CN102225082A - 一种防治糖尿病及其并发症的药物和其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种口服防治糖尿病及其并发症的紫茉莉根单方中药和其制备方法，它是从植物紫茉莉根中经乙醇回流提取、减压浓缩、真空干燥获得的有效成分。经药理实验证明，它具有降血糖、降血脂、降低肝脏和骨骼肌中甘油三酯含量和增加肝脏和骨骼肌中糖原含量的作用，预防性和治疗性给药均具降糖降脂功效，且对正常小鼠的糖脂代谢无影响，可用于防治2型糖尿病及其引起的多种并发症。为防治2型糖尿病及其并发症患者提供了一种纯天然药物。

Description

一种防治糖尿病及其并发症的药物和其制备方法

技术领域

本发明涉及一种防治2型糖尿病及其并发症的非合成药物，它是以中草药为原料制备而成的。

背景技术

糖尿病已成为继肿瘤、心脑血管疾病之后的严重危害人类健康的第三大疾病。世界卫生组织及国际糖尿病联盟资料表明预计到2025年全世界糖尿病患者总人数将达到3.33亿。根据我国公布的19省市糖尿病普查结果显示随着人群平均寿命延长，经济收入的增加和生活方式的改变(如多食少动、精神紧张、吸烟饮酒等)，糖尿病患者总数将以每年至少100万的数量增加。我国近20年来糖尿病发病率增长了5倍多，是全球增长最快的国家之一，其中2型糖尿病占全部患者的90%以上。

糖尿病并发症是糖尿病患者致死的重要原因，目前对糖尿病并发症的发病机制尚未完全阐明，也缺乏有效的防治药物。糖尿病及其并发症的防治消耗了大量的医疗资源，给世界各国带来了巨大的医疗压力和沉重的经济负担，医学界对该病的防治也感到非常棘手。已有研究显示，西医药尚缺乏安全有效的手段从各方面改善糖尿病并发症，而且药物种类偏少，价格居高不下，长期使用药效下降，产生多种副作用。而中医药从辨病辨证论治的角度出发，根据糖尿病及其并发症的病证特点，从整体水平上加以综合调理，可使糖尿病及其并发症的症状减轻。因此，从天然药物中筛选和研究有效中药以防治糖尿病及其并发症，这对于延长患者的寿命，提高生活质量具有重大的社会和经济意义，已受到全世界的普遍关注。

紫茉莉根(Mirabilis jalapa L.)系紫茉莉科植物紫茉莉的干燥块根，又名入地老鼠、花粉头、水粉头、粉子头、胭脂花头等。性微寒，味甘，无毒，具有利尿通淋、清热解毒、活血化瘀之功效，在中国大部地区有栽培。紫茉莉根含黄酮类、色素、萜类、甾醇、挥发油、树脂、氨基酸、有机酸及大量淀粉，其药理作用广泛。目前对于紫茉莉根的研究较多的是其抗癌、抗菌、避孕、抗人类免疫缺陷病毒、抗糖尿病、杀虫等作用。

目前我国批准使用的口服降糖药有促胰岛素分泌剂(磺酰脲类、格列奈类)和非促胰岛素分泌剂(α-糖苷酶抑制剂、双胍类、噻唑烷二酮胰岛素增敏剂)，但都不能从根本上解决在降低高血糖方面维持长期疗效及针对病因有效缓解病情这两大最为显著的问题，因此寻找新的治疗药物一直是该领域中的研究热点。虽然已有报道单味药紫茉莉根可降低糖尿病小鼠血糖值，但其提取方法粗糙，糖尿病模型制备不经典，仅仅检测血糖值这个单一指标，且对防治2型糖尿病及其并发症的作用及其机制国内外均未见报道。为将紫茉莉根进一步应用于防治2型糖尿病及其并发症上，尚存在诸多技术问题，包括功效低廉、工艺稳定的紫茉莉根提取方法，对2型糖尿病患者常伴有的血脂升高、组织糖脂代谢紊乱等相关症状的影响，以及对正常人糖脂代谢的影响。这些技术方法和功能指标的完成将为紫茉莉根应用于防治糖尿病及其并发症和其制备方法提供坚实的理论基础。

