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CN102369274A - 培养乳酸细菌的方法及生产发酵乳的方法 - Google Patents

培养乳酸细菌的方法及生产发酵乳的方法 Download PDF

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CN102369274A CN2010800147237A CN201080014723A CN102369274A CN 102369274 A CN102369274 A CN 102369274A CN 2010800147237 A CN2010800147237 A CN 2010800147237A CN 201080014723 A CN201080014723 A CN 201080014723A CN 102369274 A CN102369274 A CN 102369274A
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Abstract

首先制备添加有蛋白酶、酵母提取物等的乳清降解培养基。然后，将聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯或者丙二醇单油酸酯添加到乳清降解培养基中。向乳清降解培养基接种产生细菌素的乳酸细菌，将乳清降解培养基的pH值保持在4-5的同时培养乳酸细菌。离心培养之后的乳清降解培养基(培养液)，以从中分离含有浓缩的乳酸细菌的浓缩菌液。浓缩菌液显示出非常低的抗菌活性(数十AU或以下)。然后，通过将所述浓缩菌液添加到酸乳混合物中并使其发酵，从而能够在发酵没有任何延迟的情况下制备酸乳，所述酸乳含有产生细菌素的乳酸细菌。

Description

培养乳酸细菌的方法及生产发酵乳的方法
技术领域
本发明涉及培养产生细菌素的乳酸细菌的方法、以及生产含有产生细菌素的乳酸细菌的发酵乳的方法。
背景技术
通过下述方法制备酸乳(yogurt)等发酵乳：向混合有生乳、脱脂奶粉、乳清蛋白(乳清)等的原料奶(酸乳混合物)中添加起子(starter)，使酸乳混合物发酵。作为起子使用的是保加利亚乳杆菌(Lactobacillusbulgaricus)及嗜热链球菌(Streptococcus thermopHilus)等乳酸细菌。
众所周知的是，一些种类的乳酸细菌产生被称为细菌素的抗菌蛋白或者肽。如下述专利文献1和专利文献2所示，通过使用产生细菌素的乳酸细菌，可以提高食品保存质量，还给食品带来优良味道。
在专利文献1的发明中，使用主要成分为乳以及乳成分的液体培养基来共培养双歧杆菌(Bifidobacterium)和乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)。乳酸乳球菌是一种产生细菌素的乳酸细菌。通过将共培养之后的培养液作为食品防腐剂添加到食品(面包、乌冬等)中，从而提高食品保存质量的同时可以给食品带来优良味道
专利文献2公开了一种风味改良剂，该风味改良剂通过使用添加有酵母提取物等的乳清培养基来培养乳酸乳球菌、并且从培养之后的乳清培养基中去除乳酸乳球菌来获得。通过使用该风味改良剂，可以消除鱼类和海鲜的腥味，还可以给食品带来优良味道。
存在另外一种乳酸细菌，当摄入体内时，该乳酸细菌具有对人体产生有益作用的益生菌功能，使用这些乳酸细菌的酸乳已经实际应用。
专利文献1：日本国专利申请公开公报“特开平8-187071号”
专利文献2：日本国专利申请公开公报“特开2004-283109号”
一些具有益生菌功能的乳酸细菌产生细菌素。因此，当含有产生细菌素的乳酸细菌的酸乳目的在于使用益生菌功能时，有时会发生酸乳混合物的发酵发生延迟的现象。
在生产含有产生细菌素的乳酸细菌的酸乳的过程中，向酸乳混合物接种乳酸细菌的培养物。由于培养物中含有由乳酸细菌产生的细菌素，因此，在生产酸乳的过程中，不但添加了用作益生菌的乳酸细菌，而且酸乳混合物中还添加有细菌素。
