTGTGAAGTGTTGCCCGCTGTCCAATGTGCTGTTCGCTGGCCTGCTGCTCGTGATCTGAGGCGTAC
TGTTCTGGCTAGTGGTCGTGTTTTCGGACCTGGTGTTTTCGCTCGTGTCGAAGCTGCTCACGCTAGAC
TGTACCCCGATGCCCCACCCCTCCGTTTGTGTCGTGGAGCAAACGTTCGCTACCGTGTCCGTACTCGT
TTCGGACCCGATACTCTGGTTCCAATGTCCCCTCGTGAATACCGTCGTGCTGTTCTGCCTGCCCTCGA
TGGACGTGCTGCCGCTTCTGGCGCTGGTGACGCTATGGCTCCTGGCGCTCCGGACTTCTGTGAGGATG
AGGCTCACTCACATCGTGCCTGTGCCCGCTGGGGACTGGGCGCTCCATTGAGGCCTGTATACGTGGCA
CTGGGCCGTGATGCTGTTAGAGGCGGACCCGCTGAATTGAGAGGCCCTCGTCGTGAATTCTGTGCTAG
GGCTCTGCTCGAACCCGATGGAGATGCTCCTCCTTTGGTACTCCGTGACGACGCCGATGCTGGTCCTC
CCCCACAAATTCGCTGGGCTAGTGCTGCTGGACGTGCTGGTACTGTATTGGCTGCTGCTGGCGGTGGC
GTTGAAGTTGTTGGTACTGCCGCTGGACTCGCTACACCTCCCCGCCGTGAACCTGTAGACATGGATGC
TGAACTCGAGGATGATGACGACGGATTGTTCGGAGAGTAATAG
SEQ ID NO：40＝US6ΔTMR
ATGAAGTTCCTCGTGAACGTGGCCCTGGTGTTCATGGTGGTGTACATCAGCTACATCTACGCCAACCG
TTGGAAGTACGCTCTGGCTGACCCATCCCTGAAGATGGCTGACCCCAACCGTTTCCGTGGCAAGAACC
TGCCCGTGCTGGACCAGCTGACCGACCCCCCTGGCGTGAAGCGTGTGTACCACATCCAGCCATCCCTC
GAAGACCCCTTCCAGCCCCCCTCCATCCCCATCACCGTGTACTACGCTGTGCTGGAACGCGCTTGCCG
TTCCGTGCTGCTGCACGCTCCTTCCGAGGCTCCCCAGATCGTGCGTGGTGCTTCCGACGAGGCTCGCA
AGCACACCTACAACCTGACTATCGCTTGGTACAGGATGGGTGACAACTGCGCTATCCCTATCACCGTC
ATGGAATACACCGAGTGCCCCTACAACAAGTCCCTGGGCGTGTGCCCTATCCGTACCCAGCCCCGTTG
GTCCTACTACGACTCCTTCAGCGCTGTGTCCGAGGACAACCTGGGTTTCCTGATGCACGCTCCCGCTT
TCGAGACTGCTGGCACCTACCTGCGTCTGGTCAAGATCAACGACTGGACCGAGATCACCCAGTTCATC
CTGGAACACCGTGCTCGTGCTTCGTGCAAGTACGCCCTGCCCCTGCGTATCCCTCCTGCTGCTTGCCT
GACCTCCAAGGCTTACCAGCAGGGCGTGACCGTGGACTCCATCGGCATGCTGCCCCGTTTCATCCCCG
AGAACCAGCGTACCGTGGCTCTGTACTCTCTGAAGATCGCTGGCTGGCACGGTCCTAAGCCCCCCTAC
ACCTCCACTCTGCTGCCCCCTGAGCTGTCCGACACCACCAACGCTACTCAGCCCGAGTTGGTGCCTGA
GGACCCCGAGGACTCCGCTCTGTTGGAGGACCCCGCTGGAACCGTGTCCTCCCAGATCCCCCCCAACT
GGCACATCCCTTCCATCCAGGACGTGGCCCCTCACCACGCTCCAGCTGCTCCCTCCAACCCCCGTCGT
CGTGCTCAGATGGCTCCCAAGCGTCTGCGTCTGCCCCACATCCGTGACGACGACGCTCCTCCATCCCA
CCAGCCCCTGTTCTACCACCACCACCATCACCACTAATAA
SEQ ID NO：41＝RL1(ICP34.5)的核酸序列
ATGTCTCGTCGTCGTGGTCCTCGTCGTCGTGGTCCTCGTCGTCGTCCGCGTCCGGGTGCGCCGGCGGT
ACCACGCCCGGGTGCGCCGGCAGTGCCGCGTCCAGGCGCACTGCCTACCGCGGACTCTCAAATGGTGC
CGGCGTATGATTCTGGTACTGCCGTCGAATCTGCTCCGGCAGCGAGCTCCCTGCTGCGTCGTTGGCTG
CTGGTCCCTCAGGCGGACGATTCCGATGACGCAGACTACGCGGGCAACGACGACGCGGAGTGGGCTAA
CAGCCCGCCAAGCGAGGGTGGTGGCAAAGCGCCGGAGGCTCCGCACGCAGCGCCTGCCGCAGCGTGCC
CGCCTCCGCCTCCTCGTAAAGAACGTGGCCCTCAACGTCCTCTGCCGCCGCACCTGGCTCTGCGTCTG
CGTACTACCACTGAGTACCTGGCGCGTCTGTCTCTGCGTCGTCGCCGTCCGCCGGCTAGCCCGCCGGC
CGATGCACCGCGTGGCAAAGTGTGCTTCTCTCCACGTGTTCAAGTTCGTCACCTGGTGGCTTGGGAAA
CGGCTGCCCGTCTGGCTCGCCGTGGCAGCTGGGCACGTGAGCGCGCAGACCGTGACCGCTTCCGTCGC
CGTGTGGCGGCTGCTGAAGCCGTTATCGGCCCGTGCCTGGAACCTGAGGCTCGCGCTCGCGCGCGTGC
GCGCGCTCGTGCCCACGAAGATGGCGGTCCAGCAGAGGAAGAAGAGGCAGCTGCAGCAGCGCGCGGTA
GCTCCGCGGCTGCGGGTCCAGGTCGTCGTGCCGTA
SEQ ID NO：42＝RL2(ICP0)的核酸序列
ATGTCGTACTACCATCACCATCACCATCACATGGAGCCACGTCCTGGTACTTCTTCTCGCGCTGATCC
TGGTCCTGAACGTCCGCCACGCCAGACTCCGGGCACCCAGCCGGCCGCCCCTCACGCTTGGGGCATGC
TGAACGATATGCAGTGGCTGGCGTCCTCTGATTCCGAAGAGGAGACTGAGGTTGGTATCAGCGATGAT
GATCTGCACCGCGACTCTACCAGCGAAGCAGGTTCCACTGACACCGAAATGTTTGAAGCGGGCCTGAT
GGATGCCGCGACCCCGCCGGCTCGTCCGCCGGCTGAACGTCAGGGTAGCCCTACGCCTGCGGATGCGC
AAGGCTCTTGTGGTGGTGGTCCAGTAGGCGAAGAGGAGGCTGAGGCCGGTGGCGGCGGTGATGTGTGT
GCGGTTTGTACCGATGAAATCGCACCGCCGCTGCGTTGTCAGTCTTTCCCGTGCCTGCACCCGTTTTG
CATTCCGTGCATGAAAACCTGGATCCCGCTGCGCAACACTTGCCCGCTGTGCAACACTCCGGTTGCTT
ATCTGATCGTTGGTGTAACCGCATCTGGTTCCTTTTCTACCATCCCGATTGTCAACGACCCACGTACG
CGTGTTGAGGCGGAGGCGGCTGTACGTGCGGGCACCGCGGTGGACTTTATCTGGACCGGTAACCCGCG
CACCGCGCCACGCTCCCTGTCTCTGGGTGGCCATACCGTTCGTGCTCTGAGCCCGACCCCACCTTGGC
CAGGCACCGATGACGAAGACGACGATCTGGCTGACGTTGACTATGTTCCGCCGGCACCGCGTCGCGCA
CCACGCCGTGGTGGCGGTGGCGCCGGTGCGACGCGCGGTACCTCCCAGCCGGCAGCAACTCGCCCAGC
ACCGCCGGGTGCCCCGCGTTCTAGCAGCTCCGGTGGCGCACCGCTGCGTGCTGGCGTGGGTTCTGGTT
CCGGTGGTGGTCCGGCCGTGGCGGCTGTCGTCCCGCGTGTGGCTTCTCTGCCACCGGCAGCTGGTGGC
GGTCGTGCTCAAGCTCGTCGTGTCGGCGAGGACGCAGCGGCTGCTGAGGGCCGTACTCCACCGGCCCG
TCAACCGCGCGCAGCACAGGAACCGCCGATCGTGATCTCCGATTCCCCGCCACCGAGCCCGCGTCGCC
CGGCGGGTCCGGGTCCGCTGTCTTTTGTATCCTCCAGCTCTGCTCAGGTAAGCAGCGGTCCTGGCGGT
GGCGGCCTGCCACAGTCCTCTGGTCGTGCTGCTCGTCCTCGTGCGGCGGTTGCTCCTCGTGTACGTTC
TCCGCCACGCGCTGCTGCCGCGCCGGTCGTTTCTGCCTCTGCTGACGCGGCAGGTCCGGCTCCGCCTG
CAGTTCCGGTTGATGCACACCGTGCACCGCGCTCTCGTATGACCCAGGCGCAGACTGATACCCAGGCA
CAATCCCTGGGTCGCGCGGGTGCGACTGACGCTCGTGGTAGCGGTGGTCCGGGCGCTGAAGGTGGCCC
GGGTGTTCCACGCGGTACTAACACTCCGGGCGCTGCGCCACACGCGGCTGAAGGTGCGGCTGCACGTC
CGCGTAAACGTCGTGGTTCCGACAGCGGTCCGGCTGCAAGCAGCAGCGCGAGCTCTTCCGCTGCGCCT
CGCAGCCCGCTGGCGCCGCAGGGTGTTGGCGCCAAGCGTGCTGCTCCGCGTCGTGCACCGGACTCCGA
TTCTGGCGACCGCGGTCACGGCCCGCTGGCCCCTGCTAGCGCAGGCGCTGCGCCGCCATCCGCCAGCC
CGTCTTCTCAGGCAGCTGTGGCTGCGGCGTCCTCTTCTTCCGCTAGCAGCTCTTCCGCCTCTTCTAGC
AGCGCGTCCTCTAGCAGCGCATCTTCCTCTTCTGCTTCTTCTTCTAGCGCTTCTAGCTCTTCCGCGTC
CTCTTCCGCTGGCGGTGCAGGCGGCTCTGTTGCTTCCGCCAGCGGCGCAGGTGAGCGTCGTGAAACGA
GCCTGGGCCCACGTGCTGCTGCACCGCGTGGCCCGCGTAAGTGTGCGCGCAAGACCCGCCACGCTGAA
