CN101805352B - 一种制备毛萼乙素的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及的是一种应用高速逆流色谱法从唇形科香茶菜属植物疏花毛萼香茶菜的粗提物中制备高纯度的毛萼乙素(eriocalyxin B)的方法，其特点是应用两相互不混溶的溶剂系统在支撑管内高速行星运动的方式下进行天然产物的分离纯化，因而没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制量分离的优点，获得的毛萼乙素纯度可达98％以上，适用于从由各种工艺条件制备的疏花毛萼香茶菜粗品中分离制备毛萼乙素单体，适用于用各种型号的逆流色谱仪分离制备毛萼乙素单体。本发明制备方法操作简单、分离步骤少、效率高、溶剂损耗低、产品纯度高，适合工业化生产。

Description

一种制备毛萼乙素的方法

技术领域

本发明涉及药物学领域，具体地，涉及一种应用高速逆流色谱(HSCCC)法从疏花毛萼香茶菜粗提物中制备高纯度的药物化合物毛萼乙素的方法。

背景技术

毛萼乙素是一种从分布于我国西南部特有的唇形科香茶菜属植物毛萼香茶菜(Isodon eriocalyx(Dunn)Hara)和疏花毛萼香茶菜(Isodon eriocalyx var.laxiflora C.Y.Wu et H.W.Li)中纯化出的对映-贝壳杉烷类化合物。在民间用于抗炎和抗菌。在中国专利申请号CN02134163.X，从毛萼香茶菜中分离了化合物毛萼乙素用于制备预防或治疗癌症的药物。在中国申请号CN200510110089.8，毛萼香茶菜还能用于治疗急性白血病以及伯基特淋巴瘤等疾病。以前报道的毛萼乙素的提取分离主要是采用柱色谱法，包括硅胶柱和凝胶柱。但是所有的这些柱色谱都需要使用固体填料，易产生不可逆吸附，具有样品易损失、易污染、低效、速度慢和分离步骤烦琐等缺点。高速逆流色谱技术不同于传统的柱色谱，不需使用固体填料，而是应用两相互不混溶的溶剂系统在支撑管内高速行星运动的方式下进行天然产物的分离纯化，因而没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制备量分离的优点。迄今，现有技术中未有应用高速逆流色谱(HSCCC)法制备高纯度的药物化合物毛萼乙素的方法的报道。

发明内容

本发明旨在提供一种应用高速逆流色谱(HSCCC)法从疏花毛萼香茶菜粗提物中制备高纯度的毛萼乙素的方法。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：制备毛萼乙素的方法，用高速逆流色谱HSCCC法从疏花毛萼香茶菜粗提物中制备。

高速逆流色谱固定相、流动相的溶剂体系由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水组成，组成比例为4-6∶4-6∶4-6∶4-6。

制备温度选择在18-35℃。

更具体地，本发明制备毛萼乙素的方法是：在室温18-35℃下，首先以4-6∶4-6∶4-6∶4-6体积比将正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水溶剂体系配置于分液漏斗中，摇均后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相，取疏花毛萼香茶菜粗提物溶解于5mL上相和5mL下相的混合溶液中作待分离样品溶液用，采用分析型TBE-20A高速逆流色谱仪(多层缠绕聚四氟乙烯柱容量约为16mL)，并配有柱塞泵、进样阀、紫外检测器和记录仪。先用固定相充满整个柱子，调整主机转速到1600rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样0.1mL；然后根据检测器紫外谱图接收目标成分，经HPLC检测即可。

疏花毛萼香茶菜粗提物的制备，参考中国专利申请号CN02134163.X所载，即：取疏花毛萼香茶菜药材地上部分，粉碎，药粉用70％丙酮室温浸泡提取三次，合并提取液，减压浓缩至干。

该发明方案如下：采用分析型高速逆流色谱仪的小量制备及半制备型高速逆流色谱仪较大量制备，选用的溶剂体系由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水组成，组成比例为4-6∶4-6∶4-6∶4-6，一步分离即可以得到毛萼乙素。室温对分离度有一定的影响，以上分离条件适合温度在18-35℃时使用。

相比于现有技术，本发明应用高速逆流色谱技术HSCCC从疏花毛萼香茶菜粗提物中制备高纯度的毛萼乙素的方法，不同于传统的柱色谱，不需使用固体填料而是应用两相互不混溶的溶剂系统在支撑管内高速行星运动的方式下进行天然产物的分离纯化，因而没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制备量分离的优点，获得的毛萼乙素纯度可达98％以上，适用于用各种型号的逆流色谱仪分离制备毛萼乙素单体，如用分析型高速逆流色谱仪的小量制备及半制备型高速逆流色谱仪的较大量制备均可。

