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CN101836116A - 癌的检测方法 - Google Patents

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CN101836116A
CN101836116A CN200880113140A CN200880113140A CN101836116A CN 101836116 A CN101836116 A CN 101836116A CN 200880113140 A CN200880113140 A CN 200880113140A CN 200880113140 A CN200880113140 A CN 200880113140A CN 101836116 A CN101836116 A CN 101836116A
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polypeptide
amino acid
cancer
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dog
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CN200880113140A
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冈野文义
铃木佳奈
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Toray Industries Inc
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Toray Industries Inc
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Abstract

本发明涉及一种以特定多肽的表达为指标的癌的检测方法。所述多肽是通过使用了源自犬睾丸的cDNA文库和罹癌犬的血清的SEREX法，作为与存在于源自罹癌生物体的血清中的抗体结合的多肽被分离得到的。由于所述多肽与癌患者血清中特异性存在的抗体反应，所以如果测定试样中的该抗体，则可以检测生物体内的癌。另外，通过测定该抗体的抗原蛋白质本身或者编码该抗原蛋白质的mRNA，也可以检测生物体内的癌。

Description

癌的检测方法
技术领域
本发明涉及一种新型的癌的检测方法。
背景技术
癌是在全部死亡原因中占第一位的疾病，目前进行的治疗主要是以手术疗法为主、组合使用放射疗法和化学疗法的对症疗法。目前为止随着医疗技术的进步，如果能够早期发现则癌逐渐变为治疗可能性高的疾病。因此，寻求一种癌患者无体力、经济负担，能够使用血清或尿等简便地进行检查的癌的检测方法。
作为使用血液或尿的癌诊断方法，最近测定肿瘤标记物等肿瘤生产物的方法正日益普及。所谓肿瘤生产物是指与肿瘤相关的抗原、酶、特定蛋白质、代谢产物、肿瘤基因、肿瘤基因生产物及肿瘤抑制基因等，癌胚抗原CEA、糖蛋白质CA19-9、CA125、前列腺特异抗原PSA、作为由甲状腺产生的肽类激素的降钙素等在一部分癌中作为肿瘤标记物被活用于癌诊断。但是在多种癌中，不存在对癌诊断有用的肿瘤标记物。另外，由于目前所知的大部分肿瘤标记物仅以极微量(pg/mL级程度)存于体液中，所以为了检测它们需要高灵敏度的测定方法及特殊的技术。在这种现状中如果提供能够以简便操作高灵敏度地检测各种癌的新型癌检查方法，则可期待开发出针对各种癌的诊断用途。
另外，如果不仅能够检测癌，还能够对在看不见的部分产生的癌进行诊断、进行癌的进展程度诊断、癌的恶性程度及术后追踪诊断、复发诊断、转移诊断、治疗监控等，那么将非常有用。
具体而言，如果能够对在看不见的部分产生的癌进行诊断，则对腹腔内等不易察觉部分的癌的早期发现来说有用。另外，在肿瘤尚未达到肉眼能确认程度的大小时，能够呈现出即使通过超声波检查·CT(计算机化断层显像)·MRI(核磁共振成像)也不能发现的癌。
另外，关于癌的进展程度，基于肿瘤在原发部位的扩散程度、和向所属淋巴结·远位器官的转移的有无进行分类。通常，将称为“stage”的病期分类为5个阶段，数字越大癌进展得越明显。严密地划分时其定义根据脏器而不同，例如病期0是指存留在上皮内的癌，病期IV是指引起远位转移的癌。在明确了这种癌进展程度的情况下，可以决定适合的治疗方针，还可以诊断抗癌剂治疗效果。作为决定治疗方针的具体例子，存在前立腺癌等恶性程度非常低、基本不发展无需治疗的癌，另一方面也存在引起向骨等转移、伴随疼痛直至患者死亡的进行性癌。由于激素疗法及摘除手术等治疗分别伴随着副作用，所以需要适当判断并决定治疗方法。另外，如果能够判断抗癌剂的选择是否适合，适当判断结束给与抗癌剂的时机等，则还可以减轻患者体力上、经济上的负担。因此，能够诊断癌症进展程度是重要的。
癌细胞的特征之一是具有幼化即去分化的性质。除去一部分癌，低分化或者未分化等分化度越低的癌细胞其转移后的增殖以及早期治疗预后均不良。认为这种癌的恶性程度高。相反，高分化的癌细胞即细胞分化度越高的癌细胞中残存脏器的结构·功能性质，一般认为其恶性程度较低。在明确了这种癌的恶性程度的情况下，即使肿瘤小，但如果恶性程度高，则在摘除肿瘤时可以确保多些边缘，或者关注周围组织的较大范围并进行追踪观察。
在能够进行包括复发、转移的术后追踪诊断时，可以诊断能否通过手术完全摘除肿瘤。由于未完全摘除时引起复发的可能性高，所以可以判断更加重视观察且以短的间隔进行追踪观察、或根据情况尽早再次进行手术。另外，复发时能够早期发现的可能性也高。在引起远位转移时发现往往较晚，但如果能够进行转移诊断，则可以成为除摘除部位及其周边之外扩大检查范围的判断材料。
在能够进行治疗监控时，可以从各种治疗方法中选择最适合的治疗方法或其组合，进行最适合的治疗。如果能够呈现抗癌剂的治疗效果则有助于选择抗癌剂的给药时间及种类、量。另外，经治疗监控，能够知道在肿瘤摘除后是否存在残留肿瘤，也能够在追踪观察中获得尽早得知转移·复发的线索，因此可以开始早期治疗。如果能够监控治疗效果，则成为该治疗方法是否适合、是否改为其他治疗方法的判断材料。
但是，已知人的寿命大致是犬的7倍。最近，陪伴动物通常作为家族的一员被饲养、具有与饲养人具有相同的生活习惯。因此，根据陪伴动物的患癌，可以预测饲养人将来患癌的危险性高。如果能够简便且正确对陪伴动物进行癌诊断，则期待有助于预防饲养人患癌。
现在，据说犬的饲养数在日本约为639万只，另外美国约为1764万只。除接种狂犬病育苗之外通常接种5种、7种、8种等混合疫苗也较为普及，犬细小病毒感染症、犬瘟热病毒感染症、犬副流感(犬舍咳)、犬腺病毒II型感染症(犬舍咳)、犬传染性肝炎、犬冠状病毒感染症、钩端螺旋体病等致死率高的感染症已经减少。因此，犬的平均寿命延长，7岁以上的高龄犬占全部饲养数的35.5％。死亡原因也与人相同，即癌及高血压、心脏病等持续增加。据说在美国1年间约有400万只被诊断为癌，日本也有约160万只潜在具有某种肿瘤。
但是，目前为止没有简便的动物用癌诊断药，动物医疗中还未普及利用X射线、CT、MRI进行照相等的检查方法。现状是进行触诊及简单的血液检查、利用X射线照相的检查，诊断主要依赖于兽医经验。虽然使用血清的检查方法也已经部分地进行，但由于还未发现犬的肿瘤标记物所以只能使用人的肿瘤标记物。
为了正确地进行癌诊断，需要开腹手术，在犬的体力负担、饲养人的费用负担方面存在较大问题。如果能够简便地进行犬及猫等陪伴动物的癌诊断，则期待早期发现及正确诊断对陪伴动物的癌治疗有用。另外，如果可以使用上述血清进行简便地癌诊断，则期待不仅能够进行癌诊断，还对定期健康诊断及手术前诊断、决定治疗方针等具有巨大贡献。
由于陪伴动物尚未普及像人那样的健康诊断，所以在很多情况下发现较晚，肿瘤变大饲养人才开始注意并入院就诊。该变大的肿瘤为恶性时，很多情况下即使进行了手术等外科疗法及给与抗癌剂等也已经为时过晚。因此，通常兽医在判断为恶性时不进行手术而进行抗癌剂治疗。即使进行手术时也需要严格实施确保边缘的大小及手术中血液、细胞飞散对策等手术中的对策。优选手术后立即开始抗癌剂治疗，以短的间隔进行追踪观察。如果采取最近日渐普及的称为Dog Dock的犬健康诊断，则期待与早期发现相关。
另一方面，为良性肿瘤时，即使肿瘤较大也可以进行手术。手术后只需要护理切除部分，不必进行昂贵的抗癌剂治疗，追踪观察中也不必紧张。
由上述现状来看，如果能够提供可以适用于动物癌诊断的、高灵敏度且简便的癌检测方法，则可以进行正确且不白费功夫的治疗，这对于饲养人和兽医来说都是有利的。
非专利文献1：2004年度厚生劳动省调查
非专利文献2：日经SCIENCE、2007年、3月号、p.p.80-88
非专利文献3：临床检查2003年、12月发行、vol.47、No.13、p.1641-1654
非专利文献4：犬·猫的疾病统计2005年1月发行
非专利文献5：Companion Animal Health Products：2006EditionBy Tim Wesley，ANIMAL PHARM REPORTS
非专利文献6：癌的扩散和进展程度、大阪府立成人病中心调查部津熊秀明
非专利文献7：蛋白质核酸酶vol.50，No.11，p.1405-1412
非专利文献8：J Cell Sci.115：1825-35
非专利文献9：Blood.95：1788-96
非专利文献10：Mol Endocrinol.9：243-54(1995)
非专利文献11：J Cell Biol.145：83-98(1999)
发明内容
本发明的目的在于提供一种在癌的诊断中有用的癌的检测方法。
本申请发明人等经过潜心研究，结果通过使用了源自犬睾丸的cDNA文库和罹癌犬血清的SEREX法，获得了编码与存在于源自罹癌生物体的血清中的抗体结合的蛋白质的cDNA，基于该cDNA制备具有序列号2所示的氨基酸序列的多肽、具有序列号16所示的氨基酸序列的犬钙镁蛋白(Calmegin)、具有序列号26所示的氨基酸序列的犬中心体蛋白质(centrosomal protein，以下简称为CEP)，及具有序列号45所示的氨基酸序列的犬甲状腺激素受体相互作用因子11(thyroid hormone receptor interactor 11、以下有时记作“TRIP11”)。另外，基于所获得基因的人同源性基因，制备具有序列号4所示的氨基酸序列的多肽、具有序列号18所示的氨基酸序列的人钙镁蛋白质、具有序列号28所示的氨基酸序列的人CEP及具有序列号47所示的氨基酸序列的人TRIP11。发现编码上述蛋白质的基因特异性表达于犬及人的睾丸和恶性癌细胞中(参见实施例A-1、B-1、C-1、D-1)，并发现基于上述蛋白质的氨基酸序列制备的重组多肽仅与罹癌生物体中的血清特异性反应，进一步发现利用使用该重组多肽配制的抗体，可以从罹癌生物体中特异性检测出上述多肽及其同源因子，从而完成了本申请发明。
即，本发明提供一种癌的检测方法，所述方法是针对从生物体中分离的试样所进行的方法，包括测定以下(a)～(d)中至少任一种多肽的表达。
(a)多肽，是在上述生物体内产生的、且具有通过抗原抗体反应与下述抗体结合的反应性，所述抗体是针对具有序列号2或者4所示的氨基酸序列的多肽的抗体，
(b)钙镁蛋白，
(c)多肽，具有通过抗原抗体反应与下述抗体结合的反应性，所述抗体是针对具有序列号26、28或者42所示的氨基酸序列的中心体蛋白质的抗体，
(d)甲状腺激素受体相互作用因子11(thyroid hormone receptorinteractor11)。
另外，本发明提供癌检测试剂，所述癌检测试剂含有与下述抗体进行抗原抗体反应的多肽，所述抗体是在生物体内被诱导的、针对以下(i)～(l)中任一种多肽的抗体。
(i)具有序列号2或者4所示的氨基酸序列的多肽，
(j)钙镁蛋白，
(k)具有序列号26、28或者42所示的氨基酸序列的中心体蛋白质，
(l)甲状腺激素受体相互作用因子11。
进而，本发明提供癌检测试剂，所述癌检测试剂含有与以下(m)～(p)中任一种多肽进行抗原抗体反应的抗体或者其抗原结合性片段。
(m)多肽，是在生物体内产生的、且具有通过抗原抗体反应与下述抗体结合的反应性，所述抗体是针对具有序列号2或者4所示的氨基酸序列的多肽的抗体，
(n)钙镁蛋白，
(o)多肽，是在生物体内产生的、且具有通过抗原抗体反应与下述抗体结合的反应性，所述抗体是针对具有序列号26、28或者42所示的氨基酸序列的中心体蛋白质的抗体，
(p)甲状腺激素受体相互作用因子11。
进而，本发明提供癌检测试剂，所述癌检测试剂含有多核苷酸，所述多核苷酸与序列表的序列号1、3、15、17、25、27、41、44及46中任一个所示的碱基序列中的部分区域特异性杂交。
根据本发明，可以提供新型的癌检测方法。如下述实施例中的具体说明所示，基于序列号2或者4所示的氨基酸序列、钙镁蛋白的氨基酸序列、序列号26、28或者42所示的CEP氨基酸序列、及TRIP11的氨基酸序列所制备的重组多肽，与癌患者血清中特异性存在的抗体反应。因此，如果根据本发明的方法测定试样中的该抗体，则可以检测出生物体内的癌。另外，通过测定该抗体的抗原蛋白质本身，也可以检测出生物体内的癌。根据本发明的方法，也可以检测出小到肉眼看不见的大小的癌及体内深部的癌，因此也有利于在健康诊断等中早期发现癌症。另外，如果在癌治疗后在对患者的追踪观察中利用本发明的方法，则还可以早期检测出复发的癌。并且，根据本发明的方法，还可以进行肿瘤增大及对周围组织的浸润、癌向淋巴结及远位器官的转移等癌的进展程度诊断。另外，由于恶性程度高的癌患者与恶性程度低的癌患者相比上述抗体的血清中存在量较多，所以根据本发明的方法也可以诊断癌的恶性程度。通过上述抗体的血清中存在量的增减还可以进行治疗监控，经该治疗监控可以获知抗癌剂的治疗效果、及肿瘤摘除后有无残留肿瘤、以及在追踪观察中也能够获得尽早得知转移·复发的线索等，成为该治疗方法是否适合、是否改为其他治疗方法、开始何种治疗等治疗方法选择的判断材料。另外，如下述实施例所述，编码下述多肽的mRNA在睾丸及癌细胞中特异性地高度表达，所述多肽为具有序列号2或者4所示的氨基酸序列的多肽、钙镁蛋白、具有序列号26、28或者42所示的氨基酸序列的CEP及TRIP11。因此，还可以通过测定该mRNA来检测癌。
附图说明
[图1]表示实施例A-1中鉴定出的基因在正常组织及肿瘤细胞株中的表达谱。标号1：表示鉴定出的基因表达谱，标号2：表示GAPDH基因的表达谱。
[图2]为用考马斯染色法检测犬重组蛋白的图，所述犬重组蛋白是在实施例A中由大肠杆菌产生并经纯化的、为本发明使用的多肽的一例。标号3：表示犬重组蛋白的条带。
[图3]为使用实施例A制备的犬重组蛋白进行的罹癌犬的癌诊断结果的一部分。
[图4]为使用实施例A制备的犬重组蛋白进行的罹癌犬的癌详细诊断结果的一部分。
[图5]表示编码钙镁蛋白质的基因在正常组织及肿瘤细胞株中的表达谱。标号1：表示编码钙镁蛋白质的基因的表达谱，标号2：表示GAPDH基因的表达谱。
[图6]为用考马斯染色法检测犬钙镁蛋白的图，所述犬钙镁蛋白是在实施例B中由大肠杆菌制造并经纯化的、为本发明使用的蛋白的一例。标号3：表示犬钙镁蛋白质的条带。
[图7]为使用实施例B制备的犬钙镁蛋白质进行的罹癌犬的癌诊断结果的一部分。
[图8]为使用实施例B制备的犬钙镁蛋白质进行的罹癌犬的癌详细诊断结果的一部分。
[图9]表示编码CEP的基因在正常组织及肿瘤细胞株中的表达谱。标号1：表示编码CEP的基因的表达谱，标号2：表示GAPDH基因的表达谱。
[图10]为用考马斯染色法检测源自犬CEP的多肽的图，所述源自犬CEP的多肽是在实施例C中用大肠杆菌制造并纯化的、本发明使用的多肽之一例。标号3：表示源自犬CEP的多肽的条带。
[图11]为使用实施例C制备的源自犬CEP的多肽进行的罹癌犬的癌诊断结果的一部分。
[图12]为使用实施例C制备的源自犬CEP的多肽进行的罹癌犬的癌详细诊断结果的一部分。
[图13]表示编码TRIP11蛋白的基因在正常组织及肿瘤细胞株中的表达谱。标号1：表示编码TRIP11蛋白的基因的表达谱，标号2：表示GAPDH基因的表达谱。
[图14]为用考马斯染色法检测源自犬TRIP11的多肽的图，所述源自犬TRIP11的多肽是在实施例D中用大肠杆菌制造并经纯化的、为本发明使用的多肽的一例。标号3：表示源自犬TRIP11的多肽的条带。
[图15]为使用实施例D制备的源自犬TRIP11的多肽进行的罹癌犬的癌诊断结果的一部分。
[图16]为使用实施例D制备的源自犬TRIP11的多肽进行的罹癌犬的癌详细诊断结果的一部分。
具体实施方式
本发明的方法中，使用从生物体分离得到的试样测定规定的多肽的表达。作为使用上述试样测定多肽表达的方法，可以举出如下方法：对针对试样中含有的该多肽的抗体进行免疫测定的方法(第1方法)、对试样中含有的该多肽本身进行免疫测定的方法(第2方法)、及对编码试样中含有的该多肽的mRNA进行测定的方法(第3方法)。本发明的方法中，可以采用上述任一种方法测定多肽的表达。需要说明的是，本发明中所称的“测定”这一用语包括检测、定量及半定量中任一种。
采用本发明的方法测定表达的上述规定的多肽，为以下(a)～(d)中的至少任一种多肽。
(a)多肽，是在上述生物体内产生的、且具有通过抗原抗体反应与下述抗体结合的反应性，所述抗体是针对具有序列号2或者4所示的氨基酸序列的多肽的抗体，
(b)钙镁蛋白，
(c)多肽，具有通过抗原抗体反应与下述抗体结合的反应性，所述抗体是针对具有序列号26、28或者42所示的氨基酸序列的中心体蛋白质的抗体，
(d)甲状腺激素受体相互作用因子11(thyroid hormone receptorinteractor11)。
如下述实施例所述，即使仅测定上述多肽中任一种的表达，也可以检测癌。因此，本发明中可以仅研究(a)～(d)中一种的表达，也可以组合两种以上进行研究。如果组合两种以上作为指标，则可以进一步提高癌的检测精度(参见下述实施例E)。
上述(a)多肽是生物体内产生的多肽，具有通过抗原抗体反应与下述抗体结合的反应性，所述抗体是针对具有序列号2或者4所示的氨基酸序列的多肽的抗体。换言之，需要测定表达的该规定的多肽，是指与序列号2的源自犬的多肽或者与序列号4的源自人的多肽显示出相同抗原性的多肽。
作为上述多肽的具体例，可以举出序列号2的源自犬的多肽、序列号4的源自人的多肽。所述多肽为“针对具有序列号2或者4所示的氨基酸序列的多肽的抗体”的对应抗原本身，包括在上述规定的多肽中。另外，作为其他具体例，可以举出与上述源自犬的多肽或者源自人的多肽具有相同抗原性的、源自其他哺乳动物的多肽(以下将这些多肽记作“同源因子”。另外，有时将上述源自人的多肽记作源自犬的多肽的“人同源因子”)。
此处，所谓序列号2所示的氨基酸序列，是指通过使用了源自犬睾丸的cDNA文库和罹癌犬的血清的SEREX法，被鉴定为与特异性存在于源自罹癌犬的血清中的抗体(以下有时称为犬的“癌特异性抗体”)相结合的多肽的、功能未知的多肽的氨基酸序列(参见实施例A-1)。因此，采用上述第1方法测定针对序列号2的多肽的该癌特异性抗体，由此可以检测犬的癌(参见实施例A-3及A-4)。另外，采用上述第2方法测定作为抗原的序列号2的多肽本身，也可以检测犬的癌(参见实施例A-5及A-6)。另外，如下述实施例所述，由于编码该抗原多肽的mRNA在睾丸和癌细胞中显著高地表达(参见实施例A-1)，所以通过测定该mRNA也可以检测犬的癌。需要说明的是，序列号2所示的源自犬的多肽的序列在NCBI数据库中注册为Accession No.XP_535343(蛋白质)及AccessionNo.XM_535343(编码基因)，但其功能尚无相关报告。
序列号4所示的氨基酸序列，为利用BLAST进行同源检索的结果发现的、上述源自犬的多肽的人同源因子的氨基酸序列。编码人同源因子的碱基序列及其氨基酸序列分别如序列表的序列号3及4所示，在NCBI数据库中注册为Accession No.NP_689873(蛋白质)及Accession No.NM_152660(编码基因)。人同源因子与上述源自犬的多肽同样其功能尚无相关报道。如下述实施具体记载所示，编码人同源因子的mRNA与序列号2源自犬的多肽同样，显著高地表达于人的睾丸和癌细胞中，在健康人体中检测不到针对该人同源因子的抗体。因此，通过检查序列号4的多肽在人体中的表达，可以检测出人的癌。
作为与上述源自犬的多肽或其人同源因子具有相同抗原性的其他哺乳动物同源因子的具体例，例如可以举出下述实施例中所示的特异性地存在于罹癌猫体内的多肽。该猫多肽与使用序列号2源自犬的多肽作为免疫原制备的抗体进行抗原抗体反应，另外与使用序列号4的人同源因子作为免疫原制备的抗体也进行抗原抗体反应(参见实施例A-5及A-6)。因此，该猫多肽为与上述源自犬的多肽及源自人的多肽具有相同抗原性的猫同源因子，包括在成为本发明中测定表达的对象的“具有通过抗原抗体反应与针对具有序列号2或者4所示的氨基酸序列的多肽的抗体结合的反应性的”多肽的范围内。如下述实施例具体记载所述，在猫体内被诱导的针对猫同源因子的抗体在健康猫内检测不到，仅在罹癌猫中可以检测到。另外，作为抗原的猫同源因子本身也在健康猫内检测不到，仅在罹癌猫体内检测到。因此，通过测定除犬及人之外的哺乳动物同源因子的表达，也可以检测该哺乳动物的癌。
优选上述(a)多肽为具有序列表的序列号2所示的氨基酸序列的多肽，或者为与该多肽具有95％以上同源性、并在生物体内产生的多肽。与源自犬的多肽(序列号2)和其人同源因子(序列号4)的同源性在碱基序列中为93％、在氨基酸序列中为99％。在如犬和人之类的遗传远缘的哺乳动物间，同源因子的氨基酸序列的同源性非常高为99％，因此认为在除人之外的哺乳动物之间，序列号2的源自犬的多肽与其同源因子具有95％以上的高同源性。
所谓作为上述(b)多肽的钙镁蛋白，被鉴定为在精细胞分化时期特异性表达的蛋白，在体外表现出分子伴侣活性。由于为仅在睾丸内表达，在成熟精子中消失的蛋白质，所以一般认为其具有将精细胞分化相关蛋白质折叠的功能(参见非专利文献7、井上直和·山口亮·伊川正人蛋白质核酸酶vol.50No.11 1405-1412)。但是，目前尚无该蛋白在癌中表达、对癌的诊断等有用的报告。
序列号16所示的氨基酸序列为犬的钙镁蛋白的氨基酸序列。具有该氨基酸序列的犬钙镁蛋白通过使用了源自犬睾丸的cDNA文库和罹癌犬的血清的SEREX法，被鉴定为与特异性存在于源自罹癌犬的血清中的抗体结合的多肽(参见实施例B-1)。即，针对具有序列号16所示的氨基酸序列的钙镁蛋白的抗体在罹癌犬体内被特异性诱导。因此，采用上述第1方法测定针对具有序列号16所示的氨基酸序列的钙镁蛋白的上述抗体，由此可以检测犬的癌(参见实施例B-3及B-4)。另外，采用上述第2方法测定作为抗原的序列号16的钙镁蛋白本身，也可以检测犬的癌(参见实施例B-5及B-6)。另外，如下述实施例所述，由于编码钙镁蛋白的mRNA显著高地表达于睾丸和癌细胞中(参见实施例B-1)，所以通过测定该mRNA也可以检测犬的癌。
在本发明的方法中，不仅将序列号16的犬钙镁蛋白作为测定对象，还可以将其他哺乳动物的钙镁蛋白(以下，有时称作针对犬钙镁蛋白的“同源因子”。另外，简称为“钙镁蛋白”时不仅包含源自犬还包括源自其他哺乳动物的钙镁蛋白)作为测定对象。如下述实施例中的具体记载所示，编码人钙镁蛋白的mRNA与序列号16的犬钙镁蛋白同样，显著高地表达于人的睾丸和癌细胞中，在健康人体内检测不到针对该人钙镁蛋白的抗体。另外，针对猫钙镁蛋白的抗体在健康猫体内检测不到，仅在罹癌猫体内能够检测到。因此，通过测定除犬之外的哺乳动物中的钙镁蛋白的表达，也可以检测该哺乳动物的癌。作为本发明方法中为测定对象的犬之外的钙镁蛋白，例如可以举出人钙镁蛋白、猫钙镁蛋白等，但不限定于此。需要说明的是，编码人钙镁蛋白的碱基序列及其氨基酸序列分别如序列表的序列号17及18所示，与犬钙镁蛋白的同源性在碱基序列中为90％，在氨基酸序列中为89％。在如犬和人之类的遗传上远缘的哺乳动物之间，各钙镁蛋白的氨基酸序列的同源性非常高为89％，因此认为即使在除人之外的哺乳动物之间，犬钙镁蛋白与其同源因子也具有80％左右以上的高同源性。即，在本发明的方法中测定表达的钙镁蛋白没有特别限定，但优选与序列号16所示的犬钙镁蛋白的氨基酸序列具有80％以上的同源性、较优选具有85％以上的同源性。
上述所谓(c)多肽，是指具有通过抗原抗体反应与下述抗体结合的反应性的多肽，所述抗体是针对具有序列号26、28或者42所示的氨基酸序列的中心体蛋白质(CEP)的抗体。换言之，上述所谓(c)多肽是指与序列号26或42的源自犬的CEP或者序列号28的源自人的CEP显示相同抗原性的多肽。
作为上述规定的CEP的具体例，可以举出序列号26或者42的源自犬的CEP、序列号28的源自人的CEP。所述CEP为“针对具有序列号26、28或者42所示的氨基酸序列的CEP的抗体”的对应抗原自身，包括在上述规定的CEP中。另外，作为其他具体例，可以举出与上述源自犬的CEP或者源自人的CEP具有相同的抗原性的、源自其他哺乳动物的CEP(以下，将这些CEP表示为“同源因子”。另外有时将上述源自人的CEP称作源自犬的CEP的“人同源因子”)。
此处，所谓序列号26所示的氨基酸序列，是指犬CEP的氨基酸序列，通过使用了源自犬睾丸的cDNA文库和罹癌犬的血清的SEREX法，被鉴定为与特异性存在于源自罹癌犬的血清中的抗体(以下，有时称作犬的“癌特异性抗体”)结合的多肽(参见实施例C-1)。因此，采用上述第1方法测定针对具有序列号26所示的氨基酸序列的犬CEP的上述抗体，由此可以检测犬的癌(参见实施例C-3及C-4)。另外，通过采用上述第2方法测定作为抗原的序列号26的CEP本身，也可以检测犬的癌(参见实施例C-5及C-6)。另外，如下述实施例所述，由于编码序列号26的CEP的mRNA显著高地表达于睾丸和癌细胞中(参见实施例C-1)，所以通过测定该mRNA也可以检测犬的癌。需要说明的是，所谓CEP是指中心体为了控制微管所需要的蛋白质，还与中心体的成熟相关。已知在一部分骨髓增殖性疾病中经常引起染色体易位，而在引起该易位的位点上存在CEP基因，因而认为两者存在某种关系。但是，目前尚无关于该蛋白在癌中表达并对癌诊断有用的报告(非专利文献8J Cell Sci.115：1825-35、非专利文献9Blood.95：1788-96)。
序列号42所示的氨基酸序列为在数据库中注册的公知的犬CEP氨基酸序列，是通过BLAST检索作为与上述获得的犬CEP具有极高同源性的蛋白质被发现的(参见实施例C-1)。该公知的犬CEP的碱基序列如序列号41所示。一般认为序列号42的犬CEP与序列号26的犬CEP同样，高度地表达于罹癌犬中，如下述实施例中的具体记载所示，通过检查该公知的犬CEP的表达，可以检测犬的癌。
序列号28所示的氨基酸序列为利用BLAST进行同源检索结果发现的、上述源自犬的CEP的人同源因子的氨基酸序列。编码人同源因子的碱基序列及其氨基酸序列分别如序列表的序列号27及28所示。如下述实施例中的具体记载所示，编码人同源因子的mRNA与序列号26的源自犬的CEP同样，显著高地表达于人的睾丸和癌细胞中，在健康人中检测不到针对该人同源因子的抗体。因此通过检查序列号28的CEP在人体中的表达，可以检测人的癌。
作为与上述源自犬的CEP或者其人同源因子具有相同抗原性的其他哺乳动物同源因子的具体例，例如可以举出下述实施例中所示的特异性存在于罹癌猫体内的CEP。该猫CEP与使用序列号26或者42的源自犬的CEP作为免疫原制备的抗体进行抗原抗体反应，另外也与使用序列号28的人同源因子作为免疫原制备的抗体进行抗原抗体反应(参见实施例C-5及C-6)。因此，该猫CEP为与上述源自犬的CEP及源自人的CEP具有相同抗原性的猫同源因子，包括在于本发明中作为测定表达的对象的“具有通过抗原抗体反应与针对具有序列号26、28或者42所示的氨基酸序列的CEP的抗体结合的反应性的”CEP的范围内。如下述实施例中的具体记载所示，在猫体内被诱导的针对猫同源因子的抗体，在健康猫中检测不到，仅在罹癌猫中被检测到。另外作为抗原的猫同源因子本身也在健康猫中检测不到，仅在罹癌猫中被检测到。因此，通过测定除犬及人之外的哺乳动物同源因子的表达，也可以检测该哺乳动物的癌。
优选在本发明的检测方法中需要测定表达的上述CEP，为具有序列表的序列号26或42所示的氨基酸序列的CEP，或者与该CEP具有80％以上的同源性、在生物体内产生的多肽。与源自犬的CEP和其人同源因子的同源性在碱基序列中为87％，在氨基酸序列中为84％。即使在如犬和人之类的遗传远缘的哺乳动物间，同源因子的氨基酸序列的同源性也非常高为84％，因此认为在除与人之外的哺乳动物之间，源自犬的CEP和其同源因子也具有80％以上的高同源性。
作为上述(d)多肽的TRIP11(thyroid hormone receptorinteractor11)最初被鉴定为与甲状腺激素受体β相互作用的因子，但还证明其与高尔基体和微管结合，一般认为与高尔基体和微管等连接，发挥出维持上述细胞小器官的形状的作用。但是，目前尚无关于该蛋白在癌中表达并对癌的诊断等有用的报告(非专利文献10Mol Endocrinol.9：243-54(1995)、非专利文献11J Cell Biol.145：83-98(1999))。
序列号45所示的氨基酸序列为犬的TRIP11的氨基酸序列。具有该氨基酸序列的犬TRIP11通过使用了源自犬睾丸的cDNA文库和罹癌犬的血清的SEREX法，被鉴定为与特异性存在于源自罹癌犬的的血清中的抗体结合的多肽(参见实施例D-1)。即，针对具有序列号45所示的氨基酸序列的TRIP11的抗体，在罹癌犬体内被特异性诱导。因此，通过采用上述第1方法测定针对具有序列号45所示的氨基酸序列的TRIP11的上述抗体，可以检测犬的癌(参见实施例D-3及D-4)。另外，通过采用上述第2方法测定作为抗原的序列号45的TRIP11本身，也可以检测犬的癌(参见实施例D-5及D-6)。另外，如下述实施例中的记载所示，由于编码TRIP11的mRNA显著高地表达于睾丸和癌细胞中(参见实施例D-1)，所以通过测定该mRNA，也可以检测犬的癌。
本发明的方法中，不仅以序列号45的犬TRIP11作为测定对象，还以其他哺乳动物的TRIP11(以下有时称作针对犬TRIP11的“同源因子”。另外，简称为“TRIP11”时，不仅包括源自犬的TRIP11，还包括源自其他哺乳动物的TRIP11)作为测定对象。如下述实施例中的具体记载所示，编码人TRIP11的mRNA与序列号45的犬TRIP11同样，显著高地表达于人的睾丸和癌细胞中，在健康人体内检测不到针对该人TRIP11的抗体。另外，针对猫TRIP11的抗体在健康猫体内检测不到，仅在罹癌猫中被检测到。因此，通过测定在除犬之外的哺乳动物中TRIP11的表达，也可以检测该哺乳动物的癌。作为为本发明方法中的测定对象的犬之外的TRIP11，例如可以举出人TRIP11、猫TRIP11等，但不限定于此。需要说明的是，编码人TRIP11的碱基序列及其氨基酸序列分别如序列表的序列号46及47所示，与犬TRIP11的同源性在碱基序列中为88％、在氨基酸序列中为86％。即使在如犬和人之类的遗传远缘的哺乳动物间，各TRIP11的氨基酸序列的同源性也非常高为86％，因此一般认为即使在除人之外的哺乳动物之间，犬TRIP11及其同源因子也具有75％左右以上的高同源性。即，在本发明的方法中测定表达的TRIP11，没有特别限定，优选与序列号45所示的犬TRIP11的氨基酸序列具有75％以上的同源性，较优选具有80％以上的同源性。
需要说明的是，在本发明中，所谓“具有氨基酸序列”是指氨基酸残基以所述顺序进行排列。因此，例如所谓“具有序列号2所示的氨基酸序列的多肽”，表示具有序列号2所示的Met Ala Ala Leu··(中略)··Ile Thr Ser Pro氨基酸序列、大小为306个氨基酸残基的多肽。另外，例如有时将“具有序列号2所示的氨基酸序列的多肽”简称为“序列号2的多肽”。“具有碱基序列”的表达方式也同样。另外，在本发明中“多肽”是指多个氨基酸通过形成肽键而形成的分子，不仅包括构成的氨基酸数多的多肽分子，还包括氨基酸数少的低分子量分子(寡肽)，及全长蛋白质，本发明中还包括由序列号2、4、16、18、26、28、42、45或者47所示的氨基酸序列的全长形成的蛋白质。
在上述第1方法中，可以在试样中存在的上述癌特异性抗体的测定，可以通过使用了与该抗体进行抗原抗体反应的抗原物质的免疫测定而容易地进行。免疫测定方法本身如下所述为公知的常用方法。作为免疫测定的抗原物质，例如可以使用在罹癌犬体内诱导该抗体的、序列号2、16、26、42或者45的多肽。另外，抗体具有交叉反应性，即使实际为作为免疫原的抗原物质之外的分子，但如果分子上存在与免疫原的表位类似的结构，则该分子也可以通过抗原抗体反应与被诱导的针对免疫原的抗体结合。例如，在氨基酸序列的同源性高的多肽之间，很多情况下表位的结构也类似，在这种情况下两者可以显示出相同的抗原性。如下述实施例中的具体记载所示，序列号2、16、26、42或者45的源自犬的多肽，在罹癌犬体内与被诱导的针对该多肽的抗体进行抗原抗体反应，除此之外，在罹癌猫体内与被诱导的针对猫同源因子的抗体进行抗原抗体反应，另外，人同源因子与罹癌犬体内及罹癌猫体内被诱导的上述抗体进行抗原抗体反应。因此，在本发明的第1方法中作为免疫测定的抗原，还可以使用源自任一种哺乳动物的同源因子。
通常，如蛋白质等具有复杂结构的分子量大的抗原物质时，在分子上存在结构不同的多个部位。因此，在生物体内针对这种抗原物质，生产出对多个部位分别识别并结合的多种抗体。即，生物体内针对蛋白质等抗原物质生产的抗体，是作为多种抗体的混合物的多克隆抗体。本申请发明人等发现的、特异性存在于源自罹癌生物体的血清中的、与序列号2、16、26、42或者45的多肽或其同源因子通过抗原抗体反应而特异性结合的癌特异性抗体，另外也可以为多克隆抗体。需要说明的是，本发明中“多克隆抗体”是指在源自体内含有抗原物质的生物体的血清中存在的抗体，是在该生物体内被诱导的针对该抗原物质的抗体。
作为用于免疫测定罹癌生物体特异性抗体的抗原，在下述实施例A中，制备由序列号2全长区域形成的多肽、及由作为其人同源因子的序列号4全长区域形成的多肽，确认这些多肽与源自罹癌生物体的血清中上述抗体的反应性。在下述实施例B中，制备由序列号16(犬钙镁蛋白)全长区域形成的多肽、及由作为其人同源因子的序列号18(人钙镁蛋白)全长区域形成的多肽，确认这些多肽与源自罹癌生物体的血清中的上述抗体的反应性。在下述实施例C中，制备由序列号26(犬CEP)中的1514号～2339号氨基酸区域形成的多肽、及由序列号28(人CEP)中的1513号～2325号氨基酸的区域形成的多肽，确认这些多肽与源自罹癌生物体的血清中的上述抗体的反应性。在下述实施例D中，制备由序列号45(犬TRIP11)中的237号～1023号氨基酸的区域形成的多肽、及由序列号47(人TRIP11)中的236号～1023号氨基酸的区域形成的多肽，确认这些多肽与源自罹癌生物体的血清中的上述抗体的反应性。但是，由于上述抗体为多克隆抗体，所以如果为由序列号2、16、26、42或45或者其同源因子的全长形成的多肽则当然可以结合，另外即使为该多肽的片段，由于上述多克隆抗体中可以含有识别该片段的结构的抗体，所以仍然可以与源自罹癌生物体的血清中含有的上述抗体结合。即，无论是由序列号2、16、26、42或45或者其同源因子的全长形成的多肽，还是其片段，均可以同样地用于测定在罹癌生物体血清中特异性含有的上述多克隆抗体，均对癌的检测有用。
因此，本发明的第1方法中作为免疫测定的抗原使用的多肽，并不限定为由序列号2、16、26、42或45或者其同源因子(例如序列号4、18、28、47等)的全长形成的多肽，还包括由序列号2、16、26、42或45或者其同源因子的氨基酸序列中的连续7个以上、优选连续10个以上的氨基酸形成的多肽片段，与针对序列号2、16、26、42或45的源自犬的多肽或者其同源因子的多克隆抗体进行抗原抗体反应的多肽(以下，有时简称为“特异反应性部分多肽”)。需要说明的是，已知在该领域中如果为约7氨基酸残基以上的多肽，则发挥抗原性。
但是，氨基酸残基的数量太少时，也与针对试样中存在的其他蛋白质的抗体进行交叉反应的可能性增高，所述其他蛋白质即与序列号2、16、26、42或45的源自犬的多肽及其同源因子不同的蛋白质。因此，从提高免疫测定精度的观点考虑，优选作为抗原使用的多肽片段的氨基酸残基的数量较多。例如，为序列号2或者其同源因子时，优选使多肽片段的氨基酸残基数为30以上、较优选为100以上、更优选为200以上、进一步优选为250以上。为序列号16的犬钙镁蛋白或者其同源因子时，优选为30以上、较优选为100以上、更优选为200以上、进一步优选为400以上、更进一步优选为550以上。为序列号26或42的犬CEP或者其同源因子时，优选为30以上、较优选为100以上、更优选为300以上、进一步优选为600以上，进而也可以为1000以上、1500以上、2000以上。为序列号45的犬TRIP11或者其同源因子时，优选为30以上、较优选为100以上、更优选为300以上、进一步优选为600以上、进而也可以为1000以上、1500以上。
作为用作抗原的多肽的优选具体例，可以举出以下多肽。
(e)具有序列号2或者4所示的氨基酸序列的多肽，
(f)具有序列号16或者18所示的氨基酸序列的多肽，
(g)多肽，是由序列号26所示的氨基酸序列中连续500个以上的氨基酸构成的多肽，含有1514号～2339号氨基酸区域内连续500个以上的氨基酸；或者是由序列号28所示的氨基酸序列中连续500个以上的氨基酸构成的多肽，含有1513号～2325号氨基酸区域内连续500个以上的氨基酸，
(h)多肽，是由序列号45所示的氨基酸序列中连续500个以上的氨基酸构成的多肽，含有237号～1023号氨基酸区域内连续500个以上的氨基酸；或者是由序列号47所示的氨基酸序列中连续500个以上的氨基酸构成的多肽，含有236号～1023号氨基酸区域内连续500个以上的氨基酸。
上述(g)多肽(序列号26的多肽或其片段、或者序列号28的多肽或其片段)中，作为较优选的具体例，可以举出含有序列号26所示的氨基酸序列中的1514号～2339号氨基酸区域、由1000个以下的氨基酸形成的片段，及含有序列号28所示的氨基酸序列中的1513号～2325号氨基酸区域、由1000个以下的氨基酸形成的片段。作为特别优选的具体例，可以举出由序列号26中的1514号～2339号氨基酸区域(序列号35)形成的片段、及由序列号28所示的氨基酸序列中的1513号～2325号氨基酸区域(序列号36)形成的片段。
上述(h)多肽(序列号45的多肽或其片段、或者序列号47的多肽或其片段)中，作为较优选的具体例，可以举出含有序列号45所示的氨基酸序列中237号～1023号氨基酸区域、由1000个以下的氨基酸形成的片段，及含有序列号47所示的氨基酸序列中236号～1023号氨基酸区域、由1000个以下的氨基酸形成的片段。作为特别优选的具体例，可以举出由序列号45中237号～1023号氨基酸的区域(序列号54)形成的片段，及由序列号47所示的氨基酸序列中236号～1023号氨基酸区域(序列号55)形成的片段。
通常情况下即使在蛋白质抗原中该蛋白质的氨基酸序列中少数氨基酸残基被取代、缺失或者插入时，有时也具有与原蛋白质基本相同的抗原性，这对于本领域技术人员来说是众所周知的。因此，与上述多肽相同地，如下所述的多肽(以下，有时简称为“特异反应性修饰多肽”)也可以用于癌的检测，所述多肽具有在序列号2、16、26、42或45或者其同源因子的氨基酸序列中少数氨基酸残基被取代、缺失及/或者插入的序列，该多肽与序列号2、16、26、42或45或者其同源因子的序列具有80％以上、优选90％以上、较优选95％以上、更优选98％以上的同源性，并且通过抗原抗体反应与针对具有序列号2、16、26、42或45所示的氨基酸序列的多肽或者其同源因子的多克隆抗体特异性结合。优选该特异反应性修饰多肽具有在序列号2、16、26、42或45或者其同源因子(优选序列号4、18、28、47)的氨基酸序列中1至数个氨基酸残基被取代、缺失及/或者插入的氨基酸序列。
此处，氨基酸序列的“同源性”，是指将两氨基酸序列进行整列使需要比较的2个氨基酸序列的氨基酸残基尽量多地一致、用一致的氨基酸残基数除以总氨基酸残基数得到的以百分率表示的数值。上述整列时根据需要在比较的2个序列的一方或者双方中适宜地插入间隔。上述序列的整列化可以使用例如BLAST、FASTA、CLUSTALW等公知的程序进行。插入间隔时，上述总氨基酸残基数为将一个间隔作为一个氨基酸残基进行计数而得到的残基数。这样计数得到的总氨基酸残基数在比较的2个序列间不同时，同源性(％)是用一致的氨基酸残基数除以较长序列的总氨基酸残基数而计算得到的。需要说明的是，构成天然蛋白质的20种氨基酸可以根据性质的类似性分成如下几组：具有低极性侧链的中性氨基酸(Gly，Ile，Val，Leu，Ala，Met，Pro)、具有亲水性侧链的中性氨基酸(Asn，Gln，Thr，Ser，Tyr，Cys)、酸性氨基酸(Asp，Glu)、碱基性氨基酸(Arg，Lys，His)、芳香族氨基酸(Phe，Tyr，Trp)，已知在它们之间取代时多数情况下多肽的性质不发生变化。因此，将序列号2、16、26、42或45的多肽或者其同源因子中的氨基酸残基进行取代时，通过在上述各组间进行取代，能够维持与对应抗体的结合性的可能性增高。
与上述多肽相同地，如下所述的多肽(以下，有时简称为“特异反应性加成多肽”)也可以用于癌的检测，所述多肽含有本发明使用的上述多肽作为部分序列(即，在本发明中使用的多肽的一端或者两端加成其他(多)肽所得的产物)、并且通过抗原抗体反应与针对序列号2、16、26、42或45的多肽或者其同源因子的多克隆抗体特异性结合。
本发明中使用的上述多肽可以采用例如Fmoc法(芴甲氧羰基法)、tBoc法(叔丁基氧基羰基法)等化学合成法进行合成。另外，还可以利用各种市售的肽合成仪通过常用方法进行合成。另外，可以使用公知的基因工程学方法容易地制备。例如，从表达编码序列号2、16、26、42或45的多肽或者其同源因子的基因的组织中提取RNA，由该RNA通过RT-PCR制备该基因的cDNA，将该cDNA的全长或者所希望的一部分整合到表达载体中，导入宿主细胞，可以得到作为目标的多肽。编码序列号2的犬多肽、序列号16的犬钙镁蛋白、序列号26及42的犬CEP、以及序列号45的犬TRIP11的cDNA碱基序列，分别如序列号1、序列号15、序列号25及41、以及序列号44所示，编码它们的人同源因子的cDNA碱基序列分别如序列号3、序列号17(人钙镁蛋白)、序列号27(人CEP)、及序列号47(人TRIP11)所示，因此RT-PCR中使用的引物可以参照这些碱基序列容易地进行设计。另外，如下述所述，编码人之外的哺乳动物的同源因子的基因，可以通过参照犬的碱基序列及人同源因子的碱基序列设计得到的引物进行扩增，所以例如编码猫同源因子的cDNA也可以通过与上述相同的方法容易地进行制备。RNA的提取、RT-PCR、cDNA向载体中的整合、载体向宿主细胞的导入，例如可以如下所述采用公知的方法进行。另外，使用的载体及宿主细胞也为众所周知的，各种物质已经被市售。
作为上述宿主细胞，只要为可以表达上述多肽的细胞即可，可以为任何细胞，作为原核细胞的例子可以举出大肠杆菌等，作为真核细胞的例子可以举出猴肾细胞COS1、中国仓鼠卵巢细胞CHO等哺乳动物培养细胞、出芽酵母、裂殖酵母、蚕细胞、非洲爪蟾卵细胞等。
作为宿主细胞使用原核细胞时，作为表达载体可以使用具有在原核细胞中可以复制的起点、启动子、核糖体结合部位、DNA克隆部位、终止子等的表达载体。作为大肠杆菌用表达载体，可以举出pUC系列、pBluescriptII、pET表达系统、pGEX表达系统等。将编码上述多肽的DNA整合到这种表达载体中，用该载体转化原核宿主细胞后，如果培养所得的转化体，则可以使上述DNA编码的多肽在原核宿主细胞中表达。此时，还可以使该多肽以与其他蛋白质的融合蛋白形式进行表达。需要说明的是，编码上述多肽的DNA例如可以如上所述通过RT-PCR制备cDNA，另外还可以如下所述使用市售的核酸合成仪通过常用方法进行合成。需要说明的是，编码序列号2、4、16、18、26、28、42、45及47的多肽的基因的cDNA碱基序列，分别如序列表的序列号1、3、15、17、25、27、41、44及46所示。
作为宿主细胞使用真核细胞时，作为表达载体使用具有启动子、剪接区域、聚(A)附加部位等的真核细胞用表达载体。作为所述表达载体，可以举出pKA1、pCDM8、pSVK3、pMSG、pSVL、pBK-CMV、pBK-RSV、EBV载体、pRS、pcDNA3、pMSG、pYES2等。与上述同样，将编码本发明中使用的多肽的DNA整合到上述表达载体中，用该载体将真核宿主细胞转化后，如果对所得的转化体进行培养，则可以使上述DNA编码的多肽在真核宿主细胞中表达。作为表达载体使用pIND/V5-His、pFLAG-CMV-2、pEGFP-N1、pEGFP-C1等时，能够以附加有His标签、FLAG标签、myc标签、HA标签、GFP等各种标签的融合蛋白形式表达上述多肽。
表达载体向宿主细胞的导入，可以使用电穿孔法、磷酸钙法、脂质体法、DEAE葡聚糖法等公知的方法。
为了从宿主细胞中分离纯化作为目标的多肽，可以组合进行公知的分离操作。例如可以举出利用尿素等改性剂及表面活性剂的处理、超声波处理、酶消化、盐析及溶剂分步沉淀法、透析、离心分离、超滤、凝胶过滤、SDS-PAGE、等点聚焦电泳、离子交换色谱法、疏水色谱法、亲和层析、反相色谱法等。
通过以上方法所得的多肽中，还包括以与其他任意蛋白质的融合蛋白形态存在的多肽。例如可以举出与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)或His标签形成的融合蛋白等。上述融合蛋白的形态的多肽也包含在上述特异反应性加成多肽中，可以用于本发明的第1的检测方法。进而，已经在转化细胞中表达的多肽，有时被翻译后在细胞内接受各种修饰。上述翻译后被修饰的多肽只要与针对序列号2或者4的多肽的多克隆抗体具有结合性，则也可以在本发明的第1检测方法中使用。作为上述翻译修饰，可以举出N末端蛋氨酸的脱离、N末端乙酰化、附加糖链、利用细胞内蛋白酶的限制分解、肉豆蔻酰化、异戊二烯化、磷酸化等。
试样中抗体的测定可以通过使用上述多肽作为抗原的免疫测定容易地进行。免疫测定本身在该领域中是公知的，若按照反应类型分类则有夹层法、竞争法、凝集法、蛋白质印迹法等。另外，如按照标记进行分类则有放射免疫测定、荧光免疫测定、酶免疫测定、生物素免疫测定等，可以使用任意的方法进行上述抗体的免疫测定。没有特别限定，但由于夹层ELISA及凝集法的操作简便且不需要大型装置等，所以优选用作本发明方法中的上述抗体的免疫测定方法。作为抗体的标记使用酶时，作为酶，只要满足：转换数大、即使与抗体结合也稳定、使底物特异性着色等条件即可，没有特别限定，也可以使用通常的酶免疫测定方法中使用的酶，例如过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶等。另外还可以使用酶抑制剂及辅酶等。上述酶与抗体的结合可以通过使用马来酰亚胺化合物等交联剂的公知的方法进行。作为底物，可以根据所使用的酶的种类使用公知的物质。例如作为酶使用过氧化物酶时，可以使用3，3’，5，5’-四甲基联苯胺，另外作为酶使用碱性磷酸酶时可以使用对硝基苯酚等。作为放射性同位素可以使用125I及3H等通常放射免疫测定中使用的物质。作为荧光色素，可以使用异硫氰酸荧光素(FITC)及四甲基罗丹明异硫氰酸酯(TRITC)等通常荧光抗体法中使用的物质。
需要说明的是，上述免疫测定方法本身是公知的，在本说明书中没有必要对其进行说明，但若简单地记载则为：例如在夹层法中，将作为抗原使用的上述多肽在固相中进行固定化，使其与血清等试样反应，清洗后使适当的第二抗体进行反应，清洗后测定与固相结合的第二抗体。由于通过将抗原多肽在固相中进行固定化，可以容易地除去未结合的第二抗体，所以优选本发明的癌的检测方法的方案。作为第二抗体，例如如果试样为源自犬的抗体则可以使用抗犬IgG抗体。通过用上述示例的标记物质标记第二抗体，可以测定结合于固相的第二抗体。这样测定得到的第二抗体量相当于血清试样中的上述抗体量。作为标记物质使用酶时，加入在酶作用下分解并显色的底物，通过光学方法测定底物的分解量，由此可以测定抗体量。作为标记物质使用放射性同位素时，可以通过闪烁计数器(Scintillation Counter)等测定放射性同位素发出的放射线量。
本发明的第2方法，能够测定包含在从生物体得到的试样中的、序列号2的多肽或其同源因子、钙镁蛋白、序列号26或42的CEP或其同源因子、及TRIP11中的至少任一种。如上所述，在癌患者体内，与序列号2的多肽或其同源因子、犬及人等的钙镁蛋白、序列号26或42的CEP或其同源因子、或者犬及人等TRIP11进行抗原抗体反应的癌特异性抗体的量明显较多，这表示在癌患者体内该癌特异性抗体的抗原、即上述多肽或者其同源因子的产生量明显较多。通过测定该抗原本身也可以检测癌，如下述实施例中的具体记载所示。因此，通过测定序列号2的多肽或其同源因子、钙镁蛋白、序列号26或42的CEP或其同源因子、或者TRIP11本身，也可以与上述第1方法同样地检测生物体内的癌。
试样中的多肽的测定可以通过公知的免疫测定方法容易地进行。具体而言，例如制备与序列号2、16、26、42或45的多肽或者其同源因子进行抗原抗体反应的抗体或者其抗原结合性片段，使用其进行免疫测定，由此可以测定能够存在于试样中的序列号2、16、26、42或45的多肽或者其同源因子。如上所述，由于抗体具有交叉反应性，所以例如使用与序列号2、16、26、42或45的源自犬的多肽进行抗原抗体反应的抗体或者其抗原结合性片段，不仅可以测定序列号2、16、26、42或45的源自犬的多肽，还可以测定其他哺乳动物同源因子、例如序列号4、18、28或47的人同源因子、及猫同源因子等。免疫测定方法本身为上述公知的常用方法。
此处，所谓“抗原结合性片段”表示抗体分子中含有的Fab片段及F(ab’)2片段之类、与抗原具有结合能力的抗体片段。抗体可以为多克隆抗体也可以为单克隆，为了进行免疫测定等优选为重现性高的单克隆抗体。以多肽作为免疫原的多克隆抗体及单克隆抗体的制备方法是公知的，可以通过常用方法容易地进行。例如，以匙孔血蓝蛋白(KLH)及酪蛋白等载体蛋白上结合有多肽的物质作为免疫原，与佐剂一同对动物进行免疫，由此可以诱发针对该多肽的抗体。将从免疫后的动物中采集的脾细胞及淋巴细胞之类抗体产生细胞与骨髓瘤细胞细胞进行融合来制备杂交瘤，选择出产生抗体的杂交瘤，所述抗体是与序列号2、16、26、42或45的蛋白质或者其同源因子结合的抗体，使该杂交瘤增殖，可以从培养上清液中得到以上述蛋白质作为对应抗原的单克隆抗体。需要说明的是，上述方法为公知的常用方法。
本发明的第3方法可以测定mRNA，所述mRNA编码能包含在从生物体得到的试样中的、序列号2的多肽或其同源因子、钙镁蛋白、序列号26或42的CEP或其同源因子及TRIP11中的任一种。如下述实施例中的具体记载所式，编码序列号2的源自犬的多肽或序列号4的其人同源因子的mRNA；编码序列号16的犬钙镁蛋白或序列号18的人钙镁蛋白的mRNA；编码序列号26或42的犬CEP或者序列号28的其人同源因子的mRNA；及编码序列号45的犬TRIP11或者序列号47的人TRIP11的mRNA在癌细胞中显著高地表达。因此，通过测定试样中的该mRNA也可以检测生物体内的癌。
试样中的mRNA例如可以通过将该mRNA作为模板的实时RT-PCR检测之类常用方法进行定量，通过作为常用方法的RNA印迹中的染色强度等也可以大概地进行定量。由于编码序列号2、4、16、18、26、28、42、45及47的多肽的cDNA的序列分别如序列号1、3、15、17、25、27、41、44及46所示，所以以所述序列作为基础，制备与序列号1、3、15、17、25、27、41、44或者46所示的碱基序列中的部分区域进行特异性杂交的多核苷酸(以下称作“癌检测用多核苷酸”)，使用该多核苷酸作为探针及核酸扩增法中的引物，能够测定该mRNA在试样中的存在量。如下所述，如果为与序列号1或者3所示的碱基序列中的部分区域特异性杂交的多核苷酸，则也可以测定编码除犬及人之外的哺乳动物中的同源因子的mRNA。同样，如果为与序列号15或者17所示的碱基序列中的部分区域特异性杂交的多核苷酸，则也可以测定编码除犬及人之外的哺乳动物中的钙镁蛋白的mRNA。如果为与序列号25、27或者41所示的碱基序列中的部分区域特异性杂交的多核苷酸，则也可以测定编码除犬及人之外的哺乳动物中的同源因子的mRNA。如果为与序列号44或者46所示的碱基序列中的部分区域特异性杂交的多核苷酸，则也可以测定编码除犬及人之外的哺乳动物中的TRIP11的mRNA。需要说明的是，本发明中多核苷酸可以为RNA也可以为DNA。
此处，所谓“特异性杂交”表示在通常杂交的条件下，仅与作为对象的部分区域杂交，而与其他区域实质上不杂交。
所谓“在通常杂交的条件下”，是指通常PCR在通过退火或探针进行检测中使用的条件下，例如在利用了Taq聚合酶的PCR时，是指使用50mM KCl、10mM Tris-HCl(pH8.3～9.0)、1.5mM MgCl2等通常的缓冲液，在54℃～60℃左右适当的退火温度下进行反应；另外例如在Northern杂交时，是指使用5×SSPE、50％甲酰胺、5×Denhardt’s solution、0.1～0.5％SDS等通常的杂交溶液，在42℃～65℃左右适当的杂交温度下进行反应。但是，适当的退火温度或者杂交温度不限定于上述示例，可以基于作为引物或者探针使用的癌检测用多核苷酸的Tm值及实验者的经验确定，只要为本领域技术人员，即可容易地确定。
所谓“实质上不杂交”是指完全不杂交，或者即使杂交也远远小于与作为对象的部分区域杂交的量，只杂交有微量，为相对而言可以忽视程度。作为在上述条件下特异性杂交的多核苷酸，可以举出与对象的部分区域的碱基序列具有一定以上的同源性的多核苷酸，例如可以举出具有70％以上、优选80％以上、较优选90％以上、更优选93％以上、更优选95％以上、进一步更优选98％以上的同源性的多核苷酸。最优选该多核苷酸与对象的部分区域的碱基序列具有相同的碱基序列。同源性的定义与上述氨基酸序列的同源性相同。需要说明的是，癌检测用多核苷酸的末端即使含有与对象不杂交的区域，为探针时如果杂交的区域占探针总体的约一半以上则也可以用于检测，另外为引物时如果杂交的区域占引物总体的约一半以上且处于3’末端侧，则由于可以正常进行退火并产生延伸反应，所以也可以用于检测。如上所述，在癌检测用多核苷酸的末端包含不杂交的区域的情况下，计算与对象的碱基序列的同源性时，不考虑不杂交的区域，仅着眼于杂交的区域进行计算。
需要说明的是，本发明中所谓“部分区域”是指序列号1、3、15、17、25、27、41、44或者46所示的碱基序列中的一部分区域，优选为连续18个碱基以上的区域。需要说明的是，本发明中提到“序列号1所示的碱基序列”时，除序列号1实际表示的碱基序列之外还包含与其互补的序列。因此，例如在提到“具有序列号1所示的碱基序列的多核苷酸”时，包含具有序列号1实际表示的碱基序列的单链多核苷酸、具有其互补的碱基序列的单链多核苷酸、及由它们形成的双链多核苷酸。制备本发明使用的多核苷酸时、及制备编码本发明使用的多肽的多核苷酸时，可以选择适当的任一种碱基序列，只要为本领域技术人员则可以容易地进行选择。
癌检测用多核苷酸的碱基数从确保特异性的观点考虑，优选为18个碱基以上。在作为探针使用时，大小优选为18个碱基以上、较优选为20个碱基以上，优选为编码区域的全长以下；作为引物使用时，大小优选为18个碱基以上，优选为50个碱基以下。作为癌检测用多核苷酸的优选例，可以举出由序列号1、3、15、17、25、27、41、44或者46所示的碱基序列中连续18个碱基以上形成的多核苷酸。
参照本说明书本领域技术人员可以明确，测定编码序列号2、16、26或者45的犬多肽的mRNA量时，可以使用分别与序列号1、15、25或者44中的部分区域特异性杂交的多核苷酸，另外测定编码序列号4、18、28或者47的人同源因子的mRNA量时，可以分别使用与序列号3、17、27或者46中的部分区域特异性杂交的多核苷酸。但是，同源因子之间通常在碱基序列水平上同源性高，序列号1和3为93％、序列号15和17为90％、序列号25和27为87％、序列号44和46为88％，同源性均非常高。因此，与序列号1、15、25或者44中的部分区域特异性杂交的多核苷酸可以分别与对应于该部分区域的序列号3、17、27或者46中的部分区域特异性杂交。实际上如下述实施例中的记载所示，例如如果使用具有序列号7及8分别表示的碱基序列的一对引物单元，则由于与序列号1中的部分区域和序列号3中的部分区域均特异性杂交，所以编码序列号2的源自犬的多肽的mRNA、及编码作为其人同源因子的序列号4的多肽的mRNA均可以测定(实施例A)。如果使用具有序列号19及20的碱基序列的一对引物单元，则由于与序列号15中的部分区域和序列号17中的部分区域均特异性杂交，所以编码序列号16的犬钙镁蛋白的mRNA、及编码作为其人同源因子的序列号18的人钙镁蛋白的mRNA均可以测定(实施例B)。如果为具有序列号29及30的碱基序列的一对引物单元，则由于与序列号25中的部分区域和序列号27中的部分区域特异性杂交，另外与序列号41中的部分区域也特异性杂交，所以编码序列号26或者42的犬CEP的mRNA和编码其作为人同源因子的序列号28的人CEP的mRNA均可以测定(实施例C)。如果为具有序列号48及49的碱基序列的一对引物单元，则由于与序列号44中的部分区域和序列号46中的部分区域特异性杂交，所以编码序列号45的犬TRIP11的mRNA及编码作为其人同源因子的序列号47的人TRIP11的mRNA均可以测定(实施例D)。因此，例如使用与序列号1；15；25；或者44的犬的碱基序列中的部分区域特异性杂交的多核苷酸，不仅可以测定编码序列号2；16；26及42；或者45的犬多肽的mRNA，也可以分别测定编码它们的人同源因子即序列号4；18；28；或者47的多肽的mRNA，同样地还可以测定编码猫等其他哺乳动物的同源因子的mRNA。
设计癌检测用多核苷酸时，较优选选择序列号1和3之间、序列号15和17之间、序列号25和27之间或者序列号44和46之间同源性特别高的(优选碱基序列相同)部分区域。如果是在犬和人之间同源性特别高的部分区域，则可以预测在其他动物种的同源基因中也存在与该区域的同源性非常高的区域，所以如果如上所述选择部分区域，则还可以提高测定mRNA的精度，所述mRNA是编码除犬及人之外的动物种的同源因子的mRNA。
使用与受试核酸的部分区域特异性杂交的多核苷酸作为PCR之类核酸扩增法的引物或者探针来测定受试核酸的方法，其本身是公知的，例如除下述实施例中具体说明的RT-PCR之外，还可以举出RNA印迹、原位杂交等。本发明中测定mRNA量时可以采用所述公知的测定方法中的任一种。
PCR之类核酸扩增法本身在本领域是公知的，其中使用的试剂盒及装置也有市售，因此可以容易地进行。即，例如可以如下进行：将作为模板的受试核酸(例如编码下述蛋白质的基因的cDNA，所述蛋白质具有序列号2、4、16、18、26、28、45或者47所示的氨基酸序列)和一对癌检测用多核苷酸(引物)在公知的缓冲液中在Taq聚合酶及dNTP存在下，通过改变反应液的温度进行变性、退火、延伸各工序。通常，变性工序在90～95℃下进行，退火工序在模板和引物的Tm或者其附近(优选在±4℃以内)进行，延伸工序在Taq聚合酶最适温度即72℃下进行。各工序可以在30秒～2分钟左右内适当选择。例如将该热循环反复25～40次左右，由此将用一对引物夹持的模板核酸的区域扩增。需要说明的是，核酸扩增法不限定于PCR，还可以使用本领域公知的其他核酸扩增法。如上所述，使用一对癌检测用多核苷酸作为引物、使用受试核酸作为模板进行核酸扩增法时，受试核酸被扩增，但相对于此，试样中不含受试核酸时不引起扩增，因此通过检测扩增产物可以得知试样中是否存在受试核酸。扩增产物的检测可以如下进行，将扩增后的反应溶液进行电泳，将条带用溴化乙锭等染色的方法，及将电泳后的扩增产物在尼龙膜等固相中进行固定化，使其与和受试核酸特异性杂交的标记探针进行杂交，清洗后检测该标记。另外，通过进行使用了猝灭荧光色素(quencher fluorochrome)和报告荧光色素(reporter fluorochrome)的所谓实时PCR检测，也可以定量被测体中受试核酸的量。需要说明的是，实时PCR检测用试剂盒也有市售，所以可以容易地进行。进而，还可以基于电泳条带的强度对受试核酸进行半定量。需要说明的是，受试核酸可以为mRNA，也可以为由mRNA逆转录的cDNA。作为受试核酸将mRNA扩增时，也可以采用使用了上述一对引物的NASBA法(3SR法、TMA法)。NASBA法本身是公知的，其中使用的试剂盒也有市售，所以可以使用上述一对引物容易地进行。
作为探针，可以使用在癌检测用多核苷酸中附有荧光标记、放射标记、生物素标记等标记的标记探针。多核苷酸的标记方法本身是公知的。将受试核酸或者其扩增物进行固相化，与标记探针进行杂交，清洗后测定与固相结合的标记，由此可以检查试样中是否存在受试核酸。或者还可以将癌检测用多核苷酸进行固相化，使受试核酸杂交，用标记探针等检测结合于固相上的受试核酸。此时，结合于固相上的癌检测用多核苷酸也称为探针。需要说明的是，使用了多核苷酸探针的受试核酸的测定方法在本领域也是公知的，可以通过如下方法进行：在缓冲液中使多核苷酸探针与受试核酸在Tm或者其附近(优选在±4℃以内)接触由此使其杂交，清洗后测定与杂交的标记探针或者固相探针结合的模板核酸。所述方法中包括例如RNA印迹、原位杂交、DNA印迹法等公知方法。本发明中还可以适用公知的任一种方法。
本发明的检测方法基于如上所述测定的多肽的表达量，判断对象生物体是否是癌等。癌的检测可以仅测定对象生物体中多肽的表达，但从提高检测精度的观点考虑，优选如下方案：调查1至多位健康者试样中多肽的表达量(抗体量、多肽量或者mRNA量)，取得健康者基准值，将对象生物体的测定值与该健康者基准值进行比较。在期望进一步提高检测精度的情况下，也可以从已知患癌的多位患者体内取得试样，检测这些试样中多肽表达量，获得癌患者基准值，将对象生物体的测定值与健康者基准值及癌患者基准值两者进行比较。上述基准值例如可以通过将各试样中的多肽表达量数值化、计算其平均值来确定。需要说明的是，可以预先对多位健康者及癌患者检测多肽表达量，来确定健康者基准值与癌患者基准值。因此，本发明的方法中进行与基准值的比较时还可以使用预先确定的基准值。
上述4种多肽中如果以两种以上的多肽的表达量作为指标，则根据任一种多肽的表达量检测出癌时，可以判断对象生物体患癌(参见下述实施例E)。
本发明的检测方法可以组合使用利用其他癌抗原及癌标记物的诊断。由此，可以进一步提高癌的检测精度。例如，本发明的方法中测定上述癌特异性抗体时，可以与上述多肽相同地组合使用癌组织中较多表达的其他多肽作为抗原。另外，也可以将本发明的方法和利用已知的癌标记物进行的诊断组合进行。
根据本发明的检测方法，可以检测出生物体内的癌。特别是，如下述实施例的记载所示，由于根据本发明的方法可以检测小到肉眼看不见的大小的肿瘤及体内深部的肿瘤，所以对癌的早期发现有用。另外，如果对癌治疗后处于追踪观察中的患者使用本发明的检测方法，则在癌复发时可以早期检测出该癌。
另外，罹癌生物体中，如果表达作为本发明测定对象的上述规定的多肽的癌细胞数增加，则相应地该生物体内的该多肽及其mRNA的蓄积量增大，血清中产生较多针对上述多肽的抗体。另一方面，如果癌细胞数减少，则相应地生物体内的该多肽及其mRNA的蓄积量减少，血清中的针对上述多肽的抗体减少。因此，上述规定的多肽的表达量较多时，可以判断肿瘤增大及癌转移、即癌的进展程度有所进展。实际上如下述实施例中的具体记载所示，伴随着肿瘤增大及转移等癌的发展，可以观察到罹癌生物体血清中上述抗体量上升。如上所述，根据本发明的方法还可以检测出癌的进展程度。
另外，如下述实施例所述，在相同种类的肿瘤中恶性型肿瘤中的上述抗体量显著高于良性型肿瘤中的上述抗体量。因此，上述规定的多肽的表达量较多时，可以判断癌的恶性程度较高。即，根据本发明的方法还可以检测出癌的恶性程度。
进而，将上述规定的多肽的表达量的增减作为指标，还可以监控癌的治疗效果。如下述实施例中的记载所示，手术摘除肿瘤后为了防止复发而给与了抗癌剂的个体，其多肽表达量低于罹癌状态。为良性肿瘤时也同样，在切除前确认到多肽的表达时，如果能够完全切除肿瘤则表达量降低。因此，通过观察癌治疗中及治疗后的个体的上述多肽的表达量，可以获得尽早得知抗癌剂的治疗效果、及肿瘤摘除后有无残留肿瘤、以及追踪观察中转移·复发的线索。可以进行适合的治疗时，多肽的表达量低于治疗前罹癌状态，因此可以判断对该生物体进行的(正在进行的)治疗的效果良好。多肽表达量上升或者维持原状时，或者呈现暂时降低后又上升时，可以判断治疗效果不充分，成为对治疗方法的选择有用的判断材料，即判断是否需要变为其他治疗方法及改变抗癌剂给药量等。
作为为本发明癌检测方法的对象的癌，为表达序列号2的多肽或其同源因子、钙镁蛋白、序列号26或42的CEP或其同源因子及TRIP11中至少一种的癌，可以举出脑肿瘤、头、颈部、肺、子宫、或食道的鳞状上皮癌、黑色素瘤、肺或子宫的腺癌、肾癌、恶性混合肿瘤、肝细胞癌、基底细胞癌、棘细胞瘤样龈瘤(acanthomatousepulis)、口腔内肿瘤、肛门周围腺癌、肛门囊肿、肛门囊顶泌腺癌、塞尔托利细胞瘤(Sertoli cell tumor)、阴道前庭癌、皮脂腺癌、皮脂腺上皮瘤、脂腺腺瘤、汗腺癌、鼻腔内腺癌、鼻腺癌、甲状腺癌、大肠癌、支气管腺癌、腺癌、腺管癌、乳腺癌、复合型乳腺癌、乳腺恶性混合肿瘤、乳管内乳头状腺癌、纤维肉瘤、血管外皮细胞瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、软组织肉瘤、组织细胞肉瘤、粘液肉瘤、未分化肉瘤、肺癌、肥大细胞瘤、皮肤平滑肌瘤、腹腔内平滑肌瘤、平滑肌瘤、慢性淋巴细胞性白血病、淋巴瘤、消化管型淋巴瘤、消化器型淋巴瘤、小～中细胞型淋巴瘤、肾上腺髓质肿瘤、粒层细胞瘤(granulosa cell tomor)、嗜铬细胞瘤、膀胱癌(移行细胞癌)、化脓性炎症、腹腔内肝脏肿瘤、肝癌、浆细胞瘤、恶性血管外膜细胞瘤、血管肉瘤、肛门囊腺癌、口腔癌、转移性恶性黑色素瘤、无黑色素性恶性黑色素瘤、皮肤恶性黑色素瘤、恶性肌上皮瘤、恶性睾丸上皮瘤、精原细胞瘤(seminoma)、大肠腺癌、胃腺癌、低度皮脂腺癌、耳垢腺癌、顶泌腺癌(Apocrine carcinoma)、低分化型顶泌腺癌、恶性纤维性组织细胞瘤、多发性骨髓瘤、间叶组织恶性肿瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、起因不明的肉瘤、软组织肉瘤(纺锤形细胞肿瘤)、低分化肉瘤、滑膜肉瘤、血管肉瘤、转移性恶性上皮肿瘤、管状乳腺腺癌、乳腺导管癌、炎性乳癌、生殖细胞瘤、白血病、浸润性毛发上皮瘤、中细胞型淋巴瘤、多中心型淋巴瘤、骨肉瘤(乳腺)、肥大细胞瘤(PatnaikII型)、肥大细胞瘤(GradeII)、平滑筋肉瘤等，但不限定于此。另外，作为本发明方法的对象的生物体为哺乳动物，优选为人及犬、猫。
作为用于本发明的方法的试样，可以举出血液、血清、血浆、腹水、胸水等体液、组织、细胞。特别是在上述第1方法及第2方法中，可以优选使用血清、血浆、腹水及胸水，另外在测定mRNA的上述第3方法中优选组织试样及细胞试样。
第1方法中作为免疫测定的抗原使用的上述多肽(即，序列号2、序列号16、序列号26或42、或者序列号45的源自犬的多肽及其同源因子、特异反应性部分多肽、特异反应性修饰多肽、以及特异反应性加成多肽)可以作为癌检测试剂提供。该试剂可以仅由上述多肽形成，另外也可以含有对该多肽的稳定化等有用的各种添加剂等。另外，该试剂还可以以在板及膜等固相中固定化的状态提供。
第2方法中对序列号2、序列号16、序列号26或42、或序列号45的犬多肽或者其同源因子进行免疫测定时使用的、与该犬多肽或者其同源因子进行抗原抗体反应的抗体或者其抗原结合性片段也可以作为癌检测试剂提供。此时的癌检测试剂可以仅由上述抗体或者抗原结合性片段形成，另外也可以含有对该抗体或者抗原结合性片段的稳定化等有用的各种添加剂等。另外，该抗体或者抗原结合性片段也可以为结合有锰及铁等金属的物质。将这种金属结合抗体或者抗原结合性片段给与体内时，由于在抗原蛋白质较多存在的部位中该抗体或者抗原结合性片段较多地积聚，所以如果通过MRI等测定金属，则可以检测出产生抗原蛋白质的癌细胞的存在。
进而，第3方法中用于mRNA测定的上述癌检测用多核苷酸也可以作为癌检测试剂提供。此时癌检测用试剂可以仅由该多核苷酸形成，另外也可以含有对该多核苷酸的稳定化等有用的各种添加剂等。该试剂中含有的该癌检测用多核苷酸优选为引物或者探针。癌检测用多核苷酸的条件及优选例如上所述。
实施例
以下，根据实施例更加具体地说明本发明。
实施例A-1：通过SEREX法制取新型癌抗原蛋白
(1)构建cDNA文库
使用酸-胍-苯酚-氯仿法(Acid guanidium-Phenol-Chloroform法)从健康犬的睾丸组织中提取全RNA，使用Oligotex-dT30mRNA purification Kit(宝酒造公司制)按照试剂盒所附的操作说明书纯化polyA RNA。
使用该得到的mRNA(5μg)构建犬睾丸cDNA噬菌体文库。构建cDNA噬菌体文库时使用cDNA Synthesis Kit，ZAP-cDNASynthesis Kit，ZAP -cDNA GigapackIII Gold Cloning Kit(STRATAGENE公司制)按照试剂盒所附的操作说明书构建文库。构建的cDNA噬菌体文库大小为1.3×106pfu/ml。
(2)利用血清筛选cDNA文库
使用上述已构建的源自犬睾丸的cDNA噬菌体文库进行免疫筛选。具体而言，在Φ90×15mm的NZY琼脂糖平板上感染宿主大肠杆菌(XL1-Blue MRF’)使其为2340克隆，在42℃下培养3～4小时，形成溶菌斑(plaque)，在37℃下用浸透了IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)的硝酸纤维素滤膜(Cellulose Nitrate Membranes)(Hybond C Extra：GE Healthecare Bio-Science公司制)覆盖培养板4小时，从而诱导·表达蛋白质，并使蛋白质转印到膜上。之后回收该膜，将其浸渍在含有0.5％脱脂奶粉的TBS(10mM Tris-HCl，150mM NaCl pH7.5)中，在4℃下振荡一夜，由此抑制非特异性反应。在室温下使此过滤膜与稀释500倍的患病犬血清反应2～3小时。
作为上述患病犬血清，使用从患有鳞状上皮癌的患病犬体内采集的血清。将这些血清保存在-80℃下，在即将使用前进行预处理。血清预处理的方法按照以下方法进行。即，用未插入外来基因的λZAP Express噬菌体感染宿主大肠杆菌(XL1-Blue MRF’)后，在NZY培养板的培养基中于37℃下培养一夜。然后向培养板中添加含有0.5M NaCl的0.2M NaHCO3 pH8.3的缓冲液，在4℃下静置15小时后，回收上清液作为大肠杆菌/噬菌体提取液。然后将回收的大肠杆菌/噬菌体提取液通入NHS-柱(GE Healthecare Bio-Science公司制)，将源自大肠杆菌·噬菌体的蛋白质固定化。在此蛋白固定化的柱中使患病犬血清通入·反应，从血清中除去吸附在大肠杆菌和噬菌体上的抗体。将只是仅仅通过柱子的血清馏分用含有0.5％脱脂奶粉的TBS稀释500倍，将其作为免疫筛选材料。
将经上述处理血清和上述融合蛋白印迹的膜用TBS-T(0.05％Tween20/TBS)清洗4次后，将用含有0.5％脱脂奶粉的TBS稀释5000倍的山羊抗犬IgG(Goat anti Dog IgG-h+I HRP conjugated：BETHYL Laboratories公司制)作为第二抗体在室温下反应1小时，使用NBT/BCIP反应液(Roche公司制)通过酶显色反应检测，从Φ90×15mm的NZY琼脂糖平板上采集与显色反应阳性部位相一致的菌落，使其溶解于500μl SM缓冲液(100mM NaCl、10mM MgClSO4、50mM Tris-HCl、0.01％明胶pH7.5)中。采用与上述相同的方法将显色反应呈阳性的菌落反复筛选二次、三次，直至菌落单一化，筛选出与血清中IgG反应的30940个噬菌体克隆，分离出一个阳性克隆。
(3)分离抗原基因的同源性检索
为了将通过上述方法分离所得的一个阳性克隆用于碱基序列解析，进行操作将噬菌体载体转换为质粒载体。具体而言，将宿主大肠杆菌(XL1-Blue MRF’)制成吸光度OD600为1.0的溶液，将上述溶液200μl和100μl经纯化的噬菌体溶液以及1μl ExAssist helperphage(STRATAGENE公司制)混合后，在37℃下反应15分钟，然后添加3ml LB培养基并在37℃下培养2.5～3小时，立即置于70℃水浴中保持温度20分钟，之后在4℃下以1000×g离心15分钟，回收上清液作为噬菌粒溶液。然后将噬菌粒宿主大肠杆菌(SOLR)制成吸光度OD600为1.0的溶液，将200μl上述溶液和10μl经纯化的噬菌体溶液混合后，在37℃下反应15分钟，取50μl接种于含有氨苄青霉素(终浓度50μg/ml)的LB琼脂培养基中，在37℃下培养一夜。采集经转化的SOLR单菌落，用含有氨苄青霉素(终浓度50μg/ml)的LB培养基在37℃下培养后，使用QIAGEN plasmid Miniprep Kit(Qiagen公司制)纯化含有目标插入片段的质粒DNA。
经纯化的质粒使用序列号5所示的T3引物和序列号6所示的T7引物，通过引物步测法来解析插入片段的全长序列。通过该序列解析获得序列号1所示的基因序列。通过该序列解析获得了序列号1所示的基因序列。使用该基因的碱基序列及氨基酸序列，运行同源性检索程序BLAST搜索(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)，进行与已知基因同源性的检索，结果表明所得的基因是编码未知功能蛋白质(Accession No.XP_535343)的基因(AccessionNo.XM_535343)。另外，该基因的人同源因子也为编码未知功能蛋白质(Accession No.NP_689873)的基因(Accession No.NM_152660)(同源性：碱基序列93％、氨基酸序列99％)。人同源因子的碱基序列如序列号3所示，氨基酸序列如序列号4所示。
(4)在各种组织中的表达解析
对于通过上述方法所得的基因，通过RT-PCR(ReverseTranscription-PCR)法检查其在犬及人的正常组织及各种细胞株中的表达。逆转录反应如下进行。即，使用TRIZOL试剂(invitrogen公司制)按照所附的操作说明书从50-100mg各种组织及各种细胞株5-10×106个细胞中提取全RNA。通过Superscript First-StrandSynthesis System for RT-PCR(invitrogen公司制)按照所附的操作说明书，用上述全RNA合成cDNA。人正常组织(脑、海马、睾丸、结肠、胎盘)的cDNA，使用Gene Pool cDNA(invitrogen公司制)、QUICK-Clone cDNA(Clontech公司制)及Large-Insert cDNALibrary(Clontech公司制)。PCR反应使用对获得的犬基因及其人同源基因具有特异性的引物(如序列号7及8所示)按照下列方法进行。即，加入各试剂和附加缓冲液使总量为25μl，其中使通过逆转录反应配制的样品为0.25μl，上述引物各为2μM，各dNTP为0.2mM，ExTaq聚合酶(宝酒造公司制)为0.65U，使用Thermal Cycler(BIO RAD公司制)，以94℃-30秒、55℃-30秒、72℃-1分钟为一个循环，将该循环重复进行30次。需要说明的是，对具有上述序列号7及8所示碱基序列的基因具有特异性的引物是扩增下述区域的引物，所述区域是序列号1所示碱基序列中87号～606号及序列号3所示碱基序列中173号～695号碱基所在的区域，使用该引物也可以检查犬基因及其人同源基因中任一种的表达。为了比较对照，同时也使用了GAPDH特异性的引物(如序列号9及10所示)。其结果如图1所示，获得的犬基因在健康犬组织中显著表达于睾丸，另一方面发现该基因在犬乳癌细胞株中显著表达。人同源基因的表达也与犬基因相同，在人正常组织中能够确认其表达的部位仅限于睾丸，但在人癌细胞中则于脑肿瘤、白血病、乳癌、肺癌中均检测出其表达，因此可以确认人同源基因也特异性地表达于睾丸和癌细胞中。
需要说明的是，在图1中纵轴上标号1表示上述鉴定的基因表达谱，标号2表示作为比较对照的GAPDH基因表达谱。
实施例A-2：新型癌抗原蛋白的制备
(1)重组蛋白质的制备
基于实施例A-1中所得的序列号1的基因，通过以下方法制备重组蛋白质。PCR如下进行：加入各试剂和附加缓冲液使总量为50μl，其中，使由实施例A-1中所得的噬菌粒溶液配制的供序列解析的载体为1μl，使含有NdeI及XhoI限制性酶切断序列的两种引物(如序列号11及12所示)各为0.4μM、dNTP为0.2mM、PrimeSTARHS聚合酶(宝酒造公司制)为1.25U，使用Thermal Cycler(BIO RAD公司制)，以98℃-10秒、55℃-15秒、72℃-1分钟为一个循环，将该循环重复进行30次。需要说明的是，由上述两种引物可以得到编码序列号2的氨基酸序列全长的区域。PCR之后，用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，用QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN公司制)纯化约930bp的DNA片段。
将经纯化的DNA片段与克隆载体pCR-Blunt(invitrogen公司制)连接。将其转化至大肠杆菌中后回收质粒，通过测序确认了经扩增的基因片段与靶序列一致。用NdeI及XhoI限制性酶处理与靶序列一致的质粒，用QIAquick Gel Extraction Kit纯化后，将靶基因序列插入到经NdeI、XhoI限制性酶处理的大肠杆菌用表达载体pET16b(Novagen公司制)中。通过使用该载体可产生His标签融合型重组蛋白质。将该质粒转化至表达用大肠杆菌BL21(DE3)，通过进行利用1mM IPTG的表达诱导，能够使靶蛋白在大肠杆菌内表达。
另外，基于序列号3的基因，使用以下方法制备人同源基因的重组蛋白质。PCR如下进行：加入各试剂和附加缓冲液使总量为50μl，其中，使实施例A-1制备的各种组织·细胞cDNA中已确认通过RT-PCR法表达的cDNA为1μl，使含有EcoRV及EcoRI限制性酶切断序列的两种引物(如序列号13及14所示)各为0.4μM、dNTP为0.2mM、PrimeSTAR HS聚合酶(宝酒造公司制)为1.25U，使用Thermal Cycler(BIO RAD公司制)，以98℃-10秒、55℃-15秒、72℃-1分钟为一个循环，将该循环重复进行30次。需要说明的是，从上述两种引物可以得到编码序列号4的氨基酸序列全长的区域。PCR之后，用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，用QIAquickGel Extraction Kit(QIAGEN公司制)纯化约930bp的DNA片段。
将经纯化的DNA片段与克隆载体pCR-Blunt(invitrogen公司制)连接。将其转化至大肠杆菌中后回收质粒，通过测序确认了经扩增的基因片段与靶序列一致。用EcoRV及EcoRI限制性酶处理与靶序列一致的质粒，用QIAquick Gel Extraction Kit纯化后，将靶基因序列插入到经EcoRV、EcoRI限制性酶处理的大肠杆菌用表达载体pET30a(Novagen公司制)中。通过使用该载体可产生His标签融合型重组蛋白质。将该质粒转化至表达用大肠杆菌BL21(DE3)，通过利用1mM IPTG的表达诱导，能够使靶蛋白在大肠杆菌内表达。
(2)重组蛋白质的纯化
将上述得到的、表达序列号1及序列号3的各个重组大肠杆菌在含有氨苄青霉素(终浓度100μg/ml)的LB培养基中在37℃下进行培养直至600nm处的吸光度为0.7左右，然后添加IPTG至终浓度为1mM，进一步在37℃下培养4小时。之后以4800rpm离心10分钟进行集菌。将此菌体球状物悬浮于磷酸盐缓冲生理盐水中，进而以4800rpm离心10分钟，清洗菌体。
将上述菌体悬浮于50mM Tris盐酸缓冲液(pH8.0)中，在冰上进行超声裂解。将大肠杆菌超声裂解液以6000rpm离心分离20分钟，所得上清液为可溶性馏分，沉淀为不溶性馏分。
将不溶性馏分悬浮于50mM Tris盐酸缓冲液(pH8.0)中，以6000rpm离心15分钟。重复该操作2次，除去蛋白酶。
将该残渣悬浮于含有6M胍盐酸盐(Sigma-Aldrich Japan公司制)、0.15M氯化钠的50mM Tris盐酸缓冲液(pH8.0)中，在4℃下静置15小时使蛋白质变性。该变性操作后，以6000rpm离心30分钟，将所得可溶性馏分添加到按照通用方法制得的镍螯合柱(载体Chelateing Sepharose(商标)Fast Flow(GE Health Care公司制)，柱容量5mL，平衡缓冲液：含有6M胍盐酸盐、0.15M氯化钠的50mMTris盐酸缓冲液(pH8.0))中，进一步在4℃下静置一夜，使其被吸附到经镍螯合化的载体上。将该柱载体以1500rpm离心5分钟，回收上清液，将柱载体悬浮在磷酸盐缓冲生理盐水中后，再次填充到柱中。
将未被柱吸附的馏分用为柱容量10倍量的含0.5M氯化钠的0.1M酢酸缓冲液(pH4.0)清洗处理后，立即用含有0.5M氯化钠的0.1M酢酸缓冲液(pH3.0)洗脱。采集柱容量6倍量的各洗脱馏分。靶蛋白的洗脱根据按照通用方法进行的考马斯染色法确认，根据该结果将洗脱馏分脱盐、浓缩，作为诊断用固相化材料。
实施例A-3：使用犬重组蛋白的癌诊断
(1)犬的癌诊断
从确认患有恶性或良性肿瘤的486只犬和6只健康犬体内采集血液，分离血清。使用实施例A-2制备的犬重组蛋白、抗犬IgG抗体按照ELISA法测定与该蛋白特异性反应的血清中的IgG抗体效价。
制备的蛋白如下进行固相化：将用磷酸盐缓冲生理盐水稀释为50μg/mL的重组蛋白质溶液按照100μL/孔添加到96孔ImmobilizerAmino Plate(NUNC公司制)中，在4℃下静置一夜。封闭如下进行：按照100μL/孔加入含有0.5％BSA(bovine serum albumin(牛血清白蛋白)、Sigma-Aldrich Japan公司制)的50mM碳酸氢钠缓冲溶液(pH8.3)(以下称为封闭溶液)，室温下振荡1小时。按照100μL/孔添加使用了封闭溶液进行稀释的500倍稀释血清，室温下振荡3小时进行反应。用含有0.05％Tween20(和光纯药工业公司制)的磷酸盐缓冲生理盐水(以下称为PBS-T)清洗3次，按照100μL/孔加入用封闭溶液稀释了3000倍的HRP修饰犬IgG抗体(Goat anti DogIgG-h+I HRP conjugated：BETHYL Laboratories公司制)，室温下振荡1小时进行反应。用PBS-T清洗3次，按照100μl/孔添加HRP底物TMB(1-Step Turbo TMB(四甲基联苯胺)、PIERCE公司制)，室温下进行酶底物反应30分钟。之后，按照100μl/孔加入0.5M硫酸溶液(Sigma-Aldrich Japan公司制)停止反应后，用微孔板读数仪测定450nm处的吸光度。作为对照，未将制备的重组蛋白质固相化的物质、不使罹癌犬血清反应的物质与上述同样地操作进行比较。
使用被摘除的肿瘤组织进行病理诊断，结果上述癌诊断中使用的全部486个样品中有311个样品确诊为恶性。
具体而言，上述样品接受了下述癌诊断，所述癌为：恶性黑色素瘤、恶性混合肿瘤、肝细胞癌、基底细胞癌、棘细胞瘤样龈瘤、口腔内肿瘤、肛门周围腺癌、肛门囊肿、肛门囊顶泌腺癌、塞尔托利细胞瘤、阴道前庭癌、皮脂腺癌、皮脂腺上皮瘤、脂腺腺瘤、汗腺癌、鼻腔内腺癌、鼻腺癌、甲状腺癌、大肠癌、支气管腺癌、腺癌、腺管癌、乳腺癌、复合型乳腺癌、乳腺恶性混合肿瘤、乳管内乳头状腺癌、纤维肉瘤、血管外皮细胞瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、软组织肉瘤、组织细胞肉瘤、粘液肉瘤、未分化肉瘤、肺癌、肥大细胞瘤、皮肤平滑肌瘤、腹腔内平滑肌瘤、平滑肌瘤、鳞状上皮癌、慢性淋巴细胞性白血病、淋巴瘤、消化管型淋巴瘤、消化器型淋巴瘤、小～中细胞型淋巴瘤、肾上腺髓质肿瘤、粒层细胞瘤、嗜铬细胞瘤、膀胱癌(移行细胞癌)、化脓性炎症、腹腔内肝脏肿瘤、肝癌、浆细胞瘤、恶性血管外膜细胞瘤、血管肉瘤、肛门囊腺癌、口腔癌、转移性恶性黑色素瘤、无黑色素性恶性黑色素瘤、皮肤恶性黑色素瘤、恶性肌上皮瘤、恶性睾丸上皮瘤、精原细胞瘤(seminoma)、大肠腺癌、胃腺癌、低度皮脂腺癌、耳垢腺癌、顶泌腺癌、低分化型顶泌腺癌、恶性纤维性组织细胞瘤、多发性骨髓瘤、间叶组织恶性肿瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、起因不明的肉瘤、软组织肉瘤(纺锤形细胞肿瘤)、低分化肉瘤、滑膜肉瘤、血管肉瘤、转移性恶性上皮肿瘤、管状乳腺腺癌、乳腺导管癌、炎性乳癌、生殖细胞瘤、白血病、浸润性毛发上皮瘤、中细胞型淋巴瘤、多中心型淋巴瘤、骨肉瘤(乳腺)、肥大细胞瘤(PatnaikII型)、肥大细胞瘤(GradeII)、平滑筋肉瘤等。
来自上述罹癌犬生物体的血清如图3所示针对重组蛋白质的抗体效价明显高。为健康犬平均值的2倍以上即可根据本诊断方法判断为恶性时，可知有192个样品可以诊断为恶性，为61.7％。该192个样品的癌的种类如下所述。需要说明的是，根据样品，存在患多种癌的样品，以下所示的数值为每种癌的累计值。
恶性黑色素瘤10例、淋巴瘤9例、嗜铬细胞瘤1例、粒层细胞瘤1例、肝细胞癌3例、血管瘤1例、恶性睾丸肿瘤9例、口腔内肿瘤4例、肛门周围腺癌7例、骨肉瘤3例、纤维肉瘤8例、腺管癌19例、软骨肉瘤1例、乳腺癌35例、复合型乳腺癌24例、肺癌1例、皮脂腺癌2例、鼻腺癌2例、肥大细胞瘤26例、肾上腺髓质肿瘤1例、平滑筋肉瘤2例、鳞状上皮癌7例、慢性淋巴细胞性白血病1例、未分化肉瘤1例、恶性混合瘤2例、血管外膜细胞瘤1例、左膝关节部肿瘤1例、左肺后叶肿瘤1例、膀胱癌(移行细胞癌)1例、软组织肉瘤(纺锤形细胞肿瘤)1例、耳垢腺癌1例、多中心型淋巴瘤2例、脂肪肉瘤1例、滑膜肉瘤1例、浸润性毛发上皮瘤1例、肛门囊腺癌1例。
进而，使用从末期癌患病犬体内采集的胸水、腹水，进行相同的诊断，结果可以检测出与使用血清的本诊断方法的结果相同的值，可以诊断为癌。
另外，可知通过采用本诊断方法还可以进行肉眼不可见部分的癌诊断、进展程度诊断、恶性程度诊断、术后的追踪诊断、复发诊断、转移诊断等。以下举出数例图4所示的详细诊断的具体例子。
(2)-1肉眼不可见肿瘤的癌诊断
患病犬1(FLAT COATED RETRIEVER)在2007年6月7日时间点未确认到肿瘤，但在其约20日后即2007年6月24日在左上颚犬齿根的齿龈中发现了蒂状的直径2mm的肿瘤。在发现之日将蒂部结扎并切除。在肉眼可以确认肿瘤以前，可以确认到450nm处的吸光度为0.32，为明显高的值，与肿瘤发现时的0.37比较变化不大。由该结果可知通过使用本方法还可以诊断腹腔内等肉眼不可见部分的癌。
另外，可以确认从能够用肉眼确认肿瘤以前值上升，一般认为显示出肿瘤发生的前兆。由此可知，其对定期健康检查等健康诊断也有用
在切除肿瘤2周后再次对该患病犬1进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.07，显著降低。所以，还可以确认引起抗体效价上升的癌抗原表达的肿瘤被完全切除。((2)-4术后的追踪诊断)
(2)-2癌的进展程度诊断
癌的进展程度通过肿瘤的大小及深度、对周围组织带来何种影响、是否发生转移等进行判断。一般认为转移即癌发展时可以检测出比以前高的值。进而作为又一例，以下对根据给与抗癌剂的具体例进行的进展程度诊断详细说明。
患病犬2(杂种)是于2006年10月13日通过右后肢断足摘除肿瘤的患病犬。使用摘除的肿瘤进行病理诊断，结果为稍接近3级的2级高恶性程度肥大细胞瘤。于2007年3月12日在右腹股沟和肝脏确认到转移·复发，此时未作手术开始利用抗癌剂(长春花碱·脱氢皮质醇)进行治疗。自确认到转移·复发的时间点开始给与抗癌剂，1周后、2周后、4周后、8周后再次给与抗癌剂。每次给药的血清诊断结果为450nm处的吸光度分别为0.36、0.37、0.26、0.20、0.29。从给药开始后至第4周以短的间隔给与抗癌剂，值慢慢降低，因此可知可以抑制癌的发展。但是，在自上次给药间隔1个月的、8周后，确认到值再次上升，表明癌再次发展。此时临床上也确认到肿瘤变大。从患病犬2的结果可知还可以对癌进展程度进行诊断。进而，可知作为其一例，如上所述还可以诊断抗癌剂治疗效果。
(2)-3癌的恶性程度诊断
基底细胞瘤包括恶性型和良性型，近年来新WHO中存在以恶性型为基底细胞癌、以良性型为毛芽瘤进行分类的倾向。
被诊断为基底细胞癌(恶性)的患病犬3(比格犬)在手术时进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.35。另一方面，被诊断为毛芽瘤(良性)的患病犬4(杂种)在手术时进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0完全未检测出。由此可知，即使相同的基底细胞瘤也可以诊断出为恶性型基底细胞癌和良性型毛芽瘤。
接下来，举出乳腺肿瘤的例子。乳腺肿瘤包括乳腺癌及乳腺恶性混合肿瘤等恶性肿瘤、和未表现出恶性症状的良性乳腺肿瘤。患病犬5(约克犬)为于2006年5月17日因乳腺恶性混合肿瘤和乳腺癌接受了摘除手术的患病犬。通常，乳腺的混合肿瘤即使为恶性由于缺乏向周围的浸润性，所以也容易完全切除，切除后的追踪诊断大多良好。但是使用被摘除的组织进行的病理诊断中，患病犬5标本的一部分成分中呈现浸润性，诊断为恶性程度高的肿瘤。另外，乳腺癌通常为向周围的浸润性强且容易引起复发及转移的肿瘤。在患病犬5标本上肿瘤细胞未呈现浸润性，但由于部分材料的存在使在其他区域恶性程度高的成分也可能增殖。因此，病理诊断结果表明患病犬5为恶性程度高的乳癌。该手术时采集的血清诊断结果为450nm处的吸光度为0.39。另一方面，患病犬6(约克夏犬，YorkshireTerrier)为于2007年1月28日接受了乳腺肿瘤摘除手术的患病犬。在使用了此时的摘除组织的病理诊断中，细胞异型性为轻度，诊断是未见恶性症状的良性乳腺肿瘤。该手术时采集的血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.05。由以上2个样品的结果也可知恶性程度高的肿瘤与恶性程度低即良性肿瘤相比，值较大。
(2)-4术后的追踪诊断
患病犬7(西施犬)因口腔内肿瘤入院就诊并于2007年3月22日进行了摘除手术。此时进行的血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.40。另外，在使用摘除组织的病理诊断中，诊断为恶性棘细胞瘤样龈瘤。该肿瘤具有远位转移少但若切除不充分则容易复发的特征。因此能否通过手术完全切除肿瘤是重要的。2007年5月18日追踪观察时确认到450nm处的吸光度为0.25且抗体效价降低。2007年8月之前未确认到复发。由此可以认为患病犬7由于能够完全切除肿瘤所以血清诊断结果与手术时相比降低。
(2)-5复发诊断
患病犬8(哈士奇犬)于2007年5月8日进行乳腺癌摘除手术。此时进行的血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.08。使用摘除组织的病理诊断中，异型性强的上皮系细胞主要形成腺管结构、并增殖，诊断为乳腺原发性腺癌。此时已经确认到多数癌细胞进入淋巴管内，向淋巴结及远位部的转移、复发的风险高。手术后约一个半月于2007年6月28日在相同部位确认到复发。此时血清诊断的结果，该值为0.08完全未降低。一般认为患病犬8由于肿瘤未被完全切除或者复发，所以在5月上旬和6月下旬诊断结果未发生变化。
(2)-6转移诊断
患病犬9(苏格兰梗)为反复出现转移·复发的患病犬：2003年2月乳腺肿瘤、2003年8月口腔内恶性黑色素瘤、2005年1月嘴唇中恶性黑色素瘤、2005年4月13日口腔内黑色素瘤，且上述肿瘤均已通过手术被切除。2005年4月口腔内黑色素瘤复发后，因追踪观察再次入院就诊于2006年12月17日进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.3。其半年后2007年6月20日颈部淋巴结、颧淋巴结肥大再次入院就诊。如果为淋巴瘤则全身淋巴结均肿但患病犬9只有2处肿，因此临床诊断为很可能是因转移引起的淋巴瘤。通过利用本方法的诊断也可知，450nm处的吸光度为0.75显著升高，为以前存在的肿瘤的转移。
(2)-7治疗监控
患病犬11(迷你腊肠犬)为2007年4月19日进行了肿瘤摘除的患病犬。使用摘除的肿瘤进行病理诊断，结果为复合型乳腺癌，为浸润性、转移性发生可能性高的中等度的恶性程度。此时血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.26。摘除手术后约1年即2008年6月3日进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.13显著降低。此时肉眼未确认到癌的复发，但为了防止复发在其后的2个月内以每周一次的间隔给与抗癌剂(Intercat)，维持不复发的状态。开始给与抗癌剂2周后、4周后、6周后进行血清诊断，结果450nm处的吸光度分别为0.09、0.07、0.08。由患病犬11的结果可知，如果完全切除肿瘤则与罹癌状态相比值降低，如果在抗癌剂治疗中也能抑制癌复发，则不会见到值升高，遵循治疗的经时变化。另外，如患病犬8所示由于也可以诊断复发，所以也可以进行治疗监控。
(2)-8复发时的恶性诊断
患病犬12(吉娃娃犬)为2007年4月27日进行了肿瘤摘除的患病犬。使用摘除的肿瘤进行病理诊断，结果来自乳管上皮的腺管癌，即恶性乳癌。由于在约1年后即2008年6月29日再次发现了肿瘤，所以进行了摘除手术。使用其摘除的肿瘤进行病理组织诊断，结果确认来自乳管上皮的肿瘤细胞形成不规则的腺腔，还确认到向内腔进行多层化形成的部分，但构成细胞具有基本均一的卵圆形核，细胞的异型性为轻度，据此诊断为良性乳腺癌。此时血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.02，基本上未检测。由患病犬8、12的结果可知，复发时在为恶性的情况下血清诊断值不降低或维持原状，在为良性的情况下基本检测不到。
(2)-9良性肿瘤患病犬的预后诊断
患病犬13(玩具贵宾犬)为2007年10月9日进行了肿瘤摘除的患病犬。使用摘除的肿瘤进行病理诊断，结果形成乳腺上皮细胞和筋上皮细胞两成分增殖的肿瘤，但两成分均未表现出恶性症状，诊断为乳腺良性混合肿瘤。此时血清诊断的结果为450nm处的吸光度仅仅检测到0.07。8个月后即2008年6月5日进行再次采血，结果450nm处的吸光度为0完全检测不到。临床上此时也未确认到复发。因此，可知即使为良性肿瘤患病犬，如果在存在肿瘤的状态时检测到血清诊断值，则切除肿瘤时值降低，且可以进行预后诊断。
(3)猫的诊断
接下来进行罹癌猫及健康猫的诊断。使用上述利用的犬重组蛋白和抗猫IgG抗体，与上述同样地测定与该多肽特异性反应的猫血清中的IgG抗体效价。第二抗体是将HRP修饰抗猫IgG抗体(PEROXIDASE-CONJUGATED GOAT IgG FRACTION TO CATIgG(WHOLE MOLECULE)：CAPPEL RESERCH REAGENTS公司制)用封闭溶液稀释8000倍进行使用。
患病猫1(金吉拉猫)为2005年8月17日因乳腺癌而接受了肿瘤摘除手术的患病猫。患病猫1在450nm处的吸光度为0.32。另外，2006年10月17日因腺管癌接受了摘除手术的、患病猫2(喜马拉雅猫)在450nm处的吸光度为0.18。另一方面，健康猫中完全未检测到。
因此可知为猫的情况下与犬同样地在患癌样品中检测出值，而在健康样品中基本检测不到，所以与犬同样地猫也可以通过使用了犬重组蛋白的本方法进行癌诊断。
(4)健康人的诊断
使用上述利用的犬重组蛋白和抗人IgG抗体，与上述同样地测定与该蛋白特异性反应的健康人血清中的IgG抗体效价。第二抗体是将HRP修饰抗人IgG抗体(HRP-Goat Anti-Human IgG(H+L)Conjugate：Zymed Laboratories公司制)用封闭溶液稀释10000倍进行使用。作为阳性对照，使用将用磷酸盐缓冲生理盐水调整为50μg/ml的卵白蛋白抗原进行固相化的产物。结果，卵白蛋白抗原在健康人1中450nm处的吸光度为0.25。另一方面，该重组蛋白质为0完全未检测到。另外，健康人2中卵白蛋白抗原450nm处的吸光度为0.18，另一方面，该重组蛋白质为0完全未检测到。
实施例A-4：使用人重组蛋白的癌诊断
使用实施例A-2制备的人重组蛋白，与实施例A-3同样操作，测定与该蛋白反应的人、犬及猫血清中的IgG抗体效价。
使用健康人血清进行诊断，结果与实施例A-3(4)同样地使用卵白蛋白抗原作为阳性对照的情况下，将卵白蛋白固相化时可以检测到值，将人重组蛋白固相化时基本检测不到。
另外，在健康犬·猫中将该蛋白固相化时450nm处的吸光度也基本不能检测到。
另一方面，患病犬10(西施犬)为2007年6月21日接受了乳腺癌摘除手术的患病犬。使用摘除的组织的病理诊断中，具有强异型性和浸润性的乳腺组织，以大小的块状进行腺样增殖，诊断为恶性。该患病犬10在450nm处的吸光度为0.29。使用在其他病理诊断中诊断为恶性的310个样品的血清进行恶性诊断。为健康犬平均值的2倍以上即判断为恶性时，可知有189个样品可以诊断为恶性，为60.8％。患病猫3(杂种)于2007年4月3日接受了乳腺癌摘除手术，但该患病猫在450nm处的吸光度为0.14。
由以上可知，即使使用人重组蛋白，人、犬、猫均可以相同地诊断。
进而，与犬重组蛋白同样地使用人重组蛋白，对从末期癌患病犬采集的胸水、腹水进行诊断，结果可以检测到与使用血清的结果相同的值，可以诊断为癌。
实施例A-5：通过测定抗原多肽的癌诊断(1)
用实施例A-2制备的犬重组蛋白对小鼠、家兔进行免疫，制备、获得该抗原特异性抗体。使用该多克隆抗体，通过夹层ELISA法检测罹癌生物体血清中含有的该抗原多肽本身。对于与制备的该蛋白特异性多克隆抗体特异性反应的、血清中的该蛋白量，使用抗小鼠IgG抗体通过夹层ELISA法进行测定。
第一抗体的固相化如下进行：将用磷酸盐缓冲生理盐水稀释20倍的家兔抗血清按照100μL/孔添加到96孔Immobilizer Amino Plate(NUNC公司制)中，室温下振荡2小时。如下进行封闭：按照100μL/孔加入含有0.5％BSA(bovine serum albumin(牛血清白蛋白)、Sigma-Aldrich Japan公司制)的50mM碳酸氢钠缓冲溶液(pH8.3)(以下封闭溶液)，室温下振荡1小时。之后，按照100μL/孔添加用封闭溶液稀释的来自罹癌生物体的血清，室温下振荡3小时进行反应。此时将稀释倍率调整为10-1000倍的10倍稀释系列。用含有0.05％Tween20(和光纯药工业公司制)的磷酸盐缓冲生理盐水(以下称为PBS-T)清洗3次，按照100μL/孔加入用封闭溶液稀释200倍的小鼠抗血清作为第二抗体，室温下振荡1小时进行反应。用PBS-T清洗3次，按照100μL/孔加入用封闭溶液稀释2000倍的HRP修饰小鼠IgG抗体(Stabilized Goat Anti Mouse HRP conjugated：PIERCE公司制)作为第三抗体，室温下振荡1小时进行反应。用PBS-T清洗3次，按照100μl/孔添加HRP底物TMB(1-Step Turbo TMB(四甲基联苯胺)、PIERCE公司制)，室温下进行酶底物反应30分钟。之后，按照100μl/孔加入0.5M硫酸溶液(Sigma-Aldrich Japan公司制)停止反应后，用微孔板读数仪测定450nm处的吸光度。作为对照，未将家兔抗血清固相化的物质、不使来自罹癌生物体的血清反应的物质与上述同样地操作进行比较。
结果，在患有皮肤平滑筋肉瘤、乳癌、恶性黑色素瘤等罹癌犬及罹癌猫中检测到多肽的值，在健康犬、健康猫及健康人中未检测到。因此，在使用以源自犬的重组多肽作为免疫原配制的抗体检测抗原多肽的该方法中也可以诊断癌。
实施例A-6：通过测定抗原多肽的癌诊断(2)
用实施例A-2制备的人重组蛋白对小鼠、家兔进行免疫，制备、获得该抗原特异性抗体。与实施例5同样地，通过使用该多克隆抗体的夹层ELISA法，检测罹癌生物体血清中含有的该抗原多肽本身。
结果，在患有皮肤平滑筋肉瘤、乳癌、恶性黑色素瘤等罹癌犬及罹癌猫中检测到多肽的值，在健康犬、健康猫及健康人中未检测到。因此，使用以来自人的重组多肽作为免疫原配制的抗体检测抗原多肽的该方法中也可以诊断癌。
实施例B-1：通过SEREX法获得新型癌抗原蛋白
(1)构建cDNA文库
通过酸-胍-苯酚-氯仿法(Acid guanidium-Phenol-Chloroform法)自健康犬的睾丸组织中提取全RNA，使用Oligotex-dT30mRNA purification Kit(宝酒造公司制)按照试剂盒所附的操作说明书纯化polyA RNA。
使用上述所得的mRNA(5μg)构建犬睾丸cDNA噬菌体文库。在cDNA噬菌体文库的制备中使用cDNA Synthesis Kit，ZAP-cDNASynthesis Kit，ZAP-cDNA GigapackIII Gold Cloning Kit(STRATAGENE公司制)，按照试剂盒所附的操作说明书构建文库。构建的cDNA噬菌体文库大小为1.3×106pfu/ml。
(2)利用血清筛选cDNA文库
使用上述构建的源自犬睾丸的cDNA噬菌体文库进行免疫筛选。具体而言，在Φ90×15mm的NZY琼脂糖平板中感染宿主大肠杆菌(XL1-BlueMRF’)使其为2340克隆，42℃下培养3～4小时，形成溶菌斑(plaque)，在37℃下用浸透了IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)的硝酸纤维素滤膜(Hybond C Extra：GE Healthecare Bio-Science公司制)覆盖培养板4小时，从而诱导·表达蛋白质，将蛋白质转印到膜上。之后回收膜，将其浸在含有0.5％脱脂奶粉的TBS(10mM Tris-HCl，150mM NaCl pH7.5)中，在4℃下振荡一夜，由此抑制非特异性反应。在室温下使此过滤膜与稀释500倍的患病犬血清反应2～3小时。
作为上述患病犬血清，使用从患有肛门近位肿瘤的犬体内采集的血清。这些血清保存在-80℃，在即将使用前进行预处理。血清的预处理方法按照以下方法进行。即，用未插入外来基因的λZAPExpress噬菌体感染宿主大肠杆菌(XL1-BLueMRF’)后，在NZY板培养基中在37℃下培养一夜。然后，向培养板中加入含有0.5MNaCl的0.2M NaHCO3pH8.3的缓冲液，在4℃下静置15小时后，回收上清液作为大肠杆菌/噬菌体提取液。然后将回收的大肠杆菌/噬菌体提取液通入NHS-柱(GE Healthecare Bio-Science公司制)，将来自大肠杆菌·噬菌体的蛋白质固定化。在该蛋白固定化柱中使患病犬血清通入·反应，从血清中除去吸附在大肠杆菌和噬菌体上的抗体。将只是仅仅通过柱子的血清馏分用含有0.5％脱脂奶粉的TBS稀释500倍，将其作为免疫筛选材料。
将经上述处理血清和上述融合蛋白印迹的膜用TBS-T(0.05％Tween20/TBS)清洗4次后，将用含有0.5％脱脂奶粉的TBS稀释5000倍的山羊抗犬IgG(Goat anti Dog IgG-h+I HRP conjugated：BETHYL Laboratories公司制)作为第二抗体，在室温下反应1小时，使用NBT/BCIP反应液(Roche公司制)通过酶显色反应检测，从Φ90×15mm的NZY琼脂糖平板上采集与显色反应阳性部位相一致的菌落，使其溶解在500μl SM缓冲液(100mM NaCl、10mM MgClSO4、50mM Tris-HCl、0.01％明胶pH7.5)中。采用与上述相同的方法将显色反应呈阳性的菌落反复筛选二次、三次，直至菌落单一化，筛选出与血清中IgG反应的30940个噬菌体克隆，分离出一个阳性克隆。
(3)分离抗原基因的同源性检索