向酸乳混合物添加的细菌素导致起子的活动受阻，凝乳的形成等也被推迟，从而发生发酵延迟。因此，以使用益生菌的功能为目的而向酸乳混合物添加产生细菌素的乳酸细菌的培养物时，期望使培养物的抗菌活性尽可能地低。
发明内容
本发明的培养乳酸细菌的方法包括：培养液制备工序，制备含有由蛋白水解酶所降解的乳清的培养液；以及培养工序，将产生细菌素的乳酸细菌接种到所述培养液中，将接种有所述乳酸细菌的培养液的pH值保持在不低于4且低于5的同时培养所述乳酸细菌。
通过本发明的培养乳酸细菌的方法可以使产生细菌素的乳酸细菌培养物的抗菌活性尽可能地低。
本发明的生产发酵乳的方法包括：原料乳生成工序，产生酸乳混合物；培养物生成工序，培养作为产生细菌素的乳酸细菌的细菌素生产菌，从而产生所述细菌素生产菌的培养物；添加工序，向所述酸乳混合物添加所述培养物；以及发酵工序，发酵添加有所述培养物的酸乳混合物；并且，在本发明的方法中，所述培养物生成工序包括：培养液制备工序，制备含有由蛋白水解酶所降解的乳清的培养液；以及培养工序，将所述细菌素生产菌接种到所述培养液中，在将接种有所述细菌素生产菌的所述培养液的pH值保持在不低于4且低于5的同时培养所述细菌素生产菌，从而产生所述培养物。
通过本发明的生产发酵乳的方法，可以防止酸乳混合物中起子的活动被细菌素抑制。从而，可以高效地产生含有细菌素生产菌的发酵乳。
因此，本发明的目的在于提供用于获得低抗菌活性的培养物的培养乳酸细菌的方法和用于防止发酵延迟的生产发酵乳的方法。
本发明的这些和其他目的、特征、形式以及优点根据下面详述的发明内容结合附图而得以更明确。
附图简述
图1为图示在实施例1中使用的乳清降解培养基的组成的示意图；
图2为图示在实施例1中戈式乳杆菌(Lactobacillus gasseri)的培养结果的示意图；
图3为图示在实施例2中使用的乳清降解培养基的组成的示意图；
图4为图示在实施例2中戈式乳杆菌的培养结果的示意图；以及
图5为图示在实施例3中使用的酸乳混合物的组成的示意图。
具体实施方式
下面说明本发明的实施方式。本实施方式的培养乳酸细菌的方法是向培养基中添加碱性溶液以便使培养基的pH值保持在一定的范围(pH值为不低于4且低于5)内的同时培养乳酸细菌。由此，可以得到每活细菌计数的抗菌活性非常低的乳酸细菌的培养物。
在本实施方式的培养乳酸细菌的方法中，待培养的乳酸细菌是能够产生细菌素的乳酸细菌(下面，简称“细菌素生产菌”)。能够使用涉及本实施方式的乳酸细菌的培养方法来培养下述的菌种：戈式乳杆菌等属于乳杆菌(Lactobacillus)属的乳酸细菌；以及球菌等属于乳球菌(Lactococcus)属的乳酸细菌等。具体而言，可以有：戈式乳杆菌OLL2959(Lactobacillus gasseri OLL2959，NITE BP-224，专利微生物保藏中心)、球菌OLS3311(Lactococcus lactis subsp.lactis OLS3311，FERM BP-10966，专利生物保藏中心)、乳脂菌OLS3312(Lactococcuslactis subsp.cremoris OLS3312，FERM BP-10967，专利生物保藏中心)等。
对本实施方式的培养乳酸细菌的方法进行具体说明。首先，向含有乳清的乳清水溶液添加蛋白酶等蛋白水解酶，以降解乳清水溶液中的乳清蛋白。在添加蛋白水解酶之前，还可以向乳清水溶液添加浓缩乳清蛋白(WPC)、分离乳清蛋白(WPI)等乳清蛋白。
然后，向乳清水溶液添加如啤酒酵母提取物等酵母提取物，以制备用于培养细菌素生产菌的乳清降解培养基。除了乳清蛋白外，还可以向乳清降解培养基添加肉提取物、鱼肉提取物等作为氮源。另外，还可以向乳清降解培养基添加抗坏血酸钠等维生素、以及如硫酸铁、硫酸镁等无机营养物。
然后，优选地，向乳清降解培养基添加如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯、丙二醇单油酸酯等乳化剂。由此，能够可靠地抑制细菌素生产菌的培养物的抗菌活性。
向乳清降解培养基接种细菌素生产菌，并培养细菌素生产菌。优选地，培养细菌素生产菌，直到乳清降解培养基的pH值达到低于5，然后将正在培养细菌素生产菌的乳清降解培养基的pH值调整为在不低于4且低于5的范围中的同时培养细菌素生产菌。可以通过向乳清降解培养基中添加碱性溶液来调整pH值。碱性溶液则可以使用碳酸钾水溶液、碳酸氢钠水溶液等。更优选地，将乳清降解培养基的pH值调整为在不低于4.7且低于5的范围中的同时培养细菌素生产菌。与将正在培养中的乳清降解培养基的pH值调整为在低于4.7的情况相比，将正在培养中的乳清降解培养基的pH值调整为在不低于4.7且低于5的范围时，会促进细菌素生产菌的生长，从而能够高效地培养。
培养细菌素生产菌之后，从培养细菌素生产菌的乳清降解培养基(培养液)中分离浓缩有细菌素生产菌的浓缩菌液。分离浓缩菌液时可以使用离心处理或者膜分离处理。
与在培养过程中将乳清降解培养基的pH值调整为在大于等于5的范围时制备的浓缩菌液相比，这样得到的细菌素生产菌的浓缩菌液显示出非常低的抗菌活性。即，通过将乳清降解培养基的pH值保持在4-5的范围的同时培养细菌素生产菌，可以将细菌素生产菌的培养物的抗菌活性抑制至非常低的状态。
然后，根据本实施方式对生产发酵乳(酸奶)的方法进行具体说明。首先，制备作为原料乳的酸乳混合物。酸乳混合物是通过下述方法来制备的，即向生乳中混合脱脂奶粉、乳清蛋白、以及水等。另外，还可以向酸乳混合物添加砂糖、果肉、果汁等。
与以往相同地对酸乳混合物进行同质化以及杀菌之后，向酸乳混合物接种起子、以及通过所述培养乳酸细菌的方法所得到的细菌素生产菌或者其浓缩菌液。细菌素生产菌或者其浓缩菌液的接种量没有特别的限制。
而且，用作起子的乳酸细菌可以为与细菌素生产菌相同的乳酸细菌，还可以为不同的乳酸细菌。
通过使接种有细菌素生产菌或者其浓缩菌液的酸乳混合物发酵来制备酸乳。由于根据生产所述发酵乳的方法所制备的浓缩菌液等的抗菌活性非常低，因此酸乳混合物的发酵过程中不发生起子(乳酸细菌)的活动受阻的现象。从而，能够以与以往几乎相同的发酵时间来高效地生产含有细菌素生产菌的酸乳。
实施例
下面，参考附图，对本发明的培养乳酸细菌的方法的实施例进行说明。
[实施例1]
图1为图示在实施例1中使用的乳清降解培养基的组成的示意图。首先，对制备混合A、混合B的乳清降解培养基进行说明。具体而言，以混合A、混合B的乳清降解培养基的总重量为基准，通过混合8.70wt％的乳清粉末(明治乳业公司制造)、1.50wt％的浓缩乳清蛋白(WPC80，NZMP公司制造)、88.80wt％的水，以制备乳清水溶液。然后，将0.10wt％的蛋白水解酶(蛋白酶A“Amano”G，AMANO ENZYME公司制造)添加到乳清水溶液中，以降解乳清水溶液中的乳清蛋白。
之后，向乳清蛋白被降解的乳清水溶液添加0.20wt％的啤酒酵母提取物(朝日啤酒公司制造)、0.50wt％的鱼肉提取物(MARUHANICHIRO食品公司制造)、0.10wt％的抗坏血酸钠以及0.05wt％的硫酸铁(FeSO4)。
而且，向乳清水溶液添加了0.05wt％的聚山梨醇酯80(聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯，日油公司制造)作为乳化剂，从而制备了混合A的乳清降解培养基。相同地，向乳清水溶液添加了0.05wt％的SUNSOFT 81S(山梨醇单油酸酯，太阳化学公司制造)作为乳化剂，从而制备了混合B的乳清降解培养基。
然后，向混合A、混合B的乳清降解培养基分别接种了戈式乳杆菌OLL2959(Lactobacillus gasseri OLL2959，NITE BP-224，专利微生物保藏中心)，以便活细胞计数为2-4×107cfu/ml。戈式乳杆菌OLL2959是一种如下所述的细菌素生产菌，其具有通过摄入体内而降低血尿酸值的作用，并且可以用作益生菌。
培养戈式乳杆菌OLL2959直到乳清降解培养基的pH值达到4.7，中和培养戈式乳杆菌OLL2959。具体而言，向混合A的乳清降解培养基添加碳酸钾水溶液(40wt％)并搅拌，以便混合A的乳清降解培养基的pH值时常在4.7-5之间的同时，在35℃条件下对戈式乳杆菌OLL2959进行21小时的培养(中和培养)。相同地，向混合B的乳清降解培养基添加碳酸钾水溶液并搅拌，以便混合B的乳清降解培养基的pH值时常大于等于5.5的同时，中和培养戈式乳杆菌OLL2959。并且，中和培养是在吹入二氧化碳的缺氧条件下进行的。
中和培养之后，根据使用BCP培养基的倾注培养法来测量混合A、混合B的乳清降解培养基(培养液)中的戈式乳杆菌OLL2959活细菌计数。图2图示了在实施例1中的戈式乳杆菌OLL2959的培养结果。混合A的乳清降解培养基(培养液)中的活细菌计数达到1.1×1010cfu/ml，混合B的乳清降解培养基(培养液)中的活细菌计数达到了1.6×1010cfu/ml。混合A、混合B的乳清降解培养基(培养液)中的戈式乳杆菌OLL2959的活细菌计数在中和培养之后也没有显著差异。
通过对混合A、混合B的乳清降解培养基(培养液)分别进行离心处理(重力加速度：6000G)，得到了浓缩菌液。使用将在后面叙述的方法来测量从混合A的乳清降解培养基(培养液)中得到的浓缩菌液(下面称为“浓缩菌液A”)的抗菌活性和从混合B的乳清降解培养基(培养液)中得到的浓缩菌液(下面称为“浓缩菌液B”)的抗菌活性。
如图2所示，浓缩菌液A的每1ml的抗菌活性小于200AU(Arbitrary Unit)。浓缩菌液A的每1×109cfu的抗菌活性大致小于20AU。另一方面，浓缩菌液B的每1ml的抗菌活性为18000AU。浓缩菌液B的每1×109cfu的抗菌活性大致为1100AU。即，在pH值为4.7-5的条件下得到的浓缩菌液A的每活细菌计数的抗菌活性是在pH值为大于等于5.5的条件下得到的浓缩菌液B的每活细菌计数的抗菌活性的1/60左右。
另外，对混合A的乳清降解培养基进行调整以使pH大于等于5的同时，中和培养戈式乳杆菌OLL2959。结果，在pH值5大于等于的条件下进行中和培养时的活细菌计数与pH值在4.7-5的条件下进行中和培养时的活细菌计数大致相同。在pH值大于等于5的条件下进行中和培养时的每1ml的抗菌活性大于与浓缩菌液A的每1ml的抗菌活性一个数量级以上。并且，使用未添加有乳化剂的乳清降解培养基来培养戈式乳杆菌OLL2959。结果，在pH值为4.7-5的条件下中和培养戈式乳杆菌OLL2959时的每1ml的抗菌活性低于在pH值大于等于5的条件下进行中和培养时的每1ml的抗菌活性一个数量级以上。
由此，通过将乳清降解培养基的pH值维持在4.7-5中的同时，中和培养戈式乳杆菌OLL2959，能够高效地培养戈式乳杆菌OLL2959，并且能够将培养物的抗菌活性调整为在非常低的状态。
另外，通过使用混合A的乳清降解培养基在pH值为4-4.7的条件下中和培养戈式乳杆菌OLL2959，从而得到了浓缩菌液。在pH值为4-4.7的条件下进行中和培养时的活细菌计数稍微低于在pH值为4.7-5的条件下进行中和培养时的活细菌计数。通过在pH值为4-4.7的条件下进行中和培养所得到的浓缩菌液的抗菌活性与浓缩菌液A的抗菌活性大致相同。因此，即使在pH值为4-4.7的条件下进行中和培养，也能够得到抗菌活性非常低的戈式乳杆菌OLL2959的浓缩菌液。
[实施例2]
图3为图示在实施例2中使用的混合C、混合D的乳清降解培养基的组成的示意图。首先说明混合C、混合D的乳清降解培养基的制备。以与实施例1相同的顺序制备乳清蛋白被降解的乳清水溶液。然后，以图3所示的混合比向乳清水溶液添加啤酒酵母提取物、鱼肉提取物、抗坏血酸钠以及硫酸铁。
向添加有啤酒酵母提取物等的乳清水溶液中，添加0.025wt％的聚山梨醇酯80(聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯，日油公司制造)以及0.025wt％的SUN SOFT 81S(山梨醇单油酸酯，太阳化学公司制造)作为乳化剂，以制备混合C的乳清降解培养基。另外，向添加有啤酒酵母提取物等的乳清水溶液中，添加0.05wt％的SUN SOFT No.25(聚丙烯乙二醇单油酸酯，太阳化学公司制造)作为乳化剂，以制备混合D的乳清降解培养基。
然后，向混合C、混合D的乳清降解培养基中分别接种戈式乳杆菌OLL2959，以便活细菌计数达到2-4×107cfu/ml。与实施例1相同，培养戈式乳杆菌OLL2959直到乳清降解培养基的pH值达到4.7，中和培养戈式乳杆菌OLL2959。具体而言，向混合C、混合D的乳清降解培养基添加碳酸钾水溶液(40wt％)并搅拌，以便混合C、混合D的乳清降解培养基的pH值分别达到4.7-5的同时，在35℃条件下将戈式乳杆菌OLL2959进行21小时的中和培养。并且，中和培养是在吹入二氧化碳的缺氧条件进行的。
