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CN102406048B - 利用海参漂烫液制取海参糖蛋白的方法 - Google Patents

利用海参漂烫液制取海参糖蛋白的方法 Download PDF

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王志伟
刘昌衡
张绵松
孟秀梅
唐聚德
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Biology Institute of Shandong Academy of Sciences
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Shandong Homey Aquatic Development Co Ltd
Biology Institute of Shandong Academy of Sciences
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Abstract

本发明涉及一种利用海参漂烫液制取海参糖蛋白的方法，是以海参漂烫液为原料，经减压浓缩，醇沉，沉淀干燥后制成粉末，粉末醇洗脱盐，复溶于纯净水后酶解，离心，上清液经管滤，超滤，干燥，得海参糖蛋白干品。本发明的制取方法设备投入低，操作简单，生产周期短，得率高，产品成本低，所获得的海参糖蛋白生物活性好。

Description

利用海参漂烫液制取海参糖蛋白的方法
技术领域
本发明涉及一种海参加工液的处理，尤其是一种利用海参漂烫液制取海参糖蛋白的方法。
背景技术
经研究验证，海参（主要是刺参）体内含50多种对人体生理活动有益的营养成分，其中蛋白质含量较高，其蛋白质含有18种氨基酸，富含皂苷、粘多糖、神经节苷脂、甾醇、胶原蛋白等多种活性物质；微量元素种类丰富，包括钙、磷、铁、镁、锌、硒、矾、锰等；以及维生素B1、B2以及尼克酸等多种维生素。其能够延续人体衰老，补肾益气，强精健髓，消除疲劳的能力，更具有抗凝血、抗肿瘤、抗菌、抗病毒及提高免疫力等作用。由于海参所具有众多生理、药理活性，其作为滋补品日渐受到消费者的青睐。因此，加工海参的企业也越来越多。鲜海参在捕捞后，由于自身存在自溶酶等蛋白水解酶类，很容易化皮，自溶。为了便于保存，鲜海参通常要沸水浴漂烫处理，以灭掉自身的酶类，才利于后续的贮存加工。然而在沸水漂烫的过程中产生大量的漂烫液（有文献也称海参加工废液、海参煮液等），漂烫液中含有多种活性物质如海参皂苷、海参糖蛋白、海参蛋白等。目前，利用海参漂烫液提取活性物质的文献已有公开报道。例如，公开号为CN1313479的发明专利公开的一种“利用海参加工废液制备海参皂甙的工艺方法”、公开号为CN1985852的发明专利公开的一种“利用海参煮汁提取海参多糖等多种活性成分的方法”、公开号为CN10134332的发明专利申请公开的一种“利用海参加工废液提取海参多糖的方法”、公开号为CN101532044的发明专利申请公开的“一种海参煮液提取海参胶原蛋白小肽冻干粉的制备方法”、公开号为CN101585873的发明专利申请公开的一种“从海参加工废弃液中回收蛋白质及粗多糖的方法”、公开号为CN102060905的发明专利申请公开的一种“利用鲜海参加工废液制备海参皂苷Holotoxin A1对照品的工艺方法”。
糖蛋白是分支的寡糖链与多肽链共价相连所构成的复合糖，主链较短，在大多数情况下，糖的含量小于蛋质质。同时，糖蛋白还是一种结合蛋白质，糖蛋白是由短的寡糖链与蛋白质共价相连构成的分子。其具有提高身体免疫力、辅助抗瘤等生物活性。目前，还未见到过利用海参漂烫液提取海参糖蛋白的报道。
发明内容
为了克服现有技术中的不足，本发明提供一种利用海参漂烫液制取海参糖蛋白的方法。该制取方法操作简单、生产周期短、制取的产品利用价值高。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种利用海参漂烫液制取海参糖蛋白的方法，其是以海参漂烫液为原料，经减压浓缩后进行醇沉；离心，收集沉淀；沉淀干燥后制成粉末；将该粉末采用浓度65-85%的乙醇溶液进行脱盐处理；离心或者压滤收集沉淀再重复脱盐处理2-3次；脱盐后的沉淀进行干燥处理，得固定粉末；将固定粉末复溶于纯净水中，再采用蛋白水解酶水解，得水解液；水解液灭酶，离心，收集上清液；将上清液通过管膜过滤，收集滤过液；将滤过液采用截留分子量为3000Da的滤膜超滤，收集截留液；将截留液进行干燥处理，得海参糖蛋白干品。
所述水解复溶于纯净水中的固定粉末所采用的蛋白水解酶或为复合蛋白酶，其用量为固体粉末重量的3-6‰、或为风味酶，其用量为固体粉末重量的3-6‰、或为木瓜蛋白酶，其用量为固体粉末重量的3-8‰、或为碱性蛋白酶，其用量为固体粉末重量的3-6‰、或为上述蛋白水解酶中的两种以上。
本发明是以鲜海参加工过程中所产生的漂烫液为原料，经减压浓缩，醇沉，沉淀干燥后制成粉末，醇洗脱盐，复溶于水后酶解，离心，上清液经管滤，超滤，干燥，得海参糖蛋白干品。本发明利用了海参漂烫液为原料，克服了利用海参原材料提取海参糖蛋白所带来的成本高、得率低等缺点。另外，本发明将海参漂烫液浓缩醇沉、沉淀干燥后利用含水的乙醇溶液进行脱盐处理，克服了海参漂烫液盐度高、粘稠度高易堵塞超滤设备的难题。按照本发明所提供的技术方案提取的海参糖蛋白，多糖含量在10-20%之间，蛋白含量在50-70%之间。经动物实验证实，其具有良好的提高免疫力，升高白细胞数量，辅助抗肿瘤等生物活性。本发明的制取方法，其设备投入低，操作简单，生产周期短，对环境无污染，所获得的海参糖蛋白具有极高的利用价值。