为了将通过上述方法分离所得的一个阳性克隆用于碱基序列解析，进行操作将噬菌体载体转换为质粒载体。具体而言，将宿主大肠杆菌(XL1-Blue MRF’)制成吸光度OD600为1.0的溶液，将上述溶液200μl与100μl经纯化的噬菌体溶液以及1μl ExAssist helperphage(STRATAGENE公司制)混合后，在37℃下反应15分钟，之后添加3ml LB培养基在37℃下培养2.5～3小时，立即置于70℃水浴中保持温度20分钟后，在4℃下以1000×g离心15分钟，回收上清液作为噬菌粒溶液。然后，将噬菌粒宿主大肠杆菌(SOLR)制成吸光度OD600为1.0的溶液，将上述溶液200μl与10μl经纯化的噬菌体溶液混合后，在37℃下反应15分钟，取50μl接种于含有氨苄青霉素(终浓度50μg/ml)的LB琼脂培养基中，在37℃下培养一夜。采集经转化的SOLR单菌落，用含有氨苄青霉素(终浓度50μg/ml)的LB培养基在37℃下培养后，使用QIAGEN plasmid Miniprep Kit(Qiagen公司制)纯化含有目标插入片段的质粒DNA。
经纯化的质粒，使用序列号5所示的T3引物和序列号6所示的T7引物，通过引物步测法来解析插入片段的全长序列。通过该序列解析获得了序列号15所示的基因序列。使用该基因的碱基序列及氨基酸序列，运行同源性检索程序BLAST搜索(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)，进行与已知基因同源性的检索，结果表明所得的基因是钙镁蛋白(calmegin)基因。犬钙镁蛋白的人同源因子为人钙镁蛋白(同源性：碱基序列90％、氨基酸序列89％)。人钙镁蛋白的碱基序列如序列号17所示，氨基酸序列如序列号18所示。
(4)在各种组织中的表达解析
对于通过上述方法所得的基因，通过RT-PCR(ReverseTranscription-PCR)法检查其在犬及人正常组织及各种细胞株中的表达。逆转录反应如下进行。即，使用TRIZOL试剂(invitrogen公司制)按照所附的操作说明书从50-100mg各种组织及各种细胞株5-10×106个细胞中提取全RNA。通过Superscript First-StrandSynthesis System for RT-PCR(invitrogen公司制)按照所附的操作说明书使用上述全RNA合成cDNA。人正常组织(脑、海马、睾丸、结肠、胎盘)的cDNA，使用Gene Pool cDNA(invitrogen公司制)、QUICK-Clone cDNA(Clontech公司制)及Large-Insert cDNALibrary(Clontech公司制)。PCR反应使用对获得的基因具有特异性的引物(如序列号19及20所示)如下进行。即，加入各试剂和附加缓冲液使总量为25μl，其中使通过逆转录反应配制的样品为0.25μl，上述引物各为2μM，各dNTP为0.2mM，ExTaq聚合酶(宝酒造公司制)为0.65U，使用Thermal Cycler(BIO RAD公司制)，以94℃-30秒、55℃-30秒、72℃-1分钟为一个循环，将该循环重复进行30次。需要说明的是，上述基因特异性的引物是扩增下述区域的引物，所述区域是序列号15的碱基序列(犬钙镁蛋白基因)中的755号～1318号及序列号17的碱基序列(人钙镁蛋白基因)中的795号～1358号碱基所在的区域，使用该引物还可以检查犬钙镁蛋白基因及人钙镁蛋白基因中任一者的表达。为了比较对照，同时也使用了GAPDH特异性的引物(如序列号9及10所示)。其结果如图5所示，在健康犬组织中显著表达于睾丸，另一方面发现其在犬肿瘤细胞株中显著表达。人钙镁蛋白基因的表达也与犬钙镁蛋白基因同样地，在正常组织中能够确认其表达的部位仅限于睾丸，但在癌细胞中则于脑肿瘤、白血病、食道癌中均检测出其表达，因此可以确定人钙镁蛋白基因也特异性地表达于睾丸和癌细胞中。
需要说明的是，图5中纵轴的标号1表示钙镁蛋白基因的表达谱，标号2表示作为比较对照的GAPDH基因的表达谱。
实施例B-2：犬及人钙镁蛋白质的制备
(1)重组蛋白质的制备
基于实施例B-1中获得的序列号15的基因，通过以下方法制备重组蛋白质。PCR如下进行：加入各试剂和附加缓冲液使总量为50μl，使由实施例B-1中所得的噬菌粒溶液配制的供序列解析的载体为1μl、含有BamHI及EcoRI限制性酶切断序列的两种引物(如序列号21及22所示)各为0.4μM、dNTP为0.2mM、PrimeSTAR HS聚合酶(宝酒造公司制)为1.25U，使用Thermal Cycler(BIO RAD公司制)，以98℃-10秒、55℃-15秒、72℃-2分钟为一个循环，将该循环重复进行30次。需要说明的是，由上述两种引物可以得到编码序列号16的氨基酸序列全长的区域。PCR后用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，使用QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN公司制)纯化约1.9kbp的DNA片段。
将经纯化后的DNA片段与克隆载体pCR-Blunt(invitrogen公司制)连接。将其转化至大肠杆菌中后回收质粒，通过测序确认了经扩增的基因片段与靶序列一致。将与靶序列一致的质粒用BamHI及EcoRI限制性酶处理，用QIAquick Gel Extraction Kit纯化后，将靶基因序列插入用BamHI、EcoRI限制性酶处理的大肠杆菌用表达载体pET30a(Novagen公司制)中。通过使用该载体可产生His标签融合型重组蛋白质。将该质粒转化至表达用大肠杆菌BL21(DE3)，通过利用1mM IPTG的表达诱导，能够使靶蛋白在大肠杆菌内表达。
另外，基于序列号17的基因，通过以下方法制备人同源基因的重组蛋白质。PCR如下进行：加入各试剂和附加缓冲液使总量为50μl，其中，从实施例B-1制备的各种组织·细胞cDNA中取出已确认通过RT-PCR法表达的cDNA1μl、含有EcoRI及XhoI限制性酶切断序列的两种引物(如序列号23及24所示)各为0.4μM、dNTP为0.2mM、PrimeSTAR HS聚合酶(宝酒造公司制)为1.25U，使用Thermal Cycler(BIO RAD公司制)，以98℃-10秒、55℃-15秒、72℃-2分钟为一个循环，将该循环重复进行30次。需要说明的是，由上述两种引物可以得到编码序列号18的氨基酸序列全长的区域。PCR后，用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，使用QIAquickGel Extraction Kit(QIAGEN公司制)纯化约1.9kbp的DNA片段。
将经纯化后的DNA片段与克隆载体pCR-Blunt(invitrogen公司制)连接。将其转化至大肠杆菌中后回收质粒，通过测序确认了经扩增的基因片段与靶序列一致。将与靶序列一致的质粒用EcoRI及XhoI限制性酶处理，用QIAquick Gel Extraction Kit纯化后，将靶基因序列插入用EcoRI、XhoI限制性酶处理后的大肠杆菌用表达载体pET30a(Novagen公司制)中。通过使用该载体可产生His标签融合型重组蛋白质。将该质粒转化至表达用大肠杆菌BL21(DE3)，通过利用1mM IPTG的表达诱导，能够使靶蛋白在大肠杆菌内表达。
(2)重组蛋白质的纯化
将上述得到的、表达序列号15及序列号17的各重组大肠杆菌在37℃下用含有卡那霉素(终浓度30μg/ml)的LB培养基培养至600nm处的吸光度为0.7左右，之后添加IPTG至其终浓度为1mM，进而在37℃下培养4小时。之后以4800rpm离心10分钟进行集菌。将该菌体块悬浮于磷酸盐缓冲生理盐水中，进而以4800rpm离心10分钟，清洗菌体。
将所得的菌体块悬浮于20mM磷酸缓冲液(pH7.0)中，在冰上进行超声裂解。将大肠杆菌超声裂解液以6000rpm离心分离20分钟，所得上清液为可溶性馏分，沉淀为不溶性馏分。
将可溶性馏分添加到阳离子交换柱(载体SP Sepharose(商标)Fast Flow(GE Health Care公司)中，柱容量为5mL，平衡缓冲液为20mM磷酸缓冲液(pH7.0))。用柱容量10倍量的20mM磷酸缓冲液(pH7.0)清洗后，立即用含有0.3M-1.0M氯化钠的20mM磷酸缓冲液(pH7.0)通过盐的阶段浓度梯度进行洗脱。分别采集柱容量的6倍量的各洗脱馏分。
将该洗脱馏分中含有0.3M氯化钠的20mM磷酸缓冲液(pH7.0)的全部馏分和含有1.0M氯化钠的20mM磷酸缓冲液(pH7.0)馏分的第1馏分合并，通过2次柱进一步进行纯化操作。
2次柱的柱载体使用Bio gel HT Type II(BioRad社)，柱容量为5mL。使用10倍柱容量的含有0.3M氯化钠的20mM磷酸缓冲液(pH7.0)进行平衡化后，添加上述洗脱馏分。用柱容量的10倍量的含有0.3M氯化钠的20mM磷酸缓冲液(pH7.0)和0.1M磷酸缓冲液(pH7.0)清洗柱未吸附馏分。之后立即用0.2M磷酸缓冲液(pH7.0)进行洗脱。采集柱容量的6倍量的洗脱馏分。靶蛋白的洗脱根据按照通用方法进行的考马斯染色法确认，根据该结果将洗脱馏分脱盐、浓缩，作为诊断用固相化材料。
实施例B-3：使用犬钙镁蛋白质的癌诊断
(1)犬的癌诊断
从被确认患有恶性或良性肿瘤的486只犬和6只健康犬体内采集血液，分离血清。使用实施例B-2制备的犬钙镁蛋白质、抗犬IgG抗体，通过ELISA法测定与该蛋白特异性反应的血清中的IgG抗体效价。
制备的蛋白如下进行固相化：将用磷酸盐缓冲生理盐水稀释为50μg/mL的重组蛋白质溶液按照100μL/孔添加到96孔ImmobilizerAmino Plate(NUNC公司制)中，在4℃下静置一夜。封闭如下进行：按照100μL/孔加入含有0.5％BSA(bovine serum albumin(牛血清白蛋白)、Sigma-Aldrich Japan公司制)的50mM碳酸氢钠缓冲溶液(pH8.3)(以下称为封闭溶液)，室温下振荡1小时。按照100μL/孔添加用封闭溶液稀释至1000倍的稀释血清，室温下振荡3小时进行反应。用含有0.05％Tween20(和光纯药工业公司制)的磷酸盐缓冲生理盐水(以下称为PBS-T)清洗3次，按照100μL/孔加入用封闭溶液稀释3000倍的HRP修饰犬IgG抗体(Goat anti Dog IgG-h+I HRP conjugated：BETHYL Laboratories公司制)，室温下振荡1小时进行反应。用PBS-T清洗3次，按照100μl/孔添加HRP底物TMB(1-Step Turbo TMB(四甲基联苯胺)、PIERCE公司)，室温下进行酶底物反应30分钟。之后，按照100μl/孔加入0.5M硫酸溶液(Sigma-Aldrich Japan公司制)停止反应后，用微孔板读数仪测定450nm处的吸光度。作为对照，未将制备的重组蛋白质固相化的物质、不使罹癌犬血清反应的物质与上述同样地操作进行比较。
使用被摘除的肿瘤组织进行病理诊断，结果上述癌诊断中使用的全部486个样品中有311个样品被确诊为恶性。
具体而言，上述样品接受了下述癌诊断，所述癌为：恶性黑色素瘤、恶性混合肿瘤、肝细胞癌、基底细胞癌、棘细胞瘤样龈瘤、口腔内肿瘤、肛门周围腺癌、肛门囊肿、肛门囊顶泌腺癌、塞尔托利细胞瘤、阴道前庭癌、皮脂腺癌、皮脂腺上皮瘤、脂腺腺瘤、汗腺癌、鼻腔内腺癌、鼻腺癌、甲状腺癌、大肠癌、支气管腺癌、腺癌、腺管癌、乳腺癌、复合型乳腺癌、乳腺恶性混合肿瘤、乳管内乳头状腺癌、纤维肉瘤、血管外皮细胞瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、软组织肉瘤、组织细胞肉瘤、粘液肉瘤、未分化肉瘤、肺癌、肥大细胞瘤、皮肤平滑肌瘤、腹腔内平滑肌瘤、平滑肌瘤、鳞状上皮癌、慢性淋巴细胞性白血病、淋巴瘤、消化管型淋巴瘤、消化器型淋巴瘤、小～中细胞型淋巴瘤、肾上腺髓质肿瘤、粒层细胞瘤、嗜铬细胞瘤、膀胱癌(移行细胞癌)、化脓性炎症、腹腔内肝脏肿瘤、肝癌、浆细胞瘤、恶性血管外膜细胞瘤、血管肉瘤、肛门囊腺癌、口腔癌、转移性恶性黑色素瘤、无黑色素性恶性黑色素瘤、皮肤恶性黑色素瘤、恶性肌上皮瘤、恶性睾丸上皮瘤、精原细胞瘤(seminoma)、大肠腺癌、胃腺癌、低度皮脂腺癌、耳垢腺癌、顶泌腺癌、低分化型顶泌腺癌、恶性纤维性组织细胞瘤、多发性骨髓瘤、间叶组织恶性肿瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、起因不明的肉瘤、软组织肉瘤(纺锤形细胞肿瘤)、低分化肉瘤、滑膜肉瘤、血管肉瘤、转移性恶性上皮肿瘤、管状乳腺腺癌、乳腺导管癌、炎性乳癌、生殖细胞瘤、白血病、浸润性毛发上皮瘤、中细胞型淋巴瘤、多中心型淋巴瘤、骨肉瘤(乳腺)、肥大细胞瘤(PatnaikII型)、肥大细胞瘤(GradeII)、平滑筋肉瘤等。
来自上述罹癌犬生物体的血清，如图7所示针对重组蛋白质的抗体效价非常高。为健康犬平均值的2倍以上即可根据本诊断方法判断为恶性时，可知有177个样品可以诊断为恶性，为56.9％。该177个样品的癌的种类如下所述。需要说明的是，根据样品不同，存在患有多种癌的样品，以下所示的数值为每种癌的累计值。
恶性黑色素瘤10例、淋巴瘤10例、嗜铬细胞瘤1例、粒层细胞瘤1例、肝细胞癌4例、汗腺癌5例、血管瘤1例、恶性睾丸肿瘤7例、口腔内肿瘤4例、肛门周围腺癌11例、骨肉瘤4例、纤维肉瘤7例、软骨肉瘤2例、乳腺癌35例、复合型乳腺癌27例、肺癌2例、皮脂腺癌2例、鼻腺癌2例、肥大细胞瘤25例、肾上腺髓质肿瘤1例、平滑筋肉瘤1例、鳞状上皮癌5例、慢性淋巴细胞性白血病1例、生殖细胞瘤1例、恶性纤维性组织细胞瘤1例、转移性恶性上皮肿瘤1例、乳腺导管癌1例、血管肉瘤1例、管状乳腺腺癌1例、浸润性毛发上皮瘤1例、前立腺癌1例、支气管腺癌1例。
进而，使用从末期癌患病犬体内采集的胸水、腹水，进行相同的诊断，结果可以检测出与通过使用血清的本诊断方法所得的结果相同的值，可以诊断为癌。
另外，可知通过采用本诊断方法，还可以进行肉眼不可见部分的癌诊断、进展程度诊断、恶性程度诊断、术后的追踪诊断、复发诊断、转移诊断等诊断。以下举出数例图8所示的详细诊断的具体例。
(2)-1肉眼不可见的肿瘤的癌诊断
患病犬1(FLAT COATED RETRIEVER)在2007年6月7日时间点未确认到肿瘤，但在此约20日后即2007年6月24日在左上颚犬齿的根的牙龈处发现了蒂状的直径为2mm的肿瘤。在发现之日将蒂部结扎并切除。在用肉眼可以确认到肿瘤以前，可以确认450nm处的吸光度为0.31，是显著高的值，与发现肿瘤时的0.33比较变化不大。由该结果可知通过使用本方法还可以诊断腹腔内等肉眼不可见部分的癌。
另外，在可以用肉眼确认到肿瘤以前，能够确认到值升高，一般认出显示出肿瘤发生的前兆。因此，可知对定期健康检查等健康诊断也有用。
在切除肿瘤2周后再次对该患病犬1进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.17，显著降低。因此，还可以确认引起抗体效价上升的癌抗原表达的肿瘤被完全切除。((2)-4术后的追踪诊断)
(2)-2癌的进展程度诊断
癌的进展程度通过肿瘤的大小及深度、对周围组织带来何种影响、是否发生转移等进行判断。一般认为转移即癌发展时可以检测出比以前高的值。进而作为又一例，以下对根据给与抗癌剂的具体例进行的进展程度诊断详细地说明。
患病犬2(迷你腊肠犬)于2007年2月21日因恶心和越来越瘦而入院就诊，腹腔内发现2处大型肿瘤。2007年2月23日进行肿瘤摘除，右肾肥大为433g，附近淋巴结也富含血管为42g。使用此时摘除的组织进行病理诊断，诊断为多中心型恶性淋巴瘤。可以确认肿瘤细胞向脂肪组织中弥散性扩散，诊断可能也向腹腔内的其他脏器扩散。肿瘤摘除手术后从2007年3月1日开始给与抗癌剂(Oncovin)，在之后的2个月后、3个月后共进行三次血清诊断。其结果450nm处的吸光度分别为0.18、0.16、0.14。从开始给药的时间点开始值慢慢降低，可以确认表现出抗癌剂效果。即，认为能够抑制癌的发展。从患病犬2的结果可知也可以诊断癌进展程度。进而，可知作为其一例如上所述还可以诊断抗癌剂治疗效果。
(2)-3癌的恶性程度诊断
基底细胞瘤包括恶性型和良性型，近年来在新WHO中存在以恶性型为基底细胞癌、以良性型为毛芽瘤进行分类的倾向。
诊断为基底细胞癌(恶性)的患病犬3(比格犬)在手术时进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.13。另一方面，诊断为毛芽瘤(良性)的患病犬4(杂种)在手术时进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0完全检测不到。因此，可知即使为相同的基底细胞瘤也可以诊断出恶性型基底细胞癌和良性型毛芽瘤。
接下来，举出乳腺肿瘤的例子。乳腺肿瘤包括乳腺癌或乳腺恶性混合肿瘤等恶性肿瘤、和未表现出恶性症状的良性乳腺肿瘤。患病犬5(约克犬)为于2006年5月17日因乳腺恶性混合肿瘤和乳腺癌接受了摘除手术的患病犬。通常，乳腺的混合肿瘤即使为恶性，但由于缺乏向周围的浸润性，所以也容易完全切除，切除后的追踪诊断大多良好。但是在使用摘除的组织进行的病理诊断中，患病犬5标本的一部分成分中可见浸润性，诊断为恶性程度高的肿瘤。另外，乳腺癌通常为向周围的浸润性强、容易引起复发或转移的肿瘤。患病犬5的标本上肿瘤细胞中未见浸润性，但由于部分材料，所以在其他区域中恶性程度高的成分可能增殖。因此，由病理诊断结果表明患病犬5为恶性程度高的乳癌。该手术时采集的血清诊断结果为450nm处的吸光度为0.57。另一方面，患病犬6(约克夏犬)为于2007年1月28日接受了乳腺肿瘤摘除手术的患病犬。在使用此时的摘除组织进行的病理诊断中，细胞异型性为轻度，诊断为未见恶性症状的良性乳腺癌。该手术时采集的血清诊断结果，450nm处的吸光度为0。从以上2个样品的结果也可知恶性程度高的肿瘤与恶性程度低即良性肿瘤相比值大。
(2)-4术后的追踪诊断
患病犬7(西施犬)因口腔内肿瘤入院就诊于2007年3月22日进行摘除手术。此时进行的血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.70。另外，使用摘除的组织进行的病理诊断中，诊断为恶性棘细胞瘤样龈瘤。该肿瘤具有远位转移少但切除不充分时容易复发的特征。因此能否通过手术完全切除肿瘤是重要的。在2007年5月18日追踪观察时，确认到450nm处的吸光度的为0.47，值降低。至2007年8月未确认到复发。由此可以认为患病犬7由于完全切除了肿瘤所以血清诊断结果与手术时相比降低。
(2)-5复发诊断
患病犬8(哈士奇犬)于2007年5月8日进行乳腺癌摘除手术。此时进行的血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.11。使用摘除的组织进行的病理诊断中，异型性强的上皮系细胞主要形成腺管结构、并增殖，被诊断为乳腺原发性腺癌。此时已经确认到多数癌细胞进入淋巴管内，向淋巴结及远位部的转移、复发的风险高。在手术后约一个半月后即2007年6月28日在相同部位确认到复发。此时血清诊断结果为0.12，可确认值升高。患病犬8由于肿瘤未被完全切除或者复发，所以血清诊断结果与5月上旬相比6月下旬较大地被检测到。
患病犬9(喜乐蒂牧羊犬)于2006年10月24日进行腺管癌摘除手术。此时进行的血清诊断的结果为450nm处的吸光度约为0基本检测不到。在约3个月后即2007年1月31日复发，再次入院就诊再次进行摘除手术。使用此时摘除的组织进行的病理诊断中，具有卵圆形异型核的癌细胞侵袭多数淋巴管，腹股沟淋巴结转移，因此诊断为可能发生远位转移的腺管癌(乳癌)。此时进行的血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.10，升高。可知患病犬9中同样由于肿瘤未被完全切除或复发，所以血清诊断结果在3个月后较大地被检测到。
(2)-6转移诊断
患病犬10(苏格兰梗)为反复出现转移·复发的患病犬：2003年2月乳腺肿瘤、2003年8月口腔内恶性黑色素瘤、2005年1月嘴唇恶性黑色素瘤、2005年4月13日口腔内黑色素瘤，且上述肿瘤均已通过手术被切除。2005年4月口腔内黑色素瘤复发后，因追踪观察再次入院就诊于2006年12月17日进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.39。半年后即2007年6月20日颈部淋巴结、颧淋巴结肥大，再次入院就诊。如果为淋巴瘤则全身的淋巴结均肿，但患病犬10仅有2处肿，所以临床诊断为很可能是因转移引起的淋巴瘤。根据利用本方法的诊断也可知，450nm处的吸光度为0.80明显上升，为以前存在的肿瘤的转移。
患病犬11(柴犬)为于2006年3月11日因右唇部口腔恶性黑色素瘤进行了肿瘤摘除的患病犬。自2006年6月10日至同年9月26日给与抗癌剂(环磷酰胺)进行治疗，自2006年5月23日继续给与有机锗主成分的Biremo S。认为该肿瘤的转移于2007年3月20日肿瘤摘除时进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.06。使用此时摘除的组织进行的病理诊断中，诊断为转移性恶性黑色素瘤。但是，转移后的黑色种在手术后3个月的2007年6月27日再次引起转移。虽然2007年3月20日在右颈部产生肿瘤，但此次在其相反侧产生，肿瘤的形状也形成与前次类似的黑色块。大小为3.1×3.2×0.8cm，临床诊断也为转移。此时进行的血清诊断的结果，确认到450nm处的吸光度为0.19，升高，可知其转移。
(2)-7治疗监控
患病犬11(迷你腊肠犬)为于2007年4月19日进行了肿瘤摘除的患病犬。使用摘除的肿瘤进行病理诊断，结果为复合型乳腺癌，为浸润性、转移性发生可能性高的中等程度的恶性程度。此时血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.30。自摘除手术后约1年即2008年6月3日血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.25，降低。此时肉眼未确认到癌的复发，但为了防止复发在其后的2个月内以每周一次的间隔给与抗癌剂(Intercat)，维持不复发的状态。在开始给与抗癌剂2周后、4周后、6周后进行血清诊断，结果450nm处的吸光度分别为0.25、0.19、0.19。由患病犬11的结果可知，如果完全切除肿瘤则与罹癌状态相比值降低，如果在抗癌剂治疗中也可以抑制癌复发，则不会见到值升高，遵循治疗的经时变化。另外，可知如患病犬8所示由于也可以诊断复发，所以也可以进行治疗监控。
(2)-8复发时的恶性诊断
患病犬12(吉娃娃犬)于2007年4月27日进行了肿瘤摘除的患病犬。使用摘除的肿瘤进行病理诊断，结果为来自乳管上皮的腺管癌，即恶性乳癌。由于在此约1年后即2008年6月29日再次发现了肿瘤，所以进行了摘除手术。使用其摘除的肿瘤进行病理组织诊断，结果来自乳管上皮的肿瘤细胞形成不规则的腺腔，还确认到向内腔进行多层化形成的部分，但构成细胞具有基本均一的卵圆形核，细胞的异型性为轻度，据此诊断为良性乳腺癌。此时血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0完全检测不到。由患病犬8、12的结果可知，复发时在为恶性的情况下血清诊断值升高或者被维持，在为良性的情况下未检测到。
(2)-9良性肿瘤患病犬的预后诊断
患病犬13(玩具贵宾犬)为2007年10月9日进行了肿瘤摘除的患病犬。使用摘除的肿瘤进行病理诊断，结果形成乳腺上皮细胞和筋上皮细胞两成分增殖的肿瘤，但两成分均未表现出恶性症状，诊断为乳腺良性混合肿瘤。此时血清诊断的结果为450nm处的吸光度仅检测到为0.13。其8个月后即2008年6月5日进行再次采血，结果450nm处的吸光度为0完全检测不到。临床上此时也未确认到复发。因此，可知即使为良性肿瘤患病犬，如果在存在肿瘤的状态时检测到血清诊断值，则切除肿瘤时值降低，且可以进行预后诊断。
(3)猫的诊断
接下来，对罹癌猫及健康猫进行诊断。使用上述使用的犬钙镁蛋白质和抗猫IgG抗体，与上述同样地测定与该多肽特异性反应的猫血清中的IgG抗体效价。第二抗体是将HRP修饰抗猫IgG抗体(PEROXIDASE-CONJUGATED GOAT IgG FRACTION TO CATIgG(WHOLEMOLECULE)：CAPPEL RESERCH REAGENTS公司制)用封闭溶液稀释8000倍进行使用的。
患病猫1(金吉拉猫)为2005年8月17日因乳腺癌接受了肿瘤摘除手术的患病猫。患病猫1在450nm处的吸光度为0.22。另外，2006年10月17日因腺管癌接受了摘除手术的、患病猫2(喜马拉雅猫)在450nm处的吸光度为0.21。而健康猫中完全未检测到。
因此，与犬同样地在为猫的情况下在患有癌的样品中也能检测出值，而在健康样品中完全未检测到，因此，与犬同样，猫也可以通过使用犬钙镁蛋白质的本方法进行癌诊断。
(4)健康人的诊断
使用上述使用的犬钙镁蛋白质和抗人IgG抗体，与上述同样地测定与该蛋白特异性反应的健康人血清中的IgG抗体效价。第二抗体是将HRP修饰抗人IgG抗体(HRP-Goat Anti-Human IgG(H+L)Conjugate：Zymed Laboratories公司制)用封闭溶液稀释10000倍进行使用的。作为阳性对照使用将用磷酸盐缓冲生理盐水调整为50μg/ml的卵白蛋白抗原进行固相化的产物。结果，卵白蛋白抗原在健康人1中450nm处的吸光度为0.25。另一方面，该重组蛋白质于450nm处的吸光度为0.03基本未检测到。
实施例B-4：使用了人钙镁蛋白质的癌诊断
使用实施例B-2制备的人钙镁蛋白质，与实施例B-3同样地操作，测定与该蛋白反应的人、犬及猫血清中的IgG抗体效价。
使用健康人血清进行诊断，结果，与实施例B-3(4)同样地使用卵白蛋白抗原作为阳性对照的情况下，将卵白蛋白固相化时可以检测到值，将人钙镁蛋白质固相化时基本未检测到。
另外，健康犬·猫中也同样地在将该蛋白固相化时450nm处的吸光度基本未检测到。
另一方面，患病犬12(西施犬)为2007年6月21日接受了乳腺癌摘除手术的患病犬。使用摘除的组织进行的病理诊断中，具有强异型性和浸润性的乳腺组织，以大小的块状进行腺样增殖，诊断为恶性。该患病犬12在450nm处的吸光度为0.70。使用在其他病理诊断中诊断为恶性的310个样品的血清进行恶性诊断。将为健康犬平均值的2倍以上判断为恶性时，可知有171个样品能够诊断为恶性，为55.0％。患病猫3(杂种)于2007年4月3日接受了乳腺癌摘除手术，但在该患病猫中450nm处的吸光度为0.38。
由以上可知，即使使用人钙镁蛋白质，人、犬、猫也都可以进行相同的诊断。
进而，与犬重组蛋白同样地使用人重组蛋白，对从末期癌患病犬体内采集的胸水、腹水进行诊断，结果可以检测到与使用血清的结果相同的值，可以诊断为癌。
实施例B-5：通过测定抗原多肽的癌诊断(1)
用实施例B-2制备的犬重组蛋白对小鼠、家兔进行免疫，制备、获得该抗原特异性抗体。使用该多克隆抗体，通过夹层ELISA法检测罹癌生物体血清中含有的该抗原多肽本身。对于与制备的该蛋白特异性多克隆抗体特异性反应的、血清中的该蛋白量，使用抗小鼠IgG抗体通过夹层ELISA法进行测定。
第一抗体如下进行固相化：将用磷酸盐缓冲生理盐水稀释20倍的家兔抗血清按照100μL/孔添加到96孔Immobilizer Amino Plate(NUNC公司制)中，室温下振荡2小时。如下进行封闭：按照100μL/孔加入含有0.5％BSA(bovine serum albumin(牛血清白蛋白)、Sigma-Aldrich Japan公司制)的50mM碳酸氢钠缓冲溶液(pH8.3)(以下称为封闭溶液)，室温下振荡1小时。之后，按照100μL/孔添加用封闭溶液稀释的来自罹癌生物体的血清，室温下振荡3小时进行反应。此时将稀释倍率调整为10-1000倍的10倍稀释系列。用含有0.05％Tween20(和光纯药工业公司制)的磷酸盐缓冲生理盐水(以下PBS-T)清洗3次，按照100μL/孔加入用封闭溶液稀释200倍的小鼠抗血清作为第二抗体，室温下振荡1小时进行反应。用PBS-T清洗3次，按照100μL/孔加入用封闭溶液稀释2000倍的HRP修饰小鼠IgG抗体(Stabilized Goat Anti Mouse HRP conjugated：PIERCE公司制)作为第三抗体，室温下振荡1小时进行反应。用PBS-T清洗3次，按照100μl/孔添加HRP底物TMB(1-Step Turbo TMB(四甲基联苯胺)、PIERCE公司制)，室温下进行酶底物反应30分钟。之后，按照100μl/孔加入0.5M硫酸溶液(Sigma-Aldrich Japan公司制)停止反应后，用微孔板读数仪测定450nm处的吸光度。作为对照，未将家兔抗血清固相化的物质、不使来自罹癌生物体的血清反应的物质与上述同样地操作进行比较。
其结果，在患有皮肤平滑筋肉瘤、乳癌、恶性黑色素瘤等罹癌犬、罹癌猫中检测出多肽的值，在健康犬、健康猫及健康人中未检测到。因此，在使用以源自犬的重组多肽作为免疫原配制的抗体检测抗原多肽的该方法中，也可以诊断癌。
实施例B-6：通过测定抗原多肽的癌诊断(2)
用实施例B-2制备的人重组蛋白对小鼠、家兔进行免疫，制备、获得该抗原特异性抗体。与实施例B-5同样地，通过使用该多克隆抗体的夹层ELISA法检测罹癌生物体血清中含有的该抗原多肽本身。
其结果在患有皮肤平滑筋肉瘤、乳癌、恶性黑色素瘤等罹癌犬、罹癌猫中可以检测到多肽的值，在健康犬、健康猫及健康人中未检测到。因此，使用以来自人的重组多肽作为免疫原配制的抗体检测抗原多肽的该方法中，也可以诊断癌。
实施例C-1：通过SEREX法获得新型癌抗原蛋白
(1)构建cDNA文库
通过酸-胍-苯酚-氯仿法(Acid guanidium-Phenol-Chloroform法)自健康犬的睾丸组织中提取全RNA，使用Oligotex-dT30mRNA purification Kit(宝酒造公司制)按照试剂盒所附的操作说明书纯化polyARNA。
使用该所得的mRNA(5μg)构建犬睾丸cDNA噬菌体文库。在cDNA噬菌体文库的制备中使用cDNA Synthesis Kit，ZAP-cDNASynthesis Kit，ZAP-cDNA GigapackIII Gold Cloning  Kit(STRATAGENE公司制)，按照试剂盒所附的操作说明书构建文库。构建的cDNA噬菌体文库大小为1.3×106pfu/ml。
(2)利用血清筛选cDNA文库
使用上述构建的源自犬睾丸的cDNA噬菌体文库进行免疫筛选。具体而言，在Φ90×15mm的NZY琼脂糖平板中感染宿主大肠杆菌(XL1-BlueMRF’)使其为2340克隆，42℃下培养3～4小时，形成溶菌斑(plaque)，用浸透了IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)的硝酸纤维素滤膜(Hybond C Extra：GE Healthecare Bio-Science公司制)在37℃下覆盖培养板4小时，由此诱导·表达蛋白质，将蛋白质转印到膜上。之后回收膜，将其浸在含有0.5％脱脂奶粉的TBS(10mM Tris-HCl，150mM NaCl pH7.5)中，在4℃下振荡一夜，由此抑制非特异性反应。在室温下使此过滤膜与稀释500倍的患病犬血清反应2～3小时。
作为上述患病犬血清使用从患有乳癌的患病犬中采集的血清。这些血清保存在-80℃，在即将使用前进行预处理。血清的预处理方法按照以下方法进行。即，用未插入外来基因的λZAP Express噬菌体感染宿主大肠杆菌(XL1-BLueMRF’)后，在NZY板培养基中在37℃下培养一夜。然后将含有0.5M NaCl的0.2M NaHCO3 pH8.3的缓冲液加入培养板上，在4℃下静置15小时后，回收上清液作为大肠杆菌/噬菌体提取液。接下来，将回收的大肠杆菌/噬菌体提取液通入NHS-柱(GE Healthecare Bio-Science公司制)，将来自大肠杆菌·噬菌体的蛋白质固定化。使患病犬血清在该蛋白固定化柱中通入·反应，从血清中除去吸附在大肠杆菌和噬菌体上的抗体。将只是仅仅通过柱子的血清馏分用含有0.5％脱脂奶粉的TBS稀释500倍，将其作为免疫筛选材料。
将经上述处理血清和上述融合蛋白印迹的膜用TBS-T(0.05％Tween20/TBS)清洗4次后，将用含有0.5％脱脂奶粉的TBS稀释5000倍的山羊抗犬IgG(Goat anti Dog IgG-h+I HRP conjugated：BETHYL Laboratories公司制)作为第二抗体，在室温下反应1小时，使用NBT/BCIP反应液(Roche公司制)通过酶显色反应检测，从Φ90×15mm的NZY琼脂糖平板上采集与显色反应阳性部位相一致的菌落，使其溶解在500μl SM缓冲液(100mM NaCl、10mM MgClSO4、50mM Tris-HCl、0.01％明胶pH7.5)中。用与上述相同的方法重复筛选二次、三次直至显色反应阳性菌落单一化，筛选出与血清中IgG反应的30940个噬菌体克隆，分离出一个阳性克隆。
(3)分离抗原基因的同源性检索
为了将通过上述方法分离所得的一个阳性克隆用于碱基序列解析，进行操作将噬菌体载体转换为质粒载体。具体而言，将宿主大肠杆菌(XL1-Blue MRF’)制成吸光度OD600为1.0的溶液，将上述溶液200μl和100μl经纯化的噬菌体溶液以及1μl ExAssist helperphage(STRATAGENE公司制)混合后，在37℃下反应15分钟，之后添加3ml LB培养基在37℃下培养2.5～3小时，立即置于70℃水浴中保持温度20分钟后，在4℃下以1000×g离心15分钟，回收上清液作为噬菌粒溶液。然后，将噬菌粒宿主大肠杆菌(SOLR)制成吸光度OD600为1.0的溶液，将上述溶液200μl和经纯化的噬菌体溶液10μl混合后，在37℃下反应15分钟，取50μl接种于含有氨苄青霉素(终浓度50μg/ml)的LB琼脂培养基中，在37℃下培养一夜。采集经转化的SOLR单菌落，用含有氨苄青霉素(终浓度50μg/ml)的LB培养基在37℃下培养后，使用QIAGEN plasmid Miniprep Kit(Qiagen公司制)纯化含有目标插入片段的质粒DNA。
经纯化的质粒使用序列号5所示的T3引物和序列号6所示的T7引物，通过引物步测法来解析插入片段的全长序列。通过该序列解析获得序列号25所示的基因序列。使用该基因的碱基序列及氨基酸序列，运行同源性检索程序BLAST搜索(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)，进行与已知基因同源性的检索，结果表明所得的基因是与序列号41所示的被注册的CEP基因在碱基序列·氨基酸序列(其中，仅以重叠区域计算)上具有99％同源性的基因，判断该基因为CEP基因。获得的犬CEP的人同源因子为人CEP(与序列号25所示的CEP基因的同源性：碱基序列87％、氨基酸序列84％)。人CEP的碱基序列如序列号27所示，氨基酸序列如序列号28所示。
(4)在各种组织中的表达解析
对于通过上述方法所得的基因，通过RT-PCR(ReverseTranscription-PCR)法检查其在犬及人正常组织及各种细胞株中的表达。逆转录反应如下进行。即，使用TRIZOL试剂(invitrogen公司制)按照所附的操作说明书从50-100mg各种组织及各种细胞株5-10×106个细胞中提取全RNA。通过Superscript First-StrandSynthesis System for RT-PCR(invitrogen公司制)按照所附的操作说明书使用上述全RNA合成cDNA。人正常组织(脑、海马、睾丸、结肠、胎盘)的cDNA，使用Gene Pool cDNA(invitrogen公司制)、QUICK-Clone cDNA(Clontech公司制)及Large-Insert cDNALibrary(Clontech公司制)。PCR反应使用对获得的基因具有特异性的引物(如序列号29及30所示)如下进行。即，加入各试剂和附加缓冲液使总量为25μl，其中使通过逆转录反应配制的样品为0.25μl，上述引物各为2μM，各dNTP为0.2mM，ExTaq聚合酶(宝酒造公司制)为0.65U，使用Thermal Cycler(BIO RAD公司制)，以94℃-30秒、55℃-30秒、72℃-30秒为一个循环，将该循环重复进行30次。需要说明的是，上述基因特异性引物是扩增下述区域的引物，所述区域是序列号25及序列号41的碱基序列(犬CEP基因)中的4582号～5124号以及序列号27的碱基序列(人CEP基因)中的4610号～5152号碱基的区域，使用该引物也可以检查犬CEP基因及人CEP基因中任一者的表达。为了比较对照，同时也使用了GAPDH特异性的引物(如序列号9及10所示)。其结果，如图9所示犬CEP基因在健康犬组织中显著表达于睾丸中，另一方面也发现该基因在犬乳癌细胞中显著表达。人CEP基因的表达也与犬CEP基因同样，在人正常组织中能够确认其表达的部位仅限于睾丸，但在人癌细胞中则于脑肿瘤、白血病、食道癌中均检测出其表达，特别是由于其在白血病细胞株中表现出显著表达，所以可以确认人CEP基因也特异性地表达于睾丸和癌细胞中。
需要说明的是，图9中纵轴的标号1表示CEP基因的表达谱，标号2表示作为比较对照的GAPDH基因的表达谱。
实施例C-2：来自犬及人CEP的多肽的制备
(1)重组蛋白质的制备
基于实施例C-1中获得的序列号25的基因，按照以下方法制备重组蛋白质。PCR如下进行：加入各试剂和附加缓冲液使总量为50μl，使由实施例C-1中得到的噬菌粒溶液配制并供序列解析的载体为1μl、含有BamHI及SalI限制性酶切断序列的两种引物(如序列号31及32所示)各为0.4μM、dNTP为0.2mM、PrimeSTAR HS聚合酶(宝酒造公司制)为1.25U，使用Thermal Cycler(BIO RAD公司制)，以98℃-10秒、55℃-5秒、72℃-7分钟为一个循环，将上述循环重复30次。需要说明的是，通过上述两种引物可以得到编码序列号26的氨基酸序列中的1514号～2339号氨基酸区域(序列号35)的区域。PCR后，用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，使用QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN公司制)纯化约2.5kbp的DNA片段。
同样地，使用序列号37及38所示的两种引物进行PCR，得到编码序列号26的氨基酸序列全长的区域。PCR后，用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，使用QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN公司制)纯化约7.0kbp的DNA片段。
进而，使用序列号37及43所示的两种引物进行PCR，得到编码序列号42的氨基酸序列全长的区域。PCR后，用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，使用QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN公司制)纯化约7.8kbp的DNA片段。
将经纯化的各DNA片段与克隆载体pCR-Blunt(invitrogen公司制)连接。将其转化至大肠杆菌中后回收质粒，通过测序确认了经扩增的基因片段与靶序列一致。用BamHI及SalI限制性酶处理与靶序列一致的质粒，用QIAquick Gel Extraction Kit纯化后，将靶基因序列插入用BamHI、SalI限制性酶处理后的大肠杆菌用表达载体pET30a(Novagen公司制)中。通过使用该载体可产生His标签融合型重组蛋白质。将该质粒转化至表达用大肠杆菌BL21(DE3)，通过利用1mM IPTG的表达诱导，能够使靶蛋白在大肠杆菌内表达。
另外，基于序列号27的基因，采用以下方法制备人同源基因的重组蛋白质。PCR如下进行：加入各试剂和附加缓冲液使总量为50μl，其中，实施例C-1制备的各种组织·细胞cDNA中已确认通过RT-PCR法表达的cDNA为1μl、含有BamHI及SalI限制性酶切断序列的两种引物(如序列号33及34所述)各为0.4μM、dNTP为0.2mM、PrimeSTAR HS聚合酶(宝酒造公司制)为1.25U，使用Thermal Cycler(BIO RAD公司制)，以98℃-10秒、55℃-5秒、72℃-7分钟为一个循环，将上述循环重复30次。需要说明的是，由上述两种引物可以得到编码序列号28的氨基酸序列中的1513号～2325号氨基酸的区域(序列号36)的区域。PCR后，用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，使用QIAquick Gel ExtractionKit(QIAGEN公司制)纯化约2.5kbp的DNA片段。
同样地，使用序列号39及40所示的两种引物进行PCR，得到编码序列号28的氨基酸序列全长的区域。PCR后，用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，使用QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN公司制)纯化约7.0kbp的DNA片段。
将经纯化的各DNA片段与克隆载体pCR-Blunt(invitrogen公司制)连接。将其转化至大肠杆菌中后回收质粒，通过测序确认了经扩增的基因片段与靶序列一致。用BamHI及SalI限制性酶处理与靶序列一致的质粒，用QIAquick Gel Extraction Kit纯化后，将靶基因序列插入用BamHI、SalI限制性酶处理后的大肠杆菌用表达载体pET30a(Novagen公司制)中。通过使用该载体可产生His标签融合型重组蛋白质。将该质粒转化至表达用大肠杆菌BL21(DE3)，通过利用1mM IPTG的表达诱导，能够使靶蛋白在大肠杆菌内表达。
(2)重组蛋白质的纯化
在37℃下用含有卡那霉素(终浓度30μg/ml)的LB培养基培养上述所得的、表达序列号26的一部分及序列号28的一部分的各重组大肠杆菌，至600nm处的吸光度约为0.7后，添加IPTG使其终浓度为1mM，在30℃下培养20小时。之后以4800rpm离心10分钟进行集菌。将此菌体球状物悬浮于磷酸盐缓冲生理盐水中，进而以4800rpm离心10分钟，清洗菌体。
将该菌体悬浮于磷酸盐缓冲生理盐水中，在冰上进行超声裂解。将大肠杆菌超声裂解液以7000rpm离心分离20分钟，所得上清液为可溶性馏分，沉淀为不溶性馏分。将不溶性馏分悬浮于4％TritonX-100溶液中，以7000rpm离心20分钟。重复该操作2次，除去蛋白酶。之后，将残渣悬浮于磷酸盐缓冲生理盐水中，进行脱表面活性剂操作。将该残渣悬浮于含有8M尿素(Sigma-Aldrich Japan公司制)的10mMTris盐酸、100mM磷酸缓冲溶液(以下称为8M尿素溶液)和蛋白酶抑制剂鸡尾酒溶液(Protease Inhibitor Cocktail)中，在4℃下静置15小时，使蛋白质变性。
该变性操作后以7000rpm离心20分钟将所得的可溶性馏分添加到按照通用方法调整的镍螯合柱(载体Chelateing Sepharose(商标)Fast Flow(GE Health Care公司)中，柱容量为5mL，平衡缓冲液为8M尿素溶液)，进而在4℃下静置一夜。将该柱载体以1500rpm离心5分钟，回收上清液，将柱载体悬浮在磷酸盐缓冲生理盐水中后，再次填充到柱中。将未吸附馏分用柱容量5倍量的8M尿素溶液和柱容量10倍量含有0.5M氯化钠的0.1M酢酸缓冲液(pH5.0)和含有10mM咪唑的20mM磷酸缓冲液(pH8.0)进行清洗操作，立即用分为5阶段的100mM-500mM咪唑阶段浓度梯度进行洗脱。采集柱容量5倍量的各洗脱馏分。靶蛋白的洗脱根据按照通用方法进行的考马斯染色法确认，根据该结果将洗脱馏分浓缩作为诊断用固相化材料。
与上述相同地，培养在实施例C-2(1)中得到的、表达序列号26的全长及序列号28的全长、序列号42的全长的各重组大肠杆菌，进行靶蛋白的纯化，得到诊断用固相化材料。
实施例C-3：使用了来自犬CEP的多肽的癌诊断
(1)犬的癌诊断
从被确认患有恶性或良性肿瘤的486只犬和6只健康犬体内采集血液，分离血清。使用实施例C-2制备的犬CEP的部分多肽(序列号26的氨基酸序列中：1514号～2339号、序列号35)和抗犬IgG抗体，通过ELISA法测定与该多肽特异性反应的血清中IgG抗体效价。
制备的多肽如下进行固相化：按照100μL/孔将用磷酸盐缓冲生理盐水稀释为50μg/mL的重组蛋白质溶液添加到96孔ImmobilizerAmino Plate(NUNC公司制)中，在4℃下静置一夜。如下进行封闭：按照100μL/孔加入含有0.5％BSA(bovine serum albumin(牛血清白蛋白)、Sigma-Aldrich Japan公司制)的50mM碳酸氢钠缓冲溶液(pH8.3)(以下称为封闭溶液)，室温下振荡1小时。按照100μL/孔添加使用了封闭溶液进行稀释的500倍稀释血清，室温下振荡3小时进行反应。用含有0.05％Tween20(和光纯药工业公司制)的磷酸盐缓冲生理盐水(以下称为PBS-T)清洗3次，按照100μL/孔加入用封闭溶液稀释3000倍的HRP修饰犬IgG抗体(Goat anti Dog IgG-h+I HRP conjugated：BETHYL Laboratories公司制)，室温下振荡1小时进行反应。用PBS-T清洗3次，按照100μl/孔添加HRP底物TMB(1-Step Turbo TMB(四甲基联苯胺)、PIERCE公司)，室温下进行酶底物反应30分钟。之后，按照100μl/孔加入0.5M硫酸溶液(Sigma-Aldrich Japan公司制)停止反应后，用微孔板读数仪测定450nm处的吸光度。作为对照，未将制备的重组蛋白质固相化的物质、不使罹癌犬血清反应的物质与上述同样地操作进行比较。
使用被摘除的肿瘤组织进行病理诊断，结果上述癌诊断中使用的全部486个样品中有311个样品被确诊为恶性。
具体而言，上述样品接受了下述癌诊断，所述癌为：恶性黑色素瘤、恶性混合肿瘤、肝细胞癌、基底细胞癌、棘细胞瘤样龈瘤、口腔内肿瘤、肛门周围腺癌、肛门囊肿、肛门囊顶泌腺癌、塞尔托利细胞瘤、阴道前庭癌、皮脂腺癌、皮脂腺上皮瘤、脂腺腺瘤、汗腺癌、鼻腔内腺癌、鼻腺癌、甲状腺癌、大肠癌、支气管腺癌、腺癌、腺管癌、乳腺癌、复合型乳腺癌、乳腺恶性混合肿瘤、乳管内乳头状腺癌、纤维肉瘤、血管外皮细胞瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、软组织肉瘤、组织细胞肉瘤、粘液肉瘤、未分化肉瘤、肺癌、肥大细胞瘤、皮肤平滑肌瘤、腹腔内平滑肌瘤、平滑肌瘤、鳞状上皮癌、慢性淋巴细胞性白血病、淋巴瘤、消化管型淋巴瘤、消化器型淋巴瘤、小～中细胞型淋巴瘤、肾上腺髓质肿瘤、粒层细胞瘤、嗜铬细胞瘤、膀胱癌(移行细胞癌)、化脓性炎症、腹腔内肝脏肿瘤、肝癌、浆细胞瘤、恶性血管外膜细胞瘤、血管肉瘤、肛门囊腺癌、口腔癌、转移性恶性黑色素瘤、无黑色素性恶性黑色素瘤、皮肤恶性黑色素瘤、恶性肌上皮瘤、恶性睾丸上皮瘤、精原细胞瘤(seminoma)、大肠腺癌、胃腺癌、低度皮脂腺癌、耳垢腺癌、顶泌腺癌、低分化型顶泌腺癌、恶性纤维性组织细胞瘤、多发性骨髓瘤、间叶组织恶性肿瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、起因不明的肉瘤、软组织肉瘤(纺锤形细胞肿瘤)、低分化肉瘤、滑膜肉瘤、血管肉瘤、转移性恶性上皮肿瘤、管状乳腺腺癌、乳腺导管癌、炎性乳癌、生殖细胞瘤、白血病、浸润性毛发上皮瘤、中细胞型淋巴瘤、多中心型淋巴瘤、骨肉瘤(乳腺)、肥大细胞瘤(PatnaikII型)、肥大细胞瘤(GradeII)、平滑筋肉瘤等。
来自上述罹癌犬生物体的血清，如图11所示，针对重组蛋白质的抗体效价非常高。为健康犬平均值的2倍以上即可根据本诊断方法判断为恶性时，可知有197个样品被诊断为恶性，为63.3％。该197个样品的癌的种类如下所述。需要说明的是，根据样品不同，存在患有多种癌的样品，以下所示的数值为每种癌的累计值。
恶性黑色素瘤8例、淋巴瘤9例、嗜铬细胞瘤1例、化脓性炎症1例、粒层细胞瘤1例、肝细胞癌5例、血管瘤1例、恶性睾丸肿瘤6例、口腔内肿瘤5例、肛门周围腺癌12例、骨肉瘤4例、纤维肉瘤8例、腺管癌10例、软骨肉瘤2例、乳腺癌35例、复合型乳腺癌24例、肺癌2例、皮脂腺癌2例、鼻腺癌2例、肥大细胞瘤24例、肾上腺髓质肿瘤1例、平滑筋肉瘤1例、鳞状上皮癌4例、慢性淋巴细胞性白血病1例、未分化肉瘤1例、恶性混合瘤1例、左肺后叶肿瘤1例、右腋下部肿瘤1例、右前肢肘部肿瘤1例、膀胱癌(移行细胞癌)1例、转移性恶性黑色素瘤3例、无黑色素性恶性黑色素瘤1例、大肠腺癌1例、浆细胞瘤1例、组织细胞肉瘤1例、脂肪肉瘤1例、低分化肉瘤1例、滑膜肉瘤1例、恶性血管外膜细胞瘤1例、顶泌汗腺癌3例、支气管腺癌1例。
进而，使用从末期癌患病犬体内采集的胸水、腹水，进行相同的诊断，结果可以检测出与通过使用血清的本诊断方法所得的结果相同的值，可以诊断为癌。
另外，可知通过采用本诊断方法还可以进行肉眼不可见部分的癌诊断、进展程度诊断、恶性程度诊断、术后的追踪诊断、复发诊断、转移诊断等诊断。以下举出数例图12所示的详细诊断的具体例。
(2)-1肉眼不可见肿瘤的癌诊断
患病犬1(FLAT COATED RETRIEVER)在2007年6月7日时间点未确认到肿瘤，但在其约20日后即2007年6月24日在左上颚犬齿根的牙龈处发现了蒂状的直径2mm的肿瘤。在发现之日将蒂部结扎并切除。在可以肉眼确认到肿瘤以前，可以确认在450nm处的吸光度为0.41，是显著高的值，与发现肿瘤时的0.43比较变化不大。由该结果可知，通过使用本方法还可以诊断腹腔内等肉眼不可见部分的癌。
另外，在可以肉眼确认肿瘤以前，可以确认该值上升，一般认为显示出了肿瘤发生的前兆。因此，可知对定期健康检查等健康诊断也有用。
在切除肿瘤2周后再次对该患病犬1进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.06，显著降低。所以，还可以确认引起抗体效价上升的癌抗原表达的肿瘤被完全切除。(参见(2)-4术后的追踪诊断)
(2)-2癌的进展程度诊断
癌的进展程度通过肿瘤的大小及深度、对周围组织带来何种影响、是否发生转移等进行判断。可知转移即癌发展时可以检测出比以前高的值。进而作为又一例，以下对通过给与抗癌剂的具体例进行的进展程度诊断详细说明。
患病犬2(迷你腊肠犬)于2007年2月21日因恶心和越来越瘦入院就诊，在腹腔内发现2处大型肿瘤。2007年2月23日进行肿瘤摘除，右肾肥大为433g，附近淋巴结也富含血管为42g。使用此时摘除的组织进行的病理诊断中，诊断为多中心型恶性淋巴瘤。确认到肿瘤细胞向脂肪组织中弥散性扩散，诊断为可能向腹腔内的其他的脏器扩散。肿瘤摘除手术后自2007年3月1日开始给与抗癌剂(Oncovin)，在之后的2个月后、3个月后共进行三次血清诊断。其结果450nm处的吸光度分别为0.15、0.15、0.07。自给药开始时刻，值慢慢降低，可以确认表现出抗癌剂效果。即可知能够抑制癌的发展。由患病犬2的结果可知，还可以诊断癌进展程度。进而，认为作为其一例如上所述也可以诊断抗癌剂治疗效果。
(2)-3癌的恶性程度诊断
基底细胞瘤包括恶性型和良性型，近年来在新WHO中存在以恶性型为基底细胞癌、以良性型为毛芽瘤进行分类的倾向。
诊断为基底细胞癌(恶性)的患病犬3(比格犬)在手术时进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.14。另一方面，诊断为毛芽瘤(良性)的患病犬4(杂种)在手术时进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0完全检测不到。因此，认为即使为相同的基底细胞瘤也可以诊断出恶性型基底细胞癌和良性型毛芽瘤。
接下来，举出乳腺肿瘤的例子。乳腺肿瘤包括乳腺癌或乳腺恶性混合肿瘤等恶性肿瘤、和未表现出恶性症状的良性乳腺肿瘤。患病犬5(约克犬)为于2006年5月17日因乳腺恶性混合肿瘤和乳腺癌接受了摘除手术的患病犬。通常，乳腺的混合肿瘤即使为恶性，由于缺乏向周围的浸润性，所以也容易完全切除，切除后的追踪诊断多为良好。但是在使用摘除的组织进行的病理诊断中，患病犬5标本的一部分成分中可见浸润性，诊断为恶性程度高的肿瘤。另外，乳腺癌通常为向周围的浸润性强、容易引起复发或转移的肿瘤。患病犬5的标本上肿瘤细胞中未见浸润性，但由于部分材料，所以其他区域中恶性程度高的成分也可能增殖。因此，由病理诊断结果表明患病犬5为恶性程度高的乳癌。该手术时采集的血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.77。另一方面，患病犬6(约克夏犬)为于2007年1月28日接受了乳腺肿瘤摘除手术的患病犬。在使用此时的摘除组织进行的病理诊断中，细胞异型性为轻度，诊断为未见恶性症状的良性乳腺癌。该手术时采集的血清诊断结果为450nm处的吸光度为0。从以上2个样品的结果也可知，恶性程度高的肿瘤与恶性程度低即良性肿瘤相比值大。
(2)-4术后的追踪诊断
患病犬7(杂种)为于2003年8月和2006年8月9日接受了肛门周围腺瘤摘除手术的患病犬。2006年8月9日因在相同部位再次发生相同的肿瘤所以临床诊断为复发。在使用复发手术时的组织进行的病理诊断中，认为与通常的肛门周围腺瘤比大小不同、或核异型等细胞异型或浸润性强，另外核分裂像也多，因此诊断为恶性肿瘤。按照病理诊断医生的建议需要注意再次局部复发及转移形成。此时血清诊断结果为450nm处的吸光度为0.43。该手术后约4个月即2006年12月19日进行术后追踪观察时再次进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.32，值降低。至2007年8月之前未确认到复发、转移。因此可以认为患病犬7由于完全切除了肿瘤所以血清诊断结果与手术时相比降低。
(2)-5复发诊断
患病犬8(哈士奇犬)于2007年5月8日进行乳腺癌摘除手术。此时进行的血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.09。使用摘除的组织进行的病理诊断中，异型性强的上皮系细胞主要形成腺管结构、并增殖，被诊断为乳腺原发性腺癌。此时可以确认多数癌细胞已经进入淋巴管内，向淋巴结及远位部转移、复发的风险高。手术后约一个半月后即2007年6月28日在相同部位确认到复发。此时血清诊断结果为0.10，值升高。认为患病犬8由于肿瘤未被完全切除或者复发，所以血清诊断结果与5月上旬相比6月下旬较大地被检测到。
患病犬9(喜乐蒂牧羊犬)于2006年10月24日进行腺管癌摘除手术。此时进行的血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.02。约3个月后即2007年1月31日复发，再次入院就诊再次进行摘除手术。使用此时摘除的组织进行的病理诊断中，由于具有卵圆形异型核的癌细胞侵袭多数淋巴管，腹股沟淋巴结转移，所以诊断为可能发生远位转移的腺管癌(乳癌)。此时进行的血清诊断的结果，可以确认450nm处的吸光度升高，为0.09。可知患病犬9同样地由于肿瘤不确定是否被完全切除或复发，所以血清诊断结果在3个月后较大地被检测到。
(2)-6转移诊断
患病犬10(苏格兰梗)为反复出现转移·复发的患病犬：2003年2月乳腺肿瘤、2003年8月口腔内恶性黑色素瘤、2005年1月嘴唇恶性黑色素瘤、2005年4月13日口腔内黑色素瘤，且且上述肿瘤均已通过手术被切除。2005年4月口腔内黑色素瘤复发后，因追踪观察再次入院就诊于2006年12月17日进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.42。其半年后即2007年6月20日颈部淋巴结、颧淋巴结肥大，再次入院就诊。如果为淋巴瘤则全身的淋巴结均肿，但患病犬10仅有2处肿，临床诊断为很可能是因转移引起的淋巴瘤。根据利用本方法的诊断也可知，450nm处的吸光度显著升高，为0.91，以前存在的肿瘤发生转移。
(2)-7治疗监控
患病犬12(杂种)为2007年7月27日进行了肿瘤摘除的患病犬。使用摘除的肿瘤进行病理诊断，结果确认到乳癌向乳管内进展性增殖，诊断为腺管癌。此时血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.24。自摘除手术13个月后的现在未确认到癌复发。自摘除手术约1个月后即2007年9月3日、2个月后即2007年10月12日、10个月后即2008年6月1日再次进行了血清诊断，结果450nm处的吸光度分别为0.18、0.18、0.12。
由患病犬12的结果可知，如果完全切除肿瘤则与罹癌状态相比值降低，如果未引起癌的复发则不会出现值升高，遵循治疗的经时变化。另外，可知由于如患病犬8所示也可以诊断复发，所以也可以进行治疗监控。(2)-8复发时的恶性诊断
患病犬13(金毛寻回犬)为2005年5月1日进行了肿瘤摘除的患病犬。使用摘除的肿瘤进行病理诊断，结果来自乳管上皮的恶性肿瘤性病变，即为恶性乳腺管癌及向乳管内进展并增生的恶性乳头状癌。约3年后即2008年6月28日由于再次发现肿瘤，所以进行摘除手术。使用其摘除的肿瘤进行病理组织诊断，结果仅发现在可见前次手术创伤的皮下缝合线周围有嗜中性粒细胞及小噬细胞、浆细胞等的明显的炎症细胞浸润，故诊断为无肿瘤性病变。此时血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0完全检测不到。由患病犬8、9、13的结果可知，复发时为恶性的情况下血清诊断值升高或维持原状，为良性的情况下检测不到。
(2)-9良性肿瘤患病犬的预后诊断
患病犬14(玩具贵宾犬)为2007年10月9日进行了肿瘤摘除的患病犬。使用摘除的肿瘤进行病理诊断，结果形成乳腺上皮细胞和筋上皮细胞两成分增殖的肿瘤，但两成分均未表现出恶性症状，诊断为乳腺良性混合肿瘤。此时进行血清诊断的结果，450nm处的吸光度仅检测到为0.05。其8个月后即2008年6月5日进行再次采血，结果450nm处的吸光度为0完全检测不到。临床上此时也未确认到复发。因此，可知即使为良性肿瘤患病犬，如果在存在肿瘤的状态时检测到血清诊断值，则切除肿瘤时值降低，且可以进行预后诊断。
(3)猫的诊断
接下来，进行罹癌猫及健康猫的诊断。使用上述使用的犬CEP的部分多肽和抗猫IgG抗体，与上述同样地测定与该多肽特异性反应的猫血清中的IgG抗体效价。第二抗体是将HRP修饰抗猫IgG抗体(PEROXIDASE-CONJUGATED GOAT IgG FRACTION TO CATIgG(WHOLEMOLECULE)：CAPPEL RESERCH REAGENTS公司制)用封闭溶液稀释8000倍进行使用的。
患病猫1(金吉拉猫)为2005年8月17日因乳腺癌接受了肿瘤摘除手术的患病猫。患病猫1在450nm处的吸光度为0.48。另外，2006年10月17日因腺管癌接受了摘除手术的、患病猫2(喜马拉雅猫)在450nm处的吸光度为0.18。而健康猫中完全未检测到。
因此，为猫的情况下也与犬同样地在患有癌的样品中检测出值，而在健康样品中完全未检测到，因此可知，与犬同样，猫也可以根据使用来自犬CEP的多肽的本方法进行癌诊断。
(4)健康人的诊断
使用上述使用的犬CEP的部分多肽和抗人IgG抗体，与上述同样地测定与该多肽特异性反应的健康人血清中的IgG抗体效价。第二抗体是将HRP修饰抗人IgG抗体(HRP-Goat Anti-Human IgG(H+L)Conjugate：Zymed Laboratories公司制)用封闭溶液稀释10000倍进行使用。作为阳性对照使用将用磷酸盐缓冲生理盐水调整为50μg/ml的卵白蛋白抗原进行固相化的产物。结果，卵白蛋白抗原在健康人1中450nm处的吸光度为0.25。另一方面，该重组蛋白质中为0.02，基本检测不到。另外，健康人2中卵白蛋白抗原450nm处的吸光度为0.18，而该重组蛋白质中为0.03，基本未检测到。
另外，使用实施例C-2制备的序列号26所示的犬CEP的全长多肽，与上述同样地进行诊断，结果可知人、犬、猫也都可以进行相同的诊断。
进而，使用实施例C-2制备的序列号42所示的犬CEP的全长多肽，与上述同样地进行诊断，结果可知人、犬、猫也都可以进行相同的诊断。
实施例C-4：使用来自人CEP的多肽的癌诊断
使用实施例C-2制备的人CEP的部分多肽(序列号28的氨基酸序列中：1513号～2325号、序列号36)，与实施例C-3同样地操作，测定与该多肽反应的、在人、犬及猫血清中的IgG抗体效价。
使用健康人血清进行诊断，结果，在与实施例C-3(4)同样地使用卵白蛋白抗原作为阳性对照的情况下，将卵白蛋白固相化时可以检测到值，将人CEP的部分多肽固相化时基本检测不到。
另外，在健康犬·猫中也同样，将该多肽固相化时450nm处的吸光度基本检测不到。
另一方面，患病犬11(西施犬)为2007年6月21日接受了乳腺癌摘除手术的患病犬。使用摘除的组织进行的病理诊断中，具有强异型性和浸润性的乳腺组织以大小的块状进行腺样增殖，故诊断为恶性。该患病犬11在450nm处的吸光度为0.33。使用在其他病理诊断中诊断为恶性的310个样品的血清，进行恶性诊断。将为健康犬平均值的2倍以上判断为恶性时，可知有185样品能够诊断为恶性，为59.5％。
另外，患病猫3(杂种)于2007年4月3日接受了乳腺癌摘除手术，但该患病猫在450nm处的吸光度为0.15。
由以上可知，即使使用来自人CEP的多肽，在人、犬、猫中也均可以进行相同的诊断。
进而，与犬重组蛋白同样地使用人重组蛋白，对从末期癌患病犬体内采集的胸水、腹水进行诊断，结果可以检测到与使用血清的结果相同的值，可以诊断为癌。
另外，使用实施例C-2制备的序列号28所示的人CEP的全长多肽，与上述同样地诊断，结果可知在人、犬、猫中也均可以进行相同的诊断。
实施例C-5：通过测定抗原多肽的癌诊断(1)
用实施例C-2制备的序列号35所示的犬重组蛋白对小鼠、家兔进行免疫，制备、获得该抗原特异性抗体。使用该多克隆抗体，通过夹层ELISA法检测罹癌生物体血清中含有的该抗原多肽本身。对于与制备的该蛋白特异性多克隆抗体特异性反应的、血清中的该蛋白量，使用抗小鼠IgG抗体通过夹层ELISA法进行测定。
第一抗体如下进行固相化：将用磷酸盐缓冲生理盐水稀释20倍的家兔抗血清按照100μL/孔添加到96孔Immobilizer Amino Plate(NUNC公司制)中，室温下振荡2小时。如下进行封闭：按照100μL/孔加入含有0.5％BSA(bovine serum albumin(牛血清白蛋白)、Sigma-Aldrich Japan公司制)的50mM碳酸氢钠缓冲溶液(pH8.3)(以下称为封闭溶液)，室温下振荡1小时。之后，按照100μL/孔添加用封闭溶液稀释的来自罹癌生物体的血清，室温下振荡3小时进行反应。此时将稀释倍率调整为10-1000倍的10倍稀释系列。用含有0.05％Tween20(和光纯药工业公司制)的磷酸盐缓冲生理盐水(以下称为PBS-T)清洗3次，按照100μL/孔加入用封闭溶液稀释200倍的小鼠抗血清作为第二抗体，室温下振荡1小时进行反应。用PBS-T清洗3次，按照100μL/孔加入用封闭溶液稀释2000倍的HRP修饰小鼠IgG抗体(Stabilized Goat Anti Mouse HRP conjugated：PIERCE公司制)作为第三抗体，室温下振荡1小时进行反应。用PBS-T清洗3次，按照100μl/孔添加HRP底物TMB(1-Step TurboTMB(四甲基联苯胺)、PIERCE公司制)，室温下进行酶底物反应30分钟。之后，按照100μl/孔加入0.5M硫酸溶液(Sigma-AldrichJapan公司制)停止反应后，用微孔板读数仪测定450nm处的吸光度。作为对照，未将家兔抗血清固相化的物质、不使来自罹癌生物体的血清反应的物质与上述同样地操作进行比较。
结果，在患有皮肤平滑筋肉瘤、乳癌、恶性黑色素瘤等罹癌犬、罹癌猫中检测到多肽的值，在健康犬、健康猫及健康人中未检测到。因此，在使用以源自犬的重组多肽作为免疫原配制的抗体检测抗原多肽的该方法中也可以诊断癌。
另外，使用将实施例C-2制备的序列号26所示的犬CEP的全长多肽作为免疫原配制的抗体，与上述同样地进行诊断。
结果，犬、猫，均可以通过使用将犬CEP的全长多肽作为免疫原配制的抗体测定抗原多肽的该方法，同样地诊断癌。
进而，使用将实施例C-2制备的序列号42所示的犬CEP的全长多肽作为免疫原配制的抗体，与上述同样地进行诊断。
结果，犬、猫均可以通过使用将犬CEP的全长多肽作为免疫原配制的抗体检测抗原多肽的该方法，同样地诊断癌。
实施例C-6：通过测定抗原多肽的癌诊断(2)
用实施例C-2制备的序列号36所示的人重组蛋白对小鼠、家兔进行免疫，制备、获得该抗原特异性抗体。与实施例C-5同样地，通过使用该多克隆抗体的夹层ELISA法检测罹癌生物体血清中含有的该抗原多肽本身。
结果，在患有皮肤平滑筋肉瘤、乳癌、恶性黑色素瘤等罹癌犬、罹癌猫中检测到多肽的值，在健康犬、健康猫及健康人中未检测到。因此，使用以来自人的重组多肽作为免疫原配制的抗体检测抗原多肽的该方法中也可以诊断癌。
另外，使用将实施例C-2制备的序列号28所示的人CEP的全长多肽作为免疫原配制的抗体，与上述同样地进行诊断。
结果，犬、猫均可以通过使用将人CEP的全长多肽作为免疫原配制的抗体检测抗原多肽的该方法，同样地诊断癌。
实施例D-1：通过SEREX法获得新型癌抗原蛋白
(1)构建cDNA文库
通过酸-胍-苯酚-氯仿法(Acid guanidium-Phenol-Chloroform法)自健康犬的睾丸组织中提取全RNA，使用Oligotex-dT30mRNA purification Kit(宝酒造公司制)按照试剂盒所附的操作说明书纯化polyARNA。
使用该所得的mRNA(5μg)构建犬睾丸cDNA噬菌体文库。在cDNA噬菌体文库的制备中使用cDNA Synthesis Kit，ZAP-cDNASynthesis Kit，ZAP-cDNA GigapackIII Gold Cloning Kit(STRATAGENE公司制)，按照试剂盒所附的操作说明书构建文库。构建的cDNA噬菌体文库大小为1.3×106pfu/ml。
(2)利用血清筛选cDNA文库
使用上述构建的源自犬睾丸的cDNA噬菌体文库进行免疫筛选。具体而言，在Φ90×15mm的NZY琼脂糖平板中感染宿主大肠杆菌(XL1-BlueMRF’)使其为2340克隆，42℃下培养3～4小时，形成溶菌斑(plaque)，用浸透了IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)的硝酸纤维素滤膜(Hybond C Extra：GE Healthecare Bio-Science公司制)在37℃下覆盖培养板4小时，由此使蛋白质诱导·表达，将蛋白质转印到膜上。之后回收膜，将其浸在含有0.5％脱脂奶粉的TBS(10mM Tris-HCl，150mM NaCl pH7.5)中，在4℃下振荡一夜，由此抑制非特异性反应。在室温下使此过滤膜与稀释500倍的患病犬血清反应2～3小时。
作为上述患病犬血清使用从患有乳癌的患病犬中采集的血清。这些血清保存在-80℃，在即将使用前进行预处理。血清的预处理方法按照以下方法进行。即，用未插入外来基因的λZAP Express噬菌体感染宿主大肠杆菌(XL1-BLueMRF’)后，在NZY板培养基中在37℃下培养一夜。然后将含有0.5M NaCl的0.2M NaHCO3 pH8.3的缓冲液加入培养板中，4℃下静置15小时后，回收上清液作为大肠杆菌/噬菌体提取液。接下来，将回收的大肠杆菌/噬菌体提取液通入NHS-柱(GE Healthecare Bio-Science公司制)，将来自大肠杆菌·噬菌体的蛋白质固定化。在该蛋白固定化柱中使患病犬血清通入·反应，从血清中除去吸附在大肠杆菌和噬菌体上的抗体。将只是仅仅通过柱子的血清馏分用含有0.5％脱脂奶粉的TBS稀释500倍，将其作为免疫筛选材料。
将经上述处理血清和上述融合蛋白印迹的膜用TBS-T(0.05％Tween20/TBS)清洗4次后，将用含有0.5％脱脂奶粉的TBS稀释5000倍的山羊抗犬IgG(Goat anti Dog IgG-h+I HRP conjugated：BETHYL Laboratories公司制)作为第二抗体在室温下与其反应1小时，使用NBT/BCIP反应液(Roche公司制)通过酶显色反应检测，从Φ90×15mm的NZY琼脂糖平板上采集与显色反应阳性部位相一致的菌落，使其溶解在500μl SM缓冲液(100mM NaCl、10mMMgClSO4、50mM Tris-HCl、0.01％明胶pH7.5)中。按照与上述相同的方法重复二次、三次筛选，至显色反应阳性菌落单一化，筛选出与血清中IgG反应的30940个噬菌体克隆，分离出一个阳性克隆。
(3)分离抗原基因的同源性检索
为了将通过上述方法分离所得的一个阳性克隆用于碱基序列解析，进行操作将噬菌体载体转换为质粒载体。具体而言，将宿主大肠杆菌(XL1-Blue MRF’)制成吸光度OD600为1.0的溶液，将该溶液200μl和经纯化的噬菌体溶液100μl以及ExAssist helper phage(STRATAGENE公司制)1μl混合后，在37℃下反应15分钟，之后添加3ml LB培养基在37℃下培养2.5～3小时，立即置于70℃水浴中保持温度20分钟后，在4℃下以1000×g离心15分钟，回收上清液作为噬菌粒溶液。然后，将噬菌粒宿主大肠杆菌(SOLR)制成吸光度OD600为1.0的溶液，将该溶液200μl和经纯化的噬菌体溶液10μl混合后，在37℃下反应15分钟，取50μl接种于含有氨苄青霉素(终浓度50μg/ml)的LB琼脂培养基中，在37℃下培养一夜。采集经转化的SOLR单菌落，用含有氨苄青霉素(终浓度50μg/ml)的LB培养基在37℃下培养后，使用QIAGEN plasmid Miniprep Kit(Qiagen公司制)纯化含有目标插入片段的质粒DNA。
经纯化的质粒使用序列号5所示的T3引物和序列号6所示的T7引物，通过引物步测法来解析插入片段的全长序列。通过该序列解析获得序列号44所示的基因序列。使用该基因的碱基序列及氨基酸序列，运行同源性检索程序BLAST搜索(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)，进行与已知基因同源性的检索，结果证明所得的基因为TRIP11基因。犬TRIP11的人同源因子为人TRIP11(同源性：碱基序列88％、氨基酸序列86％)。人TRIP11的碱基序列如序列号46所示，氨基酸序列如序列号47所示。
(4)在各种组织中的表达解析
对于通过上述方法所得的基因，通过RT-PCR(ReverseTranscription-PCR)法检查其在犬及人正常组织及各种细胞株中的表达。逆转录反应如下进行。即，使用TRIZOL试剂(invitrogen公司制)按照所附的操作说明书从50-100mg各种组织及各种细胞株5-10×106个细胞中提取全RNA。通过Superscript First-StrandSynthesis System for RT-PCR(invitrogen公司制)按照所附的操作说明书使用上述全RNA合成cDNA。人正常组织(脑、海马、睾丸、结肠、胎盘)的cDNA，使用Gene Pool cDNA(invitrogen公司制)、QUICK-Clone cDNA(Clontech公司制)及Large-Insert cDNALibrary(Clontech公司制)。PCR反应使用所获得基因的特异性引物(如序列号48及49所示)如下进行。即，加入各试剂和附加缓冲液使总量为25μl，其中使通过逆转录反应配制的样品为0.25μl，上述引物各为2μM，各dNTP为0.2mM，ExTaq聚合酶(宝酒造公司制)为0.65U，使用Thermal Cycler(BIO RAD公司制)，以94℃-30秒、55℃-30秒、72℃-1.5分钟为一个循环，将该循环重复进行30次。需要说明的是，上述基因特异性的引物为扩增下述区域的引物，所述区域为序列号44的碱基序列(犬TRIP11基因)中的1519号～2957号及序列号46的碱基序列(人TRIP11基因)中的1872号～3310号碱基的区域，使用该引物也可以检查犬TRIP11基因及人TRIP11基因中任一者的表达。为了比较对照，同时也使用了GAPDH特异性的引物(如序列号9及10所示)。结果如图13所示，可见犬TRIP11基因在健康犬组织中显著表达于睾丸，另一方面可见其在犬乳癌细胞株中显著表达。已经确认人TRIP11基因的表达也与犬TRIP11基因同样，在正常组织中能够确认其表达的部位仅限于睾丸，但在癌细胞中在脑肿瘤、白血病、乳癌、肺癌、食道癌细胞株等多种类癌细胞株中可检测到表达，人TRIP11基因也特异性地表达于睾丸和癌细胞。
需要说明的是，图13中纵轴的标号1表示TRIP11基因的表达谱，标号2表示作为比较对照的GAPDH基因的表达谱。
实施例D-2：犬及人TRIP11蛋白的制备
(1)重组蛋白质的制备
基于实施例D-1获得的序列号44的基因，按照以下方法制备重组蛋白质。PCR如下进行：加入各试剂和附加缓冲液使总量为50μl，使由实施例D-1所得的噬菌粒溶液配制并供序列解析的载体为1μl、使含有SalI及XhoI限制性酶切断序列的两种引物(如序列号50及51所示)各为0.4μM、dNTP为0.2mM、PrimeSTAR HS聚合酶(宝酒造公司制)为1.25U，使用Thermal Cycler(BIO RAD公司制)，以98℃-10秒、55℃-5秒、72℃-6分钟为一个循环，重复上述循环30次。需要说明的是，由上述两种引物可以得到编码序列号45的氨基酸序列中的237号～1023号氨基酸的区域(序列号54)的区域。PCR后，用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，使用QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN公司制)纯化约2.4kbp的DNA片段。
同样地，使用序列号56及57所示的两种引物进行PCR，得到编码序列号45的氨基酸序列全长的区域。PCR后，用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，使用QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN公司制)纯化约6.0kbp的DNA片段。
将经纯化的各DNA片段与克隆载体pCR-Blunt(invitrogen公司制)连接。将其转化至大肠杆菌中后回收质粒，通过测序确认了经扩增的基因片段与靶序列一致。用SalI及XhoI限制性酶处理与靶序列一致的质粒，用QIAquick Gel Extraction Kit纯化后，将靶基因序列插入用SalI、XhoI限制性酶处理后的大肠杆菌用表达载体pET30b(Novagen公司制)中。通过使用该载体可产生His标签融合型重组蛋白质。将该质粒转化至表达用大肠杆菌BL21(DE3)，通过利用1mM IPTG的表达诱导，能够使靶蛋白在大肠杆菌内表达。
另外，基于序列号46的基因，按照以下方法制备人同源基因的重组蛋白质。PCR如下进行：加入各试剂和附加缓冲液使总量为50μl，其中，使实施例D-1制备的各种组织·细胞cDNA中已确认通过RT-PCR法表达的cDNA为1μl、含有NdeI及KpnI限制性酶切断序列的两种引物(如序列号52及53所示)各为0.4μM、dNTP为0.2mM、PrimeSTAR HS聚合酶(宝酒造公司制)为1.25U，使用Thermal Cycler(BIO RAD公司制)，将98℃-10秒、55℃-5秒、72℃-6分钟为一个循环，重复上述循环30次。需要说明的是，由上述两种引物可以得到编码序列号47的氨基酸序列中的236号～1023号氨基酸的区域(序列号55)的区域。PCR后，用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，使用QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN公司制)纯化约2.4kbp的DNA片段。
同样地，使用序列号58及59所示的两种引物进行PCR，得到编码序列号47的氨基酸序列全长的区域。PCR后，用1％琼脂糖凝胶对经扩增的DNA进行电泳，使用QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN公司制)纯化约6.0kbp的DNA片段。
将经纯化的各DNA片段与克隆载体pCR-Blunt(invitrogen公司制)连接。将其转化至大肠杆菌中后回收质粒，通过测序确认了经扩增的基因片段与靶序列一致。用NdeI及KpnI限制性酶处理与靶序列一致的质粒，用QIAquick Gel Extraction Kit纯化后，将靶基因序列插入用NdeI、KpnI限制性酶处理后的大肠杆菌用表达载体pET30b(Novagen公司制)中。通过使用该载体可产生His标签融合型重组蛋白质。将该质粒转化至表达用大肠杆菌BL21(DE3)，通过利用1mM IPTG的表达诱导，能够使靶蛋白在大肠杆菌内表达。
(2)重组蛋白质的纯化
将上述所得的、表达序列号44的一部分及序列号46的一部分的各重组大肠杆菌用含有卡那霉素(终浓度30μg/ml)的LB培养基在37℃下培养至600nm处的吸光度为0.7左右，之后添加IPTG使其终浓度为1mM，在30℃下培养20小时。之后以4800rpm离心10分钟进行集菌。将此菌体球状物悬浮于磷酸盐缓冲生理盐水中，进而以4800rpm离心10分钟，清洗菌体。
将该菌体悬浮于磷酸盐缓冲生理盐水中，在冰上进行超声裂解。将大肠杆菌超声裂解液以7000rpm离心分离15分钟，所得上清液为可溶性馏分，沉淀为不溶性馏分。
将不溶性馏分悬浮于4％TritonX-100溶液中以7000rpm离心10分钟。重复该操作2次，除去蛋白酶。之后，将残渣悬浮于磷酸盐缓冲生理盐水中，进行脱表面活性剂操作。
将该残渣悬浮于含有6M胍盐酸盐(Sigma-Aldrich Japan公司制)的20mM磷酸缓冲液(pH8.0)中，4℃下静置15小时使蛋白质变性。该变性操作后，以7000rpm离心20分钟，将所得的可溶性馏分添加到按照通用方法调整的镍螯合柱(载体Chelateing Sepharose(商标)Fast Flow(GE Health Care公司)中，柱容量为5mL、平衡缓冲液为含有6M胍盐酸盐的20mM磷酸缓冲液(pH8.0))。将未吸附馏分用柱容量10倍量的含有6M胍盐酸盐的20mM磷酸缓冲液(pH8.0)和含有10mM咪唑的20mM磷酸缓冲液(pH8.0)进行清洗操作，之后立即用分为4阶段的50mM-500mM咪唑阶段浓度梯度进行洗脱。采集柱容量5倍量的各洗脱馏分。靶蛋白的洗脱根据按照通用方法进行的考马斯染色法确认，根据该结果将洗脱馏分浓缩作为诊断用固相化材料。
同样地操作，培养在实施例D-2(1)得到的、表达序列号45的全长及序列号47的全长的各重组大肠杆菌，进行靶蛋白的纯化，得到诊断用固相化材料。
实施例D-3：使用来自犬TRIP11的多肽的癌诊断
(1)犬的癌诊断
从被确认患有恶性或良性肿瘤的486只犬和6只健康犬体内采集血液，分离血清。使用实施例D-2制备的犬TRIP11的部分多肽(序列号45的氨基酸序列中：237号～1023号、序列号54)抗犬IgG抗体，按照ELISA法测定与该多肽特异性反应的血清中的IgG抗体效价。
制备的多肽如下进行固相化：按照100μL/孔将用磷酸盐缓冲生理盐水稀释为100μg/mL的重组蛋白质溶液添加到96孔ImmobilizerAmino Plate(NUNC公司制)中，在4℃下静置一夜。如下进行封闭：按照100μL/孔加入含有0.5％BSA(bovine serum albumin(牛血清白蛋白)、Sigma-Aldrich Japan公司制)的50mM碳酸氢钠缓冲溶液(pH8.3)(以下称为封闭溶液)，室温下振荡1小时。按照100μL/孔添加使用封闭溶液稀释至1000倍的稀释血清，室温下振荡3小时进行反应。用含有0.05％Tween20(和光纯药工业公司制)的磷酸盐缓冲生理盐水(以下称为PBS-T)清洗3次，按照100μL/孔加入用封闭溶液稀释3000倍的HRP修饰犬IgG抗体(Goat anti Dog IgG-h+I HRP conjugated：BETHYL Laboratories公司制)，室温下振荡1小时进行反应。用PBS-T清洗3次，按照100μl/孔添加HRP底物TMB(1-StepTurboTMB(四甲基联苯胺)、PIERCE公司)，室温下进行酶底物反应30分钟。之后，按照100μl/孔加入0.5M硫酸溶液(Sigma-Aldrich Japan公司制)停止反应后，用微孔板读数仪测定450nm处的吸光度。作为对照，未将制备的重组蛋白质固相化的物质、不使罹癌犬血清反应的物质与上述同样地操作进行比较。
使用被摘除的肿瘤组织进行病理诊断，结果上述癌诊断中使用的全部486个样品中有311个样品被确诊为恶性。
具体而言，上述样品接受了下述癌诊断，所述癌为：恶性黑色素瘤、恶性混合肿瘤、肝细胞癌、基底细胞癌、棘细胞瘤样龈瘤、口腔内肿瘤、肛门周围腺癌、肛门囊肿、肛门囊顶泌腺癌、塞尔托利细胞瘤、阴道前庭癌、皮脂腺癌、皮脂腺上皮瘤、脂腺腺瘤、汗腺癌、鼻腔内腺癌、鼻腺癌、甲状腺癌、大肠癌、支气管腺癌、腺癌、腺管癌、乳腺癌、复合型乳腺癌、乳腺恶性混合肿瘤、乳管内乳头状腺癌、纤维肉瘤、血管外皮细胞瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、软组织肉瘤、组织细胞肉瘤、粘液肉瘤、未分化肉瘤、肺癌、肥大细胞瘤、皮肤平滑肌瘤、腹腔内平滑肌瘤、平滑肌瘤、鳞状上皮癌、慢性淋巴细胞性白血病、淋巴瘤、消化管型淋巴瘤、消化器型淋巴瘤、小～中细胞型淋巴瘤、肾上腺髓质肿瘤、粒层细胞瘤、嗜铬细胞瘤、膀胱癌(移行细胞癌)、化脓性炎症、腹腔内肝脏肿瘤、肝癌、浆细胞瘤、恶性血管外膜细胞瘤、血管肉瘤、肛门囊腺癌、口腔癌、转移性恶性黑色素瘤、无黑色素性恶性黑色素瘤、皮肤恶性黑色素瘤、恶性肌上皮瘤、恶性睾丸上皮瘤、精原细胞瘤(seminoma)、大肠腺癌、胃腺癌、低度皮脂腺癌、耳垢腺癌、顶泌腺癌、低分化型顶泌腺癌、恶性纤维性组织细胞瘤、多发性骨髓瘤、间叶组织恶性肿瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、起因不明的肉瘤、软组织肉瘤(纺锤形细胞肿瘤)、低分化肉瘤、滑膜肉瘤、血管肉瘤、转移性恶性上皮肿瘤、管状乳腺腺癌、乳腺导管癌、炎性乳癌、生殖细胞瘤、白血病、浸润性毛发上皮瘤、中细胞型淋巴瘤、多中心型淋巴瘤、骨肉瘤(乳腺)、肥大细胞瘤(PatnaikII型)、肥大细胞瘤(GradeII)、平滑筋肉瘤等。
来自上述罹癌犬生物体的血清，如图15所示针对重组蛋白质的抗体效价非常高。为健康犬平均值的2倍以上即可根据本诊断方法判断为恶性时，可知有78个样品可以诊断为恶性，为25.1％。该78个样品的癌的种类如下所述。需要说明的是，根据样品不同，存在患有多种癌的样品，以下所示的数值为每种癌的累计值。
恶性黑色素瘤4例、淋巴瘤5例、化脓性炎症1例、粒层细胞瘤1例、肝细胞癌2例、恶性睾丸肿瘤2例、口腔内肿瘤3例、肛门周围腺瘤5例、骨肉瘤2例、腺管癌6例、乳腺癌16例、复合型乳腺癌8例、肺癌1例、皮脂腺癌2例、肥大细胞瘤6例、平滑筋肉瘤2例、鳞状上皮癌4例、恶性混合瘤1例、转移性恶性黑色素瘤1例、乳腺导管癌1例、顶泌腺癌1例、胃腺癌1例、多中心型淋巴瘤1例、精原细胞瘤(seminoma)1例、浆细胞瘤1例。
进而，使用从末期癌患病犬采集的胸水、腹水，进行相同的诊断，结果可以检测出与通过使用血清的本诊断方法所得的结果相同的值，可以诊断为癌。
另外，可知通过采用本诊断方法，还可以进行肉眼不可见部分的癌诊断、进展程度诊断、恶性程度诊断、术后的追踪诊断、复发诊断、转移诊断等诊断。以下举出数例图4所示的详细诊断的具体例。
(2)-1肉眼不可见肿瘤的癌诊断
患病犬1(FLAT COATED RETRIEVER)在2007年6月7日时间点未确认到肿瘤，但在其约20日后即2007年6月24日在左上颚犬齿根的齿龈处发现了蒂状的直径2mm的肿瘤。在发现之日将蒂部结扎并切除。在可以用肉眼确认肿瘤以前，可以确认到在450nm处的吸光度为0.15，为显著高的值，与肿瘤发现时的0.14比较变化不大。由该结果可知，通过使用本方法还可以诊断腹腔内等肉眼不可见部分的癌。
另外，在可以肉眼确认肿瘤以前，可以确认到值上升，一般认为显示出肿瘤发生的前兆。因此，可知对定期健康检查等健康诊断也有用。
在切除肿瘤2周后再次对该患病犬1进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0检测不到。所以，还可以确认引起抗体效价上升的癌抗原表达的肿瘤被完全切除。((2)-4术后的追踪诊断)
(2)-2癌的进展程度诊断
癌的进展程度通过肿瘤的大小及深度、对周围组织带来何种影响、是否发生转移等进行判断。可知转移即癌发展时可以检测出比以前高的值。
(2)-3癌的恶性程度诊断
基底细胞瘤包括恶性型和良性型，近年来在新WHO中存在以恶性型为基底细胞癌、以良性型为毛芽瘤进行分类的倾向。
诊断为基底细胞癌(恶性)的患病犬2(比格犬)在手术时进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.15。另一方面，诊断为毛芽瘤(良性)的患病犬3(杂种)在手术时进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0完全检测不到。因此，可知即使为相同的基底细胞瘤也可以诊断出为恶性型基底细胞癌和良性型毛芽瘤。
接下来，举出乳腺肿瘤的例子。乳腺肿瘤包括乳腺癌或乳腺恶性混合肿瘤等恶性肿瘤、和未表现出恶性症状的良性乳腺肿瘤。患病犬4(约克犬)为2006年5月17日因乳腺恶性混合肿瘤和乳腺癌接受了摘除手术的患病犬。通常，乳腺的混合肿瘤即使为恶性，但由于缺乏向周围的浸润性，所以也容易完全切除，切除后的追踪诊断也大多良好。但是在使用摘除的组织进行的病理诊断中，在患病犬4标本的一部分成分中可见浸润性，诊断为恶性程度高的肿瘤。另外，乳腺癌通常为向周围的浸润性强、容易引起复发或转移的肿瘤。在患病犬4标本上在肿瘤细胞中未见浸润性，但由于部分材料所以在其他区域中恶性程度高的成分可能增殖。因此由病理诊断结果表明患病犬4为恶性程度高的乳癌。该手术时采集的血清诊断的结果在450nm处的吸光度为0.20。另一方面，患病犬5(约克夏犬)为2007年1月28日接受了乳腺肿瘤摘除手术的患病犬。在使用此时的摘除组织进行的病理诊断中，细胞异型性为轻度，诊断为未见恶性症状的良性乳腺癌。该手术时采集的血清诊断结果为450nm处的吸光度为0。从以上2个样品的结果也可知恶性程度高的肿瘤与恶性程度低即良性肿瘤相比值大。
(2)-4术后的追踪诊断
患病犬6(西施犬)因口腔内肿瘤入院就诊于2007年3月22日进行摘除手术。此时进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.12。另外，使用摘除的组织进行的病理诊断中，诊断为恶性棘细胞瘤样龈瘤。该肿瘤具有远位转移少但切除不充分时容易复发的特征。因此能否通过手术完全切除肿瘤是重要的。2007年5月18日进行追踪观察时确认到450nm处的吸光度为0.02且抗体效价降低。至2007年8月未确认到复发。因此，可以说患病犬6中由于完全切除了肿瘤，所以血清诊断结果比手术时降低。
患病犬7(约克犬)对在手术时即2006年5月17日采集的血清进行诊断，结果450nm处的吸光度为0.20。2006年12月16日因追踪观察再次入院就诊时再次进行了血清诊断，结果450nm处的吸光度为0。至2007年8月未确认到转移及复发。因此患病犬7可以说由于完全切除了肿瘤所以血清诊断结果比手术时降低。
(2)-5复发诊断
患病犬8(哈士奇犬)于2007年5月8日进行乳腺癌摘除手术。此时进行的血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.04。使用摘除的组织进行的病理诊断中，异型性强的上皮系细胞主要形成腺管结构、并增殖，被诊断为乳腺原发性腺癌。此时已经确认到多数癌细胞进入淋巴管内，向淋巴结及远位部的转移、复发的风险高。自手术约一个半月后即2007年6月28日在相同部位确认到复发。确认到此时血清诊断的结果为0.07，值升高。可知患病犬8由于不确定肿瘤被完全切除或复发，所以诊断结果与5月上旬相比，在6月下旬较大地被检测到。
(2)-6转移诊断
患病犬9(苏格兰梗)为反复发生转移·复发的患病犬：2003年2月乳腺肿瘤、2003年8月口腔内恶性黑色素瘤、2005年1月嘴唇恶性黑色素瘤、2005年4月13日口腔内黑色素瘤，且上述肿瘤均已通过手术被切除。2005年4月口腔内黑色素瘤复发后，因追踪观察再次入院就诊即2006年12月17日的血清诊断结果在450nm处的吸光度为0。其半年后即2007年6月20日颈部淋巴结、颧淋巴结肥大再次入院就诊。如果为淋巴瘤则全身淋巴结均肿，但患病犬9只有2处肿，因此临床诊断很可能是因转移引起的淋巴瘤。根据利用本方法的诊断也可知，450nm处的吸光度显著升高，为0.27，以前存在的肿瘤发生转移。
患病犬10(柴犬)为于2006年3月11日因右嘴唇部口腔恶性黑色素瘤进行了肿瘤摘除的患病犬。具有自2006年6月10日至同年9月26日给与抗癌剂(环磷酰胺)的治疗史，自2006年5月23日继续给与有机锗主成分的Biremo S。认为该肿瘤的转移时即于2007年3月20日进行肿瘤摘除，此时进行的血清诊断的结果为450nm处的吸光度约为0基本检测不到。使用此时摘除的组织进行的病理诊断中，诊断为转移性恶性黑色素瘤。但是，转移后的黑色种在手术后3个月即2007年6月27日再次引起转移。虽然2007年3月20日在右颈部产生了肿瘤，但在2007年6月27日在其反对侧产生，肿瘤的形状也形成与前次类似的黑色块。大小为3.1×3.2×0.8cm，经临床诊断也判断为转移。此时进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0.02，升高，可知为以前存在的肿瘤的转移。
(2)-7治疗监控
患病犬12(迷你腊肠犬)为2007年4月19日进行了肿瘤摘除的患病犬。使用摘除的肿瘤进行病理诊断，结果为复合型乳腺癌，为浸润性、转移性发生可能性高的中等度的恶性程度。此时血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0.03。自摘除手术约1年后即2008年6月3日进行血清诊断，结果450nm处的吸光度为0完全检测不到。此时肉眼未确认到癌的复发，但为了防止复发，在其后的2个月内以每周一次的间隔给与抗癌剂(Intercat)，维持不复发的状态。在开始给与抗癌剂2周后、4周后、6周后进行血清诊断，结果450nm处的吸光度均为0完全检测不到。由患病犬12的结果可知，如果完全切除肿瘤则与罹癌状态相比值降低，如果在抗癌剂治疗中也可以抑制癌复发，则不会出现值升高，遵循治疗的经时变化。另外，可知如患病犬8所示由于也可以诊断复发，所以也可以进行治疗监控。
(2)-8复发时的恶性诊断
患病犬13(金毛寻回犬)为2005年5月1日进行了肿瘤摘除的患病犬。使用摘除的肿瘤进行病理诊断，结果为来自乳管上皮的恶性肿瘤性病变，即恶性乳腺管癌及向乳管内进展并增生的恶性乳头状癌。在此约3年后即2008年6月28日因为再次发现肿瘤所以进行了摘除手术。使用其摘除的肿瘤进行的病理组织诊断结果，仅发现在可见前次手术创伤的皮下缝合线周围有嗜中性粒细胞及小噬细胞、浆细胞等显著炎症细胞浸润，诊断为无肿瘤性病变。此时血清诊断的结果为450nm处的吸光度为0完全检测不到。由患病犬8、13的结果可知，复发时在为恶性的情况下血清诊断值上升或维持原状，在为良性的情况下检测不到。
(3)猫的诊断
接下来，进行罹癌猫及健康猫的诊断。使用上述采用的犬TRIP11的部分多肽和抗猫IgG抗体，与上述同样地测定与该多肽特异性反应的猫血清中的IgG抗体效价。第二抗体是将HRP修饰抗猫IgG抗体(PEROXIDASE-CONJUGATED GOAT IgG FRACTION TO CATIgG(WHOLEMOLECULE)：CAPPEL RESERCH REAGENTS公司制)用封闭溶液稀释8000倍进行使用。
患病猫1(金吉拉猫)为2005年8月17日因乳腺癌接受了肿瘤摘除手术的患病猫。患病猫1在450nm处的吸光度为0.05。另外，2006年10月17日因腺管癌接受了摘除手术的、患病猫2(喜马拉雅猫)中在450nm处的吸光度为0.34。而在健康猫中完全未检测到。
因此，在为猫的情况下，也与犬同样地在患有癌的样品中检测出值，而在健康样品中完全未检测到，因此猫也与犬同样，按照本方法可以进行癌诊断。
(4)健康人的诊断
使用上述采用的犬TRIP11的部分多肽和抗人IgG抗体，与上述同样地测定与该多肽特异性反应的健康人血清中的IgG抗体效价。第二抗体是将HRP修饰抗人IgG抗体(HRP-Goat Anti-Human IgG(H+L)Conjugate：Zymed Laboratories公司制)用封闭溶液稀释10000倍进行使用。作为阳性对照使用将用磷酸盐缓冲生理盐水调整为50μg/ml的卵白蛋白抗原进行固相化的产物。结果，卵白蛋白抗原在健康人1中450nm处的吸光度为0.25。另一方面，该重组蛋白质于450nm处的吸光度为0，完全未检测到。另外，健康人2中卵白蛋白抗原450nm处的吸光度为0.18，而该重组蛋白质为0完全未检测到。
另外，使用实施例D-2制备的序列号45所示的犬TRIP11的全长多肽与上述同样地进行诊断，结果可知人、犬、猫也都可以进行相同的诊断。
实施例D-4：使用来自人TRIP11的多肽的癌诊断
使用实施例D-2制备的人TRIP11的部分多肽(序列号47的氨基酸序列中：236号～1023号、序列号55)，与实施例D-3同样地测定与该多肽反应的、在人、犬及猫血清中的IgG抗体效价。
使用健康人血清进行诊断，结果，与实施例D-3(4)同样，使用卵白蛋白抗原作为阳性对照时，将卵白蛋白固相化时可以检测到值，将人TRIP11的部分多肽固相化时基本检测不到。
另外，在健康犬·猫中将该多肽固相化时，450nm处的吸光度基本检测不到。
另一方面，患病犬11(西施犬)为2007年6月21日接受了乳腺癌摘除手术的患病犬。在使用摘除的组织进行的病理诊断中，具有强异型性和浸润性的乳腺组织以大小的块状进行腺样增殖，诊断为恶性。该患病犬11在450nm处的吸光度为0.19。使用在其他病理诊断中诊断为恶性的310个样品的血清，进行恶性诊断。将为健康犬平均值的2倍以上判断为恶性时，可知有74个样品可以诊断为恶性，为23.8％。患病猫3(杂种)于2007年4月3日接受了乳腺癌摘除手术，但该患病猫在450nm处的吸光度为0.06。
由以上可知，即使使用来自人TRIP11的多肽，人、犬、猫也都可以进行相同的诊断。
进而，与犬重组蛋白同样地使用人重组蛋白，对从末期癌患病犬采集的胸水、腹水进行诊断，结果可以检测到与使用血清的结果相同的值，可以诊断为癌。
另外，使用实施例D-2制备的序列号47所示的人TRIP11的全长多肽，与上述同样地进行诊断，结果可知人、犬、猫也都可以进行相同的诊断。
实施例D-5：通过测定抗原多肽的癌诊断(1)
用实施例D-2制备的序列号54所示的犬重组蛋白对小鼠、家兔进行免疫，制备、获得该抗原特异性抗体。使用该多克隆抗体，通过夹层ELISA法检测罹癌生物体血清中含有的该抗原多肽本身。对于与制备的该蛋白特异性多克隆抗体特异性反应的、血清中的该蛋白量，使用抗小鼠IgG抗体通过夹层ELISA法进行测定。
第一抗体如下进行固相化：将用磷酸盐缓冲生理盐水稀释20倍的家兔抗血清按照100μL/孔添加到96孔Immobilizer Amino Plate(NUNC公司制)中，室温下振荡2小时。如下进行封闭：按照100μL/孔加入含有0.5％BSA(bovine serum albumin(牛血清白蛋白)、Sigma-Aldrich Japan公司制)的50mM碳酸氢钠缓冲溶液(pH8.3)(以下称为封闭溶液)，室温下振荡1小时。之后，按照100μL/孔添加用封闭溶液稀释的来自罹癌生物体的血清，室温下振荡3小时进行反应。此时将稀释倍率调整为10-1000倍的10倍稀释系列。用含有0.05％Tween20(和光纯药工业公司制)的磷酸盐缓冲生理盐水(以下称为PBS-T)清洗3次，按照100μL/孔加入用封闭溶液稀释200倍的小鼠抗血清作为第二抗体，室温下振荡1小时进行反应。用PBS-T清洗3次，按照100μL/孔加入用封闭溶液稀释2000倍的HRP修饰小鼠IgG抗体(Stabilized Goat Anti Mouse HRP conjugated：PIERCE公司制)作为第三抗体，室温下振荡1小时进行反应。用PBS-T清洗3次，按照100μl/孔添加HRP底物TMB(1-Step TurboTMB(四甲基联苯胺)、PIERCE公司制)，室温下进行酶底物反应30分钟。之后，按照100μl/孔加入0.5M硫酸溶液(Sigma-AldrichJapan公司制)停止反应后，用微孔板读数仪测定450nm处的吸光度。作为对照，未将家兔抗血清固相化的物质、不使来自罹癌生物体的血清反应的物质与上述同样地操作进行比较。
结果，在患有皮肤平滑筋肉瘤、乳癌、恶性黑色素瘤等罹癌犬、罹癌猫中检测到多肽的值，在健康犬、健康猫及健康人中检测不到。因此，在使用以源自犬的重组多肽作为免疫原配制的抗体检测抗原多肽的该方法中也可以诊断癌。
另外，使用以实施例D-2制备的序列号45所示的犬TRIP11的全长多肽作为免疫原配制的抗体，按照与上述相同的方法进行诊断。
结果，在犬、猫中，均可以按照使用将犬TRIP11的全长多肽作为免疫原配制的抗体的检测抗原多肽的该方法，同样地进行诊断癌。
实施例D-6：通过测定抗原多肽的癌诊断(2)
用实施例D-2制备的序列号55所示的人重组蛋白对小鼠、家兔进行免疫，制备、获得该抗原特异性抗体。与实施例D-5同样地通过使用该多克隆抗体的夹层ELISA法检测罹癌生物体血清中含有的该抗原多肽本身。
结果，在患有皮肤平滑筋肉瘤、乳癌、恶性黑色素瘤等罹癌犬、罹癌猫中检测到多肽的值，在健康犬、健康猫及健康人中检测不到。因此，使用以来自人的重组多肽作为免疫原配制的抗体检测抗原多肽的该方法中也可以诊断癌。
另外，使用以实施例D-2制备的序列号47所示的人TRIP11的全长多肽作为免疫原配制的抗体，与上述同样地进行诊断。
结果，在犬、猫中，均可以按照使用以人TRIP11的全长多肽作为免疫原配制的抗体测定抗原多肽的该方法，同样地进行诊断癌。
实施例E-1：使用4种抗原多肽的组合的癌诊断(1)
(1)犬的癌诊断
使用实施例A-2制备的犬重组蛋白(序列号2)、实施例B-2制备的犬钙镁蛋白质(序列号16)、实施例C-2制备的犬CEP的全长(序列号26或42)或部分多肽(序列号26的氨基酸序列中：1514号～2339号、序列号35)、实施例D-2制备的犬TRIP11的全长(序列号45)或部分多肽(序列号45的氨基酸序列中：237号～1023号、序列号54)和抗犬IgG抗体，与上述同样地测定与该蛋白或该多肽特异性反应的血清中的IgG抗体效价。
为健康犬平均值的2倍以上即可根据本诊断方法判断为恶性时，可知有272个样品可以诊断为恶性，为87.5％。需要说明的是，4种蛋白或多肽中针对任一种被判断为恶性时，将该对象生物体诊断为恶性肿瘤(以下相同)。该272个样品的癌的种类如下所述。需要说明的是，根据样品不同，存在患有多种癌的样品，以下所示的数值为每种癌的累计值。
恶性黑色素瘤10例、淋巴瘤13例、嗜铬细胞瘤1例、化脓性炎症1例、粒层细胞瘤1例、肝细胞癌5例、血管瘤1例、恶性睾丸肿瘤8例、口腔内肿瘤4例、肛门周围腺癌14例、骨肉瘤5例、纤维肉瘤9例、腺管癌10例、软骨肉瘤2例、乳腺癌56例、复合型乳腺癌26例、肺癌2例、皮脂腺癌2例、鼻腺癌2例、肥大细胞瘤37例、肾上腺髓质肿瘤1例、平滑筋肉瘤2例、鳞状上皮癌11例、慢性淋巴细胞性白血病1例、未分化肉瘤2例、恶性混合瘤2例、左肺后叶肿瘤1例、右腋下部肿瘤1例、右前肢肘部肿瘤1例、膀胱癌(移行细胞癌)1例、转移性恶性黑色素瘤3例、无黑色素性恶性黑色素瘤1例、大肠腺癌1例、浆细胞瘤1例、组织细胞肉瘤1例、脂肪肉瘤1例、低分化肉瘤1例、滑膜肉瘤1例、恶性血管外膜细胞瘤1例、顶泌汗腺癌3例、支气管腺癌1例、生殖细胞瘤1例、恶性纤维性组织细胞瘤1例、转移性恶性上皮肿瘤1例、乳腺导管癌1例、血管肉瘤1例、管状乳腺腺癌1例、浸润性毛发上皮瘤1例、前立腺癌1例、软组织肉瘤(纺锤形细胞肿瘤)1例、耳垢腺癌1例、多中心型淋巴瘤2例、浸润性毛发上皮瘤1例、肛门囊腺癌1例、顶泌腺癌1例、胃腺癌1例、精原细胞瘤(seminoma)1例、基底细胞癌1例、血管外皮细胞瘤4例、粘液肉瘤1例、皮脂腺上皮瘤1例、脾脏肿瘤1例。
(2)猫的癌诊断
接下来，进行罹癌猫及健康猫的诊断。使用上述4种类的犬抗原多肽和抗猫IgG抗体，与上述同样地测定与该多肽特异性反应的猫血清中的IgG抗体效价。第二抗体是将HRP修饰抗猫IgG抗体(PEROXIDASE-CONJUGATED GOAT IgG FRACTION TO CATIgG(WHOLEMOLECULE)：CAPPEL RESERCH REAGENTS公司制)用封闭溶液稀释8000倍进行使用。
使用被摘除的肿瘤组织进行病理诊断，结果在用于癌诊断的全部17个样品中有11个样品被确诊为恶性。为健康猫平均值的2倍以上即可根据本诊断方法判断为恶性时，可知有9个样品可以诊断为恶性，为81.8％。
实施例E-2：使用了4种抗原多肽的组合的癌诊断(2)
(1)犬的癌诊断
使用实施例A-2制备的人重组蛋白(序列号4)、实施例B-2制备的人钙镁蛋白质(序列号18)、实施例C-2制备的人CEP的全长(序列号28)或部分多肽(序列号28的氨基酸序列中：1513号～2325号、序列号36)、实施例D-2制备的人TRIP11的全长(序列号47)或部分多肽(序列号47的氨基酸序列中：236号～1023号、序列号55)和抗犬IgG抗体，与上述同样地测定与该蛋白或该多肽特异性反应的血清中的IgG抗体效价。
为健康犬平均值的2倍以上即可根据本诊断方法判断为恶性时，可知有268个样品可以诊断为恶性，为86.2％。
(2)猫的癌诊断
接下来，进行罹癌猫及健康猫的诊断。使用上述4种人抗原多肽和抗猫IgG抗体，与上述同样地测定与该多肽特异性反应的猫血清中的IgG抗体效价。第二抗体是将HRP修饰抗猫IgG抗体(PEROXIDASE-CONJUGATED GOAT IgG FRACTION TO CATIgG(WHOLEMOLECULE)：CAPPEL RESERCH REAGENTS公司制)用封闭溶液稀释8000倍进行使用。
使用被摘除的肿瘤组织进行病理诊断，结果在用于癌诊断的全部17个样品中有11个样品被确诊为恶性。为健康猫平均值的2倍以上即可根据本诊断方法判断为恶性时，可知有7个样品可以诊断为恶性，为63.6％。
实施例E-3：利用测定4种抗原多肽的组合的癌诊断(1)
用实施例A-2制备的犬重组蛋白(序列号2)、实施例B-2制备的犬钙镁蛋白质(序列号16)、实施例C-2制备的犬CEP的全长(序列号26或42)或部分多肽(序列号26的氨基酸序列中：1514号～2339号、序列号35)、实施例D-2制备的犬TRIP11的全长(序列号45)或部分多肽(序列号45的氨基酸序列中：237号～1023号、序列号54)对小鼠、家兔进行免疫，制备、获得该抗原特异性抗体。与实施例A，B，C，D-5同样，通过使用该多克隆抗体的夹层ELISA法检测罹癌生物体血清中含有的该抗原多肽本身。
结果，可知在使用以犬抗原多肽作为免疫原配制的抗体检测抗原多肽的该方法中，为健康犬平均值的2倍以上即可根据本诊断方法判断为恶性时，可知有252个样品可以诊断为恶性，为81.0％。为猫的情况下也与上述同样，为健康猫平均值的2倍以上即可根据本诊断方法判断为恶性时，可知有8个样品可以诊断为恶性，为72.7％。
实施例E-4：通过测定4种抗原多肽的组合的癌诊断(2)
用实施例A-2制备的人重组蛋白(序列号4)、实施例B-2制备的人钙镁蛋白质(序列号18)、实施例C-2制备的人CEP的全长(序列号28)或部分多肽(序列号28的氨基酸序列中：1513号～2325号、序列号36)、实施例D-2制备的人TRIP11的全长(序列号47)或部分多肽(序列号47的氨基酸序列中：236号～1023号、序列号55)对小鼠、家兔进行免疫，制备、获得该抗原特异性抗体。与实施例A，B，C，D-5同样，通过使用该多克隆抗体的夹层ELISA法检测罹癌生物体血清中含有的该抗原多肽本身。
结果，可知在使用以人抗原多肽作为免疫原配制的抗体检测抗原多肽的该方法中，为健康犬平均值的2倍以上即可根据本诊断方法判断为恶性时，可知有248个样品可以诊断为恶性，为79.7％。为猫的情况下也与上述同样，为健康猫平均值的2倍以上即可根据本诊断方法判断为恶性时，可知有7个样品可以诊断为恶性，为63.6％。
序列表
<110>东丽株式会社
<120>癌的检测方法
<130>PF382-PCT
<160>59
<170>PatentIn version 3.1
 