为了进一步阐明紫茉莉根的药理作用，本发明对紫茉莉根进行提取，并对其防治糖尿病及其并发症作用进行了研究，发现紫茉莉根具有明显的降血糖、降低血清总胆固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、降低组织TG含量和增加糖原含量的作用，预防性和治疗性给药的降糖降脂功效相似，且不影响正常小鼠的糖脂代谢。

发明内容

本发明的目的在于提出紫茉莉根提取物在制备防治2型糖尿病及其并发症药物中的应用。

通过药理实验证明紫茉莉根提取物具有降血糖、降血脂、降低肝脏和骨骼肌中甘油三酯含量和增加肝脏和骨骼肌中糖原含量等新的医药用途，可特别用于制备防治2型糖尿病及其并发症药物。

其中紫茉莉根提取物的制备方法如下：

(1) 提取：将紫茉莉根干燥后粉碎，5-12倍量50%-95%乙醇回流提取1-3次，每次0.5-2 h，合并滤液，过滤；

(2) 浓缩：利用旋转蒸发仪减压浓缩；

(3) 真空干燥减压浓缩物，获得紫茉莉根提取物。

利用紫茉莉根提取物制备防治2型糖尿病及其并发症的药物，药物中包含有紫茉莉根提取物1%-99.5%，其余为制备胶囊、软胶囊、颗粒剂、片剂或丸剂的辅料

本发明的有益效果：本发明通过多项实验证明中药紫茉莉根提取物具有降血糖、降血脂、降低肝脏和骨骼肌中TG含量和增加肝脏和骨骼肌中糖原含量的功效，预防性和治疗性给药的降糖降脂功效相似，且对正常小鼠的糖脂代谢无影响。本发明为2型糖尿病及其并发症提供一种非合成降糖药，其功能明确、作用持久、无毒副作用，拓宽了紫茉莉根防治疾病的范围。

药效实验例：对正常和2型糖尿病小鼠糖脂代谢影响的实验。

实验通过对本发明的药物进行药效学研究，观察其对正常和2型糖尿病小鼠血糖、血脂、肝脏和骨骼肌中糖原和TG含量的影响。

实验材料

1.1 动物：清洁级雄性KM小鼠，体重18-22 g，由第三军医大学野战外科研究所实验动物中心提供。自由饮水摄食，清洁级动物房适应性饲养1周，温度(20 ± 2)℃，湿度(60 ± 5)%，12 h光照周期。

1.2 试剂：紫茉莉根，采自重庆市，并经中医专家和《中国常用中草药》、《中国常用中草药彩色图谱》对照鉴定为紫茉莉根；格列本脲(No. 20100224, 纯度99.56%)，购至武汉远城科技发展有限公司；链脲菌素，美国Sigma公司产品；TC、TG、肌酐糖原试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品；血糖试纸为美国强生公司产品。

实验方法

2.1 紫茉莉根醇提物 (EEM) 的制备

(1) 提取：将紫茉莉根干燥后粉碎，以5-12（如10倍）倍量50%-95%（如70%）乙醇回流提取1-3（如3次）次，每次0.5-2 h（如1h），合并滤液，过滤；

(2) 浓缩：利用旋转蒸发仪减压浓缩；

(3) 真空干燥，获得EEM。

2.2 EEM对正常小鼠糖脂代谢的影响

用于单次给药和多次给药的正常KM小鼠均随机分为5组，每组10只动物，正常给药组分别灌胃给予2、4、8 g/kg EEM和0.76 mg/kg格列本脲，正常对照组灌胃给予蒸馏水。

单次给药过程如下：0.2 ml/10g体重给药，单次给药2h后麻醉小鼠，眼球取血用于血糖、血清TC、血清TG检测，取快速肝脏和骨骼肌用液氮冻存，用于糖原和TG的检测。

连续给药过程如下：每天以0.2 ml/10 g体重给药，连续28天，每14天测1次体重。在第14天，取禁食16 h小鼠尾巴血用于血糖检测；在第28天，麻醉禁食16 h小鼠，眼球取血用于血糖、血清TC、血清TG检测，快速取肝脏和骨骼肌用液氮冻存，用于糖原和TG的检测。

