CN101984052B - 一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法 - Google Patents
一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101984052B CN101984052B CN201010580955A CN201010580955A CN101984052B CN 101984052 B CN101984052 B CN 101984052B CN 201010580955 A CN201010580955 A CN 201010580955A CN 201010580955 A CN201010580955 A CN 201010580955A CN 101984052 B CN101984052 B CN 101984052B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tris
- hcl
- buffer
- 20mmol
- transglutaminase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 title claims abstract description 24
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 title claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims abstract description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 21
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 21
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 17
- 241000187391 Streptomyces hygroscopicus Species 0.000 claims description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 11
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 8
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 claims description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 claims description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 13
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 12
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 6
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 6
- 101710123874 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 4
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 101000837869 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- SOUXAAOTONMPRY-UHFFFAOYSA-N 2-[[5-amino-5-oxo-2-(phenylmethoxycarbonylamino)pentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C(CCC(=O)N)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 SOUXAAOTONMPRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010022579 ATP dependent 26S protease Proteins 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 102100030944 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase K Human genes 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009941 weaving Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法，是采用阴离子交换柱分离纯化谷氨酰胺转胺酶，属于生物制品分离纯化技术领域。本发明方法工艺简单，具有较高的得率，所得到的谷氨酰胺转胺酶纯度高。
Description
技术领域
一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法，本发明涉及一种以阴离子交换层析为主要手段的谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法，属于生物制品分离纯化技术领域。
背景技术