<210>1
<211>1508
<212>DNA
<213>家犬
 
<220>
<221>CDS
<222>(17)..(937)
<223>
 
<400>1
gcggcccggg cgggac atg gcg gcg ctc tac gcc tgc acc aag tgc cac cag    52
                  Met Ala Ala Leu Tyr Ala Cys Thr Lys Cys His Gln
                  1               5                   10
cgc ttc ccc ttc gag gcg ctg tct cag ggg cag cag ctg tgc aag gaa    100
Arg Phe Pro Phe Glu Ala Leu Ser Gln Gly Gln Gln Leu Cys Lys Glu
        15                  20                  25
tgt cgg att gca cac cct gtt gtg aag tgc acc tac tgt aga act gag    148
Cys Arg Ile Ala His Pro Val Val Lys Cys Thr Tyr Cys Arg Thr Glu
    30                  35                  40
tac cag caa gag agt aaa acc aat aca ata tgc aaa aaa tgt gct cag    196
Tyr Gln Gln Glu Ser Lys Thr Asn Thr Ile Cys Lys Lys Cys Ala Gln
45                  50                  55                  60
aat gtg cag tta tat gga acg ccc aaa cct tgt cag tac tgc aac ata    244
Asn Val Gln Leu Tyr Gly Thr Pro Lys Pro Cys Gln Tyr Cys Asn Ile
                65                  70                  75
att gca gca ttt att ggc aac aaa tgc cag cga tgc acg aat tca gag    292
Ile Ala Ala Phe Ile Gly Asn Lys Cys Gln Arg Cys Thr Asn Ser Glu
            80                  85                  90
aag aag tat gga cca cca tat tca tgt gaa cag tgt aaa caa cag tgt    340
Lys Lys Tyr Gly Pro Pro Tyr Ser Cys Glu Gln Cys Lys Gln Gln Cys
        95                  100                 105
gca ttt gac agg aaa gat gat aga aag aag gta gat ggg aaa ttg ctg    388
Ala Phe Asp Arg Lys Asp Asp Arg Lys Lys Val Asp Gly Lys Leu Leu
    110                 115                 120
tgt tgg ctg tgc aca ctt tca tacaaa cgg gtc ctt caa aag acc aaa     436
Cys Trp Leu Cys Thr Leu Ser Tyr Lys Arg Val Leu Gln Lys Thr Lys
125                 130                 135                 140
gag cag agg aaa cat ctg agc agc tct tcc cgt gcc agc cac cag gag    484
Glu Gln Arg Lys His Leu Ser Ser Ser Ser Arg Ala Ser His Gln Glu
                145                 150                 155
aag gaa cag tat cga ctg agt ggt ggc agc cat tat aac agc cag aaa    532
Lys Glu Gln Tyr Arg Leu Ser Gly Gly Ser His Tyr Asn Ser Gln Lys
            160                 165                 170
aca ctt tct acg tct tca att caa aat gaa atc cca aag aaa aaa tcc    580
Thr Leu Ser Thr Ser Ser Ile Gln Asn Glu Ile Pro Lys Lys Lys Ser
        175                 180                 185
aag ttt gag tca atc aca act aat gga gac agc ttt tcc cca gac ctg    628
Lys Phe Glu Ser Ile Thr Thr Asn Gly Asp Ser Phe Ser Pro Asp Leu
    190                 195                 200
gct ctg gac tca cca ggc act gac cac ttt gtc atc att gcc cag ctg    676
Ala Leu Asp Ser Pro Gly Thr Asp His Phe Val Ile Ile Ala Gln Leu
205                 210                 215                 220
aag gaa gaa gtg gcc act ttg aag aag atg ctg cat caa aag gat caa       724
Lys Glu Glu Val Ala Thr Leu Lys Lys Met Leu His Gln Lys Asp Gln
                225                 230                 235
atg att tta gag aaa gag aag aag atc aca gag ttg aag gct gat ttt       772
Met Ile Leu Glu Lys Glu Lys Lys Ile Thr Glu Leu Lys Ala Asp Phe
            240                 245                 250
caa tac caa gaa tct cag atg aga gcc aaa atg aac cag atg gag aaa       820
Gln Tyr Gln Glu Ser Gln Met Arg Ala Lys Met Asn Gln Met Glu Lys
        255                 260                 265
act cac aaa gaa gtc aca gag caa ttg cag gcc aaa aac cga gaa ctc       868
Thr His Lys Glu Val Thr Glu Gln Leu Gln Ala Lys Asn Arg Glu Leu
    270                 275                 280
ctg aag cag gca gct gcc ttg tcc aag agc aag aag tca gag aag tca       916
Leu Lys Gln Ala Ala Ala Leu Ser Lys Ser Lys Lys Ser Glu Lys Ser
285                 290                 295                 300
gga gct ata act tct cca tga gagaccataa ggaggcttcc agccacagca          967
Gly Ala Ile Thr Ser Pro
                305
aaggggtttc ctgggttagg gttggtggcc tggctgttat ctgggaattg cccacgctcc    1027
cgggaagggc ctgtcccagt cggctctgcc ctaccgccgc agcgtcccca cctggctgaa    1087
gctgacgtcc gacgacgtga aggagcagat ctacaaactg gccaagaagg gtctgactcc    1147
ctcgcagatc ggtgtgatcc tgagagactc ccatggtgtt gcacaagtac gttttgtgac    1207
aggcaataaa atcttgagaa ttcttaagtc caagggactt gcacctgatc tccctgagga    1267
tctgtaccat ttgattaaga aagctgttgc tgttcgaaag catcttgaga ggaacagaaa    1327
ggataaggat gccaaattcc gactgattct gattgagagc cgtattcacc gattggctcg    1387
atattataag accaaaagag ttctccctcc caattggaaa tacgagtcat ccacagcctc    1447
tgccctggtc gcataaattt ggctatgtac tcaagcaata aaatcattgt ctactagaaa    1507
a                                                                    1508
 
