CN101654697B - 一种混菌发酵制备菜籽肽的方法 - Google Patents
一种混菌发酵制备菜籽肽的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101654697B CN101654697B CN 200910305952 CN200910305952A CN101654697B CN 101654697 B CN101654697 B CN 101654697B CN 200910305952 CN200910305952 CN 200910305952 CN 200910305952 A CN200910305952 A CN 200910305952A CN 101654697 B CN101654697 B CN 101654697B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- rapeseed
- liquid
- fermentation
- peptide
- rapeseed peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 title claims abstract description 56
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 55
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 55
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 8
- 244000188595 Brassica sinapistrum Species 0.000 title 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 58
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 claims abstract description 55
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 27
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 235000019779 Rapeseed Meal Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- 239000004456 rapeseed meal Substances 0.000 claims abstract description 19
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims abstract description 14
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims abstract description 12
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 241000235646 Cyberlindnera jadinii Species 0.000 claims abstract description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 8
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 5
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- 230000006944 antioxidant bioactivity Effects 0.000 claims description 3
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 18
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 16
- 125000004383 glucosinolate group Chemical group 0.000 abstract description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 abstract description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 abstract description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 8
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 8
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 8
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 8
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 4
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000000433 anti-nutritional effect Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Phytic acid Natural products OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- CIUQDSCDWFSTQR-UHFFFAOYSA-N [C]1=CC=CC=C1 Chemical class [C]1=CC=CC=C1 CIUQDSCDWFSTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000007602 hot air drying Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000031891 intestinal absorption Effects 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000002949 phytic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940068041 phytic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000467 phytic acid Substances 0.000 description 1
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种混菌发酵制备菜籽肽的方法，充分发挥微生物的水解蛋白质作用和降解硫甙作用，可以有效提高产品的可溶性氮含量和生物活性。所述混菌发酵制备菜籽肽的方法，包括以下步骤：(1)将菜籽粕粉与营养液混合制备液态发酵培养基；(2)将枯草芽孢杆菌、乳酸菌和产朊假丝酵母接入液态发酵培养基，进行液态发酵；(3)发酵后的液态培养基经固液分离，得到菜籽肽的粗提液；(4)粗提液经提纯得到菜籽肽。本发明生产工艺简单、成本低，同时不同微生物混合发酵时产生多种代谢产物和酶类，酶切位点不同，充分发挥微生物的水解蛋白质和降解硫甙作用，有效降解菜籽粕种的有毒物质，水解蛋白质，提高产品的可溶性氮含量、生物活性和菜籽肽得率。
Description
技术领域
本发明涉及一种混菌发酵制备菜籽肽的方法。
背景技术
我国是世界上油菜籽产量最大的国家，年产量已近1200万吨，菜籽粕是菜籽油加工的主要副产物，占菜籽总量的65％，其中含蛋白35％～42％。菜籽蛋白氨基酸组成合理，赖氨酸、胱氨酸和蛋氨酸的含量较高，与WHO/FAO推荐的氨基酸组成模式相近，营养价值等于或优于动物蛋白，是一种优良的植物蛋白。但由于菜籽粕存在一些抗营养因子，如硫代葡萄糖甙、植酸、多酚类物质等，加工过程中难以脱除，使菜籽粕只能应用于饲料或肥料工业，利用效能低，资源浪费严重。因此，开发利用菜籽蛋白质资源已成为大势所趋，由于菜籽蛋白水解成多肽后，具有更好的生物活性和加工特性，因此加强对菜籽肽的研究与开发，并使之工业化，对有效利用我国的植物蛋白资源，提高我国人民的营养水平，具有重大的社会意义和良好的经济效益。
目前我国对菜籽肽的研究生产刚刚起步，其方法主要为酶法，即是以菜籽分离蛋白为原料，利用商业蛋白酶制剂水解菜籽蛋白制备菜籽肽。该方法以菜籽分离蛋白为原料，生产所用酶制剂用量大且价格昂贵，导致生产成本较高，并且由于菜籽粕或菜籽分离蛋白中抗营养因子不能完全脱除，影响了蛋白酶的活性，水解程度不高，难以形成大规模工业化生产。
CN200810243461.6、CN200810106919.3公开了生物发酵方法对菜籽粕改性的方法，虽然脱除了菜籽蛋白中的硫代葡萄糖甙等有害物质，得到菜籽肽或含有菜籽肽的产品，但是产品的可溶性氮含量和生物活性仍有待进一步提高。
发明内容
本发明提供一种混菌发酵制备菜籽肽的方法，充分发挥微生物的水解蛋白质作用和降解硫甙作用，可以有效提高产品的可溶性氮含量和生物活性。
所述混菌发酵制备菜籽肽的方法，包括以下步骤：
(1)将菜籽粕粉与营养液混合制备液态发酵培养基；
(2)将枯草芽孢杆菌、乳酸菌和产朊假丝酵母接入液态发酵培养基，进行液态发酵；