GGCGGTCCGGAGCCGGGTGCGCGTGATCCGGCTCCGGGTCTGACCCGTTACCTGCCGATTGCGGGTGT
GTCCTCCGTTGTGGCACTGGCGCCGTATGTGAACAAAACTGTCACGGGCGATTGCCTGCCTGTTCTGG
ACATGGAAACCGGTCATATCGGCGCTTACGTCGTTCTGGTTGACCAAACCGGCAACGTGGCGGATCTG
CTGCGTGCGGCCGCTCCGGCTTGGTCCCGTCGTACCCTGCTGCCGGAACATGCTCGCAACTGTGTACG
CCCACCGGATTACCCAACCCCGCCGGCCTCCGAGTGGAACTCCCTGTGGATGACCCCGGTTGGTAACA
TGCTGTTCGACCAGGGCACGCTGGTTGGTGCTCTGGACTTTCACGGCCTGCGCTCCCGTCACCCGTGG
TCCCGTGAGCAAGGCGCTCCGGCCCCTGCGGGCGATGCCCCGGCTGGCCACGGCGAGAGTACTAGAGG
ATCATAA
SEQ ID NO：43＝UL36.3.4.1的核酸序列
ATGTCGTACTACCATCACCATCACCATCACGCCGCTCAACGTGCTAGGGGATCCTCTGAACGCTGGGC
TGCTGGTGTCGAGGCTGCTTTGGATAGAGTGGAGAACCGTGCCGAATTCGATGTTGTCGAGCTGAGGA
GACTCCAAGCTTTGGCTGGTACTCACGGCTACAACCCTCGTGATTTCCGTAAACGTGCCGAACAGGCT
TTGGCGGCAAACGCTGAGGCCGTAACATTGGCTCTGGACACTGCCTTCGCTTTCAACCCATACACGCC
CGAAAACCAACGTCATCCTATGCTCCCACCTCTCGCTGCTATTCACCGCCTGGGATGGAGCGCTGCTT
TCCATGCTGCTGCTGAAACTTACGCCGACATGTTCCGTGTCGATGCCGAACCACTGGCTAGACTGCTC
CGTATCGCTGAGGGACTGCTGGAGATGGCTCAAGCTGGCGACGGATTCATCGATTACCATGAGGCTGT
CGGTAGACTGGCCGATGATATGACTTCTGTGCCCGGATTGAGGCGCTACGTTCCTTTCTTCCAACATG
GCTACGCCGATTACGTGGAACTGAGAGATCGCCTGGATGCTATTAGGGCCGACGTCCATAGAGCACTC
GGTGGTGTTCCGCTGGATTTGGCGGCTGCTGCCGAACAAATTTCCGCTGCTCGTAACGATCCTGAGGC
TACTGCTGAATTGGTCCGTACTGGTGTAACATTGCCTTGCCCTAGTGAGGACGCTCTCGTGGCTTGTG
CTGCTGCCCTGGAGAGAGTCGATCAATCTCCCGTGAAAAACACGGCTTACGCCGAATACGTTGCCTTC
GTGACCCGTCAAGACACTGCTGAGACTAAAGACGCTGTGGTCCGTGCTAAACAACAACGTGCTGAGGC
CACTGAACGTGTTATGGCTGGCCTGAGAGAGGCTCTGGCTGCTAGAGAACGTCGTGCTCAAATTGAGG
CTGAGGGATTGGCAAACCTGAAAACCATGCTCAAAGTCGTGGCTGTACCCGCTACTGTTGCTAAAACT
CTCGACCAGGCTCGTAGTGTTGCCGAAATTGCCGATCAAGTCGAAGTGTTGCTGGATCAAACCGAAAA
AACTCGTGAACTGGATGTGCCTGCTGTGATCTGGCTCGAACACGCCCAAAGAACATTCGAGACACACC
CTTTGTCTGCCGCTCGTGGTGATGGTCCTGGACCCTTGGCTCGTCATGCTGGCCGCCTCGGTGCCCTC
TTCGATACTCGTCGTAGAGTAGACGCCTTGAGGAGATCCCTGGAGGAGGCTGAGGCTGAATGGGACGA
AGTTTGGGGACGCTTCGGTAGAGTGAGGGGCGGAGCGTGGAAATCTCCGGAGGGATTCCGTGCAATGC
ATGAGCAACTGAGGGCCCTCCAAGACACAACAAACACCGTGTCTGGCCTGAGGGCTCAACCTGCTTAC
GAACGCTTGTCTGCTCGCTACCAAGGAGTACTCGGAGCGAAAGGCGCTGAGAGAGCTGAGGCTGTTGA
GGAACTCGGTGCTCGTGTCACTAAACACACCGCTCTGTGTGCTAGGCTGAGAGATGAGGTCGTCCGTA
GAGTGCCTTGGGAAATGAACTTCGATGCTCTGGGAGGATTGTTGGCTGAGTTCGATGCCGCTGCTGCC
GATTTGGCACCTTGGGCTGTAGAGGAATTCCGTGGTGCTAGAGAACTCATTCAATACCGTATGGGCCT
GTACTCTGCCTACGCTAGAGCTGGAGGACAAACTGGTGCTGGAGCTGAATCTGCTCCTGCTCCTTTGC
TCGTGGATCTGAGGGCTTTGGATGCTCGTGCTCGTGCTTCTTCTTCCCCTGAGGGACATGAAGTGGAC
CCACAACTGCTGAGGAGGCGTGGAGAGGCTTACTTGAGAGCTGGCGGCGACCCTGGACCTCTCGTGCT
CCGTGAAGCTGTTTCTGCTTTGGACCTGCCATTCGCCACATCTTTCTTGGCCCCCGATGGAACTCCCC
TCCAATACGCTTTGTGCTTCCCTGCCGTAACGGACAAACTCGGAGCTTTGCTCATGAGGCCCGAGGCC
GCTTGTGTTAGACCTCCTTTGCCTACCGATGTGCTGGAATCTGCCCCAACTGTGACTGCCATGTACGT
ACTCACTGTGGTCAACCGCCTCCAACTGGCATTGAGTGATGCTCAAGCGGCAAACTTCCAACTGTTCG
GTCGTTTCGTTCGTCATAGGCAGGCAACCTGGGGAGCGTCAATGGATGCCGCCGCTGAATTGTACGTT
GCCCTGGTGGCTACAACTCTCACACGTGAATTCGGTTGTCGCTGGGCACAATTGGGATGGGCTAGTGG
AGCTGCTGCTCCTAGACCCCCACCTGGACCCCGTGGCTCACAACGTCACTGTGTGGCATTCAACGAGA
ACGATGTCCTCGTCGCTTTGGTTGCCGGTGTTCCCGAACACATCTACAACTTCTGGCGCCTGGACTTG
GTCCGTCAACACGAGTACATGCACCTCACACTGGAGCGTGCCTTCGAGGATGCTGCCGAGTCTATGCT
CTTCGTTCAACGCCTCACTCCACATCCCGACGCTCGTATTAGAGTTCTGCCGACCTTCTTGGATGGTG
GTCCTCCTACACGTGGTCTGTTGTTCGGAACCCGCTTGGCGGACTGGCGTCGTGGTAAACTGTCTGAA
ACCGACCCATTGGCCCCATGGAGATCTGCTTTGGAACTCGGAACCCAACGTCGTGACGTGCCTGCTTT
GGGAAAACTGTCCCCTGCTCAAGCTTTGGCCGCTGTGTCGGTACTGGGCCGTATGTGCTTGCCCTCGG
CTGCCTTGGCTGCTTTGTGGACCTGTATGTTCCCCGACGACTACACTGAATACGACTCATTCGACGCC
CTCTTGGCGGCTCGCCTGGAATCGGGACAAACATTGGGACCTGCTGGCGGTAGAGAGGCTTCATTGTA
ATAG
SEQ ID NO：44＝UL36.4.2.5的核酸序列
ATGTCGTACTACCATCACCATCACCATCACGAATACGACTCCTTCGACGCTTTGTTGGCTGCTAGACT
GGAATCTGGTCAAACCTTGGGACCCGCTGGCGGTAGAGAGGCTTCTTTGCCCGAGGCTCCTCATGCTT
TGTACCGTCCAACCGGACAACATGTTGCTGTGTTGGCGGCTGCTACTCATAGAACCCCTGCTGCTCGT
GTTACTGCTATGGACCTGGTCTTGGCGGCCGTTTTGCTGGGCGCTCCTGTGGTGGTCGCTCTGAGAAA
CACTACTGCCTTCTCCCGTGAATCCGAATTGGAACTGTGCCTCACCCTGTTCGATTCTCGTCCCGGCG
GACCGGATGCTGCCCTGAGAGATGTGGTATCCTCCGACATTGAAACCTGGGCTGTGGGCTTGCTCCAC
ACCGATTTGAACCCTATTGAGAACGCTTGCTTGGCGGCTCAACTGCCACGCTTGTCTGCCCTCATTGC
TGAACGTCCTTTGGCCGATGGACCCCCTTGTTTGGTGTTGGTGGACATTTCGATGACACCTGTCGCTG
TTTTGTGGGAGGCCCCTGAACCACCTGGCCCTCCCGATGTTCGTTTCGTCGGTAGCGAGGCCACTGAG
GAATTGCCTTTCGTGGCTACTGCTGGTGATGTTTTGGCGGCGAGTGCTGCCGATGCCGATCCTTTCTT
CGCTCGTGCTATCCTGGGCCGTCCTTTCGATGCTTCTCTGCTCACTGGTGAACTGTTCCCTGGTCACC
CCGTTTACCAACGTCCCCTGGCGGATGAGGCTGGTCCTTCTGCTCCTACTGCCGCTCGTGATCCTAGA
GATCTGGCTGGAGGCGACGGTGGATCCGGACCTGAGGATCCCGCTGCTCCACCTGCTAGACAGGCCGA
TCCTGGTGTTTTGGCTCCTACTCTGCTCACCGATGCTACTACTGGCGAACCTGTGCCACCCCGTATGT
GGGCTTGGATTCATGGACTGGAGGAACTGGCTTCCGATGATGCCGGCGGTCCTACCCCAAACCCTGCC
CCGGCTTTGCTGCCCCCTCCTGCTACGGATCAATCTGTCCCCACTTCCCAATACGCCCCTAGACCAAT
TGGCCCGGCTGCCACTGCTAGAGAAACTCGTCCTTCCGTTCCCCCTCAACAAAACACTGGTCGTGTCC
CTGTGGCTCCACGTGATGACCCTAGACCTTCCCCCCCTACTCCTTCCCCCCCTGCCGATGCTGCTTTG
CCACCTCCTGCCTTCTCTGGTTCTGCTGCTGCTTTCTCCGCTGCTGTTCCACGTGTTCGTCGTTCTAG
GCGTACTCGTGCCAAATCCCGTGCCCCTCGTGCTTCTGCCCCACCCGAGGGATGGCGTCCCCCCGCTT
TGCCTGCCCCTGTTGCTCCTGTGGCGGCTTCTGCTCGTCCCCCCGATCAACCTCCTACTCCCGAATCT
GCTCCCCCGGCTTGGGTTTCCGCTCTGCCATTGCCACCCGGACCTGCTAGTGCTCGTGGTGCTTTCCC
TGCTCCAACCTTGGCCCCTATTCCCCCACCCCCCGCTGAGGGAGCTGTTGTTCCCGGTGGTGATCGTA
GACGTGGTCGCCGTCAAACAACTGCTGGACCATCCCCTACACCGCCACGTGGCCCGGCTGCTGGTCCT
CCTCGTCGCCTCACTAGGCCTGCTGTTGCTAGTCTGTCCGCTTCTTTGAACTCTCTGCCTTCCCCCCG
TGATCCTGCCGATCATGCTGCTGCCGTTTCTGCTGCCGCCGCTGCCGTACCACCTTCACCTGGACTGG
CTCCCCCAACTTCTGCTGTCCAAACCTCTCCTCCTCCCTTGGCGCCTGGTCCTGTTGCCCCATCTGAA
CCTTTGTGTGGCTGGGTTGTGCCTGGAGGCCCTGTTGCTAGACGTCCCCCACCCCAATCTCCGGCTAC
TAAACCGGCTGCTCGTACCCGTATTAGGGCTCGTTCTGTGCCCCAACCACCCTTGCCCCAACCTCCAC
TGCCTCAACCCCCCTTGCCTCAACCCCCTCTCCCCCAACCACCTCTGCCTCAACCTCCGCTGCCCCAA
CCTCCTTTGCCCCAACCTCCTTTGCCCCAACCTCCTTTGCCCCAACCTCCGCTGCCCCAACCTCCGCT
GCCACCTGTTACTCGTACACTCACTCCCCAATCTCGTGACTCTGTGCCTACACCTGAGTCTCCAACTC
ACACAAACACCCACTTGCCCGTTAGTGCTGTGACTTCTTGGGCTTCGTCCCTGGCTCTCCATGTGGAT
TCTGCCCCTCCCCCTGCTTCATTGCTCCAAACTCTCCACATTTCCTCCGATGATGAACACTCCGACGC
CGACTCACTCCGCTTCTCCGATTCCGATGACACTGAGGCTCTCGATCCTTTGCCTCCTGAACCTCACT
TGCCACCTGCCGATGAACCCCCCGGACCTCTGGCTGCCGACCATCTCCAATCACCTCACTCACAATTC
GGTCCTTTGCCCGTTCAAGCGAACGCTGTTCTGTCTCGTCGTTACGTGAGATCAACTGGCCGTTCTGC
CTTGGCTGTGCTCATTAGAGCTTGTCGCCGTATCCAACAACAACTCCAGCGTACTAGGAGAGCACTCT
TCCAACGCTCAAACGCCGTGCTCACATCACTCCACCATGTCCGTATGCTCTTGGGATAATAG
SEQ ID NO：45＝US12(ICP47)的核酸序列
ATGTCTTGGGCTCTGAAAACCACCGACATGTTCCTGGACTCTTCTCGTTGCACCCACCGTACCTACGG
TGACGTTTGCGCTGAAATCCACAAACGTGAACGTGAAGACCGTGAAGCTGCTCGTACCGCTGTTACCG
ACCCGGAACTGCCGCTGCTGTGCCCGCCGGACGTTCGTTCTGACCCGGCTTCTCGTAACCCGACCCAG
CAGACCCGTGGTTGCGCTCGTTCTAACGAACGTCAGGACCGTGTTCTGGCTCCGTGA
SEQ ID NO：46＝US4的核酸序列
ATGAAGTTCCTCGTGAACGTGGCCCTGGTGTTCATGGTGGTGTACATCAGCTACATCTACGCTAACCG
TTGGGGTTCCGGCGTGCCCGGTCCCATCAACCCCCCCAACTCCGACGTGGTGTTCCCCGGTGGTTCCC
CCGTGGCTCAGTACTGCTACGCTTACCCCCGTCTGGACGACCCTGGTCCCCTGGGTTCTGCTGACGCT
GGTCGTCAGGACCTGCCCCGTCGTGTCGTGCGTCACGAGCCCCTGGGTCGTAGCTTCCTGACCGGTGG
CCTGGTGCTGTTGGCTCCCCCTGTGCGCGGTTTCGGTGCTCCCAACGCTACCTACGCTGCTCGTGTGA
CCTACTACCGTCTGACCCGTGCTTGCCGTCAGCCCATCCTGCTGCGTCAGTACGGTGGTTGCCGTGGT
GGAGAGCCCCCATCCCCCAAGACCTGCGGTTCTTACACCTACACCTACCAGGGTGGTGGTCCCCCTAC
CCGTTACGCTCTGGTCAACGCTTCCCTGCTGGTGCCCATCTGGGACCGTGCTGCTGAGACTTTCGAGT
ACCAGATCGAGCTGGGTGGCGAGCTGCACGTGGGTCTGCTGTGGGTGGAAGTGGGTGGAGAGGGTCCC
GGTCCTACCGCTCCTCCTCAGGCTGCTCGTGCTGAGGGTGGTCCTTGCGTGCCACCCGTGCCTGCTGG
TCGTCCTTGGCGTTCCGTGCCCCCCGTGTGGTACTCCGCTCCCAACCCCGGTTTCCGCGGTCTGCGTT
TCCGTGAGCGTTGCCTGCCTCCCCAGACCCCTGCTGCTCCTTCCGACCTGCCTCGTGTGGCTTTCGCT
CCCCAGTCCCTGCTCGTGGGTATCACCGGTCGTACCTTCATCCGTATGGCTCGTCCCACCGAGGACGT
GGGTGTCCTGCCTCCTCACTGGGCTCCAGGTGCTCTGGACGACGGTCCCTACGCTCCCTTCCCCCCTC
GTCCCCGTTTCCGTCGTCACCACCACCATCACCACTAATAA
SEQ ID NO：117＝RS1.2
ATGTCGTACTACCATCACCATCACCATCACATGGTGCTGTACGGCGGGCTGGGCGACAGCCGCCCCGG
CCTCTGGGGGGCGCCCGAGGCGGAGGAGGCGCGGGCCCGGTTCGAGGCCTCGGGCGCCCCGGCGCCCG
TGTGGGCGCCCGAGCTGGGCGACGCGGCGCAGCAGTACGCCCTGATCACGCGGCTGCTGTACACGCCG
GACGCGGAGGCGATGGGGTGGCTCCAGAACCCGCGCGTGGCGCCCGGGGACGTGGCGCTGGACCAGGC
CTGCTTCCGGATCTCGGGCGCGGCGCGCAACAGCAGCTCCTTCATCTCCGGCAGCGTGGCGCGGGCCG
TGCCCCACCTGGGGTACGCCATGGCGGCGGGCCGCTTCGGCTGGGGCCTGGCGCACGTGGCGGCCGCC
GTGGCCATGAGCCGCCGCTACGACCGCGCGCAGAAGGGCTTCCTGCTGACCAGCCTGCGCCGCGCCTA
CGCGCCCCTGCTGGCGCGCGAGAACGCGGCGCTGACCGGGGCGCGGACCCCCGACGACGGCGGCGACG
CCAACCGCCGCGACGGCGACGACGCCCGCGGGAAGCCCGCCGCCGCCGCCGCCCCGTTGCCGTCGGCG
GCGGCGTCGCCGGCCGACGAGCGCGCGGTGCCCGCCGGCTACGGCGCCGCGGGGGTGCTCGCCGCCCT
GGGGCGCCTGAGCGCCGCGCCCGCCTCCGCGCCGGCCGGGGCCGACGACGACGACGACGACGACGACG
GCGCCGGCGGTGGTGGCGGTGGTGGCGGTGGTGGCGGCGGCCGGCGCGCGGAGGCGGGCCGCGTGGCC
GTGGAGTGCCTGGCCGCCTGCCGCGGGATCCTGGAGGCGCTGGCGGAGGGCTTCGACGGCGACCTGGC
GGCCGTGCCGGGGCTGGCCGGAGCCCGGCCCGCCGCGCCCCCGCGCCCGGGGCCCGCGGGCGCGGCCG
CCCCGCCGCACGCCGACGCGCCCCGCCTGCGCGCCTGGCTGCGCGAGCTGCGGTTCGTGCGCGACGCG
CTGGTGCTGATGCGCCTGCGCGGGGACCTGCGCGTGGCCGGCGGCAGCGAGGCCGCCGTGGCCGCCGT
GCGCGCCGTGAGCCTGGTCGCCGGGGCCCTGGGCCCGGCGCTGCCGCGGAGCCCGCGCCTGCTGAGCT
CCGCCGCCGCCGCCGCCGCGGACCTGCTCTTCCAGAACCAGAGCCTGAGTACTAGAGGATCATAA
SEQ ID NO：118＝UL1(胞质的)，全长gL
ATGTCGTACTACCATCACCATCACCATCACATGGGGTTCGTCTGTCTGTTTGGGCTTGTCGTTATGGG
AGCCTGGGGGGCGTGGGGTGGGTCACAGGCAACCGAATATGTTCTTCGTAGTGTTATTGCCAAAGAGG
TGGGGGACATACTAAGAGTGCCTTGCATGCGGACCCCCGCGGACGATGTTTCTTGGCGCTACGAGGCC
CCGTCCGTTATTGACTATGCCCGCATAGACGGAATATTTCTTCGCTATCACTGCCCGGGGTTGGACAC
GTTTTTGTGGGATAGGCACGCCCAGAGGGCGTATCTTGTTAACCCCTTTCTCTTTGCGGCGGGATTTT
TGGAGGACTTGAGTCACTCTGTGTTTCCGGCCGACACCCAGGAAACAACGACGCGCCGGGCCCTTTAT
AAAGAGATACGCGATGCGTTGGGCAGTCGAAAACAGGCCGTCAGCCACGCACCCGTCAGGGCCGGGTG
TGTAAACTTTGACTACTCACGCACTCGCCGCTGCGTCGGGCGACGCGATTTACGGCCTGCCAACACCA
CGTCAACGTGGGAACCGCCTGTGTCGTCGGACGATGAAGCGAGCTCGCAGTCGAAGCCCCTCGCCACC
CAGCCGCCCGTCCTCGCCCTTTCGAACGCCCCCCCACGGCGGGTCTCCCCGACGCGAGGTCGGCGCCG
GCATACTCGCCTCCGACGCAACTGA
SEQ ID NO：119＝UL1(分泌的)，全长gL(优选Ag)
ATGAAGTTCCTCGTGAACGTGGCCCTGGTGTTCATGGTGGTGTACATCAGCTACATCTACGCCAACCG
TTGGGGGTTCGTCTGTCTGTTTGGGCTTGTCGTTATGGGAGCCTGGGGGGCGTGGGGTGGGTCACAGG
CAACCGAATATGTTCTTCGTAGTGTTATTGCCAAAGAGGTGGGGGACATACTAAGAGTGCCTTGCATG
CGGACCCCCGCGGACGATGTTTCTTGGCGCTACGAGGCCCCGTCCGTTATTGACTATGCCCGCATAGA
CGGAATATTTCTTCGCTATCACTGCCCGGGGTTGGACACGTTTTTGTGGGATAGGCACGCCCAGAGGG
CGTATCTTGTTAACCCCTTTCTCTTTGCGGCGGGATTTTTGGAGGACTTGAGTCACTCTGTGTTTCCG
GCCGACACCCAGGAAACAACGACGCGCCGGGCCCTTTATAAAGAGATACGCGATGCGTTGGGCAGTCG
AAAACAGGCCGTCAGCCACGCACCCGTCAGGGCCGGGTGTGTAAACTTTGACTACTCACGCACTCGCC
GCTGCGTCGGGCGACGCGATTTACGGCCTGCCAACACCACGTCAACGTGGGAACCGCCTGTGTCGTCG
GACGATGAAGCGAGCTCGCAGTCGAAGCCCCTCGCCACCCAGCCGCCCGTCCTCGCCCTTTCGAACGC
CCCCCCACGGCGGGTCTCCCCGACGCGAGGTCGGCGCCGGCATACTCGCCTCCGACGCAACCATCACC
ATCACCATCACTGA
SEQ ID NO：120全长UL19ΔTEV VP5
ATGTCGTACTACCATCACCATCACCATCACATGGCCGCTCCTGCCCGCGACCCCCCGGGTTACCGGTA
CGCCGCGGCCATGGTGCCCACCGGCTCCATCCTGAGTACGATCGAGGTGGCGTCCCACCGCAGACTCT
TTGATTTTTTCGCCCGCGTGCGCTCCGACGAAAACAGCCTGTATGACGTAGAGTTTGACGCCCTGCTG
GGGTCCTACTGCAACACCCTGTCGCTCGTGCGCTTTCTGGAGCTCGGCCTGTCCGTGGCGTGCGTGTG
CACCAAGTTCCCGGAGCTGGCTTACATGAACGAAGGGCGTGTGCAGTTCGAGGTCCACCAGCCCCTCA
TCGCCCGCGACGGCCCGCACCCCGTCGAGCAGCCCGTGCATAATTACATGACGAAGGTCATCGACCGC
CGGGCCCTGAACGCCGCCTTCAGCCTGGCCACCGAGGCCATTGCCCTGCTCACGGGGGAGGCCCTGGA
CGGGACGGGCATTAGCCTGCATCGCCAGCTGCGCGCCATCCAGCAGCTCGCGCGCAACGTCCAGGCCG
TCCTGGGGGCGTTTGAGCGCGGCACGGCCGACCAGATGCTGCACGTGCTGTTGGAGAAGGCGCCTCCC
CTGGCCCTGCTGTTGCCCATGCAACGATATCTCGACAACGGGCGCCTGGCGACCAGGGTTGCCCGGGC
GACCCTGGTCGCCGAGCTGAAGCGGAGCTTTTGCGACACGAGCTTCTTCCTGGGCAAGGCGGGCCATC
GCCGCGAGGCCATCGAGGCCTGGCTCGTGGACCTGACCACGGCGACGCAGCCGTCCGTGGCCGTGCCC
CGCCTGACGCACGCCGACACGCGCGGGCGGCCGGTCGACGGGGTGCTGGTCACCACCGCCGCCATCAA
ACAGCGCCTCCTGCAGTCCTTCCTGAAGGTGGAGGACACCGAGGCCGACGTGCCGGTGACCTACGGCG
AGATGGTCTTGAACGGGGCCAACCTCGTCACGGCGCTGGTGATGGGCAAGGCCGTGCGGAGCCTGGAC
GACGTGGGCCGCCACCTGCTGGAGATGCAGGAGGAGCAACTCGAGGCGAACCGGGAGACGCTGGATGA
ACTCGAAAGCGCCCCCCAGACAACGCGCGTGCGCGCGGATCTGGTGGCCATAGGCGACAGGCTGGTCT
TCCTGGAGGCCCTGGAGAAGCGCATCTACGCCGCCACCAACGTGCCCTACCCCCTGGTGGGCGCCATG
GACCTGACGTTCGTCCTGCCCCTGGGGCTGTTCAACCCGGCCATGGAGCGCTTCGCCGCGCACGCCGG
GGACCTGGTGCCCGCCCCCGGCCACCCGGAGCCCCGCGCGTTCCCTCCCCGGCAGCTGTTTTTTTGGG
GAAAGGACCACCAGGTTCTGCGGCTGTCCATGGAGAACGCGGTCGGGACCGTGTGTCATCCTTCGCTC
ATGAACATCGACGCGGCCGTCGGGGGCGTGAACCACGACCCCGTCGAGGCCGCGAATCCGTACGGGGC
GTACGTCGCGGCCCCGGCCGGCCCCGGCGCGGACATGCAGCAGCGTTTTCTGAACGCCTGGCGGCAGC
GCCTCGCCCACGGCCGGGTCCGGTGGGTCGCCGAGTGCCAGATGACCGCGGAGCAGTTCATGCAGCCC
GACAACGCCAACCTGGCTCTGGAGCTGCACCCCGCGTTCGACTTCTTCGCGGGCGTGGCCGACGTCGA
GCTTCCCGGCGGCGAAGTCCCCCCGGCCGGTCCGGGGGCGATCCAGGCCACCTGGCGCGTGGTCAACG
GCAACCTGCCCCTGGCGCTGTGTCCGGTGGCGTTTCGTGACGCCCGGGGCCTGGAGCTCGGCGTTGGC
CGCCACGCCATGGCGCCGGCTACCATAGCCGCCGTCCGCGGGGCGTTCGAGGACCGCAGCTACCCGGC
GGTGTTCTACCTGCTGCAAGCCGCGATTCACGGCAGCGAGCACGTGTTCTGCGCCCTGGCGCGGCTCG
TGACTCAGTGCATCACCAGCTACTGGAACAACACGCGATGCGCGGCGTTCGTGAACGACTACTCGCTG
GTCTCGTACATCGTGACCTACCTCGGGGGCGACCTCCCCGAGGAGTGCATGGCCGTGTATCGGGACCT
GGTGGCCCACGTCGAGGCCCTGGCCCAGCTGGTGGACGACTTTACCCTGCCGGGCCCGGAGCTGGGCG
GGCAGGCTCAGGCCGAGCTGAATCACCTGATGCGCGACCCGGCGCTGCTGCCGCCCCTCGTGTGGGAC
TGCGACGGCCTTATGCGACACGCGGCCCTGGACCGCCACCGAGACTGCCGGATTGACGCGGGGGAGCA
CGAGCCCGTCTACGCGGCGGCGTGCAACGTGGCGACGGCCGACTTTAACCGCAACGACGGCCGGCTGC
TGCACAACACCCAGGCCCGCGCGGCCGACGCCGCCGACGACCGGCCGCACCGGCCGGCCGACTGGACC
GTCCACCACAAAATCTACTATTACGTGCTGGTGCCGGCCTTCTCGCGGGGGCGCTGCTGCACCGCGGG
GGTCCGCTTCGACCGCGTGTACGCCACGCTGCAGAACATGGTGGTCCCGGAGATCGCCCCCGGCGAGG
AGTGCCCGAGCGATCCCGTGACCGACCCCGCCCACCCGCTGCATCCCGCCAATCTGGTGGCCAACACG
GTCAACGCCATGTTCCACAACGGGCGCGTCGTCGTCGACGGGCCCGCCATGCTCACGCTGCAGGTGCT
GGCGCACAACATGGCCGAGCGCACGACGGCGCTGCTGTGCTCCGCGGCGCCCGACGCGGGCGCCAACA
CCGCGTCGACGGCCAACATGCGCATCTTCGACGGGGCGCTGCACGCCGGCGTGCTGCTCATGGCCCCC
CAGCACCTGGACCACACCATCCAAAATGGCGAATACTTCTACGTCCTGCCCGTCCACGCGCTGTTTGC
GGGCGCCGACCACGTGGCCAACGCGCCCAACTTCCCCCCGGCCCTGCGCGACCTGGCGCGCCACGTCC
CCCTGGTCCCCCCGGCCCTGGGGGCCAACTACTTCTCCTCCATCCGCCAGCCCGTGGTGCAGCACGCC
CGCGAGAGCGCGGCGGGGGAGAACGCGCTGACCTACGCGCTCATGGCGGGGTACTTCAAGATGAGCCC
CGTGGCCCTGTATCACCAGCTCAAGACGGGCCTCCACCCCGGGTTCGGGTTCACCGTCGTGCGGCAGG
ACCGCTTCGTGACCGAGAACGTGCTGTTTTCCGAGCGCGCGTCGGAGGCGTACTTTCTGGGCCAGCTC
CAGGTGGCCCGCCACGAAACGGGCGGGGGGGTCAGCTTCACGCTCACCCAGCCGCGCGGAAACGTGGA
CCTGGGTGTGGGCTACACCGCCGTCGCGGCCACGGCCACCGTCCGCAACCCCGTTACGGACATGGGCA
ACCTCCCCCAAAACTTTTACCTCGGCCGCGGGGCCCCCCCGCTGCTAGACAACGCGGCCGCCGTGTAC
CTGCGCAACGCGGTCGTGGCGGGAAACCGGCTGGGGCCGGCCCAGCCCCTCCCGGTCTTTGGCTGCGC
CCAGGTGCCGCGGCGCGCCGGCATGGACCACGGGCAGGATGCCGTGTGTGAGTTCATCGCCACCCCCG
TGGCCACGGACATCAACTACTTTCGCCGGCCCTGCAACCCGCGGGGACGCGCGGCCGGCGGCGTGTAC
GCGGGGGACAAGGAGGGGGACGTCATAGCCCTCATGTACGACCACGGCCAGAGCGACCCGGCGCGGCC
CTTCGCGGCCACGGCCAACCCGTGGGCGTCGCAGCGGTTCTCGTACGGGGACCTGCTGTACAACGGGG
CCTATCACCTCAACGGGGCCTCGCCCGTCCTCAGCCCCTGCTTCAAGTTCTTCACCGCGGCCGACATC
ACGGCCAAACATCGCTGCCTGGAGCGTCTTATCGTGGAAACGGGATCGGCGGTATCCACGGCCACCGC
TGCCAGCGACGTGCAGTTTAAGCGCCCGCCGGGGTGCCGCGAGCTCGTGGAAGACCCGTGCGGCCTGT
TTCAGGAAGCCTACCCGATCACCTGCGCCAGCGACCCCGCCCTGCTACGCAGCGCCCGCGATGGGGAG
GCCCACGCGCGAGAGACCCACTTTACGCAGTATCTCATCTACGACGCCTCCCCGCTAAAGGGCCTGTC
TCTGTAA
SEQ ID NO：121＝RS1.1
Atgagtgccgaacagcgtaaaaagaaaaaaaccaccaccacgacccaaggacgtggagctgaagttgc
tatggcggatgaggatggaggccgcttgagagctgctgctgagactactggaggacctggatcaccgg
accctgccgatggacccccccctacaccaaaccccgatcgtagaccggctgctagacctggattcgga
tggcatggaggacccgaggaaaacgaggacgaggcggacgacgccgctgccgacgccgacgccgatga
ggctgcccctgcttctggagaggcggtagacgaacctgctgccgatggagttgttagccctaggcaat
tggctttgttggcgagcatggtagacgaggctgtgagaacaatcccttcccctccccctgaacgtgat
ggagcacaagaggaggcggctaggagtccctcaccaccccgtacaccttctatgagagcggattacgg
cgaggaaaacgacgacgacgacgatgatgatgacgacgatgatcgtgatgccggacgctgggttaggg
gacctgaaaccacttctgctgtccgtggagcataccccgatcctatggcgagtttgagccctagacca
cctgccccgaggagacaccaccaccaccaccatcataggcgtagacgtgctcctagacgtcgttctgc
cgctagtgactcttccaaatctggctcttcttcatctgcctcttccgcttcatcttcggcctcatcgt
cctcttcggcatccgcttcgagtagtgatgatgatgatgacgacgacgctgctagagcccccgcttct
gctgccgaccacgctgctggcggaactttgggagccgacgacgaggaggcgggagttcctgctcgtgc
cccgggagctgctccgaggccttctccaccccgtgctgaacctgctccggctagaacaccggccgcta
ctgctggtagactggagcgtagacgtgcccgtgctgctgtggctggtagagatgctactggccgcttc
actgctggccgtcctagacgtgttgaactggacgccgatgctgcttctggtgctttctacgcccgtta
ccgtgatggttacgtgtctggtgaaccttggcctggcgctggtccacctccgcccggacgtgtactct
acggtggattgggcgattctcgccctggtctgtggggcgctccg
SEQ ID NO：122＝RS1.3.1
tcgagtgccgccgctgctgccgccgatttgttgttccaaaaccaatccctccgccctctgctcgccga
cactgttgccgctgccgattctctggctgctccggcttctgccccacgtgaagctcgtaaacgtaaat
cacccgctccggctcgtgctccccctggtggcgcccctagaccccctaaaaaatcccgtgccgatgcc
cctagacctgctgctgctccccccgctggtgctgctccccccgctccccctactccccccccacgccc
acctcgtcccgctgccctcacacgccgtcctgctgagggacccgatccacaaggcggctggcgtagac
aacctcctggcccatcccatacaccggcaccatctgccgctgctttggaggcttactgtgctcctcgt
gctgtggctgaactcaccgatcatccgctgttccctgctccctggcgtcccgccctcatgttcgatcc
tagagctttggcttccttggccgctcgttgtgctgcccctccccctggcggtgctccggctgctttcg
gtcctctccgtgcctctggtccactccgccgtgccgctgcctggatgagacaagttcccgaccctgag
gatgttagagttgtgatcttgtactcgcccttgcctggcgaggatttggccgctggtagagctggcgg
tggcccccctcctgaatggtctgctgaacgtggtggtttgtcttgcttgttggccgccctgggaaacc
gtctgtgtggtcctgctactgctgcttgggctggaaactggactggcgctcccgatgtttctgctctc
ggtgctcaa
SEQ ID NO：123＝RS1.3.2
Tgggctggaaactggactggcgctcccgatgtttctgctctcggtgctcaaggagttttgctgctctc
tactcgtgacttggcattcgctggagctgttgaattcctgggactcttggctggcgcttgtgatagga
gactcatcgtcgtaaacgctgtgagagctgccgattggcctgccgatggtcctgttgtgtctcgtcaa
cacgcttacttggcttgtgaagtgttgcccgctgtccaatgtgctgttcgctggcctgctgctcgtga
tctgaggcgtactgttctggctagtggtcgtgttttcggacctggtgttttcgctcgtgtcgaagctg
ctcacgctagactgtaccccgatgccccacccctccgtttgtgtcgtggagcaaacgttcgctaccgt
gtccgtactcgtttcggacccgatactctggttccaatgtcccctcgtgaataccgtcgtgctgttct
gcctgccctcgatggacgtgctgccgcttctggcgctggtgacgctatggctcctggcgctccggact
tctgtgaggatgaggctcactcacatcgtgcctgtgcccgctggggactgggcgctccattgaggcct
gtatacgtggcactgggccgtgatgctgttagaggcggacccgctgaattgagaggccctcgtcgtga
attctgtgctagggctctgctcgaacccgatggagatgctcctcctttggtactccgtgacgacgccg
atgctggtcctcccccacaaattcgctgggctagtgctgctggacgtgctggtactgtattggctgct
gctggcggtggcgttgaagttgttggtactgccgctggactcgctacacctccccgccgtgaacctgt
agacatggatgctgaactcgaggatgatgacgacggattgttcggagag
SEQ ID NO：124＝RS1.3
tcgagtgccgccgctgctgccgccgatttgttgttccaaaaccaatccctccgccctctgctcgccga
cactgttgccgctgccgattctctggctgctccggcttctgccccacgtgaagctcgtaaacgtaaat
cacccgctccggctcgtgctccccctggtggcgcccctagaccccctaaaaaatcccgtgccgatgcc
cctagacctgctgctgctccccccgctggtgctgctccccccgctccccctactccccccccacgccc
acctcgtcccgctgccctcacacgccgtcctgctgagggacccgatccacaaggcggctggcgtagac
aacctcctggcccatcccatacaccggcaccatctgccgctgctttggaggcttactgtgctcctcgt
gctgtggctgaactcaccgatcatccgctgttccctgctccctggcgtcccgccctcatgttcgatcc
tagagctttggcttccttggccgctcgttgtgctgcccctccccctggcggtgctccggctgctttcg
gtcctctccgtgcctctggtccactccgccgtgccgctgcctggatgagacaagttcccgaccctgag
gatgttagagttgtgatcttgtactcgcccttgcctggcgaggatttggccgctggtagagctggcgg
tggcccccctcctgaatggtctgctgaacgtggtggtttgtcttgcttgttggccgccctgggaaacc
gtctgtgtggtcctgctactgctgcttgggctggaaactggactggcgctcccgatgtttctgctctc
ggtgctcaaggagttttgctgctctctactcgtgacttggcattcgctggagctgttgaattcctggg
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ccgatggtcctgttgtgtctcgtcaacacgcttacttggcttgtgaagtgttgcccgctgtccaatgt
gctgttcgctggcctgctgctcgtgatctgaggcgtactgttctggctagtggtcgtgttttcggacc
tggtgttttcgctcgtgtcgaagctgctcacgctagactgtaccccgatgccccacccctccgtttgt
gtcgtggagcaaacgttcgctaccgtgtccgtactcgtttcggacccgatactctggttccaatgtcc
cctcgtgaataccgtcgtgctgttctgcctgccctcgatggacgtgctgccgcttctggcgctggtga
cgctatggctcctggcgctccggacttctgtgaggatgaggctcactcacatcgtgcctgtgcccgct
ggggactgggcgctccattgaggcctgtatacgtggcactgggccgtgatgctgttagaggcggaccc
gctgaattgagaggccctcgtcgtgaattctgtgctagggctctgctcgaacccgatggagatgctcc
tcctttggtactccgtgacgacgccgatgctggtcctcccccacaaattcgctgggctagtgctgctg
gacgtgctggtactgtattggctgctgctggcggtggcgttgaagttgttggtactgccgctggactc
gctacacctccccgccgtgaacctgtagacatggatgctgaactcgaggatgatgacgacggattgtt
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SEQ ID NO：125＝RS1.4
actgctggccgtcctagacgtgttgaactggacgccgatgctgcttctggtgctttctacgcccgtta
ccgtgatggttacgtgtctggtgaaccttggcctggcgctggtccacctccgcccggacgtgtactct
acggtggattgggcgattctcgccctggtctgtggggcgctccggaggctgaggaggctagagcccgt
ttcgaggcttctggtgcccctgctcctgtttgggctcctgaattgggcgacgctgctcaacaatacgc
cctcatcacacgcttgctgtacactcccgacgccgaggctatgggatggctccaaaaccctagagttg
cccctggtgatgttgctctggatcaggcttgtttccgtatctccggcgctgctcgtaactcttcttcg
ttcatctccggttctgtggctagagctgtgcctcacttgggatacgccatggccgctggacgtttcgg
ctggggactggctcatgttgctgccgctgtagcaatgtctagacgctacgaccgtgctcaaaaaggat
tcttgctcacgtcactgaggcgtgcttacgcccctttgttggcccgtgaaaacgctgccctcactggc
gcccgtacccccgatgacggtggcgacgccaaccgccacgatggtgatgatgctagaggcaaacccgc
tgccgctgctgctcctttgccctctgccgccgcttcccctgccgatgaacgtgctgttcctgccggtt
acggtgccgctggtgtgttggctgctttgggacgcttgagtgctgccccggctagtgcccccgctggt
gccgatgacgatgacgatgacgatggtgctggcggaggcggtggcggtagacgtgctgaggctggacg
tgttgctgttgaatgcctggctgcctgtagaggaatcttggaggctctggccgagggattcgacggag
acttggcggctgtaccgggactggcgggagcgaggcctgccgctccacctcgccccggtcctgctggt
gctgccgctcctcctcatgccgacgctcctagactccgtgcttggctccgtgaactccgtttcgttcg
tgacgctttggttctgatgagactgagaggcgacttgagagtggctggaggatccgaggctgctgttg
ctgctgtccgtgctgtttctttggttgctggtgctttgggccctgctttgccgagatctccccgtttg
ttgtcgagtgccgccgctgctgccgccgatttgttgttccaaaaccaatccctccgccctctgctcgc
cgacactgttgccgctgccgattctctggctgctccggcttctgccccacgtgaagctcgtaaacgta
aatcacccgctccggctcgtgctccccctggtggcgcccctagaccccctaaaaaatcccgtgccgat
gcccctagacctgctgctgctccccccgctggtgctgctccccccgctccccctactccccccccacg
cccacctcgtcccgctgccctcacacgccgtcctgctgagggacccgatccacaaggcggctggcgta
gacaacctcctggcccatcccatacaccggcaccatctgccgctgctttggaggcttactgtgct
SEQ ID NO：126＝RS1.5
gccgctgccgattctctggctgctccggcttctgccccacgtgaagctcgtaaacgtaaatcacccgc
tccggctcgtgctccccctggtggcgcccctagaccccctaaaaaatcccgtgccgatgcccctagac
ctgctgctgctccccccgctggtgctgctccccccgctccccctactccccccccacgcccacctcgt
cccgctgccctcacacgccgtcctgctgagggacccgatccacaaggcggctggcgtagacaacctcc
tggcccatcccatacaccggcaccatctgccgctgctttggaggcttactgtgctcctcgtgctgtgg
ctgaactcaccgatcatccgctgttccctgctccctggcgtcccgccctcatgttcgatcctagagct
ttggcttccttggccgctcgttgtgctgcccctccccctggcggtgctccggctgctttcggtcctct
ccgtgcctctggtccactccgccgtgccgctgcctggatgagacaagttcccgaccctgaggatgtta
gagttgtgatcttgtactcgcccttgcctggcgaggatttggccgctggtagagctggcggtggcccc
cctcctgaatggtctgctgaacgtggtggtttgtcttgcttgttggccgccctgggaaaccgtctgtg
tggtcctgctactgctgcttgggctggaaactggactggcgctcccgatgtttctgctctcggtgctc
aaggagttttgctgctctctactcgtgacttggcattcgctggagctgttgaattcctgggactcttg
gctggcgcttgtgataggagactcatcgtcgtaaacgctgtgagagctgccgattggcctgccgatgg
tcctgttgtgtctcgtcaacacgcttacttggcttgtgaagtgttgcccgctgtccaatgtgctgttc
gctggcctgctgctcgtgatctgaggcgtactgttctggctagtggtcgtgttttcggacctggtgtt
ttcgctcgtgtcgaagctgctcacgctagactgtaccccgatgccccacccctccgtttgtgtcgtgg
agcaaacgttcgctaccgtgtccgtactcgtttcggacccgatactctggttccaatgtcccctcgtg
aataccgtcgtgctgttctgcctgccctcgatggacgtgctgccgcttctggcgctggtgacgctatg
gctcctggcgctccggacttctgtgaggatgaggctcactcacatcgtgcctgtgcccgctggggact
gggcgctccattgaggcctgtatacgtggcactgggccgtgatgctgttagaggcggacccgctgaat
tgagaggccctcgtcgtgaattctgtgctagggctctgctcgaacccgatggagatgctcctcctttg
gtactccgtgacgacgccgatgctggtcctcccccacaaattcgctgggctagtgctgctggacgtgc
tggtactgtattggctgctgctggcggtggcgttgaagttgttggtactgccgctggactcgctacac
ctccccgccgtgaacctgtagacatggatgctgaactcgaggatgatgacgacggattgttcggagag
SEQ ID NO：127＝RS1.6
caccaccaccaccaccatcataggcgtagacgtgctcctagacgtcgttctgccgctagtgactcttc
caaatctggctcttcttcatctgcctcttccgcttcatcttcggcctcatcgtcctcttcggcatccg
cttcgagtagtgatgatgatgatgacgacgacgctgctagagcccccgcttctgctgccgaccacgct
gctggcggaactttgggagccgacgacgaggaggcgggagttcctgctcgtgccccgggagctgctcc
gaggccttctccaccccgtgctgaacctgctccggctagaacaccggccgctactgctggtagactgg
agcgtagacgtgcccgtgctgctgtggctggtagagatgctactggccgcttcactgctggccgtcct
agacgtgttgaactggacgccgatgctgcttctggtgctttctacgcccgttaccgtgatggttacgt
gtctggtgaaccttggcctggcgctggtccacctccgcccggacgtgtactctacggtggattgggcg
attctcgccctggtctgtggggcgctccggaggctgaggaggctagagcccgtttcgaggcttctggt
gcccctgctcctgtttgggctcctgaattgggcgacgctgctcaacaatacgccctcatcacacgctt
gctgtacactcccgacgccgaggctatgggatggctccaaaaccctagagttgcccctggtgatgttg
ctctggatcaggcttgtttccgtatctccggcgctgctcgtaactcttcttcgttcatctccggttct
gtggctagagctgtgcctcacttgggatacgccatggccgctggacgtttcggctggggactggctca
tgttgctgccgctgtagcaatgtctagacgctacgaccgtgctcaaaaaggattcttgctcacgtcac
tgaggcgtgcttacgcccctttgttggcccgtgaaaacgctgccctcactggcgcccgtacccccgat
gacggtggcgacgccaaccgccacgatggtgatgatgctagaggcaaacccgctgccgctgctgctcc
tttgccctctgccgccgcttcccctgccgatgaacgtgctgttcctgccggttacggtgccgctggtg
tgttggctgctttgggacgcttgagtgctgccccggctagtgcccccgctggtgccgatgacgatgac
gatgacgatggtgctggcggaggcggtggcggtagacgtgctgaggctggacgtgttgctgttgaatg
cctggctgcctgtagaggaatcttggaggctctggccgagggattcgacggagacttggcggctgtac