具体实施方式
一种利用海参漂烫液制取海参糖蛋白的方法，其具体工艺步骤如下：
（1）、以海参漂烫液为原料，将其采用减压浓缩设备浓缩至固形物含量在20%-45%之间；
（2）、将所得浓缩液中加入乙醇进行沉淀，使其终浓度为55%-85%之间；
（3）、将乙醇沉淀后的溶液进行离心处理，收集沉淀；
（4）、将沉淀进行干燥后采用粉碎设备制成粉末； 
（5）、将该粉末采用浓度为65-85%的乙醇溶液进行脱盐处理，采用离心或者压滤的方式收集沉淀后按照上述方案再重复脱盐处理2-3次；
（6）、收集脱盐处理的沉淀进行干燥处理，得固体粉末；
（7）、将固体粉末复溶于纯净水中，其纯净水的用量为固体粉末重量的30-45倍，再采用蛋白水解酶进行酶解，控制酶解温度40-55℃，时间1-5h，得酶解液；将酶解液加热至90-100℃，保持10-30min，进行灭酶处理；灭酶后酶解液冷却至4℃，离心去除沉淀，收集上清液；其中，所述的蛋白水解酶
或为复合蛋白酶，其用量为固体粉末重量的3-6‰；
或为风味酶，其用量为固体粉末重量的3-6‰；
或为木瓜蛋白酶，其用量为固体粉末重量的3-8‰；
或为碱性蛋白酶，其用量为固体粉末重量的3-6‰；
或为上述蛋白水解酶中的两种以上；
（8）、将上清液通过管膜过滤，得滤过液；将滤过液通过截留分子量为3000Da的滤膜进行超滤，收集截留液；
（9）、将截留液进行干燥处理，得海参糖蛋白干品。
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
一种利用海参漂烫液制取海参糖蛋白的方法，其具体工艺步骤如下：
（1）、称取海参漂烫液2000L为原料，采用减压浓缩设备浓缩至体积150L，固形物含量为40%左右；
（2）、将所得浓缩液中加入浓度为95%的乙醇进行沉淀，使其终浓度为60%之间；
（3）、将乙醇沉淀后的溶液利用三足式离心机离心，控制转速2000rpm，收集沉淀；
（4）、将收集的沉淀进行干燥后采用粉碎机制成粉末； 
（5）、将该粉末加入到浓度为70%的乙醇溶液中，搅拌脱盐处理，脱盐后采用压滤收集沉淀，并将该沉淀按照上述方案再重复脱盐处理3次；
（6）、收集脱盐处理的沉淀进行干燥处理，得固体粉末5kg；
（7）、将该固体粉末加入到200L纯净水中，加热至100℃保持30min，充分溶胀，冷却至55℃，加入复合蛋白酶20g水解1h，然后加入风味酶25g水解2.5h，得酶解液；将酶解液加热至100℃，保持10min，进行灭酶处理；灭酶后酶解液冷却至4℃，再采用三足式离心机离心去除沉淀，其转速控制为2000rpm，收集上清液；
（8）、将上清液通过截留分子量10Kda的管膜过滤，得滤过液；将滤过液通过截留分子量为3000Da的滤膜进行超滤，收集截留液；
（9）、将截留液喷雾干燥，得海参糖蛋白干品。
实施例2
一种利用海参漂烫液制取海参糖蛋白的方法，其具体工艺步骤如下：
（1）、称取海参漂烫液6000L为原料，采用减压浓缩设备浓缩至体积400L，固形物含量为37%左右；
（2）、将所得浓缩液中加入浓度为95%的乙醇进行沉淀，使其终浓度为65%之间；
（3）、将乙醇沉淀后的溶液利用三足式离心机离心，控制转速2000rpm，收集沉淀；
（4）、将收集的沉淀进行干燥后采用粉碎机制成粉末；
（5）、将该粉末加入到浓度为65%的乙醇溶液中，搅拌脱盐处理，脱盐后采用压滤收集沉淀，并将该沉淀按照上述方案再重复脱盐处理2次；
（6）、收集脱盐处理的沉淀进行干燥处理，得固体粉末20kg；
（7）、将该固体粉末加入到700L纯净水中，加热至100℃保持30min，充分溶胀，冷却至45℃，加入碱性蛋白酶160g，水解2h，然后加入木瓜蛋白酶60g，水解3h，得酶解液；将酶解液加热至90℃，保持30min灭酶，进行灭酶处理；灭酶后酶解液冷却至4℃，再采用三足式离心机离心去除沉淀，其转速控制为2500rpm，收集上清液；
（8）、将上清液通过截留分子量10Kda的管膜过滤，得滤过液；将滤过液通过截留分子量为3000Da的滤膜进行超滤，收集截留液；
（9）、将截留液冷冻干燥，得海参糖蛋白干品。
实施例3
一种利用海参漂烫液制取海参糖蛋白的方法，其具体工艺步骤如下：
（1）、称取海参漂烫液2000L为原料，采用减压浓缩设备浓缩至体积200L，固形物含量为20%左右；
（2）、将所得浓缩液中加入浓度为95%的乙醇进行沉淀，使其终浓度为85%之间；
（3）、将乙醇沉淀后的溶液利用三足式离心机离心，控制转速2000rpm，收集沉淀；
（4）、将收集的沉淀进行干燥后采用粉碎机制成粉末；
（5）、将该粉末加入到浓度为85%的乙醇溶液中，搅拌脱盐处理，脱盐后采用压滤收集沉淀，并将该沉淀按照上述方案再重复脱盐处理2次；
（6）、收集脱盐处理的沉淀进行干燥处理，得固体粉末3kg；
（7）、将该固体粉末加入到90L纯净水中，加热至100℃保持30min，充分溶胀，冷却至40℃，加入碱性蛋白酶18g，水解2h，得酶解液；将酶解液加热至95℃，保持20min，进行灭酶处理；灭酶后酶解液冷却至4℃，再采用管式离心机离心去除沉淀，其转速控制为2500rpm，收集上清液；
（8）、将上清液通过截留分子量10Kda的管膜过滤，得滤过液；将滤过液通过截留分子量为3000Da的滤膜进行超滤，收集截留液；
（9）、将截留液冷冻干燥，得海参糖蛋白干品。