(3)发酵后的液态培养基经固液分离，得到菜籽肽的粗提液；
(4)粗提液经提纯得到菜籽肽。
步骤(1)中，菜籽粕粉与营养液按固液比1∶5～1∶40g/mL配制液态发酵培养基，其中营养液的pH为4.0～10.0，营养液中包括葡萄糖0.1％～5％，KH2PO4 0.1％～2.0％，上述百分比为质量体积百分比(质量体积百分比指100ml溶液中含某种物质多少克，即1％＝1g/100ml)。优选所述固液比为1∶15～1∶20g/mL，营养液的pH为5.5～6.5。菜籽粕粉的粒径不大于200μm。
步骤(2)中，将枯草芽孢杆菌、乳酸菌和产朊假丝酵母接入液态发酵培养基，使菌体浓度(即接入液态发酵培养基的两种菌种的总菌体浓度)为105～107个/mL，发酵温度20～40℃，优选30～35℃，发酵时间1～5天。三种菌种的混合比例可以任意，本领域普通技术人员也可以经实验确定较优的比例或比例范围。优选的方案是，枯草芽孢杆菌、乳酸菌和产朊假丝酵母分别经活化、扩大培养得到菌体浓度为107～108个/mL的种子液，再将两种种子液按2∶1～2∶1～2的体积比混合，得到发酵种子液，接入液态发酵培养基。发酵种子液的接种量优选为2％～8％，更优选为3％-5％，以种子液相对于液态发酵培养基体积的百分比计。
步骤(3)可以公知的方法进行固液分离，如可以采用真空过滤器或压力过滤器去除残渣，也可以采用离心法，相对离心力为1000g～15000g。
作为本发明的优选方案，步骤(4)中，所述提纯方法为：脱色、脱盐和干燥。优选的方案是，将粗提液采用活性炭脱色，离子交换树脂或反渗透脱盐，采用减压浓缩、热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥方式干燥，得到菜籽肽粉。
作为本发明的另一种优选方案，步骤(4)中，所述提纯方法包括离子交换、疏水层析和凝胶过滤，收集具有抗氧化生物活性的组分，经冷冻干燥得到抗氧化性专一的菜籽肽。当然也可以采用其余的分离纯化方法，如超滤膜进行超滤，收集不同截留分子量的滤液，经脱盐柱脱盐，经过凝胶过滤，收集具有生物活性专一的组分，经冷冻干燥后得到菜籽肽。
本发明与现有的技术相比，直接以菜籽粕为原料混菌液态发酵生产生物活性专一的菜籽肽，原料来源广泛，价格低廉，不需要对其进行酸、碱的处理，更不需要分离出菜籽蛋白，生产工艺简单、成本低，而且变废为宝，有利于环境保护，以微生物发酵取代纯酶制剂水解菜籽蛋白制备多肽，可以节省大量昂贵的生物酶制剂。同时不同微生物混合发酵时产生多种代谢产物和酶类，酶切位点不同，充分发挥微生物的水解蛋白质作用和降解硫甙作用，能有效降解菜籽粕种的有毒物质，水解蛋白质，达到人和动物的食用标准，提高产品的可溶性氮含量、生物活性和菜籽肽得率，还含有多种对人体有益的功能因子。总之，本发明对环境友好，反应条件温和，能充分发挥微生物的水解蛋白质作用和降解硫甙作用，是一种低成本、适合工业化大批量制备菜籽肽的方法。
具体实施方式
实施例1
(1)制备液态发酵培养基
营养液成分：葡萄糖3g，KH2PO4 2g，1000mL，pH为6.5。将普通菜籽粕粉碎至粒径为100μm左右，用营养液按固液比1∶15g/mL的比例与菜籽粕混合均匀，在121℃下灭菌30min后得到液态发酵培养基置于发酵罐内。
(2)液态发酵
①枯草芽孢杆菌种子液的制备：
斜面培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂20g，自来水1000mL，pH7.2-7.4。
种子培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10，NaCl 5g，自来水1000mL，pH 7.2-7.4。
发酵种子的制备：从活化后的菌种培养斜面中，挑取两环枯草芽孢杆菌接种于种子培养基中，8层纱布封口，35℃，120r/min，摇床培养24h，发酵液中菌体浓度达到108个/mL。
②乳酸菌种子液的制备：
斜面培养基配比：酵母膏5g，碳酸钙6g，琼脂15～20g，5°Bè麦芽汁1000mL，pH6.0。
种子培养基配比：酵母膏5g，碳酸钙6g，5°Bè麦芽汁1000mL，pH 6.0。
发酵种子的制备：从活化后的菌种培养斜面中，挑取两环乳酸接种于种子培养基中，8层纱布封口，37℃，120r/min，摇床培养24h，发酵液中的菌体浓度达到108个/mL。
③产朊假丝酵母种子液的制备：
斜面培养基：麦芽浸膏3g，葡萄糖10g，酵母浸膏3g，蛋白胨5g，琼脂20g，自来水1000mL。
种子培养基：麦芽浸膏3g，葡萄糖10g，酵母浸膏3g，蛋白胨5g，自来水1000mL。
发酵种子的制备：从活化后的菌种培养斜面中，挑取两环枯草芽孢杆菌接种于种子培养基中，8层纱布封口，35℃，120r/min，摇床培养24h，发酵液中菌体浓度达到108个/mL。
④混菌发酵种子液的制备：将枯草芽孢杆菌、乳酸菌与产朊假丝酵母种子液按2∶1∶1(v/v)混合即得混菌发酵种子液。