中和培养之后，使用与实施例1相同的方法来测量混合C、混合D的乳清降解培养基(培养液)中的戈式乳杆菌OLL2959的活细菌计数。图4图示了在实施例2中的戈式乳杆菌OLL295的培养结果。混合C的乳清降解培养基(培养液)中的戈式乳杆菌OLL2959的活细菌计数为1.6×1010cfu/ml。混合D的乳清降解培养基(培养液)中的戈式乳杆菌OLL2959的活细菌计数为1.7×1010cfu/ml。根据用于乳清降解培养基(培养液)的乳化剂，戈式乳杆菌OLL2959的活细菌计数没有发生差异。
通过离心处理，从混合C、混合D的乳清降解培养基(培养液)中分别分离了浓缩菌液。使用与实施例1相同的方法来测量从混合C的乳清降解培养基(培养液)得到的浓缩菌液(下面称为“浓缩菌液C”)的抗菌活性以及从混合D的乳清降解培养基(培养液)得到的浓缩菌液(下面称为“浓缩菌液D”)的抗菌活性。结果，浓缩菌液C和浓缩菌液D的每1ml的抗菌活性都小于200AU。浓缩菌液C和浓缩菌液D的每1×109cfu的抗菌活性都小于约15AU。
将混合C、混合D的乳清降解培养基(培养液)在pH值为4-4.7的范围进行中和培养所得到的浓缩菌液的抗菌活性与浓缩菌液C、浓缩菌液D的抗菌活性大致相同。将混合C、混合D的乳清降解培养基(培养液)在pH值为4-4.7的范围中进行中和培养时的活细菌计数稍微低于在pH值为4.7-5的条件下进行中和培养时的活细菌计数。
另外，使用添加0.025wt％的SUN SOFT No.25和0.025wt％的SUNSOFT 81S作为乳化剂的乳清降解培养基进行中和培养的结果与混合C的结果类似。
从实施例1和实施例2中的测试结果可以得出，通过将聚山梨醇酯80、SUN SOFT No.25用作乳化剂，能够得到抗菌活性非常低的浓缩菌液。另外，当将聚山梨醇酯80和SUN SOFT No.25用作乳化剂时，即使并用这些乳化剂和其他的乳化剂，也能得到抗菌活性非常低的浓缩菌液。
[抗菌活性的测量方法]
下面，以浓缩菌液A为例说明测量浓缩菌液的抗菌活性的方法。并且，对浓缩菌液B、浓缩菌液C、浓缩菌液D的抗菌活性也根据相同的方法进行测量。
通过向在市场上销售的MRS培养基(BECTON，DICKINSON公司制造)添加以MRS培养基为基准时的0.1％(v/v)的指示菌，从而制备测试培养基。指示菌则使用了保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckiisubsp.bulgaricus)ATCC11842(模式株)。
将冷冻保藏的浓缩菌液A热水浴5分钟，制备浓缩菌液A的1％(v/v)水溶液。以每次2倍的比例梯度稀释浓缩菌液A的水溶液，从而得到了稀释比例不同的多种稀溶液。稀释比例为8-12次。由此制备了被稀释了28-212倍的浓缩菌液A的稀溶液。将各种比例的稀溶液分别添加到测试培养基中，使用ANAEROPACK.ANAERO(三菱气体化学公司制造)来将添加有各种比例的稀释液的测试培养基在37℃条件下缺氧培养了24个小时。
进行缺氧培养之后，确认了不繁殖指示菌的最高稀释度比例(n)。然后，基于最高稀释比例(n)和浓缩菌液的水溶液的浓度(0.01∶1％)，求出浓缩菌液A的抗菌活性AU。可以基于下述的计算式求出抗菌活性。
抗菌活性AU＝最高稀释比例n/浓缩菌液的水溶液的浓度(0.01)。
下面，作为生产本发明的发酵乳的方法的实例，说明了分别添加有浓缩菌液A-C的酸乳的制备。
[实施例3]
图5为图示在实施例3中使用的四种酸乳混合物的组成的示意图。首先说明混合E-混合H的酸乳混合物的制备。以酸乳混合物的总重量为基准，混合14.10wt％的脱脂奶粉和0.93wt％的无盐黄油(都为明治乳业公司制造)以及水，从而制备混合E-混合H的酸乳混合物。水的混合比如下：在混合E中为82.97wt％、在混合F-混合H为82.87wt％。
与以往相同地对混合E-混合H的酸乳混合物进行同质化以及杀菌，将混合E-混合H的酸乳混合物大致冷却至40℃左右。冷却之后，将2.00wt％的乳酸细菌起子接种到混合E-混合H的酸乳混合物中。乳酸细菌起子则使用了从明治BULGARIA酸奶(明治乳业公司制造)中分离的乳酸细菌。
向混合F的酸乳混合物接种0.10wt％的浓缩菌液A。向混合G的酸乳混合物接种0.10wt％的浓缩菌液B。向混合H的酸乳混合物接种0.10wt％的浓缩菌液C。混合E的酸乳混合物则未接种浓缩菌液。然后，使各个酸乳混合物在40℃条件下发酵直到乳酸浓度达到1.20％，从而生产酸乳。此时，测量了酸乳混合物的乳酸浓度达到1.20％所需时间(发酵时间)。
未接种有浓缩菌液的混合E的酸乳混合物与分别接种有浓缩菌液A、浓缩菌液C的混合F、混合H的酸乳混合物的发酵时间大致为5个小时。由此可以看出，在接种有抗菌活性低的浓缩菌液A、浓缩菌液C的酸乳混合物(混合F、混合H)中未发生发酵延迟。
另一方面，接种有抗菌活性高的浓缩菌液B的酸乳混合物(混合G)的发酵时间为7个小时。即，在混合G的酸乳混合物中发生了发酵延迟。由此推测下述的结论：通过向酸乳混合物添加抗菌活性高的浓缩菌液B，混合G的酸乳混合物中的乳酸细菌起子的活动被浓缩菌液B所含有的细菌素抑制。
如此，通过将乳清降解培养基的pH值保持在不低于4.7且低于5的同时进行中和培养而得到的培养物(浓缩菌液A、浓缩菌液C)添加到酸乳混合物，能够以与现有酸奶相同程度的发酵时间来高效地制备添加有细菌素生产菌的酸乳。从而，即使将细菌素生产菌用作益生菌的情况下，也能够直接使用通常的酸乳制备工序。
参考附图所示的实施方式说明了本发明，但是本发明并不限于所记载的形式，应理解为，本发明所要保护的范围应由权利要求书记载的范围所决定。

Claims (12)

1.培养乳酸细菌的方法，包括：
培养液制备工序，制备含有由蛋白水解酶所降解的乳清的培养液；以及
培养工序，将产生细菌素的乳酸细菌接种到所述培养液中，将接种有所述乳酸细菌的培养液的pH值保持在不低于4且低于5的同时培养所述乳酸细菌。
2.根据权利要求1所述的培养乳酸细菌的方法，其中，还包括：
分离工序，从培养有所述乳酸细菌的培养液中分离含有浓缩的所述乳酸细菌的浓缩菌液。
3.根据权利要求1所述的培养乳酸细菌的方法，其中，
在所述培养工序中，将接种有所述乳酸细菌的培养液的pH值保持在不低于4.7且低于5的范围中。
4.根据权利要求1所述的培养乳酸细菌的方法，其中，所述培养液制备工序包括：
乳化剂添加工序，向所述培养液添加乳化剂。
5.根据权利要求4所述的培养乳酸细菌的方法，其中，所述乳化剂包括：
丙二醇单油酸酯或聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。
6.根据权利要求1所述的培养乳酸细菌的方法，其中，
在所述培养工序中，通过向接种有所述乳酸细菌的培养液中添加碱性溶液来调整接种有所述乳酸细菌的培养液的pH值。
7.生产发酵乳的方法，包括：
原料乳生成工序，产生酸乳混合物；
培养物生成工序，培养作为产生细菌素的乳酸细菌的细菌素生产菌，从而产生所述细菌素生产菌的培养物；
添加工序，向所述酸乳混合物添加所述培养物；以及
发酵工序，发酵添加有所述培养物的酸乳混合物；
其中，所述培养物生成工序包括：
培养液制备工序，制备含有由蛋白水解酶所降解的乳清的培养液；以及
培养工序，将所述细菌素生产菌接种到所述培养液中，在将接种有所述细菌素生产菌的培养液的pH值保持在不低于4且低于5的同时培养所述细菌素生产菌，从而产生所述培养物。
8.根据权利要求7所述的生产发酵乳的方法，其中，
所述培养物生成工序包括：分离工序，从培养有所述细菌素生产菌的培养液中分离含有浓缩的所述细菌素生产菌的浓缩菌液；
并且，在所述添加工序中，将所述浓缩菌液作为所述培养物添加到所述酸乳混合物中。
9.根据权利要求7所述的生产发酵乳的方法，其中，
在所述培养工序中，将接种有所述细菌素生产菌的培养液的pH值保持在不低于4.7且低于5的范围中。
10.根据权利要求7所述的生产发酵乳的方法，其中，
所述培养液制备工序包括：
乳化剂添加工序，向所述培养液添加乳化剂。
11.根据权利要求10所述的生产发酵乳的方法，其中，
所述乳化剂包括：丙二醇单油酸酯或聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。
12.根据权利要求7所述的生产发酵乳的方法，其中，
在所述培养工序中，通过向接种有所述细菌素生产菌的培养液中添加碱性溶液来调控接种有所述细菌素生产菌的培养液的pH值。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113502303A (zh) * 2021-07-16 2021-10-15 万华化学(四川)有限公司 一种利用浓缩菌液发酵生产乳酸的工艺

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017057319A1 (ja) * 2015-09-30 2017-04-06 株式会社明治 乳酸菌スターターの調製方法及び発酵乳の製造方法
JP2021126061A (ja) * 2020-02-12 2021-09-02 株式会社ヤクルト本社 新規乳酸菌用培地

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH1057031A (ja) * 1996-07-09 1998-03-03 Soc Prod Nestle Sa 食用微生物組成物の噴霧乾燥法
JP3554747B1 (ja) * 2003-03-24 2004-08-18 オーム乳業株式会社 飲食品の風味改良剤
WO2007101495A1 (de) * 2006-03-07 2007-09-13 Aquanova Ag Solubilisate von konservierungsmitteln sowie verfahren zu ihrer herstellung
WO2007138993A1 (ja) * 2006-05-31 2007-12-06 Meiji Dairies Corporation 免疫調節活性の高い乳酸菌の培養法
JP2008005834A (ja) * 2006-05-31 2008-01-17 Meiji Milk Prod Co Ltd 血中尿酸値低減作用を有する乳酸菌

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4115199A (en) * 1977-05-04 1978-09-19 Chr. Hansen's Laboratory, Inc. Preparation of culture concentrates for direct vat set cheese production
US4771001A (en) * 1986-03-27 1988-09-13 Neurex Corp. Production of lactic acid by continuous fermentation using an inexpensive raw material and a simplified method of lactic acid purification
US5173297A (en) 1991-07-01 1992-12-22 Quest International Flavors & Food Ingredients Company Division Of Indopco, Inc. Bacteriocin from lactococcus lactis subspecies lactis
FI92498C (fi) * 1992-06-10 1994-11-25 Valio Meijerien Uusi mikro-organismikanta, sitä sisältävät bakteerivalmisteet ja näiden käyttö hiivojen ja homeiden torjuntaan
EP0574681A1 (en) * 1992-06-15 1993-12-22 Quest International B.V. Yogurt product containing bacteriocin from pediococcus adilactici
JPH08187071A (ja) 1995-01-11 1996-07-23 Morinaga Milk Ind Co Ltd 食品の保存方法
JPH08187072A (ja) 1995-01-11 1996-07-23 Morinaga Milk Ind Co Ltd 食品保存剤及びその製造法
JP2002369672A (ja) 2001-06-14 2002-12-24 Yamaya Communications:Kk 乳酸醗酵液による食品の殺菌方法
JP2003235529A (ja) 2002-02-21 2003-08-26 Yamaya Communications:Kk 食品の保存方法
JP5084093B2 (ja) 2003-09-11 2012-11-28 忠夫 齋藤 ガセリシンａの生産方法、抗菌剤及び炎症の治療剤
JP2006238833A (ja) 2005-03-04 2006-09-14 Ajinomoto Co Inc 乳酸菌の保存方法
US7776370B2 (en) * 2005-09-01 2010-08-17 Kraft Foods Global Brands Llc Heat-stable flavoring components and cheese flavoring systems incorporating them
USRE46912E1 (en) * 2006-08-04 2018-06-26 Bioneer Corporation Lactic acid bacteria isolated from mother's milk with probiotic activity and inhibitory activity against body weight augmentation
JP5457349B2 (ja) 2008-06-30 2014-04-02 株式会社明治 発酵乳の製造方法，及び発酵乳

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH1057031A (ja) * 1996-07-09 1998-03-03 Soc Prod Nestle Sa 食用微生物組成物の噴霧乾燥法
JP3554747B1 (ja) * 2003-03-24 2004-08-18 オーム乳業株式会社 飲食品の風味改良剤
WO2007101495A1 (de) * 2006-03-07 2007-09-13 Aquanova Ag Solubilisate von konservierungsmitteln sowie verfahren zu ihrer herstellung
WO2007138993A1 (ja) * 2006-05-31 2007-12-06 Meiji Dairies Corporation 免疫調節活性の高い乳酸菌の培養法
JP2008005834A (ja) * 2006-05-31 2008-01-17 Meiji Milk Prod Co Ltd 血中尿酸値低減作用を有する乳酸菌

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
崔德凤等: "211菌生长特性的研究", 《中国预防兽医学报》 *
王秀丽等: "乳酸乳球菌培养条件的优化", 《吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113502303A (zh) * 2021-07-16 2021-10-15 万华化学(四川)有限公司 一种利用浓缩菌液发酵生产乳酸的工艺
CN113502303B (zh) * 2021-07-16 2023-09-19 万华化学(四川)有限公司 一种利用浓缩菌液发酵生产乳酸的工艺

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SG174959A1 (en) 2011-11-28

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