Claims (1)

1.一种利用海参漂烫液制取海参糖蛋白的方法，其特征在于：其具体工艺步骤如下：
（1）、以海参漂烫液为原料，将其采用减压浓缩设备浓缩至固形物含量为20%；
（2）、将所得浓缩液中加入浓度为95%的乙醇进行沉淀，使其终浓度为85%；
（3）、将乙醇沉淀后的溶液利用三足式离心机离心，控制转速2000rpm，收集沉淀；
（4）、将收集的沉淀进行干燥后采用粉碎机制成粉末； 
（5）、将粉末加入到浓度为85%的乙醇溶液中，搅拌脱盐处理，脱盐后采用压滤收集沉淀，并将该沉淀按照上述方案再重复脱盐处理2次；
（6）、收集脱盐处理的沉淀进行干燥处理，得固体粉末；
（7）、将得到的固体粉末复溶于纯净水中，其纯净水的用量为固体粉末重量的30倍，加热至100℃保持30min，充分溶胀，冷却至40℃，加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的用量为固体粉末重量的6‰，水解2h，得酶解液；将酶解液加热至95℃，保持20min，进行灭酶处理；灭酶后酶解液冷却至4℃，再采用管式离心机离心去除沉淀，其转速控制为2500rpm，收集上清液；
（8）、将上清液通过截留分子量10Kda的管膜过滤，得滤过液；将滤过液通过截留分子量为3000Da的滤膜进行超滤，收集截留液；
（9）、将截留液冷冻干燥，得海参糖蛋白干品。
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