<210>2
<211>306
<212>PRT
<213>家犬
 
<400>2
 
Met Ala Ala Leu Tyr Ala Cys Thr Lys Cys His Gln Arg Phe Pro Phe
1               5                   10                  15
Glu Ala Leu Ser Gln Gly Gln Gln Leu Cys Lys Glu Cys Arg Ile Ala
            20                  25                  30
His Pro Val Val Lys Cys Thr Tyr Cys Arg Thr Glu Tyr Gln Gln Glu
        35                  40                  45
Ser Lys Thr Asn Thr Ile Cys Lys Lys Cys Ala Gln Asn Val Gln Leu
    50                  55                  60
Tyr Gly Thr Pro Lys Pro Cys Gln Tyr Cys Asn Ile Ile Ala Ala Phe
65                  70                  75                  80
Ile Gly Asn Lys Cys Gln Arg Cys Thr Asn Ser Glu Lys Lys Tyr Gly
                85                  90                  95
Pro Pro Tyr Ser Cys Glu Gln Cys Lys Gln Gln Cys Ala Phe Asp Arg
            100                 105                 110
Lys Asp Asp Arg Lys Lys Val Asp Gly Lys Leu Leu Cys Trp Leu Cys
        115                 120                 125
Thr Leu Ser Tyr Lys Arg Val Leu Gln Lys Thr Lys Glu Gln Arg Lys
    130                 135                 140
His Leu Ser Ser Ser Ser Arg Ala Ser His Gln Glu Lys Glu Gln Tyr
145                 150                 155                 160
Arg Leu Ser Gly Gly Ser His Tyr Asn Ser Gln Lys Thr Leu Ser Thr
                165                 170                 175
Ser Ser Ile Gln Asn Glu Ile Pro Lys Lys Lys Ser Lys Phe Glu Ser
            180                 185                 190
Ile Thr Thr Asn Gly Asp Ser Phe Ser Pro Asp Leu Ala Leu Asp Ser
        195                 200                 205
Pro Gly Thr Asp His Phe Val Ile Ile Ala Gln Leu Lys Glu Glu Val
    210                 215                 220
Ala Thr Leu Lys Lys Met Leu His Gln Lys Asp Gln Met Ile Leu Glu
225                 230                 235                 240
Lys Glu Lys Lys Ile Thr Glu Leu Lys Ala Asp Phe Gln Tyr Gln Glu
                245                 250                 255
Ser Gln Met Arg Ala Lys Met Asn Gln Met Glu Lys Thr His Lys Glu
            260                 265                 270
Val Thr Glu Gln Leu Gln Ala Lys Asn Arg Glu Leu Leu Lys Gln Ala
        275                 280                 285
Ala Ala Leu Ser Lys Ser Lys Lys Ser Glu Lys Ser Gly Ala Ile Thr
    290                 295                 300
Ser Pro
305
 
<210>3
<211>2161
<212>DNA
<213>人
 
<220>
<221>CDS
<222>(103)..(1026)
<223>
 
<400>3
gccgcagcca gcagcctgca gccgccgccg ggttgtgcct cagactgtca gataaatcgg   60
cgggccgggc cggcgggtcg gtgagcgcgg cccgggccgg ac atg gcg gcg ctc      114
                                               Met Ala Ala Leu
                                               1
tac gcc tgc acc aag tgc cac cag cgc ttc ccc ttc gag gcg ctg tct      162
Tyr Ala Cys Thr Lys Cys His Gln Arg Phe Pro Phe Glu Ala Leu Ser
5                   10                  15                  20
cag ggg cag cag ctg tgc aag gaa tgt cgg att gca cac cct gtt gtg      210
Gln Gly Gln Gln Leu Cys Lys Glu Cys Arg Ile Ala His Pro Val Val
                25                  30                  35
aag tgc acc tac tgc agg act gag tac cag cag gag agt aaa acc aat      258
Lys Cys Thr Tyr Cys Arg Thr Glu Tyr Gln Gln Glu Ser Lys Thr Asn
            40                  45                  50
aca ata tgc aag aaa tgt gct cag aac gtg cag ttg tat gga acg ccc      306
Thr Ile Cys Lys Lys Cys Ala Gln Asn Val Gln Leu Tyr Gly Thr Pro
        55                  60                  65
aaa cct tgt cag tat tgc aac ata att gca gca ttt att ggg aat aaa      354
Lys Pro Cys Gln Tyr Cys Asn Ile Ile Ala Ala Phe Ile Gly Asn Lys
    70                  75                  80
tgc cag cgc tgc aca aat tca gaa aag aag tat gga cca ccc tat tct      402
Cys Gln Arg Cys Thr Asn Ser Glu Lys Lys Tyr Gly Pro Pro Tyr Ser
85                  90                  95                  100
tgt gaa cag tgc aag cag cag tgt gca ttt gac agg aaa gat gat aga      450
Cys Glu Gln Cys Lys Gln Gln Cys Ala Phe Asp Arg Lys Asp Asp Arg
                105                 110                 115
aag aag gta gat ggg aaa ttg ctg tgc tgg ctg tgc aca ctt tca tac      498
Lys Lys Val Asp Gly Lys Leu Leu Cys Trp Leu Cys Thr Leu Ser Tyr
            120                 125                 130
aaa cgg gtc ctt cag aag acc aaa gag cag agg aaa cac ctg agt agc      546
Lys Arg Val Leu Gln Lys Thr Lys Glu Gln Arg Lys His Leu Ser Ser
        135                 140                 145
tct tct cgt gct ggc cac cag gag aag gag cag tat agt cgc ctg agt      594
Ser Ser Arg Ala Gly His Gln Glu Lys Glu Gln Tyr Ser Arg Leu Ser
    150                 155                 160
ggt ggt ggc cat tat aac agc cag aaa aca ctt tct aca tct tca att      642
Gly Gly Gly His Tyr Asn Ser Gln Lys Thr Leu Ser Thr Ser Ser Ile
165                 170                 175                 180
caa aat gaa atc cca aag aaa aag tcc aag ttt gag tca atc aca act      690
Gln Asn Glu Ile Pro Lys Lys Lys Ser Lys Phe Glu Ser Ile Thr Thr
                185                 190                 195
aat gga gac agc ttc tcc cca gac ctg gct ctg gac tca cca ggc act      738
Asn Gly Asp Ser Phe Ser Pro Asp Leu Ala Leu Asp Ser Pro Gly Thr
            200                 205                 210
gac cac ttt gtc atc att gcc caa ctg aag gaa gaa gtg gct acc ctg      786
Asp His Phe Val Ile Ile Ala Gln Leu Lys Glu Glu Val Ala Thr Leu
        215                 220                 225
aag aag atg ttg cat caa aag gat caa atg att tta gag aaa gag aag      834
Lys Lys Met Leu His Gln Lys Asp Gln Met Ile Leu Glu Lys Glu Lys
    230                 235                 240
aag att aca gag ttg aag gct gat ttt cag tac cag gaa tcg cag atg      882
Lys Ile Thr Glu Leu Lys Ala Asp Phe Gln Tyr Gln Glu Ser Gln Met
245                 250                 255                 260
aga gcc aaa atg aac cag atg gag aaa acc cac aaa gaa gtc aca gaa      930
Arg Ala Lys Met Asn Gln Met Glu Lys Thr His Lys Glu Val Thr Glu
                265                 270                 275
caa ctg cag gcc aaa aac cga gag ctc ctg aag cag gca gct gct ttg      978
Gln Leu Gln Ala Lys Asn Arg Glu Leu Leu Lys Gln Ala Ala Ala Leu
            280                 285                 290
tcc aag agc aag aag tca gag aag tca gga gct ata acc tct cca tga      1026
Ser Lys Ser Lys Lys Ser Glu Lys Ser Gly Ala Ile Thr Ser Pro
        295                 300                 305
cagacctcaa ggaggctccc tagcaacagc aaatggagtt gtccagggtt agggttggag   1086
acctggctgt tctgtgggaa ttgcaagctt tcttaagaaa tctctatttt attacagtta   1146
tccttctttg tgcgattgca gtgggctgaa tggaaacacc tggtttgtgc tgtgttagac   1206
tgcatgcttg agtgtttggg atttcaagct cgctctcttt ctctcactat taggactttt   1266
ctttttcttc ttcctcttct ctctattttg gttctattct ttttttttct tttttctttt   1326
tttttttttt tttttttttg tggtggtcac tgctcagtgt aatgtgcaga atgatttgtt   1386
ttttgttttt tttttttttt tttggtcctt cattgcatcc tgccataccc atgagcaaac   1446
agtttggcat taattatata tcactgccac cctctgaact ttgaaaactg ccatcttcag   1506
acttggtata atggaagagg ctttctctct ccaataaacc ttttgcttca gggtatactc   1566
ttcggttttt ttccagatgt attatgtatg aactttgtac tatgtatagc cagagtttta   1626
tttatttttt aaaaaagaaa ctttttcttg ataaaggaat aatggtggtc tagctagttc   1686
ttgtaaaagt gatgcctctt gaaaaaaaac agtcctattc actagctttt agtaaaagaa   1746
tcagatcttt tctttcttgt taccttggag tcttaaaaac tgattgctaa ggtgaaacaa   1806
ttcaatgcat aagtatggag ctaagtgcct tttggaggat ttcttggaag agcatttatg   1866
gagatactta agggaggtag caaagatttg aaccgtctgt ctttttaagt aagggcagaa   1926
agcaaggttg tccaggttgt actggacact tctctcccca cccctttcct gattgtttta   1986
tgtgattgat tttaaattct cacactgcca cttctttaaa aaataaaatc ctttatttgc   2046
ttaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa   2106
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa        2161
 
<210>4
<211>307
<212>PRT
<213>人
<400>4
 
Met Ala Ala Leu Tyr Ala Cys Thr Lys Cys His Gln Arg Phe Pro Phe
1               5                   10                  15
Glu Ala Leu Ser Gln Gly Gln Gln Leu Cys Lys Glu Cys Arg Ile Ala
            20                  25                  30
His Pro Val Val Lys Cys Thr Tyr Cys Arg Thr Glu Tyr Gln Gln Glu
        35                  40                  45
Ser Lys Thr Asn Thr Ile Cys Lys Lys Cys Ala Gln Asn Val Gln Leu
    50                  55                  60
Tyr Gly Thr Pro Lys Pro Cys Gln Tyr Cys Asn Ile Ile Ala Ala Phe
65                  70                  75                  80
Ile Gly Asn Lys Cys Gln Arg Cys Thr Asn Ser Glu Lys Lys Tyr Gly
                85                  90                  95
Pro Pro Tyr Ser Cys Glu Gln Cys Lys Gln Gln Cys Ala Phe Asp Arg
            100                 105                 110
Lys Asp Asp Arg Lys Lys Val Asp Gly Lys Leu Leu Cys Trp Leu Cys
        115                 120                 125
Thr Leu Ser Tyr Lys Arg Val Leu Gln Lys Thr Lys Glu Gln Arg Lys
    130                 135                 140
His Leu Ser Ser Ser Ser Arg Ala Gly His Gln Glu Lys Glu Gln Tyr
145                 150                 155                 160
Ser Arg Leu Ser Gly Gly Gly His Tyr Asn Ser Gln Lys Thr Leu Ser
                165                 170                 175
Thr Ser Ser Ile Gln Asn Glu Ile Pro Lys Lys Lys Ser Lys Phe Glu
            180                 185                 190
Ser Ile Thr Thr Asn Gly Asp Ser Phe Ser Pro Asp Leu Ala Leu Asp
        195                 200                 205
Ser Pro Gly Thr Asp His Phe Val Ile Ile Ala Gln Leu Lys Glu Glu
    210                 215                 220
Val Ala Thr Leu Lys Lys Met Leu His Gln Lys Asp Gln Met Ile Leu
225                 230                 235                 240
Glu Lys Glu Lys Lys Ile Thr Glu Leu Lys Ala Asp Phe Gln Tyr Gln
                245                 250                 255
Glu Ser Gln Met Arg Ala Lys Met Asn Gln Met Glu Lys Thr His Lys
            260                 265                 270
Glu Val Thr Glu Gln Leu Gln Ala Lys Asn Arg Glu Leu Leu Lys Gln
        275                 28                 0285
Ala Ala Ala Leu Ser Lys Ser Lys Lys Ser Glu Lys Ser Gly Ala Ile
    290                 295                 300
Thr Ser Pro
305
 
<210>5
<211>20
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>5
aattaaccct cactaaaggg    20
 
<210>6
<211>19
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>6
taatacgact cactatagg    19
 
<210>7
<211>18
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>7
agctgtgcaa ggaatgtc       18
 
<210>8
<211>18
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>8
ccattagttg tgattgac       18
 
<210>9
<211>18
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>GAPDH引物
 
<400>9
gggctgcttt taactctg         18
 
<210>10
<211>18
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>GAPDH引物
 
<400>10
ccaggaaatg agcttgac         18
 
<210>11
<211>22
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>11
atcatatggc ggcgctctac gc    22
 
<210>12
<211>25
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>12
 
cgctcgagtg gagaagttat agctc    25
 
<210>13
<211>23
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>13
gatatcatgg cggcgctcta cgc    23
 
<210>14
<211>24
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>14
gaattctcat ggagaggtta tagc    24
 
<210>15
<211>2326
<212>DNA
<213>家犬
 
<220>
<221>CDS
<222>(62)..(1894)
<223>
 
<400>15
cagcgcctcg gacatcggag ctgccgctgc cgaacacggg cccgcaacac aggtaatcag  60
t atg cat ttc caa agc ttt tgg cta tgt ctg gga ctt ctg ttc atc tca  109
  Met His Phe Gln Ser Phe Trp Leu Cys Leu Gly Leu Leu Phe Ile Ser
  1               5                   10                  15
gtt aat gca gaa ttt atg gat gat gat gtt gag atg gaa gat ttt gat    157
Val Asn Ala Glu Phe Met Asp Asp Asp Val Glu Met Glu Asp Phe Asp
            20                  25                  30
gaa aat tca gaa gag att gat gtt aat gaa ggt gaa ctc ccc tca gag    205
Glu Asn Ser Glu Glu Ile Asp Val Asn Glu Gly Glu Leu Pro Ser Glu
        35                  40                  45
att aat tat aag aca cct cag cct atg gga gaa gta tat ttt aca gaa    253
Ile Asn Tyr Lys Thr Pro Gln Pro Met Gly Glu Val Tyr Phe Thr Glu
    50                  55                  60
act ttt gat agt gga agg ttg gct ggg tgg gtc tta tca aaa gca aag    301
Thr Phe Asp Ser Gly Arg Leu Ala Gly Trp Val Leu Ser Lys Ala Lys
65                  70                  75                  80
aaa gat gat aca gat gca gag att tcc ata tat gat gga aga tgg gaa    349
Lys Asp Asp Thr Asp Ala Glu Ile Ser Ile Tyr Asp Gly Arg Trp Glu
                85                  90                  95
ata gaa gaa ttg aaa gaa aac cga gtg cct ggt gac aga ggg ctg gta    397
Ile Glu Glu Leu Lys Glu Asn Arg Val Pro Gly Asp Arg Gly Leu Val
            100                 105                 110
ctg aaa tct aga gca aag cat cat gca ata gct gct gta tta gca aaa    445
Leu Lys Ser Arg Ala Lys His His Ala Ile Ala Ala Val Leu Ala Lys
        115                 120                 125
ccc ttc att ttt gct gac aaa ccc ttg atc gtt caa tat gaa gta aat    493
Pro Phe Ile Phe Ala Asp Lys Pro Leu Ile Val Gln Tyr Glu Val Asn
    130                 135                 140
ttt caa gat ggt att gat tgt gga ggt gca tac att aaa ctc cta gca    541
Phe Gln Asp Gly Ile Asp Cys Gly Gly Ala Tyr Ile Lys Leu Leu Ala
145                 150                 155                 160
gac act gat ggt ttg aat ctg gaa aac ttt tat gat aaa aca tcc tat    589
Asp Thr Asp Gly Leu Asn Leu Glu Asn Phe Tyr Asp Lys Thr Ser Tyr
                165                 170                 175
acc att atg ttt gga cca gat aaa tgt gga gaa gat tat aaa ctt cat    637
Thr Ile Met Phe Gly Pro Asp Lys Cys Gly Glu Asp Tyr Lys Leu His
            180                 185                 190
ttc atc ttc aga cac aaa cat cct aaa act gga gtt ttt gaa gag aaa    685
Phe Ile Phe Arg His Lys His Pro Lys Thr Gly Val Phe Glu Glu Lys
        195                 200                 205
cat gcc aaa cct cca gat gta gac ctt aaa aag ttc ttt aca gac agg    733
His Ala Lys Pro Pro Asp Val Asp Leu Lys Lys Phe Phe Thr Asp Arg
    210                 215                 220
aag act cat ctt tat acc ctt gtg atg aat cca gat gac aca ttt gaa    781
Lys Thr His Leu Tyr Thr Leu Val Met Asn Pro Asp Asp Thr Phe Glu
225                 230                 235                 240
gta cta att gat caa gta gtt gta aac caa gga agc ctc cta gaa gat    829
Val Leu Ile Asp Gln Val Val Val Asn Gln Gly Ser Leu Leu Glu Asp
                245                 250                 255
gtg gtt cct cct atc aat cct ccc aaa gaa att gaa gac ccc agt gat    877
Val Val Pro Pro Ile Asn Pro Pro Lys Glu Ile Glu Asp Pro Ser Asp
            260                 265                 270
aaa aag cct gat gaa tgg gat gaa aga gca aaa atc cct gat cct tct    925
Lys Lys Pro Asp Glu Trp Asp Glu Arg Ala Lys Ile Pro Asp Pro Ser
        275                 280                 285
gct gtc aaa cca gaa gac tgg gat gaa agt gaa cct gcc caa ata gaa    973
Ala Val Lys Pro Glu Asp Trp Asp Glu Ser Glu Pro Ala Gln Ile Glu
    290                 295                 300
gat tta agt gtt gtt aaa cct gat ggc tgg ctt gat gat gaa cca aaa    1021
Asp Leu Ser Val Val Lys Pro Asp Gly Trp Leu Asp Asp Glu Pro Lys
305                 310                 315                 320
ttt att cca gat cca aat gct gaa aaa cct gat gac tgg aat gaa gac    1069
Phe Ile Pro Asp Pro Asn Ala Glu Lys Pro Asp Asp Trp Asn Glu Asp
                325                 330                 335
atg gat gga gaa tgg gag gca cct cgt att tct aat cca gca tgt cga    1117
Met Asp Gly Glu Trp Glu Ala Pro Arg Ile Ser Asn Pro Ala Cys Arg
            340                 345                 350
att ggg tgt ggt gag tgg tca cct ccc atg ata gat aat ccc aaa tac    1165
Ile Gly Cys Gly Glu Trp Ser Pro Pro Met Ile Asp Asn Pro Lys Tyr
        355                 360                 365
aaa gga gta tgg aga cct cca atg ata gat aat cct aac tac cag gga    1213
Lys Gly Val Trp Arg Pro Pro Met Ile Asp Asn Pro Asn Tyr Gln Gly
    370                 375                 380
atc tgg agt cct cga aaa atc ccg aat cca gat tat ttt gaa gat gat    1261
Ile Trp Ser Pro Arg Lys Ile Pro Asn Pro Asp Tyr Phe Glu Asp Asp
385                 390                 395                 400
cat cca ttt ctt ctg act tct ttc cgt gct ctt ggt tta gag ctt tgg    1309
His Pro Phe Leu Leu Thr Ser Phe Arg Ala Leu Gly Leu Glu Leu Trp
                405                 410                 415
tct atg acc tct aat att tac ttt gat aat ttt att atc tgc tcg gaa    1357
Ser Met Thr Ser Asn Ile Tyr Phe Asp Asn Phe Ile Ile Cys Ser Glu
            420                 425                 430
aag gaa aca gca gat cgc tgg gct gca gat ggg tgg gga gtg aag ata    1405
Lys Glu Thr Ala Asp Arg Trp Ala Ala Asp Gly Trp Gly Val Lys Ile
        435                 440                 445
ctg gta gca aat gct aac gag cct ggt ata ttt aaa cag tta atg gca    1453
Leu Val Ala Asn Ala Asn Glu Pro Gly Ile Phe Lys Gln Leu Met Ala
    450                 455                 460
gct gct gaa gag cgc cca tgg ctt tgg ctc att tat ttt gtg aca gca    1501
Ala Ala Glu Glu Arg Pro Trp Leu Trp Leu Ile Tyr Phe Val Thr Ala
465                 470                 475                 480
ggg ctt cca ata gca tta att gct tca ttt tgt tgg cca aga aaa gtc    1549
Gly Leu Pro Ile Ala Leu Ile Ala Ser Phe Cys Trp Pro Arg Lys Val
                485                 490                 495
aag aaa aaa tat gaa gat tca gag tat aaa aag act gac ata tgc aag    1597
Lys Lys Lys Tyr Glu Asp Ser Glu Tyr Lys Lys Thr Asp Ile Cys Lys
            500                 505                 510
cca caa aca aag gga gca cta gag caa gaa gtg aag gaa aag aaa gct    1645
Pro Gln Thr Lys Gly Ala Leu Glu Gln Glu Val Lys Glu Lys Lys Ala
        515                 520                 525
gcc ctg gag aaa cca gta gac ttg gaa gaa gaa aaa aag caa agt gat    1693
Ala Leu Glu Lys Pro Val Asp Leu Glu Glu Glu Lys Lys Gln Ser Asp
    530                 535                 540
ggt gaa act gtt gaa aaa gaa gag gaa gct gaa cct gag gaa aag agt    1741
Gly Glu Thr Val Glu Lys Glu Glu Glu Ala Glu Pro Glu Glu Lys Ser
545                 550                 555                 560
gaa gaa gaa att gaa atc ata gaa gga caa gaa gaa ggt aat aaa tca    1789
Glu Glu Glu Ile Glu Ile Ile Glu Gly Gln Glu Glu Gly Asn Lys Ser
                565                 570                 575
aat aag tct gga tca gag gat gag atg aag gaa gcg gat gag agc aca    1837
Asn Lys Ser Gly Ser Glu Asp Glu Met Lys Glu Ala Asp Glu Ser Thr
            580                 585                 590
gga tct gga gat ggg cca gtg aag tca gtg cgc aaa aga aga gta cga    1885
Gly Ser Gly Asp Gly Pro Val Lys Ser Val Arg Lys Arg Arg Val Arg
       595                 600                 605
aag gaa taa actatattca agtattttta attcctgagc gagatatttg            1934
Lys Glu
    610
gcattctaaa atcagtgtgc cagagctgaa cttgagtcag tctgcacatg tttctaatat  1994
ctagcaatgt tattctttca gacacttatt ttagtctttc ttttcaggaa aaaaaaaact  2054
ttcaagttac ctggtctttg gatttagagt aaaaaagagg ggcatgttac gtatcagatt  2114
taagagacta ataccattag aagttaccaa gttttaatag ttggagaaag ttttggtttg  2174
tacagagaaa aataatatgc agcagctttg ctgctgttgg aaaatcagtt attggaattt  2234
ccccttaaac agctatacaa caatattact ggtagttcta taataaaaat gagagtgtgt  2294
tctgttgtac agagctaact gcaaaaaaaa aa                                2326
 
<210>16
<211>610
<212>PRT
<213>家犬
 
<400>16
 
Met His Phe Gln Ser Phe Trp Leu Cys Leu Gly Leu Leu Phe Ile Ser
1               5                   10                  15
Val Asn Ala Glu Phe Met Asp Asp Asp Val Glu Met Glu Asp Phe Asp
            20                  25                  30
Glu Asn Ser Glu Glu Ile Asp Val Asn Glu Gly Glu Leu Pro Ser Glu
        35                  40                  45
Ile Asn Tyr Lys Thr Pro Gln Pro Met Gly Glu Val Tyr Phe Thr Glu
    50                  55                  60
Thr Phe Asp Ser Gly Arg Leu Ala Gly Trp Val Leu Ser Lys Ala Lys
65                  70                  75                  80
Lys Asp Asp Thr Asp Ala Glu Ile Ser Ile Tyr Asp Gly Arg Trp Glu
                85                  90                  95
Ile Glu Glu Leu Lys Glu Asn Arg Val Pro Gly Asp Arg Gly Leu Val
            100                 105                 110
Leu Lys Ser Arg Ala Lys His His Ala Ile Ala Ala Val Leu Ala Lys
        115                 120                 125
Pro Phe Ile Phe Ala Asp Lys Pro Leu Ile Val Gln Tyr Glu Val Asn
    130                 135                 140
Phe Gln Asp Gly Ile Asp Cys Gly Gly Ala Tyr Ile Lys Leu Leu Ala
145                 150                 155                 160
Asp Thr Asp Gly Leu Asn Leu Glu Asn Phe Tyr Asp Lys Thr Ser Tyr
                165                 170                 175
Thr Ile Met Phe Gly Pro Asp Lys Cys Gly Glu Asp Tyr Lys Leu His
            180                 185                 190
Phe Ile Phe Arg His Lys His Pro Lys Thr Gly Val Phe Glu Glu Lys
        195                 200                 205
His Ala Lys Pro Pro Asp Val Asp Leu Lys Lys Phe Phe Thr Asp Arg
    210                 215                 220
Lys Thr His Leu Tyr Thr Leu Val Met Asn Pro Asp Asp Thr Phe Glu
225                 230                 235                 240
Val Leu Ile Asp Gln Val Val Val Asn Gln Gly Ser Leu Leu Glu Asp
                245                 250                 255
Val Val Pro Pro Ile Asn Pro Pro Lys Glu Ile Glu Asp Pro Ser Asp
            260                 265                 270
Lys Lys Pro Asp Glu Trp Asp Glu Arg Ala Lys Ile Pro Asp Pro Ser
        275                 280                 285
Ala Val Lys Pro Glu Asp Trp Asp Glu Ser Glu Pro Ala Gln Ile Glu
    290                 295                 300
Asp Leu Ser Val Val Lys Pro Asp Gly Trp Leu Asp Asp Glu Pro Lys
305                 310                 315                 320
Phe Ile Pro Asp Pro Asn Ala Glu Lys Pro Asp Asp Trp Asn Glu Asp
                325                 330                 335
Met Asp Gly Glu Trp Glu Ala Pro Arg Ile Ser Asn Pro Ala Cys Arg
            340                 345                 350
Ile Gly Cys Gly Glu Trp Ser Pro Pro Met Ile Asp Asn Pro Lys Tyr
        355                 360                 365
Lys Gly Val Trp Arg Pro Pro Met Ile Asp Asn Pro Asn Tyr Gln Gly
    370                 375                 380
Ile Trp Ser Pro Arg Lys Ile Pro Asn Pro Asp Tyr Phe Glu Asp Asp
385                 390                 395                 400
His Pro Phe Leu Leu Thr Ser Phe Arg Ala Leu Gly Leu Glu Leu Trp
                405                 410                 415
Ser Met Thr Ser Asn Ile Tyr Phe Asp Asn Phe Ile Ile Cys Ser Glu
            420                 425                 430
Lys Glu Thr Ala Asp Arg Trp Ala Ala Asp Gly Trp Gly Val Lys Ile
        435                 440                 445
Leu Val Ala Asn Ala Asn Glu Pro Gly Ile Phe Lys Gln Leu Met Ala
    450                 455                 460
Ala Ala Glu Glu Arg Pro Trp Leu Trp Leu Ile Tyr Phe Val Thr Ala
465                 470                 475                 480
Gly Leu Pro Ile Ala Leu Ile Ala Ser Phe Cys Trp Pro Arg Lys Val
                485                 490                 495
Lys Lys Lys Tyr Glu Asp Ser Glu Tyr Lys Lys Thr Asp Ile Cys Lys
           500                 505                 510
Pro Gln Thr Lys Gly Ala Leu Glu Gln Glu Val Lys Glu Lys Lys Ala
        515                 520                 525
Ala Leu Glu Lys Pro Val Asp Leu Glu Glu Glu Lys Lys Gln Ser Asp
    530                 535                 540
Gly Glu Thr Val Glu Lys Glu Glu Glu Ala Glu Pro Glu Glu Lys Ser
545                 550                 555                 560
Glu Glu Glu Ile Glu Ile Ile Glu Gly Gln Glu Glu Gly Asn Lys Ser
                565                 570                 575
Asn Lys Ser Gly Ser Glu Asp Glu Met Lys Glu Ala Asp Glu Ser Thr
            580                 585                 590
Gly Ser Gly Asp Gly Pro Val Lys Ser Val Arg Lys Arg Arg Val Arg
        595                 600                 605
Lys Glu
    610
 
<210>17
<211>2710
<212>DNA
<213>人
 
<220>
<221>CDS
<222>(102)..(1934)
<223>
 
<400>17
cgccggcggg actggtctga agagacgcgg ggacaaagtg gcaacgactt ggacatctga    60
gctgtcactg ccgaaaacag gccgcaagag agataatcaa t atg cat ttc caa gcc    116
                                              Met His Phe Gln Ala
                                            1               5
ttt tgg cta tgt ttg ggt ctt ctg ttc atc tca att aat gca gaa ttt    164
Phe Trp Leu Cys Leu Gly Leu Leu Phe Ile Ser Ile Asn Ala Glu Phe
                10                  15                  20
atg gat gat gat gtt gag acg gaa gac ttt gaa gaa aat tca gaa gaa    212
Met Asp Asp Asp Val Glu Thr Glu Asp Phe Glu Glu Asn Ser Glu Glu
            25                  30                  35
att gat gtt aat gaa agt gaa ctt tcc tca gag att aaa tat aag aca    260
Ile Asp Val Asn Glu Ser Glu Leu Ser Ser Glu Ile Lys Tyr Lys Thr
        40                  45                  50
cct caa cct ata gga gaa gta tat ttt gca gaa act ttt gat agt gga    308
Pro Gln Pro Ile Gly Glu Val Tyr Phe Ala Glu Thr Phe Asp Ser Gly
    55                  60                  65
agg ttg gct gga tgg gtc tta tca aaa gca aag aaa gat gac atg gat    356
Arg Leu Ala Gly Trp Val Leu Ser Lys Ala Lys Lys Asp Asp Met Asp
70                  75                  80                  85
gag gaa att tca ata tac gat gga aga tgg gaa att gaa gag ttg aaa    404
Glu Glu Ile Ser Ile Tyr Asp Gly Arg Trp Glu Ile Glu Glu Leu Lys
                90                  95                  100
gaa aac cag gta cct ggt gac aga gga ctg gta tta aaa tct aga gca    452
Glu Asn Gln Val Pro Gly Asp Arg Gly Leu Val Leu Lys Ser Arg Ala
            105                 110                 115
aag cat cat gca ata tct gct gta tta gca aaa cca ttc att ttt gct    500
Lys His His Ala Ile Ser Ala Val Leu Ala Lys Pro Phe Ile Phe Ala
        120                 125                 130
gat aaa ccc ttg ata gtt caa tat gaa gta aat ttt caa gat ggt att    548
Asp Lys Pro Leu Ile Val Gln Tyr Glu Val Asn Phe Gln Asp Gly Ile
    135                 140                 145
gat tgt gga ggt gca tac att aaa ctc cta gca gac act gat gat ttg    596
Asp Cys Gly Gly Ala Tyr Ile Lys Leu Leu Ala Asp Thr Asp Asp Leu
150                 155                 160                 165
att ctg gaa aac ttt tat gat aaa aca tcc tat atc att atg ttt gga    644
Ile Leu Glu Asn Phe Tyr Asp Lys Thr Ser Tyr Ile Ile Met Phe Gly
                170                 175                 180
cca gat aaa tgt gga gaa gat tat aaa ctt cat ttt atc ttc aga cat    692
Pro Asp Lys Cys Gly Glu Asp Tyr Lys Leu His Phe Ile Phe Arg His
            185                 190                 195
aaa cat ccc aaa act gga gtt ttc gaa gag aaa cat gcc aaa cct cca    740
Lys His Pro Lys Thr Gly Val Phe Glu Glu Lys His Ala Lys Pro Pro
        200                 205                 210
gat gta gac ctt aaa aag ttc ttt aca gac agg aag act cat ctt tat    788
Asp Val Asp Leu Lys Lys Phe Phe Thr Asp Arg Lys Thr His Leu Tyr
    215                 220                 225
acc ctt gtg atg aat cca gat gac aca ttt gag gtg tta gtt gat caa    836
Thr Leu Val Met Asn Pro Asp Asp Thr Phe Glu Val Leu Val Asp Gln
230                 235                 240                 245
aca gtt gta aac aaa gga agc ctc cta gag gat gtg gtt cct cct atc    884
Thr Val Val Asn Lys Gly Ser Leu Leu Glu Asp Val Val Pro Pro Ile
                250                 255                 260
aaa cct ccc aaa gaa att gaa gat ccc aat gat aaa aaa cct gag gaa    932
Lys Pro Pro Lys Glu Ile Glu Asp Pro Asn Asp Lys Lys Pro Glu Glu
            265                 270                 275
tgg gat gaa aga gca aaa att cct gat cct tct gcc gtc aaa cca gaa    980
Trp Asp Glu Arg Ala Lys Ile Pro Asp Pro Ser Ala Val Lys Pro Glu
        280                 285                 290
gac tgg gat gaa agt gaa cct gcc caa ata gaa gat tca agt gtt gtt    1028
Asp Trp Asp Glu Ser Glu Pro Ala Gln Ile Glu Asp Ser Ser Val Val
    295                 300                 305
aaa cct gct ggc tgg ctt gat gat gaa cca aaa ttt atc cct gat cct     1076
Lys Pro Ala Gly Trp Leu Asp Asp Glu Pro Lys Phe Ile Pro Asp Pro
310                 315                 320                 325
aat gct gaa aaa cct gat gac tgg aat gaa gac acg gat gga gaa tgg     1124
Asn Ala Glu Lys Pro Asp Asp Trp Asn Glu Asp Thr Asp Gly Glu Trp
                330                 335                 340
gag gca cct cag att ctt aat cca gca tgt cgg att ggg tgt ggt gag     1172
Glu Ala Pro Gln Ile Leu Asn Pro Ala Cys Arg Ile Gly Cys Gly Glu
            345                 350                 355
tgg aaa cct ccc atg ata gat aac cca aaa tac aaa gga gta tgg aga     1220
Trp Lys Pro Pro Met Ile Asp Asn Pro Lys Tyr Lys Gly Val Trp Arg
        360                 365                 370
cct cca ctg gtc gat aat cct aac tat cag gga atc tgg agt cct cga     1268
Pro Pro Leu Val Asp Asn Pro Asn Tyr Gln Gly Ile Trp Ser Pro Arg
    375                 380                 385
aaa att cct aat cca gat tat ttc gaa gat gat cat cca ttt ctt ctg     1316
Lys Ile Pro Asn Pro Asp Tyr Phe Glu Asp Asp His Pro Phe Leu Leu
390                 395                 400                 405
act tct ttc agt gct ctt ggt tta gag ctt tgg tct atg acc tct gat     1364
Thr Ser Phe Ser Ala Leu Gly Leu Glu Leu Trp Ser Met Thr Ser Asp
                410                 415                 420
atc tac ttt gat aat ttt att atc tgt tcg gaa aag gaa gta gca gat     1412
Ile Tyr Phe Asp Asn Phe Ile Ile Cys Ser Glu Lys Glu Val Ala Asp
            425                 430                 435
cac tgg gct gca gat ggt tgg aga tgg aaa ata atg ata gca aat gct     1460
His Trp Ala Ala Asp Gly Trp Arg Trp Lys Ile Met Ile Ala Asn Ala
        440                 445                 450
aat aag cct ggt gta tta aaa cag tta atg gca gct gct gaa ggg cac     1508
Asn Lys Pro Gly Val Leu Lys Gln Leu Met Ala Ala Ala Glu Gly His
    455                 460                 465
cca tgg ctt tgg ttg att tat ctt gtg aca gca gga gtg cca ata gca     1556
Pro Trp Leu Trp Leu Ile Tyr Leu Val Thr Ala Gly Val Pro Ile Ala
470                 475                 480                 485
tta att act tca ttt tgt tgg cca aga aaa gta aag aaa aaa cat aaa     1604
Leu Ile Thr Ser Phe Cys Trp Pro Arg Lys Val Lys Lys Lys His Lys
                490                 495                 500
gat aca gag tat aaa aaa acc gac ata tgt ata cca caa aca aaa gga     1652
Asp Thr Glu Tyr Lys Lys Thr Asp Ile Cys Ile Pro Gln Thr Lys Gly
            505                 510                 515
gta cta gag caa gaa gaa aag gaa gag aaa gca gcc ctg gaa aaa cca     1700
Val Leu Glu Gln Glu Glu Lys Glu Glu Lys Ala Ala Leu Glu Lys Pro
        520                 525                 530
atg gac ctg gaa gag gaa aaa aag caa aat gat ggt gaa atg ctt gaa     1748
Met Asp Leu Glu Glu Glu Lys Lys Gln Asn Asp Gly Glu Met Leu Glu
    535                 540                 545
aaa gaa gag gaa agt gaa cct gag gaa aag agt gaa gaa gaa att gaa     1796
Lys Glu Glu Glu Ser Glu Pro Glu Glu Lys Ser Glu Glu Glu Ile Glu
550                 555                 560                 565
atc ata gaa ggg caa gaa gaa agt aat caa tca aat aag tct ggg tca     1844
Ile Ile Glu Gly Gln Glu Glu Ser Asn Gln Ser Asn Lys Ser Gly Ser
                570                 575                 580
gag gat gag atg aaa gaa gca gat gag agc aca gga tct gga gat ggg     1892
Glu Asp Glu Met Lys Glu Ala Asp Glu Ser Thr Gly Ser Gly Asp Gly
            585                 590                 595
ccg ata aag tca gta cgc aaa aga aga gta cga aag gac taa             1934
Pro Ile Lys Ser Val Arg Lys Arg Arg Val Arg Lys Asp
        600                 605                 610
actagattga aatattttta attcccgaga ggatgtttgg cattgtaaaa atcagcatgc    1994
cagacctgaa ctttaatcag tctgcacatc ctgtttctaa tatctagcaa cattatattc    2054
tttcagacat ttattttagt ccttcatttc cgaggaaaaa gaagcaactt tgaagttacc    2114
tcatctttga atttagaata aaagtggcac attacatatc ggatctaaga gattaatacc    2174
attagaagtt acacagtttt agttgtttgg agatagtttt ggtttgtaca gaacaaaata    2234
atatgtagca gcttcattgc tattggaaaa atcagttatt ggaatttcca cttaaatggc    2294
tatacaacaa tataactggt agttctataa taaaaatgag catatgttct gttgtgaaga    2354
gctaaatgca ataaagtttc tgtatggttg tttgattcta tcaacaattg aaagtgttgt    2414
atatgaccca catttaccta gtttgtgtca aattatagtt acagtgagtt gtttgcttaa    2474
attatagatt cctttaagga catgccttgt tcataaaatc actggattat attgcagcat    2534
attttacatt tgaatacaag gataatgggt tttatcaaaa caaaatgatg tacagatttt    2594
ttttcaagtt tttatagttg ctttatgcca gagtggttta ccccattcac aaaatttctt    2654
atgcatacat tgctattgaa aataaaattt aaatattttt tcatcctgaa aaaaaa        2710
 
<210>18
<211>610
<212>PRT
<213>人
 
<400>18
 
Met His Phe Gln Ala Phe Trp Leu Cys Leu Gly Leu Leu Phe Ile Ser
1               5                   10                  15
Ile Asn Ala Glu Phe Met Asp Asp Asp Val Glu Thr Glu Asp Phe Glu
            20                  25                  30
Glu Asn Ser Glu Glu Ile Asp Val Asn Glu Ser Glu Leu Ser Ser Glu
        35                  40                  45
Ile Lys Tyr Lys Thr Pro Gln  Pro Ile Gly Glu Val Tyr Phe Ala Glu
    50                  55                   60
Thr Phe Asp Ser Gly Arg Leu Ala Gly Trp Val Leu Ser Lys Ala Lys
65                  70                  75                  80 
Lys Asp Asp Met Asp Glu Glu Ile Ser Ile Tyr Asp Gly Arg Trp Glu
                85                  90                  95
Ile Glu Glu Leu Lys Glu Asn Gln Val Pro Gly Asp Arg Gly Leu Val
            100                 105                 110
Leu Lys Ser Arg Ala Lys His His Ala Ile Ser Ala Val Leu Ala Lys
        115                 120                 125
Pro Phe Ile Phe Ala Asp Lys Pro Leu Ile Val Gln Tyr Glu Val Asn
    130                 135                 140
Phe Gln Asp Gly Ile Asp Cys Gly Gly Ala Tyr Ile Lys Leu Leu Ala
145                 150                 155                 160
Asp Thr Asp Asp Leu Ile Leu Glu Asn Phe Tyr Asp Lys Thr Ser Tyr
                165                 170                 175
Ile Ile Met Phe Gly Pro Asp Lys Cys Gly Glu Asp Tyr Lys Leu His
            180                 185                 190
Phe Ile Phe Arg His Lys His Pro Lys Thr Gly Val Phe Glu Glu Lys
        195                 200                 205
His Ala Lys Pro Pro Asp Val Asp Leu Lys Lys Phe Phe Thr Asp Arg
    210                 215                 220
Lys Thr His Leu Tyr Thr Leu Val Met Asn Pro Asp Asp Thr Phe Glu
225                 230                 235                 240
Val Leu Val Asp Gln Thr Val Val Asn Lys Gly Ser Leu Leu Glu Asp
                245                 250                 255
Val Val Pro Pro Ile Lys Pro Pro Lys Glu Ile Glu Asp Pro Asn Asp
            260                 265                 270
Lys Lys Pro Glu Glu Trp Asp Glu Arg Ala Lys Ile Pro Asp Pro Ser
        275                 280                 285
Ala Val Lys Pro Glu Asp Trp Asp Glu Ser Glu Pro Ala Gln Ile Glu
    290                 295                 300
Asp Ser Ser Val Val Lys Pro Ala Gly Trp Leu Asp Asp Glu Pro Lys
305                 310                 315                 320
Phe Ile Pro Asp Pro Asn Ala Glu Lys Pro Asp Asp Trp Asn Glu Asp
                325                 330                 335
Thr Asp Gly Glu Trp Glu Ala Pro Gln Ile Leu Asn Pro Ala Cys Arg
            340                 345                 350
Ile Gly Cys Gly Glu Trp Lys Pro Pro Met Ile Asp Asn Pro Lys Tyr
        355                 360                 365
Lys Gly Val Trp Arg Pro Pro Leu Val Asp Asn Pro Asn Tyr Gln Gly
    370                 375                 380
Ile Trp Ser Pro Arg Lys Ile Pro Asn Pro Asp Tyr Phe Glu Asp Asp
385                 390                 395                 400
His Pro Phe Leu Leu Thr Ser Phe Ser Ala Leu Gly Leu Glu Leu Trp
                405                 410                 415
Ser Met Thr Ser Asp Ile Tyr Phe Asp Asn Phe Ile Ile Cys Ser Glu
            420                 425                 430
Lys Glu Val Ala Asp His Trp Ala Ala Asp Gly Trp Arg Trp Lys Ile
        435                 440                 445
Met Ile Ala Asn Ala Asn Lys Pro Gly Val Leu Lys Gln Leu Met Ala
    450                 455                 460
Ala Ala Glu Gly His Pro Trp Leu Trp Leu Ile Tyr Leu Val Thr Ala
465                 470                 475                 480
Gly Val Pro Ile Ala Leu Ile Thr Ser Phe Cys Trp Pro Arg Lys Val
                485                 490                 495
Lys Lys Lys His Lys Asp Thr Glu Tyr Lys Lys Thr Asp Ile Cys Ile
            500                 505                 510
Pro Gln Thr Lys Gly Val Leu Glu Gln Glu Glu Lys Glu Glu Lys Ala
        515                 520                 525
Ala Leu Glu Lys Pro Met Asp Leu Glu Glu Glu Lys Lys Gln Asn Asp
    530                 535                 540
Gly Glu Met Leu Glu Lys Glu Glu Glu Ser Glu Pro Glu Glu Lys Ser
545                 550                 555                 560
Glu Glu Glu Ile Glu Ile Ile Glu Gly Gln Glu Glu Ser Asn Gln Ser
                565                 570                 575
Asn Lys Ser Gly Ser Glu Asp Glu Met Lys Glu Ala Asp Glu Ser Thr
            580                 585                 590
Gly Ser Gly Asp Gly Pro Ile Lys Ser Val Arg Lys Arg Arg Val Arg
        595                 600                 605
Lys Asp
    610
 
<210>19
<211>18
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>19
gtgatgaatc cagatgac                                                  18
 
<210>20
<211>18
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>20
ggtcatagac caaagctc                                                  18
 
<210>21
<211>23
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>21
aaggatccat gcatttccaa agc                                             23
<210>22
<211>25
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>22
ccgaattctt attcctttcg tactc                                              25
 
<210>23
<211>26
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>23
gaattcatgc atttccaagc cttttg                                             26
 
<210>24
<211>23
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>24
ctcgagttag tcctttcgta ctc                                                23
 
<210>25
<211>7353
<212>DNA
<213>家犬
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(7020)
<223>
 
<400>25
atg aag aaa ggt tct cag caa aag ttt ttg aaa gca aag atg cca cca       48
Met Lys Lys Gly Ser Gln Gln Lys Phe Leu Lys Ala Lys Met Pro Pro
1               5                   10                  15
tca tct cac tct cct agt cca cca tcc ctt acg tcc aat atg aga tct       96
Ser Ser His Ser Pro Ser Pro Pro Ser Leu Thr Ser Asn Met Arg Ser
            20                  25                  30
agg tca ctt tcg cct cta agt gga tct gag act ctg cct ttt cat ttt      144
Arg Ser Leu Ser Pro Leu Ser Gly Ser Glu Thr Leu Pro Phe His Phe
        35                  40                  45
gga gga ccg tgg cat gag caa gtt gag att aca gat gaa agc aca gtg      192
Gly Gly Pro Trp His Glu Gln Val Glu Ile Thr Asp Glu Ser Thr Val
    50                  55                  60
gtt tta gac tac caa gac cat aaa gaa gct gat tca cat gca gga gtc      240
Val Leu Asp Tyr Gln Asp His Lys Glu Ala Asp Ser His Ala Gly Val
65                  70                  75                  80
cga tat att aca gag gcc ctt gtt aga aaa ctt act aaa cag gac aat      288
Arg Tyr Ile Thr Glu Ala Leu Val Arg Lys Leu Thr Lys Gln Asp Asn
                85                  90                  95
ttg gcc ttg gta aaa tct ctg aac ctt tca ctt gct aaa ggt ggt ggc      336
Leu Ala Leu Val Lys Ser Leu Asn Leu Ser Leu Ala Lys Gly Gly Gly
            100                 105                 110
aag aaa ttc agg tgt atc gaa aat ttg gaa aaa tgt gtt aaa ctt gaa      384
Lys Lys Phe Arg Cys Ile Glu Asn Leu Glu Lys Cys Val Lys Leu Glu
        115                 120                 125
gta ctg aat ctc agc tat aat cta ata gga aag att gag aaa gtg gac      432
Val Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Leu Ile Gly Lys Ile Glu Lys Val Asp
    130                 135                 140
aaa ctg tta aaa tta cgt gaa ctc aac tta tcg tat aac aaa atc cgc      480
Lys Leu Leu Lys Leu Arg Glu Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Ile Arg
145                 150                 155                 160
aaa att gaa ggc ata gaa aat tta tat aat ctg caa aag ctg aac ctt      528
Lys Ile Glu Gly Ile Glu Asn Leu Tyr Asn Leu Gln Lys Leu Asn Leu
                165                 170                 175
gca gga aat gaa atc gaa cat atc cca gta tgg tta ggg aag aag tta      576
Ala Gly Asn Glu Ile Glu His Ile Pro Val Trp Leu Gly Lys Lys Leu
            180                 185                 190
aaa tct ttg cga atc ctg aat ctg aaa ggc aac aag ata tca tcg ctc      624
Lys Ser Leu Arg Ile Leu Asn Leu Lys Gly Asn Lys Ile Ser Ser Leu
       195                 200                 205
caa gat gta agc aag ttg aaa cca ctt caa gat ttg act tct ctg atc      672
Gln Asp Val Ser Lys Leu Lys Pro Leu Gln Asp Leu Thr Ser Leu Ile
    210                 215                 220
cta ctt gaa aat cca gtt gcg acc ctt cct cat tat atc cag ttt acc      720
Leu Leu Glu Asn Pro Val Ala Thr Leu Pro His Tyr Ile Gln Phe Thr
225                 230                 235                 240
att ttt cac ctt cgc tca ttg gaa agt ttg gaa ggt cag cca gta act      768
Ile Phe His Leu Arg Ser Leu Glu Ser Leu Glu Gly Gln Pro Val Thr
                245                 250                 255
agt cag gac aga caa gaa gct ttt gcg aga ttc agt tta gat gag gta      816
Ser Gln Asp Arg Gln Glu Ala Phe Ala Arg Phe Ser Leu Asp Glu Val
            260                 265                 270
gaa aga ctg gaa aga gac ctg gag aag aag aca atg gaa act gaa gag      864
Glu Arg Leu Glu Arg Asp Leu Glu Lys Lys Thr Met Glu Thr Glu Glu
       275                 280                 285
ctt agg agt gag cag aca agg ttc ctt gag gaa att aaa agt cag gat      912
Leu Arg Ser Glu Gln Thr Arg Phe Leu Glu Glu Ile Lys Ser Gln Asp
    290                 295                 300
aaa ttg aac aaa tca ctg aaa gag gag gcc aga cta caa aaa cag agc      960
Lys Leu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Glu Ala Arg Leu Gln Lys Gln Ser
305                 310                 315                 320
tat gag gag ctg gag agt aac cta aac acc aaa aat gaa ttg cta aaa     1008
Tyr Glu Glu Leu Glu Ser Asn Leu Asn Thr Lys Asn Glu Leu Leu Lys
                325                 330                 335
cag aag acc atg gaa cta atg cga gca tgt cag aaa cag tat gag atg     1056
Gln Lys Thr Met Glu Leu Met Arg Ala Cys Gln Lys Gln Tyr Glu Met
            340                 345                 350
gaa cag gag ttg gcc ttt tat aaa att gat gcc aaa ttt gaa cca cta     1104
Glu Gln Glu Leu Ala Phe Tyr Lys Ile Asp Ala Lys Phe Glu Pro Leu
        355                 360                 365
aat tat tac cca tca gag tat gtc gaa att gat aaa acc cca gat gaa     1152
Asn Tyr Tyr Pro Ser Glu Tyr Val Glu Ile Asp Lys Thr Pro Asp Glu
    370                 375                 380
agc cct tac att ggc aaa tcc aga tac aag aga aat atg ttc act aca     1200
Ser Pro Tyr Ile Gly Lys Ser Arg Tyr Lys Arg Asn Met Phe Thr Thr
385                 390                 395                 400
gag agt tat att att gca aat gcc cag aca gta aag atc aag aag atg     1248
Glu Ser Tyr Ile Ile Ala Asn Ala Gln Thr Val Lys Ile Lys Lys Met
                405                 410                 415
gag cta gat gaa ggg gaa caa ctc aga aat gag cac gtg aac ttg gga     1296
Glu Leu Asp Glu Gly Glu Gln Leu Arg Asn Glu His Val Asn Leu Gly
            420                 425                 430
gca tcg cca aca gac ata caa ctg gaa gac aaa gaa aaa aaa ata agt    1344
Ala Ser Pro Thr Asp Ile Gln Leu Glu Asp Lys Glu Lys Lys Ile Ser
        435                 440                 445
gca gca caa act cga cta tca gaa cta cat gat gaa ata gaa aag gca    1392
Ala Ala Gln Thr Arg Leu Ser Glu Leu His Asp Glu Ile Glu Lys Ala
    450                 455                 460
gaa caa caa att tta aga gcc act gaa gaa ttt aaa caa ctg gaa gaa    1440
Glu Gln Gln Ile Leu Arg Ala Thr Glu Glu Phe Lys Gln Leu Glu Glu
465                 470                 475                 480
gct ata caa ctt aaa aaa att tca gaa gcg gag aaa gac ctt ctt ttc    1488
Ala Ile Gln Leu Lys Lys Ile Ser Glu Ala Glu Lys Asp Leu Leu Phe
                485                 490                 495
aag cag ttg agt ggt agg ata cag ctt ctc aat aaa tta cgc caa gaa    1536
Lys Gln Leu Ser Gly Arg Ile Gln Leu Leu Asn Lys Leu Arg Gln Glu
            500                 505                 510
gct gtg gat cta gaa aca cag atg gaa aag caa agg caa gaa att ggt    1584
Ala Val Asp Leu Glu Thr Gln Met Glu Lys Gln Arg Gln Glu Ile Gly
        515                 520                 525
gaa aag cag aat gag atc aag gac ctg gaa ata gtc aca gat agc ctg    1632
Glu Lys Gln Asn Glu Ile Lys Asp Leu Glu Ile Val Thr Asp Ser Leu
    530                 535                 540
gat tcc aga gac cca aaa cat tgc cat atg aag gct cag aaa aga ggt    1680
Asp Ser Arg Asp Pro Lys His Cys His Met Lys Ala Gln Lys Arg Gly
545                 550                 555                 560
aaa gaa caa caa ctt gac att atg aac aag cag tac aaa cag ctt gaa    1728
Lys Glu Gln Gln Leu Asp Ile Met Asn Lys Gln Tyr Lys Gln Leu Glu
                565                 570                 575
agc cgt ttg gat gag ata ctt tct aga att gcc aaa gaa act gaa gag    1776
Ser Arg Leu Asp Glu Ile Leu Ser Arg Ile Ala Lys Glu Thr Glu Glu
            580                 585                 590
att aag gac ctt gaa gaa cag ctt act gaa gga caa ata gcc gca aac    1824
Ile Lys Asp Leu Glu Glu Gln Leu Thr Glu Gly Gln Ile Ala Ala Asn
        595                 600                 605
gaa gcc ctg aag aag gac tta gaa agt gtc atc agt ggg ttg caa gaa    1872
Glu Ala Leu Lys Lys Asp Leu Glu Ser Val Ile Ser Gly Leu Gln Glu
    610                 615                 620
tac ctg gag act gtc aaa ggt cag gcc cgt cag gcc cag aat gag tgc    1920
Tyr Leu Glu Thr Val Lys Gly Gln Ala Arg Gln Ala Gln Asn Glu Cys
625                 630                 635                 640
aga aag cta cag gat gag aag gag aca ttg ctg cag aga ttg agt gag    1968
Arg Lys Leu Gln Asp Glu Lys Glu Thr Leu Leu Gln Arg Leu Ser Glu
                645                 650                 655
gtc gag cag gag agg gac caa ctg gaa ata gtg gcc ata gat gca gaa    2016
Val Glu Gln Glu Arg Asp Gln Leu Glu Ile Val Ala Ile Asp Ala Glu
            660                 665                 670
aat atg agg aag gag ctc gca gaa ctg gag aat gcc ctc cag gag cag    2064
Asn Met Arg Lys Glu Leu Ala Glu Leu Glu Asn Ala Leu Gln Glu Gln
        675                 680                 685
cat gag gtg aat ata tct ctg cag cag acc cag gga gat ctc agt gcc    2112
His Glu Val Asn Ile Ser Leu Gln Gln Thr Gln Gly Asp Leu Ser Ala
    690                 695                 700
tat gag gct gag cta gag gct cag ctg aaa ata cgg gat gct gaa gcc    2160
Tyr Glu Ala Glu Leu Glu Ala Gln Leu Lys Ile Arg Asp Ala Glu Ala
705                 710                 715                 720
aac cag ctc aag gag gag ttg gaa aaa ctt aga agg ttg agc cag tta    2208
Asn Gln Leu Lys Glu Glu Leu Glu Lys Leu Arg Arg Leu Ser Gln Leu
                725                 730                 735
gaa caa tcg gcc ctt caa gca gag ctt gag aag gaa aag caa gcc ttc    2256
Glu Gln Ser Ala Leu Gln Ala Glu Leu Glu Lys Glu Lys Gln Ala Phe
            740                 745                 750
aag act gct gtc aaa aaa gcc cag ctc tca gaa gga aag gac caa gaa    2304
Lys Thr Ala Val Lys Lys Ala Gln Leu Ser Glu Gly Lys Asp Gln Glu
        755                 760                 765
aat agt gag ctc cgc aca caa ctc caa cag ctg cag gat gac aat gac    2352
Asn Ser Glu Leu Arg Thr Gln Leu Gln Gln Leu Gln Asp Asp Asn Asp
    770                 775                 780
cta ttg aaa cag caa ctt aaa gat ttc cag agt cac ctt aac cat gtg    2400
Leu Leu Lys Gln Gln Leu Lys Asp Phe Gln Ser His Leu Asn His Val
785                 790                 795                 800
gtt gat ggt ttg att cgt cca gaa gaa gtg gca gct tgt gtg gat gag    2448
Val Asp Gly Leu Ile Arg Pro Glu Glu Val Ala Ala Cys Val Asp Glu
                805                 810                 815
cta agg aaa aaa ctg aag tca gga gct ggg gaa atg aga atc cat act    2496
Leu Arg Lys Lys Leu Lys Ser Gly Ala Gly Glu Met Arg Ile His Thr
            820                 825                 830
cct tca gat gtc tta ggg aaa agt ctt gct gac ttg cag aag caa ttc    2544
Pro Ser Asp Val Leu Gly Lys Ser Leu Ala Asp Leu Gln Lys Gln Phe
        835                 840                 845
agt gag atc ctg gca cgc tcc cag tgg gaa aga cag gaa gca caa gtg    2592
Ser Glu Ile Leu Ala Arg Ser Gln Trp Glu Arg Gln Glu Ala Gln Val
    850                 855                 860
aga gag aga aaa ctc cag gag gaa atg gct ctg caa caa gag aaa ctg    2640
Arg Glu Arg Lys Leu Gln Glu Glu Met Ala Leu Gln Gln Glu Lys Leu
865                 870                 875                 880
gcg agc gga caa gag gag ttc agg cac gcc tgc gag agg gcc ctg gaa    2688
Ala Ser Gly Gln Glu Glu Phe Arg His Ala Cys Glu Arg Ala Leu Glu
                885                 890                 895
gcc cga att agt ttt gat aag agg cag cac gaa gca aga atc cag cag    2736
Ala Arg Ile Ser Phe Asp Lys Arg Gln His Glu Ala Arg Ile Gln Gln
            900                 905                 910
ttg gag aat gaa att cac tat ttg caa gaa aat cta aaa agt atg gag    2784
Leu Glu Asn Glu Ile His Tyr Leu Gln Glu Asn Leu Lys Ser Met Glu
        915                 920                 925
gaa atc caa ggt ctc aca gac ctc caa ctt cag gaa gct gat gaa gag    2832
Glu Ile Gln Gly Leu Thr Asp Leu Gln Leu Gln Glu Ala Asp Glu Glu
    930                 935                 940
aag gag aga att ctg gcc caa ctc cgg gag tta gag aaa aag aag aaa    2880
Lys Glu Arg Ile Leu Ala Gln Leu Arg Glu Leu Glu Lys Lys Lys Lys
945                 950                 955                 960
ctt gag gat gcc aag tct cag gag cag ttt ctt gga tta gat aga gaa    2928
Leu Glu Asp Ala Lys Ser Gln Glu Gln Phe Leu Gly Leu Asp Arg Glu
                965                 970                 975
ttg aag aag cta aag aaa gct gtg gct gcc tct gat aag ctg gcc aca    2976
Leu Lys Lys Leu Lys Lys Ala Val Ala Ala Ser Asp Lys Leu Ala Thr
            980                 985                 990
gct gag ctc acc att gcc aaa gac cag ctc aag tcc ctt cat gga act    3024
Ala Glu Leu Thr Ile Ala Lys Asp Gln Leu Lys Ser Leu His Gly Thr
        995                 1000                1005
gtg atg aaa att aac cag gag cga gca gag gag ctg cag gag acg        3069
Val Met Lys Ile Asn Gln Glu Arg Ala Glu Glu Leu Gln Glu Thr
    1010                1015                1020
gag agg ttc agc aga aag gca gca caa gca gct agg gat ctg atc        3114
Glu Arg Phe Ser Arg Lys Ala Ala Gln Ala Ala Arg Asp Leu Ile
    1025                1030                1035
cga gca gaa gcg gag att gaa ctc ctg cag aag ctt ctc aga gat    3159
Arg Ala Glu Ala Glu Ile Glu Leu Leu Gln Lys Leu Leu Arg Asp
    1040                1045                1050
aaa gag gag cag ttt cga aat gag att gag aaa gta gat gtc ggc    3204
Lys Glu Glu Gln Phe Arg Asn Glu Ile Glu Lys Val Asp Val Gly
    1055                1060                1065
tct gga gga gca aag tca cag atg ctg gag atg gag aaa cta aat    3249
Ser Gly Gly Ala Lys Ser Gln Met Leu Glu Met Glu Lys Leu Asn
    1070                1075                1080
gag aca atg gag agg caa aga aca gag att gct agg ctg agg aat    3294
Glu Thr Met Glu Arg Gln Arg Thr Glu Ile Ala Arg Leu Arg Asn
    1085                1090                1095
tta cta gac ctc acc ggg gct gat aac aaa gga aac ttt gaa aat    3339
Leu Leu Asp Leu Thr Gly Ala Asp Asn Lys Gly Asn Phe Glu Asn
    1100                1105                1110
gtt ttg gaa gaa att gct gaa ctt cga cgt gaa gtt tct cat cag    3384
Val Leu Glu Glu Ile Ala Glu Leu Arg Arg Glu Val Ser His Gln
    1115                1120                1125
aat gat tac atc agc agc atg aca gat cct ttc aaa aga cga ggc    3429
Asn Asp Tyr Ile Ser Ser Met Thr Asp Pro Phe Lys Arg Arg Gly
    1130                1135                1140
tat tgg tac ttt atg cca cca cca tca tca tca aaa gtt tcc agc    3474
Tyr Trp Tyr Phe Met Pro Pro Pro Ser Ser Ser Lys Val Ser Ser
    1145                1150                1155
cac agt tcc cag gcc acc aag gac tct ggt gtt ggc cta aag tac    3519
His Ser Ser Gln Ala Thr Lys Asp Ser Gly Val Gly Leu Lys Tyr
    1160                1165                1170
aca gcc tcc act ccg gtt aga aaa cca cat cgt gga cgg cag gat    3564
Thr Ala Ser Thr Pro Val Arg Lys Pro His Arg Gly Arg Gln Asp
    1175                1180                1185
gga aag gag aac agt ggg cct cca cct gcc tca gga tac tgg gtg    3609
Gly Lys Glu Asn Ser Gly Pro Pro Pro Ala Ser Gly Tyr Trp Val
    1190                1195                1200
tat tct cct atc agg agt ggg tta cat aaa tcg ttc tca aat aga    3654
Tyr Ser Pro Ile Arg Ser Gly Leu His Lys Ser Phe Ser Asn Arg
    1205                1210                1215
gac gca gac agt gga gga gat agc cag gaa gag agc gag cta gat    3699
Asp Ala Asp Ser Gly Gly Asp Ser Gln Glu Glu Ser Glu Leu Asp
    1220                1225                1230
gac caa gaa gac cac cca ttt gta cct cct cct gga tac atg atg    3744
Asp Gln Glu Asp His Pro Phe Val Pro Pro Pro Gly Tyr Met Met
    1235                1240                1245
tac act gtg ttt cct gat ggt tct cct gta ccc cag ggc atg gcc    3789
Tyr Thr Val Phe Pro Asp Gly Ser Pro Val Pro Gln Gly Met Ala
    1250                1255                1260
ctg tat gca ccc cct cct ccc ttg ccc aac aat agc cag cct ctt    3834
Leu Tyr Ala Pro Pro Pro Pro Leu Pro Asn Asn Ser Gln Pro Leu
    1265                1270                1275
gac ctt ggc act gtt gtt tat ggc cca cct cct gtt ggg gct ccc    3879
Asp Leu Gly Thr Val Val Tyr Gly Pro Pro Pro Val Gly Ala Pro
    1280                1285                1290
atc gtg tat ggg cct cca cct ccc aac ttc tcc gta ccc ctc atc    3924
Ile Val Tyr Gly Pro Pro Pro Pro Asn Phe Ser Val Pro Leu Ile
    1295                1300                1305
ccc gtg ggt gtg ctg cac tgc aat gtc cca gaa cac cat aac ttg    3969
Pro Val Gly Val Leu His Cys Asn Val Pro Glu His His Asn Leu
    1310                1315                1320
gag aat gaa gtt tct aga tta gaa gac ata atg cag cat tta aaa      4014
Glu Asn Glu Val Ser Arg Leu Glu Asp Ile Met Gln His Leu Lys
    1325                1330                1335
tct ggg aaa cgg gaa cag tgc atg aaa aca ccc aag ctg cag tcg      4059
Ser Gly Lys Arg Glu Gln Cys Met Lys Thr Pro Lys Leu Gln Ser
    1340                1345                1350
gag aaa gaa ctc gca gag ctg cag cat aac att gat ggt ctt ttg      4104
Glu Lys Glu Leu Ala Glu Leu Gln His Asn Ile Asp Gly Leu Leu
    1355                1360                1365
caa gag aag aaa gac tta gag cat gaa gta gaa gaa tta cat aga      4149
Gln Glu Lys Lys Asp Leu Glu His Glu Val Glu Glu Leu His Arg
    1370                1375                1380
acc atc caa aaa cat caa cag cga aaa gat ttc att gat gga aac      4194
Thr Ile Gln Lys His Gln Gln Arg Lys Asp Phe Ile Asp Gly Asn
    1385                1390                1395
gtt gag agt ctt gtg aat gat cta gaa ata gag aag tca ctc aaa      4239
Val Glu Ser Leu Val Asn Asp Leu Glu Ile Glu Lys Ser Leu Lys
    1400                1405                1410
cac cat gaa gat att gtt gat gaa att gaa tgt att gag agg acc      4284
His His Glu Asp Ile Val Asp Glu Ile Glu Cys Ile Glu Arg Thr
    1415                1420                1425
ctt ctg aag cgc cgt gca gag ctc agg gaa gcc gac cgg ctg ctg      4329
Leu Leu Lys Arg Arg Ala Glu Leu Arg Glu Ala Asp Arg Leu Leu
    1430                1435                1440
acg gag gct gaa agt gaa ctt tca tgc acg aaa gag aaa aca aaa      4374
Thr Glu Ala Glu Ser Glu Leu Ser Cys Thr Lys Glu Lys Thr Lys
    1445                1450                1455
cat gct gtt gag aag ttc act gat gcc aag aga aat tta ttg caa      4419
His Ala Val Glu Lys Phe Thr Asp Ala Lys Arg Asn Leu Leu Gln
    1460                1465                1470
act gag aaa gat gct gag gag tta gaa agg aga gcc cag gaa act      4464
Thr Glu Lys Asp Ala Glu Glu Leu Glu Arg Arg Ala Gln Glu Thr
    1475                1480                1485
gcc att aac ctc gtc aaa gcc gac cag cag ctg aga ttg ctc cag      4509
Ala Ile Asn Leu Val Lys Ala Asp Gln Gln Leu Arg Leu Leu Gln
    1490                1495                1500
gct gac acg aag gat ttg gag cag cac aaa atg gag caa gag gaa      4554
Ala Asp Thr Lys Asp Leu Glu Gln His Lys Met Glu Gln Glu Glu
    1505                1510                1515
atc ttg aaa gaa ata aac aaa gtt gtt gca gca aaa gac tca gac      4599
Ile Leu Lys Glu Ile Asn Lys Val Val Ala Ala Lys Asp Ser Asp
    1520                1525                1530
ttc cag agc cta aac aag aag aag gaa gta ctg aca gga gag ctg      4644
Phe Gln Ser Leu Asn Lys Lys Lys Glu Val Leu Thr Gly Glu Leu
    1535                1540                1545
cag aaa ctc cag aag gac att gag act gca cgg cac aat gag gat      4689
Gln Lys Leu Gln Lys Asp Ile Glu Thr Ala Arg His Asn Glu Asp
    1550                1555                1560
cag cac ctg cag gtc ctt aaa gag tcg gag acc ctc ctg cag gcc      4734
Gln His Leu Gln Val Leu Lys Glu Ser Glu Thr Leu Leu Gln Ala
    1565                1570                1575
aag aaa gct gag ctg gaa aat ctg aaa agc cag gtg tca gga cag      4779
Lys Lys Ala Glu Leu Glu Asn Leu Lys Ser Gln Val Ser Gly Gln
    1580                1585                1590
cag cag gag atg gcc gtc ttg gac agg gag tta gga cac aag aag      4824
Gln Gln Glu Met Ala Val Leu Asp Arg Glu Leu Gly His Lys Lys
    1595                1600                1605
gaa gag ctg cat ctc ctc cag gaa agc atg gtc cag gcc aaa gct    4869
Glu Glu Leu His Leu Leu Gln Glu Ser Met Val Gln Ala Lys Ala
    1610                1615                1620
gac ctc cag gaa gca ctg aga cta gga gaa agc gaa gta act gag    4914
Asp Leu Gln Glu Ala Leu Arg Leu Gly Glu Ser Glu Val Thr Glu
    1625                1630                1635
aag tgc aat cac att agg gaa gta aaa tct ctt ctg gaa gaa ctc    4959
Lys Cys Asn His Ile Arg Glu Val Lys Ser Leu Leu Glu Glu Leu
    1640                1645                1650
agt ttt cag aaa gga gaa ctg aat gtc cag atc agt gaa aaa aaa    5004
Ser Phe Gln Lys Gly Glu Leu Asn Val Gln Ile Ser Glu Lys Lys
    1655                1660                1665
act caa ctt gca ctc ata aag cag gaa att gaa aaa gag gaa gac    5049
Thr Gln Leu Ala Leu Ile Lys Gln Glu Ile Glu Lys Glu Glu Asp
    1670                1675                1680
aat ctt cag gta gtt tta ggg caa atg tct aaa cat aaa act gaa    5094
Asn Leu Gln Val Val Leu Gly Gln Met Ser Lys His Lys Thr Glu
    1685                1690                1695
cta aag aat att ctg gac atg ttg caa ctt gaa aat aat gag ctg    5139
Leu Lys Asn Ile Leu Asp Met Leu Gln Leu Glu Asn Asn Glu Leu
    1700                1705                1710
caa ggt ttg aag ctc caa cat gac caa aag atg tct gaa tta gag    5184
Gln Gly Leu Lys Leu Gln His Asp Gln Lys Met Ser Glu Leu Glu
    1715                1720                1725
aag act cgg gtt gaa gtg ctg gag gag aaa ctg gag tta gag agt    5229
Lys Thr Arg Val Glu Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Leu Glu Ser
    1730                1735                1740
ctg cag cag gca gcc ctg cga cag aga ggg gag ata gag tgg cag    5274
Leu Gln Gln Ala Ala Leu Arg Gln Arg Gly Glu Ile Glu Trp Gln
    1745                1750                1755
aag cag ctc ctc cag agg aac aca cag gaa gta gag cgg atg act    5319
Lys Gln Leu Leu Gln Arg Asn Thr Gln Glu Val Glu Arg Met Thr
    1760                1765                1770
gct gag acc cga gca tta cag tcg tgt gtt gag tct ttg tgc aaa    5364
Ala Glu Thr Arg Ala Leu Gln Ser Cys Val Glu Ser Leu Cys Lys
    1775                1780                1785
gaa aag caa gat ctc gaa gaa aaa cag gac agc tgg gaa aag aag    5409
Glu Lys Gln Asp Leu Glu Glu Lys Gln Asp Ser Trp Glu Lys Lys
    1790                1795                1800
ttg gca cag acc aaa cgg gtt cta gca gct gca gaa gag gac agc    5454
Leu Ala Gln Thr Lys Arg Val Leu Ala Ala Ala Glu Glu Asp Ser
    1805                1810                1815
gag atg gag cgg gca cgc tta gaa aag ttg gaa ctg gac gcc agg    5499
Glu Met Glu Arg Ala Arg Leu Glu Lys Leu Glu Leu Asp Ala Arg
    1820                1825                1830
aag ctg cag cag gag ttg gac caa cga aac agg gag aag ctc tcc    5544
Lys Leu Gln Gln Glu Leu Asp Gln Arg Asn Arg Glu Lys Leu Ser
    1835                1840                1845
ctg cat caa gac ctg gca gtg gtg cag cag cag cta caa gaa aaa    5589
Leu His Gln Asp Leu Ala Val Val Gln Gln Gln Leu Gln Glu Lys
    1850                1855                1860
cag gaa gca gta aac tca tta cag aag gaa cta act gat gtc cag    5634
Gln Glu Ala Val Asn Ser Leu Gln Lys Glu Leu Thr Asp Val Gln
    1865                1870                1875
gag cat ttg gac cta gca gaa cag gag gtg ctc tgc acc acc aag    5679
Glu His Leu Asp Leu Ala Glu Gln Glu Val Leu Cys Thr Thr Lys
    1880                1885                1890
cgc aag gac gca ctg ctc agc gaa cag acc agg ctc gag aag gac    5724
Arg Lys Asp Ala Leu Leu Ser Glu Gln Thr Arg Leu Glu Lys Asp
    1895                1900                1905
gtg ggt gaa tgg acg aag aag ttt gaa gac tgc cag aaa gaa ggg    5769
Val Gly Glu Trp Thr Lys Lys Phe Glu Asp Cys Gln Lys Glu Gly
    1910                1915                1920
gag aca aag cag caa cag ctt caa ggg ctt cag aag gag att gaa    5814
Glu Thr Lys Gln Gln Gln Leu Gln Gly Leu Gln Lys Glu Ile Glu
    1925                1930                1935
gga aac gag gcg aag cta gcc caa caa gaa atg atg ttt cag aga    5859
Gly Asn Glu Ala Lys Leu Ala Gln Gln Glu Met Met Phe Gln Arg
    1940                1945                1950
ctc cag aaa gag cga gaa tgt gaa gaa aaa aag tta gaa gct agt    5904
Leu Gln Lys Glu Arg Glu Cys Glu Glu Lys Lys Leu Glu Ala Ser
    1955                1960                1965
aaa gtg act ctg aag gag cag cag caa cag ctg gaa aag gaa ttg    5949
Lys Val Thr Leu Lys Glu Gln Gln Gln Gln Leu Glu Lys Glu Leu
    1970                1975                1980
atg gag cag aaa ggc aag ctg gac cag gtg ctc gct aag ctc ttg    5994
Met Glu Gln Lys Gly Lys Leu Asp Gln Val Leu Ala Lys Leu Leu
    1985                1990                1995
gtg gct gag gag cgt gtc agg acc ttg cag gag gag gga agg tgg    6039
Val Ala Glu Glu Arg Val Arg Thr Leu Gln Glu Glu Gly Arg Trp
    2000                2005                2010
agc gag acc ctg gag aag acg ctc tcc cag acc aag cga cag ctt    6084
Ser Glu Thr Leu Glu Lys Thr Leu Ser Gln Thr Lys Arg Gln Leu
    2015                2020                2025
tca gaa cgg gag cag cag tta ctg gcc aag tca gac gag ctg ctg    6129
Ser Glu Arg Glu Gln Gln Leu Leu Ala Lys Ser Asp Glu Leu Leu
    2030                2035                2040
gcc ctg cag aag gag acg gac tcc atg agg gcg gac ttc agc ctc    6174
Ala Leu Gln Lys Glu Thr Asp Ser Met Arg Ala Asp Phe Ser Leu
    2045                2050                2055
ttg cgc aac cag ttc ctg aca gaa aga aag aaa gcc gag aag cag    6219
Leu Arg Asn Gln Phe Leu Thr Glu Arg Lys Lys Ala Glu Lys Gln
    2060                2065                2070
gtg gcc agc ctg aag gaa gcc ctt aag atc cag cgg agc caa ctg    6264
Val Ala Ser Leu Lys Glu Ala Leu Lys Ile Gln Arg Ser Gln Leu
    2075                2080                2085
gag aag aac ctt ctg gag caa aag cag gag aac agc tgc atg cag    6309
Glu Lys Asn Leu Leu Glu Gln Lys Gln Glu Asn Ser Cys Met Gln
    2090                2095                2100
agg gag atg gca acc atc gaa cag gtg gcc cag gac aac cac gag    6354
Arg Glu Met Ala Thr Ile Glu Gln Val Ala Gln Asp Asn His Glu
    2105                2110                2115
cgg gcc cgg cgc cta atg agg gag ctc aac cag atg cag cgc gag    6399
Arg Ala Arg Arg Leu Met Arg Glu Leu Asn Gln Met Gln Arg Glu
    2120                2125                2130
tac gtg gag ctc agg aaa cag atg aca aac caa aag gat ttg gaa    6444
Tyr Val Glu Leu Arg Lys Gln Met Thr Asn Gln Lys Asp Leu Glu
    2135                2140                2145
aga aga cag atg gaa atc agt gat gcg atg caa gca ctt aaa tgt    6489
Arg Arg Gln Met Glu Ile Ser Asp Ala Met Gln Ala Leu Lys Cys
    2150                2155                2160
gag gtg aaa gat gaa atc cga acc agc ctg aag aat ctc aac cag    6534
Glu Val Lys Asp Glu Ile Arg Thr Ser Leu Lys Asn  Leu Asn Gln
    2165                2170                2175
ttt ctt cca gaa ctg cca gcg gac ctg gag gcc ctt ctg gaa agg      6579
Phe Leu Pro Glu Leu Pro Ala Asp Leu Glu Ala Leu Leu Glu Arg
    2180                2185                2190
aat gag aac ctt gga gga ggc ttg gag agc ttg aaa gag aat ttc      6624
Asn Glu Asn Leu Gly Gly Gly Leu Glu Ser Leu Lys Glu Asn Phe
    2195                2200                2205
ccg ttt acc gtg agc gac aga cca tca tct tgc gaa gag aaa ctg      6669
Pro Phe Thr Val Ser Asp Arg Pro Ser Ser Cys Glu Glu Lys Leu
    2210                2215                2220
aat ttt ggc cag gct cac gtg gcg gat gaa cag tgg cgg gga gag      6714
Asn Phe Gly Gln Ala His Val Ala Asp Glu Gln Trp Arg Gly Glu
    2225                2230                2235
gca ctc cgg gag aag ctg cgc cac cgc gag gac cgg ctc aag gcc      6759
Ala Leu Arg Glu Lys Leu Arg His Arg Glu Asp Arg Leu Lys Ala
    2240                2245                2250
cag ctg cgc cgc tgc atg tcc aag cag gcc gag gtg ctg agc gag      6804
Gln Leu Arg Arg Cys Met Ser Lys Gln Ala Glu Val Leu Ser Glu
    2255                2260                2265
ggc cgg cgg cgc acg gag ggg acc ctg cac agc ctg cgg cgg cag      6849
Gly Arg Arg Arg Thr Glu Gly Thr Leu His Ser Leu Arg Arg Gln
    2270                2275                2280
gtg gac gcc ctg ggc gag ctg gtc acc agc act tcc ggg gac tcc      6894
Val Asp Ala Leu Gly Glu Leu Val Thr Ser Thr Ser Gly Asp Ser
    2285                2290                2295
gcg tcc acc cgc agt ctg tcg cgc acc gag ggc tcg ctc gcc gag      6939
Ala Ser Thr Arg Ser Leu Ser Arg Thr Glu Gly Ser Leu Ala Glu
    2300                2305                2310
gac gaa ccg ccg ggg ccc agc cag agc tcc cgg cgg ctc ccc cga      6984
Asp Glu Pro Pro Gly Pro Ser Gln Ser Ser Arg Arg Leu Pro Arg
    2315                2320                2325
ggc ccg tcg ccg cgg ctg gac gcg cac cga ccc tga ggacccggag        7030
Gly Pro Ser Pro Arg Leu Asp Ala His Arg Pro
    2330                2335
 