附图说明

图1分析型高速逆流色谱仪TBE-20A对疏花毛萼香茶菜中毛萼乙素(eriocalyxin B)的分离效果图。

图2半制备型高速逆流色谱仪TBE-300B对疏花毛萼香茶菜中毛萼乙素(eriocalyxin B)的分离效果图。

图3高速逆流色谱所得毛萼乙素的¹H NMR图(Bruker DRX500，500MHz，氘代吡啶)。

图4高速逆流色谱所得毛萼乙素的¹³C和DEPT NMR图(BrukerDRX500，125MHz，氘代吡啶)。

图5高速逆流色谱所得毛萼乙素的ESI(a)和HRESI(b)MS图(API QSTAR)。

具体实施方式

为了进一步说明本发明，下面结合附图，给出本发明的具体实施例，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

1、毛萼乙素粗品的制备：

取疏花毛萼香茶菜地上部分1公斤，粉碎后置于10升的渗滤罐，用10升95％乙醇室温渗滤提取3次(3次共用20升)，合并渗滤提取液(约15升)，在球形浓缩罐中浓缩得浸膏67.8克，加入120mL水搅拌均匀，将该水相以相同体积的乙酸乙酯萃取(V∶V＝1∶1，萃取三次)，得乙酸乙酯部位62.7克；将该浸膏溶于95％乙醇，过滤后，上MCI柱除色素，以90％乙醇冲柱，待含有毛萼乙素的流分洗下后，用丙酮洗柱。含毛萼乙素的流分浓缩后即得疏花毛萼香茶菜粗提物58.8克。

2、毛萼乙素的制备：

采用分析型高速逆流色谱仪溶剂选用正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水体系从疏花毛萼香茶菜粗品中分离制备毛萼乙素单体。首先以4.5∶5∶4.5∶5体积比将正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水溶剂体系配置于分液漏斗中，摇均后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相，取步骤1所得500mg疏花毛萼香茶菜粗提物溶解于5mL上相和5mL下相的混合溶液中作待分离样品溶液用，采用上海同田生物技术有限公司生产的分析型TBE-20A高速逆流色谱仪，并配有柱塞泵、进样阀、紫外检测器和记录仪、多层缠绕聚四氟乙烯的柱容量约为16mL。先用固定相充满整个柱子；调整主机转速到1600rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样0.1mL；然后根据检测器紫外谱图接收目标成分(见图1)，经HPLC检测目标化合物毛萼乙素纯度都在98％以上。

毛萼乙素分子结构式为：

实施例2：

采用半制备型TBE-300B高速逆流色谱仪，并配有柱塞泵、进样阀、紫外检测器和记录仪、多层缠绕聚四氟乙烯的柱容量约为260mL。溶剂体系选用正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水5∶5∶5∶5分离制备毛萼乙素单体。首先将上述溶剂体系配置于分液漏斗中，摇均后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。取500mg疏花毛萼香茶菜粗提物溶解于5mL上相和5mL下相的混合物中待用。先用固定相充满整个柱子；调整主机转速到800rpm，以2.0mL/min的流速将流动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样10mL；然后根据检测器紫外谱图接收目标成分。减压旋转蒸发至干。得到毛萼乙素单体95mg，经HPLC检测目标化合物毛萼乙素纯度都在98％以上(见图2)。对所得化合物利用NMR和MS(图3，4和5)进行结构解析，并与文献数据比对，确定该化合物为毛萼乙素无疑。

Claims (3)

1.一种制备毛萼乙素的方法，用高速逆流色谱HSCCC法从疏花毛萼香茶菜粗提物中制备，其特征在于高速逆流色谱固定相、流动相的溶剂体系由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水组成，组成比例为4-6∶4-6∶4-6∶4-6。

2.如权利要求1所述的制备毛萼乙素的方法，其特征在于制备温度选择在18-35℃。

3.如权利要求1所述的制备毛萼乙素的方法，其特征在于在室温18-35℃下，首先以4-6∶4-6∶4-6∶4-6体积比将正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水溶剂体系配置于分液漏斗中，摇均后静置分层，待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相，取疏花毛萼香茶菜粗提物溶解于5mL上相和5mL下相的混合溶液中作待分离样品溶液用，采用分析型TBE-20A高速逆流色谱仪，并配有柱塞泵、进样阀、紫外检测器和记录仪，多层缠绕聚四氟乙烯柱容量为15mL-16mL，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速到1600rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样0.1mL；然后根据检测器紫外谱图接收目标成分，经HPLC检测即可。

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