cgggactggcgggagcgaggcctgccgctccacctcgccccggtcctgctggtgctgccgctcctcct
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gatgagactgagaggcgacttgagagtggctggaggatccgaggctgctgttgctgctgtccgtgctg
tttctttggttgctggtgctttgggccctgctttgccgagatctccccgtttgttgtcgagtgccgcc
gctgctgccgccgatttgttgttccaaaaccaatccctccgccctctgctcgccgacactgttgccgc
tgccgattctctggctgctccggcttctgccccacgtgaagctcgtaaacgtaaatcacccgctccgg
ctcgtgctccccctggtggcgcccctagaccccctaaaaaatcccgtgccgatgcccctagacctgct
gctgctccccccgctggtgctgctccccccgctccccctactccccccccacgcccacctcgtcccgc
tgccctcacacgccgtcctgctgagggacccgatccacaaggcggctggcgtagacaacctcctggcc
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ctcaccgatcatccgctgttccctgctccctggcgtcccgccctcatgttcgatcctagagctttggc
ttccttggccgctcgttgtgctgcccctccccctggcggtgctccggctgctttcggtcctctccgtg
cctctggtccactccgccgtgccgctgcctggatgagacaagttcccgaccctgaggatgttagagtt
gtgatcttgtactcgcccttgcctggcgaggatttggccgctggtagagctggcggtggcccccctcc
tgaatggtctgctgaacgtggtggtttgtcttgcttgttggccgccctgggaaaccgtctgtgtggtc
ctgctactgctgcttgggctggaaactggactggcgctcccgatgtttctgctctcggtgctcaagga
gttttgctgctctctactcgtgacttggcattcgctggagctgttgaattcctgggactcttggctgg
cgcttgtgataggagactcatcgtcgtaaacgctgtgagagctgccgattggcctgccgatggtcctg
ttgtgtctcgtcaacacgcttacttggcttgtgaagtgttgcccgctgtccaatgtgctgttcgctgg
cctgctgctcgtgatctgaggcgtactgttctggctagtggtcgtgttttcggacctggtgttttcgc
tcgtgtcgaagctgctcacgctagactgtaccccgatgccccacccctccgtttgtgtcgtggagcaa
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cgtcgtgctgttctgcctgccctcgatggacgtgctgccgcttctggcgctggtgacgctatggctcc
tggcgctccggacttctgtgaggatgaggctcactcacatcgtgcctgtgcccgctggggactgggcg
ctccattgaggcctgtatacgtggcactgggccgtgatgctgttagaggcggacccgctgaattgaga
ggccctcgtcgtgaattctgtgctagggctctgctcgaacccgatggagatgctcctcctttggtact
ccgtgacgacgccgatgctggtcctcccccacaaattcgctgggctagtgctgctggacgtgctggta
ctgtattggctgctgctggcggtggcgttgaagttgttggtactgccgctggactcgctacacctccc
cgccgtgaacctgtagacatggatgctgaactcgaggatgatgacgacggattgttcggagagtaa
SEQ ID NO：128＝RS1.7
atgagtgccgaacagcgtaaaaagaaaaaaaccaccaccacgacccaaggacgtggagctgaagttgc
tatggcggatgaggatggaggccgcttgagagctgctgctgagactactggaggacctggatcaccgg
accctgccgatggacccccccctacaccaaaccccgatcgtagaccggctgctagacctggattcgga
tggcatggaggacccgaggaaaacgaggacgaggcggacgacgccgctgccgacgccgacgccgatga
ggctgcccctgcttctggagaggcggtagacgaacctgctgccgatggagttgttagccctaggcaat
tggctttgttggcgagcatggtagacgaggctgtgagaacaatcccttcccctccccctgaacgtgat
ggagcacaagaggaggcggctaggagtccctcaccaccccgtacaccttctatgagagcggattacgg
cgaggaaaacgacgacgacgacgatgatgatgacgacgatgatcgtgatgccggacgctgggttaggg
gacctgaaaccacttctgctgtccgtggagcataccccgatcctatggcgagtttgagccctagacca
cctgccccgaggagacaccaccaccaccaccatcataggcgtagacgtgctcctagacgtcgttctgc
cgctagtgactcttccaaatctggctcttcttcatctgcctcttccgcttcatcttcggcctcatcgt
cctcttcggcatccgcttcgagtagtgatgatgatgatgacgacgacgctgctagagcccccgcttct
gctgccgaccacgctgctggcggaactttgggagccgacgacgaggaggcgggagttcctgctcgtgc
cccgggagctgctccgaggccttctccaccccgtgctgaacctgctccggctagaacaccggccgcta
ctgctggtagactggagcgtagacgtgcccgtgctgctgtggctggtagagatgctactggccgcttc
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ccgtgatggttacgtgtctggtgaaccttggcctggcgctggtccacctccgcccggacgtgtactct
acggtggattgggcgcccgtacccccgatgacggtggcgacgccaaccgccacgatggtgatgatgct
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tgttcctgccggttacggtgccgctggtgtgttggctgctttgggacgcttgagtgctgccccggcta
gtgcccccgctggtgccgatgacgatgacgatgacgatggtgctggcggaggcggtggcggtagacgt
gctgaggctggacgtgttgctgttgaatgcctggctgcctgtagaggaatcttggaggctctggccga
gggattcgacggagacttggcggctgtaccgggactggcgggagcgaggcctgccgctccacctcgcc
ccggtcctgctggtgctgccgctcctcctcatgccgacgctcctagactccgtgcttggctccgtgaa
ctccgtttcgttcgtgacgctttggttctgatgagactgagaggcgacttgagagtggctggaggatc
cgaggctgctgttgctgctgtccgtgctgtttctttggttgctggtgctttgggccctgctttgccga
gatctccccgtttgttgtcgagtgccgccgctgctgccgccgatttgttgttccaaaaccaatccctc
cgccctctgctcgccgacactgttgccgctgccgattctctggctgctccggcttctgccccacgtga
agctcgtaaacgtaaatcacccgctccggctcgtgctccccctggtggcgcccctagaccccctaaaa
aatcccgtgccgatgcccctagacctgctgctgctccccccgctggtgctgctccccccgctccccct
actccccccccacgcccacctcgtcccgctgccctcacacgccgtcctgctgagggacccgatccaca
aggcggctggcgtagacaacctcctggcccatcccatacaccggcaccatctgccgctgctttggagg
cttactgtgctcctcgtgctgtggctgaactcaccgatcatccgctgttccctgctccctggcgtccc
gccctcatgttcgatcctagagctttggcttccttggccgctcgttgtgctgcccctccccctggcgg
tgctccggctgctttcggtcctctccgtgcctctggtccactccgccgtgccgctgcctggatgagac
aagttcccgaccctgaggatgttagagttgtgatcttgtactcgcccttgcctggcgaggatttggcc
gctggtagagctggcggtggcccccctcctgaatggtctgctgaacgtggtggtttgtcttgcttgtt
ggccgccctgggaaaccgtctgtgtggtcctgctactgctgcttgggctggaaactggactggcgctc
ccgatgtttctgctctcggtgctcaaggagttttgctgctctctactcgtgacttggcattcgctgga
gctgttgaattcctgggactcttggctggcgcttgtgataggagactcatcgtcgtaaacgctgtgag
agctgccgattggcctgccgatggtcctgttgtgtctcgtcaacacgcttacttggcttgtgaagtgt
tgcccgctgtccaatgtgctgttcgctggcctgctgctcgtgatctgaggcgtactgttctggctagt
ggtcgtgttttcggacctggtgttttcgctcgtgtcgaagctgctcacgctagactgtaccccgatgc
cccacccctccgtttgtgtcgtggagcaaacgttcgctaccgtgtccgtactcgtttcggacccgata
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gcttctggcgctggtgacgctatggctcctggcgctccggacttctgtgaggatgaggctcactcaca
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gtactgccgctggactcgctacacctccccgccgtgaacctgtagacatggatgctgaactcgaggat
gatgacgacggattgttcggagag
SEQ ID NO：129＝RS1.8
atgagtgccgaacagcgtaaaaagaaaaaaaccaccaccacgacccaaggacgtggagctgaagttgc
tatggcggatgaggatggaggccgcttgagagctgctgctgagactactggaggacctggatcaccgg
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ttgttggtactgccgctggactcgctacacctccccgccgtgaacctgtagacatggatgctgaactc
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SEQ ID NO：130＝His标签
HHHHHH
SEQ ID NO：131＝标签
MSYYHHHHHH
SEQ ID NO：132＝分泌信号
MKFLVNVALVFMVVYISYIYA
SEQ ID NO：133＝UL49.5
ATGTCGTACTACCATCACCATCACCATCACATGACGGGGAAACCCGCAAGACTGGGCCGCTGGGTGGT
GCTGTTGTTCGTCGCGCTCGTCGCGGGCGTGCCCGGGGAGCCGCCGAACGCGGCAGGCGCACGCGGCG
TTATCGGGGACGCGCAATGCCGGGGCGACAGCGCCGGTGTGGTGTCCGTCCCGGGGGTCCTGGTGCCC
TTTTATCTAGGCATGACCTCGATGGGCGTATGTATGATCGCGCACGTGTATCAGATATGCCAGCGGGC
ACTGGCCGCCGGGTCAGCCTGA
SEQ ID NO：134＝UL10
ATGGGACGCCGGGCCCCCAGGGGATCCCCCGAGGCCGCGCCGGGCGCCGACGTCGCGCCCGGGGCGCG
GGCGGCGTGGTGGGTCTGGTGTGTGCAGGTGGCGACGTTCATCGTCTCGGCCATCTGCGTCGTGGGGC
TCCTGGTGCTGGCCTCTGTGTTCCGGGACAGGTTTCCCTGCCTTTACGCCCCCGCGACCTCTTATGCG
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GCTGGCCACGTACGCAATTACGTCTACGCTGTTGCTGGCGGCGGCCGTGTACGCCGCGGTGGGCGCGG
TGACCTCGCGCTACGAGCGCGCGCTGGATGCGGCCCGTCGCCTGGCGGCGGCCCGTATGGCGATGCCA
CACGCCACGCTAATCGCCGGAAACGTCTGCGCGTGGCTGTTGCAGATCACAGTCCTGCTGCTGGCCCA
CCGCATCAGCCAGCTGGCCCACCTTATCTACGTCCTGCACTTTGCGTGCCTCGTGTATCTCGCGGCCC
ATTTTTGCACCAGGGGGGTCCTGAGCGGGACGTACCTGCGTCAGGTTCACGGCCTGATTGACCCGGCG
CCGACGCACCATCGTATCGTCGGTCCGGTGCGGGCAGTAATGACAAACGCCTTATTACTGGGCACCCT
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GGTCCGCGGGGGAGCCGGTGTACAGCACCGTTCGGCGATGGTAG

Claims (42)

1.一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和由SEQ ID NOS：2、3、4和5组成的至少一个多肽或其免疫原性片段，并且可选地进一步包括SEQID NO：1或其免疫原性片段。
2.权利要求1所述的疫苗制剂，包括由SEQ ID NO：1组成的第一多肽和由SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4组成的第二多肽。
3.权利要求1所述的疫苗制剂，包括由SEQ ID NO：2组成的第一多肽和由SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4组成的第二多肽。
4.权利要求1所述的疫苗制剂，包括由SEQ ID NO：3组成的第一多肽和SEQ ID NO：4组成的第二多肽。
5.权利要求1所述的疫苗制剂，包括由SEQ ID NO：1组成的第一多肽、由SEQ ID NO：3组成的第二多肽和由SEQ ID NO：4组成的第三多肽。
6.权利要求1所述的疫苗制剂，包括由SEQ ID NO：2组成的第一多肽、由SEQ ID NO：3组成的第二多肽和由SEQ ID NO：4组成的第三多肽。
7.一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂、含有皂树皂苷的一个或多个纯化成分的佐剂，和至少一个多肽，其具有SEQ ID NOS：2、3、4和5中的任意一个或其免疫原性片段，并且可选地进一步包括SEQ ID NO：1或其免疫原性片段。
8.一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和由SEQ ID NO：2或其免疫原性片段组成的多肽。
9.权利要求8所述的疫苗制剂，其中所述片段是SEQ ID NO：2的截短的片段，其中从其N-端、C-端或两端移除了1-20个氨基酸残基。
10.权利要求9所述的疫苗制剂，其中所述片段是SEQ ID NO：2的截短的片段，其中从其N-端、C-端或两端移除了1-10个氨基酸残基。
11.一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和包括SEQ ID NO：5的多肽，其中所述多肽缺失跨越341-363位氨基酸残基的跨膜结构域中的全部或至少8个氨基酸残基。
12.一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和包括SEQ ID NO：4的多肽。
13.一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和包括SEQ ID NO：5的多肽。
14.权利要求13所述的疫苗制剂，其中所述多肽是未糖基化的。
15.一种疫苗制剂，包括药学上可接受的载剂和包括SEQ ID NO：3的多肽。
16.权利要求1、8、11、13或15任一项所述的疫苗制剂，所述至少一个多肽缀合在免疫原性载剂上。
17.权利要求1、8、11、13或15任一项所述的疫苗制剂，进一步包括佐剂。
18.权利要求17所述的疫苗制剂，其中所述佐剂是皂树皂苷的一个或多个纯化成分。
19.权利要求18所述的疫苗制剂，其中所述佐剂包括皂苷成分A和皂苷成分C。
20.权利要求19所述的疫苗制剂，其中所述佐剂包括胆固醇、磷脂酰胆碱、皂苷成分A和皂苷成分C。
21.权利要求20所述的疫苗制剂，其中所述佐剂是颗粒形式。
22.权利要求21所述的疫苗制剂，其中所述包含皂苷成分A的颗粒基本上不含皂苷成分C，且包含皂苷成分C的颗粒基本上不含皂苷成分A。
23.权利要求1、8、11、13或15任一项所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂包括5-200μg的所述至少一种多肽，和5-200μg的所述佐剂。
24.权利要求1、7、8、11、13或15任一项所述的疫苗制剂，其中所述多肽是融合蛋白，其进一步包含标签。
25.权利要求1-24任一项所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂抑制HSV-2的症状。
26.权利要求25所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂减少疱疹性病变的数量。
27.权利要求25的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂减少对象经受疱疹性病变的天数。
28.权利要求1-24任一项所述的疫苗制剂，所述疫苗制剂抑制HSV-2感染未感染对象。
29.权利要求28所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂增加针对一个或多个HSV-2抗原的IgG滴度。
30.权利要求28所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂增强针对一个或多个HSV-2抗原的T细胞应答。
31.权利要求28所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂减少在HSV-2感染初期时的疱疹性病变数目。
32.权利要求1-24任一项所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂在3剂或更少的剂量下抑制HSV-2症状或抑制HSV-2的感染。
33.一种治疗患有HSV-2感染或者HSV-2易感对象的方法，包括给药有效量的权利要求1-24所述的疫苗制剂。
34.权利要求33所述的方法，其中所述方法抑制HSV-2的症状。
35.权利要求34所述的方法，其中所述方法减少疱疹性病变的数量。
36.权利要求35所述的方法，其中所述方法减少对象经受疱疹性病变的天数。
37.权利要求33所述的方法，其中所述方法抑制HSV-2感染未感染对象。
38.权利要求37所述的方法，其中所述方法增加针对一个或多个HSV-2抗原的IgG滴度。
39.权利要求37所述的方法，其中所述方法增强针对一个或多个HSV-2抗原的T细胞应答。
40.权利要求37所述的方法，其中所述方法减少在HSV-2感染初期时的疱疹性病变数目。
41.权利要求33所述的方法，其中所述方法在3次剂量的方案之内治疗对象。
42.权利要求33所述的方法，其中所述对象是人。
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