⑤取发酵种子液接入装有液态发酵培养基的发酵罐中，使菌体浓度为106个/mL，调发酵温度为32℃，转速150r/min，震荡培养，定时通风，发酵1～2天。
(3)固液分离，得到菜籽肽的粗提液
取出液态发酵培养基，先用2500g相对离心力低速离心分离去除粕渣，再用10000g相对离心力高速离心去杂，得菜籽肽粗提液，将该菜籽肽粗提液喷雾干燥后测得菜籽肽得率为36.6％。
(4)提纯
将上述粗提液分别通过截留分子量为30kDa、10kDa、3kDa和1kDa的超滤膜进行超滤，收集不同截留分子量的滤液，经脱盐柱(HiPrepTM 26/10，流速30mL/min，温度25℃)脱盐，灭菌(121℃，30min)，喷雾干燥得到生物活性不同的五个组分菜籽肽粉。
将上述粗提液经过离子交换(HiTrapTM离子交换柱SP XL；流速：1mL/min，磷酸盐缓冲液pH7.0，温度：室温)，疏水层析(HiTrapTM疏水层析柱PhenyL FF；流速：1mL/min；温度：25℃)和凝胶过滤(Superdex Peptide HR 10/30；流速：0.5mL/min；温度：25℃)，收集具有抗氧化生物活性的组分，经冷冻干燥后得到抗氧化性专一的菜籽肽。所得菜籽肽的抗氧化生物活性指标如下：
菜籽肽还原能力：产品浓度1mg/mL时，A700nm为1.2％；
自由基清除率：产品浓度0.5mL时，DPPH·自由基清除率为90％
金属螯合力：产品浓度5mg/mL时，金属螯合力为63％；
脂质氧化抑制率：产品浓度1mg/mL时，脂质氧化抑制率为80％；
蛋白质含量(干基，N×6.25)为95％；
可溶性氮含量为98％；
分子量在600Da～2000Da的肽含量为75％；
硫甙含量0μmoL/g。
实施例2
(1)制备液态发酵培养基
营养液成分：葡萄糖3g，KH2PO4 2g，1000mL，pH为6.5。将普通菜籽粕粉碎至粒径为100μm左右，用营养液按固液比1∶25g/mL的比例与菜籽粕混合均匀，在121℃下灭菌30min后得到液态发酵培养基置于发酵罐内。
(2)液态发酵
①枯草芽孢杆菌种子液的制备：
斜面培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5，琼脂20g，自来水1000mL，pH7.2-7.4。
种子培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10，NaCl 5g，自来水1000mL，pH 7.2-7.4。
发酵种子的制备：从活化后的菌种培养斜面中，挑取两环枯草芽孢杆菌接种于种子培养基中，8层纱布封口，35℃，120r/min，摇床培养24h，发酵液中菌体浓度达到108个/mL。
②乳酸菌种子液的制备：
斜面培养基配比：酵母膏5g，碳酸钙6g，琼脂15～20g，5°Bè麦芽汁1000mL，pH6.0。
种子培养基配比：酵母膏5g，碳酸钙6g，5°Bè麦芽汁1000mL，pH 6.0。
发酵种子的制备：从活化后的菌种培养斜面中，挑取两环乳酸接种于种子培养基中，8层纱布封口，37℃，120r/min，摇床培养24h，发酵液中的菌体浓度达到108个/mL。
③产朊假丝酵母种子液的制备：
斜面培养基：麦芽浸膏3g，葡萄糖10g，酵母浸膏3g，蛋白胨5g，琼脂20g，自来水1000mL。
种子培养基：麦芽浸膏3g，葡萄糖10g，酵母浸膏3g，蛋白胨5g，自来水1000mL。
发酵种子的制备：从活化后的菌种培养斜面中，挑取两环枯草芽孢杆菌接种于种子培养基中，8层纱布封口，35℃，120r/min，摇床培养24h，发酵液中菌体浓度达到108个/mL。
④混菌发酵种子液的制备：将枯草芽孢杆菌、乳酸菌与产朊假丝酵母种子液按2∶1∶1(v/v)混合即得混菌发酵种子液。
⑤取发酵种子液接入装有液态发酵培养基的发酵罐中，使菌体浓度为106个/mL，调发酵温度为32℃，转速150r/min，震荡培养，定时通风，发酵1～2天。
(3)固液分离，得到菜籽肽的粗提液
取出液态发酵培养基，先用2500g相对离心力低速离心分离去除粕渣，再用10000g相对离心力高速离心去杂，得菜籽肽粗提液，将该菜籽肽粗提液喷雾干燥后测得菜籽肽得率为32.2％。
(4)提纯
调节菜籽肽粗提液pH至6.5～7.5，加入10g/L的活性炭，于50℃脱色、脱苦1h，然后高速离心(相对离心力为12000g)去杂，上清液经脱盐柱(HiPrepTM 26/10，流速30mL/min)脱盐后，喷雾干燥菜籽肽粗提液得菜籽肽，蛋白质含量(干基，N×6.25)为86％，可溶性氮含量为82％，分子量在1000Da～5000Da的肽含量58％，硫甙含量2μmoL/g。
由以上实施例可以看出，本发明所得菜籽肽可溶性氮含量和分子量在1000Da～5000Da的肽含量都很高，因此产品的溶解性较好，有利于肠道吸收和生物活性功能的发挥。
Claims (6)
1.一种混菌发酵制备菜籽肽的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将菜籽粕粉与营养液混合制备液态发酵培养基；