2.3 EEM对已建成2型糖尿病小鼠糖脂代谢的影响

禁食16 h小鼠腹腔注射160 mg/kg链脲菌素，3天后检测空腹血糖，以空腹血糖大于11.1 mmol/L为糖尿病造模成功指标，并随机分为5组，每组10只动物。模型给药组分别灌胃2、4、8 g/kg EEM和0.76 mg/kg格列本脲，模型对照组灌胃等体积蒸馏水。单次给药和多次给药过程同“EEM对正常小鼠糖脂代谢的影响”。

2.4 预防性给予EEM对2型糖尿病小鼠糖脂代谢的影响

小鼠随机分为6组，每组10只动物。其中4组分别灌胃2、4、8 g/kg EEM和0.76 mg/kg格列本脲，剩余2组给予等体积蒸馏水，连续14天。14天后所有小鼠禁食16 h，其中给予蒸馏水的1组腹腔注射0.1 mol/L柠檬酸缓冲液，其余4组均腹腔注射160 mg/kg链脲菌素。所有动物再继续给予蒸馏水或EEM 28天，每14天称一次体重。在第17天(即注射链脲菌素3天后)和28天剪鼠尾取血用于血糖的检测。第42天麻醉禁食小鼠，眼球取血用于血糖、血清TC和TG水平的检测，取肝脏和骨骼肌用于糖原和TG含量的检测。

2.5 血清TC和TG水平的检测

用南京建成生物工程研究所的TC和TG试剂盒检测小鼠血清中TC和TG水平，严格按照说明书进行。

2.6 肝脏和骨骼肌中糖原和TG含量的检测

用南京建成生物工程研究所的糖原和TG试剂盒检测小鼠肝脏和骨骼肌中糖原和TG含量，严格按照说明书进行。

2.7 统计分析

所有数据以均数±标准差( ± s)表示，应用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)，多重比较用LSD法。结果以P<0.05为差异有统计学意义。

结果

3.1 EEM对正常和2型糖尿病小鼠糖脂代谢的影响

3.1.1 EEM对血糖水平的影响

单次给药

链脲菌素诱导的糖尿病模型对照组小鼠的空腹血糖水平明显高于给予EEM前后的正常小鼠的血糖水平(P<0.01)，但是单次给予2、4、8 g/kg EEM均不影响正常及糖尿病小鼠的空腹血糖水平，单次给予阳性对照药格列本脲可显著降低糖尿病小鼠的血糖水平，但不影响正常小鼠的血糖水平(表1)。

多次给药

连续灌胃2、4、8 g/kg EEM和阳性对照药格列本脲14天和28天对正常小鼠血糖水平均无影响。与给药前和模型对照组小鼠比较，连续14天给予4、8 g/kg EEM和格列本脲可降低糖尿病小鼠血糖水平(P<0.01)，EEM并能在随后14天里进一步降低血糖水平(P<0.01)，低剂量(2g/kg)EEM不影响糖尿病小鼠的血糖水平。相反，实验过程中糖尿病模型对照组小鼠的血糖水平持续升高(表1)。

表1 单次和多次灌胃紫茉莉根醇提物(EEM)对正常和糖尿病小鼠血糖水平的影响

数据以均数±标准差(

± s)表示，n = 10. ^* P<0.01, 与糖尿病对照组比较. ^# P<0.01, 与正常对照组比较. ^† P<0.01, 与给药前比较。

3.1.2 EEM对血清TC和TG水平的影响

单次给药

与正常对照组小鼠比较，注射链脲菌素导致血清TC和TG水平显著升高(P<0.01)。但是单次给予2、4、8 g/kg EEM和格列本脲未能降低正常及糖尿病小鼠的TC和TG水平(表2)。

多次给药

连续28天给予2、4、8 g/kg EEM和格列本脲均不影响正常小鼠血清TC和TG水平。连续28天给予2 g/kg EEM和格列本脲也不影响糖尿病小鼠血清TC和TG水平，但4、8 g/kg EEM可显著降低糖尿病小鼠血清TC和TG水平(P<0.01)(表2)。

表2. 单次和多次灌胃紫茉莉根醇提物(EEM)对正常和糖尿病小鼠血清TC和TG水平的影响

数据以均数±标准差(

± s)表示，n = 10. ^* P<0.01, 与糖尿病对照组比较. ^# P<0.01, 与正常对照组比较。

3.1.3 EEM对肝脏和骨骼肌中糖原和TG含量的影响

单次给药

单次给予2、4、8 g/kg EEM和格列本脲对正常及糖尿病小鼠肝脏和骨骼肌中TG和糖原含量均不产生影响。与正常对照组小鼠比较，糖尿病模型对照组小鼠肝脏和骨骼肌中TG含量明显增加，而糖原含量明显降低(P<0.01)(表3)。

表3. 单次灌胃紫茉莉根醇提物(EEM)对正常和糖尿病小鼠肝脏和骨骼肌中糖原和TG含量的影响

数据以均数±标准差(

± s)表示，n = 10. ^* P<0.01, 与糖尿病对照组比较. ^# P<0.01, 与正常对照组比较。

多次给药

连续28天灌胃2、4、8 g/kg EEM和格列本脲均不影响正常小鼠肝脏和骨骼肌中TG和糖原含量。与正常对照组小鼠比较，糖尿病模型对照组小鼠肝脏和骨骼肌中TG含量明显增加，而糖原含量明显降低(P<0.01)。连续28天给予2 g/kg EEM也不影响糖尿病小鼠肝脏和骨骼肌中TG和糖原含量，但4、8 g/kg EEM可显著降低糖尿病小鼠肝脏和骨骼肌中TG含量和增加糖原含量(P<0.01)；阳性对照药格列本脲可显著增加糖尿病小鼠肝脏和骨骼肌中糖原含量，但不影响TG含量(表4)。

表4. 多次灌胃紫茉莉根醇提物(EEM)对正常和糖尿病小鼠肝脏和骨骼肌中糖原和TG含量的影响

数据以均数±标准差( ± s)表示，n = 10. ^* P<0.01, 与糖尿病对照组比较. ^# P<0.01, 与正常对照组比较。

3.2 预防性给予EEM对2型糖尿病小鼠糖脂代谢的影响

3.2.1 预防性给予EEM对2型糖尿病小鼠血糖水平的影响

腹腔注射链脲菌素诱导糖尿病之前，预防性连续14天给予2、4、8 g/kg EEM和格列本脲不影响正常小鼠血糖水平。腹腔注射链脲菌素3天(即连续17天给予EEM)后，糖尿病模型对照组小鼠的血糖水平仍明显高于正常对照组小鼠。与糖尿病模型对照组小鼠比较，连续28天灌胃4、8 g/kg EEM和格列本脲可明显降低糖尿病小鼠的血糖水平(P<0.01)，且EEM在连续42天给药后可进一步降低血糖水平(P<0.01)。在第28天和第42天，2 g/kg EEM均不影响糖尿病小鼠的血糖水平。相反，在实验过程中，糖尿病模型对照组小鼠的血糖水平持续升高(表5)。

表5. 预防性灌胃紫茉莉根醇提物(EEM)对糖尿病小鼠血糖水平的影响

组别	给药前	给药14天	给药17天	给药18天	给药42天
						正常对照组	6.24 ± 0.55	6.27 ± 0.62	6.40 ± 0.42	6.25 ± 0.65	6.30 ±0.48
糖尿病对照组	6.18 ± 0.61	6.26 ± 0.62	16.14 ± 1.54 #	18.32 ± 1.62 #	19.76 ± 1.29 #
						糖尿病+2 g/kg EEM	6.25 ± 0.50	6.16 ± 0.58	15.29 ± 1.29	18.21 ± 1.34	19.75 ± 1.22
糖尿病+4 g/kg EEM	6.22 ± 0.58	6.16 ± 0.53	15.12 ± 1.58	13.12 ± 1.66 *	10.07 ± 1.05 *
						糖尿病+8 g/kg EEM	6.23 ± 0.64	6.20 ± 0.60	15.16 ± 1.28	12.81 ± 1.44 *	10.01 ± 0.84 *
糖尿病+格列本脲	6.21 ± 0.60	6.17 ± 0.58	6.87 ± 0.75 *	6.45 ± 0.68 *	6.17 ± 0.48 *

数据以均数±标准差(

± s)表示，n = 10. ^* P<0.01, 与糖尿病对照组比较. ^# P<0.01, 与正常对照组比较。

3.2.2 预防性给予EEM对2型糖尿病小鼠血清TC和TG水平的影响

与正常对照组小鼠比较，糖尿病模型对照组小鼠血清TC和TG水平明显升高(P<0.01)。预防性连续42天给予4、8 g/kg EEM可明显降低糖尿病小鼠血清TC和TG水平(P<0.01)，但2 g/kg EEM和格列本脲不影响糖尿病小鼠血清TC和TG水平(表6)。

3.2.3 预防性给予EEM对2型糖尿病小鼠肝脏和骨骼肌中糖原和TG含量的影响

与正常对照组小鼠比较，链脲菌素诱导可明显导致小鼠肝脏和骨骼肌中TG含量升高，糖原含量降低(P<0.01)。与糖尿病模型对照组小鼠比较，预防性连续42天给予4、8 g/kg EEM可明显降低糖尿病小鼠肝脏和骨骼肌中TG含量，增加糖原含量(P<0.01)，格列本脲可显著增加糖尿病小鼠肝脏和骨骼肌中糖原含量，但不影响TG含量，2 g/kg EEM不影响糖尿病小鼠肝脏和骨骼肌中糖原和TG含量(表6)。

表6. 预防性灌胃紫茉莉根醇提物(EEM)对糖尿病小鼠血清TC、TG水平及肝脏和骨骼肌中糖原、TG含量的影响

数据以均数±标准差(

± s)表示，n = 10. ^* P<0.01, 与糖尿病对照组比较. ^# P<0.01, 与正常对照组比较。

结论

建立糖尿病模型前预防性连续14天灌胃EEM并继续给药28天，对糖尿病小鼠的血糖、血清TC、TG水平及肝脏和骨骼肌中糖原、TG含量的影响与建立糖尿病后连续给药28天相同。紫茉莉根对糖尿病小鼠具有治疗性和预防性的降糖降脂作用，但对正常小鼠的糖脂代谢无影响，说明该药物可用于2型糖尿病及其并发症的防治，且不影响正常糖脂代谢。

本发明可根据实际情况制备成胶囊、软胶囊、颗粒剂、片剂或丸剂提供临床应用，在制备上述制剂时可加入适量淀粉或其它辅料作为添加剂。

具体实施方式

实施例一 ]

紫茉莉根醇提物的获得

紫茉莉根粉碎成粗粉后，用5倍量50%乙醇室温浸提3次，每次24h，合并滤液，过滤；利用旋转蒸发仪减压浓缩；真空干燥，获得紫茉莉根醇提物，提取率为12.5%。

实施例二 ]

紫茉莉根醇提物的获得

紫茉莉根粉碎成粗粉后，用10倍量用95%乙醇室温浸提3次，每次48h，合并滤液，过滤；利用旋转蒸发仪减压浓缩；真空干燥，获得紫茉莉根醇提物，提取率为13.0%。

实施例三 ]

紫茉莉根醇提物的获得

紫茉莉根粉碎成粗粉后，用12倍量用70%乙醇回流提取3次，每次2h，合并滤液，过滤；利用旋转蒸发仪减压浓缩；真空干燥，获得紫茉莉根醇提物，提取率为14.1%。

实施例四 ]

紫茉莉根醇提物的获得

紫茉莉根粉碎成粗粉后，用8倍量用80%乙醇回流提取3次，每次2h，合并滤液，过滤；利用旋转蒸发仪减压浓缩；真空干燥，获得紫茉莉根醇提物，提取率为13.7%。

实施例五 ]

紫茉莉根醇提物的获得

紫茉莉根粉碎成粗粉后，用5倍量用95%乙醇回流提取3次，每次1h，合并滤液，过滤；利用旋转蒸发仪减压浓缩；真空干燥，获得紫茉莉根醇提物，提取率为12.4%。

实施例六 ]

紫茉莉根醇提物胶囊的制备

一种中草药药物，它是以中草药紫茉莉根为原料所制成的药剂，用于治疗糖尿病及其并发症。

配方：紫茉莉根醇提物(有效成分) 200g，乳糖(赋形剂) 80g，淀粉(赋形剂)70g，硬脂酸镁(抗粘剂) 2.5g，共制成1000粒胶囊。

制备方法：将有效成分和药用辅料均过100目筛，按处方分别准确称量，在混合机中混合10-15min，加入硬脂酸镁2.5g，混合2min后，装入1000粒胶囊即得。

实施例七 ]

紫茉莉根醇提物软胶囊的制备

一种中草药药物，它是以中草药紫茉莉根为原料所制成的药剂，用于治疗糖尿病及其并发症。

配方：紫茉莉根醇提物(有效成分) 200g，植物油(赋形剂) 70g，蜂蜡(赋形剂)30g，对羟基苯甲酸甲酯(防腐剂) 1g，共制成1000粒软胶囊。

制备方法：将有效成分过100目筛，按照制剂处方准确称取主药和辅料，置于胶体磨研成油膏状混悬物，制成1000粒软胶囊，即得。

实施例八 ]

紫茉莉根醇提物颗粒剂的制备

一种中草药药物，它是以中草药紫茉莉根为原料所制成的药剂，用于治疗糖尿病及其并发症。

配方：紫茉莉根醇提物(有效成分) 250g，糊精(赋形剂) 100g，甜菊素(矫味剂)适量。

制备方法：将有效成分和药用辅料均过100目筛，按处方分别准确称量，在混合机中混合均匀，通过干法制粒，包装即得。

实施例九 ]

紫茉莉根醇提物片剂或丸剂的制备

一种中草药药物，它是以中草药紫茉莉根为原料所制成的药剂，用于治疗糖尿病及其并发症。

片芯配方：紫茉莉根醇提物(有效成分)200g，糊精(赋形剂) 112.5g，乳糖(赋形剂)87.5g，低取代羟丙基纤维素(粘合剂) 18.75g，4%羟丙基纤维素的50%乙醇(粘合剂) 112.5ml，滑石粉(抗粘剂) 3.75g，硬脂酸镁(抗粘剂) 3.75g，共制成1250片。

包衣液配方：包衣预混剂(欧巴代OY-C-7000A)4.37g，蒸馏水30g，用于制备1250片。

制备方法：将有效成分和其他药用辅料均过100目筛，称取处方量的紫茉莉根醇提物、乳糖、糊精和占处方量一半的低取代羟丙基纤维素，按等量递加法混合均匀，以4%羟丙基纤维素的50%乙醇为润湿剂制软材，18目筛制粒，湿颗粒于45-50℃干燥，20目筛整粒，加入剩余量的低取代羟丙基纤维素和处方量的滑石粉、硬脂酸镁混匀，测定有效成分含量后，确定片重，于10.0mm浅凹冲模压片。按常规方法包以白色薄膜衣，包衣增重1-2%。

包衣液的配制：在搅拌下把包衣预混剂(欧巴代OY-C-7000A)加入蒸馏水中，5min内加完，继续搅拌45min即得。

由此已详细地描述了本发明，对本领域技术人员而言，在本发明的范围内显然还可有各种改变，本发明并不受说明书所述的限制。

Claims (4)

1. 紫茉莉根提取物在制备防治2型糖尿病及其并发症药物中的应用。

2. 一种防治2型糖尿病及其并发症的药物，其特征是，所述的药物还有重量比为1-99.5%的紫茉莉根提取物，其余为药学上可接受的辅料。

3.根据权利要求1所述的防治2型糖尿病及其并发症的药物，其特征是，所述的药物是片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂。

4. 根据权利要求2或3所述药物，其特征在于所述紫茉莉根提取物采用以下方法制备获得：

(1) 提取：将紫茉莉根干燥后粉碎，以5-12倍量50%-95%乙醇回流提取1-3次，每次0.5-2 h，合并滤液，过滤；

(2) 浓缩：利用旋转蒸发仪减压浓缩；

(3) 真空干燥，获得紫茉莉根提取物。