gacccggagg cccggcgtcc cctcggaacg cttcctccgc gtccgcggac accaggctca   7090
cgggaaggcg cgtccatgcg ggaagagccg cgagcggaac ccggatgccc gggctggtct   7150
ctgggccttg gaaacgtgtt gccgtaaaag cagcgcccgc ggctgcggac ttgaagcccc   7210
gaactggtaa actcggcggc tgccgggcga actgtactca ggactttttt cacggacacc   7270
gtcagatttt atttttggaa atctattttc atatgaaaat aaaagataaa agcgcctgaa   7330
aaaaaaaaaa aaaaaaaact agt                                           7353
 
<210>26
<211>2339
<212>PRT
<213>家犬
 
<400>26
 
Met Lys Lys Gly Ser Gln Gln Lys Phe Leu Lys Ala Lys Met Pro Pro
1               5                   10                  15
Ser Ser His Ser Pro Ser Pro Pro Ser Leu Thr Ser Asn Met Arg Ser
            20                  25                  30
Arg Ser Leu Ser Pro Leu Ser Gly Ser Glu Thr Leu Pro Phe His Phe
        35                  40                  45
Gly Gly Pro Trp His Glu Gln Val Glu Ile Thr Asp Glu Ser Thr Val
    50                  55                  60
Val Leu Asp Tyr Gln Asp His Lys Glu Ala Asp Ser His Ala Gly Val
65                  70                  75                  80
Arg Tyr Ile Thr Glu Ala Leu Val Arg Lys Leu Thr Lys Gln Asp Asn
                85                  90                  95
Leu Ala Leu Val Lys Ser Leu Asn Leu Ser Leu Ala Lys Gly Gly Gly
            100                 105                 110
Lys Lys Phe Arg Cys Ile Glu Asn Leu Glu Lys Cys Val Lys Leu Glu
        115                 120                 125
Val Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Leu Ile Gly Lys Ile Glu Lys Val Asp
    130                 135                 140
Lys Leu Leu Lys Leu Arg Glu Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Ile Arg
145                 150                 155                 160
Lys Ile Glu Gly Ile Glu Asn Leu Tyr Asn Leu Gln Lys Leu Asn Leu
                165                 170                 175
Ala Gly Asn Glu Ile Glu His Ile Pro Val Trp Leu Gly Lys Lys Leu
            180                 185                 190
Lys Ser Leu Arg Ile Leu Asn Leu Lys Gly Asn Lys Ile Ser Ser Leu
        195                 200                 205
Gln Asp Val Ser Lys Leu Lys Pro Leu Gln Asp Leu Thr Ser Leu Ile
    210                 215                 220
Leu Leu Glu Asn Pro Val Ala Thr Leu Pro His Tyr Ile Gln Phe Thr
225                 230                 235                 240
Ile Phe His Leu Arg Ser Leu Glu Ser Leu Glu Gly Gln Pro Val Thr
245             250                 255
Ser Gln Asp Arg Gln Glu Ala Phe Ala Arg Phe Ser Leu Asp Glu Val
            260                 265                 270
Glu Arg Leu Glu Arg Asp Leu Glu Lys Lys Thr Met Glu Thr Glu Glu
        275                 280                 285
Leu Arg Ser Glu Gln Thr Arg Phe Leu Glu Glu Ile Lys Ser Gln Asp
    290                 295                 300
Lys Leu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Glu Ala Arg Leu Gln Lys Gln Ser
305                 310                 315                 320
Tyr Glu Glu Leu Glu Ser Asn Leu Asn Thr Lys Asn Glu Leu Leu Lys
                325                 330                 335
Gln Lys Thr Met Glu Leu Met Arg Ala Cys Gln Lys Gln Tyr Glu Met
            340                 345                 350
Glu Gln Glu Leu Ala Phe Tyr Lys Ile Asp Ala Lys Phe Glu Pro Leu
        355                 360                 365
Asn Tyr Tyr Pro Ser Glu Tyr Val Glu Ile Asp Lys Thr Pro Asp Glu
    370                 375                 380
Ser Pro Tyr Ile Gly Lys Ser Arg Tyr Lys Arg Asn Met Phe Thr Thr
385                 390                 395                 400
Glu Ser Tyr Ile Ile Ala Asn Ala Gln Thr Val Lys Ile Lys Lys Met
                405                 410                 415
Glu Leu Asp Glu Gly Glu Gln Leu Arg Asn Glu His Val Asn Leu Gly
            420                 425                 430
Ala Ser Pro Thr Asp Ile Gln Leu Glu Asp Lys Glu Lys Lys Ile Ser
        435                 440                 445
Ala Ala Gln Thr Arg Leu Ser Glu Leu His Asp Glu Ile Glu Lys Ala
    450                 455                 460
Glu Gln Gln Ile Leu Arg Ala Thr Glu Glu Phe Lys Gln Leu Glu Glu
465                 470                 475                 480
Ala Ile Gln Leu Lys Lys Ile Ser Glu Ala Glu Lys Asp Leu Leu Phe
                485                 490                 495
Lys Gln Leu Ser Gly Arg Ile Gln Leu Leu Asn Lys Leu Arg Gln Glu
            500                 505                 510
Ala Val Asp Leu Glu Thr Gln Met Glu Lys Gln Arg Gln Glu Ile Gly
        515                 520                 525
Glu Lys Gln Asn Glu Ile Lys Asp Leu Glu Ile Val Thr Asp Ser Leu
    530                 535                 540
Asp Ser Arg Asp Pro Lys His Cys His Met Lys Ala Gln Lys Arg Gly
545                 550                 555                 560
Lys Glu Gln Gln Leu Asp Ile Met Asn Lys Gln Tyr Lys Gln Leu Glu
                565                 570                 575
Ser Arg Leu Asp Glu Ile Leu Ser Arg Ile Ala Lys Glu Thr Glu Glu
            580                 585                 590
Ile Lys Asp Leu Glu Glu Gln Leu Thr Glu Gly Gln Ile Ala Ala Asn
        595                 600                 605
Glu Ala Leu Lys Lys Asp Leu Glu Ser Val Ile Ser Gly Leu Gln Glu
    610                 615                 620
Tyr Leu Glu Thr Val Lys Gly Gln Ala Arg Gln Ala Gln Asn Glu Cys
625                 630                 635                 640
Arg Lys Leu Gln Asp Glu Lys Glu Thr Leu Leu Gln Arg Leu Ser Glu
                645                 650                 655
Val Glu Gln Glu Arg Asp Gln Leu Glu Ile Val Ala Ile Asp Ala Glu
            660                 665                 670
Asn Met Arg Lys Glu Leu Ala Glu Leu Glu Asn Ala Leu Gln Glu Gln
        675                 680                 685
His Glu Val Asn Ile Ser Leu Gln Gln Thr Gln Gly Asp Leu Ser Ala
    690                 695                 700
Tyr Glu Ala Glu Leu Glu Ala Gln Leu Lys Ile Arg Asp Ala Glu Ala
705                 710                 715                 720
Asn Gln Leu Lys Glu Glu Leu Glu Lys Leu Arg Arg Leu Ser Gln Leu
                725                 730                 735
Glu Gln Ser Ala Leu Gln Ala Glu Leu Glu Lys Glu Lys Gln Ala Phe
            740                 745                 750
Lys Thr Ala Val Lys Lys Ala Gln Leu Ser Glu Gly Lys Asp Gln Glu
        755                 760                 765
Asn Ser Glu Leu Arg Thr Gln Leu Gln Gln Leu Gln Asp Asp Asn Asp
    770                 775                 780
Leu Leu Lys Gln Gln Leu Lys Asp Phe Gln Ser His Leu Asn His Val
785                 790                 795                 800
Val Asp Gly Leu Ile Arg Pro Glu Glu Val Ala Ala Cys Val Asp Glu
                805                 810                 815
Leu Arg Lys Lys Leu Lys Ser Gly Ala Gly Glu Met Arg Ile His Thr
            820                 825                 830
Pro Ser Asp Val Leu Gly Lys Ser Leu Ala Asp Leu Gln Lys Gln Phe
        835                 840                 845
Ser Glu Ile Leu Ala Arg Ser Gln Trp Glu Arg Gln Glu Ala Gln Val
    850                 855                 860
Arg Glu Arg Lys Leu Gln Glu Glu Met Ala Leu Gln Gln Glu Lys Leu
865                 870                 875                 880
Ala Ser Gly Gln Glu Glu Phe Arg His Ala Cys Glu Arg Ala Leu Glu
                885                 890                 895
Ala Arg Ile Ser Phe Asp Lys Arg Gln His Glu Ala Arg Ile Gln Gln
            900                 905                 910
Leu Glu Asn Glu Ile His Tyr Leu Gln Glu Asn Leu Lys Ser Met Glu
        915                 920                 925
Glu Ile Gln Gly Leu Thr Asp Leu Gln Leu Gln Glu Ala Asp Glu Glu
    930                 935                 940
Lys Glu Arg Ile Leu Ala Gln Leu Arg Glu Leu Glu Lys Lys Lys Lys
945                 950                 955                 960
Leu Glu Asp Ala Lys Ser Gln Glu Gln Phe Leu Gly Leu Asp Arg Glu
                965                 970                 975
Leu Lys Lys Leu Lys Lys Ala Val Ala Ala Ser Asp Lys Leu Ala Thr
            980                 985                 990
Ala Glu Leu Thr Ile Ala Lys Asp Gln Leu Lys Ser Leu His Gly Thr
        995                 1000                1005
Val Met Lys Ile Asn Gln Glu Arg Ala Glu Glu Leu Gln Glu Thr
    1010                1015                1020
Glu Arg Phe Ser Arg Lys Ala Ala Gln Ala Ala Arg Asp Leu Ile
    1025                1030                1035
Arg Ala Glu Ala Glu Ile Glu Leu Leu Gln Lys Leu Leu Arg Asp
    1040                1045                1050
Lys Glu Glu Gln Phe Arg Asn Glu Ile Glu Lys Val Asp Val Gly
    1055                1060                1065
Ser Gly Gly Ala Lys Ser Gln Met Leu Glu Met Glu Lys Leu Asn
    1070                1075                1080
Glu Thr Met Glu Arg Gln Arg Thr Glu Ile Ala Arg Leu Arg Asn
    1085                1090                1095
Leu Leu Asp Leu Thr Gly Ala Asp Asn Lys Gly Asn Phe Glu Asn
    1100                1105                1110
Val Leu Glu Glu Ile Ala Glu Leu Arg Arg Glu Val Ser His Gln
    1115                1120                1125
Asn Asp Tyr Ile Ser Ser Met Thr Asp Pro Phe Lys Arg Arg Gly
    1130                1135                1140
Tyr Trp Tyr Phe Met Pro Pro Pro Ser Ser Ser Lys Val Ser Ser
    1145                1150                1155
His Ser Ser Gln Ala Thr Lys Asp Ser Gly Val Gly Leu Lys Tyr
    1160                1165                1170
Thr Ala Ser Thr Pro Val Arg Lys Pro His Arg Gly Arg Gln Asp
    1175                1180                1185
Gly Lys Glu Asn Ser Gly Pro Pro Pro Ala Ser Gly Tyr Trp Val
    1190                1195                1200
Tyr Ser Pro Ile Arg Ser Gly Leu His Lys Ser Phe Ser Asn Arg
    1205                1210                1215
Asp Ala Asp Ser Gly Gly Asp Ser Gln Glu Glu Ser Glu Leu Asp
    1220                1225                1230
Asp Gln Glu Asp His Pro Phe Val Pro Pro Pro Gly Tyr Met Met
    1235                1240                1245
Tyr Thr Val Phe Pro Asp Gly Ser Pro Val Pro Gln Gly Met Ala
    1250                1255                1260
Leu Tyr Ala Pro Pro Pro Pro Leu Pro Asn Asn Ser Gln Pro Leu
    1265                1270                1275
Asp Leu Gly Thr Val Val Tyr Gly Pro Pro Pro Val Gly Ala Pro
    1280                1285                1290
Ile Val Tyr Gly Pro Pro Pro Pro Asn Phe Ser Val Pro Leu Ile
    1295                1300                1305
Pro Val Gly Val Leu His Cys Asn Val Pro Glu His His Asn Leu
    1310                1315                1320
Glu Asn Glu Val Ser Arg Leu Glu Asp Ile Met Gln His Leu Lys
    1325                1330                1335
Ser Gly Lys Arg Glu Gln Cys Met Lys Thr Pro Lys Leu Gln Ser
    1340                1345                1350
Glu Lys Glu Leu Ala Glu Leu Gln His Asn Ile Asp Gly Leu Leu
    1355                1360                1365
Gln Glu Lys Lys Asp Leu Glu His Glu Val Glu Glu Leu His Arg
    1370                1375                1380
Thr Ile Gln Lys His Gln Gln Arg Lys Asp Phe Ile Asp Gly Asn
    1385                1390                1395
Val Glu Ser Leu Val Asn Asp Leu Glu Ile Glu Lys Ser Leu Lys
    1400                1405                1410
His His Glu Asp Ile Val Asp Glu Ile Glu Cys Ile Glu Arg Thr
    1415                1420                1425
Leu Leu Lys Arg Arg Ala Glu Leu Arg Glu Ala Asp Arg Leu Leu
    1430                1435                1440
Thr Glu Ala Glu Ser Glu Leu Ser Cys Thr Lys Glu Lys Thr Lys
    1445                1450                1455
His Ala Val Glu Lys Phe Thr Asp Ala Lys Arg Asn Leu Leu Gln
    1460                1465                1470
Thr Glu Lys Asp Ala Glu Glu Leu Glu Arg Arg Ala Gln Glu Thr
    1475                1480                1485
Ala Ile Asn Leu Val Lys Ala Asp Gln Gln Leu Arg Leu Leu Gln
    1490                1495                1500
Ala Asp Thr Lys Asp Leu Glu Gln His Lys Met Glu Gln Glu Glu
    1505                1510                1515
Ile Leu Lys Glu Ile Asn Lys Val Val Ala Ala Lys Asp Ser Asp
    1520                1525                1530
Phe Gln Ser Leu Asn Lys Lys Lys Glu Val Leu Thr Gly Glu Leu
    1535                1540                1545
Gln Lys Leu Gln Lys Asp Ile Glu Thr Ala Arg His Asn Glu Asp
    1550                1555                1560
Gln His Leu Gln Val Leu Lys Glu Ser Glu Thr Leu Leu Gln Ala
    1565                1570                1575
Lys Lys Ala Glu Leu Glu Asn Leu Lys Ser Gln Val Ser Gly Gln
    1580                1585                1590
Gln Gln Glu Met Ala Val Leu Asp Arg Glu Leu Gly His Lys Lys
    1595                1600                1605
Glu Glu Leu His Leu Leu Gln Glu Ser Met Val Gln Ala Lys Ala
    1610                1615                1620
Asp Leu Gln Glu Ala Leu Arg Leu Gly Glu Ser Glu Val Thr Glu
    1625                1630                1635
Lys Cys Asn His Ile Arg Glu Val Lys Ser Leu Leu Glu Glu Leu
    1640                1645                1650
Ser Phe Gln Lys Gly Glu Leu Asn Val Gln Ile Ser Glu Lys Lys
    1655                1660                1665
Thr Gln Leu Ala Leu Ile Lys Gln Glu Ile Glu Lys Glu Glu Asp
    1670                1675                1680
Asn Leu Gln Val Val Leu Gly Gln Met Ser Lys His Lys Thr Glu
    1685                1690                1695
Leu Lys Asn Ile Leu Asp Met Leu Gln Leu Glu Asn Asn Glu Leu
    1700                1705                1710
Gln Gly Leu Lys Leu Gln His Asp Gln Lys Met Ser Glu Leu Glu
    1715                1720                1725
Lys Thr Arg Val Glu Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Leu Glu Ser
    1730                1735                1740
Leu Gln Gln Ala Ala Leu Arg Gln Arg Gly Glu Ile Glu Trp Gln
    1745                1750                1755
Lys Gln Leu Leu Gln Arg Asn Thr Gln Glu Val Glu Arg Met Thr
    1760                1765                1770
Ala Glu Thr Arg Ala Leu Gln Ser Cys Val Glu Ser Leu Cys Lys
    1775                1780                1785
Glu Lys Gln Asp Leu Glu Glu Lys Gln Asp Ser Trp Glu Lys Lys
    1790                1795                1800
Leu Ala Gln Thr Lys Arg Val Leu Ala Ala Ala Glu Glu Asp Ser
    1805                1810                1815
Glu Met Glu Arg Ala Arg Leu Glu Lys Leu Glu Leu Asp Ala Arg
    1820                1825                1830
Lys Leu Gln Gln Glu Leu Asp Gln Arg Asn Arg Glu Lys Leu Ser
    1835                1840                1845
Leu His Gln Asp Leu Ala Val Val Gln Gln Gln Leu Gln Glu Lys
    1850                1855                1860
Gln Glu Ala Val Asn Ser Leu Gln Lys Glu Leu Thr Asp Val Gln
    1865                1870                1875
Glu His Leu Asp Leu Ala Glu Gln Glu Val Leu Cys Thr Thr Lys
    1880                1885                1890
Arg Lys Asp Ala Leu Leu Ser Glu Gln Thr Arg Leu Glu Lys Asp
    1895                1900                1905
Val Gly Glu Trp Thr Lys Lys Phe Glu Asp Cys Gln Lys Glu Gly
    1910                1915                1920
Glu Thr Lys Gln Gln Gln Leu Gln Gly Leu Gln Lys Glu Ile Glu
    1925                1930                1935
Gly Asn Glu Ala Lys Leu Ala Gln Gln Glu Met Met Phe Gln Arg
    1940                1945                1950
Leu Gln Lys Glu Arg Glu Cys Glu Glu Lys Lys Leu Glu Ala Ser
    1955                1960                1965
Lys Val Thr Leu Lys Glu Gln Gln Gln Gln Leu Glu Lys Glu Leu
    1970                1975                1980
Met Glu Gln Lys Gly Lys Leu Asp Gln Val Leu Ala Lys Leu Leu
    1985                1990                1995
Val Ala Glu Glu Arg Val Arg Thr Leu Gln Glu Glu Gly Arg Trp
    2000                2005                2010
Ser Glu Thr Leu Glu Lys Thr Leu Ser Gln Thr Lys Arg Gln Leu
    2015                2020                2025
Ser Glu Arg Glu Gln Gln Leu Leu Ala Lys Ser Asp Glu Leu Leu
    2030                2035                2040
Ala Leu Gln Lys Glu Thr Asp Ser Met Arg Ala Asp Phe Ser Leu
    2045                2050                2055
Leu Arg Asn Gln Phe Leu Thr Glu Arg Lys Lys Ala Glu Lys Gln
    2060                2065                2070
Val Ala Ser Leu Lys Glu Ala Leu Lys Ile Gln Arg Ser Gln Leu
    2075                2080                2085
Glu Lys Asn Leu Leu Glu Gln Lys Gln Glu Asn Ser Cys Met Gln
    2090                2095                2100
Arg Glu Met Ala Thr Ile Glu Gln Val Ala Gln Asp Asn His Glu
    2105                2110                2115
Arg Ala Arg Arg Leu Met Arg Glu Leu Asn Gln Met Gln Arg Glu
    2120                2125                2130
Tyr Val Glu Leu Arg Lys Gln Met Thr Asn Gln Lys Asp Leu Glu
    2135                2140                2145
Arg Arg Gln Met Glu Ile Ser Asp Ala Met Gln Ala Leu Lys Cys
    2150                2155                2160
Glu Val Lys Asp Glu Ile Arg Thr Ser Leu Lys Asn Leu Asn Gln
    2165                2170                2175
Phe Leu Pro Glu Leu Pro Ala Asp Leu Glu Ala Leu Leu Glu Arg
    2180                2185                2190
Asn Glu Asn Leu Gly Gly Gly Leu Glu Ser Leu Lys Glu Asn Phe
    2195                2200                2205
Pro Phe Thr Val Ser Asp Arg Pro Ser Ser Cys Glu Glu Lys Leu
    2210                2215                2220
Asn Phe Gly Gln Ala His Val Ala Asp Glu Gln Trp Arg Gly Glu
    2225                2230                2235
Ala Leu Arg Glu Lys Leu Arg His Arg Glu Asp Arg Leu Lys Ala
    2240                2245                2250
Gln Leu Arg Arg Cys Met Ser Lys Gln Ala Glu Val Leu Ser Glu
    2255                2260                2265
Gly Arg Arg Arg Thr Glu Gly Thr Leu His Ser Leu Arg Arg Gln
    2270                2275                2280
Val Asp Ala Leu Gly Glu Leu Val Thr Ser Thr Ser Gly Asp Ser
    2285                2290                2295
Ala Ser Thr Arg Ser Leu Ser Arg Thr Glu Gly Ser Leu Ala Glu
    2300                2305                2310
Asp Glu Pro Pro Gly Pro Ser Gln Ser Ser Arg Arg Leu Pro Arg
    2315                2320                2325
Gly Pro Ser Pro Arg Leu Asp Ala His Arg Pro
    2330                2335
 
<210>27
<211>7431
<212>DNA
<213>人
 
<220>
<221>CDS
<222>(32)..(7009)
<223>
<400>27
gttttgatga acacctggct ttattcttgc a atg aag aaa ggt tct caa caa    52
                                   Met Lys Lys Gly Ser Gln Gln
                                   1               5
aaa ata ttc tcc aaa gca aag ata cca tca tca tct cac tct cct atc    100
Lys Ile Phe Ser Lys Ala Lys Ile Pro Ser Ser Ser His Ser Pro Ile
        10                  15                  20
cca tca tct atg tcc aat atg aga tct agg tca ctt tca cct ttg att    148
Pro Ser Ser Met Ser Asn Met Arg Ser Arg Ser Leu Ser Pro Leu Ile
    25                  30                  35
gga tca gag act cta cct ttt cat tct gga gga cag tgg tgt gag caa    196
Gly Ser Glu Thr Leu Pro Phe His Ser Gly Gly Gln Trp Cys Glu Gln
40                  45                  50                  55
gtt gag att gca gat gaa aac aat atg ctt ttg gac tat caa gac cat    244
Val Glu Ile Ala Asp Glu Asn Asn Met Leu Leu Asp Tyr Gln Asp His
                60                  65                  70
aaa gga gct gat tca cat gca gga gtt aga tat att aca gag gcc ctc    292
Lys Gly Ala Asp Ser His Ala Gly Val Arg Tyr Ile Thr Glu Ala Leu
            75                  80                  85
att aaa aaa ctt act aaa cag gat aat ttg gct ttg ata aaa tct ctg    340
Ile Lys Lys Leu Thr Lys Gln Asp Asn Leu Ala Leu Ile Lys Ser Leu
        90                  95                  100
aac ctt tca ctt tct aaa gac ggt ggc aag aaa ttt aag tat att gag    388
Asn Leu Ser Leu Ser Lys Asp Gly Gly Lys Lys Phe Lys Tyr Ile Glu
    105                 110                 115
aat ttg gaa aaa tgt gtt aaa ctt gaa gta ctg aat ctc agc tat aat    436
Asn Leu Glu Lys Cys Val Lys Leu Glu Val Leu Asn Leu Ser Tyr Asn
120                 125                 130                 135
cta ata ggg aag att gaa aag ttg gac aag ctg tta aaa tta cgt gaa    484
Leu Ile Gly Lys Ile Glu Lys Leu Asp Lys Leu Leu Lys Leu Arg Glu
                140                 145                 150
ctc aac tta tca tat aac aaa atc agc aaa att gaa ggc ata gaa aat    532
Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Ile Ser Lys Ile Glu Gly Ile Glu Asn
            155                 160                 165
atg tgt aat ctg caa aag ctt aac ctt gca gga aat gaa att gag cat    580
Met Cys Asn Leu Gln Lys Leu Asn Leu Ala Gly Asn Glu Ile Glu His
        170                 175                 180
att cca gta tgg tta ggg aag aag tta aaa tct ttg cga gtc ctc aat    628
Ile Pro Val Trp Leu Gly Lys Lys Leu Lys Ser Leu Arg Val Leu Asn
    185                 190                 195
ttg aaa ggc aac aag ata tca tcg ctc caa gat ata agc aag ttg aaa    676
Leu Lys Gly Asn Lys Ile Ser Ser Leu Gln Asp Ile Ser Lys Leu Lys
200                 205                 210                 215
ccg ctt caa gat ttg att tct ctg atc cta gtt gaa aat cca gtt gtg    724
Pro Leu Gln Asp Leu Ile Ser Leu Ile Leu Val Glu Asn Pro Val Val
                220                 225                 230
acc ctt cct cat tac ctc cag ttt acc att ttc cac ctc cgt tca ttg    772
Thr Leu Pro His Tyr Leu Gln Phe Thr Ile Phe His Leu Arg Ser Leu
            235                 240                 245
gaa agt ttg gaa ggt cag cca gta acc act cag gat aga cag gag gct    820
Glu Ser Leu Glu Gly Gln Pro Val Thr Thr Gln Asp Arg Gln Glu Ala
        250                 255                 260
ttt gag aga ttc agt tta gaa gag gta gaa aga ctg gaa aga gac cta    868
Phe Glu Arg Phe Ser Leu Glu Glu Val Glu Arg Leu Glu Arg Asp Leu
    265                 270                 275
gaa aaa aag atg ata gaa act gaa gag ctt aag agc aaa caa aca agg    916
Glu Lys Lys Met Ile Glu Thr Glu Glu Leu Lys Ser Lys Gln Thr Arg
280                 285                 290                 295
ttc ctt gag gaa att aaa aat caa gat aaa ttg aat aaa tca tta aaa    964
Phe Leu Glu Glu Ile Lys Asn Gln Asp Lys Leu Asn Lys Ser Leu Lys
                300                 305                 310
gag gag gcc atg tta cag aaa cag agc tgt gag gaa ctc aag agt gac    1012
Glu Glu Ala Met Leu Gln Lys Gln Ser Cys Glu Glu Leu Lys Ser Asp
            315                 320                 325
tta aac aca aaa aat gaa ttg cta aaa cag aag acc ata gaa tta aca    1060
Leu Asn Thr Lys Asn Glu Leu Leu Lys Gln Lys Thr Ile Glu Leu Thr
        330                 335                 340
cga gca tgt cag aag caa tat gag ctg gaa cag gaa ttg gcc ttt tat    1108
Arg Ala Cys Gln Lys Gln Tyr Glu Leu Glu Gln Glu Leu Ala Phe Tyr
    345                 350                 355
aaa att gat gct aaa ttt gag cca cta aat tat tat cca tca gag tat    1156
Lys Ile Asp Ala Lys Phe Glu Pro Leu Asn Tyr Tyr Pro Ser Glu Tyr
360                 365                 370                 375
gct gaa att gat aaa gcc cca gat gaa agc cct tac att ggc aaa tcc    1204
Ala Glu Ile Asp Lys Ala Pro Asp Glu Ser Pro Tyr Ile Gly Lys Ser
                380                 385                 390
aga tac aag aga aat atg ttt gcc aca gag agt tat att att gac agt    1252
Arg Tyr Lys Arg Asn Met Phe Ala Thr Glu Ser Tyr Ile Ile Asp Ser
            395                 400                 405
gct cag gca gta cag atc aag aag atg gag cca gat gaa caa ctt aga    1300
Ala Gln Ala Val Gln Ile Lys Lys Met Glu Pro Asp Glu Gln Leu Arg
        410                 415                 420
aat gat cac atg aac ttg aga ggc cac aca cca ctg gac acg caa ctg    1348
Asn Asp His Met Asn Leu Arg Gly His Thr Pro Leu Asp Thr Gln Leu
    425                 430                 435
gaa gac aaa gaa aaa aaa ata agt gca gca caa act cga cta tca gaa    1396
Glu Asp Lys Glu Lys Lys Ile Ser Ala Ala Gln Thr Arg Leu Ser Glu
440                 445                 450                 455
ctg cat gat gaa ata gaa aag gca gaa caa caa att ttg aga gct act    1444
Leu His Asp Glu Ile Glu Lys Ala Glu Gln Gln Ile Leu Arg Ala Thr
                460                 465                 470
gaa gaa ttt aaa caa ctg gaa gaa gct ata caa cta aaa aag att tca    1492
Glu Glu Phe Lys Gln Leu Glu Glu Ala Ile Gln Leu Lys Lys Ile Ser
            475                 480                 485
gaa gca ggg aaa gac ctt ctt tac aag cag ttg agt ggt aga cta caa    1540
Glu Ala Gly Lys Asp Leu Leu Tyr Lys Gln Leu Ser Gly Arg Leu Gln
        490                 495                 500
ctt gta aat aaa tta cgc cag gaa gct ctg gat cta gaa ctg cag atg    1588
Leu Val Asn Lys Leu Arg Gln Glu Ala Leu Asp Leu Glu Leu Gln Met
    505                 510                 515
gaa aag caa aag cag gaa att gcc gga aag cag aag gag att aag gac    1636
Glu Lys Gln Lys Gln Glu Ile Ala Gly Lys Gln Lys Glu Ile Lys Asp
520                 525                 530                 535
ctg caa ata gcc ata gat agc ctg gat tcc aaa gac cca aaa cat tcc    1684
Leu Gln Ile Ala Ile Asp Ser Leu Asp Ser Lys Asp Pro Lys His Ser
                540                 545                 550
cat atg aag gct caa aag agc ggt aaa gaa caa cag ctt gac att atg    1732
His Met Lys Ala Gln Lys Ser Gly Lys Glu Gln Gln Leu Asp Ile Met
            555                 560                 565
aac aag cag tac caa caa ctt gaa agt cgt ttg gat gag ata ctt tct    1780
Asn Lys Gln Tyr Gln Gln Leu Glu Ser Arg Leu Asp Glu Ile Leu Ser
        570                 575                 580
aga att gct aag gaa acg gaa gag att aag gac ctt gaa gaa cag ctt    1828
Arg Ile Ala Lys Glu Thr Glu Glu Ile Lys Asp Leu Glu Glu Gln Leu
    585                 590                 595
act gaa ggc cag ata gca gca aat gaa gcc ctg aag aag gat tta gaa    1876
Thr Glu Gly Gln Ile Ala Ala Asn Glu Ala Leu Lys Lys Asp Leu Glu
600                 605                 610                 615
ggt gtt atc agt ggg ttg caa gaa tac ctg ggg acc att aaa ggc cag    1924
Gly Val Ile Ser Gly Leu Gln Glu Tyr Leu Gly Thr Ile Lys Gly Gln
                620                 625                 630
gca act cag gcc cag aat gag tgc agg aag ctg cgg gat gag aaa gag    1972
Ala Thr Gln Ala Gln Asn Glu Cys Arg Lys Leu Arg Asp Glu Lys Glu
            635                 640                 645
aca ttg ttg cag aga ttg aca gaa gtc gag cag gag aga gac cag ctg    2020
Thr Leu Leu Gln Arg Leu Thr Glu Val Glu Gln Glu Arg Asp Gln Leu
        650                 655                 660
gaa ata gtt gcc atg gat gca gaa aat atg agg aag gag ctt gca gag    2068
Glu Ile Val Ala Met Asp Ala Glu Asn Met Arg Lys Glu Leu Ala Glu
    665                 670                 675
cta gaa agt gcc ctc caa gag cag cat gag gtg aat gca tct ttg cag    2116
Leu Glu Ser Ala Leu Gln Glu Gln His Glu Val Asn Ala Ser Leu Gln
680                 685                 690                 695
cag acc cag gga gat ctc agt gcc tat gaa gct gag cta gag gct cgg    2164
Gln Thr Gln Gly Asp Leu Ser Ala Tyr Glu Ala Glu Leu Glu Ala Arg
                700                 705                 710
cta aac cta agg gat gct gaa gcc aac cag ctc aag gaa gag ttg gaa    2212
Leu Asn Leu Arg Asp Ala Glu Ala Asn Gln Leu Lys Glu Glu Leu Glu
            715                 720                 725
aaa gta aca aga ctt acc cag tta gaa caa tca gcc ctt caa gca gaa    2260
Lys Val Thr Arg Leu Thr Gln Leu Glu Gln Ser Ala Leu Gln Ala Glu
        730                 735                 740
ctt gag aag gaa agg caa gcc ctc aag aat gcc ctt gga aaa gcc cag    2308
Leu Glu Lys Glu Arg Gln Ala Leu Lys Asn Ala Leu Gly Lys Ala Gln
    745                 750                 755
ttc tca gaa gaa aag gag caa gag aac agt gag ctc cat gca aaa ctt    2356
Phe Ser Glu Glu Lys Glu Gln Glu Asn Ser Glu Leu His Ala Lys Leu
760                 765                 770                 775
aaa cac ttg cag gat gac aat aat ctg tta aaa cag caa ctt aaa gat    2404
Lys His Leu Gln Asp Asp Asn Asn Leu Leu Lys Gln Gln Leu Lys Asp
                780                 785                 790
ttc cag aat cac ctt aac cat gtg gtt gat ggt ttg gtt cgt cca gaa    2452
Phe Gln Asn His Leu Asn His Val Val Asp Gly Leu Val Arg Pro Glu
            795                 800                 805
gaa gtg gca gct cgt gtg gat gag cta aga aga aaa ctg aaa tta gga    2500
Glu Val Ala Ala Arg Val Asp Glu Leu Arg Arg Lys Leu Lys Leu Gly
        810                 815                 820
act ggg gaa atg aac atc cat agt cct tca gat gtc tta ggg aaa agt    2548
Thr Gly Glu Met Asn Ile His Ser Pro Ser Asp Val Leu Gly Lys Ser
    825                 830                 835
ctt gct gat tta cag aaa caa ttc agt gaa att ctt gca cgc tcc aag    2596
Leu Ala Asp Leu Gln Lys Gln Phe Ser Glu Ile Leu Ala Arg Ser Lys
840                 845                 850                 855
tgg gaa aga gat gaa gca caa gtt aga gag aga aaa ctc caa gaa gaa    2644
Trp Glu Arg Asp Glu Ala Gln Val Arg Glu Arg Lys Leu Gln Glu Glu
                860                 865                 870
atg gct ctg cag caa gag aaa ctg gca act gga caa gaa gag ttc agg    2692
Met Ala Leu Gln Gln Glu Lys Leu Ala Thr Gly Gln Glu Glu Phe Arg
            875                 880                 885
cag gcc tgt gag aga gcc ctg gaa gca aga atg aat ttt gat aag agg    2740
Gln Ala Cys Glu Arg Ala Leu Glu Ala Arg Met Asn Phe Asp Lys Arg
        890                 895                 900
caa cat gaa gca aga atc cag caa atg gag aat gaa att cac tat ttg   2788
Gln His Glu Ala Arg Ile Gln Gln Met Glu Asn Glu Ile His Tyr Leu
    905                 910                 915
caa gaa aat cta aaa agt atg gag gaa atc caa ggc ctt aca gat ctc   2836
Gln Glu Asn Leu Lys Ser Met Glu Glu Ile Gln Gly Leu Thr Asp Leu
920                 925                 930                 935
caa ctt cag gaa gct gat gaa gag aag gag aga att ctg gcc caa ctc   2884
Gln Leu Gln Glu Ala Asp Glu Glu Lys Glu Arg Ile Leu Ala Gln Leu
                940                 945                 950
cga gag tta gag aaa aag aag aaa ctt gaa gat gcc aaa tct cag gag   2932
Arg Glu Leu Glu Lys Lys Lys Lys Leu Glu Asp Ala Lys Ser Gln Glu
            955                 960                 965
caa gtt ttt ggt tta gat aaa gaa ctg aag aaa cta aag aaa gcc gtg   2980
Gln Val Phe Gly Leu Asp Lys Glu Leu Lys Lys Leu Lys Lys Ala Val
        970                 975                 980
gcc acc tct gat aag cta gcc aca gct gag ctc acc att gcc aaa gac   3028
Ala Thr Ser Asp Lys Leu Ala Thr Ala Glu Leu Thr Ile Ala Lys Asp
    985                 990                 995
cag ctg aag tcc ctt cat gga act gtt atg aaa att aac cag gag       3073
Gln Leu Lys Ser Leu His Gly Thr Val Met Lys Ile Asn Gln Glu
1000                1005                1010
cga gca gag gag ttg cag gaa gca gag agg ttc agc aga aag gca       3118
Arg Ala Glu Glu Leu Gln Glu Ala Glu Arg Phe Ser Arg Lys Ala
1015                1020                1025
gca caa gca gcc aga gat ctc acc cga gca gaa gct gag atc gaa       3163
Ala Gln Ala Ala Arg Asp Leu Thr Arg Ala Glu Ala Glu Ile Glu
1030                1035                1040
ctc ctg cag aat ctc ctc agg cag aag ggg gag cag ttt cga ctt       3208
Leu Leu Gln Asn Leu Leu Arg Gln Lys Gly Glu Gln Phe Arg Leu
1045                1050                1055
gag atg gag aaa aca ggt gta ggt act gga gca aac tca cag gtc       3253
Glu Met Glu Lys Thr Gly Val Gly Thr Gly Ala Asn Ser Gln Val
1060                1065                1070
cta gaa att gag aaa ctg aat gag aca atg gaa cga caa agg aca       3298
Leu Glu Ile Glu Lys Leu Asn Glu Thr Met Glu Arg Gln Arg Thr
1075                1080                1085
gag att gca agg ctg cag aat gta cta gac ctc act gga agt gac       3343
Glu Ile Ala Arg Leu Gln Asn Val Leu Asp Leu Thr Gly Ser Asp
1090                1095                1100
aac aaa gga ggc ttt gaa aat gtt tta gaa gaa att gct gaa ctt       3388
Asn Lys Gly Gly Phe Glu Asn Val Leu Glu Glu Ile Ala Glu Leu
1105                1110                1115
cga cgt gaa gtt tct tat cag aat gat tac ata agc agc atg gca       3433
Arg Arg Glu Val Ser Tyr Gln Asn Asp Tyr Ile Ser Ser Met Ala
1120                1125                1130
gat cct ttc aaa aga cga ggc tat tgg tac ttt atg cca cca cca       3478
Asp Pro phe Lys Arg Arg Gly Tyr Trp Tyr Phe Met Pro Pro Pro
1135                1140                1145
cca tca tca aaa gtt tcc agc cat agt tcc cag gcc acc aag gac       3523
Pro Ser Ser Lys Val Ser Ser His Ser Ser Gln Ala Thr Lys Asp
1150                1155                1160
tct ggt gtt ggc ctt aag tac tca gcc tca act cct gtt aga aaa      3568
Ser Gly Val Gly Leu Lys Tyr Ser Ala Ser Thr Pro Val Arg Lys
1165                1170                1175
cca cgc cct ggg cag cag gat ggg aag gaa ggc agt caa cct ccc       3613
Pro Arg Pro Gly Gln Gln Asp Gly Lys Glu Gly Ser Gln Pro Pro
1180                1185                1190
cct gcc tca gga tac tgg gtt tat tct ccc atc agg agt ggg tta    3658
Pro Ala Ser Gly Tyr Trp Val Tyr Ser Pro Ile Arg Ser Gly Leu
1195                1200                1205
cat aaa ctg ttt cca agt aga gat gca gac agt gga gga gat agt    3703
His Lys Leu Phe Pro Ser Arg Asp Ala Asp Ser Gly Gly Asp Ser
1210                1215                1220
cag gaa gag agt gag ctg gat gac caa gaa gaa ccc cca ttt gtg    3748
Gln Glu Glu Ser Glu Leu Asp Asp Gln Glu Glu Pro Pro Phe Val
1225                1230                1235
cct cct cct gga tac atg atg tat act gtg ctt cct gat ggt tct    3793
Pro Pro Pro Gly Tyr Met Met Tyr Thr Val Leu Pro Asp Gly Ser
1240                1245                1250
cct gta ccc cag ggc atg gcc ctg tat gca cca cct cct ccc ttg    3838
Pro Val Pro Gln Gly Met Ala Leu Tyr Ala Pro Pro Pro Pro Leu
1255                1260                1265
cca aac aat agc cga cct ctc acc cct ggc act gtt gtt tat ggc    3883
Pro Asn Asn Ser Arg Pro Leu Thr Pro Gly Thr Val Val Tyr Gly
1270                1275                1280
cca cct cct gct ggg gcc ccc atg gtg tat ggg cct cca ccc ccc    3928
Pro Pro Pro Ala Gly Ala Pro Met Val Tyr Gly Pro Pro Pro Pro
1285                1290                1295
aac ttc tcc atc ccc ttc atc cct atg ggt gtg ctg cat tgc aac    3973
Asn Phe Ser Ile Pro Phe Ile Pro Met Gly Val Leu His Cys Asn
1300                1305                1310
gtc cct gaa cac cat aac tta gag aat gaa gtt tct aga tta gaa    4018
Val Pro Glu His His Asn Leu Glu Asn Glu Val Ser Arg Leu Glu
1315                1320                1325
gac ata atg cag cat tta aaa tca aag aag cgg gaa gaa agg tgg    4063
Asp Ile Met Gln His Leu Lys Ser Lys Lys Arg Glu Glu Arg Trp
1330                1335                1340
atg aga gca tcc aag cgg cag tcg gag aaa gaa atg gaa gaa ctg    4108
Met Arg Ala Ser Lys Arg Gln Ser Glu Lys Glu Met Glu Glu Leu
1345                1350                1355
cat cat aat att gat gat ctt ttg caa gag aag aaa agc tta gag    4153
His His Asn Ile Asp Asp Leu Leu Gln Glu Lys Lys Ser Leu Glu
1360                1365                1370
tgt gaa gta gaa gaa tta cat aga act gtc cag aaa cgt caa cag    4198
Cys Glu Val Glu Glu Leu His Arg Thr Val Gln Lys Arg Gln Gln
1375                1380                1385
caa aag gac ttc att gat gga aat gtt gag agt ctt atg act gaa    4243
Gln Lys Asp Phe Ile Asp Gly Asn Val Glu Ser Leu Met Thr Glu
1390                1395                1400
cta gaa ata gaa aaa tca ctc aaa cat cat gaa gat att gta gat    4288
Leu Glu Ile Glu Lys Ser Leu Lys His His Glu Asp Ile Val Asp
1405                1410                1415
gaa att gag tgc att gag aag act ctt ctg aaa cgt cgc tca gag    4333
Glu Ile Glu Cys Ile Glu Lys Thr Leu Leu Lys Arg Arg Ser Glu
1420                1425                1430
ctc agg gaa gct gac cga ctc ctg gca gag gct gag agt gaa ctt    4378
Leu Arg Glu Ala Asp Arg Leu Leu Ala Glu Ala Glu Ser Glu Leu
1435                1440                1445
tca tgc act aaa gaa aag aca aaa aat gct gtt gaa aag ttc act    4423
Ser Cys Thr Lys Glu Lys Thr Lys Asn Ala Val Glu Lys Phe Thr
1450                1455                1460
gat gcc aag aga agt tta ttg caa act gag tca gat gct gag gaa    4468
Asp Ala Lys Arg Ser Leu Leu Gln Thr Glu Ser Asp Ala Glu Glu
1465                1470                1475
tta gaa agg aga gct cag gaa act gct gtt aac ctc gtc aaa gct    4513
Leu Glu Arg Arg Ala Gln Glu Thr Ala Val Asn Leu Val Lys Ala
1480                1485                1490
gat cag cag cta aga tcg ctc cag gct gat gca aag gat ttg gag    4558
Asp Gln Gln Leu Arg Ser Leu Gln Ala Asp Ala Lys Asp Leu Glu
1495                1500                1505
cag cac aaa atc aag caa gaa gaa atc ttg aaa gaa ata aac aaa    4603
Gln His Lys Ile Lys Gln Glu Glu Ile Leu Lys Glu Ile Asn Lys
1510                1515                1520
att gta gca gca aaa gac tca gac ttc caa tgt tta agc aag aag    4648
Ile Val Ala Ala Lys Asp Ser Asp Phe Gln Cys Leu Ser Lys Lys
1525                1530                1535
aag gaa aaa ctg aca gaa gag ctt cag aaa cta cag aaa gac ata    4693
Lys Glu Lys Leu Thr Glu Glu Leu Gln Lys Leu Gln Lys Asp Ile
1540                1545                1550
gag atg gca gaa cgc aat gag gat cac cac ctg cag gtc ctt aaa    4738
Glu Met Ala Glu Arg Asn Glu Asp His His Leu Gln Val Leu Lys
1555                1560                1565
gaa tct gag gtg ctt ctt cag gcc aaa aga gcc gag ctg gaa aag    4783
Glu Ser Glu Val Leu Leu Gln Ala Lys Arg Ala Glu Leu Glu Lys
1570                1575                1580
ctg aaa agc cag gtg aca agt cag cag cag gag atg gct gtc ttg    4828
Leu Lys Ser Gln Val Thr Ser Gln Gln Gln Glu Met Ala Val Leu
1585                1590                1595
gac agg cag tta ggg cat aaa aag gag gag ctg cat cta ctc caa    4873
Asp Arg Gln Leu Gly His Lys Lys Glu Glu Leu His Leu Leu Gln
1600                1605                1610
gga agc atg gtc cag gca aaa gct gac ctc cag gaa gct ctg aga    4918
Gly Ser Met Val Gln Ala Lys Ala Asp Leu Gln Glu Ala Leu Arg
1615                1620                1625
ctg gga gag act gaa gta act gag aag tgc aat cac att agg gaa    4963
Leu Gly Glu Thr Glu Val Thr Glu Lys Cys Asn His Ile Arg Glu
1630                1635                1640
gta aaa tct ctt ctg gaa gaa ctg agt ttt cag aaa gga gaa cta    5008
Val Lys Ser Leu Leu Glu Glu Leu Ser Phe Gln Lys Gly Glu Leu
1645                1650                1655
aat gtt cag att agt gaa aga aaa act caa ctt aca ctt ata aag    5053
Asn Val Gln Ile Ser Glu Arg Lys Thr Gln Leu Thr Leu Ile Lys
1660                1665                1670
cag gaa att gaa aaa gag gaa gaa aat ctt cag gtt gtt tta agg    5098
Gln Glu Ile Glu Lys Glu Glu Glu Asn Leu Gln Val Val Leu Arg
1675                1680                1685
cag atg tct aaa cat aaa acc gaa cta aag aat att ctg gac atg    5143
Gln Met Ser Lys His Lys Thr Glu Leu Lys Asn Ile Leu Asp Met
1690                1695                1700
ttg caa ctt gaa aac cat gag cta caa ggt ttg aag cta caa cat    5188
Leu Gln Leu Glu Asn His Glu Leu Gln Gly Leu Lys Leu Gln His
1705                1710                1715
gac caa agg gta tct gaa tta gag aag act cag gtg gca gtgcta     5233
Asp Gln Arg Val Ser Glu Leu Glu Lys Thr Gln Val Ala Val Leu
1720                1725                1730
gag gag aaa ctg gag tta gag aat ttg cag cag ata tcc cag cag    5278
Glu Glu Lys Leu Glu Leu Glu Asn Leu Gln Gln Ile Ser Gln Gln
1735                1740                1745
cag aaa ggg gaa ata gag tgg cag aag cag ctc ctt gag agg gat    5323
Gln Lys Gly Glu Ile Glu Trp Gln Lys Gln Leu Leu Glu Arg Asp
1750                1755                1760
aaa cga gaa ata gaa cga atg act gct gag tcc cga gct tta caa      5368
Lys Arg Glu Ile Glu Arg Met Thr Ala Glu Ser Arg Ala Leu Gln
1765                1770                1775
tcg tgt gtt gag tgt ttg agc aaa gaa aag gaa gat ctc caa gag      5413
Ser Cys Val Glu Cys Leu Ser Lys Glu Lys Glu Asp Leu Gln Glu
1780                1785                1790
aaa tgt gac att tgg gaa aaa aag ttg gca caa acc aaa agg gtt      5458
Lys Cys Asp Ile Trp Glu Lys Lys Leu Ala Gln Thr Lys Arg Val
1795                1800                1805
tta gca gca gca gaa gaa aat agc aaa atg gag caa tca aac tta      5503
Leu Ala Ala Ala Glu Glu Asn Ser Lys Met Glu Gln Ser Asn Leu
1810                1815                1820
gaa aag ttg gaa ttg aat gtc aga aaa ctg cag cag gaa cta gac      5548
Glu Lys Leu Glu Leu Asn Val Arg Lys Leu Gln Gln Glu Leu Asp
1825                1830                1835
caa cta aac aga gac aag ttg tca ctg cat aac gac att tca gca      5593
Gln Leu Asn Arg Asp Lys Leu Ser Leu His Asn Asp Ile Ser Ala
1840                1845                1850
atg caa cag cag ctc caa gaa aaa cga gaa gca gta aac tca ctg      5638
Met Gln Gln Gln Leu Gln Glu Lys Arg Glu Ala Val Asn Ser Leu
1855                1860                1865
cag gag gaa cta gct aat gtc caa gac cat ttg aac cta gca aaa      5683
Gln Glu Glu Leu Ala Asn Val Gln Asp His Leu Asn Leu Ala Lys
1870                1875                1880
cag gac ctg ctt cac acc acc aag cat cag gat gtg ttg ctc agt      5728
Gln Asp Leu Leu His Thr Thr Lys His Gln Asp Val Leu Leu Ser
1885                1890                1895
gag cag acc cga ctc cag aag gac atc agt gaa tgg gca aat agg      5773
Glu Gln Thr Arg Leu Gln Lys Asp Ile Ser Glu Trp Ala Asn Arg
1900                1905                1910
ttt gaa gac tgt cag aaa gaa gag gag aca aaa caa caa caa ctt      5818
Phe Glu Asp Cys Gln Lys Glu Glu Glu Thr Lys Gln Gln Gln Leu
1915                1920                1925
caa gtg ctt cag aat gag att gaa gaa aac aag ctc aaa cta gtc      5863
Gln Val Leu Gln Asn Glu Ile Glu Glu Asn Lys Leu Lys Leu Val
1930                1935                1940
caa caa gaa atg atg ttt cag aga ctc cag aaa gag aga gaa agt      5908
Gln Gln Glu Met Met Phe Gln Arg Leu Gln Lys Glu Arg Glu Ser
1945                1950                1955
gaa gaa agc aaa tta gaa acc agt aaa gtg aca ctg aag gag caa      5953
Glu Glu Ser Lys Leu Glu Thr Ser Lys Val Thr Leu Lys Glu Gln
1960                1965                1970
cag cac cag ctg gaa aag gaa tta aca gac cag aaa agc aaa ctg      5998
Gln His Gln Leu Glu Lys Glu Leu Thr Asp Gln Lys Ser Lys Leu
1975                1980                1985
gac caa gtg ctc tca aag gtg ctg gca gct gaa gag cgt gtt agg      6043
Asp Gln Val Leu Ser Lys Val Leu Ala Ala Glu Glu Arg Val Arg
1990                1995                2000
act ctg cag gaa gag gag agg tgg tgt gag agc ctg gag aag aca      6088
Thr Leu Gln Glu Glu Glu Arg Trp Cys Glu Ser Leu Glu Lys Thr
2005                2010                2015
ctc tcc caa act aaa cgg cag ctt tca gaa agg gag cag caa ttg      6133
Leu Ser Gln Thr Lys Arg Gln Leu Ser Glu Arg  Glu Gln Gln Leu
2020                2025                2030
gtg gag aaa tca ggt gag ctg ttg gcc ctc cag aaa gag gca gat      6178
Val Glu Lys Ser Gly Glu Leu Leu Ala Leu Gln Lys Glu Ala Asp
2035                2040                2045
tct atg agg gca gac ttc agc ctt ctg cgg aac cag ttc ttg aca      6223
Ser Met Arg Ala Asp Phe Ser Leu Leu Arg Asn Gln Phe Leu Thr
2050                2055                2060
gaa aga aag aaa gct gag aag cag gtg gcc agc ctg aag gaa gca      6268
Glu Arg Lys Lys Ala Glu Lys Gln Val Ala Ser Leu Lys Glu Ala
2065                2070                2075
ctt aag atc cag cgg agc cag ctg gag aaa aac ctt ctt gag caa      6313
Leu Lys Ile Gln Arg Ser Gln Leu Glu Lys Asn Leu Leu Glu Gln
2080                2085                2090
aaa cag gag aac agc tgc ata caa aag gaa atg gca aca att gaa      6358
Lys Gln Glu Asn Ser Cys Ile Gln Lys Glu Met Ala Thr Ile Glu
2095                2100                2105
ctg gta gcc cag gac aac cat gag cgg gcc agg cgc ctg atg aag      6403
Leu Val Ala Gln Asp Asn His Glu Arg Ala Arg Arg Leu Met Lys
2110                2115                2120
gag ctc aac cag atg cag tat gag tac acg gag ctc aag aaa cag      6448
Glu Leu Asn Gln Met Gln Tyr Glu Tyr Thr Glu Leu Lys Lys Gln
2125                2130                2135
atg gca aac caa aaa gat ttg gag aga aga caa atg gaa atc agt      6493
Met Ala Asn Gln Lys Asp Leu Glu Arg Arg Gln Met Glu Ile Ser
2140                2145                2150
gat gca atg agg aca ctt aaa tct gag gtg aag gat gaa atc aga      6538
Asp Ala Met Arg Thr Leu Lys Ser Glu Val Lys Asp Glu Ile Arg
2155                2160                2165
acc agc ttg aag aat ctt aat cag ttt ctt cca gaa cta cca gca      6583
Thr Ser Leu Lys Asn Leu Asn Gln Phe Leu Pro Glu Leu Pro Ala
2170                2175                2180
gat cta gaa gct att ttg gaa aga aac gaa aac cta gaa gga gaa      6628
Asp Leu Glu Ala Ile Leu Glu Arg Asn Glu Asn Leu Glu Gly Glu
2185                2190                2195
ttg gaa agc ttg aaa gag aac ctt cca ttt acc atg aat gag gga      6673
Leu Glu Ser Leu Lys Glu Asn Leu Pro Phe Thr Met Asn Glu Gly
2200                2205                2210
cct ttt gaa gaa aaa ctg aac ttt tcc caa gtt cac ata atg gat      6718
Pro Phe Glu Glu Lys Leu Asn Phe Ser Gln Val His Ile Met Asp
2215                2220                2225
gaa cac tgg cgt gga gaa gca ctc cgg gag aaa ctg cgt cac cgg      6763
Glu His Trp Arg Gly Glu Ala Leu Arg Glu Lys Leu Arg His Arg
2230                2235                2240
gaa gac cga ctc aag gcc caa ctc cga cac tgt atg tcc aag caa      6808
Glu Asp Arg Leu Lys Ala Gln Leu Arg His Cys Met Ser Lys Gln
2245                2250                2255
gca gaa gta tta att aaa gga aag cgg cag aca gag ggc act tta      6853
Ala Glu Val Leu Ile Lys Gly Lys Arg Gln Thr Glu Gly Thr Leu
2260                2265                2270
cac agt ttg agg aga caa gta gat gct tta ggg gaa ttg gtc acc      6898
His Ser Leu Arg Arg Gln Val Asp Ala Leu Gly Glu Leu Val Thr
2275                2280                2285
agc acc tct gca gat tca gcg tca tca ccc agt ctg tct cag ctg      6943
Ser Thr Ser Ala Asp Ser Ala Ser Ser Pro Ser Leu Ser Gln Leu
2290                2295                2300
gag tct tcc ctc aca gag gac tct caa ctt gga caa aat cag gaa      6988
Glu Ser Ser Leu Thr Glu Asp Ser Gln Leu Gly Gln Asn Gln Glu
2305                2310                2315
aag aat gcc tca gcc aga tga ggaatactgt cttgtgtaaa tatattcaag     7039
Lys Asn Ala Ser Ala Arg
2320                2325
 
gaaaacacct ccactacctc actgacttca taattggaat gtcacatggt ttttttaatc    7099
aagatgcagt gaactgagat tctgaaactc cactgtagtt tactttgcct gtaccattaa    7159
tgccaatgtt tttataaatc acttgtacat agtacatatg ggaatagttg catatgggaa    7219
tttaaaccaa catgtggctg agcctttttt tttttaatct tcgtaacatg tttaaaaaaa    7279
aacagtgatt ttaactgcat atttgaacct acaaactggt aaatcttatt aacaaaaaga    7339
atgtacttaa ggccctcttt atttatagtg tcgagttatt tttgaatttt gcttaaaatc    7399
tatttttcat atgaaaataa aagataacaa tc                                  7431
 
<210>28
<211>2325
<212>PRT
<213>人
 
<400>28
 
Met Lys Lys Gly Ser Gln Gln Lys Ile Phe Ser Lys Ala Lys Ile Pro
1               5                   10                  15
Ser Ser Ser His Ser Pro Ile Pro Ser Ser Met Ser Asn Met Arg Ser
            20                  25                  30
Arg Ser Leu Ser Pro Leu Ile Gly Ser Glu Thr Leu Pro Phe His Ser
        35                  40                  45
Gly Gly Gln Trp Cys Glu Gln Val Glu Ile Ala Asp Glu Asn Asn Met
    50                  55                  60
Leu Leu Asp Tyr Gln Asp His Lys Gly Ala Asp Ser His Ala Gly Val
65                  70                  75                  80
Arg Tyr Ile Thr Glu Ala Leu Ile Lys Lys Leu Thr Lys Gln Asp Asn
                85                  90                  95
Leu Ala Leu Ile Lys Ser Leu Asn Leu Ser Leu Ser Lys Asp Gly Gly
            100                 105                 110
Lys Lys Phe Lys Tyr Ile Glu Asn Leu Glu Lys Cys Val Lys Leu Glu
        115                 120                 125
Val Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Leu Ile Gly Lys Ile Glu Lys Leu Asp
    130                 135                 140
Lys Leu Leu Lys Leu Arg Glu Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Ile Ser
145                 150                 155                 160
Lys Ile Glu Gly Ile Glu Asn Met Cys Asn Leu Gln Lys Leu Asn Leu
                165                 170                 175
Ala Gly Asn Glu Ile Glu His Ile Pro Val Trp Leu Gly Lys Lys Leu
            180                 185                 190
Lys Ser Leu Arg Val Leu Asn Leu Lys Gly Asn Lys Ile Ser Ser Leu
        195                 200                 205
Gln Asp Ile Ser Lys Leu Lys Pro Leu Gln Asp Leu Ile Ser Leu Ile
    210                 215                 220
Leu Val Glu Asn Pro Val Val Thr Leu Pro His Tyr Leu Gln Phe Thr
225                 230                 235                 240
Ile Phe His Leu Arg Ser Leu Glu Ser Leu Glu Gly Gln Pro Val Thr
                245                 250                 255
Thr Gln Asp Arg Gln Glu Ala Phe Glu Arg Phe Ser Leu Glu Glu Val
            260                 265                 270
Glu Arg Leu Glu Arg Asp Leu Glu Lys Lys Met Ile Glu Thr Glu Glu
        275                 280                 285
Leu Lys Ser Lys Gln Thr Arg Phe Leu Glu Glu Ile Lys Asn Gln Asp
    290                 295                 300
Lys Leu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Glu Ala Met Leu Gln Lys Gln Ser
305                 310                 315                 320
Cys Glu Glu Leu Lys Ser Asp Leu Asn Thr Lys Asn Glu Leu Leu Lys
                325                 330                 335
Gln Lys Thr Ile Glu Leu Thr Arg Ala Cys Gln Lys Gln Tyr Glu Leu
            340                 345                 350
Glu Gln Glu Leu Ala Phe Tyr Lys Ile Asp Ala Lys Phe Glu Pro Leu
        355                 360                 365
Asn Tyr Tyr Pro Ser Glu Tyr Ala Glu Ile Asp Lys Ala Pro Asp Glu
    370                 375                 380
Ser Pro Tyr Ile Gly Lys Ser Arg Tyr Lys Arg Asn Met Phe Ala Thr
385                 390                 395                 400
Glu Ser Tyr Ile Ile Asp Ser Ala Gln Ala Val Gln Ile Lys Lys Met
                405                 410                 415
Glu Pro Asp Glu Gln Leu Arg Asn Asp His Met Asn Leu Arg Gly His
            420                 425                 430
Thr Pro Leu Asp Thr Gln Leu Glu Asp Lys Glu Lys Lys Ile Ser Ala
        435                 440                 445
Ala Gln Thr Arg Leu Ser Glu Leu His Asp Glu Ile Glu Lys Ala Glu
    450                 455                 460
Gln Gln Ile Leu Arg Ala Thr Glu Glu Phe Lys Gln Leu Glu Glu Ala
465                 470                 475                 480
Ile Gln Leu Lys Lys Ile Ser Glu Ala Gly Lys Asp Leu Leu Tyr Lys
                485                 490                 495
Gln Leu Ser Gly Arg Leu Gln Leu Val Asn Lys Leu Arg Gln Glu Ala
            500                 505                 510
Leu Asp Leu Glu Leu Gln Met Glu Lys Gln Lys Gln Glu Ile Ala Gly
        515                 520                 525
Lys Gln Lys Glu Ile Lys Asp Leu Gln Ile Ala Ile Asp Ser Leu Asp
    530                 535                 540
Ser Lys Asp Pro Lys His Ser His Met Lys Ala Gln Lys Ser Gly Lys
545                 550                 555                 560
Glu Gln Gln Leu Asp Ile Met Asn Lys Gln Tyr Gln Gln Leu Glu Ser
                565                 570                 575
Arg Leu Asp Glu Ile Leu Ser Arg Ile Ala Lys Glu Thr Glu Glu Ile
            580                 585                 590
Lys Asp Leu Glu Glu Gln Leu Thr Glu Gly Gln Ile Ala Ala Asn Glu
        595                 600                 605
Ala Leu Lys Lys Asp Leu Glu Gly Val Ile Ser Gly Leu Gln Glu Tyr
    610                 615                 620
Leu Gly Thr Ile Lys Gly Gln Ala Thr Gln Ala Gln Asn Glu Cys Arg
625                 630                 635                 640
Lys Leu Arg Asp Glu Lys Glu Thr Leu Leu Gln Arg Leu Thr Glu Val
                645                 650                 655
Glu Gln Glu Arg Asp Gln Leu Glu Ile Val Ala Met Asp Ala Glu Asn
            660                 665                 670
Met Arg Lys Glu Leu Ala Glu Leu Glu Ser Ala Leu Gln Glu Gln His
        675                 680                 685
Glu Val Asn Ala Ser Leu Gln Gln Thr Gln Gly Asp Leu Ser Ala Tyr
    690                 695                 700
Glu Ala Glu Leu Glu Ala Arg Leu Asn Leu Arg Asp Ala Glu Ala Asn
705                 710                 715                 720
Gln Leu Lys Glu Glu Leu Glu Lys Val Thr Arg Leu Thr Gln Leu Glu
                725                 730                 735
Gln Ser Ala Leu Gln Ala Glu Leu Glu Lys Glu Arg Gln Ala Leu Lys
            740                 745                 750
Asn Ala Leu Gly Lys Ala Gln Phe Ser Glu Glu Lys Glu Gln Glu Asn
        755                 760                 765
Ser Glu Leu His Ala Lys Leu Lys His Leu Gln Asp Asp Asn Asn Leu
    770                 775                 780
Leu Lys Gln Gln Leu Lys Asp Phe Gln Asn His Leu Asn His Val Val
785                 790                 795                 800
Asp Gly Leu Val Arg Pro Glu Glu Val Ala Ala Arg Val Asp Glu Leu
805                 810                 815
Arg Arg Lys Leu Lys Leu Gly Thr Gly Glu Met Asn Ile His Ser Pro
            820                 825                 830
Ser Asp Val Leu Gly Lys Ser Leu Ala Asp Leu Gln Lys Gln Phe Ser
        835                 840                 845
Glu Ile Leu Ala Arg Ser Lys Trp Glu Arg Asp Glu Ala Gln Val Arg
    850                 855                 860
Glu Arg Lys Leu Gln Glu Glu Met Ala Leu Gln Gln Glu Lys Leu Ala
865                 870                 875                 880
Thr Gly Gln Glu Glu Phe Arg Gln Ala Cys Glu Arg Ala Leu Glu Ala
                885                 890                 895
Arg Met Asn Phe Asp Lys Arg Gln His Glu Ala Arg Ile Gln Gln Met
            900                 905                 910
Glu Asn Glu Ile His Tyr Leu Gln Glu Asn Leu Lys Ser Met Glu Glu
        915                 920                 925
Ile Gln Gly Leu Thr Asp Leu Gln Leu Gln Glu Ala Asp Glu Glu Lys
    930                 935                 940
Glu Arg Ile Leu Ala Gln Leu Arg Glu Leu Glu Lys Lys Lys Lys Leu
945                 950                 955                 960
Glu Asp Ala Lys Ser Gln Glu Gln Val Phe Gly Leu Asp Lys Glu Leu
                965                 970                 975
Lys Lys Leu Lys Lys Ala Val Ala Thr Ser Asp Lys Leu Ala Thr Ala
            980                 985                 990
Glu Leu Thr Ile Ala Lys Asp Gln Leu Lys Ser Leu His Gly Thr Val
        995                 1000                1005
Met Lys Ile Asn Gln Glu Arg Ala Glu Glu Leu Gln Glu Ala Glu
    1010                1015                1020
Arg Phe Ser Arg Lys Ala Ala Gln Ala Ala Arg Asp Leu Thr Arg
    1025                1030                1035
Ala Glu Ala Glu Ile Glu Leu Leu Gln Asn Leu Leu Arg Gln Lys
    1040                1045                1050
Gly Glu Gln Phe Arg Leu Glu Met Glu Lys Thr Gly Val Gly Thr
    1055                1060                1065
Gly Ala Asn Ser Gln Val Leu Glu Ile Glu Lys Leu Asn Glu Thr
    1070                1075                1080
Met Glu Arg Gln Arg Thr Glu Ile Ala Arg Leu Gln Asn Val Leu
    1085                1090                1095
Asp Leu Thr Gly Ser Asp Asn Lys Gly Gly Phe Glu Asn Val Leu
    1110                1105                1110
Glu Glu Ile Ala Glu Leu Arg Arg Glu Val Ser Tyr Gln Asn Asp
    1115                1120                1125
Tyr Ile Ser Ser Met Ala Asp Pro Phe Lys Arg Arg Gly Tyr Trp
    1130                1135                1140
Tyr Phe Met Pro Pro Pro Pro Ser Ser Lys Val Ser Ser His Ser
    1145                1150                1155
Ser Gln Ala Thr Lys Asp Ser Gly Val Gly Leu Lys Tyr Ser Ala
    1160                1165                1170
Ser Thr Pro Val Arg Lys Pro Arg Pro Gly Gln Gln Asp Gly Lys
    1175                1180                1185
Glu Gly Ser Gln Pro Pro Pro Ala Ser Gly Tyr Trp Val Tyr Ser
    1190                1195                1200
Pro Ile Arg Ser Gly Leu His Lys Leu Phe Pro Ser Arg Asp Ala
    1205                1210                1215
Asp Ser Gly Gly Asp Ser Gln Glu Glu Ser Glu Leu Asp Asp Gln
    1220                1225                1230
Glu Glu Pro Pro Phe Val Pro Pro Pro Gly Tyr Met Met Tyr Thr
    1235                1240                1245
Val Leu Pro Asp Gly Ser Pro Val Pro Gln Gly Met Ala Leu Tyr
    1250                1255                1260
Ala Pro Pro Pro Pro Leu Pro Asn Asn Ser Arg Pro Leu Thr Pro
    1265                1270                1275
Gly Thr Val Val Tyr Gly Pro Pro Pro Ala Gly Ala Pro Met Val
    1280                1285                1290
Tyr Gly Pro Pro Pro Pro Asn Phe Ser Ile Pro Phe Ile Pro Met
    1295                1300                1305
Gly Val Leu His Cys Asn Val Pro Glu His His Asn Leu Glu Asn
    1310                1315                1320
Glu Val Ser Arg Leu Glu Asp Ile Met Gln His Leu Lys Ser Lys
    1325                1330                1335
Lys Arg Glu Glu Arg Trp Met Arg Ala Ser Lys Arg Gln Ser Glu
    1340                1345                1350
Lys Glu Met Glu Glu Leu His His Asn Ile Asp Asp Leu Leu Gln
    1355                1360                1365
Glu Lys Lys Ser Leu Glu Cys Glu Val Glu Glu Leu His Arg Thr
    1370                1375                1380
Val Gln Lys Arg Gln Gln Gln Lys Asp Phe Ile Asp Gly Asn Val
    1385                1390                1395
Glu Ser Leu Met Thr Glu Leu Glu Ile Glu Lys Ser Leu Lys His
    1400                1405                1410
His Glu Asp Ile Val Asp Glu Ile Glu Cys Ile Glu Lys Thr Leu
    1415                1420                1425
Leu Lys Arg Arg Ser Glu Leu Arg Glu Ala Asp Arg Leu Leu Ala
    1430                1435                1440
Glu Ala Glu Ser Glu Leu Ser Cys Thr Lys Glu Lys Thr Lys Asn
    1445                1450                1455
Ala Val Glu Lys Phe Thr Asp Ala Lys Arg Ser Leu Leu Gln Thr
    1460                1465                1470
Glu Ser Asp Ala Glu Glu Leu Glu Arg Arg Ala Gln Glu Thr Ala
    1475                1480                1485
Val Asn Leu Val Lys Ala Asp Gln Gln Leu Arg Ser Leu Gln Ala
    1490                1495                1500
Asp Ala Lys Asp Leu Glu Gln His Lys Ile Lys Gln Glu Glu Ile
    1505                1510                1515
Leu Lys Glu Ile Asn Lys Ile Val Ala Ala Lys Asp Ser Asp Phe
    1520                1525                1530
Gln Cys Leu Ser Lys Lys Lys Glu Lys Leu Thr Glu Glu Leu Gln
    1535                1540                1545
Lys Leu Gln Lys Asp Ile Glu Met Ala Glu Arg Asn Glu Asp His
    1550                1555                1560
His Leu Gln Val Leu Lys Glu Ser Glu Val Leu Leu Gln Ala Lys
    1565                1570                1575
Arg Ala Glu Leu Glu Lys Leu Lys Ser Gln Val Thr Ser Gln Gln
    1580                1585                1590
Gln Glu Met Ala Val Leu Asp Arg Gln Leu Gly His Lys Lys Glu
    1595                1600                1605
Glu Leu His Leu Leu Gln Gly Ser Met Val Gln Ala Lys Ala Asp
    1610                1615                1620
Leu Gln Glu Ala Leu Arg Leu Gly Glu Thr Glu Val Thr Glu Lys
    1625                1630                1635
Cys Asn His Ile Arg Glu Val Lys Ser Leu Leu Glu Glu Leu Ser
    1640                1645                1650
Phe Gln Lys Gly Glu Leu Asn Val Gln Ile Ser Glu Arg Lys Thr
    1655                1660                1665
Gln Leu Thr Leu Ile Lys Gln Glu Ile Glu Lys Glu Glu Glu Asn
    1670                1675                1680
Leu Gln Val Val Leu Arg Gln Met Ser Lys His Lys Thr Glu Leu
    1685                1690                1695
Lys Asn Ile Leu Asp Met Leu Gln Leu Glu Asn His Glu Leu Gln
    1700                1705                1710
Gly Leu Lys Leu Gln His Asp Gln Arg Val Ser Glu Leu Glu Lys
    1715                1720                1725
Thr Gln Val Ala Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Leu Glu Asn Leu
    1730                1735                1740
Gln Gln Ile Ser Gln Gln Gln Lys Gly Glu Ile Glu Trp Gln Lys
    1745                1750                1755
Gln Leu Leu Glu Arg Asp Lys Arg Glu Ile Glu Arg Met Thr Ala
    1760                1765                1770
Glu Ser Arg Ala Leu Gln Ser Cys Val Glu Cys Leu Ser Lys Glu
    1775                1780                1785
Lys Glu Asp Leu Gln Glu Lys Cys Asp Ile Trp Glu Lys Lys Leu
    1790                1795                1800
Ala Gln Thr Lys Arg Val Leu Ala Ala Ala Glu Glu Asn Ser Lys
    1805                1810                1815
Met Glu Gln Ser Asn Leu Glu Lys Leu Glu Leu Asn Val Arg Lys
    1820                1825                1830
Leu Gln Gln Glu Leu Asp Gln Leu Asn Arg Asp Lys Leu Ser Leu
    1835                1840                1845
His Asn Asp Ile Ser Ala Met Gln Gln Gln Leu Gln Glu Lys Arg
    1850                1855                1860
Glu Ala Val Asn Ser Leu Gln Glu Glu Leu Ala Asn Val Gln Asp
    1865                1870                1875
His Leu Asn Leu Ala Lys Gln Asp Leu Leu His Thr Thr Lys His
    1880                1885                1890
Gln Asp Val Leu Leu Ser Glu Gln Thr Arg Leu Gln Lys Asp Ile
    1895                1900                1905
Ser Glu Trp Ala Asn Arg Phe Glu Asp Cys Gln Lys Glu Glu Glu
    1910                1915                1920
Thr Lys Gln Gln Gln Leu Gln Val Leu Gln Asn Glu Ile Glu Glu
    1925                1930                1935
Asn Lys Leu Lys Leu Val Gln Gln Glu Met Met Phe Gln Arg Leu
    1940                1945                1950
Gln Lys Glu Arg Glu Ser Glu Glu Ser Lys Leu Glu Thr Ser Lys
    1955                1960                1965
Val Thr Leu Lys Glu Gln Gln His Gln Leu Glu Lys Glu Leu Thr
    1970                1975                1980
Asp Gln Lys Ser Lys Leu Asp Gln Val Leu Ser Lys Val Leu Ala
    1985                1990                1995
Ala Glu Glu Arg Val Arg Thr Leu Gln Glu Glu Glu Arg Trp Cys
    2000                2005                2010
Glu Ser Leu Glu Lys Thr Leu Ser Gln Thr Lys Arg Gln Leu Ser
    2015                2020                2025
Glu Arg Glu Gln Gln Leu Val Glu Lys Ser Gly Glu Leu Leu Ala
    2030                2035                2040
Leu Gln Lys Glu Ala Asp Ser Met Arg Ala Asp Phe Ser Leu Leu
    2045                2050                2055
Arg Asn Gln Phe Leu Thr Glu Arg Lys Lys Ala Glu Lys Gln Val
    2060                2065                2070
Ala Ser Leu Lys Glu Ala Leu Lys Ile Gln Arg Ser Gln Leu Glu
    2075                2080                2085
Lys Asn Leu Leu Glu Gln Lys Gln Glu Asn Ser Cys Ile Gln Lys
    2090                2095                2100
Glu Met Ala Thr Ile Glu Leu Val Ala Gln Asp Asn His Glu Arg
    2105                2110                2115
Ala Arg Arg Leu Met Lys Glu Leu Asn Gln Met Gln Tyr Glu Tyr
    2120                2125                2130
Thr Glu Leu Lys Lys Gln Met Ala Asn Gln Lys Asp Leu Glu Arg
    2135                2140                2145
Arg Gln Met Glu Ile Ser Asp Ala Met Arg Thr Leu Lys Ser Glu
    2150                2155                2160
Val Lys Asp Glu Ile Arg Thr Ser Leu Lys Asn Leu Asn Gln Phe
    2165                2170                2175
Leu Pro Glu Leu Pro Ala Asp Leu Glu Ala Ile Leu Glu Arg Asn
    2180                2185                2190
Glu Asn Leu Glu Gly Glu Leu Glu Ser Leu Lys Glu Asn Leu Pro
    2195                2200                2205
Phe Thr Met Asn Glu Gly Pro Phe Glu Glu Lys Leu Asn Phe Ser
    2210                2215                2220
Gln Val His Ile Met Asp Glu His Trp Arg Gly Glu Ala Leu Arg
    2225                2230                2235
Glu Lys Leu Arg His Arg Glu Asp Arg Leu Lys Ala Gln Leu Arg
    2240                2245                2250
His Cys Met Ser Lys Gln Ala Glu Val Leu Ile Lys Gly Lys Arg
    2255                2260                2265
Gln Thr Glu Gly Thr Leu His Ser Leu Arg Arg Gln Val Asp Ala
    2270                2275                2280
Leu Gly Glu Leu Val Thr Ser Thr Ser Ala Asp Ser Ala Ser Ser
    2285                2290                2295
Pro Ser Leu Ser Gln Leu Glu Ser Ser Leu Thr Glu Asp Ser Gln
    2300                2305                2310
Leu Gly Gln Asn Gln Glu Lys Asn Ala Ser Ala Arg
    2315                2320                2325
 
<210>29
<211>18
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>29
gcagcaaaag actcagac    18
 
<210>30
<211>18
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>30
aagttgcaac atgtccag    18
 
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<211>28
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>31
catatggagc aagaggaaat cttgaaag    28
 
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<211>21
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>32
ggtaccgggt cggtgcgcgt c    21
 
<210>33
<211>24
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
<400>33
ggatccatca agcaagaaga aatc    24
 
<210>34
<211>25
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>34
gtcgactcat ctggctgagg cattc    25
 
<210>35
<211>826
<212>PRT
<213>家犬
 
<400>35
 
Met Glu Gln Glu Glu Ile Leu Lys Glu Ile Asn Lys Val Val Ala Ala
1               5                   10                  15
Lys Asp Ser Asp Phe Gln Ser Leu Asn Lys Lys Lys Glu Val Leu Thr
            20                  25                  30
Gly Glu Leu Gln Lys Leu Gln Lys Asp Ile Glu Thr Ala Arg His Asn
        35                  40                  45
Glu Asp Gln His Leu Gln Val Leu Lys Glu Ser Glu Thr Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Ala Lys Lys Ala Glu Leu Glu Asn Leu Lys Ser Gln Val Ser Gly Gln
65                  70                  75                  80
Gln Gln Glu Met Ala Val Leu Asp Arg Glu Leu Gly His Lys Lys Glu
                85                  90                  95
Glu Leu His Leu Leu Gln Glu Ser Met Val Gln Ala Lys Ala Asp Leu
            100                 105                 110
Gln Glu Ala Leu Arg Leu Gly Glu Ser Glu Val Thr Glu Lys Cys Asn
        115                 120                 125
His Ile Arg Glu Val Lys Ser Leu Leu Glu Glu Leu Ser Phe Gln Lys
    130                 135                 140
Gly Glu Leu Asn Val Gln Ile Ser Glu Lys Lys Thr Gln Leu Ala Leu
145                 150                 155                 160
Ile Lys Gln Glu Ile Glu Lys Glu Glu Asp Asn Leu Gln Val Val Leu
                165                 170                 175
Gly Gln Met Ser Lys His Lys Thr Glu Leu Lys Asn Ile Leu Asp Met
            180                 185                 190
Leu Gln Leu Glu Asn Asn Glu Leu Gln Gly Leu Lys Leu Gln His Asp
        195                 200                 205
Gln Lys Met Ser Glu Leu Glu Lys Thr Arg Val Glu Val Leu Glu Glu
     210                 215                 220
Lys Leu Glu Leu Glu Ser Leu Gln Gln Ala Ala Leu Arg Gln Arg Gly
225                 230                 235                 240
Glu Ile Glu Trp Gln Lys Gln Leu Leu Gln Arg Asn Thr Gln Glu Val
                245                 250                 255
Glu Arg Met Thr Ala Glu Thr Arg Ala Leu Gln Ser Cys Val Glu Ser
            260                 265                 270
Leu Cys Lys Glu Lys Gln Asp Leu Glu Glu Lys Gln Asp Ser Trp Glu
        275                 280                 285
Lys Lys Leu Ala Gln Thr Lys Arg Val Leu Ala Ala Ala Glu Glu Asp
    290                 295                 300
Ser Glu Met Glu Arg Ala Arg Leu Glu Lys Leu Glu Leu Asp Ala Arg
305                 310                 315                 320
Lys Leu Gln Gln Glu Leu Asp Gln Arg Asn Arg Glu Lys Leu Ser Leu
                325                 330                 335
His Gln Asp Leu Ala Val Val Gln Gln Gln Leu Gln Glu Lys Gln Glu
            340                 345                 350
Ala Val Asn Ser Leu Gln Lys Glu Leu Thr Asp Val Gln Glu His Leu
        355                 360                 365
Asp Leu Ala Glu Gln Glu Val Leu Cys Thr Thr Lys Arg Lys Asp Ala
    370                 375                 380
Leu Leu Ser Glu Gln Thr Arg Leu Glu Lys Asp Val Gly Glu Trp Thr
385                 390                 395                 400
Lys Lys Phe Glu Asp Cys Gln Lys Glu Gly Glu Thr Lys Gln Gln Gln
                405                 410                 415
Leu Gln Gly Leu Gln Lys Glu Ile Glu Gly Asn Glu Ala Lys Leu Ala
            420                 425                 430
Gln Gln Glu Met Met Phe Gln Arg Leu Gln Lys Glu Arg Glu Cys Glu
        435                 440                 445
Glu Lys Lys Leu Glu Ala Ser Lys Val Thr Leu Lys Glu Gln Gln Gln
    450                 455                 460
Gln Leu Glu Lys Glu Leu Met Glu Gln Lys Gly Lys Leu Asp Gln Val
465                 470                 475                 480
Leu Ala Lys Leu Leu Val Ala Glu Glu Arg Val Arg Thr Leu Gln Glu
                485                 490                 495
Glu Gly Arg Trp Ser Glu Thr Leu Glu Lys Thr Leu Ser Gln Thr Lys
            500                 505                 510
Arg Gln Leu Ser Glu Arg Glu Gln Gln Leu Leu Ala Lys Ser Asp Glu
        515                 520                 525
Leu Leu Ala Leu Gln Lys Glu Thr Asp Ser Met Arg Ala Asp Phe Ser
    530                 535                 540
Leu Leu Arg Asn Gln Phe Leu Thr Glu Arg Lys Lys Ala Glu Lys Gln
545                 550                 555                 560
Val Ala Ser Leu Lys Glu Ala Leu Lys Ile Gln Arg Ser Gln Leu Glu
                565                 570                 575
Lys Asn Leu Leu Glu Gln Lys Gln Glu Asn Ser Cys Met Gln Arg Glu
            580                 585                 590
Met Ala Thr Ile Glu Gln Val Ala Gln Asp Asn His Glu Arg Ala Arg
        595                 600                 605
Arg Leu Met Arg Glu Leu Asn Gln Met Gln Arg Glu Tyr Val Glu Leu
    610                 615                 620
Arg Lys Gln Met Thr Asn Gln Lys Asp Leu Glu Arg Arg Gln Met Glu
625                 630                 635                 640
Ile Ser Asp Ala Met Gln Ala Leu Lys Cys Glu Val Lys Asp Glu Ile
                645                 650                 655
Arg Thr Ser Leu Lys Asn Leu Asn Gln Phe Leu Pro Glu Leu Pro Ala
            660                 665                 670
Asp Leu Glu Ala Leu Leu Glu Arg Asn Glu Asn Leu Gly Gly Gly Leu
        675                 680                 685
Glu Ser Leu Lys Glu Asn Phe Pro Phe Thr Val Ser Asp Arg Pro Ser
    690                 695                 700
Ser Cys Glu Glu Lys Leu Asn Phe Gly Gln Ala His Val Ala Asp Glu
705                 710                 715                 720
Gln Trp Arg Gly Glu Ala Leu Arg Glu Lys Leu Arg His Arg Glu Asp
                725                 730                 735
Arg Leu Lys Ala Gln Leu Arg Arg Cys Met Ser Lys Gln Ala Glu Val
            740                 745                 750
Leu Ser Glu Gly Arg Arg Arg Thr Glu Gly Thr Leu His Ser Leu Arg
        755                 760                 765
Arg Gln Val Asp Ala Leu Gly Glu Leu Val Thr Ser Thr Ser Gly Asp
    770                 775                 780
Ser Ala Ser Thr Arg Ser Leu Ser Arg Thr Glu Gly Ser Leu Ala Glu
785                 790                 795                 800
Asp Glu Pro Pro Gly Pro Ser Gln Ser Ser Arg Arg Leu Pro Arg Gly
                805                 810                 815
Pro Ser Pro Arg Leu Asp Ala His Arg Pro
         820                 825
 
<210>36
<211>813
<212>PRT
<213>人
 
<400>36
 
Ile Lys Gln Glu Glu Ile Leu Lys Glu Ile Asn Lys Ile Val Ala Ala
1               5                   10                  15
Lys Asp Ser Asp Phe Gln Cys Leu Ser Lys Lys Lys Glu Lys Leu Thr
            20                  25                  30
Glu Glu Leu Gln Lys Leu Gln Lys Asp Ile Glu Met Ala Glu Arg Asn
        35                  40                  45
Glu Asp His His Leu Gln Val Leu Lys Glu Ser Glu Val Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Ala Lys Arg Ala Glu Leu Glu Lys Leu Lys Ser Gln Val Thr Ser Gln
65                  70                  75                  80
Gln Gln Glu Met Ala Val Leu Asp Arg Gln Leu Gly His Lys Lys Glu
                85                  90                  95
Glu Leu His Leu Leu Gln Gly Ser Met Val Gln Ala Lys Ala Asp Leu
            100                 105                 110
Gln Glu Ala Leu Arg Leu Gly Glu Thr Glu Val Thr Glu Lys Cys Asn
        115                 120                 125
His Ile Arg Glu Val Lys Ser Leu Leu Glu Glu Leu Ser Phe Gln Lys
    130                 135                 140
Gly Glu Leu Asn Val Gln Ile Ser Glu Arg Lys Thr Gln Leu Thr Leu
145                 150                 155                 160
Ile Lys Gln Glu Ile Glu Lys Glu Glu Glu Asn Leu Gln Val Val Leu
                165                 170                 175
Arg Gln Met Ser Lys His Lys Thr Glu Leu Lys Asn Ile Leu Asp Met
            180                 185                 190
Leu Gln Leu Glu Asn His Glu Leu Gln Gly Leu Lys Leu Gln His Asp
        195                 200                 205
Gln Arg Val Ser Glu Leu Glu Lys Thr Gln Val Ala Val Leu Glu Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Glu Leu Glu Asn Leu Gln Gln Ile Ser Gln Gln Gln Lys Gly
225                 230                 235                 240
Glu Ile Glu Trp Gln Lys Gln Leu Leu Glu Arg Asp Lys Arg Glu Ile
                245                 250                 255
Glu Arg Met Thr Ala Glu Ser Arg Ala Leu Gln Ser Cys Val Glu Cys
            260                 265                 270
Leu Ser Lys Glu Lys Glu Asp Leu Gln Glu Lys Cys Asp Ile Trp Glu
        275                 280                 285
Lys Lys Leu Ala Gln Thr Lys Arg Val Leu Ala Ala Ala Glu Glu Asn
    290                 295                 300
Ser Lys Met Glu Gln Ser Asn Leu Glu Lys Leu Glu Leu Asn Val Arg
305                 310                 315                 320
Lys Leu Gln Gln Glu Leu Asp Gln Leu Asn Arg Asp Lys Leu Ser Leu
                325                 330                 335
His Asn Asp Ile Ser Ala Met Gln Gln Gln Leu Gln Glu Lys Arg Glu
            340                 345                 350
Ala Val Asn Ser Leu Gln Glu Glu Leu Ala Asn Val Gln Asp His Leu
        355                 360                 365
Asn Leu Ala Lys Gln Asp Leu Leu His Thr Thr Lys His Gln Asp Val
    370                 375                 380
Leu Leu Ser Glu Gln Thr Arg Leu Gln Lys Asp Ile Ser Glu Trp Ala
385                 390                 395                 400
Asn Arg Phe Glu Asp Cys Gln Lys Glu Glu Glu Thr Lys Gln Gln Gln
                405                 410                 415
Leu Gln Val Leu Gln Asn Glu Ile Glu Glu Asn Lys Leu Lys Leu Val
            420                 425                 430
Gln Gln Glu Met Met Phe Gln Arg Leu Gln Lys Glu Arg Glu Ser Glu
        435                 440                 445
Glu Ser Lys Leu Glu Thr Ser Lys Val Thr Leu Lys Glu Gln Gln His
    450                 455                 460
Gln Leu Glu Lys Glu Leu Thr Asp Gln Lys Ser Lys Leu Asp Gln Val
465                 470                 475                 480
Leu Ser Lys Val Leu Ala Ala Glu Glu Arg Val Arg Thr Leu Gln Glu
                485                 490                 495
Glu Glu Arg Trp Cys Glu Ser Leu Glu Lys Thr Leu Ser Gln Thr Lys
            500                 505                 510
Arg Gln Leu Ser Glu Arg Glu Gln Gln Leu Val Glu Lys Ser Gly Glu
        515                 520                 525
Leu Leu Ala Leu Gln Lys Glu Ala Asp Ser Met Arg Ala Asp Phe Ser
    530                 535                 540
Leu Leu Arg Asn Gln Phe Leu Thr Glu Arg Lys Lys Ala Glu Lys Gln
545                 550                 555                 560
Val Ala Ser Leu Lys Glu Ala Leu Lys Ile Gln Arg Ser Gln Leu Glu
                565                 570                 575
Lys Asn Leu Leu Glu Gln Lys Gln Glu Asn Ser Cys Ile Gln Lys Glu
            580                 585                 590
Met Ala Thr Ile Glu Leu Val Ala Gln Asp Asn His Glu Arg Ala Arg
        595                 600                 605
Arg Leu Met Lys Glu Leu Asn Gln Met Gln Tyr Glu Tyr Thr Glu Leu
    610                 615                 620
Lys Lys Gln Met Ala Asn Gln Lys Asp Leu Glu Arg Arg Gln Met Glu
625                 630                 635                 640
Ile Ser Asp Ala Met Arg Thr Leu Lys Ser Glu Val Lys Asp Glu Ile
                645                 650                 655
Arg Thr Ser Leu Lys Asn Leu Asn Gln Phe Leu Pro Glu Leu Pro Ala
            660                 665                 670
Asp Leu Glu Ala Ile Leu Glu Arg Asn Glu Asn Leu Glu Gly Glu Leu
        675                 680                 685
Glu Ser Leu Lys Glu Asn Leu Pro Phe Thr Met Asn Glu Gly Pro Phe
    690                 695                 700
Glu Glu Lys Leu Asn Phe Ser Gln Val His Ile Met Asp Glu His Trp
705                 710                 715                 720
Arg Gly Glu Ala Leu Arg Glu Lys Leu Arg His Arg Glu Asp Arg Leu
                725                 730                 735
Lys Ala Gln Leu Arg His Cys Met Ser Lys Gln Ala Glu Val Leu Ile
            740                 745                 750
Lys Gly Lys Arg Gln Thr Glu Gly Thr Leu His Ser Leu Arg Arg Gln
        755                 760                 765
Val Asp Ala Leu Gly Glu Leu Val Thr Ser Thr Ser Ala Asp Ser Ala
    770                 775                 780
Ser Ser Pro Ser Leu Ser Gln Leu Glu Ser Ser Leu Thr Glu Asp Ser
785                 790                 795                 800
Gln Leu Gly Gln Asn Gln Glu Lys Asn Ala Ser Ala Arg
                805                 810
<210>37
<211>24
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>37
ggatccatga agaaaggttc tcag    24
 
<210>38
<211>24
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>38
gtcgactcag ggtcggtgcg cgtc    24
 
<210>39
<211>25
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
 
<400>39
ggatccatga agaaaggttc tcaac    25
 
<210>40
<211>25
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>40
gtcgactcat ctggctgagg cattc    25
 
<210>41
<211>7770
<212>DNA
<213>家犬
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(7770)
<223>
 
<400>41
atg aag aaa ggt tct cag caa aag ttt ttg aaa gca aag atg cca cca    48
Met Lys Lys Gly Ser Gln Gln Lys Phe Leu Lys Ala Lys Met Pro Pro
1               5                   10                  15
tca tct cac tct cct agt cca cca tcc ctt acg tcc aat atg aga tct    96
Ser Ser His Ser Pro Ser Pro Pro Ser Leu Thr Ser Asn Met Arg Ser
            20                  25                  30
agg tca ctt tcg cct cta agt gga tct gag act ctg cct ttt cat ttt    144
Arg Ser Leu Ser Pro Leu Ser Gly Ser Glu Thr Leu Pro Phe His Phe
        35                  40                  45
gga gga ccg tgg cat gag caa gtt gag att aca gat gaa agc aca gtg    192
Gly Gly Pro Trp His Glu Gln Val Glu Ile Thr Asp Glu Ser Thr Val
    50                  55                  60
gtt tta gac tac caa gac cat aaa gaa gct gat tca cat gca gga gtc    240
Val Leu Asp Tyr Gln Asp His Lys Glu Ala Asp Ser His Ala Gly Val
65                  70                  75                  80
cga tat att aca gag gcc ctt gtt aga aaa ctt act aaa cag gac aat    288
Arg Tyr Ile Thr Glu Ala Leu Val Arg Lys Leu Thr Lys Gln Asp Asn
                85                  90                  95
ttg gcc ttg gta aaa tct ctg aac ctt tca ctt gct aaa ggt ggt ggc    336
Leu Ala Leu Val Lys Ser Leu Asn Leu Ser Leu Ala Lys Gly Gly Gly
            100                 105                 110
aag aaa ttc agg tgt atc gaa aat ttg gaa aaa tgt gtt aaa ctt gaa    384
Lys Lys Phe Arg Cys Ile Glu Asn Leu Glu Lys Cys Val Lys Leu Glu
        115                  120                  125
gta ctg aat ctc agc tat aat cta ata gga aag att gag aaa gtg gac    432
Val Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Leu Ile Gly Lys Ile Glu Lys Val Asp
    130                 135                 140
aaa ctg tta aaa tta cgt gaa ctc aac tta tcg tat aac aaa atc cgc    480
Lys Leu Leu Lys Leu Arg Glu Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Ile Arg
145                 150                 155                 160
aaa att gaa ggc ata gaa aat tta tat aat ctg caa aag ctg aac ctt    528
Lys Ile Glu Gly Ile Glu Asn Leu Tyr Asn Leu Gln Lys Leu Asn Leu
                165                 170                 175
gca gga aat gaa atc gaa cat atc cca gta tgg tta ggg aag aag tta    576
Ala Gly Asn Glu Ile Glu His Ile Pro Val Trp Leu Gly Lys Lys Leu
            180                 185                 190
aaa tct ttg cga atc ctg aat ctg aaa ggc aac aag ata tca tcg ctc    624
Lys Ser Leu Arg Ile Leu Asn Leu Lys Gly Asn Lys Ile Ser Ser Leu
        195                 200                 205
caa gat gta agc aag ttg aaa cca ctt caa gat ttg act tct ctg atc    672
Gln Asp Val Ser Lys Leu Lys Pro Leu Gln Asp Leu Thr Ser Leu Ile
    210                 215                 220
cta ctt gaa aat cca gtt gcg acc ctt cct cat tat atc cag ttt acc    720
Leu Leu Glu Asn Pro Val Ala Thr Leu Pro His Tyr Ile Gln Phe Thr
225                 230                 235                 240
att ttt cac ctt cgc tca ttg gaa agt ttg gaa ggt cag cca gta act    768
Ile Phe His Leu Arg Ser Leu Glu Ser Leu Glu Gly Gln Pro Val Thr
                245                 250                 255
agt cag gac aga caa gaa gct ttt gcg aga ttc agt tta gat gag gta    816
Ser Gln Asp Arg Gln Glu Ala Phe Ala Arg Phe Ser Leu Asp Glu Val
            260                 265                 270
gaa aga ctg gaa aga gac ctg gag aag aag aca atg gaa act gaa gag    864
Glu Arg Leu Glu Arg Asp Leu Glu Lys Lys Thr Met Glu Thr Glu Glu
        275                 280                 285
ctt agg agt gag cag aca agg ttc ctt gag gaa att aaa agt cag gat    912
Leu Arg Ser Glu Gln Thr Arg Phe Leu Glu Glu Ile Lys Ser Gln Asp
    290                 295                 300
aaa ttg aac aaa tca ctg aaa gag gag gcc aga cta caa aaa cag agc    960
Lys Leu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Glu Ala Arg Leu Gln Lys Gln Ser
305                 310                 315                 320
tat gag gag ctg gag agt aac cta aac acc aaa aat gaa ttg cta aaa    1008
Tyr Glu Glu Leu Glu Ser Asn Leu Asn Thr Lys Asn Glu Leu Leu Lys
                325                 330                 335
cag aag acc atg gaa cta atg cga gca tgt cag aaa cag tat gag atg    1056
Gln Lys Thr Met Glu Leu Met Arg Ala Cys Gln Lys Gln Tyr Glu Met
            340                 345                 350
gaa cag gag ttg gcc ttt tat aaa att gat gcc aaa ttt gaa cca cta    1104
Glu Gln Glu Leu Ala Phe Tyr Lys Ile Asp Ala Lys Phe Glu Pro Leu
        355                 360                 365
aat tat tac cca tca gag tat gtc gaa att gat aaa acc cca gat gaa    1152
Asn Tyr Tyr Pro Ser Glu Tyr Val Glu Ile Asp Lys Thr Pro Asp Glu
    370                 375                 380
agc cct tac att ggc aaa tcc aga tac aag aga aat atg ttc act aca    1200
Ser Pro Tyr Ile Gly Lys Ser Arg Tyr Lys Arg Asn Met Phe Thr Thr
385                 390                 395                 400
gag agt tat att att gca aat gcc cag aca gta aag atc aag aag atg    1248
Glu Ser Tyr Ile Ile Ala Asn Ala Gln Thr Val Lys Ile Lys Lys Met
                405                 410                 415
gag cta gat gaa ggg gaa caa ctc aga aat gag cac gtg aac ttg gga    1296
Glu Leu Asp Glu Gly Glu Gln Leu Arg Asn Glu His Val Asn Leu Gly
            420                 425                 430
gca tcg cca aca gac ata caa ctg gaa gac aaa gaa aaa aaa ata agt    1344
Ala Ser Pro Thr Asp Ile Gln Leu Glu Asp Lys Glu Lys Lys Ile Ser
        435                 440                 445
gca gca caa act cga cta tca gaa cta cat gat gaa ata gaa aag gca    1392
Ala Ala Gln Thr Arg Leu Ser Glu Leu His Asp Glu Ile Glu Lys Ala
    450                 455                 460
gaa caa caa att tta aga gcc act gaa gaa ttt aaa caa ctg gaa gaa    1440
Glu Gln Gln Ile Leu Arg Ala Thr Glu Glu Phe Lys Gln Leu Glu Glu
465                 470                 475                 480
gct ata caa ctt aaa aaa att tca gaa gcg gag aaa gac ctt ctt ttc    1488
Ala Ile Gln Leu Lys Lys Ile Ser Glu Ala Glu Lys Asp Leu Leu Phe
                485                 490                 495
aag cag ttg agt ggt agg ata cag ctt ctc aat aaa tta cgc caa gaa    1536
Lys Gln Leu Ser Gly Arg Ile Gln Leu Leu Asn Lys Leu Arg Gln Glu
            500                 505                 510
gct gtg gat cta gaa aca cag atg gaa aag caa agg caa gaa att ggt    1584
Ala Val Asp Leu Glu Thr Gln Met Glu Lys Gln Arg Gln Glu Ile Gly
        515                 520                 525
gaa aag cag aat gag atc aag gac ctg gaa ata gtc aca gat agc ctg    1632
Glu Lys Gln Asn Glu Ile Lys Asp Leu Glu Ile Val Thr Asp Ser Leu
    530                 535                 540
gat tcc aga gac cca aaa cat tgc  cat atg aag gct cag aaa aga ggt   1680
Asp Ser Arg Asp Pro Lys Hi s Cys His Met Lys Ala Gln Lys Arg Gly
545                 550                 555                 560
aaa gaa caa caa ctt gac att atg aac aag cag tac aaa cag ctt gaa    1728
Lys Glu Gln Gln Leu Asp Ile Met Asn Lys Gln Tyr Lys Gln Leu Glu
                565                 570                 575
agc cgt ttg gat gag ata ctt tct aga att gcc aaa gaa act gaa gag    1776
Ser Arg Leu Asp Glu Ile Leu Ser Arg Ile Ala Lys Glu Thr Glu Glu
            580                 585                 590
att aag gac ctt gaa gaa cag ctt act gaa gga caa ata gcc gca aac    1824
Ile Lys Asp Leu Glu Glu Gln Leu Thr Glu Gly Gln Ile Ala Ala Asn
        595                 600                 605
gaa gcc ctg aag aag gac tta gaa agt gtc atc agt ggg ttg caa gaa    1872
Glu Ala Leu Lys Lys Asp Leu Glu Ser Val Ile Ser Gly Leu Gln Glu
    610                 615                 620
tac ctg gag act gtc aaa ggt cag gcc cgt cag gcc cag aat gag tgc    1920
Tyr Leu Glu Thr Val Lys Gly Gln Ala Arg Gln Ala Gln Asn Glu Cys
625                 630                 635                 640
aga aag cta cag gat gag aag gag aca ttg ctg cag aga ttg agt gag    1968
Arg Lys Leu Gln Asp Glu Lys Glu Thr Leu Leu Gln Arg Leu Ser Glu
                645                 650                 655
gtc gag cag gag agg gac caa ctg gaa ata gtg gcc ata gat gca gaa    2016
Val Glu Gln Glu Arg Asp Gln Leu Glu Ile Val Ala Ile Asp Ala Glu
            660                 665                 670
aat atg agg aag gag ctc gca gaa ctg gag aat gcc ctc cag gag cag    2064
Asn Met Arg Lys Glu Leu Ala Glu Leu Glu Asn Ala Leu Gln Glu Gln
        675                 680                 685
cat gag gtg aat ata tct ctg cag cag acc cag gga gat ctc agt gcc    2112
His Glu Val Asn Ile Ser Leu Gln Gln Thr Gln Gly Asp Leu Ser Ala
    690                 695                 700
tat gag gct gag cta gag gct cag ctg aaa ata cgg gat gct gaa gcc    2160
Tyr Glu Ala Glu Leu Glu Ala Gln Leu Lys Ile Arg Asp Ala Glu Ala
705                 710                 715                 720
aac cag ctc aag gag gag ttg gaa aaa ctt aga agg ttg agc cag tta    2208
Asn Gln Leu Lys Glu Glu Leu Glu Lys Leu Arg Arg Leu Ser Gln Leu
                725                 730                 735
gaa caa tcg gcc ctt caa gca gag ctt gag aag gaa aag caa gcc ttc     2256
Glu Gln Ser Ala Leu Gln Ala Glu Leu Glu Lys Glu Lys Gln Ala Phe
            740                 745                 750
aag act gct gtc aaa aaa gcc cag ctc tca gaa gga aag gac caa gaa     2304
Lys Thr Ala Val Lys Lys Ala Gln Leu Ser Glu Gly Lys Asp Gln Glu
        755                 760                 765
aat agt gag ctc cgc aca caa ctc caa cag ctg cag gat gac aat gac     2352
Asn Ser Glu Leu Arg Thr Gln Leu Gln Gln Leu Gln Asp Asp Asn Asp
    770                 775                 780
cta ttg aaa cag caa ctt aaa gat ttc cag agt cac ctt aac cat gtg     2400
Leu Leu Lys Gln Gln Leu Lys Asp Phe Gln Ser His Leu Asn His Val
785                 790                 795                 800
gtt gat ggt ttg att cgt cca gaa gaa gtg gca gct tgt gtg gat gag     2448
Val Asp Gly Leu Ile Arg Pro Glu Glu Val Ala Ala Cys Val Asp Glu
                805                 810                 815
cta agg aaa aaa ctg aag tca gga gct ggg gaa atg aga atc cat act     2496
Leu Arg Lys Lys Leu Lys Ser Gly Ala Gly Glu Met Arg Ile His Thr
            820                 825                 830
cct tca gat gtc tta ggg aaa agt ctt gct gac ttg cag aag caa ttc     2544
Pro Ser Asp Val Leu Gly Lys Ser Leu Ala Asp Leu Gln Lys Gln Phe
        835                 840                 845
agt gag atc ctg gca cgc tcc cag tgg gaa aga cag gaa gca caa gtg     2592
Ser Glu Ile Leu Ala Arg Ser Gln Trp Glu Arg Gln Glu Ala Gln Val
    850                 855                 860
aga gag aga aaa ctc cag gag gaa atg gct ctg caa caa gag aaa ctg     2640
Arg Glu Arg Lys Leu Gln Glu Glu Met Ala Leu Gln Gln Glu Lys Leu
865                 870                 875                 880
gcg agc gga caa gag gag ttc agg cac gcc tgc gag agg gcc ctg gaa     2688
Ala Ser Gly Gln Glu Glu Phe Arg His Ala Cys Glu Arg Ala Leu Glu
                885                 890                 895
gcc cga att agt ttt gat aag agg cag cac gaa gca aga atc cag cag     2736
Ala Arg Ile Ser Phe Asp Lys Arg Gln His Glu Ala Arg Ile Gln Gln
            900                 905                 910
ttg gag aat gaa att cac tat ttg caa gaa aat cta aaa agt atg gag     2784
Leu Glu Asn Glu Ile His Tyr Leu Gln Glu Asn Leu Lys Ser Met Glu
        915                 920                 925
gaa atc caa ggt ctc aca gac ctc caa ctt cag gaa gct gat gaa gag     2832
Glu Ile Gln Gly Leu Thr Asp Leu Gln Leu Gln Glu Ala Asp Glu Glu
    930                 935                 940
aag gag aga att ctg gcc caa ctc cgg gag tta gag aaa aag aag aaa     2880
Lys Glu Arg Ile Leu Ala Gln Leu Arg Glu Leu Glu Lys Lys Lys Lys
945                 950                 955                 960
ctt gag gat gcc aag tct cag gag cag ttt ctt gga tta gat aga gaa     2928
Leu Glu Asp Ala Lys Ser Gln Glu Gln Phe Leu Gly Leu Asp Arg Glu
                965                 970                 975
ttg aag aag cta aag aaa gct gtg gct gcc tct gat aag ctg gcc aca     2976
Leu Lys Lys Leu Lys Lys Ala Val Ala Ala Ser Asp Lys Leu Ala Thr
             980                 985                 990
gct gag ctc acc att gcc aaa gac cag ctc aag tcc ctt cat gga act     3024
Ala Glu Leu Thr Ile Ala Lys Asp Gln Leu Lys Ser Leu His Gly Thr
        995                 1000                1005
gtg atg aaa att aac cag gag cga gca gag gag ctg cag gag acg         3069
Val Met Lys Ile Asn Gln Glu Arg Ala Glu Glu Leu Gln Glu Thr
    1010                1015                1020
gag agg ttc agc aga aag gca gca caa gca gct agg gat ctg atc         3114
Glu Arg Phe Ser Arg Lys Ala Ala Gln Ala Ala Arg Asp Leu Ile
    1025                1030                1035
cga gca gaa gcg gag att gaa ctc ctg cag aag ctt ctc aga gat    3159
Arg Ala Glu Ala Glu Ile Glu Leu Leu Gln Lys Leu Leu Arg Asp
    1040                1045                1050
aaa gag gag cag ttt cga aat gag att gag aaa gta gat gtc ggc    3204
Lys Glu Glu Gln Phe Arg Asn Glu Ile Glu Lys Val Asp Val Gly
    1055                1060                1065
tct gga gga gca aag tca cag atg ctg gag atg gag aaa cta aat    3249
Ser Gly Gly Ala Lys Ser Gln Met Leu Glu Met Glu Lys Leu Asn
    1070                1075                1080
gag aca atg gag agg caa aga aca gag att gct agg ctg agg aat    3294
Glu Thr Met Glu Arg Gln Arg Thr Glu Ile Ala Arg Leu Arg Asn
    1085                1090                1095
tta cta gac ctc acc ggg gct gat aac aaa gga aac ttt gaa aat    3339
Leu Leu Asp Leu Thr Gly Ala Asp Asn Lys Gly Asn Phe Glu Asn
    1100                1105                1110
gtt ttg gaa gaa att gct gaa ctt cga cgt gaa gtt tct cat cag    3384
Val Leu Glu Glu Ile Ala Glu Leu Arg Arg Glu Val Ser His Gln
    1115                1120                1125
aat gat tac atc agc agc atg aca gat cct ttc aaa aga cga ggc    3429
Asn Asp Tyr Ile Ser Ser Met Thr Asp Pro Phe Lys Arg Arg Gly
    1130                1135                1140
tat tgg tac ttt atg cca cca cca tca tca tca aaa gtt tcc agc    3474
Tyr Trp Tyr Phe Met Pro Pro Pro Ser Ser Ser Lys Val Ser Ser
    1145                1150                1155
cac agt tcc cag gcc acc aag gac tct ggt gtt ggc cta aag tac    3519
His Ser Ser Gln Ala Thr Lys Asp Ser Gly Val Gly Leu Lys Tyr
    1160                1165                1170
aca gcc tcc act ccg gtt aga aaa cca cat cgt gga cgg cag gat    3564
Thr Ala Ser Thr Pro Val Arg Lys Pro His Arg Gly Arg Gln Asp
    1175                1180                1185
gga aag gag aac agt ggg cct cca cct gcc tca gga tac tgg gtg    3609
Gly Lys Glu Asn Ser Gly Pro Pro Pro Ala Ser Gly Tyr Trp Val
    1190                1195                1200
tat tct cct atc agg agt ggg tta cat aaa tcg ttc tca aat aga    3654
Tyr Ser Pro Ile Arg Ser Gly Leu His Lys Ser Phe Ser Asn Arg
    1205                1210                1215
gac gca gac agt gga gga gat agc cag gaa gag agc gag cta gat    3699
Asp Ala Asp Ser Gly Gly Asp Ser Gln Glu Glu Ser Glu Leu Asp
    1220                1225                1230
gac caa gaa gac cac cca ttt gta cct cct cct gga tac atg atg    3744
Asp Gln Glu Asp His Pro Phe Val Pro Pro Pro Gly Tyr Met Met
    1235                1240                1245
tac act gtg ttt cct gat ggt tct cct gta ccc cag ggc atg gcc    3789
Tyr Thr Val Phe Pro Asp Gly Ser Pro Val Pro Gln Gly Met Ala
    1250                1255                1260
ctg tat gca ccc cct cct ccc ttg ccc aac aat agc cag cct ctt    3834
Leu Tyr Ala Pro Pro Pro Pro Leu Pro Asn Asn Ser Gln Pro Leu
    1265                1270                1275
gac ctt ggc act gtt gtt tat ggc cca cct cct gtt ggg gct ccc    3879
Asp Leu Gly Thr Val Val Tyr Gly Pro Pro Pro Val Gly Ala Pro
    1280                1285                1290
atc gtg tat ggg cct cca cct ccc aac ttc tcc gta ccc ctc atc    3924
Ile Val Tyr Gly Pro Pro Pro Pro Asn Phe Ser Val Pro Leu Ile
    1295                1300                1305
ccc gtg ggt gtg ctg cac tgc aat gtc cca gaa cac cat aac ttg    3969
Pro Val Gly Val Leu His Cys Asn Val Pro Glu His His Asn Leu
    1310                1315                1320
gag aat gaa gtt tct aga tta gaa gac ata atg cag cat tta aaa    4014
Glu Asn Glu Val Ser Arg Leu Glu Asp Ile Met Gln His Leu Lys
    1325                1330                1335
tct ggg aaa cgg gaa cag tgc atg aaa aca ccc aag ctg cag tcg    4059
Ser Gly Lys Arg Glu Gln Cys Met Lys Thr Pro Lys Leu Gln Ser
    1340                1345                1350
gag aaa gaa ctc gca gag ctg cag cat aac att gat ggt ctt ttg    4104
Glu Lys Glu Leu Ala Glu Leu Gln His Asn Ile Asp Gly Leu Leu
    1355                1360                1365
caa gag aag aaa gac tta gag cat gaa gta gaa gaa tta cat aga    4149
Gln Glu Lys Lys Asp Leu Glu His Glu Val Glu Glu Leu His Arg
    1370                1375                1380
acc atc caa aaa cat caa cag cga aaa gat ttc att gat gga aac    4194
Thr Ile Gln Lys His Gln Gln Arg Lys Asp Phe Ile Asp Gly Asn
    1385                1390                1395
gtt gag agt ctt gtg aat gat cta gaa ata gag aag tca ctc aaa    4239
Val Glu Ser Leu Val Asn Asp Leu Glu Ile Glu Lys Ser Leu Lys
    1400                1405                1410
cac cat gaa gat att gtt gat gaa att gaa tgt att gag agg acc    4284
His His Glu Asp Ile Val Asp Glu Ile Glu Cys Ile Glu Arg Thr
    1415                1420                1425
ctt ctg aag cgc cgt gca gag ctc agg gaa gcc gac cgg ctg ctg    4329
Leu Leu Lys Arg Arg Ala Glu Leu Arg Glu Ala Asp Arg Leu Leu
    1430                1435                1440
acg gag gct gaa agt gaa ctt tca tgc acg aaa gag aaa aca aaa    4374
Thr Glu Ala Glu Ser Glu Leu Ser Cys Thr Lys Glu Lys Thr Lys
    1445                1450                1455
cat gct gtt gag aag ttc act gat gcc aag aga aat tta ttg caa    4419
His Ala Val Glu Lys Phe Thr Asp Ala Lys Arg Asn Leu Leu Gln
    1460                1465                1470
act gag aaa gat gct gag gag tta gaa agg aga gcc cag gaa act    4464
Thr Glu Lys Asp Ala Glu Glu Leu Glu Arg Arg Ala Gln Glu Thr
    1475                1480                1485
gcc att aac ctc gtc aaa gcc gac cag cag ctg aga ttg ctc cag    4509
Ala Ile Asn Leu Val Lys Ala Asp Gln Gln Leu Arg Leu Leu Gln
    1490                1495                1500
gct gac acg aag gat ttg gag cag cac aaa atg gag caa gag gaa    4554
Ala Asp Thr Lys Asp Leu Glu Gln His Lys Met Glu Gln Glu Glu
    1505                1510                1515
atc ttg aaa gaa ata aac aaa gtt gtt gca gca aaa gac tca gac    4599
Ile Leu Lys Glu Ile Asn Lys Val Val Ala Ala Lys Asp Ser Asp
    1520                1525                1530
ttc cag agc cta aac aag aag aag gaa gta ctg aca gga gag ctg    4644
Phe Gln Ser Leu Asn Lys Lys Lys Glu Val Leu Thr Gly Glu Leu
    1535                1540                1545
cag aaa ctc cag aag gac att gag act gca cgg cac aat gag gat    4689
Gln Lys Leu Gln Lys Asp Ile Glu Thr Ala Arg His Asn Glu Asp
    1550                1555                1560
cag cac ctg cag gtc ctt aaa gag tcg gag acc ctc ctg cag gcc    4734
Gln His Leu Gln Val Leu Lys Glu Ser Glu Thr Leu Leu Gln Ala
    1565                1570                1575
aag aaa gct gag ctg gaa aat ctg aaa agc cag gtg tca gga cag    4779
Lys Lys Ala Glu Leu Glu Asn Leu Lys Ser Gln Val Ser Gly Gln
    1580                1585                1590
cag cag gag atg gcc gtc ttg gac agg gag tta gga cac aag aag    4824
Gln Gln Glu Met Ala Val Leu Asp Arg Glu Leu Gly His Lys Lys
    1595                1600                1605
gaa gag ctg cat ctc ctc cag gaa agc atg gtc cag gcc aaa gct      4869
Glu Glu Leu His Leu Leu Gln Glu Ser Met Val Gln Ala Lys Ala
    1610                1615                1620
gac ctc cag gaa gca ctg aga cta gga gaa agt gaa gta act gag      4914
Asp Leu Gln Glu Ala Leu Arg Leu Gly Glu Ser Glu Val Thr Glu
    1625                1630                1635
aag tgc aat cac att agg gaa gta aaa tct ctt ctg gaa gaa ctc      4959
Lys Cys Asn His Ile Arg Glu Val Lys Ser Leu Leu Glu Glu Leu
    1640                1645                1650
agt ttt cag aaa gga gaa ctg aat gtc cag atc agt gaa aaa aaa      5004
Ser Phe Gln Lys Gly Glu Leu Asn Val Gln Ile Ser Glu Lys Lys
    1655                1660                1665
act caa ctt gca ctc ata aag cag gaa att gaa aaa gag gaa gac      5049
Thr Gln Leu Ala Leu Ile Lys Gln Glu Ile Glu Lys Glu Glu Asp
    1670                1675                1680
aat ctt cag gta gtt tta ggg caa atg tct aaa cat aaa act gaa      5094
Asn Leu Gln Val Val Leu Gly Gln Met Ser Lys His Lys Thr Glu
    1685                1690                1695
cta aag aat att ctg gac atg ttg caa ctt gaa aat aat gag ctg      5139
Leu Lys Asn Ile Leu Asp Met Leu Gln Leu Glu Asn Asn Glu Leu
    1700                1705                1710
caa ggt ttg aag ctc caa cat gac caa aag atg tct gaa tta gag      5184
Gln Gly Leu Lys Leu Gln His Asp Gln Lys Met Ser Glu Leu Glu
    1715                1720                1725
aag act cgg gtt gaa gtg ctg gag gag aaa ctg gag tta gag agt      5229
Lys Thr Arg Val Glu Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Leu Glu Ser
    1730                1735                1740
ctg cag cag gca gcc ctg cga cag aga ggg gag ata gag tgg cag      5274
Leu Gln Gln Ala Ala Leu Arg Gln Arg Gly Glu Ile Glu Trp Gln
    1745                1750                1755
aag cag ctc ctc cag agg aac aca cag gaa gta gag cgg atg act      5319
Lys Gln Leu Leu Gln Arg Asn Thr Gln Glu Val Glu Arg Met Thr
    1760                1765                1770
gct gag acc cga gca tta cag tca tgt gtt gag tct ttg tgc aaa      5364
Ala Glu Thr Arg Ala Leu Gln Ser Cys Val Glu Ser Leu Cys Lys
    1775                1780                1785
gaa aag caa gat ctc gaa gaa aaa cag gac agc tgg gaa aag aag      5409
Glu Lys Gln Asp Leu Glu Glu Lys Gln Asp Ser Trp Glu Lys Lys
    1790                1795                1800
ttg gca cag acc aaa cgg gtt cta gca gct gca gaa gag gac agc      5454
Leu Ala Gln Thr Lys Arg Val Leu Ala Ala Ala Glu Glu Asp Ser
    1805                1810                1815
gag atg gag cgg gca cgc tta gaa aag ttg gaa ctg gac gcc agg      5499
Glu Met Glu Arg Ala Arg Leu Glu Lys Leu Glu Leu Asp Ala Arg
    1820                1825                1830
aag ctg cag cag gag ttg gac caa cga aac agg gag aag ctc tcc      5544
Lys Leu Gln Gln Glu Leu Asp Gln Arg Asn Arg Glu Lys Leu Ser
    1835                1840                1845
ctg cat caa gac ctg gca gtg gtg cag cag cag cta caa gaa aaa      5589
Leu His Gln Asp Leu Ala Val Val Gln Gln Gln Leu Gln Glu Lys
    1850                1855                1860
cag gaa gca gta aac tca tta cag aag gaa cta gct gat gtc cag      5634
Gln Glu Ala Val Asn Ser Leu Gln Lys Glu Leu Ala Asp Val Gln
    1865                1870                1875
gag cat ttg gac cta gca gaa cag gag gtg ctc tgc acc acc aag      5679
Glu His Leu Asp Leu Ala Glu Gln Glu Val Leu Cys Thr Thr Lys
    1880                1885                1890
cgc aag gac gca ctg ctc agc gaa cag acc agg ctc gag aag gac    5724
Arg Lys Asp Ala Leu Leu Ser Glu Gln Thr Arg Leu Glu Lys Asp
    1895                1900                1905
gtg ggt gaa tgg acg aag aag ttt gaa gac tgc cag aaa gaa ggg    5769
Val Gly Glu Trp Thr Lys Lys Phe Glu Asp Cys Gln Lys Glu Gly
    1910                1915                1920
gag aca aag cag caa cag ctt caa ggg ctt cag aag gag att gaa    5814
Glu Thr Lys Gln Gln Gln Leu Gln Gly Leu Gln Lys Glu Ile Glu
    1925                1930                1935
gga aac gag gcg aag cta gcc caa caa gaa atg atg ttt cag aga    5859
Gly Asn Glu Ala Lys Leu Ala Gln Gln Glu Met Met Phe Gln Arg
    1940                1945                1950
ctc cag aaa gag cga gaa tgt gaa gaa aaa aag tta gaa gct agt    5904
Leu Gln Lys Glu Arg Glu Cys Glu Glu Lys Lys Leu Glu Ala Ser
    1955                1960                1965
aaa gtg act ctg aag gag cag cag caa cag ctg gaa aag gaa ttg    5949
Lys Val Thr Leu Lys Glu Gln Gln Gln Gln Leu Glu Lys Glu Leu
    1970                1975                1980
atg gag cag aaa ggc aag ctg gac cag gtg ctc gct aag ctc ttg    5994
Met Glu Gln Lys Gly Lys Leu Asp Gln Val Leu Ala Lys Leu Leu
    1985                1990                1995
gtg gct gag gag cgt gtc agg acc ttg cag gag gag gga agg tgg    6039
Val Ala Glu Glu Arg Val Arg Thr Leu Gln Glu Glu Gly Arg Trp
    2000                2005                2010
agc gag acc ctg gag aag acg ctc tcc cag acc aag cga cag ctt    6084
Ser Glu Thr Leu Glu Lys Thr Leu Ser Gln Thr Lys Arg Gln Leu
    2015                2020                2025
tca gaa cgg gag cag cag tta ctg gcc aag tca gac gag ctg ctg    6129
Ser Glu Arg Glu Gln Gln Leu Leu Ala Lys Ser Asp Glu Leu Leu
    2030                2035                2040
gcc ctg cag aag gag acg gac tcc atg agg gcg gac ttc agc ctc    6174
Ala Leu Gln Lys Glu Thr Asp Ser Met Arg Ala Asp Phe Ser Leu
    2045                2050                2055
ttg cgc aac cag ttc ctg aca gaa aga aag aaa gcc gag aag cag    6219
Leu Arg Asn Gln Phe Leu Thr Glu Arg Lys Lys Ala Glu Lys Gln
    2060                2065                2070
gtg gcc agc ctg aag gaa gcc ctt aag atc cag cgg agc caa ctg    6264
Val Ala Ser Leu Lys Glu Ala Leu Lys Ile Gln Arg Ser Gln Leu
    2075                2080                2085
gag aag aac ctt ctg gag caa aag cag gag aac agc tgc atg cag    6309
Glu Lys Asn Leu Leu Glu Gln Lys Gln Glu Asn Ser Cys Met Gln
    2090                2095                2100
agg gag atg gca acc atc gaa cag gtg gcc cag gac aac cac gag    6354
Arg Glu Met Ala Thr Ile Glu Gln Val Ala Gln Asp Asn His Glu
    2105                2110                2115
cgg gcc cgg cgc ctg atg agg gag ctc aac cag atg cag cgc gag    6399
Arg Ala Arg Leu Met Arg Glu Leu Asn Asn Gln Met Gln Arg Glu
    2120                2125                2130
tac gtg gag ctc agg aaa cag atg aca aac caa aag gat ttg gaa    6444
Tyr Val Glu Leu Arg Lys Gln Met Thr Asn Gln Lys Asp Leu Glu
    2135                2140                2145
aga aga cag atg gaa atc agt gat gcg atg caa gca ctt aaa tgt    6489
Arg Arg Gln Met Glu Ile Ser Asp Ala Met Gln Ala Leu Lys Cys
    2150                2155                2160
gag gtg aaa gat gaa atc cga acc agc ctg aag aat ctc aac cag    6534
Glu Val Lys Asp Glu Ile Arg Thr Ser Leu Lys Asn Leu Asn Gln
    2165                2170                2175
ttt ctt cca gag ctg cca gcg gac ctg gag gcc ctt ctg gaa agg    6579
Phe Leu Pro Glu Leu Pro Ala Asp Leu Glu Ala Leu Leu Glu Arg
    2180                2185                2190
aat gag aac ctt gga gga ggc ttg gag agc ttg aaa gag aat ttc    6624
Asn Glu Asn Leu Gly Gly Gly Leu Glu Ser Leu Lys Glu Asn Phe
    2195                2200                2205
ccg ttt acc gtg agc gac aga cca tca tct tgc gaa gag aaa ctg    6669
Pro Phe Thr Val Ser Asp Arg Pro Ser Ser Cys Glu Glu Lys Leu
    2210                2215                2220
aat ttt ggc cag gct cac gtg gcg gat gaa cag tgg cgg gga gag    6714
Asn Phe Gly Gln Ala His Val Ala Asp Glu Gln Trp Arg Gly Glu
    2225                2230                2235
gca ctc cgg gag aag ctg cgc cac cgc gag gac cgg ctc aag gcc    6759
Ala Leu Arg Glu Lys Leu Arg His Arg Glu Asp Arg Leu Lys Ala
    2240                2245                2250
cag ctg cgc cgc tgc atg tcc aag cag gcc gag gtg ctg agc gag    6804
Gln Leu Arg Arg Cys Met Ser Lys Gln Ala Glu Val Leu Ser Glu
    2255                2260                2265
ggc cgg cgg cgc acg gag ggg acc ctg cac agc ctg cgg cgg cag    6849
Gly Arg Arg Arg Thr Glu Gly Thr Leu His Ser Leu Arg Arg Gln
    2270                2275                2280
gtg gac gcc ctg ggc gag ctg gtc acc agc act tcc ggg gac tcc    6894
Val Asp Ala Leu Gly Glu Leu Val Thr Ser Thr Ser Gly Asp Ser
    2285                2290                2295
gcg tcc acc cgc agt ctg tcg cgc acc gag ggc tcg ctc gcc gag    6939
Ala Ser Thr Arg Ser Leu Ser Arg Thr Glu Gly Ser Leu Ala Glu
    2300                2305                23l0
gac gaa ccg ccg ggg ccc agc cag gag ctg cac gtg ctg ggg tcg    6984
Asp Glu Pro Pro Gly Pro Ser Gln Glu Leu His Val Leu Gly Ser
    2315                2320                2325
ggc ggc agc gac cga ggt gga gga cgg ggc ggg ggc agg aag ggc    7029
Gly Gly Ser Asp Arg Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Arg Lys Gly
    2330                2335                2340
ctt tcc cga cgc cgc cgc tgg aac cac gga gaa gcg cgc ctc ggc    7074
Leu Ser Arg Arg Arg Arg Trp Asn His Gly Glu Ala Arg Leu Gly
    2345                2350                2355
ccg cgg agg ccc cca cgg gag ggg gca ggg cgg ggc gcg gcc ttc    7119
Pro Arg Arg Pro Pro Arg Glu Gly Ala Gly Arg Gly Ala Ala Phe
    2360                2365                2370
cga gcc ttg gtc tcc tgc tcc cgc cct gca gag ctc ccg gcg gct    7164
Arg Ala Leu Val Ser Cys Ser Arg Pro Ala Glu Leu Pro Ala Ala
    2375                2380                2385
ccc ccg agg ccc gtc gcc gcg gct gga cgc gca ccg acc ctg agg    7209
Pro Pro Arg Pro Val Ala Ala Ala Gly Arg Ala Pro Thr Leu Arg
    2390                2395                2400
acc cgg agg acc cgg agg ccc ggc gtc ccc tcg gaa cgc ttc ctc    7254
Thr Arg Arg Thr Arg Arg Pro Gly Val Pro Ser Glu Arg Phe Leu
    2405                2410                2415
cgc gtc cgc gga cac cag gct cac ggg aag gcg cgt cca tgc ggg    7299
Arg Val Arg Gly His Gln Ala His Gly Lys Ala Arg Pro Cys Gly
    2420                2425                2430
aag agc cgc gag cgg aac ccg gat gcc cgg gct ggt ctc tgg gcc    7344
Lys Ser Arg Glu Arg Asn Pro Asp Ala Arg Ala Gly Leu Trp Ala
    2435                2440                2445
ttg gaa acg tgt tgc cgt aaa agc agc gcc cgc ggc tgc gga ctt    7389
Leu Glu Thr Cys Cys Arg Lys Ser Ser Ala Arg Gly Cys Gly Leu
    2450                2455                2460
gaa gcc ccg aac tgc cgc cgt gcc cgg tgc gga gcg agc gtg cgg    7434
Glu Ala Pro Asn Cys Arg Arg Ala Arg Cys Gly Ala Ser Val Arg
    2465                2470                2475
tac cct ctc gtg cct cgg ggc cgg act gga cga ggg gcc gtg acc    7479
Tyr Pro Leu Val Pro Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Ala Val Thr
    2480                2485                2490
ccg tgg ggc cgc ctg cag tcc cga ggg acg cgg acc acc ccc cgg    7524
Pro Trp Gly Arg Leu Gln Ser Arg Gly Thr Arg Thr Thr Pro Arg
    2495                2500                2505
ccg gtg cga cgg gag cat ccc cag cac cag gaa agg ccc cca ggg    7569
Pro Val Arg Arg Glu His Pro Gln His Gln Glu Arg Pro Pro Gly
    2510                2515                2520
cgc gtt acc gcg gcc cac act gag acc gcc cct ccc cgc cgg gtg    7614
Arg Val Thr Ala Ala His Thr Glu Thr Ala Pro Pro Arg Arg Val
    2525                2530                2535
ttc cac gcg cga gta gca gtc ggg gag gtc agc ctc ggg ccc ggc    7659
Phe His Ala Arg Val Ala Val Gly Glu Val Ser Leu Gly Pro Gly
    2540                2545                2550
cgc ggt ctc gag cga aca cgg ggc ggg ggc ggg ggg gcg ggg gcg    7704
Arg Gly Leu Glu Arg Thr Arg Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly Ala
    2555                2560                2565
gga ctc ctc gca gag gcc gcg gcc acg gcc cgg tgc gca gac ccc    7749
Gly Leu Leu Ala Glu Ala Ala Ala Thr Ala Arg Cys Ala Asp Pro
    2570                2575                2580
tcc aca gac ccc tcc gca tag                                    7770
Ser Thr Asp Pro Ser Ala
    2585
 
<210>42
<211>2589
<212>PRT
<213>家犬
 
<400>42
 
Met Lys Lys Gly Ser Gln Gln Lys Phe Leu Lys Ala Lys Met Pro Pro
1               5                   10                  15
Ser Ser His Ser Pro Ser Pro Pro Ser Leu Thr Ser Asn Met Arg Ser
            20                  25                  30
Arg Ser Leu Ser Pro Leu Ser Gly Ser Glu Thr Leu Pro Phe His Phe
        35                  40                  45
Gly Gly Pro Trp His Glu Gln Val Glu Ile Thr Asp Glu Ser Thr Val
    50                  55                  60
Val Leu Asp Tyr Gln Asp His Lys Glu Ala Asp Ser His Ala Gly Val
65                  70                  75                  80
Arg Tyr Ile Thr Glu Ala Leu Val Arg Lys Leu Thr Lys Gln Asp Asn
                85                  90                  95
Leu Ala Leu Val Lys Ser Leu Asn Leu Ser Leu Ala Lys Gly Gly Gly
            100                 105                 110
Lys Lys Phe Arg Cys Ile Glu Asn Leu Glu Lys Cys Val Lys Leu Glu
        115                 120                 125
Val Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Leu Ile Gly Lys Ile Glu Lys Val Asp
    130                 135                 140
Lys Leu Leu Lys Leu Arg Glu Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Ile Arg
145                 150                 155                 160
Lys Ile Glu Gly Ile Glu Asn Leu Tyr Asn Leu Gln Lys Leu Asn Leu
                165                 170                 175
Ala Gly Asn Glu Ile Glu His Ile Pro Val Trp Leu Gly Lys Lys Leu
            180                 185                 190
Lys Ser Leu Arg Ile Leu Asn Leu Lys Gly Asn Lys Ile Ser Ser Leu
        195                 200                 205
Gln Asp Val Ser Lys Leu Lys Pro Leu Gln Asp Leu Thr Ser Leu Ile
    210                 215                 220
Leu Leu Glu Asn Pro Val Ala Thr Leu Pro His Tyr Ile Gln Phe Thr
225                 230                 235                 240
Ile Phe His Leu Arg Ser Leu Glu Ser Leu Glu Gly Gln Pro Val Thr
                245                 250                 255
Ser Gln Asp Arg Gln Glu Ala Phe Ala Arg Phe Ser Leu Asp Glu Val
            260                 265                 270
Glu Arg Leu Glu Arg Asp Leu Glu Lys Lys Thr Met Glu Thr Glu Glu
        275                 280                 285
Leu Arg Ser Glu Gln Thr Arg Phe Leu Glu Glu Ile Lys Ser Gln Asp
    290                 295                 300
Lys Leu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Glu Ala Arg Leu Gln Lys Gln Ser
305                 310                 315                 320
Tyr Glu Glu Leu Glu Ser Asn Leu Asn Thr Lys Asn Glu Leu Leu Lys
                325                 330                 335
Gln Lys Thr Met Glu Leu Met Arg Ala Cys Gln Lys Gln Tyr Glu Met
            340                 345                 350
Glu Gln Glu Leu Ala Phe Tyr Lys Ile Asp Ala Lys Phe Glu Pro Leu
        355                 360                 365
Asn Tyr Tyr Pro Ser Glu Tyr Val Glu Ile Asp Lys Thr Pro Asp Glu
    370                 375                 380
Ser Pro Tyr Ile Gly Lys Ser Arg Tyr Lys Arg Asn Met Phe Thr Thr
385                 390                 395                 400
Glu Ser Tyr Ile Ile Ala Asn Ala Gln Thr Val Lys Ile Lys Lys Met
                405                 410                 415
Glu Leu Asp Glu Gly Glu Gln Leu Arg Asn Glu His Val Asn Leu Gly
            420                 425                 430
Ala Ser Pro Thr Asp Ile Gln Leu Glu Asp Lys Glu Lys Lys Ile Ser
        435                 440                 445
Ala Ala Gln Thr Arg Leu Ser Glu Leu His Asp Glu Ile Glu Lys Ala
    450                 455                 460
Glu Gln Gln Ile Leu Arg Ala Thr Glu Glu Phe Lys Gln Leu Glu Glu
465                 470                 475                 480
Ala Ile Gln Leu Lys Lys Ile Ser Glu Ala Glu Lys Asp Leu Leu Phe
                485                 490                 495
Lys Gln Leu Ser Gly Arg Ile Gln Leu Leu Asn Lys Leu Arg Gln Glu
            500                 505                 510
Ala Val Asp Leu Glu Thr Gln Met Glu Lys Gln Arg Gln Glu Ile Gly
        515                 520                 525
Glu Lys Gln Asn Glu Ile Lys Asp Leu Glu Ile Val Thr Asp Ser Leu
    530                 535                 540
Asp Ser Arg Asp Pro Lys His Cys His Met Lys Ala Gln Lys Arg Gly
545                 550                 555                 560
Lys Glu Gln Gln Leu Asp Ile Met Asn Lys Gln Tyr Lys Gln Leu Glu
                565                 570                 575
Ser Arg Leu Asp Glu Ile Leu Ser Arg Ile Ala Lys Glu Thr Glu Glu
            580                 585                 590
Ile Lys Asp Leu Glu Glu Gln Leu Thr Glu Gly Gln Ile Ala Ala Asn
        595                 600                 605
Glu Ala Leu Lys Lys Asp Leu Glu Ser Val Ile Ser Gly Leu Gln Glu
    610                 615                 620
Tyr Leu Glu Thr Val Lys Gly Gln Ala Arg Gln Ala Gln Asn Glu Cys
625                 630                 635                 640
Arg Lys Leu Gln Asp Glu Lys Glu Thr Leu Leu Gln Arg Leu Ser Glu
                645                 650                 655
Val Glu Gln Glu Arg Asp Gln Leu Glu Ile Val Ala Ile Asp Ala Glu
            660                 665                 670
Asn Met Arg Lys Glu Leu Ala Glu Leu Glu Asn Ala Leu Gln Glu Gln
        675                 680                 685
His Glu Val Asn Ile Ser Leu Gln Gln Thr Gln Gly Asp Leu Ser Ala
    690                 695                 700
Tyr Glu Ala Glu Leu Glu Ala Gln Leu Lys Ile Arg Asp Ala Glu Ala
705                 710                 715                 720
Asn Gln Leu Lys Glu Glu Leu Glu Lys Leu Arg Arg Leu Ser Gln Leu
                725                 730                 735
Glu Gln Ser Ala Leu Gln Ala Glu Leu Glu Lys Glu Lys Gln Ala Phe
            740                 745                 750
Lys Thr Ala Val Lys Lys Ala Gln Leu Ser Glu Gly Lys Asp Gln Glu
        755                 760                 765
Asn Ser Glu Leu Arg Thr Gln Leu Gln Gln Leu Gln Asp Asp Asn Asp
    770                 775                 780
Leu Leu Lys Gln Gln Leu Lys Asp Phe Gln Ser His Leu Asn His Val
785                 790                 795                 800
Val Asp Gly Leu Ile Arg Pro Glu Glu Val Ala Ala Cys Val Asp Glu
                805                 810                 815
Leu Arg Lys Lys Leu Lys Ser Gly Ala Gly Glu Met Arg Ile His Thr
            820                 825                 830
Pro Ser Asp Val Leu Gly Lys Ser Leu Ala Asp Leu Gln Lys Gln Phe
        835                 840                 845
Ser Glu Ile LeuAla Arg Ser Gln Trp Glu Arg Gln Glu Ala Gln Val
    850                 855                 860
Arg Glu Arg Lys Leu Gln Glu Glu Met Ala Leu Gln Gln Glu Lys Leu
865                 870                 875                 880
Ala Ser Gly Gln Glu Glu Phe Arg His Ala Cys Glu Arg Ala Leu Glu
                885                 890                 895
Ala Arg Ile Ser Phe Asp Lys Arg Gln His Glu Ala Arg Ile Gln Gln
            900                 905                 910
Leu Glu Asn Glu Ile Hi s Tyr Leu Gln Glu Asn Leu Lys Ser Met Glu
        915                 920                 925
Glu Ile Gln Gly Leu Thr Asp Leu Gln Leu Gln Glu Ala Asp Glu Glu
    930                 935                 940
Lys Glu Arg Ile Leu Ala Gln Leu Arg Glu Leu Glu Lys Lys Lys Lys
945                 950                 955                 960
Leu Glu Asp Ala Lys Ser Gln Glu Gln Phe Leu Gly Leu Asp Arg Glu
                965                 970                 975
Leu Lys Lys Leu Lys Lys Ala Val Ala Ala Ser Asp Lys Leu Ala Thr
            980                 985                 990
Ala Glu Leu Thr Ile Ala Lys Asp Gln Leu Lys Ser Leu His Gly Thr
        995                 1000                1005
Val Met Lys Ile Asn Gln Glu Arg Ala Glu Glu Leu Gln Glu Thr
    1010                1015                1020
Glu Arg Phe Ser Arg Lys Ala Ala Gln Ala Ala Arg Asp Leu Ile
    1025                1030                1035
Arg Ala Glu Ala Glu Ile Glu Leu Leu Gln Lys Leu Leu Arg Asp
    1040                1045                1050
Lys Glu Glu Gln Phe Arg Asn Glu Ile Glu Lys Val Asp Val Gly
    1055                1060                1065
Ser Gly Gly Ala Lys Ser Gln Met Leu Glu Met Glu Lys Leu Asn
    1070                1075                1080
Glu Thr Met Glu Arg Gln Arg Thr Glu Ile Ala Arg Leu Arg Asn
    1085                1090                1095
Leu Leu Asp Leu Thr Gly Ala Asp Asn Lys Gly Asn Phe Glu Asn
    1100                1105                1110
Val Leu Glu Glu Ile Ala Glu Leu Arg Arg Glu Val Ser His Gln
    1115                1120                1125
Asn Asp Tyr Ile Ser Ser Met Thr Asp Pro Phe Lys Arg Arg Gly
    1130                1135                1140
Tyr Trp Tyr Phe Met Pro Pro Pro Ser Ser Ser Lys Val Ser Ser
    1145                1150                1155
His Ser Ser Gln Ala Thr Lys Asp Ser Gly Val Gly Leu Lys Tyr
    1160                1165                1170
Thr Ala Ser Thr Pro Val Arg Lys Pro His Arg Gly Arg Gln Asp
    1175                1180                1185
Gly Lys Glu Asn Ser Gly Pro Pro Pro Ala Ser Gly Tyr Trp Val
    1190                1195                1200
Tyr Ser Pro Ile Arg Ser Gly Leu His Lys Ser Phe Ser Asn Arg
    1205                1210                1215
Asp Ala Asp Ser Gly Gly Asp Ser Gln Glu Glu Ser Glu Leu Asp
    1220                1225                1230
Asp Gln Glu Asp His Pro Phe Val Pro Pro Pro Gly Tyr Met Met
    1235                1240                1245
Tyr Thr Val Phe Pro Asp Gly Ser Pro Val Pro Gln Gly Met Ala
    1250                1255                1260
Leu Tyr Ala Pro Pro Pro Pro Leu Pro Asn Asn Ser Gln Pro Leu
    1265                1270                1275
Asp Leu Gly Thr Val Val Tyr Gly Pro Pro Pro Val Gly Ala Pro
    1280                1285                1290
Ile Val Tyr Gly Pro Pro Pro Pro Asn Phe Ser Val Pro Leu Ile
    1295                1300                1305
Pro Val Gly Val Leu His Cys Asn Val Pro Glu His His Asn Leu
    1310                1315                1320
Glu Asn Glu Val Ser Arg Leu Glu Asp Ile Met Gln His Leu Lys
    1325                1330                1335
Ser Gly Lys Arg Glu Gln Cys Met Lys Thr Pro Lys Leu Gln Ser
    1340                1345                1350
Glu Lys Glu Leu Ala Glu Leu Gln His Asn Ile Asp Gly Leu Leu
    1355                1360                1365
Gln Glu Lys Lys Asp Leu Glu His Glu Val Glu Glu Leu His Arg
    1370                1375                1380
Thr Ile Gln Lys His Gln Gln Arg Lys Asp Phe Ile Asp Gly Asn
    1385                1390                1395
Val Glu Ser Leu Val Asn Asp Leu Glu Ile Glu Lys Ser Leu Lys
    1400                1405                1410
His His Glu Asp Ile Val Asp Glu Ile Glu Cys Ile Glu Arg Thr
    1415                1420                1425
Leu Leu Lys Arg Arg Ala Glu Leu Arg Glu Ala Asp Arg Leu Leu
    1430                1435                1440
Thr Glu Ala Glu Ser Glu Leu Ser Cys Thr Lys Glu Lys Thr Lys
    1445                1450                1455
His Ala Val Glu Lys Phe Thr Asp Ala Lys Arg Asn Leu Leu Gln
    1460                1465                1470
Thr Glu Lys Asp Ala Glu Glu Leu Glu Arg Arg Ala Gln Glu Thr
    1475                1480                1485
Ala Ile Asn Leu Val Lys Ala Asp Gln Gln Leu Arg Leu Leu Gln
    1490                1495                1500
Ala Asp Thr Lys Asp Leu Glu Gln His Lys Met Glu Gln Glu Glu
    1505                1510                1515
Ile Leu Lys Glu Ile Asn Lys Val Val Ala Ala Lys Asp Ser Asp
    1520                1525                1530
Phe Gln Ser Leu Asn Lys Lys Lys Glu Val Leu Thr Gly Glu Leu
    1535                1540                1545
Gln Lys Leu Gln Lys Asp Ile Glu Thr Ala Arg His Asn Glu Asp
    1550                1555                1560
Gln His Leu Gln Val Leu Lys Glu Ser Glu Thr Leu Leu Gln Ala
    1565                1570                1575
Lys Lys Ala Glu Leu Glu Asn Leu Lys Ser Gln Val Ser Gly Gln
    1580                1585                1590
Gln Gln Glu Met Ala Val Leu Asp Arg Glu Leu Gly His Lys Lys
    1595                1600                1605
Glu Glu Leu His Leu Leu Gln Glu Ser Met Val Gln Ala Lys Ala
    1610                1615                1620
Asp Leu Gln Glu Ala Leu Arg Leu Gly Glu Ser Glu Val Thr Glu
    1625                1630                1635
Lys Cys Asn His Ile Arg Glu Val Lys Ser Leu Leu Glu Glu Leu
    1640                1645                1650
Ser Phe Gln Lys Gly Glu Leu Asn Val Gln Ile Ser Glu Lys Lys
    1655                1660                1665
Thr Gln Leu Ala Leu Ile Lys Gln Glu Ile Glu Lys Glu Glu Asp
    1670                1675                1680
Asn Leu Gln Val Val Leu Gly Gln Met Ser Lys His Lys Thr Glu
    1685                1690                1695
Leu Lys Asn Ile Leu Asp Met Leu Gln Leu Glu Asn Asn Glu Leu
    1700                1705                1710
Gln Gly Leu Lys Leu Gln His Asp Gln Lys Met Ser Glu Leu Glu
    1715                1720                1725
Lys Thr Arg Val Glu Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Leu Glu Ser
    1730                1735                1740
Leu Gln Gln Ala Ala Leu Arg Gln Arg Gly Glu Ile Glu Trp Gln
    1745                1750                1755
Lys Gln Leu Leu Gln Arg Asn Thr Gln Glu Val Glu Arg Met Thr
    1760                1765                1770
Ala Glu Thr Arg Ala Leu Gln Ser Cys Val Glu Ser Leu Cys Lys
    1775                1780                1785
Glu Lys Gln Asp Leu Glu Glu Lys Gln Asp Ser Trp Glu Lys Lys
    1790                1795                1800
Leu Ala Gln Thr Lys Arg Val Leu Ala Ala Ala Glu Glu Asp Ser
    1805                1810                1815
Glu Met Glu Arg Ala Arg Leu Glu Lys Leu Glu Leu Asp Ala Arg
    1820                1825                1830
Lys Leu Gln Gln Glu Leu Asp Gln Arg Asn Arg Glu Lys Leu Ser
    1835                1840                1845
Leu His Gln Asp Leu Ala Val Val Gln Gln Gln Leu Gln Glu Lys
    1850                1855                1860
Gln Glu Ala Val Asn Ser Leu Gln Lys Glu Leu Ala Asp Val Gln
    1865                1870                1875
Glu His Leu Asp Leu Ala Glu Gln Glu Val Leu Cys Thr Thr Lys
    1880                1885                1890
Arg Lys Asp Ala Leu Leu Ser Glu Gln Thr Arg Leu Glu Lys Asp
    1895                1900                1905
Val Gly Glu Trp Thr Lys Lys Phe Glu Asp Cys Gln Lys Glu Gly
    1910                1915                1920
Glu Thr Lys Gln Gln Gln Leu Gln Gly Leu Gln Lys Glu Ile Glu
    1925                1930                1935
Gly Asn Glu Ala Lys Leu Ala Gln Gln Glu Met Met Phe Gln Arg
    1940                1945                1950
Leu Gln Lys Glu Arg Glu Cys Glu Glu Lys Lys Leu Glu Ala Ser
    1955                1960                1965
Lys Val Thr Leu Lys Glu Gln Gln Gln Gln Leu Glu Lys Glu Leu
    1970                1975                1980
Met Glu Gln Lys Gly Lys Leu Asp Gln Val Leu Ala Lys Leu Leu
    1985                1990                1995
Val Ala Glu Glu Arg Val Arg Thr Leu Gln Glu Glu Gly Arg Trp
    2000                2005                2010
Ser Glu Thr Leu Glu Lys Thr Leu Ser Gln Thr Lys Arg Gln Leu
    2015                2020                2025
Ser Glu Arg Glu Gln Gln Leu Leu Ala Lys Ser Asp Glu Leu Leu
    2030                2035                2040
Ala Leu Gln Lys Glu Thr Asp Ser Met Arg Ala Asp Phe Ser Leu
    2045                2050                2055
Leu Arg Asn Gln Phe Leu Thr Glu Arg Lys Lys Ala Glu Lys Gln
    2060                2065                2070
Val Ala Ser Leu Lys Glu Ala Leu Lys Ile Gln Arg Ser Gln Leu
    2075                2080                2085
Glu Lys Asn Leu Leu Glu Gln Lys Gln Glu Asn Ser Cys Met Gln
    2090                2095                2100
Arg Glu Met Ala Thr Ile Glu Gln Val Ala Gln Asp Asn His Glu
    2105                2110                2115
Arg Ala Arg Arg Leu Met Arg Glu Leu Asn Gln Met Gln Arg Glu
    2120                2125                2130
Tyr Val Glu Leu Arg Lys Gln Met Thr Asn Gln Lys Asp Leu Glu
    2135                2140                2145
Arg Arg Gln Met Glu Ile Ser Asp Ala Met Gln Ala Leu Lys Cys
    2150                2155                2160
Glu Val Lys Asp Glu Ile Arg Thr Ser Leu Lys Asn Leu Asn Gln
    2165                2170                2175
Phe Leu Pro Glu Leu Pro Ala Asp Leu Glu Ala Leu Leu Glu Arg
    2180                2185                2190
Asn Glu Asn Leu Gly Gly Gly Leu Glu Ser Leu Lys Glu Asn Phe
    2195                2200                2205
Pro Phe Thr Val Ser Asp Arg Pro Ser Ser Cys Glu Glu Lys Leu
    2210                2215                2220
Asn Phe Gly Gln Ala His Val Ala Asp Glu Gln Trp Arg Gly Glu
    2225                2230                2235
Ala Leu Arg Glu Lys Leu Arg His Arg Glu Asp Arg Leu Lys Ala
    2240                2245                2250
Gln Leu Arg Arg Cys Met Ser Lys Gln Ala Glu Val Leu Ser Glu
    2255                2260                2265
Gly Arg Arg Arg Thr Glu Gly Thr Leu His Ser Leu Arg Arg Gln
    2270                2275                2280
Val Asp Ala Leu Gly Glu Leu Val Thr Ser Thr Ser Gly Asp Ser
    2285                2290                2295
Ala Ser Thr Arg Ser Leu Ser Arg Thr Glu Gly Ser Leu Ala Glu
    2300                2305                2310
Asp Glu Pro Pro Gly Pro Ser Gln Glu Leu His Val Leu Gly Ser
    2315                2320                2325
Gly Gly Ser Asp Arg Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Arg Lys Gly
    2330                2335                2340
Leu Ser Arg Arg Arg Arg Trp Asn His Gly Glu Ala Arg Leu Gly
    2345                2350                2355
Pro Arg Arg Pro Pro Arg Glu Gly Ala Gly Arg Gly Ala Ala Phe
    2360                2365                2370
Arg Ala Leu Val Ser Cys Ser Arg Pro Ala Glu Leu Pro Ala Ala
    2375                2380                2385
Pro Pro Arg Pro Val Ala Ala Ala Gly Arg Ala Pro Thr Leu Arg
    2390                2395                2400
Thr Arg Arg Thr Arg Arg Pro Gly Val Pro Ser Glu Arg Phe Leu
    2405                2410                2415
Arg Val Arg Gly His Gln Ala His Gly Lys Ala Arg Pro Cys Gly
    2420                2425                2430
Lys Ser Arg Glu Arg Asn Pro Asp Ala Arg Ala Gly Leu Trp Ala
    2435                2440                2445
Leu Glu Thr Cys Cys Arg Lys Ser Ser Ala Arg Gly Cys Gly Leu
    2450                2455                2460
Glu Ala Pro Asn Cys Arg Arg Ala Arg Cys Gly Ala Ser Val Arg
    2465                2470                2475
Tyr Pro Leu Val Pro Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Ala Val Thr
    2480                2485                2490
Pro Trp Gly Arg Leu Gln Ser Arg Gly Thr Arg Thr Thr Pro Arg
    2495                2500                2505
Pro Val Arg Arg Glu His Pro Gln His Gln Glu Arg Pro Pro Gly
    2510                2515                2520
Arg Val Thr Ala Ala His Thr Glu Thr Ala Pro Pro Arg Arg Val
    2525                2530                2535
Phe His Ala Arg Val Ala Val Gly Glu Val Ser Leu Gly Pro Gly
    2540                2545                2550
Arg Gly Leu Glu Arg Thr Arg Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly Ala
    2555                2560                2565
Gly Leu Leu Ala Glu Ala Ala Ala Thr Ala Arg Cys Ala Asp Pro
    2570                2575                2580
Ser Thr Asp Pro Ser Ala
    2585
 
<210>43
<211>23
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>43
gtcgacctat gcggaggggt ctg                                             23
 
<210>44
<211>6046
<212>DNA
<213>家犬
 
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(5934)
<223>
 
<400>44
atg tcg tcc tgg ctc ggg ggc ctg ggc tcc ggc ctg ggc cag tcg ctg       48
Met Ser Ser Trp Leu Gly Gly Leu Gly Ser Gly Leu Gly Gln Ser Leu
1               5                   10                  15
ggg caa gtc gga ggc agc ctg gcc tcc ctc act ggc cag att tca aac       96
Gly Gln ValGly Gly Ser Leu Ala Ser Leu Thr Gly Gln Ile Ser Asn
               20              25                  30
ttt acg aag gac atg ctg atg gag ggc acg gag gag gtg gaa gca gaa      144
Phe Thr Lys Asp Met Leu Met Glu Gly Thr Glu Glu Val Glu Ala Glu
        35                  40                  45
tta cct aat tct agg aga aag gaa gtt gaa gcc att cat gca atc tta      192
Leu Pro Asn Ser Arg Arg Lys Glu Val Glu Ala Ile His Ala Ile Leu
    50                  55                  60
aga tca gag aat gag aga ctc aaa gaa ctt tgt act gat tta gaa gag      240
Arg Ser Glu Asn Glu Arg Leu Lys Glu Leu Cys Thr Asp Leu Glu Glu
65                  70                  75                   80
aag cat gaa gca tca gag ctt caa ata aag caa caa tct aca aat tac      288
Lys His Glu Ala Ser Glu Leu Gln Ile Lys Gln Gln Ser Thr Asn Tyr
                85                   90                   95
cga aat caa cta caa cag aaa gag gta gaa atc agc cat ctt aaa gca      336
Arg Asn Gln Leu Gln Gln Lys Glu Val Glu Ile Ser His Leu Lys Ala
            100                 105                 110
aga cag att gca ctg cag gat cag ttg ctg aag ctg cag tca gct gct      384
Arg Gln Ile Ala Leu Gln Asp Gln Leu Leu Lys Leu Gln Ser Ala Ala
        115                 120                 125
cag tct gca cat tca gga gct agc agc gta cca gca gcc ctg gca tca      432
Gln Ser Ala His Ser Gly Ala Ser Ser Val Pro Ala Ala Leu Ala Ser
    130                 135                 140
tct ccg ttc agc tat tct gtc agt cat cat gct tca gct ttc cat gac      480
Ser Pro Phe Ser Tyr Ser Val Ser His His Ala Ser Ala Phe His Asp
145                 150                 155                 160
gat gac atg gac ttc agt gac ata att tca tca caa caa gaa ata aac      528
Asp Asp Met Asp Phe Ser Asp Ile Ile Ser Ser Gln Gln Glu Ile Asn
                165                 170                 175
aga tta tca aat gaa gtt tca aga ctt gag tct gag gtt ggc cat tgg      576
Arg Leu Ser Asn Glu Val Ser Arg Leu Glu Ser Glu Val Gly His Trp
           180                 185                 190
agg cat att gct cag act tct aaa gca caa gga tca aat agc tct gat      624
Arg His Ile Ala Gln Thr Ser Lys Ala Gln Gly Ser Asn Ser Ser Asp
        195                 200                 205
caa agt gaa atc tgt aaa cta caa agt atc att aag gaa ctc aaa cag      672
Gln Ser Glu Ile Cys Lys Leu Gln Ser Ile Ile Lys Glu Leu Lys Gln
    210                 215                 220
att cga agt cag gaa atc gat gac cat caa cat gaa atg tca gtg ttg      720
Ile Arg Ser Gln Glu Ile Asp Asp His Gln His Glu Met Ser Val Leu
225                 230                 235                 240
cag aat gca cat caa cag aag ttg aca gat ata agt cgt cgg cat cga      768
Gln Asn Ala His Gln Gln Lys Leu Thr Asp Ile Ser Arg Arg His Arg
                245                 250                 255
gaa gaa tta cgt gac tat gaa gaa cga att gaa gaa ctg gaa aat ctg      816
Glu Glu Leu Arg Asp Tyr Glu Glu Arg Ile Glu Glu Leu Glu Asn Leu
           260                 265                 270
tta gaa caa ggt ggc tca gga att gta ata cct gat cac tca aaa atc      864
Leu Glu Gln Gly Gly Ser Gly Ile Val Ile Pro Asp His Ser Lys Ile
        275                 280                 285
cat gag atg caa aaa act att cag aat cta caa act gaa aaa gta gca      912
His Glu Met Gln Lys Thr Ile Gln Asn Leu Gln Thr Glu Lys Val Ala
    290                 295                 300
tct ata aaa aaa att gaa gaa ctt gag gat aaa ata aaa gac ata gat      960
Ser Ile Lys Lys Ile Glu Glu Leu Glu Asp Lys Ile Lys Asp Ile Asp
305                 310                 315                 320
aaa aaa ttg tct tct gca gaa aat gac aga gat gtt ttg agg aag gag      1008
Lys Lys Leu Ser Ser Ala Glu Asn Asp Arg Asp Val Leu Arg Lys Glu
                325                 330                 335
aaa gaa tgc cta aat gtt gaa aac aga caa ata aca gaa caa tgt gaa      1056
Lys Glu Cys Leu Asn Val Glu Asn Arg Gln Ile Thr Glu Gln Cys Glu
            340                 345                 350
agc ttg aaa ctg gaa tgt aaa ttg cag cat gat gct gag aag caa ggt      1104
Ser Leu Lys Leu Glu Cys Lys Leu Gln His Asp Ala Glu Lys Gln Gly
        355                 360                 365
gat act gtg aca gaa aaa gaa aga atc ctt cca cag agt aca tca gtg     1152
Asp Thr Val Thr Glu Lys Glu Arg Ile Leu Pro Gln Ser Thr Ser Val
    370                 375                 380
gaa gag gaa gtg ctc aaa ctg cag caa gca ctg tct gat gcg gaa aat     1200
Glu Glu Glu Val Leu Lys Leu Gln Gln Ala Leu Ser Asp Ala Glu Asn
385                 390                 395                 400
gaa att atg aga ctg agt aat tta tac cag gat aac agt ctc act gaa     1248
Glu Ile Met Arg Leu Ser Asn Leu Tyr Gln Asp Asn Ser Leu Thr Glu
                405                 410                 415
gat aat ttg aaa ctt aaa atg cat gtc gaa ttt tta gaa aaa cag aag     1296
Asp Asn Leu Lys Leu Lys Met His Val Glu Phe Leu Glu Lys Gln Lys
            420                 425                 430
tcc tta ttg agt caa gaa aag gaa gag ctt caa cta tca ctt tta aag     1344
Ser Leu Leu Ser Gln Glu Lys Glu Glu Leu Gln Leu Ser Leu Leu Lys
        435                 440                 445
ttg aac aat gaa tat gaa gtg att aaa agt aca gct gtg aga gac atg     1392
Leu Asn Asn Glu Tyr Glu Val Ile Lys Ser Thr Ala Val Arg Asp Met
    450                 455                 460
gat atg gat tca aca tta tgt gat tta aga ctg acc ttg gag gca aag     1440
Asp Met Asp Ser Thr Leu Cys Asp Leu Arg Leu Thr Leu Glu Ala Lys
465                 470                 475                 480
gac cag gaa ctc aat cag agt ctc act gag aag gaa ata ttg gtt gct     1488
Asp Gln Glu Leu Asn Gln Ser Leu Thr Glu Lys Glu Ile Leu Val Ala
                485                 490                 495
gag tta gag gaa ttg gac aga caa aac caa gaa gct aca aag cac atg     1536
Glu Leu Glu Glu Leu Asp Arg Gln Asn Gln Glu Ala Thr Lys His Met
            500                 505                 510
att ctg ata aaa gat cag cta tca aaa caa caa agt gag gga gaa act     1584
Ile Leu Ile Lys Asp Gln Leu Ser Lys Gln Gln Ser Glu Gly Glu Thr
        515                 520                 525
atc att agt aaa ctg aga aaa gat cta aat gat gaa aac aag aga gtc     1632
Ile Ile Ser Lys Leu Arg Lys Asp Leu Asn Asp Glu Asn Lys Arg Val
    530                 535                 540
cat caa ctt gaa gat gat aaa aag aat atg act aaa gaa cta aat gtg     1680
His Gln Leu Glu Asp Asp Lys Lys Asn Met Thr Lys Glu Leu Asn Val
545                 550                 555                 560
cag aaa gag aag tta gtt caa agt gaa ctc gtc cta aat ggc ttg cat     1728
Gln Lys Glu Lys Leu Val Gln Ser Glu Leu Val Leu Asn Gly Leu His
                565                 570                 575
tta gcc aag cag aag ctt gag gag aaa gta gaa gat tta gtg gat cag     1776
Leu Ala Lys Gln Lys Leu Glu Glu Lys Val Glu Asp Leu Val Asp Gln
            580                 585                 590
cta aat aaa tca caa aaa agt aat tta aac atg cag aag gag aac ttt     1824
Leu Asn Lys Ser Gln Lys Ser Asn Leu Asn Met Gln Lys Glu Asn Phe
        595                 600                 605
gga ctt aag gaa cat att aaa caa aat gag gaa gag ctt tct aga gtc     1872
Gly Leu Lys Glu His Ile Lys Gln Asn Glu Glu Glu Leu Ser Arg Val
    610                 615                 620
agg gat gag tta act cag tct cta agt cga gac tct ggc agt gat ttt     1920
Arg Asp Glu Leu Thr Gln Ser Leu Ser Arg Asp Ser Gly Ser Asp Phe
625                 630                 635                 640
aag gat gac tta ctt aaa gaa agg gaa gct gaa gtc aga aac tta aaa     1968
Lys Asp Asp Leu Leu Lys Glu Arg Glu Ala Glu Val Arg Asn Leu Lys
                645                 650                 655
caa aat ctt tca gaa ata gaa cag ctc aat gac agt tta aac aaa gtt     2016
Gln Asn Leu Ser Glu Ile Glu Gln Leu Asn Asp Ser Leu Asn Lys Val
            660                 665                 670
gcc ttt gat ctc aaa atg gaa aat gaa aag ttg gtc tta gcg tgt gaa    2064
Ala Phe Asp Leu Lys Met Glu Asn Glu Lys Leu Val Leu Ala Cys Glu
        675                 680                 685
gat ata aga cat cag ttg gaa gaa tca att gtt ggc agc aat cag atg    2112
Asp Ile Arg His Gln Leu Glu Glu Ser Ile Val Gly Ser Asn Gln Met
    690                 695                 700
tct ctg gaa aga aac act att gtg gag gct cta aaa atg gaa aaa gga    2160
Ser Leu Glu Arg Asn Thr Ile Val Glu Ala Leu Lys Met Glu Lys Gly
705                 710                 715                 720
cag tta gaa gca gaa ttg agt cga gct gac caa agg ctg ttg gaa gaa    2208
Gln Leu Glu Ala Glu Leu Ser Arg Ala Asp Gln Arg Leu Leu Glu Glu
                725                 730                 735
gcc agt aag tat gaa cag acg att caa gag cta tca aag gca cgt gat    2256
Ala Ser Lys Tyr Glu Gln Thr Ile Gln Glu Leu Ser Lys Ala Arg Asp
            740                 745                 750
ttg agg acc tct gct tta cag ctg gag cag cag cat tta atg aaa ctc    2304
Leu Arg Thr Ser Ala Leu Gln Leu Glu Gln Gln His Leu Met Lys Leu
        755                 760                 765
agt caa gag aag gac ttc gaa ata gca gaa ctt aaa aag aac att gaa    2352
Ser Gln Glu Lys Asp Phe Glu Ile Ala Glu Leu Lys Lys Asn Ile Glu
    770                 775                 780
cag atg gat act gat cat aaa gaa act aag gca att ttg tca tct att    2400
Gln Met Asp Thr Asp His Lys Glu Thr Lys Ala Ile Leu Ser Ser Ile
785                 790                 795                 800
tta gaa gag cag aag caa ttg acg caa ctt ata agt gag aag gaa att    2448
Leu Glu Glu Gln Lys Gln Leu Thr Gln Leu Ile Ser Glu Lys Glu Ile
                805                 810                 815
ttt att gag aaa ctt aaa gaa aga agt tca gag ctt cag gag gaa tta    2496
Phe Ile Glu Lys Leu Lys Glu Arg Ser Ser Glu Leu Gln Glu Glu Leu
            820                 825                 830
gag aaa tct act cag gcc tca agg aaa att gaa att tta aag caa acc    2544
Glu Lys Ser Thr Gln Ala Ser Arg Lys Ile Glu Ile Leu Lys Gln Thr
        835                 840                 845
att gag gag aaa gac aga agt ctt ggg tcc atg aaa gaa gaa aac aat    2592
Ile Glu Glu Lys Asp Arg Ser Leu Gly Ser Met Lys Glu Glu Asn Asn
    850                 855                 860
cat ctg aaa gaa gaa ctg gaa cgg ctc cgt gaa cag cag agt cga gcc    2640
His Leu Lys Glu Glu Leu Glu Arg Leu Arg Glu Gln Gln Ser Arg Ala
865                 870                 875                 880
gtg cct gtg gtg gag cct aaa ccc ctg gat agt gtt aca gag cta gaa    2688
Val Pro Val Val Glu Pro Lys Pro Leu Asp Ser Val Thr Glu Leu Glu
                885                 890                 895
tct gag gtg ttg cag cta aat ata gta aag agg aat ctt gag gag gaa    2736
Ser Glu Val Leu Gln Leu Asn Ile Val Lys Arg Asn Leu Glu Glu Glu
            900                 905                 910
ata aaa cgt cat cag aag att ata gaa gat caa aac cag agt aaa atg    2784
Ile Lys Arg His Gln Lys Ile Ile Glu Asp Gln Asn Gln Ser Lys Met
        915                 920                 925
cag ctg ctt cag tct cta gag gag cag aag aag gaa atg gat gaa ttt    2832
Gln Leu Leu Gln Ser Leu Glu Glu Gln Lys Lys Glu Met Asp Glu Phe
    930                 935                 940
aag tgc cag cat gag caa atg aac gtc aca cac acc caa ctc ttc tta    2880
Lys Cys Gln His Glu Gln Met Asn Val Thr His Thr Gln Leu Phe Leu
945                 950                 955                 960
gag aaa gat gag gag att aag aat  ttg caa aaa aca att gaa caa atc   2928
Glu Lys Asp Glu Glu Ile Lys Asn Leu Gln Lys Thr Ile Glu Gln Ile
                965                 970                 975
aaa acc caa tgg cat gaa gaa aga cag gac gtt caa atg gag aat tct    2976
Lys Thr Gln Trp His Glu Glu Arg Gln Asp Val Gln Met Glu Asn Ser
            980                 985                 990
gag ttc ttt caa gaa aca aaa gtg cag agc ctt aat cta gaa aat ggc    3024
Glu Phe Phe Gln Glu Thr Lys Val Gln Ser Leu Asn Leu Glu Asn Gly
        995                 1000                1005
agt gaa aag cat gat tta tcg aaa gcc gaa act gag agg tta gta         3069
Ser Glu Lys His Asp Leu Ser Lys Ala Glu Thr Glu Arg Leu Val
    1010                1015                1020
aaa gga ata aaa gaa cga gag ctg gag att aaa ctt cta aat gaa         3114
Lys Gly Ile Lys Glu Arg Glu Leu Glu Ile Lys Leu Leu Asn Glu
   1025                1030                1035
aag aat ata tct tta aca aaa caa att gat cag ctg tcc aaa gat         3159
Lys Asn Ile Ser Leu Thr Lys Gln Ile Asp Gln Leu Ser Lys Asp
    1040                1045                1050
gag gtt ggt aaa ctc act cag atc atc cag cag aaa gac tta gag         3204
Glu Val Gly Lys Leu Thr Gln Ile Ile Gln Gln Lys Asp Leu Glu
    1055                1060                1065
ata caa gct ctt cat gct agg att tct tca gct tcc tac acc cag         3249
Ile Gln Ala Leu His Ala Arg Ile Ser Ser Ala Ser Tyr Thr Gln
    1070                1075                1080
gat gtt gtc tac ctt cag cag cag ctg cag gcc tat gct atg gag         3294
Asp Val Val Tyr Leu Gln Gln Gln Leu Gln Ala Tyr Ala Met Glu
    1085                1090                1095
aga gaa caa gta tta gct gtt ttg agt gag aag acc agg gaa aat         3339
Arg Glu Gln Val Leu Ala Val Leu Ser Glu Lys Thr Arg Glu Asn
    1100                1105                1110
agc cat ctg aaa aca gaa tac cac aaa atg atg gat atc gtt gct         3384
Ser His Leu Lys Thr Glu Tyr His Lys Met Met Asp Ile Val Ala
    1115                1120                1125
gct aaa gaa gca gct ctc att aag ctg caa gat gaa aat aaa aaa         3429
Ala Lys Glu Ala Ala Leu Ile Lys Leu Gln Asp Glu Asn Lys Lys
    1130                1135                1140
ttg tct gct aga tcc gaa ggt ggt ggc cag gat atg ttt aga gag         3474
Leu Ser Ala Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gln Asp Met Phe Arg Glu
    1145                1150                1155
act gtc cag aat tta tca cgt atc att cga gaa aaa gac att gag         3519
Thr Val Gln Asn Leu Ser Arg Ile Ile Arg Glu Lys Asp Ile Glu
    1160                1165                1170
ata gat gcg tta agt cag aag tgc cag acc tta ttg aca gtt tta         3564
Ile Asp Ala Leu Ser Gln Lys Cys Gln Thr Leu Leu Thr Val Leu
    1175                1180                1185
caa aca tcg agc act ggg aat gag gtt gga ggc gtt aat agc aat         3609
Gln Thr Ser Ser Thr Gly Asn Glu Val Gly Gly Val Asn Ser Asn
    1190                1195                1200
cag ttt gag gag ctt cta cag gaa cgc gac aaa tta aaa caa caa         3654
Gln Phe Glu Glu Leu Leu Gln Glu Arg Asp Lys Leu Lys Gln Gln
    1205                1210                1215
gta aag aag atg gaa gag tgg aaa cag cag gtg atg acc aca gtt         3699
Val Lys Lys Met Glu Glu Trp Lys Gln Gln Val Met  Thr Thr Val
    1220                1225                1230
cag aat atg cag cat gag tca gcc cag ctt caa gaa gaa ctt cat         3744
Gln Asn Met Gln His Glu Ser Ala Gln Leu Gln Glu Glu Leu His
    1235                1240                1245
cag ctt cag gca caa gtt ttg gtt gac agt gat aat aat tct aaa         3789
Gln Leu Gln Ala Gln Val Leu Val Asp Ser Asp Asn Asn Ser Lys
    1250                1255                1260
tta caa gtg gat tat act ggc ctg atc caa agt tat gag cag aat    3834
Leu Gln Val Asp Tyr Thr Gly Leu Ile Gln Ser Tyr Glu Gln Asn
    1265                1270                1275
gaa act aaa ctc aaa aat ttt ggg cag gag cta gca caa gtt cag    3879
Glu Thr Lys Leu Lys Asn Phe Gly Gln Glu Leu Ala Gln Val Gln
    1280                1285                1290
cac agc ata ggg cag ctg tac agt acc aaa gac ctt ctc tta gga    3924
His Ser Ile Gly Gln Leu Tyr Ser Thr Lys Asp Leu Leu Leu Gly
    1295                1300                1305
aaa ctt gat att att tct cct caa ctc ccc tcc gga tca tcg cct    3969
Lys Leu Asp Ile Ile Ser Pro Gln Leu Pro Ser Gly Ser Ser Pro
    1310                1315                1320
cct tcc cag tca gca gag tct ctt gga atg gat aag cgt gat aca    4014
Pro Ser Gln Ser Ala Glu Ser Leu Gly Met Asp Lys Arg Asp Thr
    1325                1330                1335
tca agt gag tct tca aaa cag gag cta gaa gag cta aga aag tca    4059
Ser Ser Glu Ser Ser Lys Gln Glu Leu Glu Glu Leu Arg Lys Ser
    1340                1345                1350
ctg cag gaa aaa gat gca acg att aaa aca ctc cag gaa aat aac    4104
Leu Gln Glu Lys Asp Ala Thr Ile Lys Thr Leu Gln Glu Asn Asn
    1355                1360                1365
cac aga ttg tcc gat tca att gct gcc acc tca gag cta gaa aga    4149
His Arg Leu Ser Asp Ser Ile Ala Ala Thr Ser Glu Leu Glu Arg
    1370                1375                1380
aaa gaa cac gaa cag act gat tca gaa att aag cag cta aag gag    4194
Lys Glu His Glu Gln Thr Asp Ser Glu Ile Lys Gln Leu Lys Glu
    1385                1390                1395
aaa caa gat gtt tta caa aag tca ctt aag gag aaa gac ctc tta    4239
Lys Gln Asp Val Leu Gln Lys Ser Leu Lys Glu Lys Asp Leu Leu
    1400                1405                1410
atc aaa gcc aaa agt gat cag tta ctt tct tta aat gaa aat ttc    4284
Ile Lys Ala Lys Ser Asp Gln Leu Leu Ser Leu Asn Glu Asn Phe
    1415                1420                1425
acc aac aaa gtg aat gaa aat gaa ctc ttg agg cag gca gta acc    4329
Thr Asn Lys Val Asn Glu Asn Glu Leu Leu Arg Gln Ala Val Thr
    1430                1435                1440
aac ctg aag gag cgg gta tta att tta gaa atg gac att ggt aaa    4374
Asn Leu Lys Glu Arg Val Leu Ile Leu Glu Met Asp Ile Gly Lys
    1445                1450                1455
cta aaa gaa gaa aat gaa aaa ata gtt gaa aga acc agg gaa aag    4419
Leu Lys Glu Glu Asn Glu Lys Ile Val Glu Arg Thr Arg Glu Lys
    1460                1465                1470
gaa acg gag tat caa gca tta cag gag act aat atg aag ttt tcc    4464
Glu Thr Glu Tyr Gln Ala Leu Gln Glu Thr Asn Met Lys Phe Ser
    1475                1480                1485
atg atg ctt cga gaa aaa gag ttt gag tgc cat tca atg aag gaa    4509
Met Met Leu Arg Glu Lys Glu Phe Glu Cys His Ser Met Lys Glu
    1490                1495                1500
aaa tct ctt gca ttt gag cag cta ctg aaa gaa aaa gag cag ggc    4554
Lys Ser Leu Ala Phe Glu Gln Leu Leu Lys Glu Lys Glu Gln Gly
    1505                1510                1515
aag act ggg gag tta aat caa ctt tta aat gca gtt aag tca atg    4599
Lys Thr Gly Glu Leu Asn Gln Leu Leu Asn Ala Val Lys Ser Met
    1520                1525                1530
cag gag aag aca gtt aag ttt caa caa gag aga gac cag gtc atg    4644
Gln Glu Lys Thr Val Lys Phe Gln Gln Glu Arg Asp Gln Val Met
    1535                1540                1545
ttg gcc ctg aaa cag aaa caa atg gaa aac agt gct tta cag aat    4689
Leu Ala Leu Lys Gln Lys Gln Met Glu Asn Ser Ala Leu Gln Asn
    1550                1555                1560
gag gtt caa cat tta cgc gac aaa gaa tta cgc tta aac cag gag    4734
Glu Val Gln His Leu Arg Asp Lys Glu Leu Arg Leu Asn Gln Glu
    1565                1570                1575
cta gag aga ttg cgt aac cat ctt tta gaa tca gag gat tct tac    4779
Leu Glu Arg Leu Arg Asn His Leu Leu Glu Ser Glu Asp Ser Tyr
    1580                1585                1590
acc cgt gaa gct ttg gct gca gaa gag aga gag gcc aaa ctg aga    4824
Thr Arg Glu Ala Leu Ala Ala Glu Glu Arg Glu Ala Lys Leu Arg
    1595                1600                1605
agg aaa gtc aca gta ttg gag gaa aag cta gtt tca tct tct aat    4869
Arg Lys Val Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Val Ser Ser Ser Asn
    1610                1615                1620
gca atg gaa aat gca agc cat cag gcc agt ttg cag gta gag tca    4914
Ala Met Glu Asn Ala Ser His Gln Ala Ser Leu Gln Val Glu Ser
    1625                1630                1635
ctg cag gag cag ctg aat gtg gtc tct aag cag agg gat gaa acc    4959
Leu Gln Glu Gln Leu Asn Val Val Ser Lys Gln Arg Asp Glu Thr
    1640                1645                1650
gcc ctg cag ctc tct gtg tct cgg gaa caa gta aag cag tat gct    5004
Ala Leu Gln Leu Ser Val Ser Arg Glu Gln Val Lys Gln Tyr Ala
    1655                1660                1665
ctc tca ctc tcc aac ctg cag atg gta cta gag cat ttc cag caa    5049
Leu Ser Leu Ser Asn Leu Gln Met Val Leu Glu His Phe Gln Gln
    1670                1675                1680
gag gaa aaa gct gtg tat tct gct gaa cta gaa aag cac aaa cag    5094
Glu Glu Lys Ala Val Tyr Ser Ala Glu Leu Glu Lys His Lys Gln
    1685                1690                1695
ctt gta gct gaa tgg aag aaa aag gca gaa aat ctg gaa gga aaa    5139
Leu Val Ala Glu Trp Lys Lys Lys Ala Glu Asn Leu Glu Gly Lys
    1700                1705                1710
ctg atg tca tta cag gag cgt ttt gat gaa gca aat gct gcg ttg    5184
Leu Met Ser Leu Gln Glu Arg Phe Asp Glu Ala Asn Ala Ala Leu
    1715                1720                1725
gat tca gca tca aga ctt aca gag cag tta gat tta aag gaa gaa    5229
Asp Ser Ala Ser Arg Leu Thr Glu Gln Leu Asp Leu Lys Glu Glu
    1730                1735                1740
caa att gaa gaa ctt aaa aaa caa aat gaa ctc cga caa gaa atg    5274
Gln Ile Glu Glu Leu Lys Lys Gln Asn Glu Leu Arg Gln Glu Met
    1745                1750                1755
ctg gat gat gta caa aag aaa ttg atg aac tta gta aac agc aca    5319
Leu Asp Asp Val Gln Lys Lys Leu Met Asn Leu Val Asn Ser Thr
    1760                1765                1770
gaa gga aaa gtg gac aaa gtc cta atg aga aac ctc ttc att gga    5364
Glu Gly Lys Val Asp Lys Val Leu Met Arg Asn Leu  Phe Ile Gly
    1775                1780                1785
cat ttc cac aca cca aag cat cag cgc cac gag gtg tta cga tta    5409
His Phe His Thr Pro Lys His Gln Arg His Glu Val Leu Arg Leu
    1790                1795                1800
atg gga agc atc ctt ggt atc aag agg gag gaa atg gaa cag ttg    5454
Met Gly Ser Ile Leu Gly Ile Lys Arg Glu Glu Met Glu Gln Leu
    1805                1810                1815
ctt cat gaa gat cag ggt ggt gtt acc agg tgg atg act gga tgg    5499
Leu His Glu Asp Gln Gly Gly Val Thr Arg Trp Met Thr Gly Trp
    1820                1825                1830
ctt gga gga gga tca aaa agt gtc ccc aac aca cct ctg aga cca        5544
Leu Gly Gly Gly Ser Lys Ser Val Pro Asn Thr Pro Leu Arg Pro
    1835                1840                1845
aat caa caa tct gtg ctt aat agc tct ttt tca gaa ctt ttt gtt        5589
Asn Gln Gln Ser Val Leu Asn Ser Ser Phe Ser Glu Leu Phe Val
    1850                1855                1860
aaa ttt cta gaa aca gaa tct cat cca tct gtt cca cca cca aag        5634
Lys Phe Leu Glu Thr Glu Ser His Pro Ser Val Pro Pro Pro Lys
    1865                1870                1875
ctt tct  gtt cat gat atg aaa cct ctg gat tca cca gga agg aga       5679
Leu Ser Val His Asp Met Lys Pro Leu Asp Ser Pro Gly Arg Arg
    1880                1885                1890
aaa gta gtc ata cat gta tca gaa agt ttt aaa gaa acc aca gag        5724
Lys Val Val Ile His Val Ser Glu Ser Phe Lys Glu Thr Thr Glu
    1895                1900                1905
tcc aga tgt gga agg aga aca gat gtg aat cca ttc ttg gct ccc        5769
Ser Arg Cys Gly Arg Arg Thr Asp Val Asn Pro Phe Leu Ala Pro
    1910                1915                1920
cgc tct gca gct gtg cct ctc att aac cca gct gga ctt gga cct        5814
Arg Ser Ala Ala Val Pro Leu Ile Asn Pro Ala Gly Leu Gly Pro
    1925                1930                1935
ggt ggg cct ggg cat ctt ctt ttg aag ccc atc tca gac gtg ttg        5859
Gly Gly Pro Gly His Leu Leu Leu Lys Pro Ile Ser Asp Val Leu
    1940                1945                1950
ccc aca ttt aca cct ttg ccg gtg tca cct gac aac agt gct gga        5904
Pro Thr Phe Thr Pro Leu Pro Val Ser Pro Asp Asn Ser Ala Gly
    1955                1960                1965
gtt gtg ttg aaa gac ctt tta aag caa tag atgattctca agccagagac      5954
Val Val Leu Lys Asp Leu Leu Lys Gln
    1970                1975
 
aacatatgta gcactttaaa gaaaccatga acactatgtg tatgtacttt atcacaaagt  6014
ggcctttcag aaaaagtcat gtgtttgttt gc                                6046
 
<210>45
<211>1977
<212>PRT
<213>家犬
 
<400>45
 
Met Ser Ser Trp Leu Gly Gly Leu Gly Ser Gly Leu Gly Gln Ser Leu
1               5                   10                  15
Gly Gln Val Gly Gly Ser Leu Ala Ser Leu Thr Gly Gln Ile Ser Asn
            20                  25                  30
Phe Thr Lys Asp Met Leu Met Glu Gly Thr Glu Glu Val Glu Ala Glu
        35                  40                  45
Leu Pro Asn Ser Arg Arg Lys Glu Val Glu Ala Ile His Ala Ile Leu
    50                  55                  60
Arg Ser Glu Asn Glu Arg Leu Lys Glu Leu Cys Thr Asp Leu Glu Glu
65                  70                  75                  80
Lys His Glu Ala Ser Glu Leu Gln Ile Lys Gln Gln Ser Thr Asn Tyr
                85                  90                  95
Arg Asn Gln Leu Gln Gln Lys Glu Val Glu Ile Ser His Leu Lys Ala
            100                 105                 110
Arg Gln Ile Ala Leu Gln Asp Gln Leu Leu Lys Leu Gln Ser Ala Ala
        115                 120                 125
Gln Ser Ala His Ser Gly Ala Ser Ser Val Pro Ala Ala Leu Ala Ser
    130                 135                 140
Ser Pro Phe Ser Tyr Ser Val Ser His His Ala Ser Ala Phe His Asp
145                 150                 155                 160
Asp Asp Met Asp Phe Ser Asp Ile Ile Ser Ser Gln Gln Glu Ile Asn
                165                 170                 175
Arg Leu Ser Asn Glu Val Ser Arg Leu Glu Ser Glu Val Gly His Trp
            180                 185                 190
Arg His Ile Ala Gln Thr Ser Lys Ala Gln Gly Ser Asn Ser Ser Asp
        195                 200                 205
Gln Ser Glu Ile Cys Lys Leu Gln Ser Ile Ile Lys Glu Leu Lys Gln
    210                 215                 220
Ile Arg Ser Gln Glu Ile Asp Asp His Gln His Glu Met Ser Val Leu
225                 230                 235                 240
Gln Asn Ala His Gln Gln Lys Leu Thr Asp Ile Ser Arg Arg His Arg
                245                 250                 255
Glu Glu Leu Arg Asp Tyr Glu Glu Arg Ile Glu Glu Leu Glu Asn Leu
            260                 265                 270
Leu Glu Gln Gly Gly Ser Gly Ile Val Ile Pro Asp His Ser Lys Ile
        275                 280                 285
His Glu Met Gln Lys Thr Ile Gln Asn Leu Gln Thr Glu Lys Val Ala
    290                 295                 300
Ser Ile Lys Lys Ile Glu Glu Leu Glu Asp Lys Ile Lys Asp Ile Asp
305                 310                 315                 320
Lys Lys Leu Ser Ser Ala Glu Asn Asp Arg Asp Val Leu Arg Lys Glu
                325                 330                 335
Lys Glu Cys Leu Asn Val Glu Asn Arg Gln Ile Thr Glu Gln Cys Glu
            340                 345                 350
Ser Leu Lys Leu Glu Cys Lys Leu Gln His Asp Ala Glu Lys Gln Gly
        355                 360                 365
Asp Thr Val Thr Glu Lys Glu Arg Ile Leu Pro Gln Ser Thr Ser Val
    370                 375                 380
Glu Glu Glu Val Leu Lys Leu Gln Gln Ala Leu Ser Asp Ala Glu Asn
385                 390                 395                 400
Glu Ile Met Arg Leu Ser Asn Leu Tyr Gln Asp Asn Ser Leu Thr Glu
                405                 410                 415
Asp Asn Leu Lys Leu Lys Met His Val Glu Phe Leu Glu Lys Gln Lys
            420                 425                 430
Ser Leu Leu Ser Gln Glu Lys Glu Glu Leu Gln Leu Ser Leu Leu Lys
        435                 440                 445
Leu Asn Asn Glu Tyr Glu Val Ile Lys Ser Thr Ala Val Arg Asp Met
    450                 455                 460
Asp Met Asp Ser Thr Leu Cys Asp Leu Arg Leu Thr Leu Glu Ala Lys
465                 470                 475                 480
Asp Gln Glu Leu Asn Gln Ser Leu Thr Glu Lys Glu Ile Leu Val Ala
                485                 490                 495
Glu Leu Glu Glu Leu Asp Arg Gln Asn Gln Glu Ala Thr Lys His Met
            500                 505                 510
Ile Leu Ile Lys Asp Gln Leu Ser Lys Gln Gln Ser Glu Gly Glu Thr
        515                 520                 525
Ile Ile Ser Lys Leu Arg Lys Asp Leu Asn Asp Glu Asn Lys Arg Val
    530                 535                 540
His Gln Leu Glu Asp Asp Lys Lys Asn Met Thr Lys Glu Leu Asn Val
545                 550                 555                 560
Gln Lys Glu Lys Leu Val Gln Ser Glu Leu Val Leu Asn Gly Leu His
                565                 570                 575
Leu Ala Lys Gln Lys Leu Glu Glu Lys Val Glu Asp Leu Val Asp Gln
            580                 585                 590
Leu Asn Lys Ser Gln Lys Ser Asn Leu Asn Met Gln Lys Glu Asn Phe
        595                 600                 605
Gly Leu Lys Glu His Ile Lys Gln Asn Glu Glu Glu Leu Ser Arg Val
    610                 615                 620
Arg Asp Glu Leu Thr Gln Ser Leu Ser Arg Asp Ser Gly Ser Asp Phe
625                 630                 635
Lys Asp Asp Leu Leu Lys Glu Arg Glu Ala Glu Val Arg Asn Leu Lys
                640                 645                 650
Gln Asn Leu Ser Glu Ile Glu Gln Leu Asn Asp Ser Leu Asn Lys Val
            660                 665                 670
Ala Phe Asp Leu Lys Met Glu Asn Glu Lys Leu Val Leu Ala Cys Glu
        675                 680                 685
Asp Ile Arg His Gln Leu Glu Glu Ser Ile Val Gly Ser Asn Gln Met
    690                 695                 700
Ser Leu Glu Arg Asn Thr Ile Val Glu Ala Leu Lys Met Glu Lys Gly
705                 710                 715                 720
Gln Leu Glu Ala Glu Leu Ser Arg Ala Asp Gln Arg Leu Leu Glu Glu
                725                 730                 735
Ala Ser Lys Tyr Glu Gln Thr Ile Gln Glu Leu Ser Lys Ala Arg Asp
            740                 745                 750
Leu Arg Thr Ser Ala Leu Gln Leu Glu Gln Gln His Leu Met Lys Leu
        755                 760                 765
Ser Gln Glu Lys Asp Phe Glu Ile Ala Glu Leu Lys Lys Asn Ile Glu
    770                 775                 780
Gln Met Asp Thr Asp His Lys Glu Thr Lys Ala Ile Leu Ser Ser Ile
785                 790                 795                 800
Leu Glu Glu Gln Lys Gln Leu Thr Gln Leu Ile Ser Glu Lys Glu Ile
                805                 810                 815
Phe Ile Glu Lys Leu Lys Glu Arg Ser Ser Glu Leu Gln Glu Glu Leu
            820                 825                 830
Glu Lys Ser Thr Gln Ala Ser Arg Lys Ile Glu Ile Leu Lys Gln Thr
        835                 840                 845
Ile Glu Glu Lys Asp Arg Ser Leu Gly Ser Met Lys Glu Glu Asn Asn
    850                 855                 860
His Leu Lys Glu Glu Leu Glu Arg Leu Arg Glu Gln Gln Ser Arg Ala
865                 870                 875                 880
Val Pro Val Val Glu Pro Lys Pro Leu Asp Ser Val Thr Glu Leu Glu
                885                 890                 895
Ser Glu Val Leu Gln Leu Asn Ile Val Lys Arg Asn Leu Glu Glu Glu
            900                 905                 910
Ile Lys Arg His Gln Lys Ile Ile Glu Asp Gln Asn Gln Ser Lys Met
        915                 920                 925
Gln Leu Leu Gln Ser Leu Glu Glu Gln Lys Lys Glu Met Asp Glu Phe
    930                 935                 940
Lys Cys Gln His Glu Gln Met Asn Val Thr Hi s Thr Gln Leu Phe Leu
945                 950                 955                 960
Glu Lys Asp Glu Glu Ile Lys Asn Leu Gln Lys Thr Ile Glu Gln Ile
                965                 970                 975
Lys Thr Gln Trp His Glu Glu Arg Gln Asp Val Gln Met Glu Asn Ser
            980                 985                 990
Glu Phe Phe Gln Glu Thr Lys Val  Gln Ser Leu Asn Leu  Glu Asn Gly
        995                 1000                 1005
Ser Glu Lys His Asp Leu Ser Lys Ala Glu Thr Glu Arg Leu Val
    1010                1015                1020
Lys Gly Ile Lys Glu Arg Glu Leu Glu Ile Lys Leu Leu Asn Glu
    1025                1030                1035
Lys Asn Ile Ser Leu Thr Lys Gln Ile Asp Gln Leu Ser Lys Asp
    1040                1045                1050
Glu Val Gly Lys Leu Thr Gln Ile Ile Gln Gln Lys Asp Leu Glu
    1055                1060                1065
Ile Gln Ala Leu His Ala Arg Ile Ser Ser Ala Ser Tyr Thr Gln
    1070                1075                1080
Asp Val Val Tyr Leu Gln Gln Gln Leu Gln Ala Tyr Ala Met Glu
    1085                1090                1095
Arg Glu Gln Val Leu Ala Val Leu Ser Glu Lys Thr Arg Glu Asn
    1100                1105                1110
Ser His Leu Lys Thr Glu Tyr His Lys Met Met Asp Ile Val Ala
    1115                1120                1125
Ala Lys Glu Ala Ala Leu Ile Lys Leu Gln Asp Glu Asn Lys Lys
    1130                1135                1140
Leu Ser Ala Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gln Asp Met Phe Arg Glu
    1145                1150                1155
Thr Val Gln Asn Leu Ser Arg Ile Ile Arg Glu Lys Asp Ile Glu
    1160                1165                1170
Ile Asp Ala Leu Ser Gln Lys Cys Gln Thr Leu Leu Thr Val Leu
    1175                1180                1185
Gln Thr Ser Ser Thr Gly Asn Glu Val Gly Gly Val Asn Ser Asn
    1190                1195                1200
Gln Phe Glu Glu Leu Leu Gln Glu Arg Asp Lys Leu Lys Gln Gln
    1205                1210                1215
Val Lys Lys Met Glu Glu Trp Lys Gln Gln Val Met Thr Thr Val
    1220                1225                1230
Gln Asn Met Gln His Glu Ser Ala Gln Leu Gln Glu Glu Leu His
    1235                1240                1245
Gln Leu Gln Ala Gln Val Leu Val Asp Ser Asp Asn Asn Ser Lys
    1250                1255                1260
Leu Gln Val Asp Tyr Thr Gly Leu Ile Gln Ser Tyr Glu Gln Asn
    1265                1270                1275
Glu Thr Lys Leu Lys Asn Phe Gly Gln Glu Leu Ala  Gln Val Gln
    1280                1285                1290
His Ser Ile Gly Gln Leu Tyr Ser Thr Lys Asp Leu Leu Leu Gly
    1295                1300                1305
Lys Leu Asp Ile Ile Ser Pro Gln Leu Pro Ser Gly Ser Ser Pro
    1310                1315                1320
Pro Ser Gln Ser Ala Glu Ser Leu Gly Met Asp Lys Arg Asp Thr
    1325                1330                1335
Ser Ser Glu Ser Ser Lys Gln Glu Leu Glu Glu Leu Arg Lys Ser
    1340                1345                1350
Leu Gln Glu Lys Asp Ala Thr Ile Lys Thr Leu Gln Glu Asn Asn
    1355                1360                1365
His Arg Leu Ser Asp Ser Ile Ala Ala Thr Ser Glu Leu Glu Arg
    1370                1375                1380
Lys Glu His Glu Gln Thr Asp Ser Glu Ile Lys Gln Leu Lys Glu
    1385                1390                1395
Lys Gln Asp Val Leu Gln Lys Ser Leu Lys Glu Lys Asp Leu Leu
    1400                1405                1410
Ile Lys Ala Lys Ser Asp Gln Leu Leu Ser Leu Asn Glu Asn Phe
    1415                1420                1425
Thr Asn Lys Val Asn Glu Asn Glu Leu Leu Arg Gln Ala Val Thr
    1430                1435                1440
Asn Leu Lys Glu Arg Val Leu Ile Leu Glu Met Asp Ile Gly Lys
    1445                1450                1455
Leu Lys Glu Glu Asn Glu Lys Ile Val Glu Arg Thr Arg Glu Lys
    1460                1465                1470
Glu Thr Glu Tyr Gln Ala Leu Gln Glu Thr Asn Met Lys Phe Ser
    1475                1480                1485
Met Met Leu Arg Glu Lys Glu Phe Glu Cys His Ser Met Lys Glu
    1490                1495                1500
Lys Ser Leu Ala Phe Glu Gln Leu Leu Lys Glu Lys Glu Gln Gly
    1505                1510                1515
Lys Thr Gly Glu Leu Asn Gln Leu Leu Asn Ala Val Lys Ser Met
    1520                1525                1530
Gln Glu Lys Thr Val Lys Phe Gln Gln Glu Arg Asp Gln Val Met
    1535                1540                1545
Leu Ala Leu Lys Gln Lys Gln Met Glu Asn Ser Ala Leu Gln Asn
    1550                1555                1560
Glu Val Gln His Leu Arg Asp Lys Glu Leu Arg Leu Asn Gln Glu
    1565                1570                1575
Leu Glu Arg Leu Arg Asn His Leu Leu Glu Ser Glu Asp Ser Tyr
    1580                1585                1590
Thr Arg Glu Ala Leu Ala Ala Glu Glu Arg Glu Ala Lys Leu Arg
    1595                1600                1605
Arg Lys Val Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Val Ser Ser Ser Asn
    1610                1615                1620
Ala Met Glu Asn Ala Ser His Gln Ala Ser Leu Gln Val Glu Ser
    1625                1630                1635
Leu Gln Glu Gln Leu Asn Val Val Ser Lys Gln Arg Asp Glu Thr
    1640                1645                1650
Ala Leu Gln Leu Ser Val Ser Arg Glu Gln Val Lys Gln Tyr Ala
    1655                1660                1665
Leu Ser Leu Ser Asn Leu Gln Met Val Leu Glu His Phe Gln Gln
    1670                1675                1680
Glu Glu Lys Ala Val Tyr Ser Ala Glu Leu Glu Lys His Lys Gln
    1685                1690                1695
Leu Val Ala Glu Trp Lys Lys Lys Ala Glu Asn Leu Glu Gly Lys
    1700                1705                1710
Leu Met Ser Leu Gln Glu Arg Phe Asp Glu Ala Asn Ala Ala Leu
    1715                1720                1725
Asp Ser Ala Ser Arg Leu Thr Glu Gln Leu Asp Leu Lys Glu Glu
    1730                1735                1740
Gln Ile Glu Glu Leu Lys Lys Gln Asn Glu Leu Arg Gln Glu Met
    1745                1750                1755
Leu Asp Asp Val Gln Lys Lys Leu Met Asn Leu Val Asn Ser Thr
    1760                1765                1770
Glu Gly Lys Val Asp Lys Val Leu Met Arg Asn Leu Phe Ile Gly
    1775                1780                1785
His Phe His Thr Pro Lys His Gln Arg His Glu Val Leu Arg Leu
    1790                1795                1800
Met Gly Ser Ile Leu Gly Ile Lys Arg Glu Glu Met Glu Gln Leu
    1805                1810                1815
Leu His Glu Asp Gln Gly Gly Val Thr Arg Trp Met Thr Gly Trp
    1820                1825                1830
Leu Gly Gly Gly Ser Lys Ser Val Pro Asn Thr Pro Leu Arg Pro
    1835                1840                1845
Asn Gln Gln Ser Val Leu Asn Ser Ser Phe Ser Glu Leu Phe Val
    1850                1855                1860
Lys Phe Leu Glu Thr Glu Ser His Pro Ser Val Pro Pro Pro Lys
    1865                1870                1875
Leu Ser Val His Asp Met Lys Pro Leu Asp Ser Pro Gly Arg Arg
    1880                1885                1890
Lys Val Val Ile His Val Ser Glu Ser Phe Lys Glu Thr Thr Glu
    1895                1900                1905
Ser Arg Cys Gly Arg Arg Thr Asp Val Asn Pro Phe Leu Ala Pro
    1910                1915                1920
Arg Ser Ala Ala Val Pro Leu Ile Asn Pro Ala Gly Leu Gly Pro
    1925                1930                1935
Gly Gly Pro Gly His Leu Leu Leu Lys Pro Ile Ser Asp Val Leu
    1940                1945                1950
Pro Thr Phe Thr Pro Leu Pro Val Ser Pro Asp Asn Ser Ala Gly
    1955                1960                1965
Val Val Leu Lys Asp Leu Leu Lys Gln
    1970                1975
 
<210>46
<211>6452
<212>DNA
<213>人
 
<220>
<221>CDS
<222>(357)..(6296)
<223>
 
<400>46
cgagcgagtg tcatggcggc cggcgtcgag ttggcaggag taacccacgg aactgaggaa     60
agtcattaga gctgagaaag aagtggccca atctggacgg tgggaattcg tgggaatgag    120
cagaaggccc tccgtagtga ctgtgtcact agaggcgggc ccctggtaaa attccaggcc    180
aggcctctgc gtttctaggc agaacctgga gtcggccttg cctgagaacc cagctttgtg    240
ttatcgtatc ctgtctcgcg aaggcaggcg ttcaaggata tttggtcgga tcgcccggcg    300
gcgctaaacg ttttcttttt tccgagcgga ccgggtcgtt ctctaaactc gccgcg atg    359
                                                              Met
                                                              1
tcg tcc tgg ctt ggg ggc ctc ggc tcc gga ttg ggc cag tct ctg ggt      407
Ser Ser Trp Leu Gly Gly Leu Gly Ser Gly Leu Gly Gln Ser Leu Gly
            5                   10                  15
caa gtc ggg ggc agc ctg gct tcc ctc act ggc cag ata tca aac ttt      455
Gln Val Gly Gly Ser Leu Ala Ser Leu Thr Gly Gln Ile Ser Asn Phe
        20                  25                  30
aca aag gat atg ctg atg gag ggc acg gag gaa gtg gaa gca gaa tta      503
Thr Lys Asp Met Leu Met Glu Gly Thr Glu Glu Val Glu Ala Glu Leu
    35                  40                  45
cct gat tct agg aca aag gaa att gaa gcc att cat gca atc ttg aga      551
Pro Asp Ser Arg Thr Lys Glu Ile Glu Ala Ile His Ala Ile Leu Arg
50                  55                  60                  65
tca gag aat gaa agg ctt aag aaa ctt tgt act gat cta gaa gag aaa      599
Ser Glu Asn Glu Arg Leu Lys Lys Leu Cys Thr Asp Leu Glu Glu Lys
                70                  75                  80
cat gaa gca tca gag att caa ata aag cag caa tct aca agt tac cga    647
His Glu Ala Ser Glu Ile Gln Ile Lys Gln Gln Ser Thr Ser Tyr Arg
            85                  90                  95
aat caa ctt caa caa aaa gag gta gaa atc agc cat ctt aaa gcc aga    695
Asn Gln Leu Gln Gln Lys Glu Val Glu Ile Ser His Leu Lys Ala Arg
        100                 105                 110
cag att gca ctc cag gat cag ttg ctg aaa ctg cag tca gct gct cag    743
Gln Ile Ala Leu Gln Asp Gln Leu Leu Lys Leu Gln Ser Ala Ala Gln
    115                 120                 125
tca gta cct tca gga gct ggt gta cca gca acc act gca tca tct tca    791
Ser Val Pro Ser Gly Ala Gly Val Pro Ala Thr Thr Ala Ser Ser Ser
130                 135                 140                 145
ttc gct tat ggg att agt cat cat cct tca gct ttc cat gac gat gac    839
Phe Ala Tyr Gly Ile Ser His His Pro Ser Ala Phe His Asp Asp Asp
                150                 155                 160
atg gac ttt ggt gat ata att tca tcc caa caa gaa ata aac cga ctc    887
Met Asp Phe Gly Asp Ile Ile Ser Ser Gln Gln Glu Ile Asn Arg Leu
            165                 170                 175
tca aat gaa gtt tca aga ctt gag tct gaa gtt ggc cat tgg agg cat    935
Ser Asn Glu Val Ser Arg Leu Glu Ser Glu Val Gly His Trp Arg His
        180                 185                 190
att gct cag act tcc aaa gca caa gga aca gat aac tct gat caa agt    983
Ile Ala Gln Thr Ser Lys Ala Gln Gly Thr Asp Asn Ser Asp Gln Ser
    195                 200                 205
gaa ata tgt aaa cta caa aat atc att aag gaa cta aaa cag aac cga    1031
Glu Ile Cys Lys Leu Gln Asn Ile Ile Lys Glu Leu Lys Gln Asn Arg
210                 215                 220                 225
agt cag gaa att gat gac cat caa cat gaa atg tca gta ctg cag aat    1079
Ser Gln Glu Ile Asp Asp His Gln His Glu Met Ser Val Leu Gln Asn
                230                 235                 240
gca cac caa cag aaa ttg aca gaa ata agt cga cga cat cga gaa gaa    1127
Ala His Gln Gln Lys Leu Thr Glu Ile Ser Arg Arg His Arg Glu Glu
            245                 250                 255
tta agt gac tat gaa gaa cga att gaa gaa ctt gaa aat ctg tta caa    1175
Leu Ser Asp Tyr Glu Glu Arg Ile Glu Glu Leu Glu Asn Leu Leu Gln
        260                 265                 270
caa ggt ggc tct gga gtt ata gaa act gat ctc tct aaa atc tat gag    1223
Gln Gly Gly Ser Gly Val Ile Glu Thr Asp Leu Ser Lys Ile Tyr Glu
    275                 280                 285
atg caa aaa act att caa gtt cta caa ata gaa aaa gtg gag tct acc    1271
Met Gln Lys Thr Ile Gln Val Leu Gln Ile Glu Lys Val Glu Ser Thr
290                 295                 300                 305
aaa aaa atg gaa caa ctt gag gat aaa ata aaa gat ata aat aaa aaa    1319
Lys Lys Met Glu Gln Leu Glu Asp Lys Ile Lys Asp Ile Asn Lys Lys
                310                 315                 320
tta tct tct gca gaa aat gac aga gat att ttg agg agg gaa caa gaa    1367
Leu Ser Ser Ala Glu Asn Asp Arg Asp Ile Leu Arg Arg Glu Gln Glu
            325                 330                 335
cag cta aat gtg gaa aag aga caa ata atg gaa gaa tgt gaa aac ttg    1415
Gln Leu Asn Val Glu Lys Arg Gln Ile Met Glu Glu Cys Glu Asn Leu
        340                 345                 350
aaa ttg gaa tgt agt aaa ttg cag cct tct gct gtg aag caa agt gat    1463
Lys Leu Glu Cys Ser Lys Leu Gln Pro Ser Ala Val Lys Gln Ser Asp
    355                 360                 365
act atg aca gaa aag gaa aga att ctt gcc cag agt gca tca gtg gaa    1511
Thr Met Thr Glu Lys Glu Arg Ile Leu Ala Gln Ser Ala Ser Val Glu
370                 375                 380                 385
gaa gtg ttc aga cta caa caa gca ctg tct gat gcc gaa aat gaa ata     1559
Glu Val Phe Arg Leu Gln Gln Ala Leu Ser Asp Ala Glu Asn Glu Ile
                390                 395                 400
atg aga ttg agt agt tta aac cag gat aac agt ctt gct gaa gac aat     1607
Met Arg Leu Ser Ser Leu Asn Gln Asp Asn Ser Leu Ala Glu Asp Asn
            405                 410                 415
ctg aaa ctt aaa atg cgt atc gaa gtt tta gaa aaa gag aag tca tta     1655
Leu Lys Leu Lys Met Arg Ile Glu Val Leu Glu Lys Glu Lys Ser Leu
        420                 425                 430
ctg agt caa gaa aag gaa gaa ctt cag atg tca ctt tta aaa ttg aac     1703
Leu Ser Gln Glu Lys Glu Glu Leu Gln Met Ser Leu Leu Lys Leu Asn
    435                 440                 445
aat gaa tat gaa gta att aaa agt aca gct aca aga gac ata agt ttg     1751
Asn Glu Tyr Glu Val Ile Lys Ser Thr Ala Thr Arg Asp Ile Ser Leu
450                 455                 460                 465
gat tca gaa tta cat gac tta aga ctt aat ttg gag gca aag gaa caa     1799
Asp Ser Glu Leu His Asp Leu Arg Leu Asn Leu Glu Ala Lys Glu Gln
                470                 475                 480
gaa ctc aat cag agt att agt gaa aag gaa aca ctg ata gct gag ata     1847
Glu Leu Asn Gln Ser Ile Ser Glu Lys Glu Thr Leu Ile Ala Glu Ile
            485                 490                 495
gaa gaa ttg gac aga cag aat caa gaa gct aca aag cac atg att ttg     1895
Glu Glu Leu Asp Arg Gln Asn Gln Glu Ala Thr Lys His Met Ile Leu
        500                 505                 510
ata aaa gat cag cta tca aaa caa caa aat gaa gga gat agc atc atc     1943
Ile Lys Asp Gln Leu Ser Lys Gln Gln Asn Glu Gly Asp Ser Ile Ile
    515                 520                 525
agt aaa ctg aaa caa gat cta aat gat gaa aaa aag aga gtt cat caa     1991
Ser Lys Leu Lys Gln Asp Leu Asn Asp Glu Lys Lys Arg Val His Gln
530                 535                 540                 545
ctt gaa gat gat aaa atg gac att act aaa gag tta gat gta cag aaa     2039
Leu Glu Asp Asp Lys Met Asp Ile Thr Lys Glu Leu Asp Val Gln Lys
                550                 555                 560
gaa aag cta att caa agt gaa gtg gcc cta aat gat tta cat tta acc     2087
Glu Lys Leu Ile Gln Ser Glu Val Ala Leu Asn Asp Leu His Leu Thr
            565                 570                 575
aag cag aaa ctt gag gac aaa gta gaa aat tta gta gat cag cta aat     2135
Lys Gln Lys Leu Glu Asp Lys Val Glu Asn Leu Val Asp Gln Leu Asn
        580                 585                 590
aaa tca caa gaa agt aat gta agc atc cag aag gag aat tta gaa ctt     2183
Lys Ser Gln Glu Ser Asn Val Ser Ile Gln Lys Glu Asn Leu Glu Leu
    595                 600                 605
aag gag cat att aga caa aat gag gag gag ctt tct aga ata agg aat     2231
Lys Glu His Ile Arg Gln Asn Glu Glu Glu Leu Ser Arg Ile Arg Asn
610                 615                 620                 625
gag tta atg cag tct cta aat caa gac tct aat agt aat ttt aag gat     2279
Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn Gln Asp Ser Asn Ser Asn Phe Lys Asp
                630                 635                 640
acc tta ctt aaa gaa aga gaa gct gaa gtt aga aac tta aag caa aat     2327
Thr Leu Leu Lys Glu Arg Glu Ala Glu Val Arg Asn Leu Lys Gln Asn
            645                 650                 655
ctt tca gaa tta gaa cag ctc aat gaa aat tta aag aaa gtt gct ttt     2375
Leu Ser Glu Leu Glu Gln Leu Asn Glu Asn Leu Lys Lys Val Ala Phe
        660                 665                 670
gat gtc aaa atg gaa aat gaa aag tta gtt tta gca tgt gaa gat gtg     2423
Asp Val Lys Met Glu Asn Glu Lys Leu Val Leu Ala Cys Glu Asp Val
    675                 680                 685
agg cat cag tta gaa gaa tgt ctt gct ggt aac aat cag ctt tct ctg    2471
Arg His Gln Leu Glu Glu Cys Leu Ala Gly Asn Asn Gln Leu Ser Leu
690                 695                 700                 705
gaa aaa aac act att gtg gag act cta aaa atg gaa aaa gga gag ata    2519
Glu Lys Asn Thr Ile Val Glu Thr Leu Lys Met Glu Lys Gly Glu Ile
                710                 715                 720
gag gca gaa ttg tgt tgg gct aaa aag agg ctg ttg gaa gaa gca aac    2567
Glu Ala Glu Leu Cys Trp Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Glu Ala Asn
            725                 730                 735
aag tat gag aaa acc att gaa gaa ctg tca aat gca cgt aat ttg aat    2615
Lys Tyr Glu Lys Thr Ile Glu Glu Leu Ser Asn Ala Arg Asn Leu Asn
        740                 745                 750
acc tct gcc  tta cag ctg gaa cat gag cat tta att aaa ctc aat caa   2663
Thr Ser Ala Leu Gln Leu Glu His Glu His Leu Ile Lys Leu Asn Gln
    755                 760                 765
aag aaa gac atg gaa ata gca gaa ctc aaa aag aat att gaa caa atg    2711
Lys Lys Asp Met Glu Ile Ala Glu Leu Lys Lys Asn Ile Glu Gln Met
770                 775                 780                 785
gat act gac cat aaa gaa act aag gac gtt ttg tca tct agt tta gaa    2759
Asp Thr Asp His Lys Glu Thr Lys Asp Val Leu Ser Ser Ser Leu Glu
                790                 795                 800
gag cag aag cag ttg aca caa ctt ata aac aag aaa gaa att ttt att    2807
Glu Gln Lys Gln Leu Thr Gln Leu Ile Asn Lys Lys Glu Ile Phe Ile
            805                 810                 815
gaa aag ctt aaa gaa aga agt tca aag ctg cag gag gaa ttg gat aaa    2855
Glu Lys Leu Lys Glu Arg Ser Ser Lys Leu Gln Glu Glu Leu Asp Lys
        820                 825                 830
tat tct cag gcc tta aga aaa aat gaa att tta aga cag acc ata gag    2903
Tyr Ser Gln Ala Leu Arg Lys Asn Glu Ile Leu Arg Gln Thr Ile Glu
    835                 840                 845
gaa aaa gac cga agt ctt gga tcc atg aaa gag gaa aat aat cat ctg    2951
Glu Lys Asp Arg Ser Leu Gly Ser Met Lys Glu Glu Asn Asn His Leu
850                 855                 860                 865
caa gaa gaa ttg gaa cga ctc agg gaa gag cag agt cga acc gca cct    2999
Gln Glu Glu Leu Glu Arg Leu Arg Glu Glu Gln Ser Arg Thr Ala Pro
                870                 875                 880
gtg gct gac cct aaa acc ctt gat agt gtt act gaa cta gca tct gag    3047
Val Ala Asp Pro Lys Thr Leu Asp Ser Val Thr Glu Leu Ala Ser Glu
            885                 890                 895
gta tct caa ctg aac acg atc aag gaa cat ctt gaa gag gaa att aaa    3095
Val Ser Gln Leu Asn Thr Ile Lys Glu His Leu Glu Glu Glu Ile Lys
        900                 905                 910
cat cat caa aag ata att gaa gat caa aac cag agt aag atg caa cta    3143
His His Gln Lys Ile Ile Glu Asp Gln Asn Gln Ser Lys Met Gln Leu
    915                 920                 925
ctt cag tct tta caa gag caa aag aag gaa atg gat gag ttt aga tac    3191
Leu Gln Ser Leu Gln Glu Gln Lys Lys Glu Met Asp Glu Phe Arg Tyr
930                 935                 940                 945
cag cat gag caa atg aac gcc aca cac acc cag ctc ttt tta gag aag    3239
Gln His Glu Gln Met Asn Ala Thr His Thr Gln Leu Phe Leu Glu Lys
                950                 955                 960
gat gag gaa att aag agt ttg caa aaa aca att gaa caa atc aaa acc    3287
Asp Glu Glu Ile Lys Ser Leu Gln Lys Thr Ile Glu Gln Ile Lys Thr
            965                 970                 975
cag ttg cat gaa gaa aga cag gac att caa aca gat aac tct gat att    3335
Gln Leu His Glu Glu Arg Gln Asp Ile Gln Thr Asp Asn Ser Asp Ile
        980                 985                 990
ttt caa gaa aca aaa gtt cag agc ctt aat ata gaa aat gga agt gaa  3383
Phe Gln Glu Thr Lys Val Gln Ser Leu Asn Ile Glu Asn Gly Ser Glu
    995                 1000                1005
aag cat gat tta tct aaa gct gaa acg gaa aga tta gtg aaa gga      3428
Lys His Asp Leu Ser Lys Ala Glu Thr Glu Arg Leu Val Lys Gly
1010                1015                1020
ata aaa gag cga gaa ctg gag att aaa ctt cta aat gaa aag aat      3473
Ile Lys Glu Arg Glu Leu Glu Ile Lys Leu Leu Asn Glu Lys Asn
1025                1030                1035
ata tct tta act aaa cag att gat cag ttg tcc aaa gat gaa gtt      3518
Ile Ser Leu Thr Lys Gln Ile Asp Gln Leu Ser Lys Asp Glu Val
1040                1045                1050
ggt aaa cta act cag att att cag cag aaa gat ttg gag ata caa      3563
Gly Lys Leu Thr Gln Ile Ile Gln Gln Lys Asp Leu Glu Ile Gln
1055                1060                1065
gct ctt cat gct aga att tct tca act tcc cat act caa gat gtt      3608
Ala Leu His Ala Arg Ile Ser Ser Thr Ser His Thr Gln Asp Val
1070                1075                1080
gtt tac ctt caa cag caa ctg cag gct tat gct atg gaa aga gaa      3653
Val Tyr Leu Gln Gln Gln Leu Gln Ala Tyr Ala Met Glu Arg Glu
1085                1090                1095
aag gta ttt gct gtt ttg aat gag aag act agg gaa aat agc cat      3698
Lys Val Phe Ala Val Leu Asn Glu Lys Thr Arg Glu Asn Ser His
1100                1105                1110
cta aaa aca gaa tat cac aaa atg atg gat att gtt gct gcc aag      3743
Leu Lys Thr Glu Tyr His Lys Met Met Asp Ile Val Ala Ala Lys
1115                1120                1125
gaa gca gct ctt atc aaa ctg caa gat gaa aat aaa aaa ttg tcc      3788
Glu Ala Ala Leu Ile Lys Leu Gln Asp Glu Asn Lys Lys Leu Ser
1130                1135                1140
act aga ttt gaa agt agt ggc caa gat atg ttt aga gaa act att      3833
Thr Arg Phe Glu Ser Ser Gly Gln Asp Met Phe Arg Glu Thr Ile
1145                1150                1155
cag aat tta tca cgt atc att cga gaa aaa gac atc gaa ata gat      3878
Gln Asn Leu Ser Arg Ile Ile Arg Glu Lys Asp Ile Glu Ile Asp
1160                1165                1170
gca cta agt cag aaa tgt cag act tta ttg gca gtt tta caa aca      3923
Ala Leu Ser Gln Lys Cys Gln Thr Leu Leu Ala Val Leu Gln Thr
1175                1180                1185
tcc agc act ggt aat gag gct gga ggt gtt aat agt cat caa ttt      3968
Ser Ser Thr Gly Asn Glu Ala Gly Gly Val Asn Ser His Gln Phe
1190                1195                1200
gag gag ctt cta cag gaa cgt gac aag tta aaa cag caa gta aag      4013
Glu Glu Leu Leu Gln Glu Arg Asp Lys Leu Lys Gln Gln Val Lys
1205                1210                1215
aaa atg gaa gag tgg aag cag cag gtg atg acc aca gta caa aat      4058
Lys Met Glu Glu Trp Lys Gln Gln Val Met Thr Thr Val Gln Asn
1220                1225                1230
atg caa cac gag tca gcc cag ctt cag gaa gag ctt cac caa ctt      4103
Met Gln His Glu Ser Ala Gln Leu Gln Glu Glu Leu His Gln Leu
1235                1240                1245
caa gca cag gtt ttg gtt gac agt gat aat aat tct aaa tta caa      4148
Gln Ala Gln Val Leu Val Asp Ser Asp Asn Asn Ser Lys Leu Gln
1250                1255                1260
gtg gac tat act ggc ctg atc caa agt tat gag cag aat gaa acc      4193
Val Asp Tyr Thr Gly Leu Ile Gln Ser Tyr Glu Gln Asn Glu Thr
1265                1270                1275
aaa ctc aaa aat ttt ggg cag gaa tta gca caa gtt cag cac agc    4238
Lys Leu Lys Asn Phe Gly Gln Glu Leu Ala Gln Val Gln His Ser
1280                1285                1290
att ggg cag ctt tgc aat acc aag gat ctt ctt tta gga aaa ctt    4283
Ile Gly Gln Leu Cys Asn Thr Lys Asp Leu Leu Leu Gly Lys Leu
1295                1300                1305
gat att att tca ccc cag ctg tct tct gca tca ttg ctt act ccc    4328
Asp Ile Ile Ser Pro Gln Leu Ser Ser Ala Ser Leu Leu Thr Pro
1310                1315                1320
cag tct gca gag tgt ctt aga gca agt aag tct gaa gta ttg agt    4373
Gln Ser Ala Glu Cys Leu Arg Ala Ser Lys Ser Glu Val Leu Ser
1325                1330                1335
gaa tct tct gaa ttg ctt cag caa gag tta gaa gag cta aga aaa    4418
Glu Ser Ser Glu Leu Leu Gln Gln Glu Leu Glu Glu Leu Arg Lys
1340                1345                1350
tca cta cag gaa aaa gat gca aca att aga act ctc cag gaa aat    4463
Ser Leu Gln Glu Lys Asp Ala Thr Ile Arg Thr Leu Gln Glu Asn
1355                1360                1365
aac cac aga ttg tct gat tcg att gct gcc acc tca gag cta gaa    4508
Asn His Arg Leu Ser Asp Ser Ile Ala Ala Thr Ser Glu Leu Glu
1370                1375                1380
aga aaa gaa cac gaa caa acc gat tca gaa atc aag cag cta aag    4553
Arg Lys Glu His Glu Gln Thr Asp Ser Glu Ile Lys Gln Leu Lys
1385                1390                1395
gag aaa caa gat gtt ttg caa aag tta ctt aag gaa aaa gac ctc    4598
Glu Lys Gln Asp Val Leu Gln Lys Leu Leu Lys Glu Lys Asp Leu
1400                1405                1410
tta atc aaa gcc aaa agt gat caa cta ctt tct tcc aat gaa aat    4643
Leu Ile Lys Ala Lys Ser Asp Gln Leu Leu Ser Ser Asn Glu Asn
1415                1420                1425
ttc act aac aaa gta aat gaa aac gaa ctt ttg agg cag gca gta    4688
Phe Thr Asn Lys Val Asn Glu Asn Glu Leu Leu Arg Gln Ala Val
1430                1435                1440
aca aac ctg aag gag aga ata tta att cta gag atg gac att ggc    4733
Thr Asn Leu Lys Glu Arg Ile Leu Ile Leu Glu Met Asp Ile Gly
1445                1450                1455
aaa cta aaa gga gaa aat gaa aaa ata gtg gaa aca tac agg gga    4778
Lys Leu Lys Gly Glu Asn Glu Lys Ile Val Glu Thr Tyr Arg Gly
1460                1465                1470
aag gaa aca gaa tat caa gcg tta caa gag act aac atg aag ttt    4823
Lys Glu Thr Glu Tyr Gln Ala Leu Gln Glu Thr Asn Met Lys Phe
1475                1480                1485
tct atg atg ctg cga gaa aaa gag ttt gag tgc cac tca atg aag    4868
Ser Met Met Leu Arg Glu Lys Glu Phe Glu Cys His Ser Met Lys
1490                1495                1500
gag aag gct ctt gct ttt gaa cag cta ttg aaa gag aaa gaa cag    4913
Glu Lys Ala Leu Ala Phe Glu Gln Leu Leu Lys Glu Lys Glu Gln
1505                1510                1515
ggc aag act gga gag tta aat cag ctt tta aat gca gtt aaa tca    4958
Gly Lys Thr Gly Glu Leu Asn Gln Leu Leu Asn Ala Val Lys Ser
1520                1525                1530
atg cag gag aag aca gtt gtg ttt caa cag gag aga gac caa gtc    5003
Met Gln Glu Lys Thr Val Val Phe Gln Gln Glu Arg Asp Gln Val
1535                1540                1545
atg ttg gcc ctg aaa caa aaa caa atg gaa aat act gcc cta cag    5048
Met Leu Ala Leu Lys Gln Lys Gln Met Glu Asn Thr Ala Leu Gln
1550                1555                1560
aat gag gtt caa cgt tta cgt gac aaa gaa ttt cgt tca aac caa    5093
Asn Glu Val Gln Arg Leu Arg Asp Lys Glu Phe Arg Ser Asn Gln
1565                1570                1575
gag cta gag aga ttg cgt aat cat ctt tta gaa tca gaa gat tct    5138
Glu Leu Glu Arg Leu Arg Asn His Leu Leu Glu Ser Glu Asp Ser
1580                1585                1590
tat acc cgt gaa gct ttg gct gca gaa gat aga gag gct aaa cta    5183
Tyr Thr Arg Glu Ala Leu Ala Ala Glu Asp Arg Glu Ala Lys Leu
1595                1600                1605
aga aag aaa gtc aca gta ttg gag gaa aag cta gtt tca tcc tct    5228
Arg Lys Lys Val Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Val Ser Ser Ser
1610                1615                1620
aat gca atg gaa aat gca agc cat caa gcc agt gtg cag gta gag    5273
Asn Ala Met Glu Asn Ala Ser His Gln Ala Ser Val Gln Val Glu
1625                1630                1635
tca ttg caa gaa cag ttg aat gta gtt tcc aag caa agg gat gaa    5318
Ser Leu Gln Glu Gln Leu Asn Val Val Ser Lys Gln Arg Asp Glu
1640                1645                1650
act gcg ctg cag ctt tct gtc tct cag gaa caa gta aag cag tat    5363
Thr Ala Leu Gln Leu Ser Val Ser Gln Glu Gln Val Lys Gln Tyr
1655                1660                1665
gct ctg tca ctg gcc aac ctg cag atg gta cta gag cat ttc caa    5408
Ala Leu Ser Leu Ala Asn Leu Gln Met Val Leu Glu His Phe Gln
1670                1675                1680
caa gag gaa aaa gct atg tat tct gct gaa ctc gaa aag caa aaa    5453
Gln Glu Glu Lys Ala Met Tyr Ser Ala Glu Leu Glu Lys Gln Lys
1685                1690                1695
cag ctt ata gct gaa tgg aag aaa aac gca gaa aat ctg gaa gga    5498
Gln Leu Ile Ala Glu Trp Lys Lys Asn Ala Glu Asn Leu Glu Gly
1700                1705                1710
aaa gtg ata tca tta cag gaa tgt ttg gat gaa gca aat gct gca    5543
Lys Val Ile Ser Leu Gln Glu Cys Leu Asp Glu Ala Asn Ala Ala
1715                1720                1725
ttg gat tca gca tca aga ctt aca gaa cag tta gat gta aaa gaa    5588
Leu Asp Ser Ala Ser Arg Leu Thr Glu Gln Leu Asp Val Lys Glu
1730                1735                1740
gaa caa att gaa gaa ctt aaa aga caa aat gag ctc cga caa gaa    5633
Glu Gln Ile Glu Glu Leu Lys Arg Gln Asn Glu Leu Arg Gln Glu
1745                1750                1755
atg ctg gat gat gta caa aag aaa ttg atg agc tta gca aac agc    5678
Met Leu Asp Asp Val Gln Lys Lys Leu Met Ser Leu Ala Asn Ser
1760                1765                1770
tca gaa gga aaa gta gac aaa gtc cta atg aga aac ctc ttc att    5723
Ser Glu Gly Lys Val Asp Lys Val Leu Met Arg Asn Leu Phe Ile
1775                1780                1785
ggt cat ttc cac aca ccg aaa aat cag cgt cat gaa gtg tta cgg    5768
Gly His Phe His Thr Pro Lys Asn Gln Arg His Glu Val Leu Arg
1790                1795                1800
tta atg ggg agc atc ctg ggc gtc aga agg gag gag atg gag cag    5813
Leu Met Gly Ser Ile Leu Gly Val Arg Arg Glu Glu Met Glu Gln
1805                1810                1815
ttg ttt cat gac gat cag ggc agt gtt acc agg tgg atg act ggg    5858
Leu Phe His Asp Asp Gln Gly Ser Val Thr Arg Trp Met Thr Gly
1820                1825                1830
tgg ctt gga gga gga tca aaa agt gtt ccc aac aca cct ttg aga    5903
Trp Leu Gly Gly Gly Ser Lys Ser Val Pro Asn Thr Pro Leu Arg
1835                1840                1845
cca aat cag caa tct gtg gtt aat agt tct ttt tca gaa ctt ttt          5948
Pro Asn Gln Gln Ser Val Val Asn Ser Ser Phe Ser Glu Leu Phe
1850                1855                1860
gtt aaa ttt cta gaa aca gaa tct cat cca tcc att cca cca cca          5993
Val Lys Phe Leu Glu Thr Glu Ser His Pro Ser Ile Pro Pro Pro
1865                1870                1875
aag ctt tct gtt cat gat atg aaa cct ctg gat tca cca gga aga          6038
Lys Leu Ser Val His Asp Met Lys Pro Leu Asp Ser Pro Gly Arg
1880                1885                1890
aga aaa aga gat aca aat gca cca gaa agt ttt aaa gat aca gca          6083
Arg Lys Arg Asp Thr Asn Ala Pro Glu Ser Phe Lys Asp Thr Ala
1895                1900                1905
gaa tcc agg tct ggt aga aga aca gat gta aat ccg ttt ttg gct          6128
Glu Ser Arg Ser Gly Arg Arg Thr Asp Val Asn Pro Phe Leu Ala
1910                1915                1920
cct cgc tcg gca gct gta cct ctt att aac cca gct gga ctt gga          6173
Pro Arg Ser Ala Ala Val Pro Leu Ile Asn Pro Ala Gly Leu Gly
1925                1930                1935
cct ggt ggg ccc ggg cat ctt ctt ctg aaa ccc atc tca gat gtt          6218
Pro Gly Gly Pro Gly His Leu Leu Leu Lys Pro Ile Ser Asp Val
1940                1945                1950
ttg ccc aca ttt aca cct ttg cca gcg tta cct gac aac agt gct          6263
Leu Pro Thr Phe Thr Pro Leu Pro Ala Leu Pro Asp Asn Ser Ala
1955                1960                1965
ggg gtt gtg ctg aaa gac ctt tta aag caa tag atgattctca    6306
Gly Val Val Leu Lys Asp Leu Leu Lys Gln
1970                1975
 
agccagagac aatctagcac tttaaagaaa ccatgaacac tatatgtatg tactttatca    6366
caaagtggcc tttggggaga aagtcatgta tttgttcgca attatgcttt ctctgaattt    6426
aataaaaata ttcctaatgc ttttag                                         6452
 
<210>47
<211>1979
<212>PRT
<213>人
 
<400>47
 
Met Ser Ser Trp Leu Gly Gly Leu Gly Ser Gly Leu Gly Gln Ser Leu
1               5                   10                  15
Gly Gln Val Gly Gly Ser Leu Ala Ser Leu Thr Gly Gln Ile Ser Asn
            20                  25                  30
Phe Thr Lys Asp Met Leu Met Glu Gly Thr Glu Glu Val Glu Ala Glu
        35                  40                  45
Leu Pro Asp Ser Arg Thr Lys GluIle Glu Ala Ile His Ala Ile Leu
    50                  55                  60
Arg Ser Glu Asn Glu Arg Leu Lys Lys Leu Cys Thr Asp Leu Glu Glu
65                  70                  75                  80
Lys His Glu Ala Ser Glu Ile Gln Ile Lys Gln Gln Ser Thr Ser Tyr
                85                  90                  95
Arg Asn Gln Leu Gln Gln Lys Glu Val Glu Ile Ser His Leu Lys Ala
            100                 105                 110
Arg Gln Ile Ala Leu Gln Asp Gln Leu Leu Lys Leu Gln Ser Ala Ala
        115                 120                 125
Gln Ser Val Pro Ser Gly Ala Gly Val Pro Ala Thr Thr Ala Ser Ser
    130                 135                 140
Ser Phe Ala Tyr Gly Ile Ser His His Pro Ser Ala Phe His Asp Asp
145                 150                 155                 160
Asp Met Asp Phe Gly Asp Ile Ile Ser Ser Gln Gln Glu Ile Asn Arg
                165                 170                 175
Leu Ser Asn Glu Val Ser Arg Leu Glu Ser Glu Val Gly His Trp Arg
            180                 185                 190
His Ile Ala Gln Thr Ser Lys Ala Gln Gly Thr Asp Asn Ser Asp Gln
        195                 200                 205
Ser Glu Ile Cys Lys Leu Gln Asn Ile Ile Lys Glu Leu Lys Gln Asn
    210                 215                 220
Arg Ser Gln Glu Ile Asp Asp His Gln His Glu Met Ser Val Leu Gln
225                 230                 235                 240
Asn Ala His Gln Gln Lys Leu Thr Glu Ile Ser Arg Arg His Arg Glu
                245                 250                 255
Glu Leu Ser Asp Tyr Glu Glu Arg Ile Glu Glu Leu Glu Asn Leu Leu
            260                 265                 270
Gln Gln Gly Gly Ser Gly Val Ile Glu Thr Asp Leu Ser Lys Ile Tyr
        275                 280                 285
Glu Met Gln Lys Thr Ile Gln Val Leu Gln Ile Glu Lys Val Glu Ser
    290                 295                 300
Thr Lys Lys Met Glu Gln Leu Glu Asp Lys Ile Lys Asp Ile Asn Lys
305                 310                 315                 320
Lys Leu Ser Ser Ala Glu Asn Asp Arg Asp Ile Leu Arg Arg Glu Gln
                325                 330                 335
Glu Gln Leu Asn Val Glu Lys Arg Gln Ile Met Glu Glu Cys Glu Asn
            340                 345                 350
Leu Lys Leu Glu Cys Ser Lys Leu Gln Pro Ser Ala Val Lys Gln Ser
        355                 360                 365
Asp Thr Met Thr Glu Lys Glu Arg Ile Leu Ala Gln Ser Ala Ser Val
    370                 375                 380
Glu Glu Val Phe Arg Leu Gln Gln Ala Leu Ser Asp Ala Glu Asn Glu
385                 390                 395                 400
Ile Met Arg Leu Ser Ser Leu Asn Gln Asp Asn Ser Leu Ala Glu Asp
                405                 410                 415
Asn Leu Lys Leu Lys Met Arg Ile Glu Val Leu Glu Lys Glu Lys Ser
            420                 425                 430
Leu Leu Ser Gln Glu Lys Glu Glu Leu Gln Met Ser Leu Leu Lys Leu
        435                 440                 445
Asn Asn Glu Tyr Glu Val Ile Lys Ser Thr Ala Thr Arg Asp Ile Ser
    450                 455                 460
Leu Asp Ser Glu Leu His Asp Leu Arg Leu Asn Leu Glu Ala Lys Glu
465                 470                 475                 480
Gln Glu Leu Asn Gln Ser Ile Ser Glu Lys Glu Thr Leu Ile Ala Glu
                485                 490                 495
Ile Glu Glu Leu Asp Arg Gln Asn Gln Glu Ala Thr Lys His Met Ile
            500                 505                 510
Leu Ile Lys Asp Gln Leu Ser Lys Gln Gln Asn Glu Gly Asp Ser Ile
        515                 520                 525
Ile Ser Lys Leu Lys Gln Asp Leu Asn Asp Glu Lys Lys Arg Val His
    530                 535                 540
Gln Leu Glu Asp Asp Lys Met Asp Ile Thr Lys Glu Leu Asp Val Gln
545                 550                 555                 560
Lys Glu Lys Leu Ile Gln Ser Glu Val Ala Leu Asn Asp Leu His Leu
                565                 570                 575
Thr Lys Gln Lys Leu Glu Asp Lys Val Glu Asn Leu Val Asp Gln Leu
            580                 585                 590
Asn Lys Ser Gln Glu Ser Asn Val Ser Ile Gln Lys Glu Asn Leu Glu
        595                 600                 605
Leu Lys Glu HisIle Arg Gln Asn Glu Glu Glu Leu Ser Arg Ile Arg
    610                 615                 620
Asn Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn Gln Asp Ser Asn Ser Asn Phe Lys
625                 630                 635                 640
Asp Thr Leu Leu Lys Glu Arg Glu Ala Glu Val Arg Asn Leu Lys Gln
                645                 650                 655
Asn Leu Ser Glu Leu Glu Gln Leu Asn Glu Asn Leu Lys Lys Val Ala
            660                 665                 670
Phe Asp Val Lys Met Glu Asn Glu Lys Leu Val Leu Ala Cys Glu Asp
        675                 680                 685
Val Arg His Gln Leu Glu Glu Cys Leu Ala Gly Asn Asn Gln Leu Ser
    690                 695                 700
Leu Glu Lys Asn Thr Ile Val Glu Thr Leu Lys Met Glu Lys Gly Glu
705                 710                 715                 720
Ile Glu Ala Glu Leu Cys Trp Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Glu Ala
                725                 730                 735
Asn Lys Tyr Glu Lys Thr Ile Glu Glu Leu Ser Asn Ala Arg Asn Leu
            740                 745                 750
Asn Thr Ser Ala Leu Gln Leu Glu His Glu His Leu Ile Lys Leu Asn
        755                 760                 765
Gln Lys Lys Asp Met Glu Ile Ala Glu Leu Lys Lys Asn Ile Glu Gln
    770                 775                 780
Met AspThr Asp His Lys Glu Thr Lys Asp Val Leu Ser Ser Ser Leu
785                 790                 795                 800
Glu Glu Gln Lys Gln Leu Thr Gln Leu Ile Asn Lys Lys Glu Ile Phe
                805                 810                 815
Ile Glu Lys Leu Lys Glu Arg Ser Ser Lys Leu Gln Glu Glu Leu Asp
            820                 825                 830
Lys Tyr Ser Gln Ala Leu Arg Lys Asn Glu Ile Leu Arg Gln Thr Ile
        835                 840                 845
Glu Glu Lys Asp Arg Ser Leu Gly Ser Met Lys Glu Glu Asn Asn His
    850                 855                 860
Leu Gln Glu Glu Leu Glu Arg Leu Arg Glu Glu Gln Ser Arg Thr Ala
865                 870                 875                 880
Pro Val Ala Asp Pro Lys Thr Leu Asp Ser Val Thr Glu Leu Ala Ser
                885                 890                 895
Glu Val Ser Gln Leu Asn Thr Ile Lys Glu His Leu Glu Glu Glu Ile
            900                 905                 910
Lys His His Gln Lys Ile Ile Glu Asp Gln Asn Gln Ser Lys Met Gln
        915                 920                 925
Leu Leu Gln Ser Leu Gln Glu Gln Lys Lys Glu Met Asp Glu Phe Arg
    930                 935                 940
Tyr Gln His Glu Gln Met Asn Ala Thr His Thr Gln Leu Phe Leu Glu
945                 950                 955                 960
Lys Asp Glu Glu Ile Lys Ser Leu Gln Lys Thr Ile Glu Gln Ile Lys
                965                 970                 975
Thr Gln Leu His Glu Glu Arg Gln Asp Ile Gln Thr Asp Asn Ser Asp
            980                 985                 990
Ile Phe Gln Glu Thr Lys Val Gln Ser Leu Asn Ile Glu Asn Gly Ser
        995                 1000                1005
Glu Lys His Asp Leu Ser Lys Ala Glu Thr Glu Arg Leu Val Lys
    1010                1015                1020
Gly Ile Lys Glu Arg Glu Leu Glu Ile Lys Leu Leu Asn Glu Lys
    1025                1030                1035
Asn Ile Ser Leu Thr Lys Gln Ile Asp Gln Leu Ser Lys Asp Glu
    1040                1045                1050
Val Gly Lys Leu Thr Gln Ile Ile Gln Gln Lys Asp Leu Glu Ile
    1055                1060                1065
Gln Ala Leu His Ala Arg Ile Ser Ser Thr Ser His Thr Gln Asp
    1070                1075                1080
Val Val Tyr Leu Gln Gln Gln Leu Gln Ala Tyr Ala Met Glu Arg
    1085                1090                1095
Glu Lys Val Phe Ala Val Leu Asn Glu Lys Thr Arg Glu Asn Ser
    1100                1105                1110
His Leu Lys Thr Glu Tyr His Lys Met Met Asp Ile Val Ala Ala
    1115                1120                1125
Lys Glu Ala Ala Leu Ile Lys Leu Gln Asp Glu Asn Lys Lys Leu
    1130                1135                1140
Ser Thr Arg Phe Glu Ser Ser Gly Gln Asp Met Phe Arg Glu Thr
    1145                1150                1155
Ile Gln Asn Leu Ser Arg Ile Ile Arg Glu Lys Asp Ile Glu Ile
    1160                1165                1170
Asp Ala Leu Ser Gln Lys Cys Gln Thr Leu Leu Ala Val Leu Gln
    1175                1180                1185
Thr Ser Ser Thr Gly Asn Glu Ala Gly Gly Val Asn Ser His Gln
    1190                1195                1200
Phe Glu Glu Leu Leu Gln Glu Arg Asp Lys Leu Lys Gln Gln Val
    1205                1210                1215
Lys Lys Met Glu Glu Trp Lys Gln Gln Val Met Thr Thr Val Gln
    1220                1225                1230
Asn Met Gln His Glu Ser Ala Gln Leu Gln Glu Glu Leu His Gln
    1235                1240                1245
Leu Gln Ala Gln Val Leu Val Asp Ser Asp Asn Asn Ser Lys Leu
    1250                1255                1260
Gln Val Asp Tyr Thr Gly Leu Ile Gln Ser Tyr Glu Gln Asn Glu
    1265                1270                1275
Thr Lys Leu Lys Asn Phe Gly Gln Glu Leu Ala Gln Val Gln His
    1280                1285                1290
Ser Ile Gly Gln Leu Cys Asn Thr Lys Asp Leu Leu Leu Gly Lys
    1295                1300                1305
Leu Asp Ile Ile Ser Pro Gln Leu Ser Ser Ala Ser Leu Leu Thr
    1310                1315                1320
Pro Gln Ser Ala Glu Cys Leu Arg Ala Ser Lys Ser Glu Val Leu
    1325                1330                1335
Ser Glu Ser Ser Glu Leu Leu Gln Gln Glu Leu Glu Glu Leu Arg
    1340                1345                1350
Lys Ser Leu Gln Glu Lys Asp Ala Thr Ile Arg Thr Leu Gln Glu
    1355                1360                1365
Asn Asn His Arg Leu Ser Asp Ser Ile Ala Ala Thr Ser Glu Leu
    1370                1375                1380
Glu Arg Lys Glu His Glu Gln Thr Asp Ser Glu Ile Lys Gln Leu
    1385                1390                1395
Lys Glu Lys Gln Asp Val Leu Gln Lys Leu Leu Lys Glu Lys Asp
    1400                1405                1410
Leu Leu Ile Lys Ala Lys Ser Asp Gln Leu Leu Ser Ser Asn Glu
    1415                1420                1425
Asn Phe Thr Asn Lys Val Asn Glu Asn Glu Leu Leu Arg Gln Ala
    1430                1435                1440
Val Thr Asn Leu Lys Glu Arg Ile Leu Ile Leu Glu Met Asp Ile
    1445                1450                1455
Gly Lys Leu Lys Gly Glu Asn Glu Lys Ile Val Glu Thr Tyr Arg
    1460                1465                1470
Gly Lys Glu Thr Glu Tyr Gln Ala Leu Gln Glu Thr Asn Met Lys
    1475                1480                1485
Phe Ser Met Met Leu Arg Glu Lys Glu Phe Glu Cys His Ser Met
    1490                1495                1500
Lys Glu Lys Ala Leu Ala Phe Glu Gln Leu Leu Lys Glu Lys Glu
    1505                1510                1515
Gln Gly Lys Thr Gly Glu Leu Asn Gln Leu Leu Asn Ala Val Lys
    1520                1525                1530
Ser Met Gln Glu Lys Thr Val Val Phe Gln Gln Glu Arg Asp Gln
    1535                1540                1545
Val Met Leu Ala Leu Lys Gln Lys Gln Met Glu Asn Th rAla Leu
    1550                1555                1560
Gln Asn Glu Val Gln Arg Leu Arg Asp Lys Glu Phe Arg Ser Asn
    1565                1570                1575
Gln Glu Leu Glu Arg Leu Arg Asn His Leu Leu Glu Ser Glu Asp
    1580                1585                1590
Ser Tyr Thr Arg Glu Ala Leu Ala Ala Glu Asp Arg Glu Ala Lys
    1595                1600                1605
Leu Arg Lys Lys Val Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Val Ser Ser
    1610                1615                1620
Ser Asn Ala Met Glu Asn Ala Ser His Gln Ala Ser Val Gln Val
    1625                1630                1635
Glu Ser Leu Gln Glu Gln Leu Asn Val Val Ser Lys Gln Arg Asp
    1640                1645                1650
Glu Thr Ala Leu Gln Leu Ser Val Ser Gln Glu Gln Val Lys Gln
    1655                1660                1665
Tyr Ala Leu Ser Leu Ala Asn Leu Gln Met Val Leu Glu His Phe
    1670                1675                1680
Gln Gln Glu Glu Lys Ala Met Tyr Ser Ala Glu Leu Glu Lys Gln
    1685                1690                1695
Lys Gln Leu Ile Ala Glu Trp Lys Lys Asn Ala Glu Asn Leu Glu
    1700                1705                1710
Gly Lys Val Ile Ser Leu Gln Glu Cys Leu Asp Glu Ala Asn Ala
    1715                1720                1725
Ala Leu Asp Ser Ala Ser Arg Leu Thr Glu Gln Leu Asp Val Lys
    1730                1735                1740
Glu Glu Gln Ile Glu Glu Leu Lys Arg Gln Asn Glu Leu Arg Gln
    1745                1750                1755
Glu Met Leu Asp Asp Val Gln Lys Lys Leu Met Ser Leu Ala Asn
    1760                1765                1770
Ser Ser Glu Gly Lys Val Asp Lys Val Leu Met Arg Asn Leu Phe
    1775                1780                1785
Ile Gly His Phe His Thr Pro Lys Asn Gln Arg His Glu Val Leu
    1790                1795                1800
Arg Leu Met Gly Ser Ile Leu Gly Val Arg Arg Glu Glu Met Glu
    1805                1810                1815
Gln Leu  Phe His Asp Asp Gln Gly Ser Val Thr Arg Trp Met Thr
    1820                1825                1830
Gly Trp Leu Gly Gly Gly Ser Lys Ser Val Pro Asn Thr Pro Leu
    1835                1840                1845
Arg Pro Asn Gln Gln Ser Val Val Asn Ser Ser Phe Ser Glu Leu
    1850                1855                1860
Phe Val Lys Phe Leu Glu Thr Glu Ser His Pro Ser Ile Pro Pro
    1865                1870                1875
Pro Lys Leu Ser Val His Asp Met Lys Pro Leu Asp Ser Pro Gly
    1880                1885                1890
Arg Arg Lys Arg Asp Thr Asn Ala Pro Glu Ser Phe Lys Asp Thr
    1895                1900                1905
Ala Glu Ser Arg Ser Gly Arg Arg Thr Asp Val Asn Pro Phe Leu
    1910                1915                1920
Ala Pro Arg Ser Ala Ala Val Pro Leu Ile Asn Pro Ala Gly Leu
    1925                1930                1935
Gly Pro Gly Gly Pro Gly His Leu Leu Leu Lys Pro Ile Ser Asp
    1940                1945                1950
Val Leu Pro Thr Phe Thr Pro Leu Pro Ala Leu Pro Asp Asn Ser
    1955                1960                1965
Ala Gly Val Val Leu Lys Asp Leu Leu Lys Gln
    1970                1975
 
<210>48
<211>18
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>48
gaagctacaa agcacatg    18
 
<210>49
<211>18
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>49
tcctgtcttt cttcatgc    18
 
<210>50
<211>23
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>50
catatgtcag tgttgcagaa tgc    23
 
<210>51
<211>24
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>51
ggtacctact aacctctcag tttc    24
 
<210>52
<211>23
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>52
catatgtcag tactgcagaa tgc      23
 
<210>53
<211>26
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>53
ggtacctttt attcctttca ctaatc    26
 
<210>54
<211>787
<212>PRT
<213>家犬
 
<400>54
 
Met Ser Val Leu Gln Asn Ala His Gln Gln Lys Leu Thr Asp Ile Ser
1               5                   10                  15
Arg Arg His Arg Glu Glu Leu Arg Asp Tyr Glu Glu Arg Ile Glu Glu
            20                  25                  30
Leu Glu Asn Leu Leu Glu Gln Gly Gly Ser Gly Ile Val Ile Pro Asp
        35                  40                  45
His Ser Lys Ile His Glu Met Gln Lys Thr Ile Gln Asn Leu Gln Thr
    50                  55                  60
Glu Lys Val Ala Ser Ile Lys Lys Ile Glu Glu Leu Glu Asp Lys Ile
65                  70                  75                  80
Lys Asp Ile Asp Lys Lys Leu Ser Ser Ala Glu Asn Asp Arg Asp Val
                85                  90                  95
Leu Arg Lys Glu Lys Glu Cys Leu Asn Val Glu Asn Arg Gln Ile Thr
            100                 105                 110
Glu Gln Cys Glu Ser Leu Lys Leu Glu Cys Lys Leu Gln His Asp Ala
        115                 120                 125
Glu Lys Gln Gly Asp Thr Val Thr Glu Lys Glu Arg Ile Leu Pro Gln
    130                 135                 140
Ser Thr Ser Val Glu Glu Glu Val Leu Lys Leu Gln Gln Ala Leu Ser
145                 150                 155                 160
Asp Ala Glu Asn Glu Ile Met Arg Leu Ser Asn Leu Tyr Gln Asp Asn
                165                 170                 175
Ser Leu Thr Glu Asp Asn Leu Lys Leu Lys Met His Val Glu Phe Leu
            180                 185                 190
Glu Lys Gln Lys Ser Leu Leu Ser Gln Glu Lys Glu Glu Leu Gln Leu
        195                 200                 205
Ser Leu Leu Lys Leu Asn Asn Glu Tyr Glu Val Ile Lys Ser Thr Ala
    210                 215                 220
Val Arg Asp Met Asp Met Asp Ser Thr Leu Cys Asp Leu Arg Leu Thr
225                 230                 235                 240
Leu Glu Ala Lys Asp Gln Glu Leu Asn Gln Ser Leu Thr Glu Lys Glu
                245                 250                 255
Ile Leu Val Ala Glu Leu Glu Glu Leu Asp Arg Gln Asn Gln Glu Ala
            260                 265                 270
Thr Lys His Met Ile Leu Ile Lys Asp Gln Leu Ser Lys Gln Gln Ser
        275                 280                 285
Glu Gly Glu Thr Ile Ile Ser Lys Leu Arg Lys Asp Leu Asn Asp Glu
    290                 295                 300
Asn Lys Arg Val His Gln Leu Glu Asp Asp Lys Lys Asn Met Thr Lys
305                 310                 315                 320
Glu Leu Asn Val Gln Lys Glu Lys Leu Val Gln Ser Glu Leu Val Leu
                325                 330                 335
Asn Gly Leu His Leu Ala Lys Gln Lys Leu Glu Glu Lys Val Glu Asp
            340                 345                 350
Leu Val Asp Gln Leu Asn Lys Ser Gln Lys Ser Asn Leu Asn Met Gln
        355                 360                 365
Lys Glu Asn Phe Gly Leu Lys Glu His Ile Lys Gln Asn Glu Glu Glu
    370                 375                 380
Leu Ser Arg Val Arg Asp Glu Leu Thr Gln Ser Leu Ser Arg Asp Ser
385                 390                 395                 400
Gly Ser Asp Phe Lys Asp Asp Leu Leu Lys Glu Arg Glu Ala Glu Val
                405                 410                 415
Arg Asn Leu Lys Gln Asn Leu Ser Glu Ile Glu Gln Leu Asn Asp Ser
            420                 425                 430
Leu Asn Lys Val Ala Phe Asp Leu Lys Met Glu Asn Glu Lys Leu Val
        435                 440                 445
Leu Ala Cys Glu Asp Ile Arg His Gln Leu Glu Glu Ser Ile Val Gly
    450                 455                 460
Ser Asn Gln Met Ser Leu Glu Arg Asn Thr Ile Val Glu Ala Leu Lys
465                 470                 475                 480
Met Glu Lys Gly Gln Leu Glu Ala Glu Leu Ser Arg Ala Asp Gln Arg
                485                 490                 495
Leu Leu Glu Glu Ala Ser Lys Tyr Glu Gln Thr Ile Gln Glu Leu Ser
            500                 505                 510
Lys Ala Arg Asp Leu Arg Thr Ser Ala Leu Gln Leu Glu Gln Gln His
        515                 520                 525
Leu Met Lys Leu Ser Gln Glu Lys Asp Phe Glu Ile Ala Glu Leu Lys
    530                 535                 540
Lys Asn Ile Glu Gln Met Asp Thr Asp His Lys Glu Thr Lys Ala Ile
545                 550                 555                 560
Leu Ser Ser Ile Leu Glu Glu Gln Lys Gln Leu Thr Gln Leu Ile Ser
                565                 570                 575
Glu Lys Glu Ile Phe Ile Glu Lys Leu Lys Glu Arg Ser Ser Glu Leu
            580                 585                 590
Gln Glu Glu Leu Glu Lys Ser Thr Gln Ala Ser Arg Lys Ile Glu Ile
        595                 600                 605
Leu Lys Gln Thr Ile Glu Glu Lys Asp Arg Ser Leu Gly Ser Met Lys
    610                 615                 620
Glu Glu Asn Asn His Leu Lys Glu Glu Leu Glu Arg Leu Arg Glu Gln
625                 630                 635                 640
Gln Ser Arg Ala Val Pro Val Val Glu Pro Lys Pro Leu Asp Ser Val
                645                 650                 655
Thr Glu Leu Glu Ser Glu Val Leu Gln Leu Asn Ile Val Lys Arg Asn
            660                 665                 670
Leu Glu Glu Glu Ile Lys Arg His Gln Lys Ile Ile Glu Asp Gln Asn
        675                 680                 685
Gln Ser Lys Met Gln Leu Leu Gln Ser Leu Glu Glu Gln Lys Lys Glu
    690                 695                 700
Met Asp Glu Phe Lys Cys Gln His Glu Gln Met Asn Val Thr His Thr
705                 710                 715                 720
Gln Leu Phe Leu Glu Lys Asp Glu Glu Ile Lys Asn Leu Gln Lys Thr
                725                 730                 735
Ile Glu Gln Ile Lys Thr Gln Trp His Glu Glu Arg Gln Asp Val Gln
            740                 745                 750
Met Glu Asn Ser Glu Phe Phe Gln Glu Thr Lys Val Gln Ser Leu Asn
        755                 760                 765
Leu Glu Asn Gly Ser Glu Lys His Asp Leu Ser Lys Ala Glu Thr Glu
    770                 775                 780
Arg Leu Val
785
 
<210>55
<211>788
<212>PRT
<213>人
 
<400>55
 
Met Ser Val Leu Gln Asn Ala His Gln Gln Lys Leu Thr Glu Ile Ser
1               5                   10                  15
Arg Arg His Arg Glu Glu Leu Ser Asp Tyr Glu Glu Arg Ile Glu Glu
            20                  25                  30
Leu Glu Asn Leu Leu Gln Gln Gly Gly Ser Gly Val Ile Glu Thr Asp
        35                  40                  45
Leu Ser Lys Ile Tyr Glu Met Gln Lys Thr Ile Gln Val Leu Gln Ile
    50                  55                  60
Glu Lys Val Glu Ser Thr Lys Lys Met Glu Gln Leu Glu Asp Lys Ile
65                  70                  75                  80
Lys Asp Ile Asn Lys Lys Leu Ser Ser Ala Glu Asn Asp Arg Asp Ile
                85                  90                  95
Leu Arg Arg Glu Gln Glu Gln Leu Asn Val Glu Lys Arg Gln Ile Met
            100                 105                 110
Glu Glu Cys Glu Asn Leu Lys Leu Glu Cys Ser Lys Leu Gln Pro Ser
        115                 120                 125
Ala Val Lys Gln Ser Asp Thr Met Thr Glu Lys Glu Arg Ile Leu Ala
    130                 135                 140
Gln Ser Ala Ser Val Glu Glu Val Phe Arg Leu Gln Gln Ala Leu Ser
145                 150                 155                 160
Asp Ala Glu Asn Glu Ile Met Arg Leu Ser Ser Leu Asn Gln Asp Asn
                165                 170                 175
Ser Leu Ala Glu Asp Asn Leu Lys Leu Lys Met Arg Ile Glu Val Leu
            180                 185                 190
Glu Lys Glu Lys Ser Leu Leu Ser Gln Glu Lys Glu Glu Leu Gln Met
        195                 200                 205
Ser Leu Leu Lys Leu Asn Asn Glu Tyr Glu Val Ile Lys Ser Thr Ala
    210                 215                 220
Thr Arg Asp Ile Ser Leu Asp Ser Glu Leu His Asp Leu Arg Leu Asn
225                 230                 235                 240
Leu Glu Ala Lys Glu Gln Glu Leu Asn Gln Ser Ile Ser Glu Lys Glu
                245                 250                 255
Thr Leu Ile Ala Glu Ile Glu Glu Leu Asp Arg Gln Asn Gln Glu Ala
            260                 265                 270
Thr Lys His Met Ile Leu Ile Lys Asp Gln Leu Ser Lys Gln Gln Asn
        275                 280                 285
Glu Gly Asp Ser Ile Ile Ser Lys Leu Lys Gln Asp Leu Asn Asp Glu
    290                 295                 300
Lys Lys Arg Val His Gln Leu Glu Asp Asp Lys Met Asp Ile Thr Lys
305                 310                 315                 320
Glu Leu Asp Val Gln Lys Glu Lys Leu Ile Gln Ser Glu Val Ala Leu
                325                 330                 335
Asn Asp Leu His Leu Thr Lys Gln Lys Leu Glu Asp Lys Val Glu Asn
            340                 345                 350
Leu Val Asp Gln Leu Asn Lys Ser Gln Glu Ser Asn Val Ser Ile Gln
        355                 360                 365
Lys Glu Asn Leu Glu Leu Lys Glu His Ile Arg Gln Asn Glu Glu Glu
    370                 375                 380
Leu Ser Arg Ile Arg Asn Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn Gln Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asn Ser Asn Phe Lys Asp Thr Leu Leu Lys Glu Arg Glu Ala Glu Val
                405                 410                 415
Arg Asn Leu Lys Gln Asn Leu Ser Glu Leu Glu Gln Leu Asn Glu Asn
            420                 425                 430
Leu Lys Lys Val Ala Phe Asp Val Lys Met Glu Asn Glu Lys Leu Val
        435                 440                 445
Leu Ala Cys Glu Asp Val Arg His Gln Leu Glu Glu Cys Leu Ala Gly
    450                 455                 460
Asn Asn Gln Leu Ser Leu Glu Lys Asn Thr Ile Val Glu Thr Leu Lys
465                 470                 475                 480
Met Glu Lys Gly Glu Ile Glu Ala Glu Leu Cys Trp Ala Lys Lys Arg
                485                 490                 495
Leu Leu Glu Glu Ala Asn Lys Tyr Glu Lys Thr Ile Glu Glu Leu Ser
            500                 505                 510
Asn Ala Arg Asn Leu Asn Thr Ser Ala Leu Gln Leu Glu His Glu His
        515                 520                 525
Leu Ile Lys Leu Asn Gln Lys Lys Asp Met Glu Ile Ala Glu Leu Lys
    530                 535                 540
Lys Asn Ile Glu Gln Met Asp Thr Asp His Lys Glu Thr Lys Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Ser Ser Ser Leu Glu Glu Gln Lys Gln Leu Thr Gln Leu Ile Asn
                565                 570                 575
Lys Lys Glu Ile Phe Ile Glu Lys Leu Lys Glu Arg Ser Ser Lys Leu
            580                 585                 590
Gln Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Ser Gln Ala Leu Arg Lys Asn Glu Ile
        595                 600                 605
Leu Arg Gln Thr Ile Glu Glu Lys Asp Arg Ser Leu Gly Ser Met Lys
    610                 615                 620
Glu Glu Asn Asn His Leu Gln Glu Glu Leu Glu Arg Leu Arg Glu Glu
625                 630                 635                 640
Gln Ser Arg Thr Ala Pro Val Ala Asp Pro Lys Thr Leu Asp Ser Val
                645                 650                 655
Thr Glu Leu Ala Ser Glu Val Ser Gln Leu Asn Thr Ile Lys Glu His
            660                 665                 670
Leu Glu Glu Glu Ile Lys His His Gln Lys Ile Ile Glu Asp Gln Asn
        675                 680                 685
Gln Ser Lys Met Gln Leu Leu Gln Ser Leu Gln Glu Gln Lys Lys Glu
    690                 695                 700
Met Asp Glu Phe Arg Tyr Gln His Glu Gln Met Asn Ala Thr His Thr
705                 710                 715                 720
Gln Leu Phe Leu Glu Lys Asp Glu Glu Ile Lys Ser Leu Gln Lys Thr
                725                 730                 735
Ile Glu Gln Ile Lys Thr Gln Leu His Glu Glu Arg Gln Asp Ile Gln
            740                 745                 750
Thr Asp Asn Ser Asp Ile Phe Gln Glu Thr Lys Val Gln Ser Leu Asn
        755                 760                 765
Ile Glu Asn Gly Ser Glu Lys His Asp Leu Ser Lys Ala Glu Thr Glu
    770                 775                 780
Arg Leu Val Lys
785
 
<210>56
<211>24
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>56
gtcgacatgt cgtcctggct cggg    24
 
<210>57
<211>24
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>57
ctcgagctat tgctttaaaa ggtc    24
 
<210>58
<211>24
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>58
catatgtcgt cctggcttgg gggc    24
 
<210>59
<211>25
<212>DNA
<213>人工
 
<220>
<223>引物
 
<400>59
ggtaccttgc tttaaaaggt ctttc    25

Claims (30)

1.一种癌的检测方法，所述检测方法是针对从生物体中分离的试样进行的，包括测定以下(a)～(d)中至少任一种多肽的表达，
(a)多肽，是在所述生物体内产生的、且具有通过抗原抗体反应与抗体结合的反应性，所述抗体是针对具有序列号2或者4所示的氨基酸序列的多肽的抗体，
(b)钙镁蛋白，
(c)多肽，具有通过抗原抗体反应与抗体结合的反应性，所述抗体是针对具有序列号26、28或者42所示的氨基酸序列的中心体蛋白质的抗体，
(d)甲状腺激素受体相互作用因子11。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述(a)多肽为具有序列号2所示的氨基酸序列的多肽或者与所述多肽具有95％以上同源性的多肽，所述(c)多肽为具有序列号26或者42所示的氨基酸序列的中心体蛋白质或者与所述中心体蛋白质具有80％以上同源性的多肽。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述生物体为犬、人或猫。
4.如权利要求3所述的方法，其中，所述生物体为犬，需要测定的所述多肽为具有序列号2、16、26、42及45中任一者所示的氨基酸序列的多肽。
5.如权利要求4所述的方法，其中，所述生物体为犬，需要测定的所述多肽为具有序列号2、16、26及45中任一者所示的氨基酸序列的多肽。
6.如权利要求3所述的方法，其中，所述生物体为人，需要测定的所述多肽为具有序列号4、18、28及47中任一者所示的氨基酸序列的多肽。
7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述多肽的表达的测定，是通过对抗体进行免疫测定来进行的，所述抗体是针对能够包含在所述试样中的、需要测定的所述多肽的抗体、且在所述生物体内被诱导产生。
8.如权利要求7所述的方法，其中，所述方法通过免疫测定进行，所述免疫测定使用了以下(e)～(h)中任一种多肽作为抗原，
(e)多肽，具有序列号2或者4所示的氨基酸序列，
(f)多肽，具有序列号16或者18所示的氨基酸序列，
(g)多肽，是由序列号26所示的氨基酸序列中连续500个以上的氨基酸构成的多肽，含有1514号～2339号氨基酸区域内连续500个以上的氨基酸；或者，是由序列号28所示的氨基酸序列中连续500个以上的氨基酸构成的多肽，含有1513号～2325号氨基酸区域内连续500个以上的氨基酸，
(h)多肽，是由序列号45所示的氨基酸序列中连续500个以上的氨基酸构成的多肽，含有237号～1023号氨基酸区域内连续500个以上的氨基酸；或者，是由序列号47所示的氨基酸序列中连续500个以上的氨基酸构成的多肽，含有236号～1023号氨基酸区域内连续500个以上的氨基酸。
9.如权利要求8所述的方法，其中，所述(g)多肽为含有序列号26所示的氨基酸序列中的1514号～2339号氨基酸区域、由1000个以下的氨基酸构成的多肽，或者为含有序列号28所示的氨基酸序列中的1513号～2325号氨基酸区域、由1000个以下的氨基酸构成的多肽；所述(h)多肽为含有序列号45所示的氨基酸序列中的237号～1023号氨基酸区域、由1000个以下的氨基酸构成的多肽，或者为含有序列号47所示的氨基酸序列中236号～1023号氨基酸区域、由1000个以下的氨基酸构成的多肽。
10.如权利要求9所述的方法，其中，所述(g)多肽为具有序列号35或者36所示的氨基酸序列的多肽，所述(h)多肽为具有序列号54或者55所示的氨基酸序列的多肽。
11.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述(a)～(d)中任一种多肽的表达的测定，通过对能够包含在所述试样中的所述多肽进行免疫测定来进行。
12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中，所述试样为血清、血浆、腹水或者胸水。
13.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述(a)～(d)中任一种多肽的表达的测定，通过对能够包含在所述试样中的、编码所述多肽的mRNA进行测定来进行。
14.如权利要求13所述的方法，其中，使用与所述mRNA碱基序列中的部分区域特异性杂交的多核苷酸，检测所述试样中所述mRNA的存在量。
15.如权利要求14所述的方法，其中，所述生物体为犬，所述多核苷酸为与序列号1、15、25、41及44中任一者所示的碱基序列中的部分区域特异性杂交的多核苷酸。
16.如权利要求14所述的方法，其中，所述生物体为人，所述多核苷酸为与序列号3、17、27及46中任一者所示的碱基序列中的部分区域特异性杂交的多核苷酸。
17.如权利要求14至16中任一项所述的方法，其中，所述多核苷酸为引物或者探针。
18.如权利要求13至17中任一项所述的方法，其中，所述试样为组织或者细胞。
19.如权利要求1至18中任一项所述的方法，其中，所述癌为选自下述癌中的至少一种癌：脑肿瘤、头部、颈部、肺、子宫或食道的鳞状上皮癌、黑色素瘤、肺或子宫的腺癌、肾癌、恶性混合肿瘤、肝细胞癌、基底细胞癌、棘细胞瘤样龈瘤、口腔内肿瘤、肛门周围腺癌、肛门囊肿、肛门囊顶泌腺癌、塞尔托利细胞瘤、阴道前庭癌、皮脂腺癌、皮脂腺上皮瘤、脂腺腺瘤、汗腺癌、鼻腔内腺癌、鼻腺癌、甲状腺癌、大肠癌、支气管腺癌、腺癌、腺管癌、乳腺癌、复合型乳腺癌、乳腺恶性混合肿瘤、乳管内乳头状腺癌、纤维肉瘤、血管外皮细胞瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、软组织肉瘤、组织细胞肉瘤、粘液肉瘤、未分化肉瘤、肺癌、肥大细胞瘤、皮肤平滑肌瘤、腹腔内平滑肌瘤、平滑肌瘤、慢性淋巴细胞性白血病、淋巴瘤、消化管型淋巴瘤、消化器型淋巴瘤、小～中细胞型淋巴瘤、肾上腺髓质肿瘤、粒层细胞瘤、嗜铬细胞瘤、膀胱癌(移行细胞癌)、化脓性炎症、腹腔内肝脏肿瘤、肝癌、浆细胞瘤、恶性血管外膜细胞瘤、血管肉瘤、肛门囊腺癌、口腔癌、转移性恶性黑色素瘤、无黑色素性恶性黑色素瘤、皮肤恶性黑色素瘤、恶性肌上皮瘤、恶性睾丸上皮瘤、精原细胞瘤、大肠腺癌、胃腺癌、低度皮脂腺癌、耳垢腺癌、顶泌腺癌、低分化型顶泌腺癌、恶性纤维性组织细胞瘤、多发性骨髓瘤、间叶组织恶性肿瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、起因不明的肉瘤、软组织肉瘤(纺锤形细胞肿瘤)、低分化肉瘤、滑膜肉瘤、血管肉瘤、转移性恶性上皮肿瘤、管状乳腺腺癌、乳腺导管癌、炎性乳癌、生殖细胞瘤、白血病、浸润性毛发上皮瘤、中细胞型淋巴瘤、多中心型淋巴瘤、骨肉瘤(乳腺)、肥大细胞瘤(PatnaikII型)、肥大细胞瘤(GradeII)及平滑筋肉瘤。
20.如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中还包括，基于在所述(a)～(d)中任一种多肽的表达量多的情况下癌的恶性程度升高的情况，进一步检测癌的恶性程度。
21.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中还包括，基于在所述(a)～(d)中任一种多肽的表达量多的情况下癌的进展程度发展的情况，进一步检测癌的进展程度。
22.如权利要求1至21中任一项所述的方法，其中还包括，基于所述(a)～(d)中任一种多肽的表达量是否降低，进一步监控癌的治疗效果。
23.一种癌检测试剂，含有与抗体进行抗原抗体反应的多肽，所述抗体是在生物体内被诱导的、针对以下(i)～(1)中任一种多肽的抗体，
(i)具有序列号2或者4所示的氨基酸序列的多肽，
(j)钙镁蛋白，
(k)具有序列号26、28或者42所示的氨基酸序列的中心体蛋白质，
(l)甲状腺激素受体相互作用因子11。
24.如权利要求23所述的试剂，其中，所述(k)多肽为由序列号26所示的氨基酸序列中连续500个以上的氨基酸构成的多肽，含有1514号～2339号氨基酸区域内连续500个以上的氨基酸，或者为由序列号28所示的氨基酸序列中连续500个以上的氨基酸构成的多肽，含有1513号～2325号氨基酸区域内连续500个以上的氨基酸的多肽；所述(l)多肽为由序列号45所示的氨基酸序列中连续500个以上的氨基酸构成的多肽，含有237号～1023号氨基酸区域内连续500个以上的氨基酸，或者为由序列号47所示的氨基酸序列中连续500个以上的氨基酸构成的多肽，含有236号～1023号氨基酸区域内连续500个以上的氨基酸。
25.如权利要求24所述的试剂，其中，所述(k)多肽为含有序列号26所示的氨基酸序列中1514号～2339号氨基酸区域、由1000个以下的氨基酸构成的多肽，或者为含有序列号28所示的氨基酸序列中1513号～2325号氨基酸区域、由1000个以下的氨基酸构成的多肽；所述(l)多肽为含有序列号45所示的氨基酸序列中237号～1023号氨基酸区域、由1000个以下的氨基酸构成的多肽，或者为含有序列号47所示的氨基酸序列中236号～1023号氨基酸区域、由1000个以下的氨基酸构成的多肽。
26.如权利要求25所述的试剂，其中，所述(k)多肽为具有序列号35或者36所示的氨基酸序列的多肽，所述(l)多肽为具有序列号54或者55所示的氨基酸序列的多肽。
27.一种癌检测试剂，含有与以下(m)～(p)中任一种多肽进行抗原抗体反应的抗体、或者其抗原结合性片段，
(m)多肽，是在生物体内产生的、且具有通过抗原抗体反应与抗体结合的反应性，所述抗体是针对具有序列号2或者4所示的氨基酸序列的多肽的抗体，
(n)钙镁蛋白，
(o)多肽，是在生物体内产生的、且具有通过抗原抗体反应与抗体结合的反应性，所述抗体是针对具有序列号26、28或者42所示的氨基酸序列的中心体蛋白质的抗体，
(p)甲状腺激素受体相互作用因子11。
28.一种癌检测试剂，含有与序列表的序列号1、3、15、17、25、27、41、44及46中任一者所示的碱基序列中的部分区域特异性杂交的多核苷酸。
29.如权利要求28所述的试剂，其中，所述多核苷酸由序列表的序列号1、3、15、17、25、27、41、44及46中任一者所示的碱基序列中的连续18个以上碱基构成。
30.如权利要求28或者29所述的试剂，其中，所述多核苷酸为引物或者探针。
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Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104471403A (zh) * 2012-07-19 2015-03-25 东丽株式会社 癌的检测方法
US9273128B2 (en) 2011-08-04 2016-03-01 Toray Industries, Inc Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
US9273130B2 (en) 2012-02-21 2016-03-01 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
US9409993B2 (en) 2011-08-04 2016-08-09 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of pancreatic cancer
US9416193B2 (en) 2012-03-30 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of liver cancer
US9416191B2 (en) 2010-02-04 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
US9416192B2 (en) 2008-08-05 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and prevention of cancers
US9428581B2 (en) 2012-03-30 2016-08-30 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of gallbladder cancer
US9573993B2 (en) 2012-02-21 2017-02-21 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment of cancer comprising an anti-CAPRIN-1 peptide antibody
US9753038B2 (en) 2012-07-19 2017-09-05 Toray Industries, Inc. Method for detecting cancer via measurement of caprin-1 expression level
US9796775B2 (en) 2011-08-04 2017-10-24 Toray Industries, Inc. Method for detecting pancreatic cancer
US9862774B2 (en) 2013-08-09 2018-01-09 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
US11137401B2 (en) 2008-08-05 2021-10-05 Toray Industries, Inc. Method for detecting cancer using CAPRIN-1 as a marker

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2445625C1 (ru) * 2011-01-11 2012-03-20 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" Способ прогнозирования риска развития многоузловых поражений при лейомиоме матки
JP5995117B2 (ja) * 2015-01-26 2016-09-21 国立大学法人 筑波大学 可溶型ｃｄ１５５タンパク質を用いた癌の検出方法
EP3729076B1 (en) * 2017-12-20 2022-09-07 TREARS Ltd Method for measuring average cortisol and glucose concentrations in earwax

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040029114A1 (en) * 2001-01-24 2004-02-12 Eos Technology, Inc. Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
WO2004080148A2 (en) * 2002-10-02 2004-09-23 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6355623B2 (en) * 1998-09-24 2002-03-12 Hopital-Sainte-Justine Method of treating IBD/Crohn's disease and related conditions wherein drug metabolite levels in host blood cells determine subsequent dosage
JP2005506033A (ja) 2000-10-13 2005-03-03 イーオーエス バイオテクノロジー インコーポレイテッド 前立腺癌の診断法、前立腺癌モジュレータースクリーニングの組成物及び方法
EP1409504A2 (en) * 2001-03-29 2004-04-21 Incyte Genomics, Inc. Secretory molecules
AU2002337657A1 (en) 2001-07-25 2003-02-17 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of prostate cancer
US20030124579A1 (en) * 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US20070237770A1 (en) * 2001-11-30 2007-10-11 Albert Lai Novel compositions and methods in cancer
US7279566B2 (en) * 2002-09-13 2007-10-09 University Of Massachusetts Centrosome proteins and uses thereof
CN1852974A (zh) * 2003-06-09 2006-10-25 密歇根大学董事会 用于治疗和诊断癌症的组合物和方法
NZ575886A (en) * 2003-07-17 2010-11-26 Pacific Edge Biotechnology Ltd Serine or cysteine proteinase inhibitor clade H (SERPHINH1) as a marker for detection of gastric cancer
US7807392B1 (en) * 2003-09-15 2010-10-05 Celera Corporation Lung disease targets and uses thereof
EP1892306A3 (en) 2003-10-06 2008-06-11 Bayer HealthCare AG Methods and kits for investigating cancer
CN1657537A (zh) * 2004-02-19 2005-08-24 中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所 一种中心体定位的新基因及其在医药领域中的应用
JP2007522791A (ja) * 2004-02-24 2007-08-16 オンコセラピー・サイエンス株式会社 結腸直腸癌を診断する方法
US7560233B2 (en) * 2004-06-16 2009-07-14 University Of Massachusetts Oxidative DNA damage protection
US20070099209A1 (en) * 2005-06-13 2007-05-03 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating and diagnosing cancer
EP3192521B1 (en) * 2007-10-25 2020-09-16 Toray Industries, Inc. Immune response inducer

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040029114A1 (en) * 2001-01-24 2004-02-12 Eos Technology, Inc. Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
WO2004080148A2 (en) * 2002-10-02 2004-09-23 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GENBANK: "NP_689873.1", 《GENBANK》 *
GENBANK: "XP_535343.1", 《GENBANK》 *

Cited By (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11137401B2 (en) 2008-08-05 2021-10-05 Toray Industries, Inc. Method for detecting cancer using CAPRIN-1 as a marker
US9982059B2 (en) 2008-08-05 2018-05-29 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and prevention of cancers
US9416192B2 (en) 2008-08-05 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and prevention of cancers
US9416191B2 (en) 2010-02-04 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
US9796775B2 (en) 2011-08-04 2017-10-24 Toray Industries, Inc. Method for detecting pancreatic cancer
US9273128B2 (en) 2011-08-04 2016-03-01 Toray Industries, Inc Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
US9409993B2 (en) 2011-08-04 2016-08-09 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of pancreatic cancer
US9573993B2 (en) 2012-02-21 2017-02-21 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment of cancer comprising an anti-CAPRIN-1 peptide antibody
US9273130B2 (en) 2012-02-21 2016-03-01 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
US9428581B2 (en) 2012-03-30 2016-08-30 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of gallbladder cancer
US9416193B2 (en) 2012-03-30 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of liver cancer
CN104471403A (zh) * 2012-07-19 2015-03-25 东丽株式会社 癌的检测方法
CN104471403B (zh) * 2012-07-19 2017-03-01 东丽株式会社 癌的检测方法
US9753038B2 (en) 2012-07-19 2017-09-05 Toray Industries, Inc. Method for detecting cancer via measurement of caprin-1 expression level
US9772332B2 (en) 2012-07-19 2017-09-26 Toray Industries, Inc. Method for detecting CAPRIN-1 in a biological sample
US9862774B2 (en) 2013-08-09 2018-01-09 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer

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