CN102391327A - 一种阿克替苷的分离制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及天然药物的分离，具体地说是一种阿克替苷的分离制备方法，将阿拉伯婆婆纳地上部分粉碎后，沸水浸提3次，每次1-2h，合并浸提液，通过大孔树脂柱层析，乙醇水洗脱，收集液浓缩回收乙醇，浓缩液进过高速离心机过滤，滤液通过膜分离机分离，得到组分再经高效工业色谱柱分离制备，以水—醇体系梯度洗脱，合并富含阿克替苷的洗脱液，浓缩冷冻干燥即得阿克替苷。本发明产品纯度高，工艺稳定，特别适用于从阿拉伯婆婆纳中分离制备高纯度的阿克替苷化合物。
Description
技术领域
本发明涉及天然药物的分离，具体地说是一种通过膜分离和制备型高效液相色谱技术从阿拉伯婆婆纳地上部分分离阿克替苷的制备方法。
背景技术
阿拉伯婆婆纳(Veronica persica Poir.)为玄参科草本植物，生于田间、路旁，是华东地区早春常见杂草，也为常见入侵植物，资源丰富。植物的全草可供药用，可治疗风湿痹痛，肾虚腰痛，外疟等症。阿拉伯婆婆纳地上部分含有阿拉伯婆婆纳苷、阿克替苷、卫矛醇等活性成分。
阿克替苷为苯丙素类成分，可溶于醇类有机试剂，溶于水，极性大。现代药理研究表明阿克替苷具有多种生活性：抗氧化、抗病毒、保肝、抗肿瘤转移、抗炎、降血脂、抗菌、神经保护、降血压和心血管保护等。孙卫东等通过研究发现阿克替苷能促进细胞凋亡，对超微结构有明显的改善作用，能够抑制前列增生。
目前尚未见阿克替苷工业分离制备方法的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种环保无污染、产品纯度高，可以大规模生产的阿克替苷的分离制备方法。
为了达到上述目的，本发明采用技术方案为：
一种阿克替苷的分离制备方法，其特征在于：
（1）提取：称取阿拉伯婆婆纳干燥地上部分，加入8-12倍沸水浸提3次，每次1-2h，合并浸提液；
（2）大孔树脂柱层析：将浸提液上样于非极性大孔树脂柱，分别用蒸馏水和45-65%乙醇洗脱，收集洗脱液；
（3）膜分离：将洗脱液浓缩除去乙醇，经过高速离心机离心得到清液，通过孔径0.10微米的微滤氧化锑陶瓷膜过滤，滤液再经过截留分子量为1000的中空纤维膜分离，得到透过液，浓缩干燥即得到膜分离组分；
（4）制备型高效液相色谱分离：以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以甲醇—水为流动相，梯度洗脱，紫外在线监测，收集目标成分，浓缩冷冻干燥即得阿克替苷。
步骤（4）中所述甲醇—水体积比为10-55%。
步骤（4）中所述紫外在线监测波长为227nm。
本发明具有以下优点：
（1）所得产品纯度高。本发明采用了先进的制备型高效液相色谱分离技术，具有高分离能力，可以保证产品纯度达到98%以上。
（2）有机残留少。本发明摒弃了传统的溶剂萃取、硅胶柱层析等工艺，采用了水提和膜分离等无需使用有机溶剂的方法。
（3）环保无污染。本发明制备过程中使用的有机溶剂均可回收循环利用，不产生影响环境的废水。
（4）能够实现大规模生产。
具体实施方式
实施例1
阿拉伯婆婆纳干燥地上部分粉碎，称取0.5kg，加入10倍沸水浸提3次，每次1.5h，过滤，合并浸提液，浸提液上样于D101型大孔树脂柱，分别用蒸馏水和65%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，浓缩除去乙醇，经过高速离心机离心得到清液，通过孔径0.10微米的微滤氧化锑陶瓷膜过滤，滤液再经过截留分子量为1000的中空纤维膜分离，得到透过液，浓缩干燥即得到膜分离组分；
以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以10-55%甲醇—水为流动相，梯度洗脱，将膜分离组分用10ml无水甲醇溶解，进样，紫外在线监测，波长为227nm，收集目标成分，浓缩冷冻干燥即得阿克替苷。
实施例2
阿拉伯婆婆纳干燥地上部分粉碎，称取1kg，加入12倍沸水浸提3次，每次2h，过滤，合并浸提液，浸提液上样于D101型大孔树脂柱，分别用蒸馏水和45%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，浓缩除去乙醇，经过高速离心机离心得到清液，通过孔径0.10微米的微滤氧化锑陶瓷膜过滤，滤液再经过截留分子量为1000的中空纤维膜分离，得到透过液，浓缩干燥即得到膜分离组分；
以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以10-55%甲醇—水为流动相，梯度洗脱，将膜分离组分用10ml无水甲醇溶解，进样，紫外在线监测，波长为227nm，收集目标成分，浓缩冷冻干燥即得阿克替苷。
实施例3
阿拉伯婆婆纳干燥地上部分粉碎，称取2kg，加入12倍沸水浸提3次，每次1h，过滤，合并浸提液，浸提液上样于D101型大孔树脂柱，分别用蒸馏水和50%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，浓缩除去乙醇，经过高速离心机离心得到清液，通过孔径0.10微米的微滤氧化锑陶瓷膜过滤，滤液再经过截留分子量为1000的中空纤维膜分离，得到透过液，浓缩干燥即得到膜分离组分；
以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以10-55%甲醇—水为流动相，梯度洗脱，将膜分离组分用10ml无水甲醇溶解，进样，紫外在线监测，波长为227nm，收集目标成分，浓缩冷冻干燥即得阿克替苷。
Claims (3)
1.一种阿克替苷的分离制备方法，其特征在于：
（1）提取：称取阿拉伯婆婆纳干燥地上部分，加入8-12倍沸水浸提3次，每次1-2h，合并浸提液；
（2）大孔树脂柱层析：将浸提液上样于非极性大孔树脂柱，分别用蒸馏水和45-65%乙醇洗脱，收集洗脱液；
（3）膜分离：将洗脱液浓缩除去乙醇，经过高速离心机离心得到清液，通过孔径0.10微米的微滤氧化锑陶瓷膜过滤，滤液再经过截留分子量为1000的中空纤维膜分离，得到透过液，浓缩干燥即得到膜分离组分；
（4）制备型高效液相色谱分离：以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以甲醇—水为流动相，梯度洗脱，紫外在线监测，收集目标成分，浓缩冷冻干燥即得阿克替苷。
2.根据权利要求1所述阿克替苷的分离制备方法，其特征在于步骤（4）中所述甲醇—水体积比为10-55%。
3.根据权利要求1所述阿克替苷的分离制备方法，其特征在于步骤（4）中所述紫外在线监测波长为227nm。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120328 |