（2）将枯草芽孢杆菌、乳酸菌和产朊假丝酵母接入液态发酵培养基，进行液态发酵；
（3）发酵后的液态培养基经固液分离，得到菜籽肽的粗提液；
（4）粗提液经提纯得到菜籽肽；
步骤（1）中，菜籽粕粉的粒径不大于200μm；菜籽粕粉与营养液按固液比1:5～1:40g/mL配制液态发酵培养基，其中营养液的pH为4.0～10.0，营养液中包括葡萄糖0.1%～2%，KH2PO40.1%～2.0%，上述百分比为质量体积百分比；
步骤（2）中，枯草芽孢杆菌、乳酸菌和产朊假丝酵母分别经活化、扩大培养得到菌体浓度为107～108个/mL的种子液，再将三种种子液按2：1～2：1～2体积比混合，得到发酵种子液，接入液态发酵培养基，使菌体浓度为105～107个/mL，发酵温度20～40℃，发酵时间1～5天。
2.如权利要求1所述的混菌发酵制备菜籽肽的方法，其特征在于步骤（1）中，所述固液比为1：15～1：20g/mL，营养液的pH为5.5～6.5。
3.如权利要求1所述的混菌发酵制备菜籽肽的方法，其特征在于步骤（2）中，发酵种子液的接种量为2%～8%。
4.如权利要求1-3中任一项所述的混菌发酵制备菜籽肽的方法，其特征在于步骤（4）中，所述提纯方法为：脱色、脱盐和干燥。
5.如权利要求1-3中任一项所述的混菌发酵制备菜籽肽的方法，其特征在于步骤（4）中，所述提纯方法包括离子交换、疏水层析和凝胶过滤，收集具有抗氧化生物活性的组分，经冷冻干燥得到抗氧化性专一的菜籽肽。
6.如权利要求1-3中任一项所述的混菌发酵制备菜籽肽的方法，其特征在于步骤（4）中，所述提纯方法包括用超滤膜进行超滤，收集不同截留分子量的滤液，经脱盐柱脱盐，经过凝胶过滤，收集具有生物活性专一的组分，经冷冻干燥后得到菜籽肽。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200910305952 CN101654697B (zh) | 2009-08-21 | 2009-08-21 | 一种混菌发酵制备菜籽肽的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200910305952 CN101654697B (zh) | 2009-08-21 | 2009-08-21 | 一种混菌发酵制备菜籽肽的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101654697A CN101654697A (zh) | 2010-02-24 |
| CN101654697B true CN101654697B (zh) | 2013-10-30 |
Family
ID=41709148
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200910305952 Expired - Fee Related CN101654697B (zh) | 2009-08-21 | 2009-08-21 | 一种混菌发酵制备菜籽肽的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101654697B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014131422A2 (en) * | 2013-02-28 | 2014-09-04 | Fermentationexperts A/S | Fermented rapeseed feed ingredient |
| CN105361168B (zh) * | 2015-12-02 | 2017-12-19 | 绥化学院 | 一种复合型抗氧化肽及制备方法 |
| CN107502639B (zh) * | 2017-10-13 | 2021-03-12 | 广东生和堂健康食品股份有限公司 | 一种龟甲胶原多肽的提取方法 |
| CN111011575B (zh) * | 2019-12-30 | 2023-03-31 | 广州市科能化妆品科研有限公司 | 一种水母促生长肽及其制备方法 |
| CN112852909B (zh) * | 2021-01-25 | 2023-05-09 | 韩山师范学院 | 一种混合菌种固态发酵虾头制备ace抑制肽的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0006654A2 (en) * | 1978-06-26 | 1980-01-09 | Unilever N.V. | A process for producing a detoxified rapeseed protein concentrate |
| CN101028035A (zh) * | 2006-09-30 | 2007-09-05 | 刘唤明 | 一种饲料添加剂的制备方法 |