谷氨酰胺转胺酶（Transglutaminase，简称TGase，EC 2.3.2.13），又称转谷氨酰胺酶，是一种催化酰基转移反应的酶。它具有多种催化功能，既可以使蛋白质分子内、分子间交联，也可以使蛋白质和氨基酸连接还可以水解蛋白质分子内的谷氨酰胺，从而改变蛋白质本身以及其所附着细胞和组织等的结构和功能，提高蛋白质的营养价值，被誉为“21世纪超级粘合剂”。成为目前食品加工领域最受关注和应用最为广泛的酶制剂。此外，在生物医药，组织工程，纺织和皮革处理等多个领域也有着潜在应用。
然而，目前在国内食品、生物医药领域应用的谷氨酰胺转胺酶主要购自日本公司，其原因在于日本公司生产的谷氨酰胺转胺酶纯度较高。而本发明旨在开发出一种高纯度、高得率的电泳级谷氨酰胺转胺酶的纯化方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法。
本发明的具体步骤如下：
1） 将发酵液去除菌体得到的上清液经过硫酸铵分级沉淀，收集蛋白沉淀溶解后进行透析；
2） 将透析后的酶液加入到用pH 7.5的Tris-HCl平衡好的阴离子交换柱Hitrap Q HP中，用0-1 mol/L氯化钠线形梯度洗脱，收集活性部分；
3） 将收集的活性部分用硫酸铵浓缩，将浓缩后的酶液加入Superdex 75 10/300GL层析柱中，用0.15 mol/L氯化钠洗脱并收集活性部分；
4） 将收集到的活性部分加入到用pH 8.5的Tris-HCl平衡好的阴离子交换柱Hitrap Q HP中，用0-0.4 mol/L氯化钠进行线性梯度洗脱，收集活性部分。
本发明所述发酵液是指：以吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）WSH03-13作为出发菌株，10%的接种量接菌至发酵培养基中，30℃，200 r/min培养60 h，得到含谷氨酰胺转胺酶的发酵液。吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)WSH03-13已在中国专利ZL03152956.9公开，授权公告号CN 1208452 C，授权公告日2005年6月29日。
本发明的详细的步骤为：
（1）硫酸铵沉淀
将吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus发酵液离心去除菌体后，上清液中加入硫酸铵粉末，至饱和度为50%，缓慢搅拌使其完全溶解。调节pH值，使酶液的pH保持在7.5，静置半小时后10000×g低温离心10 min，收集上清液继续加入硫酸铵至饱和度为80%，4℃静置数小时后，低温离心收集蛋白沉淀。将沉淀溶解在20 mmol/L Tris-HCl pH 7.5的缓冲液中并且4℃透析数小时；
（2）第一次离子交换层析
将透析后的酶液加入到预先用20 mmol/L Tris-HCl pH 7.5的缓冲液平衡好的阴离子交换柱Hitrap Q HP中。用含0-1 mol/L氯化钠的相同缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为1 mL/min，检测波长为280 nm，收集有活性的部分；
（3）凝胶过滤层析
将收集到的全部活性部分用硫酸铵（饱和度80%）浓缩并用少量Tris-HCl pH 7.5缓冲液溶解，将浓缩后的酶液加入到预先用20 mmol/L Tris-HCl pH 7.5缓冲液平衡好的Superdex 75 10/300GL层析柱中，用含0.15 mol/L氯化钠的相同缓冲液进行洗脱，流速为0.4 mL/min，检测波长为280 nm，收集有活性的部分；
（4）第二次离子交换层析
将收集到的活性部分经20 mmol/L Tris-HCl pH 8.5的缓冲液透析后再次加入到预先用20 mmol/L Tris-HCl pH 8.5缓冲液平衡好的Hitrap Q HP离子柱中，用含0-0.4 mol/L氯化钠的相同缓冲液进行线性梯度洗脱，收集活性部分，即为所制备的电泳纯谷氨酰胺转胺酶。
本发明的有益效果：本发明提供了一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法，该方法工艺简单，具有较高的得率，所得到的谷氨酰胺转胺酶纯度高。
附图说明：
图1. 第一次离子交换色谱图
图2. 凝胶过滤色谱图
图3. 第二次离子交换色谱图
图4. 谷氨酰胺转胺酶分离纯化全过程的SDS-PAGE电泳图
1、蛋白分子量标准；2、发酵上清液；3、盐析后的酶液；4、第一次离子交换后的酶液；5、Superdex 75凝胶过滤后的酶液；6、第二次离子交换后得到的TGase A；7、第二次离子交换后得到的TGase B。
具体实施方式：
材料和检测方法
吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）WSH03-13，巳在中国专利ZL03152956.9公开，授权公告号CN 1208452 C，授权公告日2005年6月29日。
发酵培养基：糊精20 g/L，蛋白胨 20 g/L，酵母提取物 5 g/L，CaCl2 1 g/L，MgSO4 2 g/L，K2HPO4 2 g/L，KH2PO4 2 g/L（pH 7.0）。
谷氨酰胺转胺酶活力测定方法：以L-谷氨酸-g-单羟肟酸为标准品作标准曲线。恒温水浴锅调到37℃，将底物(Z-Gln-Gly和羟胺)和待测样品（40 μL）放入水浴锅预热10 min，在样品中加入100 μL底物，反应10 min，然后加40 μL终止剂（三氯乙酸和三氯化铁）终止反应。取出样品，8000×g离心5 min，在562 nm下用蛋白核酸定量测定仪比色测定酶活。酶活力单位定义：该酶在37℃时每分钟催化底物生成1 mmol L-谷氨酸-g-单羟肟酸所需要的酶量。
实施例1
将吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）WSH03-13以 10%的接种量接菌至发酵培养基中，30℃，200 r/min培养60 h，发酵结束后测定谷氨酰胺转胺酶活力为：2.5 U/mg。
实施例2
（1）硫酸铵沉淀
将吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus发酵液离心去除菌体后，上清液中加入硫酸铵粉末，至饱和度为50%，缓慢搅拌使其完全溶解。调节pH值，使酶液的pH保持在7.5，静置半小时后10000×g低温离心10 min，收集上清液继续加入硫酸铵至饱和度为80%，4℃静置数小时后，低温离心收集蛋白沉淀。将沉淀溶解在20 mmol/L Tris-HCl pH 7.5的缓冲液中并且4℃透析数小时；
（2）第一次离子交换层析
将透析后的酶液加入到预先用20 mmol/L Tris-HCl pH 7.5的缓冲液平衡好的阴离子交换柱Hitrap Q HP中。用含0-1 mol/L氯化钠的相同缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为1 mL/min，检测波长为280 nm，收集有活性的部分（图1）；
（3）凝胶过滤层析
将收集到的全部活性部分用硫酸铵（饱和度80%）浓缩并用少量Tris-HCl pH 7.5缓冲液溶解，将浓缩后的酶液加入到预先用20 mmol/L Tris-HCl pH 7.5缓冲液平衡好的Superdex 75 10/300GL层析柱中，用含0.15 mol/L氯化钠的相同缓冲液进行洗脱，流速为0.4 mL/min，检测波长为280 nm，收集有活性的部分（图2）；
（4）第二次离子交换层析
将收集到的活性部分经20 mmol/L Tris-HCl pH 8.5的缓冲液透析后再次加入到预先用20 mmol/L Tris-HCl pH 8.5缓冲液平衡好的Hitrap Q HP离子柱中，用含0-0.4 mol/L氯化钠的相同缓冲液进行线性梯度洗脱，收集活性部分，即为所制备的电泳纯谷氨酰胺转胺酶。TGase的回收率可以达到45.9%，TGase A的比酶活可以达到14.3 U/mg，TGase B的比酶活可以达到17.8 U/mg（图3）。
谷氨酰胺转胺酶分离纯化全过程的SDS-PAGE电泳图见图4所示。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (2)
1.一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法，其特征在于，步骤如下：
1)将来源于中国专利ZL03152956.9的吸水链霉菌Streptomyceshygroscopicus WSH03-13发酵液去除菌体，上清液中加入硫酸铵粉末，至饱和度为50％，缓慢搅拌使其完全溶解；调节pH值，使酶液的pH保持在7.5，静置半小时后10000×g低温离心10min，收集上清液继续加入硫酸铵至饱和度为80％，4℃静置数小时后，低温离心收集蛋白沉淀；将沉淀溶解在20mmol/L Tris-HCl pH 7.5的缓冲液中并且4℃透析；
2)将透析后的酶液加入到预先用20mmol/L Tris-HCl pH 7.5的缓冲液平衡好的阴离子交换柱Hitrap Q HP中；用含0-1mol/L氯化钠的相同缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为1mL/min，检测波长为280nm，收集有活性的部分；
3)将收集到的全部活性部分用饱和度80％的硫酸铵浓缩并用少量Tris-HCl pH 7.5缓冲液溶解，将浓缩后的酶液加入到预先用20mmol/L Tris-HCl pH 7.5缓冲液平衡好的Superdex 7510/300GL层析柱中，用含0.15mol/L氯化钠的相同缓冲液进行洗脱，流速为0.4mL/min，检测波长为280nm，收集有活性的部分；
4)将收集到的活性部分经20mmol/L Tris-HCl pH 8.5的缓冲液透析后再次加入到预先用20mmol/L Tris-HCl pH 8.5缓冲液平衡好的Hitrap Q HP离子柱中，用含0-0.4mol/L氯化钠的相同缓冲液进行线性梯度洗脱，收集活性部分。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述吸水链霉菌Streptomyceshygroscopicus WSH03-13发酵培养基为：pH 7.0，糊精20g/L，蛋白胨20g/L，酵母提取物5g/L，CaCl21g/L，MgSO42g/L，K2HPO42g/L，KH2PO42g/L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010580955A CN101984052B (zh) | 2010-12-09 | 2010-12-09 | 一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010580955A CN101984052B (zh) | 2010-12-09 | 2010-12-09 | 一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101984052A CN101984052A (zh) | 2011-03-09 |
| CN101984052B true CN101984052B (zh) | 2012-09-26 |
Family
ID=43641222
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201010580955A Expired - Fee Related CN101984052B (zh) | 2010-12-09 | 2010-12-09 | 一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101984052B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102120989B (zh) * | 2010-12-10 | 2014-01-29 | 江南大学 | 一种新型谷氨酰胺转胺酶及其应用 |
| CN113528481B (zh) * | 2021-07-21 | 2023-01-03 | 华东理工大学 | 用温度响应型无规共聚醚eo20po80沉淀法分离谷氨酰胺转氨酶的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0726317A2 (en) * | 1995-02-09 | 1996-08-14 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacillus-derived transglutaminase |
| CN1493685A (zh) * | 2003-09-05 | 2004-05-05 | 江南大学 | 一种谷氨酰胺转胺酶高产菌及其筛选方法和用该菌株发酵法生产谷氨酰胺转胺酶 |
| CN1621521A (zh) * | 2003-11-27 | 2005-06-01 | 合肥永通塑料有限公司 | 制备肉桂链轮丝菌谷氨酰胺转移酶的新工艺 |
-
2010
- 2010-12-09 CN CN201010580955A patent/CN101984052B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0726317A2 (en) * | 1995-02-09 | 1996-08-14 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacillus-derived transglutaminase |
| CN1493685A (zh) * | 2003-09-05 | 2004-05-05 | 江南大学 | 一种谷氨酰胺转胺酶高产菌及其筛选方法和用该菌株发酵法生产谷氨酰胺转胺酶 |
| CN1621521A (zh) * | 2003-11-27 | 2005-06-01 | 合肥永通塑料有限公司 | 制备肉桂链轮丝菌谷氨酰胺转移酶的新工艺 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101984052A (zh) | 2011-03-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103275941B (zh) | 一种制备丙酮酸氧化酶的方法 | |
| CN102961741B (zh) | 一种破伤风类毒素疫苗的制备方法 | |
| CN109735559B (zh) | 一种γ-氨基丁酸的生物制备方法 | |
| Ishii et al. | Purification and properties of endo-polygalacturonase from Aspergillus japonicus | |
| CN101984052B (zh) | 一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法 | |
| CN102080090A (zh) | 短乳杆菌谷氨酸脱羧酶基因的克隆、表达及应用 | |
| CN100999746A (zh) | 酶法合成γ－D－谷氨酰－L－色氨酸的方法 | |
| CN100383240C (zh) | 一种快速制备转糖基β-半乳糖苷酶的方法 | |
| CN114350728B (zh) | 一种酶法制备透明质酸寡聚糖的方法 | |
| CN112322686B (zh) | 一种酶法生产莱鲍迪苷b的方法 | |
| CN104530250A (zh) | 一种纯化肺炎链球菌荚膜多糖的方法 | |
| CN103224920A (zh) | 一种枯草芽孢杆菌耐高温β-淀粉酶分离纯化的方法 | |
| CN103509778B (zh) | 一种卤代酸脱卤酶的提取纯化方法 | |
| CN102120989A (zh) | 一种新型谷氨酰胺转胺酶及其应用 | |
| CN102168028A (zh) | 一种节杆菌突变株、利用该突变株生产乳糖酶的方法及用乳糖酶制备乳果糖的方法 | |
| CN104531573B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN108300752B (zh) | 一种利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法 | |
| WO2002097077A1 (fr) | Procede de preparation de sucrose-phosphorylase | |
| CN109750073B (zh) | 一种从产朊假丝酵母发酵液中提取谷胱甘肽的方法 | |
| CN101121747A (zh) | 一种谷氨酰胺转胺酶激活蛋白酶抑制因子的分离纯化方法 | |
| CN110592061B (zh) | 一种利用固定化α-葡萄糖苷酶制备黑曲霉低聚糖的方法 | |
| CN103667201A (zh) | 海洋微生物菌株ys0810产的碱性过氧化氢酶及其分离纯化方法 | |
| CN108624637B (zh) | 一种利用大米生产海藻糖的方法 | |
| CN107164340B (zh) | 一种鲜猪血中超氧化物歧化酶的提取方法 | |
| CN1544623A (zh) | 一种κ-卡拉胶降解酶及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120926 Termination date: 20211209 |