| CN101434982A (zh) * | 2008-12-25 | 2009-05-20 | 南京财经大学 | 一种微生物固态发酵制备菜籽活性肽的方法 |
| CN101497910A (zh) * | 2008-01-31 | 2009-08-05 | 海城市宏大牧业有限公司 | 酶解寡肽蛋白的制法 |
-
2009
- 2009-08-21 CN CN 200910305952 patent/CN101654697B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0006654A2 (en) * | 1978-06-26 | 1980-01-09 | Unilever N.V. | A process for producing a detoxified rapeseed protein concentrate |
| CN101028035A (zh) * | 2006-09-30 | 2007-09-05 | 刘唤明 | 一种饲料添加剂的制备方法 |
| CN101497910A (zh) * | 2008-01-31 | 2009-08-05 | 海城市宏大牧业有限公司 | 酶解寡肽蛋白的制法 |
| CN101434982A (zh) * | 2008-12-25 | 2009-05-20 | 南京财经大学 | 一种微生物固态发酵制备菜籽活性肽的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101654697A (zh) | 2010-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106119173B (zh) | 一种无苦味的虾类低分子肽及其制备方法与应用 | |
| CN106581083A (zh) | 一种灵芝成分的提取方法、生物饲料及其制备方法 | |
| CN101692865B (zh) | 一种提高花生粕中氨基酸和蛋白质含量的发酵方法 | |
| CN106244658B (zh) | 一种甘薯蛋白多肽的制备方法 | |
| CN101654697B (zh) | 一种混菌发酵制备菜籽肽的方法 | |
| CN102492759A (zh) | 一种黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法 | |
| CN103911420A (zh) | 菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法 | |
| CN101491288A (zh) | 微生物发酵制备大豆肽工艺 | |
| CN102660622A (zh) | 一种混菌固态发酵制备大豆活性肽的方法 | |
| CN106901363A (zh) | 一种油橄榄果渣酵素的制备方法 | |
| CN102334702B (zh) | 一种紫菜蛋白多糖营养素粉的生产方法 | |
| CN101434982B (zh) | 一种微生物固态发酵制备菜籽活性肽的方法 | |
| CN101869169A (zh) | 以鱼下脚料发酵耦合膜技术制备鱼低聚肽的方法 | |
| CN101434981B (zh) | 一种微生物固态发酵制备生物活性专一的菜籽肽的方法 | |
| CN104152522A (zh) | 一种混菌固态发酵谷朊粉制备小麦活性肽的方法 | |
| CN101654693B (zh) | 微生物发酵制备菜籽肽的方法 | |
| CN108203729B (zh) | 一种巨藻抗氧化肽的制备方法 | |
| CN105166834B (zh) | 一种裂片石莼多糖与明胶肽美拉德反应产物的制备方法 | |
| CN103224973B (zh) | 一种发酵虾头制备活性物质、甲壳素和有机酸钙的方法 | |
| CN101654696B (zh) | 一种微生物液态发酵制备菜籽肽的方法 | |
| CN101492708B (zh) | 混菌固态发酵制备生物活性专一的菜籽肽的方法 | |
| CN101440390B (zh) | 混菌固态发酵制备菜籽活性肽的方法 | |
| CN117305395A (zh) | 一种富含小分子多肽的混菌发酵产品及制备工艺 | |
| CN115261414A (zh) | 一种复合酶联合微生物发酵制备银耳发酵液的方法 | |
| KR102397841B1 (ko) | S-gag 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20131030 Termination date: 20140821 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |