CN101568532A - 作为趋化因子受体活性调节剂的环状衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明一般涉及具有意外的所需药理学性质组合的趋化因子受体活性调节剂。本发明也涉及含有这些调节剂的药用组合物，及使用该调节剂作为治疗和预防炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病、尤其是糖尿病、克罗恩氏病、动脉粥样硬化及多发性硬化的药物的方法，以及制备化合物及其中间体的方法。在本文中也提供活性化合物的代谢物，也提供药用组合物及其用途。

Description

作为趋化因子受体活性调节剂的环状衍生物

[0001]本申请要求分别于2006年7月28日和2007年3月21日提交的美国临时申请号60/834,235和60/896,026的优先权，这两篇文献的公开内容通过引用结合到本文中。

发明领域

[0002]本发明一般涉及具有所需药理学性质的出乎意料的组合的趋化因子受体活性调节剂。本发明也涉及含有这些调节剂的药用组合物，及使用该调节剂作为治疗和预防炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病且尤其是糖尿病、动脉粥样硬化、克罗恩氏病及多发性硬化的药物的方法，以及制备化合物及其中间体的方法。在本文中也提供活性化合物的代谢物、药用组合物及其用途。

背景技术

[0003]趋化因子为分子量为6-15kDa的趋化性细胞因子，其由多种细胞释放以吸引且活化(在其它细胞类型中)巨噬细胞、T和B淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞(综述于：Charo和Rasonhoff，New Eng.J.Med.2006，354，610-621；Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445；和Rollins，Blood 1997，90，909-928中)。根据氨基酸序列中的前两个半胱氨酸是否由单一氨基酸分隔(CXC)或相邻(CC)而定，存在两种主要类型的趋化因子CXC和CC。CXC趋化因子(例如介白素-8(IL-8)、嗜中性粒细胞-活化蛋白-2(NAP-2)和黑素瘤生长刺激活性蛋白(MGSA))主要对嗜中性粒细胞和T淋巴细胞具趋化性，而CC趋化因子(例如RANTES、MIP-1α、MIP-1β、单核细胞趋化性蛋白(MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4和MCP-5)和嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxins)(-1和-2))对(在其它细胞类型中)巨噬细胞、T淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、树突状细胞和嗜碱性粒细胞具趋化性。也存在趋化因子淋巴细胞趋化因子(lymphotactin)-1、淋巴细胞趋化因子-2(两者均为C趋化因子)和CXXXC趋化分子(CX₃C趋化因子)，其不在两种主要趋化因子亚家族的范围内。

[0004]趋化因子与属于G蛋白偶合的七跨膜域蛋白家族的特异性细胞表面受体结合(综述于：Horuk，Trends Pharm.Sci.1994，15，159-165中)，其被称作″趋化因子受体″。在与其同源配体结合时，趋化因子受体通过相关三聚G蛋白转导胞内信号，使得(在其它反应中)胞内钙浓度迅速增加、细胞形状改变、细胞粘着分子表达增加、细胞去颗粒和细胞迁移促进。存在至少十种具有以下特征图的与CC趋化因子结合或响应CC趋化因子的人趋化因子受体(综述于Zlotnik和Oshie Immunity2000，12，121中)：CCR-1(或″CKR-1″或″CC-CKR-1″)[MIP-1α、MCP-3、MCP-4、RANTES](Ben-Barruch等，Cell 1993，72，415-425；和Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)；CCR-2A和CCR-2B(或″CKR-2A″/″CKR-2B″或″CC-CKR-2A″/″CC-CKR-2B″)[MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5](Charo等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA1994，91，2752-2756；和Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)；CCR-3(或″CKR-3″或″CC-CKR-3″)[嗜酸性粒细胞趋化因子-1、嗜酸性粒细胞趋化因子-2、RANTES、MCP-3、MCP-4](Combadiere等，J.Biol.Chem.1995，270，16491-16494；和Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)；CCR-4(或″CKR-4″或″CC-CKR-4″)[TARC、MDC](Power等，J.Biol.Chem.1995，270，19495-19500；和Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)；CCR-5(或″CKR-5″或″CC-CKR-5″)[MIP-1α、RANTES、MIP-1β](Sanson等，Biochemistry 1996，35，3362-3367)；CCR-6(或″CKR-6″或″CC-CKR-6″)[LARC](Baba等，J.Biol.Chem.1997，272，14893-14898)；CCR-7(或″CKR-7″或″CC-CKR-7″)[ELC](Yoshie等，J.Leukoc.Biol.1997，62，634-644)；CCR-8(或″CKR-8″或″CC-CKR-8″)[I-309](Napolitano等，J.Immunol.，1996，157，2759-2763)；CCR-10(或″CKR-10″或″CC-CKR-10″)[MCP-1、MCP-3](Bonini等，DNAand Cell Biol.1997，16，1249-1256)；和CCR-11[MCP-1、MCP-2和MCP-4](Schweickert等，J.Biol.Chem.2000，275，90550)。

[0005]除哺乳动物趋化因子受体外，已展示哺乳动物细胞肥大病毒、疱疹病毒和痘病毒在感染细胞中表达具有趋化因子受体的结合性质的蛋白(综述于：Wells和Schwartz，Curr.Opin.Biotech.1997，8，741-748中)。人CC趋化因子(例如RANTES和MCP-3)可通过这些病毒编码的受体造成钙的迅速迁移。受体表达可通过允许破坏正常免疫系统监视且响应感染而允许感染。另外，人趋化因子受体(例如CXCR4、CCR2、CCR3、CCR5和CCR8)可充当由如同(例如)人免疫缺陷病毒(HIV)一样的微生物感染哺乳动物细胞的共同受体。

[0006]已暗示趋化因子及其同源受体为炎性、传染性和免疫调节性病症和疾病的重要介质，所述病症和疾病包括哮喘和过敏性疾病；以及自身免疫性病变，例如类风湿性关节炎和多发性硬化；和代谢疾病，例如动脉粥样硬化和糖尿病(综述于：Charo和Rasonhoff，New Eng.J.Med.2006，354，610-621；Z.Gao和W.A.Metz，Chem.Rev.2003，103，3733；P.H.Carter，Current Opinion in Chemical Biology 2002，6，510；Trivedi等，Ann.Reports Med.Chem.2000，35，191；Saunders和Tarby，Drug Disc.Today 1999，4，80；Premack和Schall，Nature Medicine 1996，2，1174中)。例如，趋化因子单核细胞化学引诱剂-1(MCP-1)及其受体CC趋化因子受体2(CCR-2)在将白细胞吸引至发炎部位和随后活化该等细胞中起关键作用。当趋化因子MCP-1与CCR-2结合时，其诱导胞内钙浓度迅速增加、细胞粘着分子的表达增加和白细胞迁移的促进。已通过用遗传工程基因修饰小鼠进行的实验提供MCP-1/CCR-2相互作用的重要性的证明。在若干不同类型的免疫激发后，MCP-1^-/-小鼠不能将单核细胞补充至发炎部位中(Bao Lu等，J.Exp.Med.1998，187，601)。同样，当以各种外源药物攻击时，CCR-2-/-小鼠不能补充单核细胞或产生干扰素-γ；此外，CCR-2无效等位基因小鼠(null mice)的白细胞未对MCP-1作出响应而迁移(Landin Boring等，J.Clin.Invest.1997，100，2552)，从而说明MCP-1/CCR-2相互作用的特异性。两个其它组已独立地报导不同CCR-2-/-小鼠品系的相当结果(William A.Kuziel等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1997，94，12053；和Takao Kurihara等，J.Exp.Med.1997，186，1757)。MCP-1-/-和CCR-2-/-动物的生存能力和一般正常健康为值得注意的，在于MCP-1/CCR-2相互作用的破坏不诱导生理学危机。总而言之，这些数据使人们得出结论：阻断MCP-1/CCR2作用的分子会适用于治疗众多炎性和自身免疫性疾病(综述于：M.Feria和F.Díaz-González，Exp.Opin.Ther.Patents 2006，16，49；和J.Dawson，W.Miltz，和C.Wiessner，C.Exp.Opin.Ther.Targets 2003，7，35中)。如下文所述，此假设如今已在多种不同动物疾病模型中得到证实。

[0007]已知在患有类风湿性关节炎的患者中MCP-1被上调(AlisaKoch等，J.Clin.Invest.1992，90，772-779)。此外，几项临床前研究已证实MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用在治疗类风湿性关节炎中的潜在治疗价值。最近显示编码MCP-1的DNA疫苗改善大鼠的慢性多佐剂诱发的关节炎(Sawsan Youssef等，J.Clin.Invest.2000，106，361)。同样，疾病症状可通过直接向患有胶原蛋白诱发的关节炎(Hiroomi Ogata等，J.Pathol.1997，182，106)或链球菌细胞壁诱发的关节炎(Ralph C.Schimmer等，J.Immunol.1998，160，1466)的大鼠给予MCP-1的抗体来控制。或许最重要地，显示MCP-1的肽拮抗剂(MCP-1(9-76))在关节炎MRL-lpr小鼠模型中预防疾病发作且减少疾病症状(视给药时间而定)(Jiang-Hong Gong等，J.Exp.Med.1997，186，131)。此外，已证明小分子CCR2拮抗剂的给药降低关节炎啮齿动物模型的临床评分(C.M.Brodmerkel等，J.Immunol.2005，175，5370；和M.Xia等，美国专利申请0069123，2006)。根据给药时间而定，给予抗CCR2抗体对鼠科动物CIA具有变化的效应(H.Bruhl等，J.Immunol.2004，172，890)。以CCR2-/-小鼠进行的最近研究已表明CCR2的缺失可在特定实验环境中使啮齿动物关节炎模型恶化(M.P.Quinones等，J.Clin.Invest.2004，113，856；M.P.Quinones等，J.Mol.Med.2006，84，503)。

[0008]已知在动脉粥样硬化病变中MCP-1上调，且已显示MCP-1的循环水平通过以治疗剂治疗而降低(Abdolreza Rezaie-Majd等，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2002，22，1194-1199)。几项关键研究已证明MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用在治疗动脉粥样硬化中的潜在治疗价值。例如，当MCP-1-/-小鼠与LDL受体缺乏小鼠杂交时，观测到83％的主动脉脂质沉积的减少(Long Gu等，Mol.Cell 1998，2，275)。类似地，当从已过度表达人阿朴脂蛋白B的小鼠遗传性切除MCP-1时，相对于MCP-1+/+apoB对照小鼠，所得小鼠被保护免于动脉粥样硬化病变形成(Jennifa Gosling等，J.Clin.Invest.1999，103，773)。同样，当CCR-2-/-小鼠与脂蛋白元E-/-小鼠杂交时，观测到动脉粥样硬化病变发病率的显著降低(Landin Boring等，Nature 1998，394，894；T.C.Dawson等，Atherosclerosis 1999，143，205)。最终，当向阿朴脂蛋白E-/-小鼠给予编码CCR2的肽拮抗剂的基因时，则病变范围减小且斑块稳定性增加(W.Ni等，Circulation 2001，103，2096-2101)。将来自CCR2-/-小鼠的骨髓植入ApoE3-Leiden小鼠中可抑制早期动脉粥样化形成(J.Guo等，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2003，23，447)，但对晚期病变具有最小影响(J.Guo等，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2005，25，1014)。

[0009]患有2型糖尿病的患者通常表现为该疾病的标志特征之一的胰岛素抵抗。胰岛素抵抗也与被称作″代谢综合征″或″X综合征″的异常群(其包括肥胖症、动脉粥样硬化、高血压和血脂异常)相关(综述于：Eckel等，Lancet 2005，365，1415中)。公认炎症在2型糖尿病和″X综合征″病理的疾病进程的恶化中起作用(综述于：Chen，PharmacologicalResearch 2006，53，469；Neels和Olefsky，J.Clin.Invest.2006，116，33；Danadona和Aljada，Am J Cardiol.2002 90，27G-33G；Pickup和Crook，Diabetologia 1998，41，1241)。认为MCP-1在肥胖症诱发的胰岛素抵抗中起作用。在培养中，人类前成脂肪细胞构成性地表达MCP-1(Gerhardt，Mol.Cell.Endocrinology 2001，175，81)。CCR2表达于脂肪细胞上；在活体外向分化脂肪细胞中添加MCP-1可降低胰岛素刺激的葡萄糖吸收和若干脂肪形成基因(LpL、降脂蛋白、GLU-4、aP2、β3肾上腺素受体和PPARγ)的表达(P.Sartipy和D.Loskutoff，Proc.Natl.Acad.Sci USA 1999，96，6902)。患有2型糖尿病的患者具有比非糖尿病对照患者的循环MCP-1更高的水平(S.Nomura等，Clin.Exp.Immunol.2000，121，437)，且MCP-1自脂肪组织的释放可通过以抗糖尿病疗法(例如二甲双胍或噻唑烷二酮)治疗来减少(J.M.Bruun等，J.Clin.Endocrinol.Metab.2005，90，2282)。同样，MCP-1也在肥胖症鼠科动物实验模型中过度表达，且主要由脂肪组织产生(Sartipy和Loskutoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2003，100，7265)。在肥胖小鼠中，MCP-1的表达在胰岛素抵抗开始之前和与其同时发生(H.Xu等，J.Clin.Invest.2003，112，1821)。另一研究显示MCP-1的表达与小鼠的围生殖脂肪组织的身体质量正性相关(Weisberg等，J.Clin.Invest.2003，112，1796)。与这些资料一致，db/db小鼠中胰岛素抵抗的发展通过MCP-1的遗传缺失或通过显性阴性肽的基因诱导的表达而得以改善(H.Kanda等，J.Clin.Invest.2006，116，1494)。逻辑转换也可得到证明：MCP-1在脂肪组织中的过度表达促进胰岛素抵抗(N.Kamei等，J.Biol.Chem.2006，281，26602)。也出现一项显示MCP-1的遗传缺失不影响db/db小鼠中胰岛素抵抗的矛盾结果(F.Y.Chow等，Diabetologia 2007，50，471)。与关于MCP-1的数据一致，以CCR2(MCP-1受体)进行的直接研究已显示其在肥胖症和肥胖症诱发的胰岛素抵抗的形成中起作用。维持高脂肪饮食可增加野生型小鼠(C.L.Tsou等，J.Clin.Invest.2007，117，902)和ApoE^-/-小鼠(F.Tacke等，J.Clin.Invest.2007，117，185)中循环CCR2⁺炎性单核细胞的数目。CCR2的遗传缺失减少鼠科动物脂肪组织中活化巨噬细胞的数目(C.N.Lumeng等，Diabetes 2007，56，16)，但不影响被认为维持″瘦弱″状态的M2脂肪巨噬细胞的群体(C.N.Lumeng等，J.Clin.Invest.2007，117，175)。根据实验条件而定(A.Chen等，Obes.Res.2005，13，1311)，CCR2的遗传缺失减少饮食诱发的肥胖症且改良饮食诱发肥胖症模型的胰岛素敏感性(S.P.Weisberg等，J.Clin.Invest.2006，116，115；P Cornelius，RP Gladue，RS Sebastian，WO专利2006/013427 A2，2006)。给予小分子CCR2拮抗剂也改善此相同模型的胰岛素敏感性(S.P.Weisberg等，J.Clin.Invest.2006，116，115)。

[0010]两项研究描述CCR2在高血压诱发的血管炎症、重塑(remodeling)和肥大中的重要作用(E Bush等，Hypertension 2000，36，360；M Ishibashi等，Circ.Res.2004，94，1203)。

[0011]已知在人类多发性硬化中MCP-1上调，且已显示以干扰素β-1b进行的有效疗法降低外周血液单核细胞中的MCP-1表达，表明MCP-1在疾病进程中起作用(Carla Iarlori等，J.Neuroimmunol.2002，123，170-179)。其它研究已证明MCP-1/CCR-2相互作用的拮抗作用在治疗多发性硬化中的潜在治疗价值；已在实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)(多发性硬化的常用动物模型)中证明所有这些研究。向患有EAE的动物给予MCP-1的抗体显著减少疾病复发(K.J.Kennedy等，J.Neuroimmunol.1998，92，98)。此外，两篇报导已显示CCR-2-/-小鼠抵抗EAE(B.T.Fife等，J.Exp.Med.2000，192，899；L.Izikson等，J.Exp.Med.2000，192，1075)。随后的报导通过研究不同品系小鼠的CCR2缺失的影响来扩展这些初始观测(S.Gaupp等，Am.J.Pathol.2003，162，139)。值得注意的是，给予小分子CCR2拮抗剂也减缓C57BL/6小鼠的疾病进程(C.M.Brodmerkel等，J.Immunol.2005，175，5370)。

[0012]已知在肺移植后患上阻塞性细支气管炎综合征的患者中MCP-1上调(Martine Reynaud-Gaubert等，J.of Heart and LungTransplant.，2002，21，721-730；John Belperio等，J.Clin.Invest.2001，108，547-556)。在阻塞性细支气管炎综合征的鼠科动物模型中，给予MCP-1的抗体可使得气管闭塞减弱；同样，CCR2-/-小鼠抵抗此相同模型中的气管闭塞(John Belperio等，J.Clin.Invest.2001，108，547-556)。这些资料表明MCP-1/CCR2的拮抗作用可有益于治疗移植后器官的排斥。另外，研究已显示MCP-1/CCR2轴的破坏能够延长胰岛移植物的存活(I Lee等，J Immunol 2003，171，6929；R Abdi等，JImmunol 2004，172，767)。在大鼠移植物模型中，显示在发展移植性血管病的移植物中CCR2和MCP-1上调(K Horiguchi等，J Heart LungTransplant.2002，21，1090)。在另一研究中，抗MCP-1基因疗法削弱移植性血管病(A Saiura等，Artherioscler Thromb Vasc Biol 2004，24，1886)。一项研究描述MCP-1阻塞对实验血管移植物新生血管内膜(neointimal)形成的抑制作用(H Tatewaki等，J Vasc Surg.2007，45，1236)。

[0013]其它研究已证明MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用在治疗哮喘中的潜在治疗价值。MCP-1与中和抗体在卵白蛋白攻击的小鼠中的螯合作用使得支气管高反应性和炎症显著减少(Jose-Angel Gonzalo等，J.Exp.Med.1998，188，157)。这证明有可能通过给予MCP-1的抗体来减少经曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)卵攻击的小鼠的过敏性气管炎症(Nicholas W.Lukacs等，J.Immunol.1997，158，4398)。与此相一致，MCP-1-/-小鼠显示降低的对以曼氏血吸虫卵攻击的响应(Bao Lu等，J.Exp.Med.1998，187，601)。

[0014]其它研究已证明MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用在治疗肾病中的潜在治疗价值。在肾小球肾炎鼠科动物模型中给予MCP-1的抗体导致肾小球新月体形成和I型胶原蛋白沉积显著减少(Clare M.Lloyd等，J.Exp.Med.1997，185，1371)。另外，患有诱发性肾毒血清肾炎的MCP-1-/-小鼠显示比其MCP-1+/+对应者显著更小的管状损伤(Gregory H.Tesch等，J.Clin.Invest.1999，103，73)。

[0015]几项研究已证明MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用在治疗全身性红斑狼疮中的潜在治疗价值。在全身性红斑狼疮鼠科动物模型中，相对于其WT对应者，CCR2^-/-小鼠显示存活延长和肾病减少(G.Perez de Lema等，J.Am.Soc.Neph.2005，16，3592)。这些数据与患狼疮的啮齿动物模型中关于MCP-1的遗传缺失(S.Shimizu等，Rheumatology(Oxford)2004，43，1121；Gregory H.Tesch等，J.Exp.Med.1999，190，1813)或给予CCR2的肽拮抗剂(H.Hasegawa等，Arthritis & Rheumatism 2003，48，2555)的最新研究中发现的改变病情活动一致。

[0016]相对于未患病回肠而言，在克罗恩氏病患者的小肠中观测到CCR2⁺固有层淋巴细胞显著增加30倍(S.J.Connor等，Gut 2004，53，1287)。同样值得注意的是，相对于对照组而言，在患有活动性克罗恩氏病的患者中存在循环CCR2⁺/CD14⁺/CD56⁺单核细胞的子集(subset)的扩大。几项啮齿动物研究已证实MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用在治疗克罗恩氏病/结肠炎中的潜在治疗价值。CCR-2^-/-小鼠经保护免受葡聚糖硫酸钠诱发的结肠炎的影响(Pietro G.Andres等，J.Immunol.2000，164，6303)。给予CCR2、CCR5和CXCR3的小分子拮抗剂(鼠科动物结合亲和力分别为24nM、236nM和369nM)也保护抵抗葡聚糖硫酸钠诱发的结肠炎(H.Tokuyama等，Int.Immunol.2005，17，1023)。最后，MCP-1-/-小鼠在半抗原诱发的结肠炎模型中显示显著降低结肠损伤(宏观与组织学)(W.I.Khan等，Am.J.Physiol.Gastrointest.LiverPhysiol.2006，291，G803)。

[0017]两篇报导描述MCP-1在患有炎性肠病的患者的肠上皮细胞和肠粘膜中的过度表达(H.C.Reinecker等，Gastroenterology 1995，108，40，和Michael C.Grimm等，J.Leukoc.Biol.1996，59，804)。

[0018]一项研究描述MCP-1基因中的启动子多态现象与硬皮病(系统性硬化症)的联系(S Karrer等，J Invest Dermatol.2005，124，92)。在组织纤维化的相关模型中，CCR2/MCP-1轴的抑制作用降低皮肤(TYamamoto和K Nishioka，J Invest Dermatol 2003，121，510；AM Ferreira等，J Invest Dermatol.2006，126，1900)、肺(T Okuma等，J Pathol.2004，204，594；M Gharaee-Kermani等，Cytokine 2003，24，266)、肾(KKitagawa等，Am J Pathol.2004，165，237；T Wada等，J Am Soc Nephrol2004，15，940)、心脏(S Hayashidani等，Circulation 2003，108，2134)和肝(S Tsuruta等，Int J Mol Med.2004，14，837)的纤维化。

[0019]一项研究已证明MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用在治疗肺泡炎中的潜在治疗价值。当以针对大鼠MCP-1(JE)而产生的抗体经静脉内治疗具有IgA免疫复合物的肺损伤的大鼠时，肺泡炎的症状部分减轻(Michael L.Jones等，J.Immunol.1992，149，2147)。

[0020]若干研究已显示MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用在治疗癌症中的潜在治疗价值(综述于：M.J.Craig和R.D.Loberg，CancerMetastasis Rev.2006，25，611；I.Conti和B.Rollins，Seminars in CancerBiology 2004，14，149；R.Giles和R.D.Loberg，Curr.Cancer DrugTargets 2006，6，659中)。当带有人乳癌细胞的免疫缺陷小鼠经抗MCP-1抗体治疗时，观测到肺微小转移灶的抑制作用和存活增加(Rosalba Salcedo等，Blood 2000，96，34-40)。使用人类临床肿瘤样品，CCR2表达与前列腺癌进程相关(Y.Lu等，J.Cell.Biochem.2007，101，676)。在活体外，已显示MCP-1表达介导前列腺癌细胞生长和入侵(Y.Lu等，Prostate 2006，66，1311)；此外，由前列腺癌细胞表达的MCP-1诱导用于骨胳再吸收的人骨髓祖细胞(Y.Lu等，Cancer Res.2007，67，3646)。

[0021]多项研究已描述MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用在治疗再狭窄中的潜在治疗价值。在人类中，MCP-1含量与再狭窄的风险直接相关(F.Cipollone等，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2001，21，327)。缺乏CCR2或MCP-1的小鼠在动脉损伤后显示内膜面积和内膜/中膜比的减小(相对于野生型同窝出生小鼠而言)(Merce Roque等，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2002，22，554；A.Schober等，Circ.Res.2004，95，1125；W.J.Kim等，Biochem Biophys Res Commun.2003，310，936)。在小鼠中，MCP-1的显性阴性抑制剂在骨胳肌中的转染(K.Egashira等，Circ.Res.2002，90，1167)在动脉损伤后也减少内膜增生。使用中和抗体阻断CCR2在扩展于灵长类动物中后减少新生血管内膜增生(C.Horvath等，Circ.Res.2002，90，488)。

[0022]两篇报导描述在患有诱发性脑损伤的大鼠中MCP-1的过度表达(J.S.King等，J.Neuroimmunol.1994，56，127，和Joan W.Berman等，J.Immunol.1996，156，3017)。另外，研究已显示CCR2^-/-(O.B.Dimitrijevic等，Stroke 2007，38，1345)与MCP-1^-/-小鼠(P.M.Hughes等，J.Cereb.Blood Flow Metab.2002，22，308)经部分保护免于缺血/再灌注损伤。

[0023]已知单核细胞/巨噬细胞在神经病疼痛发展中起重要作用(LiuT，van Rooijen N，Tracey DJ，Pain 2000，86，25)。与此概念相一致，最近已描述CCR2在治疗炎性疼痛与神经病疼痛中的潜在作用。相对于其WT对应物，CCR2^-/-小鼠显示改变的对炎性疼痛的反应，其包括在脚掌内福尔马林注射后疼痛行为减少且在脚掌内CFA注射后机械异常性疼痛(allodynia)轻微减轻(C.Abbadie等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA2003，100，7947)。另外，在坐骨神经损伤后，CCR2^-/-小鼠未显示显著机械疼痛。同样，在口服小分子CCR2拮抗剂后，机械疼痛减轻至原损伤水平的约80％(C.Abbadie，J.A.Lindia和H.Wang，WO PCT110376，2004)。

[0024]一项研究描述MCP-1在缺血性心肌病中的关键作用(N.G.Frangogiannis等，Circulation 2007，115，584)。另一研究描述在MCP-1的抑制作用后实验性心脏衰竭的减弱(S Hayashidani等，Circulation2003，108，2134)。

[0025]其它研究已提供证据证明MCP-1在上文未提及的各种疾病状态中过度表达。这些报导提供相关证据证明MCP-1拮抗剂可为这些疾病的有用治疗剂。另一研究已证明MCP-1在啮齿动物心脏同种异体移植物中的过度表达，此表明MCP-1在移植性动脉硬化的病因中的作用(Mary E.Russell等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993，90，6086)。在患有特发性肺纤维化的患者的肺内皮细胞中已显示MCP-1的过度表达(Harry N.Antoniades等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1992，89，5371)。类似地，在患有牛皮癣的患者的皮肤中已显示MCP-1的过度表达(M.Deleuran等，J.Dermatol.Sci.1996，13，228，和R.Gillitzer等，J.Invest.Dermatol.1993，101，127)；也已报导关于CCR2+细胞的优势的相关发现(C.Vestergaard等，Acta Derm.Venerol.2004，84，353)。最后，最新报导已显示MCP-1过度表达于患有HIV-1相关痴呆的患者的大脑和脑脊髓液中(Alfredo Garzino-Demo，WO 99/46991)。

[0026]另外，已显示CCR2多态现象与至少在一个亚组患者中的肉状瘤病相关(P.Spagnolo等，Am J Respir Crit Care Med.2003，168，1162)。

[0027]也应注意已涉及CCR-2为一些HIV株的共同受体(B.J.Doranz等，Cell 1996，85，1149)。也已确定使用CCR-2作为HIV共同受体可与疾病进程相关(Ruth I.Connor等，J.Exp.Med.1997，185，621)。此发现与最新发现一致，CCR-2突变体(CCR2-64I)的存在与人群中HIV的延迟发作正性相关(Michael W.Smith等，Science 1997，277，959)。尽管MCP-1未牵涉于这些过程中，但通过与CCR-2结合起作用的MCP-1拮抗剂可能在延迟感染HIV的患者的AIDS疾病进程中具有有益治疗效应。

[0028]应注意CCR2也为人趋化因子MCP-2、MCP-3和MCP-4的受体(Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)。因为在本文中所述的新的式(I)化合物通过与CCR-2受体结合而拮抗MCP-1，这些式(I)化合物也可能为由CCR-2介导的MCP-2、MCP-3和MCP-4作用的有效拮抗剂。因此，当在本文中提及″MCP-1的拮抗作用″时，假定其等同于″CCR-2的趋化因子刺激的拮抗作用″。

[0029]因此，调节趋化因子活性的化合物可显示在治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病中的多种效用。专利申请公布号WO 2005021500(其通过引用结合到本文中且转让于本发明申请人)公开通过CCR2调节MCP-1、MCP-2、MCP-3和MCP-4活性的化合物。该参考文献也公开制备这些化合物的多种方法，其包括包含引入且随后移除保护基的多步骤合成。

[0030]需要找出与已知趋化因子调节剂相比具有改良的药理学特性的新的化合物。例如，需要找出具有改良的CCR-2抑制活性和CCR-2对其他G蛋白偶合受体(即5HT2A受体)的选择性的新化合物。也需要找出在以下类别中的一或多种中具有有利和改良的特性的化合物：

(a)药学性质(即溶解性、渗透性、对持续释放制剂的顺从性)；

(b)剂量要求(例如，较低剂量和/或每日给药一次)；

(c)降低血液浓度峰谷比特性的因素(即清除率和/或分布体积)；

(d)增加受体的活性药物浓度的因素(即蛋白结合、分布体积)；

(e)降低临床药物-药物相互作用倾向的因素(细胞色素P450酶抑制作用或诱导作用，例如CYP 2D6抑制作用，参见G.K.Dresser，J.D.Spence，D.G.Bailey，Clin.Pharmacokinet.2000，38，41-57，其通过引用结合到本文中)；

(f)降低有害副作用的可能性的因素(例如，对G蛋白偶合受体的药理学选择性、潜在化学或代谢反应性、有限CNS渗透、离子通道选择性)。尤其需要找出具有前述药理学特性的所需组合的化合物。

[0031]本领域也需要提供制备这些化合物的新的和/或改良方法。这些方法的特征可(不加限制)在于：a)易于调节至更大规模制备，例如试验工厂规模或生产规模；b)方法步骤和/或技术能够改良中间体和/或最终化合物的纯度(包括手性纯度)、稳定性和/或操作简易性；和/或c)更少加工步骤。

发明概述

[0032]因此，在本文中公开具有所需药理学特性的出乎意料的组合的新的趋化因子活性调节剂或其药学上可接受的盐或前药。

[0033]本公开提供药用组合物，其包含药学上可接受的载体和治疗有效量的至少一种本发明化合物或其药学上可接受的盐或前药形式。

[0034]本公开也提供治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病、尤其是糖尿病、多发性硬化、克罗恩氏病和/或动脉粥样硬化的方法，其包括向需要该治疗的主体给予治疗有效量的至少一种本发明化合物或其药学上可接受的盐或前药形式。

[0035]本公开提供一种制备在本文中公开的化合物及其有用中间体的方法。

[0036]本公开也提供活性化合物的代谢物或其药学上可接受的盐或前药、其药用组合物和使用所述代谢物治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病、尤其是糖尿病、多发性硬化、克罗恩氏病和/或动脉粥样硬化的方法。

[0037]本公开提供用于疗法中的新的环状衍生物。

[0038]本公开提供新的环状衍生物在制备用以治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病的药物的用途。

附图简述

[0039]图1公开(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯的X射线晶体结构。

发明详述

[0040]本发明一般涉及具有所需药理学性质的出乎意料的组合的趋化因子受体活性调节剂。本发明也涉及含有这些调节剂的药用组合物，和使用这些调节剂作为治疗和预防炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病、尤其是糖尿病、动脉粥样硬化、克罗恩氏病和多发性硬化的药物的方法，以及制备化合物及其中间体的方法。

[0041]本发明的化合物出乎意料地显示药理学特性的所需组合，其包括令人惊奇地高度口服生物可利用度与表明这些化合物非常有效且具有出色安全性标准的适应症的组合。

[0042]CCR2受体的已知调节剂(例如2005年3月10日公开的专利公布号WO 2005021500(2007年1月16日授权的美国专利第7,163,937号，转让于本申请人)中所公开的那些调节剂，其显示足够程度的膜渗透性(口服生物可利用度的关键因素))如由其CCR2结合能力所测量的不够有效，和/或如由hERG和Ca离子通道研究所测量的离子通道选择性所表明，其缺乏适当的安全性标准。

[0043]相反，如在本文中在下文标题为″比较药理学特性″的部分中呈现的数据所说明，本发明的相对极性分子显示令人惊奇的高度膜渗透性，且仍保持有效CCR2结合能力和出色的离子通道选择性。

[0044]因此，本发明提供具有改良的药理学特性的新的趋化因子调节剂，其预期适用于治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病。

[0045]在本文中也提供活性化合物的代谢物、药用组合物和使用其治疗和预防炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病、尤其是糖尿病、动脉粥样硬化、克罗恩氏病和多发性硬化的方法，以及制备化合物及其中间体的方法。这些活性化合物为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(描述于同在申请中的专利申请案，代理人案号11079中)和N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(描述于同时待审的专利申请中，代理人案号10720中)。这些代谢物的活性在本文中于下文标题为″比较药理学特性″的部分中提出。

实施方案

[0046]在一实施方案中，本发明涉及一种选自以下各物的化合物：

(i)N-((1R，2S，5R)-2-((3S)-3-((6-叔丁基嘧啶并[5，4-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基)乙酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-(甲氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)甲酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-(二甲氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；

N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-6-叔丁基-2-吡啶甲酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-氨基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)丙酰胺；

2-叔丁基-N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-4-(叔丁氨基)-2-(甲烷磺酰基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-4-嘧啶甲酰胺；

2-叔丁基-N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-4-(叔丁氨基)-2-(丙酰基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-4-嘧啶甲酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁氨基)-2-((3S)-3-((6-叔丁基嘧啶并[5，4-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)甲烷磺酰胺；和

N-(((1S，2S，5R)-5-甲氧基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)甲基)乙酰胺；或

(ii)(i)的其药学上可接受的盐。

[0047]在另一实施方案中，本公开涉及一种化合物，其为N-((1R，2S，5R)-2-((3S)-3-((6-叔丁基嘧啶并[5，4-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基)乙酰胺或其药学上可接受的盐。

[0048]在一实施方案中，本公开涉及一种化合物，其为N-((1R，2S，5R)-5-(甲氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺或其药学上可接受的盐。

[0049]在另一实施方案中，本公开涉及一种化合物，其为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)甲酰胺或其药学上可接受的盐。

[0050]在另一实施方案中，本公开涉及一种化合物，其为N-((1R，2S，5R)-5-(二甲氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺或其药学上可接受的盐。

[0051]在另一实施方案中，本公开涉及一种化合物，其为N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-6-叔丁基-2-吡啶甲酰胺或其药学上可接受的盐。

[0052]在另一实施方案中，本公开涉及一种化合物，其为N-((1R，2S，5R)-5-氨基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)丙酰胺或其药学上可接受的盐。

[0053]在另一实施方案中，本公开涉及一种化合物，其为2-叔丁基-N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-4-(叔丁氨基)-2-(甲烷磺酰基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-4-嘧啶甲酰胺或其药学上可接受的盐。

[0054]在另一实施方案中，本公开涉及一种化合物，其为2-叔丁基-N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-4-(叔丁氨基)-2-(丙酰基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-4-嘧啶甲酰胺或其药学上可接受的盐。

[0055]在另一实施方案中，本公开涉及一种化合物，其为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁氨基)-2-((3S)-3-((6-叔丁基嘧啶并[5，4-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)甲烷磺酰胺或其药学上可接受的盐。

[0056]在另一实施方案中，本公开涉及一种化合物，其为N-(((1S，2S，5R)-5-甲氧基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)甲基)乙酰胺或其药学上可接受的盐。

[0057]另一实施方案为一种药用组合物，其包含药学上可接受的载体和实施例的化合物。

[0058]另一实施方案为一种调节趋化因子或趋化因子受体活性的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0059]另一实施方案为一种调节CCR-2受体活性的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0060]另一实施方案为一种调节由CCR2受体介导的MCP-1、MCP-2、MCP-3和MCP-4和MCP-5活性的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0061]另一实施方案为一种调节MCP-1活性的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0062]另一实施方案为一种抑制CCR2和CCR5活性的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0063]另一实施方案为一种治疗炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0064]另一实施方案为一种治疗病症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物，所述病症选自糖尿病、肥胖症、代谢综合征、中风、神经病疼痛、缺血性心肌病、牛皮癣、高血压、硬皮病、骨关节炎、动脉瘤、发热、心血管疾病、克罗恩氏病、充血性心脏衰竭、自身免疫性疾病、HIV感染、HIV相关痴呆、牛皮癣、特发性肺纤维化、移植性动脉硬化、物理或化学诱发性脑损伤、炎性肠道疾病、肺泡炎、结肠炎、全身性红斑狼疮、肾毒性血清肾炎、肾小球性肾炎、哮喘、多发性硬化、动脉粥样硬化、血管炎、易损斑块(vulnerable plaques)、类风湿性关节炎、再狭窄、静脉新生血管内膜增生、透析移植物新生血管内膜增生、动静脉分流血管内膜增生、器官移植、慢性同种异体移植肾病变和癌症。

[0065]另一实施方案为一种治疗病症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物，其中这些病症选自糖尿病、肥胖症、克罗恩氏病、牛皮癣、特发性肺纤维化、移植性动脉硬化、物理或化学诱发性脑损伤、炎性肠道疾病、肺泡炎、结肠炎、全身性红斑狼疮、肾毒性血清肾炎、肾小球性肾炎、哮喘、多发性硬化、动脉粥样硬化和类风湿性关节炎、再狭窄、器官移植和癌症。

[0066]另一实施方案为一种治疗病症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物，其中这些病症选自糖尿病、肥胖症、克罗恩氏病、全身性红斑狼疮、肾小球性肾炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、再狭窄和器官移植。

[0067]另一实施方案为一种治疗病症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物，其中这些病症选自多发性硬化、动脉粥样硬化、克罗恩氏病和糖尿病。

[0068]另一实施方案为一种治疗病症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物，其中这些病症选自再狭窄、器官移植和癌症。

[0069]另一实施方案为一种治疗糖尿病的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0070]另一实施方案为一种治疗多发性硬化的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0071]另一实施方案为一种治疗动脉粥样硬化的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0072]另一实施方案为一种治疗再狭窄的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0073]另一实施方案为一种治疗器官移植的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0074]另一实施方案为一种治疗癌症的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0075]另一实施方案为一种治疗癌症的方法，其中所述癌症选自乳癌、肝癌、前列腺癌和黑素瘤。

[0076]另一实施方案为一种治疗至少部分由CCR-2介导的炎性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病、癌症和/或心血管疾病的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0077]另一实施方案为一种调节CCR2活性的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0078]另一实施方案为一种调节由CCR5受体介导的MIP-1β和RANTES活性的方法，其包括向有此需要的患者给予治疗有效量的实施例的化合物。

[0079]另一实施方案为一种制备药物的实施例的化合物，所述药物用于治疗糖尿病、肥胖症、代谢综合征、中风、神经病疼痛、缺血性心肌病、牛皮癣、高血压、硬皮病、骨关节炎、动脉瘤、发热、心血管疾病、克罗恩氏病、充血性心脏衰竭、自身免疫性疾病、HIV感染、HIV相关痴呆、牛皮癣、特发性肺纤维化、移植性动脉硬化、物理或化学诱发性脑损伤、炎性肠道疾病、肺泡炎、结肠炎、全身性红斑狼疮、肾毒性血清肾炎、肾小球性肾炎、哮喘、多发性硬化、动脉粥样硬化、血管炎、易损斑块、类风湿性关节炎、再狭窄、静脉新生血管内膜增生、透析移植物新生血管内膜增生、动静脉分流血管内膜增生、器官移植、慢性同种异体移植肾病变和癌症。

[0080]另一实施方案为一种用于疗法中的实施例的化合物。

[0081]另一实施方案为一种制备实施例的化合物的方法。

[0082]另一实施方案为一种选自以下的化合物：

(i)N-((1R，2S，5R)-5-(异丙氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-氨基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((3S)-3-((1-氧化-6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-(异丙氨基)-2-((3S)-3-((1-氧化-6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；和

N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁氨基)-2-((3S)-3-((1-氧化-6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；或

(ii)(i)的药学上可接受的盐或前药；

其中所述化合物适合用作药用活性化合物的人代谢物。

[0083]本发明可在不背离其精神或本质特征的情况下，以其它特定形式实施。本发明也涵盖在本文中提及的本发明的备选方面和实施方案的所有组合。应了解任何和所有实施方案可与任何其它实施方案组合描述本发明的其它实施方案。此外，一实施方案的任何要素(包括优选的方面)均意欲与这些实施方案的任一实施方案的任何和所有其它要素组合以描述其它实施方案。

定义

[0084]在本文中所述的化合物可具有不对称中心。含有不对称取代的原子的本发明化合物可分离为光学活性或外消旋形式。本领域熟知如何制备光学活性形式，例如通过拆分外消旋形式或通过自光学活性起始原料合成。烯烃、C＝N双键及其类似物的许多几何异构体也可存在于本文中所述的化合物中，且所有这些稳定异构体均涵盖于本发明中。描述本发明的化合物的顺式和反式几何异构体且其可分离为异构体的混合物或分离的异构形式。除非具体指定特定的立体化学或异构形式，否则意指所有手性、非对映异构体、外消旋形式和所有几何异构形式的结构。

[0085]在本文中公开的化合物的一种对映异构体可显示出比其它对映异构体更优越的活性。因此，认为所有的立体化学均为本发明的部分。需要时，外消旋原料的分离可通过使用手性柱进行HPLC或通过如Steven D.Young等，Antimicrobial Agents and Chemotherapy，1995，2602-2605中所述使用拆分剂(例如樟脑酰氯(camphonic chloride))进行拆分来实现。

[0086]在本文中使用的短语″药学上可接受的″系指具有以下特性的那些化合物、原料、组合物和/或剂型：其在正确医学判断的范畴内适用于与人和动物组织接触而无过度毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，此与合理的利益/风险比相称。

[0087]如在本文中所使用，″药学上可接受的盐″系指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸式盐或碱式盐而改质。药学上可接受的盐的实例包括(但不限于)碱性残基(例如胺)的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基(例如羧酸)的碱性盐或有机盐等。药学上可接受的盐包括常规无毒盐或(例如)由无毒无机酸或有机酸形成的母体化合物的季铵盐。例如，这些常规无毒盐包括由无机酸衍生的那些盐，这些无机酸有例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；和由有机酸制备的盐，这些有机酸有例如乙酸、丙酸、丁二酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸、顺丁烯二酸、羟基顺丁烯二酸、苯基乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、反丁烯二酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸等。

[0088]本发明的药学上可接受的盐可通过常规化学方法，由含有碱性或酸性部分的母体化合物来合成。一般而言，这些盐可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量量的适当碱或酸于水或有机溶剂或两者的混合物中反应来制备；一般而言，例如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈的非水性介质为优选的。适合盐的列表见于Remington′s药物科学(Remington′s Pharmaceutical Sciences)，第17版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1985，第1418页中，其公开内容通过引用结合到本文中。

[0089]因为已知前药增强药物的众多所需性质(例如，溶解性、生物可利用度、制备等)，所以本发明的化合物可以前药形式传递。因此，本发明意欲涵盖本发明所要求的化合物的前药、其传递方法和含有它们的组合物。″前药″意欲包括任何共价键结合的载体，当该前药给予哺乳动物患者时，该载体在活体内释放本发明的活性母体药物。本发明的前药通过使修饰物(modifications)裂解(在常规操作中或在活体内)为母体化合物的方式修饰化合物中所存在的官能基来制备。前药包括其中羟基、氨基或巯基键结至任何基团的本发明的化合物，当本发明的前药给予哺乳动物患者时，其裂解以分别形成游离羟基、游离氨基或游离巯基。前药的实例包括(但不限于)本发明的化合物中醇和胺官能团的乙酸盐、甲酸盐和苯甲酸盐衍生物。

[0090]″稳定化合物″和″稳定结构″意欲表示足够稳固以便在自反应混合物中分离至有用纯度和调配为有效治疗剂后继续存在的化合物。本发明意欲包含稳定化合物。

[0091]″治疗有效量″意欲包括可有效抑制MCP-1或可有效治疗或预防病症的单用本发明化合物的量或所要求的化合物组合的量或本发明的化合物与其它活性成分的组合的量。

[0092]如在本文中所使用的，″治疗″或″处理″涵盖哺乳动物、尤其是人的疾病状态的治疗，且包括：(a)预防哺乳动物中疾病状态的发生，尤其当该哺乳动物倾向于罹患该疾病状态但尚未经诊断患有该疾病状态时；(b)抑制该疾病状态，即，阻止其发展；和/或(c)减轻该疾病状态，即，使该疾病状态消退。

实施例

[0093]以下实施例说明本发明的化合物和起始原料的实施方案，但并非意欲限制权利要求书的范围。

[0094]适当时，反应在干燥氮(或氩)气氛下进行。对于无水反应而言，使用得自EM的Dri-Solv溶剂。对于其它反应而言，利用试剂级或HPLC级溶剂。除非另外说明，否则所有市售试剂按原样使用。

[0095]LC/MS测量使用Shimadzu HPLC/Waters ZQ单一四极质谱仪混合系统获得。所关注的峰的数据由正离子模式电喷雾电离报导。NMR(核磁共振)光谱通常于指定溶剂中于Bruker或JEOL 400MHz和500MHz仪器上获得。所有化学位移系自作为内部标准的具有溶剂共振的四甲基硅烷以ppm报导。¹H-NMR光谱数据通常报导如下：化学位移，峰多裂性(s＝单峰，br s＝宽单峰，d＝双重峰，dd＝两个双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，sep＝七重峰，m＝多重峰，app＝表观)，偶合常数(Hz)和积分(integration)。

[0096]本领域技术人员应了解在本文中利用的标准缩写。为易于提及，这些缩写包括(但未必限于)：sat.＝饱和，HPLC＝高效液相层析，AP＝面积百分比，KF＝Karl-Fischer，RT＝室温，mmol＝毫摩尔，HRMS＝高分辨率质谱，TBTU＝四氟硼酸O-苯并三唑-2-基-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓，MTBE＝TBME＝叔丁基甲基醚，EDAC＝N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐，EDC＝N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺，TEA＝三乙胺，DPPA＝-二苯基磷酰基叠氮化物，IPA＝异丙醇，TFA＝三氟乙酸，DCM＝二氯甲烷，THF＝四氢呋喃，DMF＝N，N-二甲基甲酰胺，BOP＝六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲氨基)鏻，EtOAc＝乙酸乙酯，DMSO＝二甲亚砜，℃＝摄氏度，eq＝当量，g＝克，mg＝毫克，mL(或ml)＝毫升，h＝小时，M＝摩尔浓度，N＝正常，min＝分钟，MHz＝兆赫兹，tlc＝薄层层析，v/v＝体积/体积比。

[0097]″α″、″β″、″R″和″S″为本领域技术人员所熟知的立体化学命名。

实施例1

N-((1R，2S，5R)-2-((3S)-3-((6-叔丁基嘧啶并[5，4-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基)乙酰胺

[0098]实施例1，步骤1：将2-苄氧羰基氨基-7-氧代-6-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-6-甲酸(1R，2S，5R)-叔丁酯(89.6g，0.24mol，参见：P.H.Carter等，PCT申请WO 2005/021500)溶解于乙酸乙酯(1.5L)中且用饱和NaHCO₃(2×0.45L)和饱和NaCl(1×0.45L)洗涤所得溶液。将溶液干燥(Na₂SO₄)，然后直接过滤入3颈3L圆底烧瓶中。通过直接氮注射净化溶液，其后在氮气氛下向其中加入10％Pd/C(13.65g)。将烧瓶抽空且回填氢；将此程序再重复两次。向溶液中鼓泡通入氢气30分钟，然后在1atm H₂下搅拌反应18小时。将烧瓶抽空，回填氮，且加入新鲜催化剂(6g 10％Pd/C)。向溶液中鼓泡通入氢气30分钟，然后在1atm H₂下搅拌反应18小时。将烧瓶抽空且回填氮。将混合物通过硅藻土过滤；随后用乙酸乙酯洗涤滤垫。将滤液(约1.6L EtOAc体积)用乙腈(0.3L)稀释且连续加入L-N-Cbz-甲硫氨酸(68g，0.24mol)、TBTU(77g，0.24mol)和N，N-二异丙基乙胺(42mL，0.24mol)。将反应物在室温下搅拌4小时，在此期间其自悬浮液变为澄清溶液。通过添加饱和NH₄Cl(0.75L)和水(0.15L)猝灭反应；用EtOAc(0.75L)进一步稀释混合物。将各相混合且分离，用饱和Na₂CO₃(2×0.9L)和饱和NaCl(1×0.75L)洗涤有机相。将溶液干燥(Na₂SO₄)，过滤且在真空中浓缩得到呈油状的2-((S)-2-(苄氧羰基氨基)-4-(甲硫基)丁酰氨基)-7-氧代-6-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-6-甲酸(1R，2S，5R)-叔丁酯，其不经进一步纯化而用于下一步骤。LC/MS主峰：[M-Boc+H]⁺＝406.3；[M+Na]⁺＝528.3。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.36(m，5H)，5.11(s，2H)，4.32(m，1H)，4.2(m，1H)，4.0(m，1H)，2.5-2.7(m，3H)，2.25(m，1H)，2.11(s，3H)，2.05(m，4H)，1.9(m，1H)，1.7(m，2H)，1.54(s，9H)。也存在EtOAc[1.26(t)，2.03(s)，4.12(q)]和N，N，N，N-四甲基脲[2.83(s)]。

[0099]实施例1，步骤2：将2-((S)-2-(苄氧羰基氨基)-4-(甲硫基)丁酰氨基)-7-氧代-6-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-6-甲酸(1R，2S，5R)-叔丁酯的样品(假定0.24mol；参见先前程序)溶于碘甲烷(1,250g)中且在室温下搅拌48小时。在真空中浓缩反应物。将残余物溶于二氯甲烷中且在真空中浓缩。将此程序再重复两次。将所得料泥(sludge)溶解于二氯甲烷(0.4L)中且倾入迅速搅拌的MTBE溶液(4.0L)中。将所得黄色固体通过抽吸过滤收集且在高真空下干燥，得到锍盐(179g)。此物质不经进一步纯化而用于下一步骤。LC/MS主峰：[M-Me₂S+H]⁺＝458.4；[M]⁺＝520.4。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.35(m，5H)，5.09(s，2H)，4.33(m，1H)，4.28(m，1H)，3.98(m，1H)，3.3-3.45(m，2H)，2.97(s，3H)，2.94(s，3H)，2.78(m，1H)，2.0-2.3(m，4H)，1.7(m，2H)，1.52(s，9H)。也存在MTBE[1.18(s)，3.2(s)]和痕量N，N，N，N-四甲基脲[2.81(s)]。

[00100]实施例1，步骤3：将来自先前步骤的所有锍盐(假定0.24mol)溶解于DMSO(2.0L)中。将所得溶液在室温、氮气下搅拌且逐份加入碳酸铯(216g)。将悬浮液在室温下搅拌3小时，然后过滤以除去固体。将溶液分为约0.22L的数份且如下进行后处理：将反应混合物(约0.22L)用乙酸乙酯(1.5L)稀释且用水(3×0.5L)和盐水(1×0.3L)连续洗涤。将有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤且在真空中浓缩。获得呈微晶泡沫状的所需2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-7-氧代-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷-6-甲酸(1R，2S，5R)-叔丁酯(90.8g，83％)，其不含四甲基脲杂质。LC/MS主峰：[M-Boc+H]⁺＝358.4；[M+Na]⁺＝480.4。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.35(m，5H)，5.12(s，2H)，4.35(m，2H)，4.2(m，1H)，3.6(m，1H)，3.3(m，1H)，2.64(m，1H)，2.28-2.42(m，2H)，2.15(m，1H)，1.7-2.0(m，5H)，1.55(s，9H)。需要时，可通过溶解于MTBE(1体积)中、添加至庚烷(3.3体积)中，收集所得沉淀物分离为固体的此物质。

[00101]实施例1，步骤4：向2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-7-氧代-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷-6-甲酸(1R，2S，5R)-叔丁酯(108g，0.236mol)于THF(1L)中的搅拌溶液中加入单水合氢氧化锂(21.74g，0.519mol)。缓慢添加水(0.3L)，以使温度不超过20℃。将反应物在室温下搅拌过夜且于真空中除去挥发物。通过添加1N HCl(450mL)和NaH₂PO₄将pH值调节至约4。将所得白色沉淀物通过过滤收集且以水(2×1L)洗涤。将固体溶解于二氯甲烷(1.5L)和水(约1L)中。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤且在真空中浓缩。将残余物溶解于EtOAc(0.7L)中且将所得溶液在回流下加热1小时。冷却至室温后分离固体，通过过滤收集。通过于异丙醇中再结晶纯化这些固体，得到呈白色固体状的所需(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基氨基)环己烷甲酸(104.5g，93％产率)。LC/MS主峰：[M-tBu+H]⁺＝420.2；[M-Boc+H]⁺＝376.2；[M+H]⁺＝476.2。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.35(m，5H)，5.11(s，2H)，4.35(m，2H)，3.71(m，1H)，3.45-3.6(m，2H)，2.99(m，1H)，2.41(m，1H)，2.15(m，1H)，2.0(m，2H)，1.6-1.9(m，4H)，1.46(s，9H)。

[00102]实施例1，步骤5：向3L圆底烧瓶中加入(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基氨基)环己烷甲酸(75.5g，0.158mol)、EDC·HCl(33.5g，0.175mol)、1-羟基苯并三唑(23.6g，0.175mol)和二氯甲烷(1L)。在室温下搅拌反应2小时，在此期间其自白色悬浮液变为澄清溶液。将氨(气)鼓入该溶液中直至pH值为强碱性(试纸)且搅拌反应10分钟；重复加入氨且另外搅拌反应10分钟。添加水。将有机相用饱和NaHCO₃、NaH₂PO₄和盐水洗涤，其后在真空中浓缩。将残余物以乙腈(0.5L)制成浆料，然后浓缩得到呈白色固体状的(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基氨基)环己烷甲酰胺(75.9g，约100％)，其不经进一步纯化而用于下一步骤中。LC/MS主峰：[M-Boc+H]⁺＝375.3；[M+H]⁺＝475.4；[M-tBu+H]⁺＝419.3。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.35(m，5H)，5.11(s，2H)，4.25(m，2H)，3.70(m，1H)，3.6(m，1H)，3.45(m，1H)，2.91(m，1H)，2.38(m，1H)，2.12(m，1H)，1.9-2.05(m，2H)，1.65-1.9(m，4H)，1.46(s，9H)。

[00103]实施例1，步骤6：将反应以三等份进行且合并用于水的后处理。向5L 3颈圆底烧瓶中加入(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基氨基)环己烷甲酰胺(25.3g，53mmol)、乙腈(1.9L)和2.6L水/冰。将混合物搅拌且冷却至0℃。添加二乙酸碘苯(25.77g，80mmol)且搅拌反应2小时；添加另外0.5当量二乙酸碘苯。搅拌反应9小时(反应温度＜10℃)。向混合物中加入8当量N，N-二异丙基乙胺和2当量乙酸酐。在随后30分钟内，每10分钟添加4当量N，N-二异丙基乙胺和2当量乙酸酐，直至反应进行完全(HPLC)。于真空中除去乙腈；自残余物分离一些固体，且通过过滤将其收集。用二氯甲烷(3L，随后1L)萃取剩余的残余物。将有机相用水、饱和NaHCO₃和盐水依次洗涤。将收集的固体以及活性碳(15g)添加至有机相中。在40℃下将混合物搅拌30分钟，随后过滤且在真空中浓缩。将残余物溶解于EtOAc(1L)中，且在75℃下将所得溶液搅拌1小时，随后使其冷却至室温。分离固体且通过过滤收集。通过再结晶将此固体进一步纯化：首先将其溶解于0.5L CH₂Cl₂中，随后在真空中浓缩，随后自1LEtOAc中再结晶；将此程序重复三次。使用相同方法将自上述母液获得的固体再结晶三次。将合并的固体自乙腈(0.7L)中再结晶另外两次，以提供66g(84％)(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(由HPLC，纯度大于99.5％)。LC/MS主峰：[M+H]⁺＝489.4；[M-tBu+H]⁺＝433.3。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.3-7.4(m，5H)，5.11(s，2H)，4.35(m，1H)，4.15(m，1H)，4.04(m，1H)，3.8(m，1H)，3.6(m，2H)，2.44(m，1H)，2.12(m，1H)，1.87-2.05(m，4H)，1.87(s，3H)，1.55-1.7(m，2H)，1.46(s，9H)。如图1所示，通过此化合物的X射线晶体结构分析，证实霍夫曼重排(Hofmannrearrangement)的立体化学真实性(fidelity)。

[00104]实施例1，步骤7：向(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(66g，0.135mol)于二氯甲烷(216mL)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(216mL)。将反应物在室温下搅拌2小时且在真空中浓缩。将残余物溶解于甲醇中且将所得溶液在真空中浓缩；将此程序重复一次。获得呈油状的(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-氨基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯且将其直接用于以下步骤8中。LC/MS实测值[M+H]⁺＝389.4。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.3-7.4(m，5H)，5.12(s，2H)，4.41(br.s，1H)，4.15(m，1H)，4.00(t，J＝9.3Hz，1H)，3.81(t，J＝9.1Hz，1H)，3.65(q，J＝8.4Hz，1H)，3.3-3.4(m，1H)，2.45(m，1H)，1.95-2.24(m，5H)，2.00(s，3H)，1.6-1.8(m，2H)。

[00105]实施例1，步骤8：向(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-氨基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(约0.135mol)于甲醇(675mL)中的搅拌溶液中依次加入丙酮(37.8g，4eq)、乙酸钠(33.2g，3eq)和氰基硼氢化钠(16.9g，2eq)。将混合物在室温下搅拌6小时且过滤。将滤液溶解于二氯甲烷(1L)中；用1N NaOH(1L)洗涤此溶液。将在过滤中收集的固体在0℃下溶解于1N NaOH(1L)中，然后以二氯甲烷(1L)萃取。合并有机萃取物且用HCl水溶液(200mL 1N HCl+800mL水)萃取。将水相用饱和NaHCO₃(500mL)和随后1N NaOH(100mL)碱化直至pH值为11。用二氯甲烷(2L)萃取水相。合并有机萃取物，干燥(Na₂SO₄)，过滤且在真空中浓缩得到呈油状的(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯。LC/MS实测值[M+H]⁺＝431.45。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.3-7.4(m，5H)，5.12(s，2H)，4.31(m，1H)，4.24(t，J＝9.4Hz，1H)，4.11(m，1H)，3.61(t，J＝9.1Hz，1H)，3.52(q，J＝8.6Hz，1H)，3.04(br.s，1H)，2.96(sep，J＝6.3Hz，1H)，2.40(m，1H)，2.15(m，1H)，1.92(s，3H)，1.7-1.9(m，5H)，1.65(m，1H)，1.12(app.dd，J＝6.3，1.1Hz，6H)。

[00106]实施例1，步骤9(参见下文替代性步骤9)：将(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(约115mmol)于二氯甲烷(600mL)中的搅拌溶液冷却至0℃且依次加入甲醛(18.6g，37重量％溶液)、三乙胺(23mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(28.7g)。将混合物在室温下搅拌30分钟且用二氯甲烷(多达1.2L)稀释。将此溶液用500mL饱和NaHCO₃+NaOH(饱和NaHCO₃，pH至11 w/1N NaOH)洗涤三次。用HCl水溶液(200mL 1NHCl+600mL水)萃取有机相。将水相以饱和NaHCO₃((500mL)和随后1N NaOH(100mL)碱化直至pH值为11。用二氯甲烷(1.2L)萃取水相。合并有机萃取物，干燥(Na₂SO₄)，过滤且在真空中浓缩得到呈油状的(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯，其直接用于以下步骤10中。LC/MS实测值[M+H]⁺＝445.4。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.3-7.4(m，5H)，5.12(s，2H)，4.33(br.s，1H)，4.25(t，J＝9.2Hz，1H)，4.11(br.s，1H)，3.5-3.6(m，2H)，2.77(v br s，2H)，2.41(m，1H)，2.26(s，3H)，2.0-2.1(m，2H)，1.92(s，3H)，1.7-1.9(m，5H)，1.10(app.dd，J＝17，6.4Hz，6H)。

[00107]实施例1，步骤10：向(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)-环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(约0.115mol)于甲醇(600mL)中的溶液中添加10％Pd/C(6g 50％湿催化剂)。将烧瓶抽空且用氢气回填。在1atm H₂下搅拌混合物2小时且通过硅藻土过滤除去催化剂。将滤液在真空中浓缩，得到呈油状的N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基)乙酰胺，其不经进一步纯化而用于下一步骤。LC/MS实测值[M+H]⁺＝311.47。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ4.39(br.s，1H)，4.00(m，1H)，3.3-3.5(m，4H)，2.73(m，1H)，2.38(m，1H)，2.25(s，3H)，2.0-2.2(m，3H)，1.94(s，3H)，1.6-1.75(m，4H)，1.07(app.dd，J＝21，6.4Hz，6H)。

[00108]实施例1，步骤11：向N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基)乙酰胺(62mg，0.2mmol)于异丙醇(3mL)中的溶液中添加2-叔丁基-8-氯-嘧啶并[5，4-d]嘧啶(49mg，1.1eq，参见：P.H.Carter等，PCT申请WO 2005/021500)和三乙胺(40.4mg，2eq)。在室温下搅拌混合物1小时。减压除去溶剂。通过制备型HPLC纯化残余物，得到呈其TFA盐的标题化合物(125mg，86.3％)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝497。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)，δppm：9.31(1H，s)，8.67(1H，s)，5.07(1H，t，J＝9.92Hz)，4.14-4.31(2H，m)，3.57-3.89(4H，m)，2.78(3H，s)，2.58-2.67(1H，m)，2.38-2.50(1H，m)，1.94-2.29(6H，m)，1.92(3H，s)，1.51(9H，s)，1.41(3H，d，J＝6.61Hz)，1.34(3H，dd，J＝6.36，3.81Hz)。

实施例2

N-((1R，2S，5R)-5-(异丙氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺

[00109]实施例2，步骤1：向(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(30mg，0.07mmol；参见实施例1，步骤8)于甲醇(3mL)中的溶液中添加10％Pd/C(30mg 50％催化剂)。将烧瓶抽空且自氢气球回填氢气。在室温、1atm氢气下搅拌混合物1.5小时，然后通过过滤除去催化剂。在真空中浓缩滤液。将残余物溶解于异丙醇(3mL)中且依次加入4-氯-6-(三氟甲基)喹唑啉(19.4mg，1.2eq)和二异丙基乙胺(18mg，2eq)。在室温下搅拌混合物1小时。减压除去溶剂。通过制备型反相HPLC纯化残余物，得到呈其TFA盐的标题化合物(47mg，93％)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝493。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)，δppm：8.90(1H，s)，8.81(1H，s)，8.25-8.29(1H，m)，7.96(1H，d，J＝8.65Hz)，5.44(1H，t，J＝9.92Hz)，4.42(1H，d，J＝2.54Hz)，4.15-4.24(1H，m)，3.90(1H，t，J＝8.65Hz)，3.70-3.79(1H，m)，3.46-3.62(2H，m)，2.56-2.67(1H，m)，2.33-2.47(1H，m)，1.70-2.23(9H，m)，1.35(6H，d，J＝6.10Hz)。

实施例3

N-((1R，2S，5R)-5-(甲氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺

[00110]实施例3，步骤1：将(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯样品(43.2g，88mmol；参见实施例1，步骤6)溶解于二氯甲烷(200mL)中。向该溶液中加入TFA(100mL)，将其搅拌2.5小时，且在真空中浓缩。将残余物再溶解于二氯甲烷(200mL)中且将所得溶液逐滴添加至纯乙醚(2.0L)的搅拌溶液中。以乙醚洗涤液收集白色固体，然后将其溶解于碱性盐水溶液(于NaCl中2.0M和于K₂CO₃中1.0M，共350mL)中。添加二氯甲烷(1.2L)，且将两相剧烈混合，随后分离。用二氯甲烷(3×450ml)萃取水相。合并有机相，干燥(MgSO₄)，过滤且在真空中浓缩，在高真空下抽吸后得到呈微晶固体状的(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-氨基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(34.8g，定量)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝389.5。

[00111]实施例3，步骤2：将(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-氨基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯样品(34.8g，约90mmol)溶解于甲醇(400ml)中。将烧瓶用氮气净化且加入三乙胺(15.61ml，112mmol)，接着加入4-甲氧基苯甲醛(13.62ml，112mmol)。在室温下搅拌反应14小时，此时反应的LC/MS显示伯胺完全消耗且形成所需亚胺(LC/MS实测值[M+H]⁺＝507.4)。将反应冷却至0℃且经1分钟分次加入硼氢化钠(5.08g，134mmol)。在30分钟后除去冰浴且另外搅拌溶液3.5小时。将反应在真空中浓缩得到白色固体/胶状物，将其溶解于400mL饱和NaHCO₃和1200mL EtOAc中。将各相剧烈混合，然后分离。用2×800mL 0.5N HCl洗涤有机相(注释：在第一次萃取中，少量的第三油相在底部；连同酸相一起取得)。合并酸洗液，用固体NaOH减化至pH 13，冷却至室温，然后用EtOAc(1×1000mL；2×600mL)萃取。合并有机萃取物，用盐水(1×120mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤且在真空中浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中且浓缩；重复此程序，在高真空下抽吸后得到呈流动微晶固体状的(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(4-甲氧基苄氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(43.68g，86mmol，96％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝509.6。

[00112]实施例3，步骤3：将(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(4-甲氧基苄氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯样品(54.45g，107mmol)溶解于二氯甲烷(400mL)中。在N₂气流下将所得溶液冷却至0℃，然后依次加入三乙胺(29.8ml，214mmol)、甲醛水溶液(11.96mL37％溶液，161mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(34.0g，161mmol)。移去冰浴且在室温下搅拌反应2小时，随后用750mL EtOAc稀释且用饱和NaHCO₃(2×250mL)洗涤。将有机相在真空中浓缩且将所得残余物溶解于EtOAc(750mL)中。用酸[2×(200mL 1N HCl/300mL H₂O)]洗涤有机相。合并酸性洗液，然后用6N NaOH(80mL)和饱和NaHCO₃(70mL)碱化。用EtOAc(3×500mL)萃取混合物。合并有机萃取物，用盐水(1×100mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤且在真空中浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中且浓缩；将此程序重复两次，在高真空下抽吸后得到呈强烈白色微晶泡沫状的(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-((4-甲氧基苄基)(甲基)氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(54.14g，104mmol，97％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝523.6。

[00113]实施例3，步骤4：将(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-((4-甲氧基苄基)(甲基)氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯样品(25.0g，47.8mmol)溶解于MeOH中。向烧瓶中加入二羟基钯(6g，8.54mmol)，抽空且用氢气囊回填氢气。将混合物在室温下搅拌过夜，然后过滤(3×80mL异丙醇洗液)。将残余物在高真空下浓缩至干。在减压下将残余物与异丙醇(4×150mL)一起共沸干燥，得到N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(甲氨基)环己基)乙酰胺(12.5g，46.6mmol，97％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝269。

[00114]实施例3，步骤5：向N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(甲氨基)环己基)乙酰胺(12.5g，46.6mmol)于二氯甲烷中的溶液中添加三乙胺(12.98mL，93mmol)和4-氯-6-(三氟甲基)喹唑啉(10.83g，46.6mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩至干。将残余物溶解于二氯甲烷(350mL)中且用乙酸水溶液(1×200mL，1×100mL；由300mL H₂O和16mL乙酸制得)萃取。将酸性水层(pH 4-5)用二氯甲烷(2×300mL)萃取，用Na₂CO₃碱化至pH 10-11，然后用二氯甲烷(2×350mL；需要时用Na₂CO₃将水层的pH值保持为10-11)萃取。用饱和NaCl溶液(1×200mL)洗涤有机相；用二氯甲烷(1×100mL)反萃取NaCl层。合并有机萃取物，干燥(Na₂SO₄)，过滤且在真空中浓缩得到标题化合物(19.4g，90％)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝465。HPLC显示纯度为99.4％，其中最大单一杂质为0.5％。¹H-NMR(500MHz，CD₃OD)，δppm：8.77(1H，s)，8.56(1H，s)，8.02(1H，dd，J＝8.80，1.37Hz)，7.87(1H，d，J＝8.52Hz)，5.25(1H，t，J＝8.52Hz)，4.53(1H，q，J＝3.94Hz)，4.01(1H，dt，J＝11.96，3.85，3.71Hz)，3.46-3.64(2H，m)，2.77-2.86(1H，m)，2.47-2.57(1H，m)，2.41(3H，s)，2.22(1H，dq，J＝12.51，12.44，3.57Hz)，1.98(3H，s)，1.95-1.98(1H，m)，1.92-1.98(1H，m)，1.84-1.91(1H，m)，1.78(1H，t，J＝3.44Hz)，1.71-1.76(1H，m)，1.62-1.69(1H，m)。

[00115]实施例3，再结晶：将来自步骤5的标题化合物样品(19.4g)添加至300mL无水乙醇中。使混合物在氮气氛下达到回流，此使得固体完全溶解，然后在搅拌下缓慢冷却至约60℃(在浓缩前形成一些固体)。在搅拌下在减压下将混合物缓慢浓缩(油浴保持在约64℃)，直至产物和乙醇的总重量为约62g。在浓缩期间沉淀出大量固体。将混合物缓慢冷却至室温，然后在冰浴中冷却1小时。将冷混合物过滤且用冷乙醇(约15mL)洗涤固体。在55℃-60℃下将固体减压干燥过夜，得到标题化合物的游离碱(17.4g；90％回收率)。HPLC显示纯度为99.9％。

实施例4

N-((1R，2S，5R)-5-氨基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺

[00116]实施例4，步骤1：向(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(1.7g，3.48mmol；参见实施例1，步骤6)于甲醇(10mL)中的溶液中添加10％Pd/C(0.6g50％湿催化剂)。将烧瓶抽空且用氢气囊回填氢气。在室温及1atm氢下，将混合物搅拌14小时且通过过滤除去催化剂。在真空中浓缩滤液，得到(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯，其不经进一步纯化而用于下一步骤中。LC/MS实测值[M+H]⁺＝355。

[00117]实施例4，步骤2：向(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(约3.4mmol)于异丙醇(10mL)中的溶液中添加4-氯-6-(三氟甲基)喹唑啉(0.97g，1.2eq)和二异丙基乙胺(0.88g，2eq)。在室温下搅拌混合物2.5小时。减压除去溶剂。通过硅胶柱层析纯化残余物，用于二氯甲烷中的1％和5％MeOH洗脱，得到(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(2.0g，约100％)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝551。

[00118]实施例4，步骤3：向(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(1.65g，3mmol)于二氯甲烷(8mL)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(4mL)。将反应物在室温下搅拌1小时且在真空中浓缩。将残余物溶解于1mL甲醇与5mL二氯甲烷的混合物中。在搅拌下将所得溶液逐滴添加至80mL叔丁基甲基醚中。将所形成的固体通过过滤收集且干燥，得到呈其TFA盐形式的标题化合物(1.75g，86％)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝451。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)，δppm：8.82(1H，s)，8.77(1H，s)，8.20-8.27(1H，m)，7.95(1H，d，J＝8.65Hz)，5.32(1H，t，J＝9.92Hz)，4.36(1H，t，J＝4.07Hz)，4.16-4.23(1H，m)，3.87(1H，t，J＝9.16Hz)，3.70-3.79(1H，m)，3.39(1H，s)，2.54-2.67(1H，m)，2.32-2.45(1H，m)，2.08-2.23(2H，m)，1.88-2.04(6H，m)，1.73-1.87(1H，m)。

实施例5

N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((3S)-3-((1-氧化-6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺

[00119]实施例5，步骤1：通过反相HPLC纯化(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯样品(参见实施例4，步骤2)。将所得TFA盐溶解于EtOAc中且依次用1N NaOH和饱和NaCl洗涤。将有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，过滤且在真空中浓缩。将所得游离碱(117mg，0.21mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)中且向所得溶液中加入间氯过氧苯甲酸(105mg 77％纯度的商业试剂)。溶液在5分钟内变为黄色。搅拌反应3小时，随后通过添加Na₂S₂O₃水溶液中止反应。用EtOAc稀释混合物且分离各层。将有机相依次用饱和NaHCO₃和盐水洗涤，随后干燥(Na₂8O₄)，过滤且在真空中浓缩得到呈黄色固体状的4-((S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁氧羰基氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基)-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物。LC/MS实测值[M+H]⁺＝567。将此物质全部溶解于二氯甲烷(6mL)中且用三氟乙酸(2.5mL)处理。使所得溶液静置3小时，随后在真空中浓缩。将残余物再溶解于二氯甲烷(6mL)中且用三氟乙酸(2.5mL)处理。使所得溶液静置0.5小时，随后在真空中浓缩。通过反相HPLC纯化残余物，在冻干后得到呈黄色粉末状的4-((S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-氨基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基)-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物的TFA盐(13.6mg)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝467.3。

[00120]实施例5，步骤2：将4-((S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-氨基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基)-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物样品(TFA盐，13.6mg)溶解于2mL的1∶1丙酮/甲醇中且向所得溶液中加入氰基硼氢化钠(0.3mL的于甲醇中的0.1M溶液)。在1.5小时后LC/MS分析显示起始原料消耗且转化为4-((S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基)-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物，MS实验值[M+H]⁺＝509.3。此物质未经分离而是进一步反应：向溶液中加入37％甲醛水溶液(0.06mL)且搅拌30分钟，此时LC/MS分析显示产生所需4-((S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基)-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物，[M+H]+＝523.3。用氮气流减少体积且通过反相HPLC纯化所得残余物得到呈黄色粉末状的标题化合物的TFA盐(1.7mg)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝523.3。

实施例5的替代性制备

[00121]实施例5，替代性制备，步骤1：在N₂气氛下，将4-氯-6-(三氟甲基)喹唑啉样品(3.25g，13.97mmol)溶解于乙腈(60mL)中。向所得混浊溶液中加入Cs₂CO₃(6.83g，20.96mmol)和酚(1.578g，16.77mmol)且在室温下搅拌。在约65小时后，过滤反应物以除去固体。在真空中浓缩有机相得到橙色固体。通过使用1∶3 EtOAc/己烷作为洗脱剂的自动快速层析(80g硅胶)纯化该物质，得到呈结晶固体状的所需4-苯氧基-6-(三氟甲基)喹唑啉。LC/MS实测值(M+H)⁺＝291.1。

[00122]实施例5，替代性制备，步骤2：向4-苯氧基-6-(三氟甲基)喹唑啉(1.61g，5.55mmol)于无水CH₂Cl₂(20mL)中的溶液中添加3-氯过氧苯甲酸(1.243g，5.55mmol)且在室温下将该混合物搅拌5小时。此时，白色固体开始沉淀。以若干滴Me₂S猝灭反应。向混合物中添加40mL己烷以沉淀不需的2-羟基-4-苯氧基-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物(0.43g)，通过过滤将其收集。将滤液浓缩以沉淀所需的4-苯氧基-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物(0.93g)，其被苯甲酸副产物和约15％的2-羟基-4-苯氧基-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物污染。此物质未经进一步纯化而用于随后化学反应中。LC/MS实测值(M+H)⁺＝307.06。

[00123]实施例5，替代性制备，步骤3：向N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基)乙酰胺(50mg，0.161mmol；参见实施例1，步骤10)和4-苯氧基-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物(99mg，0.161mmol)于i-PrOH(2mL)中的溶液中添加N，N-二异丙基乙胺(0.056ml，0.322mmol)。将容器于氩气下密封且于微波中在120℃下加热1小时。LC/MS实测值：(M+H)⁺＝523.3，作为主要产物峰。将混合物浓缩且通过自动快速层析(40g硅胶，以8∶92 10％cNH₄OH/MeOH洗脱)纯化。合并含有所需产物的流分且在真空中浓缩。将残余物自CH₂Cl₂和己烷中结晶。合并两批产物且在真空下干燥，得到标题化合物4-((S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基)-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物(93mg)。通过¹H-NMR分析显示此物质含有约0.75摩尔当量的CH₂Cl₂。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ8.99(s，1H)，8.81(s，1H)，8.62(d，J＝8.9Hz，1H)，8.32(dd，J＝9.0，1.5Hz，1H)，5.28(t，J＝8.4Hz，1H)，4.59(br.s，1H)，4.05(m，1H)，3.55-3.65(m，2H)，3.43(m，1H)，2.75(br.s，1H)，2.55(m，1H)，2.27(s，3H)，2.1-2.3(m，3H)，2.02(s，3H)，2.0(m，1H)，1.65-1.7(m，3H)，1.12(d，J＝6.0Hz，3H)，1.06(d，J＝6.0Hz，3H)。LC/MS实测值：[M+H]⁺＝523.33。

实施例6

N-((1R，2S，5R)-5-(异丙氨基)-2-((3S)-3-((1-氧化-6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺

[00124]实施例6，步骤1：标题产物作为实施例5的第一列出合成的部分来合成(以两个步骤进行)。需要时，标题化合物可由此程序纯化，而并非进一步反应以形成实施例5。

实施例6的替代性制备

[00125]实施例6，替代性制备，步骤1：向(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(0.090g，0.209mmol；参见实施例1，步骤8)于MeOH(10mL)中的溶液中添加约100mg的10％Pd/C(50％，湿)。在H₂(50psi)下搅拌混合物14小时。滤出催化剂且蒸发溶剂得到呈泡沫状固体残余物的N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙氨基)环己基)乙酰胺(50mg，0.169mmol)。将此物质溶解于i-PrOH(2mL)中，且向所得溶液中加入4-苯氧基-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物(103mg，0.169mmol；参见实施例5，替代性制备，步骤2)和N，N-二异丙基乙胺(0.059ml，0.337mmol)。将容器在氩气氛下密封且于微波中在120℃下加热1小时。蒸发反应物得到油状残余物，通过自动快速层析将其纯化得到黄色固体。将其自CH₂Cl₂-己烷中再结晶得到所需4-((S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基)-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物(第一批43.5mg和第二批3.1mg)。LC/MS实测值：(M+H)⁺＝509.32。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)，δppm：8.99(s，1H)，8.81(s，1H)，8.62(d，J＝9.0Hz，1H)，8.33(dd，J＝9.0，1.6Hz，1H)，5.28(t，J＝8.3Hz，1H)，4.56(brs，1H)，4.02(brd，1H)，3.63(m，2H)，3.18(brs，1H)，2.55(m，1H)，2.27(m，1H)，2.03(s，3H)，1.97-1.67(m，7H)，1.16(d，J＝5.5Hz，3H)，1.15(d，J＝5.5Hz，3H)。

实施例7

N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)甲酰胺

[00126]实施例7，步骤1：在0℃下向(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基氨基)环己烷甲酸(38g，0.0799mol；参见实施例1，步骤4)于二氯甲烷(400mL)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(100mL)。将反应物在室温下搅拌2小时且在真空中浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷(100mL)中且在搅拌下将所得溶液逐滴添加至乙醚(1500mL)中。将所形成的固体通过过滤收集且用乙醚(3×50mL)洗涤。将白色固体于真空中干燥得到呈其TFA盐形式的(1R，2S，5R)-5-氨基-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己烷甲酸(35.5g，86％)。该化合物不经进一步纯化而用于下一步骤中。LC/MS实测值[M+H]⁺＝376。

[00127]实施例7，步骤2：向(1R，2S，5R)-5-氨基-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己烷甲酸(TFA盐，35.5g，0.0725mol)于二氯乙烷(350mL)中的搅拌溶液中依次加入N-甲基吗啉(29.3g，4.0eq)和丙酮(42.05g，10eq)。在室温下搅拌混合物10分钟且在0℃下添加三乙酰氧基硼氢化钠(30.7g，2eq)。在室温下搅拌混合物14小时，随后添加甲醛(37重量％溶液，28.4g，5eq)和三乙酰氧基硼氢化钠(18.4g，1.2eq)。在室温下搅拌混合物2小时。添加水(70ml)且持续搅拌10分钟。将混合物减压浓缩以除去有机溶剂。用饱和NaHCO₃溶液将所得混合物调节至pH为7-8，然后用1N HCl调节至pH为约6。用二氯甲烷(5×250ml)萃取混合物。合并萃取物，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷(100ml)中且在搅拌下将所得溶液逐滴添加至乙醚(1500ml)中。将所形成的固体通过过滤收集且用乙醚(3×50ml)洗涤。将白色固体于真空中干燥得到(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己烷甲酸(31g，99％)。该化合物不经进一步纯化而用于下一步骤中。LC/MS实测值[M+H]⁺＝432。

[00128]实施例7，步骤3：在0℃下向(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己烷甲酸(15.0g，0.0348mol)于1，4-二氧六环(200mL)中的搅拌溶液中加入N-甲基吗啉(5.26g，1.5eq)和DPPA(14.3g，1.5eq)。在室温下搅拌混合物2小时。向该混合物中加入2-(三甲基硅烷基)乙醇(6.16g，1.5eq)，然后在氮保护下在85℃下搅拌2.5小时。将反应冷却至室温且减压除去溶剂。将所得残余物溶解于乙酸乙酯(250mL)中且用饱和NaHCO₃(3×80mL)和盐水(3×80mL)洗涤。将溶液经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在真空中浓缩。通过以于二氯甲烷中的1％和2.5％甲醇洗脱的硅胶柱层析纯化所得残余物，得到(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(9.3g，49％)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝547。

[00129]实施例7，步骤4：向(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(272mg，0.5mmol)于二氯甲烷(3mL)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(2mL)。将反应物在室温下搅拌2小时且在真空中浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷(50mL)中且用饱和NaHCO₃(15mL)洗涤。用二氯甲烷(4×30mL)萃取水层。合并所有二氯甲烷层且经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在真空中浓缩得到(S)-1-((1S，2R，4R)-2-氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(190mg，94.5％)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝403。

[00130]实施例7，步骤5：向460mg(10mmol)甲酸中添加乙酸酐(204mg，2mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。随后在0℃下在搅拌下将上述溶液的五分之一添加至(S)-1-((1S，2R，4R)-2-氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(60mg，0.149mmol)于二氯甲烷(3mL)和三乙胺(62.3μl，3eq)中的混合物中。在室温下搅拌反应1小时且添加1ml水以中止反应。将混合物以二氯甲烷(60mL)稀释且以饱和NaHCO₃(20mL)洗涤。将溶液经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在真空中浓缩得到(S)-1-((1S，2R，4R)-2-甲酰氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(50mg，78％)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝431。

[00131]实施例7，步骤6：向(S)-1-((1S，2R，4R)-2-甲酰氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(50mg，0.116mmol)于甲醇(3mL)中的溶液中添加10％Pd/C(40mg的50％湿催化剂)。将烧瓶抽空且用氢气囊回填氢气。在室温下搅拌混合物1小时且通过过滤除去催化剂。将滤液在真空中浓缩得到N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基)甲酰胺(35mg，100％)，其不经进一步纯化而用于下一步骤中。LC/MS实测值[M+H]⁺＝297。

[00132]实施例7，步骤7：向N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基)甲酰胺(34mg，0.115mmol)于异丙醇(3mL)中的溶液中添加4-氯-6-(三氟甲基)喹唑啉(32mg，1.2eq，参见：P.H.Carter等，PCT申请WO 2005/021500)和三乙胺(29.1mg，2.5eq)。在室温下将混合物搅拌过夜。减压除去溶剂。通过制备型HPLC纯化残余物得到呈其TFA盐形式的标题化合物(76mg，91.7％)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝493。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)，δppm：8.73-8.90(2H，m)，8.26(1H，d，J＝8.65Hz)，8.09(1H，s)，7.96(1H，d，J＝9.16Hz)，5.35(1H，t，J＝9.66Hz)，4.30(2H，s)，3.57-3.92(4H，m)，2.77-2.83(3H，m)，2.56-2.68(1H，m)，1.91-2.46(6H，m)，1.29-1.48(6H，m)。

实施例8

N-((1R，2S，5R)-5-(二甲氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺

[00133]实施例8，步骤1：向(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(66g，0.135mol；参见实施例1，步骤6)于二氯甲烷(216mL)中的搅拌溶液中加入三氟乙酸(216mL)。将反应物在室温下搅拌2小时且在真空中浓缩。将残余物溶解于甲醇中且在真空中浓缩所得溶液；将此程序重复一次。获得呈油状的(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-氨基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯。LC/MS实测值[M+H]⁺＝389.4。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.3-7.4(m，5H)，5.12(s，2H)，4.41(br.s，1H)，4.15(m，1H)，4.00(t，J＝9.3Hz，1H)，3.81(t，J＝9.1Hz，1H)，3.65(q，J＝8.4Hz，1H)，3.3-3.4(m，1H)，2.45(m，1H)，1.95-2.24(m，5H)，2.00(s，3H)，1.6-1.8(m，2H)。

[00134]实施例8，步骤2：向(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-氨基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯的TFA盐(500mg，0.99mmol)于CH₂Cl₂(20mL)中的溶液中依次添加甲醛(5ml，37重量％溶液)、三乙胺(0.35ml，2.4mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(315mg，1.5mmol)。在16小时后，将溶液以CH₂Cl₂稀释且以饱和NaHCO₃洗涤。将有机层收集且以HCl水溶液(5mL 1N HCl和20mL水)萃取。将水相收集且用NaOH水溶液(约10mL 1N NaOH和20mL水)碱化，然后用二氯甲烷(2×50mL)萃取。合并有机萃取物，干燥(Na₂SO₄)，过滤且在真空中浓缩得到呈油状的(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(二甲氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(280mg，68％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝417。

[00135]实施例8，步骤3：向(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(二甲氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(70mg)与10％Pd/C(30mg的50％湿催化剂)的混合物中添加EtOAc(50mL)，然后将烧瓶抽空且用氢气回填。在1atm H₂下搅拌混合物16小时且通过经硅藻土过滤除去催化剂。在真空中浓缩滤液得到呈白色固体状的N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(二甲氨基)环己基)乙酰胺(40mg，85％产率)，其不经进一步纯化而用于下一步骤中。LC/MS实测值[M+H]⁺＝283。

[00136]实施例8，步骤4：向N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(二甲氨基)环己基)乙酰胺(40mg，0.14mmol)于异丙醇(6mL)中的溶液中添加4-氯-6-(三氟甲基)喹唑啉(39mg，0.17mmol)和三乙胺(0.02ml，0.14mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时且在真空中浓缩为粗油状物，通过半制备型反相HPLC(梯度洗脱，水/甲醇/TFA)将其纯化得到标题化合物(70mg，71％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝479。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)，δppm：8.87(s，1H)，8.72(s，1H)，8.22(m，1H)，7.87(m，1H)，5.49(m，1H)，4.23(m，1H)，4.2(m，1H)，4.12(m，1H)，3.75(m，1H)，3.65(m，1H)，3.38(m，1H)，2.82(s，6H)，2.51(m，1H)，2.35(m，1H)，2.15(m，1H)，2.14-1.86(m，5H)，1.84(s，3H)。

实施例9

N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-6-叔丁基-2-吡啶甲酰胺

[00137]实施例9，步骤1：将6-叔丁基氰基吡啶(Butylpicolinonitrile)(662mg，4.1mmol；参见：P.H.Carter等，PCT申请WO 2005/021500)溶解于冰乙酸(6.8mL)中，随后添加浓HCl(1.6mL)。将此混合物于油浴(95℃)中加热过夜。在冷却后，浓缩该溶液。将所得粗固体于50/50Et₂O/己烷中转移至布氏漏斗(Buchner funnel)中。用另外50/50Et₂O/己烷洗涤此固体得到6-叔丁基吡啶甲酸盐酸盐(880mg)。LC/MS实测值(M+H)⁺＝180.0。

[00138]实施例9，步骤2：将N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基)乙酰胺(70mg，0.22mmol；参见实施例1，步骤10)溶解于DMF(2mL)中，随后添加4-甲基吗啉(0.1ml，0.91mmol)和叔丁基吡啶甲酸盐酸盐(90mg，0.50mmol)。在冷却至0℃后，添加BOP(175mg，0.39mmol)。将溶液升温至室温且搅拌过夜。随后将该溶液过滤且浓缩。通过反相HPLC(梯度洗脱，水/甲醇/TFA)纯化所得残余物得到呈其TFA盐形式的标题化合物(85.1mg)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝487.45。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)，δppm：7.9(m，2H)，7.67(m，1H)，4.47(m，1H)，4.38(t，1H)，4.24(m，1H)，3.97-3.74(m，3H)，3.64(m，1H)，2.82(s，3H)，2.6(m，1H)，2.34(m，2H)，2.25-2.05(m，2H)，2.01(s，3H)，1.95-1.8(m，2H)，1.45(s，9H)，1.37(m，3H)。

实施例10

N-((1R，2S，5R)-5-氨基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)丙酰胺

[00139]实施例10，步骤1：向(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基氨基)环己烷甲酰胺(2.0g，4.21mmol；参见实施例1，步骤5)于MeCN(150mL)和H₂O(205mL)中的溶液中添加二乙酸碘苯(1.357g，4.21mmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时，然后在融化冰浴中经14小时使其升温至室温。通过添加乙酸将该混合物酸化至pH 4，然后用乙醚(2×60mL)萃取。在减压下浓缩水层以除去乙腈。在使用饱和NaHCO₃将pH值调节为9-10的后，用二氯甲烷(2×80mL)萃取残余溶液。将二氯甲烷层干燥(Na₂SO₄)且在真空中浓缩得到所需(1R，3R，4S)-3-氨基-4-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(1.8g，4.03mmol，96％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝447。

[00140]实施例10，步骤2：向(1R，3R，4S)-3-氨基-4-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(1.8g，4.03mmol)于3mL DMF中的溶液中添加丙酸(0.285g，3.85mmol)、BOP(1.704g，3.85mmol)和三乙胺(0.059mL，0.423mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5小时，然后倾入水(75mL)中。用EtOAc(2×60mL)萃取所得混合物。合并有机相且用饱和NaHCO₃(2×40mL)和盐水(50mL)洗涤。随后将有机相干燥(MgSO₄)，过滤且在真空中浓缩。将残余物分散于乙醚中。将沉淀固体通过过滤收集，用乙醚(2×40mL)洗涤，且在真空中干燥得到(1R，3R，4S)-4-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-3-丙酰氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(1.6g，3.18mmol，79％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝503。

[00141]实施例10，步骤3：向(1R，3R，4S)-4-(((S)-3-(苄氧羰基氨基)-3-丙酰氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(900mg，1.79mmol)于10mL MeOH中的溶液中添加20％的氢氧化钯/碳(340mg，2.42mmol)。将混合物抽空且用氢气囊回填氢气。在1atm H₂下在室温下搅拌混合物1.5小时。过滤接着减压浓缩得到(1R，3R，4S)-4-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-3-丙酰氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(650mg，1.764mmol，99％产率)，其不经进一步纯化而用于下一步骤中。LC/MS实测值[M+H]⁺＝369。

[00142]实施例10，步骤4：向(1R，3R，4S)-4-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-3-丙酰氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(650mg，1.764mmol)于5mL异丙醇中的溶液中添加4-氯-6-(三氟甲基)喹唑啉(492mg，2.117mmol)和三乙胺(0.492mL，3.53mmol)。在50℃下将该混合物搅拌4小时。减压除去溶剂且将残余物用30mL于水中的20％AcOH稀释，随后用乙醚(2×20mL)萃取。用于水中的20％AcOH溶液(3×30mL)萃取醚层。合并各水层且用Na₂CO₃碱化，用二氯甲烷(3×50mL)萃取。合并有机萃取物，用盐水(40mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且减压浓缩得到(1R，3R，4S)-4-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)-3-丙酰氨基环己基氨基甲酸叔丁酯，LC/MS实测值[M+H]⁺＝565。将此粗产物全部溶解于5mL二氯甲烷中。向所得溶液中加入TFA(3mL)，在室温下搅拌30分钟，然后在真空中浓缩。通过制备型反相HPLC纯化残余物得到于甲醇水溶液中的呈其TFA盐形式的标题化合物。在真空中浓缩此溶液以除去甲醇且将残余物溶液用饱和NaHCO₃碱化且用二氯甲烷(3×50mL)萃取，干燥(Na₂SO₄)且在真空中浓缩得到呈其游离碱形式的标题化合物(550mg，1.184mmol，67％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝465。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)，δppm：8.77(1H，s)，8.57(1H，s)，8.03(1H，dd，J＝9.16，2.03Hz)，7.88(1H，d，J＝8.65Hz)，5.24(1H，t，J＝8.65Hz)，4.55(1H，d，J＝3.56Hz)，3.97-4.05(1H，m)，3.52-3.67(2H，m)，3.35-3.41(1H，m)，2.47-2.58(1H，m)，2.20-2.34(3H，m)，1.62-2.04(6H，m)，1.14(3H，t，J＝7.63Hz)。

实施例11

2-叔丁基-N-((S)-1-((1S，2R，4R)-4-(叔丁氨基)-2-(甲基磺酰氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基)嘧啶-4-甲酰胺

[00143]实施例11，步骤1：将经烘箱干燥的3颈圆底烧瓶装备干燥搅拌棒、干燥回流冷凝器和两个隔片。在N₂下冷却后，向该烧瓶中依次加入(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基氨基)环己烷甲酸(60g，126mmol；参见实施例1，步骤4)、乙腈(800mL)、N-甲基吗啉(27.7mL，252mmol)和二苯基磷酰基叠氮化物(29.9mL，139mmol)。在室温下搅拌反应1小时40分钟，此时添加2-三甲基硅烷基乙醇(90mL，631mmol)。将反应设定为加热，且30分钟后达到回流。使其回流1小时，此时使其逐渐冷却至50℃，然后在外部冷却下冷却至15℃。通过添加乙酸(1.734mL，30.3mmol)猝灭反应。将反应物在真空中浓缩，然后溶解于EtOAc(1.2L)中。将其用水(1×0.3L)、饱和NaHCO₃(2×0.3L)、1N HCl(1×0.3L)和盐水(2×0.3L)依次洗涤。将有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤且在真空中浓缩。在浓缩过程中固体出现极早。在除去挥发物后，添加800mL 10％ EtOAc/己烷，且将混合物搅拌过夜。将固体收集且干燥得到(1R，3R，4S)-4-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-3-((2-三甲基硅烷基)乙氧基羰基氨基)环己基氨基甲酸叔丁酯(60.5g，102mmol，81％产率)。HPLC显示该物质为72％纯度，其中存在两种12％杂质。此物质未经纯化而用于下一步骤中。随后浓缩滤液得到另外4.38g产物。总产量＝64.9g(87％)。

[00144]实施例11，步骤2：将干燥的500mL圆底烧瓶装备搅拌棒且依次向其中加入(1R，3R，4S)-4-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-3-((2-三甲基硅烷基)乙氧基羰基氨基)环己基氨基甲酸叔丁酯(60.5g)、CH₂Cl₂(180mL)和单水合对甲苯磺酸(19.48g，102mmol)于CH₂Cl₂(120mL)和甲醇(30mL)中的溶液。将混合物置于旋转蒸发器上且除去大部分CH₂Cl₂(浴温度约为20℃)。当该混合物开始起泡时，释放真空，且浴温度升高至46℃(该温度在44℃与51℃之间变化；其通过添加外部冰来控制)。将该混合物在此温度下旋转恰一小时(始终可见气体析出)，然后用EtOAc(1L)稀释。用0.5N NH₄OH(2×250mL)洗涤有机相。合并水性洗涤液且置于旁边。用饱和NH₄Cl(1×250mL)和饱和NaCl(1×250mL)洗涤有机相；丢弃这些水性洗涤液。将初始合并的NH₄OH洗涤液用EtOAc(1×250mL)反萃取，且用饱和NH₄Cl(1×60mL)和饱和NaCl(1×60mL)洗涤彼有机萃取物。合并所有有机萃取物，干燥(Na₂SO₄)，过滤且浓缩。通过SiO₂塞(13cm宽×7.5cm高)洗脱来纯化残余物。第一洗脱剂为纯EtOAc(约4L)。第二洗脱剂为1∶9(于MeOH中的10％NH₄OH)/CH₂Cl₂(约5L)。将含所需产物的流分汇集在一起且蒸发得到所需(1R，2S，5R)-5-氨基-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(31.6g，64.4mmol，63％产率)。

[00145]实施例11，步骤3：向(1R，2S，5R)-5-氨基-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(1.03g，2.099mmol)于甲醇(10ml)中的溶液中添加3，5-二-叔丁基-1，2-苯醌(0.555g，2.52mmol)。将此混合物搅拌2小时，随后添加THF(6mL)和水(2mL)以及草酸至pH 4。浓缩此混合物。将所得残余物溶解于乙酸乙酯中且用盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤且浓缩。通过快速层析纯化此物，得到(1R，2S)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-氧代环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(0.550g，1.123mmol，53.5％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝491.3。

[00146]实施例11，步骤4：向(1R，2S)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-氧代环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(0.550g，1.123mmol)于二氯甲烷(0.4mL)中的溶液中添加叔丁胺(1.180ml，11.23mmol)和异丙醇钛(IV)(6.63ml，22.47mmol)。将此混合物搅拌2小时，随后添加氰基硼氢化钠(127mg，2.022mmol)和MeOH(1mL)。2小时后，添加二氯甲烷(50mL)，接着添加1N NaOH。通过硅藻土过滤该混合物以除去钛盐。将滤液干燥且在真空中浓缩得到呈混合物形式的(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氨基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯及其5S非对映异构体(510mg，0.933mmol，83％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝547.31。

[00147]实施例11，步骤5：将来自步骤4的产物(510mg，0.933mmol)溶解于CH₂Cl₂(2ml)和三氟乙酸(2.87ml，37.3mmol)中。30分钟后，将该溶液浓缩得到呈与其4S非对映异构体的混合物形式的(S)-1-((1S，2R，4R)-2-氨基-4-(叔丁氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯的双TFA盐(520mg，0.825mmol，88％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝403.25。

[00148]实施例11，步骤6：将来自步骤5的一部分胺(362mg，0.57mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)中。向所得溶液中依次加入三乙胺(0.125ml，0.900mmol)和甲烷磺酰氯(0.070ml，0.900mmol)。将该混合物在室温下搅拌2小时且用饱和NaHCO₃溶液洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤且在真空中浓缩。将残余物溶解于甲醇(3ml)中。向容器中加入Pd/C(150mg，1.410mmol)且装备氢气球。1小时后，将溶液过滤且在真空中浓缩。将残余物再溶解于甲醇(3mL)中且再次向该容器中加入Pd/C(150mg，1.410mmol)且装备氢气球。1小时后，将溶液过滤且在真空中浓缩得到呈与其5S非对映异构体的混合物形式的N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氨基)环己基)甲烷磺酰胺(190mg，0.548mmol，75％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝347.3。

[00149]实施例11，步骤7：将来自步骤7的产物胺(190mg，0.548mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)中。添加2-叔丁基嘧啶-4-甲酸(196mg，1.09mmol；参见P.H.Carter等，PCT申请WO 2005/021500)、EDC(210mg，1.097mmol)和N-甲基吗啉(0.247ml，2.193mmol)，随后添加HOBt(364mg，2.7mmol)。将此混合物搅拌过夜。将该溶液浓缩，过滤且通过制备型反相HPLC纯化得到呈非对映异构纯形式的标题化合物的TFA盐(123mg，0.198mmol，36％)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝509.35。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)，δppm：9.36(br d，1H)，8.97(d，1H)，7.88(d，1H)，4.49(m，2H)，3.94-3.75(m，3H)，3.64(m，1H)，3.04(s，3H)，2.58(m，1H)，2.33(m，2H)，2.2-1.96(m，4H)，1.88(m，1H)，1.48(s，9H)，1.44(s，9H)。

实施例12

2-叔丁基-N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-4-(叔丁氨基)-2-(丙酰基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-4-嘧啶甲酰胺

[00150]实施例12，步骤1：将(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氨基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯及其5S非对映异构体的样品(68mg，0.141mmol；参见实施例11，步骤4)溶解于MeOH(3mL)中，随后添加10％Pd/C(100mg，0.940mmol)和氢气球。1小时后，将该溶液过滤且在真空中浓缩。随后用新鲜试剂再次开始反应。1小时后，将溶液过滤且浓缩得到呈与其5S非对映异构体的混合物形式的(1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氨基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯(139.4mg，0.338mmol，99％产率)：LC/MS实测值[M+H]⁺＝413.4。

[00151]实施例12，步骤2：将来自上述步骤1的产物(139.4mg，0.338mmol)溶解于CH₂Cl₂(3mL)中。向该溶液中依次加入2-叔丁基嘧啶-4-甲酸(122mg，0.676mmol)、1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-醇(91mg，0.676mmol)和4-甲基吗啉(0.149ml，1.351mmol)。随后向该溶液中加入1-(3-二甲氨基)丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(130mg，0.676mmol)。将此混合物搅拌过夜。将溶液浓缩，过滤且通过制备型反相HPLC(Phenomenex 21×250mm，经30分钟，含有0.1％三氟乙酸的0％至100％甲醇-水，15mL/min，220nM，产物保留时间＝29.9分钟)纯化得到(1R，2S，5R)-5-(叔丁氨基)-2-((S)-3-(2-叔丁基嘧啶-4-甲酰氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯的TFA盐(92mg，0.134mmol，39.5％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝575.5。

[00152]实施例12，步骤3：将步骤2的产物(92mg，0.134mmol)溶解于CH₂Cl₂(2mL)中，随后添加三氟乙酸(3.09ml，40.1mmol)。30分钟后，浓缩溶液得到N-((S)-1-((1S，2R，4R)-2-氨基-4-(叔丁氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基)-2-叔丁基嘧啶-4-甲酰胺的TFA盐(87mg，0.132mmol，99％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝431.37。

[00153]实施例12，步骤4：将N-((S)-1-((1S，2R，4R)-2-氨基-4-(叔丁氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基)-2-叔丁基嘧啶-4-甲酰胺的TFA盐(87mg，0.132mmol)溶解于CH₂Cl₂(3mL)中，随后添加三乙胺(0.092ml，0.660mmol)。将溶液冷却至0℃且向其中加入丙酸酐(0.051ml，0.396mmol)。30分钟后，将溶液浓缩，过滤且通过制备型反相HPLC(Phenomenex 21×100mm，经10分钟，含有0.1％三氟乙酸的0％至100％甲醇-水，20mL/min，220nM，产物保留时间＝8.2分钟)纯化得到呈其TFA盐形式的标题化合物。将此物质溶解于二氯甲烷中。将所得溶液用饱和Na₂CO₃洗涤，然后干燥且在真空中浓缩得到标题化合物(46mg，0.095mmol，72％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝487.45。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)，δppm：8.84(d，1H)，7.73(d，1H)，4.57(t，1H)，4.29(m，1H)，3.95(m，1H)，3.51(m，2H)，2.97(m，1H)，2.42(m，1H)，2.12(q，2H)，2.06(m，1H)，1.9(m，1H)，1.75-1.55(m，5H)，1.36(s，9H)，1.36-1.02(m，12H)。

实施例13

N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁氨基)-2-((3S)-3-((6-叔丁基嘧啶并[5，4-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)甲烷磺酰胺

[00154]实施例13，步骤1：将(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氨基)环己基氨基甲酸2-(三甲基硅烷基)乙酯及其5S非对映异构体的样品(100mg，0.183mmol；参见实施例11，步骤4)溶解于二氯甲烷(2mL)中，随后添加三氟乙酸(2.54ml，32.9mmol)。30分钟后，在真空中浓缩溶液。将残余物溶解于二氯甲烷(3mL)中，随后添加三乙胺(0.100ml，0.720mmol)和甲烷磺酰氯(0.018ml，0.234mmol)。2小时后，用饱和NaHCO₃溶液洗涤此混合物且将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤且浓缩得到呈与其4S非对映异构体的混合物形式的(S)-1-((1S，2R，4R)-4-(叔丁氨基)-2-(甲基磺酰氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(66mg，0.137mmol，76％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝481.22。

[00155]实施例13，步骤2：将来自上文步骤1的产物(0.066g，0.137mmol)溶解于MeOH(4mL)中，随后添加10％Pd/C(150mg，1.410mmol)和氢气球。1小时后，将溶液过滤且在真空中浓缩。随后用新鲜试剂再次开始反应。1小时后，将溶液过滤且浓缩得到呈与其5S非对映异构体的混合物形式的N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氨基)环己基)甲烷磺酰胺(47.5mg，0.137mmol，100％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝347.3。

[00156]实施例13，步骤3：将来自步骤2的产物(47.5mg，0.137mmol)溶解于2-丙醇(2mL)中。向所得溶液中依次加入三乙胺(0.057ml，0.411mmol)和2-叔丁基-8-氯嘧啶并[5，4-d]嘧啶(45.8mg，0.206mmol；参见P.H.Carter等，PCT申请WO 2005/021500)。搅拌2小时后，浓缩溶液。通过制备型反相HPLC(Phenomenex Luna 5u C1821.2×100mm，含有0.1％三氟乙酸的％甲醇-水，经12分钟的梯度，20mL/min，220nM，产物保留时间＝8.2分钟)来纯化残余物得到呈TFA盐形式的产物。将其溶解于二氯甲烷中且用20％Na₂CO₃溶液洗涤。浓缩有机层得到标题化合物(18mg，0.034mmol，24.66％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝533.3。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)，δppm：9.15(s，1H)，8.47(s，1H)，5.16(m，1H)，3.91(m，2H)，3.83(m，1H)，3.55(m，1H)，3.14(m，1H)，2.91(s，3H)，2.53(m，1H)，2.1(m，2H)，1.9(m，1H)，1.77-1.55(m，4H)，1.40(s，9H)，1.07(s，9H)。

实施例14

N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁氨基)-2-((3S)-3-((1-氧化-6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺

[00157]实施例14，步骤1：在-20℃下向(1R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-((S)-3-(苄氧羰基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基氨基甲酸叔丁酯(100g，0.205mol；参见实施例1，步骤6)于二氯甲烷(400mL)中的溶液中添加TFA(400mL)。在室温下搅拌反应溶液2小时。减压除去溶剂和大部分TFA，且用二氯甲烷(2L)和K₂CO₃水溶液(2L)稀释残余物。用1N HCl将pH值调节为10。用二氯甲烷(3×1L)萃取水层。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥且浓缩得到呈油状的(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-氨基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(81g，100％产率)。此胺不经进一步纯化而直接用于下一步骤中。

[00158]实施例14，步骤2：在室温下将(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-氨基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(13.3g，34mmol)和3，5-二叔丁基环己-3，5-二烯-1，2-二酮(7.54g，34mmol)于甲醇(160mL)中的溶液搅拌2小时。将该溶液浓缩且用丙酮(132mL)和水(33mL)稀释，接着添加Dowex-50WX8-200(33g)。在室温下搅拌反应2小时。通过过滤除去Dowex-50WX8-200且用二氯甲烷(300mL)将其洗涤。在真空下浓缩滤液以除去大部分丙酮。将残余物以二氯甲烷(200mL)稀释且用NaHCO₃水溶液(200mL)和盐水(200mL)洗涤。用二氯甲烷(2×100mL)萃取合并的水层。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥且浓缩。通过于EtOAc(100mL)和己烷(200mL)中结晶获得呈固体状的产物(S)-1-((1S，2R)-2-乙酰氨基-4-氧代环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(12g，90％产率)。¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 7.99(d，J＝9.35Hz，1H)，7.44(d，J＝8.80Hz，1H)，7.28-7.39(m，5H)，5.03(s，2H)，4.50(s，1H)，4.31(d，J＝12.10Hz，1H)，4.18(q，J＝8.98Hz，1H)，3.27(m，2H)，2.82(dd，J＝15.12，5.22Hz，1H)，2.52-2.65(m，1H)，2.40(dd，J＝12.92，4.67Hz，1H)，2.15-2.31(m，2H)，2.09(d，J＝15.40Hz，1H)，1.90(m，1H)，1.81(s，3H)，1.68(m，1H)。m/z：388.46[M+H]。

[00159]实施例14，步骤3：在0℃下向TiCl₄(1M于二氯甲烷中，36ml，36mmol)于二氯甲烷(30mL)中的溶液中添加Ti(OiPr)₄(10.8ml，36mmol)。随后在室温下搅拌混合物10分钟。在室温下向(S)-1-((1S，2R)-2-乙酰氨基-4-氧代环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(23.25g，60mmol)于二氯甲烷(600mL)中的溶液中添加叔丁胺(30ml，300mmol)，接着在-50℃下添加TiCl₄/Ti(OiPr)₄溶液。使反应缓慢升温至室温。反应在2小时后完成(通过以于甲醇中的NaBH₄猝灭HPLC样品而于HPLC上监控反应)。将溶液冷却至10℃且添加BH₃·SMe₂(1M于二氯甲烷中，66ml，66mmol)。将混合物在室温下搅拌5小时，随后以Na₂CO₃水溶液(300mL)猝灭反应。滤除沉淀物。将两层分离且用二氯甲烷(600mL)萃取水层。将合并的二氯甲烷层用1N HCl萃取两次(150ml和15mL)。(产物和不需要的反式异构体均在酸性水相中)。用NH₄OH的12M水溶液(12mL)将合并的酸性水层中和至pH为约8且用二氯甲烷将其萃取两次(600ml，450mL)。(产物在有机相中，而反式异构体仍在水层中)。将合并的有机层用NH₄Cl水溶液洗涤3次(3×200mL)直至有机层中不存在反式异构体。将有机层经Na₂SO₄干燥且浓缩。通过于EtOAc/己烷(200ml/800mL)中结晶来纯化残余物得到呈白色固体状的所需(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(20.80g，78％产率)，其具有99.5％纯度。¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 8.76(s，1H)，7.27-7.46(m，6H)，5.03(m，2H)，4.14(m，1H)，4.07(q，J＝8.80Hz，1H)，3.83(m，1H)，3.36(m，2H)，2.91(s，1H)，2.18(m，1H)，2.04(m，1H)，1.78(s，3H)，1.41-1.74(m，7H)，1.04(s，9H)。m/z：445.54[M+H]。

[00160]实施例14，步骤4：向(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(43.3g，98mmol)于甲醇(400mL)中的溶液中添加10％湿Pd/C(4.34g)。将混合物抽空且以氢气球回填氢气。在室温下搅拌混合物5小时。将该混合物过滤且用甲醇(500mL)洗涤且在真空下浓缩至干燥。在减压下用IPA(2×100mL)蒸馏所得粗产物得到呈油状的产物N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氨基)环己基)乙酰胺(30g，98％产率)。此胺不经进一步纯化而用于下一步骤中。

[00161]实施例14，步骤5：向N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氨基)环己基)乙酰胺(50mg，0.161mmol，如上文所述制备)和4-苯氧基-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物(99mg，0.161mmol；参见实施例5，替代性制备，步骤2)于i-PrOH(2mL)中的溶液中添加N，N-二异丙基乙胺(0.056ml，0.322mmol)。将容器在氩气氛下密封且于微波中在120℃下加热1小时。LC/MS实测值：(M+H)⁺＝523.3，为主要产物峰。于另一容器中以相同规模重复反应。合并两份反应物且蒸发得到油状残余物，通过自动快速层析(40g硅胶)由8∶92(于MeOH中的10％cNH₄OH)洗脱来纯化该残余物。将含有所需产物的流分汇集且在真空中浓缩。将残余物自CH₂Cl₂和己烷结晶。将两批产物组合且在真空下干燥得到4-((S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(叔丁氨基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基)-6-(三氟甲基)喹唑啉1-氧化物(101mg)。通过¹H-NMR分析显示此物质含有约0.6摩尔当量的CH₂Cl₂。LC/MS实测值：[M+H]⁺＝523.30。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)，δppm：9.00(s，1H)，8.80(s，1H)，8.61(d，J＝9.0Hz，1H)，8.32(dd，J＝9.0，1.6Hz，1H)，5.28(t，J＝8.3Hz，1H)，4.57(brs，1H)，4.02(brd，1H)，3.65-3.51(m，2H)，3.24(brs，1H)，2.59-2.51(m，1H)，2.34-2.20(m，1H)，2.04(s，3H)，2.04(m，1H)，1.89(brs，3H)，1.74(brs，2H)，1.20(s，9H)。

实施例15

N-(((1S，2S，5R)-5-甲氧基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)甲基)乙酰胺

[00162]实施例15，步骤1：在室温下将(1R，2S，5R)-7-氧代-6-氧杂双环[3.2.1]辛-2-基氨基甲酸苄酯样品(9g，32.7mmol；参见P.H.Carter等，PCT申请WO 2005/021500)溶解于THF(50mL)和水(16.67mL)中，随后添加硼氢化钠(1.237g，32.7mmol)。搅拌反应混合物22小时。以饱和NaHCO₃溶液猝灭反应。用1∶9MeOH-CH₂Cl₂混合物(5×)萃取反应混合物。随后将合并的有机层用盐水洗涤且经无水MgSO₄干燥。获得呈白色泡沫状固体的所需产物(1S，2R，4R)-4-羟基-2-(羟甲基)环己基氨基甲酸苄酯(8.75g，31.3mmol，96％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝280.30。

[00163]实施例15，步骤2：在室温下将(1S，2R，4R)-4-羟基-2-(羟甲基)环己基氨基甲酸苄酯样品(20.5g，73.4mmol)溶解于无水吡啶(140mL)中，随后一次性添加三苯甲基氯(20.46g，73.4mmol)。搅拌反应混合物两天。蒸发吡啶且将残余物溶解于EtOAc中。用水(2×)、接着用盐水来洗涤溶液。用EtOAc再萃取合并的水层。用盐水洗涤此有机层。随后将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥且蒸发得到油状残余物，其自EtOAc和己烷中产生白色结晶产物。将母液层析(400g硅胶，经20％EtOAc/己烷、接着40％EtOAc/己烷且最后70％EtOAc/己烷洗脱)。获得呈白色固体状的所需区域异构体(1S，2R，4R)-4-羟基-2-(三苯甲基氧基甲基)环己基氨基甲酸苄酯(33.08g，63.4mmol，86％产率)。MS实验值[M-H]^-＝520.2(AP/CI)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ，ppm 7.4(d，J＝7.12Hz，6H)，7.19-7.34(m，15H)，5.25-5.31(m，1H)，4.98-5.09(m，2H)，3.92(s，1H)，3.66(bs，1H)，3.14-3.24(m，1H)，2.97(dd，J＝9.41，4.83Hz，1H)，1.98-2.08(m，1H)，1.91(d，J＝11.9Hz，2H)，1.76-1.84(m，1H)，1.36-1.49(m，2H)，1.39-1.43(m，1H)，1.19-1.30(m，1H)。也获得少量不需的异构体(1S，2R，4R)-2-(羟甲基)-4-(三苯甲基氧基)环己基氨基甲酸苄酯(1.17g，2.243mmol，3.06％产率)。MS实验值[M-H]^-＝520.2(AP/CI)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 7.48(d，J＝7.12Hz，6H)，7.32-7.40(m，5H)，7.21-7.32(m，10H)，5.05-5.14(m，2H)，4.96(d，J＝8.65Hz，1H)，3.89(dd，J＝8.39，2.8Hz，1H)，3.84(dd，J＝10.7，4.58Hz，1H)，3.46(ddd，J＝14.5，9.92，4.07Hz，1H)，3.07(ddd，J＝15.26，10.43，4.3Hz，1H)，1.66(dd，J＝14.24，3.05Hz)，1.43-1.51(m，1H)，1.30-1.40(m，2H)，1.14-1.23(m，1H)，0.79-0.91(m，1H)，0.72-0.79(m，1H)。

[00164]实施例15，步骤3：在室温、N₂下，将(1S，2R，4R)-4-羟基-2-(三苯甲基氧基甲基)环己基氨基甲酸苄酯样品(11.5g，21.47mmol)溶解于CH₂Cl₂(100mL)中，随后依次添加1，8-双(二甲氨基)萘(11.50g，53.7mmol)、分子筛(粉末状，

，5g)和三甲基氧鎓四氟硼酸盐(6.35g，42.9mmol，分三份)。搅拌反应混合物48小时。仍存在起始原料。添加额外量的三甲基氧鎓四氟硼酸盐(1.5g)和分子筛(1g)且另外搅拌反应混合物5小时。将其用200ml CH₂Cl₂稀释且通过硅藻土过滤。将滤液用0.5N HCl(3×，50ml)、接着用饱和Na₂CO₃洗涤且经无水MgSO₄干燥。随后将溶液蒸发且在真空中干燥得到浅黄色泡沫。将该黄色泡沫溶于100ml AcOH∶水(7∶3)中且在60℃下搅拌3小时。将所得粉红色溶液浓缩且用1N NaOH碱化。用EtOAc(5×，各150ml)萃取混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，浓缩且层析(300g硅胶；以7∶3 EtOAc∶己烷、接着EtOAc洗脱)。获得呈油状的所需(1S，2R，4R)-2-(羟甲基)-4-甲氧基环己基氨基甲酸苄酯(6.1g，20.79mmol，97％)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝294.41。

[00165]实施例15，步骤4：在0℃下将三苯膦样品(7.39g，28.2mmol)溶解于THF(60mL)中，随后逐滴添加偶氮二甲酸二乙酯(4.46ml，28.2mmol)。在0℃下持续搅拌30分钟，同时将(1S，2R，4R)-2-(羟甲基)-4-甲氧基环己基氨基甲酸苄酯(4.13g，14.08mmol)于THF(40mL)中的溶液缓慢添加至反应混合物中。在缓慢添加叠氮化氢溶液(14.08ml，28.2mmol)(作为于苯中的2M溶液)时，在0℃下搅拌反应混合物30分钟。在0℃下搅拌反应混合物90分钟。以MeOH猝灭反应且将该混合物在室温下搅拌过夜。将红黄色溶液浓缩且层析。获得呈极粘稠的油状(1S，2S，4R)-2-(叠氮基甲基)-4-甲氧基环己基氨基甲酸苄酯(4.19g，13.16mmol，93％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝319.5。

[00166]实施例15，步骤5：在室温下将(1S，2S，4R)-2-(叠氮基甲基)-4-甲氧基环己基氨基甲酸苄酯样品(4.7g，14.76mmol)溶解于THF中，随后添加水(0.293ml，16.24mmol)和三苯膦(4.26g，16.24mmol)。在60℃下搅拌反应4小时。随后将其冷却且用Na₂CO₃饱和水溶液(3.13g，29.5mmol)处理，接着用二碳酸二叔丁酯(3.77ml，16.24mmol)处理。在室温下将反应混合物搅拌过夜。使其在EtOAc与水之间分溶。将有机层用盐水洗涤且经无水MgSO₄干燥。将溶液浓缩且层析(500ml硅胶，以30％EtOAc/己烷洗脱)。获得呈粘性油状的所需(1S，2S，5R)-2-苄氧羰基氨基-5-甲氧基环己基)甲基氨基甲酸叔丁酯。LC/MS实测值[M-Boc+H]⁺＝293.25。

[00167]实施例15，步骤6：将来自步骤5的产物样品溶解于MeOH(100mL)中。将钯/碳(0.185g，1.743mmol)添加至该溶液中且在50psi氢气下搅拌反应混合物2小时。通过硅藻土以EtOAc过滤反应混合物。将所得溶液在真空中浓缩得到呈透明油状的(1S，2S，5R)-2-氨基-5-甲氧基环己基)甲基氨基甲酸叔丁酯，其不经任何进一步纯化而使用。呈现最大量产率。LC/MS实测值[M+H]⁺＝259.41。

[00168]实施例15，步骤7：在室温下将(1S，2S，5R)-2-氨基-5-甲氧基环己基)甲基氨基甲酸叔丁酯样品(2.53g，9.79mmol)溶解于CH₂Cl₂(50mL)中。向溶液中依次加入1-羟基苯并三唑(1.456g，10.77mmol)、N-苄氧羰基-L-甲硫氨酸(4.16g，14.69mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(2.440g，12.73mmol)。将反应混合物搅拌过夜。将其用EtOAc稀释且用饱和Na₂CO₃、接着用盐水洗涤。将溶液干燥(MgSO₄)，过滤且在真空中浓缩得到呈无色粘性固体状的(1S，2S，5R)-2-((S)-2-苄氧羰基氨基-4-(甲硫基)丁酰氨基)-5-甲氧基环己基)甲基氨基甲酸叔丁酯。LC/MS实测值[M+H]⁺＝524.31。

[00169]实施例15，步骤8：将来自步骤7的产物样品溶解于碘甲烷(30mL)中且在室温下搅拌两天。将反应混合物蒸发且在真空中干燥。将残余物溶解于CH₂Cl₂中且蒸发。将该过程再重复四次。将所得残余物在真空中干燥得到黄色泡沫状固体，随后将其溶于DMF(20mL)中且用Cs₂CO₃(6.36g，19.52mmol)处理。在室温下将反应混合物搅拌过夜。将其以EtOAc稀释且用水(2×)洗涤。用EtOAc(2×)萃取合并的水层。随后将合并的有机层用盐水洗涤且经无水MgSO₄干燥。随后将溶液浓缩且层析得到呈白色泡沫状固体的((1S，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-甲氧基环己基)甲基氨基甲酸叔丁酯。LC/MS实测值[M+H]⁺＝476.4。

[00170]实施例15，步骤9：在室温下将((1S，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-甲氧基环己基)甲基氨基甲酸叔丁酯样品(0.75g，1.577mmol)溶解于CH₂Cl₂(15mL)中。向该溶液中加入三氟乙酸(1.215ml，15.77mmol)且搅拌6小时。随后将其蒸发且在真空中干燥。将残余物溶解于EtOAc中且用饱和Na2CO₃、接着用盐水洗涤。随后将有机层经无水Na₂SO₄干燥，浓缩且在真空中干燥得到浅黄色泡沫。在室温下将此物质溶解于CH₂Cl₂(10mL)中。向溶液中依次加入三乙胺(0.659ml，4.73mmol)、二甲氨基吡啶(0.019g，0.158mmol)和乙酸酐(0.164ml，1.734mmol)。将反应混合物搅拌90分钟，然后以饱和NaHCO₃猝灭反应。随后用CH₂Cl₂(3×)萃取反应混合物。合并有机层，经无水MgSO₄干燥，浓缩且层析。获得呈白色固体状的所需产物(S)-1-((1S，2S，4R)-2-(乙酰氨基甲基)-4-甲氧基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯。LC/MS实测值[M+H]⁺＝418.4。

[00171]实施例15，步骤10：在室温、50psi氢气氛下，将(S)-1-((1S，2S，4R)-2-(乙酰氨基甲基)-4-甲氧基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基氨基甲酸苄酯(614mg，1.471mmol)和Pd/C(62.6mg，0.294mmol)的样品在MeOH(30mL)中搅拌2小时。将悬浮液通过硅藻土以EtOAc过滤，浓缩且在真空中干燥得到呈白色固体状的N-(((1S，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-甲氧基环己基)甲基)乙酰胺(410mg，1.447mmol，98％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝284.24。

[00172]实施例15，步骤11：在室温下将N-(((1S，2S，5R)-2-((S)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-甲氧基环己基)甲基)乙酰胺样品(220mg，0.776mmol)溶解于2-丙醇(10mL)中。向此溶液中添加三乙胺(0.433ml，3.11mmol)，接着添加4-氯-6-(三氟甲基)喹唑啉(235mg，1.009mmol)。将反应混合物搅拌过夜。将其浓缩且层析(120g硅胶，以于CH₂Cl₂中的5％MeOH、接着10％MeOH洗脱)得到呈白色固体状的标题化合物(300mg，0.626mmol，81％产率)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝480.4。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)，δppm：8.6(s，1H)，8.51(s，1H)，7.92(br.s，1H)，7.87-7.82(m，2H)，6.28(br.s，1H)，5.00(dd，J＝16.02，8.65Hz，1H)，4.36-4.35(m，1H)，3.72-3.68(m，1H)，3.63-3.56(m，1H)，3.37-3.23(m，2H)，3.31(s，3H)，3.18-3.13(m，1H)，2.69-2.66(m，1H)，2.12-2.07(m，1H)，2.06-1.89(m，4H)，1.96(s，3H)，1.74-1.67(m，1H)，1.57-1.51(m，1H)，1.30-1.28(m，1H)。

比较性药理学特性

[00173]比较本发明的化合物和WO 2005021500(对应于美国专利第7,163,937号，转让于本申请人)中可见的化合物的药理学特性的检测和数据呈现于下。

人外周血液单核细胞结合(″CCR2结合″)

[00174]也参见：Yoshimura等，J.Immunol.1990，145，292。人CCR2结合检测使用¹²⁵I-人MCP-1作为示踪配体由人外周血液单核细胞(hPBMC)建立。hPBMC通过Ficoll-Hypaque(Mediatech Cellgro)使用标准方案自人leukopak(Biological Specialty Inc.)分离。将分离的hPBMC洗涤且于结合缓冲液(RPMI-1640、0.1％ BSA、20mM Hepes，pH 7.4)中稀释至1×10⁷/ml。将¹²⁵I-MCP-1(NEN/Perk Elmer)于结合缓冲液中稀释至0.45nM。将化合物于结合缓冲液中稀释为结合检测中所用最终浓度的3倍。使用96孔过滤板(Millipore)进行结合检测。总¹²⁵I-MCP-1结合评估如下：向总体积为150μl的每一反应中添加5×10⁵个细胞、0.15nM ¹²⁵I-MCP-1和化合物以使得最终浓度在0nM至100nM范围内。将板在室温下培养30分钟，接着使用一真空歧管过滤(Millipore)，用RPMI-1640、0.1％BSA、0.4M NaCl、20mM Hepes(pH 7.4)洗涤三次。洗涤后，在室温下将该板风干60分钟。此后接着向每一孔中添加25μlMicroscint 20。将板密封且于Trilux上计数1分钟。在300nM冷MCP-1(PeproTech Inc.)存在下测定非特异性结合。以总结合与非特异性结合的差来计算特异性¹²⁵I-MCP-1。所有条件均重复测试两次。IC50被定义为将特异性结合降低50％所需的竞争性化合物的浓度。

hERG通量

[00175]使稳定表达hERG通道的HEK293细胞在培养箱中于经10％Sigma胎牛血清、非必需氨基酸、2mM L-谷氨酸和500μg/ml G418补充的Dulbecco’s改良Eagle’s培养基(Dulbecco′s Modified Eagle′s Media)中生长(37℃，5％CO₂)。使用细胞解离缓冲液自烧瓶萃取细胞，随后将其以每孔2×10⁴个细胞的密度(20μl)接种于涂覆有聚-D-赖氨酸的384孔Corning黑色/透明板中的10％血清培养基中，且在37℃下于一5％CO₂培养箱中培养15-24小时直至获得融合细胞单层。

[00176]于100％DMSO中制备BTC-AM染料(Molecular Probes，Eugene，OR)的2mM储备液，然后在检测当天以1∶1添加至DMSO中的10％(w/v)pluronic酸中。随后将该染料于hERG外部EP缓冲液(140mMNaCl、4.0mM KCl、1.8mM CaCl₂、1.0mM MgCl₂、10mM HEPES(pH7.3)和10mM葡萄糖；所有缓冲液组分均获自Sigma Chemical)中稀释。将此BTC染料混合物(30μl)添加至细胞中且产生2.5μM的最终负载浓度。在21℃下将细胞培养45分钟。

[00177]将测试化合物稀释至10mM DMSO(60μl)。随后于384孔板的第1-10和11-20行中以DMSO以1∶2比率连续稀释这些化合物。通过自于Velocity 11 BioCel上制备的DMSO连续稀释板印上2.5μl而产生检测备用板。通过添加48μl EP缓冲液而产生含水板，然后将其稀释30-45分钟，接着于FLIPR上读取检测值。在染料装载后，将经水稀释的化合物添加至三个复制板的细胞(10μl)中，从而产生80μM至0.156nM的十点浓度范围。在检测中最终DMSO浓度为1％。于一Cybio液体处理器上制备检测备用水性板且加以稀释。

[00178]将装载染料的细胞于FLIPR384(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)上读取，FLIPR384使用一氩激光器的488nm光线激发染料。使用540±30nm带通过滤器过滤发射。通过每孔添加20μl含有66mM K₂SO₄和1.3mM Tl₂SO₄的EP缓冲液(Sigma/Aldrich)来刺激hERG通道打开。对于每一板而言，在12秒的时期内每秒收集数据，此时添加含有Tl⁺的刺激缓冲液。每秒进行数据收集历时48秒，然后继续每三秒收集数据历时另外2分钟。

[00179]自空白孔和总数孔测定检测的动态范围。总数孔(第21和22行)界定板的最大hERG活化(不存在测试化合物)，且空白孔(第23和24行)界定100％hERG抑制。空白孔含有400nM的标准hERG抑制剂多非利特(dofetilide)(Ficker等，1998)或E-4031。首先对每一样品孔中的原始数据点修正细胞/信号偏差、阴性对照(空白)背景，且使用在线FLIPR软件标准化为阳性对照(总数)。随后使用Excel Fit(ID BusinessSolutions Limited，Surrey，UK)，通过其中A＝最大抑制作用的单点对数方程Y＝A+((B-A)/1+((C/X)^D)))来拟合hERG Tl⁺通量数据的测试化合物浓度反应曲线。对于测试化合物的给定条件而言，通过拟合Tl⁺通量的荧光的最大变化振幅来分析数据。自三重复孔的平均值计算化合物的效能(IC₅₀值)。

钠通道，位点2结合检测

[00180]也参见：W.A.Catterall等，J.Biol.Chem.1981，256，8922。标准结合缓冲液含有50mM HEPES、50mM Tris-HCl(pH 7.4)、130mM氯化胆碱、5.4mM KCl、0.8mM MgCl₂、5.5mM葡萄糖、40μg/mLLqT。通过向含有于标准结合缓冲液中的5nM[³H]-蟾毒素和所需浓度的待测化合物的反应混合物中添加突触体(由Wistar大鼠脑制备)来引发结合反应。随后将样品混合且在37℃下培养60分钟。通过添加含有50mM HEPES、50mM Tris-HCl(pH 7.4)、1.8mM CaCl₂、0.8mMMgCl₂和1mg/mL牛血清白蛋白的冰冷的洗涤缓冲液来终止反应。将这些突触体立即收集于玻璃纤维过滤器上且用洗涤缓冲液洗涤3次。使用液体闪烁分光计对这些过滤器上剩余的[³H]-蟾毒素的放射性计数。

平行人造膜渗透性检测(PAMPA)

[00181]平行人造膜渗透性检测(PAMPA)系由被称作胃肠道(GIT)脂质的特定配制的卵磷脂基脂质组合组成。GIT脂质用于在类似于Caco-2检测中所用的夹层板装置中形成膜。GIT脂质极类似于如由已知在人中被动吸收的标准化合物所测量的体内膜组成和效能。PAMPA广泛用作发明化合物的渗透性筛检的体外模型。使用化合物穿过PAMPA膜的穿过速率来确定渗透性系数(Pc)，其可与化合物的体内被动渗透性相关。

[00182]于一具有7.4的顶点和基侧pH值的pH值依赖性装置中检测特定化合物的渗透性系数(Pc)。所有实验均以一式三份重复测定进行。

[00183]以pH 7.4的供体孔缓冲液(pION目录号110151)以1∶100稀释化合物(于100％DMSO中的10mM储备液)，得到于1％DMSO中的100μM检测溶液。将稀释于供体孔缓冲液中的化合物转移至一WhatmanUnifilter板中且过滤，随后将200μl分配于检测板(pION目录号110163)的供体孔中。通过将4μl脂质溶液(pION目录号110169)吸移于过滤板(VWR目录号13503)上来形成PAMPA膜。随后向该膜上覆盖200μl受体孔缓冲液(pH 7.4)(pION目录号110139)。将PAMPA检测板(供体侧和受体侧)合并且将其在室温下培养4小时。随后拆除该板且填充(每孔150μl)分光光度计板(VWR目录号655801)。于SpectraMax UV板读取器中读取供体板、受体板、参照板和空白板。通过pION软件获取数据，该软件分析光谱且产生Pc值。

CCR2趋化性

[00184]以人单核细胞系THP-1进行人CCR2趋化性检测。在每15分钟轻微混合的情况下，将THP-1细胞在37℃下于不含酚红、不含BSA的RPMI-1640(pH 7.4)中首先经荧光染料Calcein-AM标记30分钟。随后将经标记细胞洗涤且以1×10⁵/ml再悬浮于趋化性缓冲液(不含酚红的RPMI-1640，0.1％BSA，pH 7.4)中。将测试化合物稀释于趋化性缓冲液中以使得最终检测浓度在0.01nM至1μM的范围内。将配体MCP-1(PeproTech Inc.)于趋化性缓冲液中稀释至20nM。为进行检测，将相等体积的测试化合物稀释液与相等体积的经标记THP-1细胞混合(混合物1)，且将相等体积的测试化合物稀释液与相等体积的稀释的MCP-1配体混合(混合物2)。将两种混合物在37℃下独立培养10分钟，接着轻微混合。随后通过将50μl混合物1置于顶部腔室中且将225μl混合物2置于底部腔室中而在趋化性培养板(Becton Dickinson)中测量MCP-1诱导的趋化性。以一盖覆盖该培养板且在37℃下培养30分钟。30分钟后，于一Cytofluor上读取该培养板。所有条件均重复测试两次。对于信噪比测定而言，将50μl经标记的THP-1细胞(每孔5×10⁴个)单独置于顶部腔室中且将225μl配体MCP-1单独置于底部腔室中(最终浓度为10nM)。将通过分级浓度的测试化合物所达到的抑制作用计算为不含化合物的MCP-1对照物的百分比。IC50被定义为达到细胞趋化性的50％抑制所需的测试化合物的浓度。

hERG膜片钳

[00185]使用全细胞膜片钳直接测量稳定表达克隆的hERG钾信道α亚单位的HEK-293细胞中的hERG电流。化合物在室温下于具有pH 7.4的水性缓冲液中测试。自-80mV至+20mV的保持电位施加重复测试脉冲(0.05Hz)历时2秒钟，且通过将电压步进为-65mV而随测试脉冲激发尾电流。通过测量峰值尾电流的抑制作用来计算化合物的效应。

钠通道膜片钳

[00186]使用全细胞膜片钳直接测量表达人心脏钠通道SCN5A的HEK-293细胞中的向内钠电流。化合物在不含蛋白质的水性缓冲液下测试。为测定稳定状态的抑制作用，每5秒使用以下电压方案激发钠电流：将细胞保持在-90mV的电位下且步进至-20mV经60ms。通过在测试脉冲达到-20mV期间测量峰电流的抑制作用来计算效应。通过在1Hz和4Hz的频率下刺激来评估抑制作用的速率依赖性。

大鼠中的单一剂量药物动力学

[00187]使用雄性Sprague-Dawley大鼠(250-300g)进行药物动力学研究。在经口给药前将大鼠禁食过夜且在给药4小时后使其进食。自颈静脉将血样(约0.3mL)收集入含有K₂EDTA的管中，然后在4℃下离心(1500-2000×g)以获得血浆。在一口服生物可利用度研究中，以通过颈静脉的静脉内(IV)输液(经10分钟)形式或通过经口管饲使2组动物(每组N＝2-3)接收测试化合物。在给药后0.17小时(仅对于IV而言)、0.25小时、0.5小时、0.75小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时和24小时时获得连续血样。将通过在4℃下离心(1500-2000×g)所获得的血样储存在-20℃下直至由LC/MS/MS进行分析。

猴中的单一剂量药物动力学

[00188]以交叉设计于雄性猕猴(Cynomolgus monkeys)中评估各种测试化合物的药物动力学。在经口给药前将猴禁食过夜且在给药4小时后进食。通过经股静脉的IV输液(经10分钟)和通过经口管饲使一组1-3只动物(3kg至5kg)接收化合物，其中在两次治疗之间有1周洗脱(washout)。在给药后0.17小时(仅对于IV而言)、0.25小时、0.5小时、0.75小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时和24小时时自股动脉收集连续血样(约0.3mL)，且在4℃(1500-2000×g)下离心以获得血浆。将样品储存在-20℃下直至由LC/MS/MS进行分析。

药物动力学检测的数据分析

[00189]通过血浆浓度对时间数据的非隔室(non-compartmental)分析(KINETICA^TM软件，4.2版本，InnaPhase Corporation，Philadelphia，PA)来获得药物动力学参数。直接由实验观测记录峰浓度(Cmax)和Cmax的时间。使用线性和对数梯形总和的组合来计算自时间零点至最后取样时间的曲线下面积(AUC(0-T))。在IV给药后评估总血浆清除率(CLTp)、稳态分布容积(Vss)、表观消除半衰期(T1/2)和平均保留时间(MRT)。使用具有可量化浓度的最少3个时间点来进行T1/2的估计。将绝对口服生物可利用度(F)估计为在经口给药和IV给药后剂量标准化AUC值的比率。

THP-1结合

[00190]也使用¹²⁵I人MCP-1作为示踪配体通过表达内源CCR2的THP-1人单核白血病细胞系来建立人CCR2结合检测。使用放射性配体竞争结合检测来评估测试化合物与CCR2受体的结合亲和力。对于放射性配体竞争研究而言，将每孔含有2.5×10⁵个THP-1细胞的100μl(于含有50mM HEPES(pH 7.4)、5mM MgCl₂、1mM CaCl₂和0.5％BSA的检测缓冲液中)添加至含有3倍连续稀释的测试化合物的96孔检测板中，其中最终浓度在5μM至100pM的范围内。随后，将50μl于检测缓冲液中最终浓度为0.2nM的¹²⁵I-MCP-1放射性配体添加至反应中。在室温下90分钟培养期后，通过于GF/B过滤板(PerkinElmer目录号6005177)上收集，接着用冰冷的洗涤缓冲液(50mM HEPES(pH 7.4)、0.1％BSA、0.5M NaCl)洗涤以除去未结合的配体来终止结合反应。在洗涤后，将板在60℃下干燥45分钟，接着添加40μl MicroScint 20闪烁液，密封且由Packard TopCount读出仪分析。在10μM(摩尔过量5000倍)的内部(in-house)CCR2小分子拮抗剂(实施例2k，WO2005021500；CCR2IC50＝2nM)存在下测定非特异性结合。将¹²⁵I-MCP-1的特异性结合计算为总结合与非特异性结合的差。以在无测试化合物的情况下特异性结合的放射性配体的抑制百分比(总信号的百分比)来绘制竞争数据。在校正非特异性结合的后，测定IC50值。IC50被定义为将¹²⁵I-MCP-1特异性结合降低50％所需的测试化合物的浓度且用四参数对数方程拟合标准化数据来计算。

[00191]以下可见如在上述检测中所测量的每一化合物的数据。

化合物	CCR2结合IC50(nM)	hERG通量IC50(nM)	Na+通道结合(％抑制)	PAMPA渗透性(nm/秒)
					实施例12as，WO2005021500	0.27(1)	2.8	未获得	未获得
实施例12aj，WO2005021500	0.43±0.06(2)	0.77	未获得	未获得
					实施例2k，WO2005021500	0.88±0.60(23)	51,000	97％，10,000nM	529±157(9)
实施例12bd，WO2005021500	1.15±0.07(2)	＞80,000	54％，10,000nM	392
					实施例8a，WO2005021500	1.83±0.80(12)	＞80,000	3％，10,000nM33％，30,000nM	94±58(10)
实施例8e，WO2005021500	2.20±0.03(2)	＞80,000	-6％，10,000nM	2±2(2)
					实施例9c，WO2005021500	0.96±0.26(19)	＞80,000	48％，10,000nM75％，，30,000nM	145±71(8)
实施例1，本发明	3.34±0.32(3)	＞80,000	13％，10,000nM6％，30,000nM	187
					实施例3，本发明	4.74±0.58(3)	＞80,000	17％，10,000nM42％，30,000nM	235±68(5)
实施例7，本发明	1.72±0.54(7)	＞80,000	22％，10,000nM44％，30,000nM	326±221(2)
					实施例8，本发明	3.58±0.78(3)	＞80,000	-14％，10,000nM19％，30,000nM	557
实施例9，	1.69±0.67(3)	＞80,000	13％，10,000nM	266

本发明			48％，30,000nM
					实施例10，本发明	5.18±1.98(6)	＞80,000	18％，10,000nM45％，30,000nM	228
实施例11，本发明	1.91±0.52(3)	＞80,000	14％，10,000nM34％，30,000nM	350
					实施例12，本发明	4.49±1.35(3)	＞80,000	18％，10,000nM36％，30,000nM	239
实施例13，本发明	4.02±1.31(3)	＞80,000	5％，10,000nM21％，30,000nM	541±63(2)
					实施例15，本发明	3.34±0.71(4)	＞80,000	-5％，10,000nM5％，30,000nM	186

表2a.其它比较性体外数据。

化合物	CCR2趋化性IC50(nM)	hERG膜片钳(％抑制)	Na+通道膜片钳(％抑制)
				实施例2k，WO2005021500	0.24±0.16(12)	83％，10,000nM	52％，10,000nM90％，30,000nM
实施例8a，WO2005021500	2.63±1.24(4)	4％，10,000nM	22％，10,000nM49％，30,000nM
				实施例9c，WO2005021500	0.21	4％，10,000nM	19％，10,000nM39％，30,000nM
实施例1，本发明	3.85±0.36(2)	8％，10,000nM17％，30,000nM	13％，30,000nM
				实施例3，本发明	2.20±1.59(5)	6％，10,000nM24％，30,000nM	3％，30,000nM
实施例7，本发明	2.85	12％，10,000nM29％，30,000nM	10％，30,000nM
				实施例8，本发明	4.09±1.21(4)	18％，10,000nM37％，30,000nM	11％，30,000nM
实施例9，本发明	0.35	26％，10,000nM41％，30,000nM	6％，30,000nM
				实施例10，本发明	1.6±0.42(4)	33％，30,000nM	35％，30,000nM

实施例11，本发明	0.92	15％，30,000nM	未获得
				实施例12，本发明	0.88	6％，10,000nM7％，30,000nM	未获得
实施例13，本发明	0.49	10％，30,000nM	未获得
				实施例15，本发明	0.92±0.67(6)	29％，30,000nM47％，100,000nM	未获得

表2b.大鼠中的比较性体内药物动力学数据

化合物	剂量IV/PO(mg/kg)	Cl(mL/min/kg)	F％	口服AUC(nM*h)
					实施例2kWO2005021500	2.5/25	40	68	9294
实施例8aWO2005021500	6/72	42	1.4	690
					实施例9c，WO2005021500	4/43	54	14	1855
实施例1，本发明	未获得	未获得	未获得	未获得
					实施例3，本发明	2/10	31	88	10068
实施例7，本发明	未获得	未获得	未获得	未获得
					实施例8，本发明	8.6(PO)	未获得	未获得	7281
实施例9，本发明	未获得	未获得	未获得	未获得
					实施例10，本发明	1.6/9.3	45	57	4227
实施例11，本发明	2/10	56	52	3043
					实施例12，本发明	2/10	59	91	5228
实施例13，本发明	2/10	26	88	10522
					实施例15，本发明	2.7/11	23	93	16221

表2c.猴中的比较性体内药物动力学数据

化合物	剂量IV/PO(mg/kg)	Cl(mL/min/kg)	F％	口服AUC(nM*h)
					实施例2kWO2005021500	1/1.4	25	46	862

实施例8aWO2005021500	1/11	14	9.4	1896
					实施例9c，WO2005021500	1/10	12	26	6763
实施例1，本发明	未获得	未获得	未获得	未获得
					实施例3，本发明	1/1	15	91	2051
实施例7，本发明	未获得	未获得	未获得	未获得
					实施例8，本发明	0.8(PO)	未获得	未获得	558
实施例9，本发明	未获得	未获得	未获得	未获得
					实施例10，本发明	1/1	21	67	1085
实施例11，本发明	未获得	未获得	未获得	未获得
					实施例12，本发明	1(PO)	未获得	未获得	413
实施例13，本发明	1.7(PO)	未获得	未获得	263
					实施例15，本发明	0.9/1.5	28	19	333

化合物	PBMC结合IC50(nM)	THP-1结合IC50(nM)
			实施例2，本发明	15.0±7.3(6)	27(1)
实施例4，本发明	3.46±1.10(5)	4.22±1.22(4)
			实施例5，本发明	27.5±1.4(2)	21.3(1)
实施例6，本发明	未获得	139.1(1)
			实施例14，本发明	14.9±5.2(2)	19.9(1)

效用

[00192]使用本领域技术人员已知的检测，实施例的代表性化合物显示为趋化因子受体活性调节剂。在本节中描述这些检测且给出其参考文献。更多检测在本文中描述于上文标题为″比较性药理学特性″的部分中。通过在MCP-1拮抗作用的这些检测中呈现活性，预期实施例的化合物适用于治疗与趋化因子及其同源受体相关的人类疾病。这些检测中活性的定义为当于一特定检测中测量时显示30μM或更低浓度的IC₅₀的化合物。

与人PBMC结合的MCP-1的拮抗作用

(Yoshimura等，J.Immunol.1990，145，292)

[00193]实施例中所述化合物的至少一种在本文中所述与人PBMC(人外周血液单核细胞)结合的MCP-1的拮抗作用中具有活性。

[00194]在室温下将Millipore过滤板(#MABVN1250)经100μl结合缓冲液(于RPMI 1640培养基中的0.5％牛血清白蛋白、20mM HEPES缓冲液和5mM氯化镁)处理30分钟。为测量结合，将50μl具有或不具有已知浓度化合物的结合缓冲液与50μl经¹²⁵-I标记的人MCP-1(以得到最终浓度为150pM的放射性配体)和50μl含有5×10⁵个细胞的结合缓冲液合并。用于这些结合检测的细胞可包括通过Ficoll-Hypaque梯度离心分离的人外周血液单核细胞、人单核细胞(Weiner等，J.Immunol.Methods.1980，36，89)或表达内源性受体的THP-1细胞系。在室温下将化合物、细胞和放射性配体的混合物培养30分钟。将培养板置于一真空歧管上，施加真空，且用含有0.5M NaCl的结合缓冲液将培养板洗涤三次。将塑料侧套(skirt)自培养板除去，使板风干，将孔穿孔输出且计数。使用在不存在任何竞争化合物的情况下所获得的总计数和通过添加100nM MCP-1替代测试化合物所测定的背景结合来计算结合的抑制百分比。

MCP-1诱导的钙流入的拮抗作用

(Sullivan等，Methods Mol.Biol.1999，114，125-133)

[00195]实施例中所述的至少一种化合物在本文中所述的MCP-1诱导的钙流入检测的拮抗作用中具有活性。

[00196]使用荧光的Ca²⁺指示染料Fluo-3来测量钙活动。在37℃下以8×10⁵个细胞/ml将细胞于含有0.1％牛血清白蛋白、20mM HEPES缓冲液、5mM葡萄糖、1％胎牛血清、4μM Fluo-3AM和2.5mM丙磺舒的磷酸缓冲盐水中培养60分钟。用于这些钙检测的细胞可包括如按照Weiner等，J.Immunol.Methods 1990，36，89-97所述分离的人单核细胞或表达例如THP-1和MonoMac-6的内源性CCR2受体的细胞系。随后于含有0.1％牛血清白蛋白、20mM HEPES、5mM葡萄糖和2.5mM丙磺舒的磷酸缓冲盐水中将细胞洗涤三次。以2-4×10⁶个细胞/ml的最终浓度将这些细胞再悬浮于含有0.5％牛血清白蛋白、20mM HEPES和2.5mM丙磺舒的磷酸缓冲盐水中。将细胞接种于96孔黑壁微量培养板中(每孔100μl)且将这些板以200×g离心5分钟。将各种浓度的化合物添加至孔中(每孔50μl)且在5分钟后，每孔添加50μl MCP-1以得到10nM的最终浓度。通过使用一荧光成像板读出仪来检测钙活动。以一氩激光器(488nM)激发细胞单层且测量与细胞相关的荧光3分钟，(前90秒为每秒测量和后90秒为每10秒测量)。以任意荧光单位产生的数据且将每一孔的荧光变化测定为最大-最小的差。相对于单独MCP-1的反应来计算化合物依赖性抑制作用。

MCP-1诱导的人PBMC趋化性的拮抗作用

(Bacon等，Brit.J.Pharmacol.1988，95，966)

[00197]实施例中所述的至少一种化合物在本文中所述的MCP-1诱导的人PBMC趋化性检测的拮抗作用中具有活性。

[00198]将Neuroprobe MBA96-96孔趋化性室、Polyfiltronics MPC 96孔板和Neuroprobe不含聚乙烯吡咯烷酮的聚碳酸酯PFD5 8微米过滤器于一37℃培养箱中温热。将通过标准ficoll密度分离方法新鲜分离的人外周血液单核细胞(PBMC)(Boyum等，Scand.J.Clin.Lab Invest.Suppl.1968，97，31)以1×10⁷c/ml悬浮于DMEM中且在37℃下加温。人MCP-1的60nM溶液也在37℃下加温。测试化合物的稀释液由DMEM中所需浓度的2倍浓度构成。在存在或不存在测试化合物的稀释液的情况下，将PBMC悬浮液和60nm MCP-1溶液于具有预热DMEM的聚丙烯管中1∶1混合。于一37℃管加温器中加温这些混合物。为开始检测，将MCP-1/化合物混合物添加至已置于Neuroprobe趋化性室的底部中的Polyfiltronics MPC 96孔板的孔中。添加至每一孔的近似体积为400μl且在分配后应存在一正弯液面。将8微米过滤器轻轻置于96孔板顶部，将一橡胶垫圈附着至上部室的底部，且装配该室。将200μl体积的细胞悬浮液/化合物混合物添加至上部室的适当孔中。以一板密封器覆盖上部腔室，且将经装配单元置于一37℃培养箱中45分钟。在培养后，除去该板密封器且吸出所有剩余细胞悬浮液。将室拆开且轻轻除去过滤器。当将过滤器保持在90度角下时，使用磷酸缓冲盐水的温和流洗去未迁移细胞且用橡胶扫帚尖端擦过滤器顶部。再重复此洗涤两次。将过滤器风干，然后完全浸渍于Wright Geimsa染色剂中历时45秒。随后通过于蒸馏水中浸泡7分钟，然后于新鲜蒸馏水中洗涤另外15秒来洗涤过滤器。将过滤器再次风干。通过目视显微镜来定量过滤器上的迁移细胞。

[00199]哺乳动物趋化因子受体于哺乳动物(例如人)中提供干扰或促进免疫细胞功能的标靶。抑制或促进趋化因子受体功能的化合物尤其适用于为治疗目的调节免疫细胞功能。因此，本发明涉及适用于预防和/或治疗多种炎性、传染性和免疫调节病症和疾病的化合物，其中这些病症和疾病包括哮喘和过敏性疾病、由病原性微生物(根据定义，其包括病毒)引起的感染以及自身免疫性病变(例如类风湿性关节炎和动脉粥样硬化)。

[00200]例如，可给予抑制哺乳动物趋化因子受体(例如，人趋化因子受体)的一或多种功能的本发明化合物以抑制(即，降低或预防)炎症或传染性疾病。结果，一或多种炎性过程(例如白细胞迁移、粘着、趋化性、胞吐作用(例如，酶、组织胺的胞吐作用)或炎性介质释放)得到抑制。

[00201]类似地，给予促进哺乳动物趋化因子受体(例如，人趋化因子)的一或多种功能的本发明化合物，以刺激(诱导或增强)免疫或炎性反应，例如白细胞迁移、粘着、趋化性、胞吐作用(例如，酶、组织胺的胞吐作用)或炎性介质释放，从而产生对炎性过程的有益刺激。例如，嗜酸性粒细胞可经补充以抵抗寄生感染。另外，如果考虑传递足够化合物以通过诱发趋化因子受体内化作用来造成细胞上受体表达的损失或以导致细胞迁移方向错误的方式来传递化合物，则也可设计对促进哺乳动物趋化因子受体的一或多种功能的本发明化合物对前述炎性、过敏性和自身免疫性疾病的治疗。

[00202]除灵长类动物(例如人)外，多种其它哺乳动物也可根据本发明的方法来治疗。例如，可治疗的哺乳动物包括(但不限于)牛、绵羊、山羊、马、犬、猫、豚鼠、大鼠或其它牛科、绵羊科、马科、犬科、猫科、啮齿类或鼠科物种。然而，该方法也可于其它物种(例如鸟类物种)中得以实施。在上述方法中所治疗的患者为其中需要趋化因子受体活性的调节的雄性或雌性哺乳动物。如在本文中所使用的″调节″意欲涵盖拮抗、激动、部分拮抗和/或部分激动。

CCR5结合和功能检测

细胞衍生和细胞培养

[00203]使用由Harrington，Sherf和Rundlett概述的方法(参见美国专利US 6,361,972和US 6,410,266)来发展稳定表达内源性CC趋化因子受体5(CCR5)的HT1080细胞池(pool)。使用重复流式细胞仪、接着亚克隆来分离最高表达无性系。随后以每孔3×10⁵个细胞将这些细胞培养于6孔培养皿中且经含有嵌合HA标记G蛋白Gqi5的DNA载体(MolecularDevices；于15微升来自Fermentes的Ex-Gen中的5微克线性载体DNA用于该转染)转染。在转染两天后，将孔合并且接种于P100板中。在接种七天后，对菌落进行挑选，使其繁殖且通过西方墨点法分析Gqi5含量。选择具有Gqi5(来自转染)和CCR5(内源性)的高表达的克隆(指定为3559.1.6)且将其用于下文所述的实验中。将HT1080细胞(克隆3559.1.6)在37℃下在5％CO₂下于潮湿气氛中以经10％透析的胎牛血清、2％青霉素/链霉素/谷氨酸和500微克/毫升潮霉素B(最终浓度)补充的α-MEM培养。

膜制备

[00204]将含有1×10⁸个HT1080细胞(克隆3559.1.6)的细胞沉淀再悬浮于5mL冰冷的膜制备缓冲液(50mM HEPES、5mM MgCl₂、1mMCaCl₂)中且于冰上在Polytron均质机上高速均质化20秒。将匀浆以另外25mL膜制备缓冲液稀释且离心12分钟(48,000×g，在4℃下)。将细胞沉淀再悬浮于5mL膜制备缓冲液中，随后如先前所述再次均质化。将匀浆以5mL膜制备缓冲液稀释且检测CCR5蛋白浓度。

结合检测

[00205]将来自上述膜制备的新鲜制备的匀浆稀释于结合缓冲液(50mM HEPES、5mM MgCl₂、1mM CaCl₂、0.1％BSA；在检测前添加一片完全蛋白酶抑制剂片)中以达到每孔(来自Corning，Inc.的固体白色96孔板)10微克的最终蛋白浓度。将此膜制剂与WGA-SPA珠(Amerhsam；预浸泡于结合缓冲液中)混合以得到每孔200微克的浓度。随后将膜/SPA珠混合物(每孔100微升)添加至已用含有各种浓度的测试物品(纯DMSO用于阴性对照；各种浓度的本发明的实施例化合物用于测试物品；500nM MIP-1β作为阳性对照)预先点渍(dotted)的2微升DMSO的板中。通过添加50微升[¹²⁵I]-MIP-1β(Perkin Elmer；物质被稀释于结合缓冲液中以使得添加每孔50微升得到最终浓度为0.1nM的[¹²⁵I]-MIP-1β)来启动结合检测。将板密封且使其在室温下静置4-6小时，随后于Packard TopCount上计数。使用阴性对照和阳性对照界定每一实验的窗口来计算测试物品的结合百分比。

基于荧光成像板读出仪(FLIPR)的功能检测

[00206]以每孔10,000个细胞(30微升)将HT1080细胞(克隆3559.1.6)接种于384孔板(黑色/透明底部Biocoat PDL，Beckton Dickinson)中且加入每孔30微升的Fluro-4 AM荧光染料(通过将1mg Fluro-4AM溶解于440微升DMSO中且经100微升泊洛沙姆(pluronic)溶液稀释，随后经10mL Hanks缓冲液进一步稀释来制备)。将细胞在37℃下于5％CO₂下培养30分钟，随后洗涤三次且悬浮于检测缓冲液(20mM HEPES、1.2mMCaCl₂、5mM MgCl₂、2.5mM丙磺舒、0.5％BSA、1×Hanks)中。将测试物品以DMSO系列稀释，然后以检测缓冲液1∶10稀释，随后添加至细胞中(每孔10微升)。使用FLIPR，对板读取(10-70秒)导入的通量(即激动剂活性)。随后向细胞中进一步加入激动剂溶液(每孔30微升；通过将30微升100microMolar MIP-1β稀释于100mL检测缓冲液中来制备；此方案在检测中传递5nM的MIP-1β的最终浓度)且使用FLIPR对板读取1分钟。相对于0.4％DMSO/缓冲液阴性对照来测定测试物品的拮抗剂活性。

[00207]至少一种本发明的化合物为CCR2和CCR5的抑制剂且可用于治疗与任一趋化因子相关的疾病。认为本发明的这些化合物为双重拮抗剂。

[00208]可用趋化因子受体功能抑制剂治疗的人或其它物种的疾病或病症包括(但不限于)：炎性或过敏性疾病和病症，包括呼吸道过敏性疾病，例如哮喘、过敏性鼻炎、过敏性肺病、过敏性肺炎、嗜酸性粒细胞性蜂窝组织炎(例如，Well′s综合征)、嗜酸性粒细胞性肺炎(例如，Loeffler′s综合征、慢性嗜酸性粒细胞性肺炎)、嗜酸性粒细胞性筋膜炎(例如，Shulman′s综合征)、迟发型过敏、间质性肺病(ILD)(例如，特发性肺纤维化，或与类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、强直性脊椎炎、系统性硬化症、Sjogren′s综合征、多肌炎或皮肌炎相关的ILD)；全身性过敏或过敏反应、药物过敏(例如，对青霉素、头孢菌素(cephalosporins)的药物过敏)、归因于摄取经污染色氨酸的嗜酸性粒细胞增多-肌肉疼痛综合征、昆虫叮咬过敏；自身免疫性疾病，例如类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、多发性硬化、全身性红斑狼疮、重症肌无力、青少年发作型糖尿病；肾小球性肾炎、自身免疫甲状腺炎、Behcet′s病；移植排斥(例如，在移植中)，其包括同种异体移植排斥反应或移植物抗宿主疾病；炎性肠道疾病，例如克罗恩氏病和溃疡性结肠炎；脊椎关节病；硬皮病；牛皮癣(其包括T细胞介导的牛皮癣)和炎性皮肤病，例如皮炎、湿疹、异位性皮炎、过敏性接触皮炎、荨麻疹；血管炎(例如，坏死性血管炎、皮肤血管炎和过敏性血管炎)；嗜酸性粒细胞性肌炎、嗜酸性粒细胞性筋膜炎；具有皮肤或器官的白细胞浸润的癌症。可治疗其中将抑制不需要的炎性反应的其它疾病或病症，其包括(但不限于)再灌注损伤、动脉粥样硬化、某些血液科恶性疾病、细胞因子诱导的毒性(例如，败血性休克、内毒素性休克)、多肌炎、皮肌炎。可用趋化因子受体功能抑制剂治疗的人或其它物种的传染性疾病或病症包括(但不限于)HIV。

[00209]可用趋化因子受体功能促进剂治疗的人或其它物种的疾病或病症包括(但不限于)：免疫抑制，例如在具有免疫缺陷综合征(例如AIDS)或其它病毒感染的个体中、经受造成免疫抑制的放射疗法、化学疗法、自身免疫性疾病疗法或药物疗法(例如，皮质类固醇疗法)的个体中；归因于受体功能的先天性不足或其它病因的免疫抑制；和感染性疾病，例如寄生虫病，包括(但不限于)蠕虫感染，例如线虫(蛔虫)；(鞭虫病、蛲虫病、蛔虫病、钩虫病、类圆线虫病、旋毛虫病、丝虫病；吸虫(吸虫)(血吸虫病、华支睾吸虫病)、绦虫(带虫)(包虫病、牛带绦虫病(Taeniasis saginata)、囊虫病)；内脏虫、内脏幼虫偏头痛(例如，弓蛔虫(Toxocara))、嗜酸性粒细胞性肠胃炎(例如，异尖线虫属(Anisakisp.)、海豹线虫属(Phocanema sp.))、皮肤幼虫偏头痛(巴西钩口线虫、犬钩虫)。本发明的化合物因此用于预防和治疗多种炎性、传染性和免疫调节病症和疾病。

[00210]另外，如果考虑传递足够的化合物以通过诱导趋化因子受体内化作用来造成细胞上受体表达的损失或以导致细胞迁移方向错误的方式来传递化合物，则也可设计用趋化因子受体功能的促进剂治疗前述炎性、过敏性和自身免疫性疾病。

[00211]在另一方面，本发明可用于评估G蛋白偶合受体的假定特异性激动剂或拮抗剂。本发明涉及这些化合物在制备和实行调节趋化因子受体活性的化合物的筛检检测中的用途。此外，本发明的化合物用于(例如)通过竞争性抑制作用或于检测中作为参照以比较其已知活性与具有未知活性的化合物来建立或确定其它化合物与趋化因子受体的结合位点。当开发新的检测或方案时，本发明的化合物可用于测试其有效性。特别是，这些化合物可提供于(例如)用于涉及前述疾病的医药研究的商业药剂盒中。本发明的化合物也适用于评估趋化因子受体的推定特异性调节剂。另外，通过用作未结合的化合物的实施例或作为可有助于界定相互作用的特异性位点的对这些受体具活性的化合物的结构变异体，可利用本发明的化合物来检测被认为不是趋化因子受体的G蛋白偶合受体的特异性。

[00212]在本文中所公开的化合物适用于治疗或预防选自以下的病症：类风湿性关节炎、骨关节炎、败血性休克、动脉粥样硬化、动脉瘤、发热、心血管作用、血液动力学休克、脓毒病综合征、缺血后再灌注损伤、疟疾、克罗恩氏病、炎性肠道疾病、分枝杆菌感染、脑膜炎、牛皮癣、充血性心脏衰竭、纤维化疾病、恶病质、移植排斥、自身免疫性疾病、皮肤炎性疾病、多发性硬化、辐射损害、高氧肺泡损伤、HIV、HIV痴呆、非胰岛素依赖性糖尿病、哮喘、过敏性鼻炎、异位性皮炎、特发性肺纤维化、大疱性类天疱疮、蠕虫寄生虫感染、过敏性结肠炎、湿疹、结膜炎、移植、家族性嗜酸性粒细胞增多、嗜酸性粒细胞性蜂窝组织炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、嗜酸性粒细胞性筋膜炎、嗜酸性粒细胞性肠胃炎、药物诱导的嗜酸性粒细胞增多、囊性纤维化、Churg-Strauss综合征、淋巴瘤、何杰金氏病、结肠癌、Felty′s综合征、肉状瘤病、葡萄膜炎、阿尔茨海默氏病、肾小球性肾炎和全身性红斑狼疮、食管鳞状细胞癌、神经病疼痛和肥胖症。

[00213]在另一方面，这些化合物适用于治疗或预防选自以下的炎性病症：类风湿性关节炎、骨关节炎、动脉粥样硬化、动脉瘤、发热、心血管作用、克罗恩氏病、炎性肠道疾病、牛皮癣、充血性心脏衰竭、多发性硬化、自身免疫性疾病、皮肤炎性疾病。

[00214]在另一方面，这些化合物用于治疗或预防选自以下的炎性病症：类风湿性关节炎、骨关节炎、动脉粥样硬化、克罗恩氏病、炎性肠道疾病和多发性硬化。

[00215]在另一方面，在本文中所公开的实施例可用于治疗多种癌症，包括(但不限于)以下癌症：

癌瘤，包括膀胱癌(包括加速性膀胱癌和转移性膀胱癌)、乳癌、结肠癌(包括结肠直肠癌)、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌和肺腺癌)、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、淋巴系统癌、直肠癌、喉癌、胰腺癌(包括外分泌胰腺癌)、食道癌、胃癌、胆囊癌、子宫颈癌、甲状腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；

淋巴谱系的造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、组织细胞淋巴瘤和伯基特氏淋巴瘤(Burketts lymphoma)；

骨髓谱系的造血系统肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病、骨髓发育不良综合征、骨髓白血病和前髓细胞白血病；

中枢和外周神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；

间叶细胞源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；和

其它肿瘤，包括黑素瘤、色素性干皮症、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌和畸胎癌。

[00216]在另一方面，在本文中公开治疗癌症的方法，其中该癌症选自乳癌、肝癌、前列腺癌和黑素瘤。另外，在本文中所公开的化合物可用于治疗卵巢癌和多发性骨髓瘤。

[00217]本发明提供治疗多种非癌性增生性疾病的方法。

[00218]预防和治疗炎性、传染性和免疫调节病症和疾病(其包括哮喘和过敏性疾病，以及自身免疫性病变(例如类风湿性关节炎和动脉粥样硬化)，和上文所指出的那些病变)的联合疗法由本发明的化合物与已知用于这些效用的其它化合物的组合来说明。例如，在炎症的治疗或预防中，本发明的化合物可与抗炎药或镇痛剂结合使用，例如阿片激动剂、脂氧合酶抑制剂、环加氧酶-2抑制剂、介白素抑制剂(例如介白素-1抑制剂)、肿瘤坏死因子抑制剂、NMDA拮抗剂、氧化氮的抑制剂或氧化氮合成的抑制剂、非类固醇抗炎药、磷酸二酯酶抑制剂或抑制细胞因子的抗炎药，例如与例如对乙酰氨基酚、阿司匹林、可待因、芬太尼、布洛芬、吲哚美辛(indomethacin)、酮洛酸(ketorolac)、吗啡、萘普生、非那西汀、吡罗昔康、甾类止痛剂、舒芬太尼(sufentanyl)、舒林酸、干扰素α等的化合物组合使用。类似地，本发明的化合物可与以下药物一起给予：疼痛缓解剂；增效剂，例如咖啡因、H2-拮抗剂、聚二甲硅氧烷、氢氧化铝或氢氧化镁；减充血剂，例如苯肾上腺素、苯丙醇胺、伪麻黄素(pseudophedrine)、羟甲唑啉(oxymetazoline)、肾上腺素、萘唑啉(naphazoline)、塞洛唑啉、丙己君或左脱氧麻黄素(levodesoxy-ephedrine)；和止咳剂，例如可待因、氢可酮、卡拉美芬、喷托维林或右美沙芬；利尿剂；和镇静性和非镇静性抗组胺。同样，在本文中所公开的化合物可与用于治疗/预防/抑制或改善本发明的化合物适用的疾病或病症的其它药物组合使用。这些其它药物可以因此通常使用的途径和量与本发明的化合物同时或依次给予。当化合物与一或多种其它药物同时使用时，可使用除本发明的化合物外还含有这些其它药物的药用组合物。因此，这些药用组合物包括除本发明的化合物之外，还含有一或多种其它活性成分的那些药用组合物。

[00219]分别给予或于同样的药用组合物中给予的可与本发明的化合物组合的其它活性成分的实例包括(但不限于)：(a)整联蛋白拮抗剂，例如选择蛋白、ICAM和VLA-4的拮抗剂；(b)甾族化合物，例如倍氯米松、甲泼尼龙、倍他米松、泼尼松、地塞米松和氢化可的松；(c)免疫抑制剂，例如环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素及其它FK-506型免疫抑制剂；(d)抗组胺剂(H1-组胺拮抗剂)，例如溴苯那敏、扑尔敏、右氯苯那敏、曲普利啶、氯马斯汀、苯海拉明、二苯拉林、曲吡那敏、羟嗪、甲地嗪、异丙嗪、阿利马嗪、阿扎他定、赛庚啶、安他唑啉、非尼拉敏、美吡拉敏、阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、地氯雷他定(descarboethoxyloratadine)等；(e)非类固醇止喘药，例如b2-激动剂(特布他林、奥西那林、非诺特罗、异他林、沙丁胺醇(albuteral)、比托特罗和吡布特罗、茶碱、色甘酸钠、阿托品、异丙托溴铵、白三烯拮抗剂(扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特(pranlukast)、伊拉司特、泊比司特、SKB-102，203)、白三烯生物合成抑制剂(齐留通、BAY-1005)；(f)非类固醇抗炎药(NSAID)，例如丙酸衍生物(阿明洛芬、苯噁洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、噁丙嗪、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫噁洛芬)、乙酸衍生物(吲哚美辛、阿西美辛、阿氯芬酸、环氯茚酸、双氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋罗芬酸、异丁芬酸、伊索克酸、奥昔平酸(oxpinac)、舒林酸、硫平酸、托美丁、齐多美辛和佐美酸)、芬那酸(fenamic acid)衍生物(氟芬那酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸和托芬那酸)、联苯甲酸衍生物(二氟尼柳和氟苯柳)、昔康类药物(oxicams)(伊索昔康、吡罗昔康、舒多昔康和替诺昔康(tenoxican))、水杨酸盐(乙酰基水杨酸、柳氮磺胺吡啶)和吡唑啉酮(阿扎丙宗、苄哌立隆(bezpiperylon)、非普拉宗、莫非布宗、羟布宗、苯基丁氮酮)；(g)环加氧酶-2(COX-2)抑制剂；(h)IV型磷酸二酯酶(PDE-IV)抑制剂；(i)趋化因子受体的其它拮抗剂；(j)胆固醇降低剂，例如HMG-COA还原酶抑制剂(洛伐他汀、辛伐他汀和普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀及其它他汀类药物(statins))、螯合剂(考来烯胺和考来替泊(colestipol))、烟酸、非诺贝酸衍生物(吉非贝特、氯贝丁酯(clofibrat)、非诺贝特和苯扎贝特(benzafibrate))和丙丁酚；(k)抗糖尿病剂，例如胰岛素、磺酰脲、双胍(二甲双胍)、a-葡糖苷酶抑制剂(阿卡波糖)和格列酮类药物(glitazones)((曲格列酮和吡格列酮)；(l)干扰素制剂(干扰素α-2a、干扰素-2B、干扰素α-N3、干扰素β-1a、干扰素β-1b、干扰素γ-1b)；(m)抗病毒化合物，例如依法韦仑、奈韦拉平、茚地那韦、更昔洛韦、拉米夫定、泛昔洛韦和扎西他滨；(o)其它化合物，例如5-氨基水杨酸及其前药、抗代谢物(例如硫唑嘌呤和6-巯嘌呤)和细胞毒性癌症化学治疗剂。本发明的化合物与第二活性成分的重量比可改变且应视每一成分的有效剂量而定。

[00220]通常将使用有效剂量的各成分。因此，例如，当化合物与NSAID组合时，本发明的化合物与NSAID的重量比通常应在约1000∶1至约1∶1000或者约200∶1至约1∶200的范围内。本发明的化合物与其它活性成分的组合通常也应在前述范围内，但在每一情况下，应使用有效剂量的每一活性成分。

[00221]在治疗癌症中，化学治疗剂和/或其它治疗(例如，放射疗法)的组合通常为有利的。第二(或第三)药物可具有与主要治疗剂相同或不同的作用机制。使用细胞毒性药物组合可为尤其有用的，其中经给予的两种或两种以上药物以不同方式或在不同阶段的细胞周期中起作用，和/或其中该两种或两种以上药物具有重叠毒性或副作用，和/或其中组合的药物在治疗患者所表现的特定疾病症态中各自具有所证明的功效。

[00222]因此，本文中所公开的化合物(或本文中所公开的其它结构式)可与用于治疗癌症或其它增生性疾病的其它抗癌剂和细胞毒性剂和治疗组合给予。在本文中本发明进一步包括本文中的化合物(或在本文中所公开的其它结构式)在制备用于治疗癌症的药物中的用途，和/或其包括本文中的化合物的包装以及化合物与用于治疗癌症的其它抗癌剂或细胞毒性剂和治疗组合使用的说明。本发明进一步包含呈药剂盒形式的化合物与一或多种其它药物的组合，例如，其中它们被包装在一起或置于各分开的包装中以作为药剂盒一起销售，或其中它们被包装以调配在一起。

[00223]第二(或更多)抗癌剂可选自以下药物中的任何一种或多种：

烷基化剂(包括氮芥、磺酸烷基酯、亚硝基脲、乙烯亚胺(ethylenimine)衍生物和三氮烯)；抗血管生成剂(包括基质金属蛋白酶抑制剂)；抗代谢物(包括腺苷脱胺酶抑制剂、叶酸拮抗剂、嘌呤类似物和嘧啶类似物)；抗生素或抗体(包括单克隆抗体、CTLA-4抗体、蒽环霉素)；芳香酶抑制剂；

细胞周期反应调节剂；酶；法呢基蛋白转移酶抑制剂；

激素和抗激素药物和类固醇(包括合成类似物、糖皮质激素、雌激素/抗雌激素[例如，SERM]、雄激素/抗雄激素、孕酮、孕甾酮受体激动剂和促黄体素释放[LHRH]激动剂和拮抗剂)；胰岛素样生长因子(IGF)/胰岛素样生长因子受体(IGFR)系统调节剂(包括IGFR1抑制剂)；整联蛋白-信号抑制剂；激酶抑制剂(包括多激酶抑制剂和/或Src激酶或Src/abl的抑制剂、细胞周期蛋白依赖性激酶[CDK]抑制剂、panHer、Her-1和Her-2抗体、VEGF抑制剂(包括抗VEGF抗体)、EGFR抑制剂、有丝分裂原活化蛋白[MAP]抑制剂、MEK抑制剂、Aurora激酶抑制剂、PDGF抑制剂及其它酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂；

微管破裂剂，例如海鞘素(ecteinascidin)或其类似物和衍生物；微管稳定剂，例如紫杉烷(taxanes)，和天然存在的大环内酯类抗肿瘤药(epothilones)及其合成和半合成类似物；

微管结合、去稳定剂(包括长春花生物碱(vinca alkaloids))；和

拓扑异构酶抑制剂；异戊烯基(prenyl)蛋白转移酶抑制剂；铂配位复合物；信号转导抑制剂；和用作抗癌剂和细胞毒性剂的其它药物，例如生物反应调节剂、生长因子和免疫调节剂。

[00224]另外，本发明的化合物可与因其在处理与前述病症相关的副作用中的特定有用性而经选定的其它治疗剂一起调配或共同给予。例如，本发明的化合物可与药物一起调配以预防恶心、过敏和胃刺激，例如止吐药和H₁和H₂抗组胺药。

当与本发明的化合物组合使用时，上文其它治疗剂可以(例如)以临床医师案头参考书(Physicians′Desk Reference)(PDR)中指示或如由本领域普通技术人员所确定的那些量使用。

[00225]这些化合物以治疗有效量给予哺乳动物。″治疗有效量″意谓当单独或与另一治疗剂组合给予哺乳动物时可有效预防或改善疾病症态或疾病进程的本发明的化合物的量。

剂量和制剂

[00226]本公开的化合物可以例如片剂、胶囊(其各自包括持续释放或定时释放制剂)、丸剂、散剂、颗粒、酏剂、酊剂、悬浮液、糖浆和乳液的口服剂型给予。它们也可以静脉内(大剂量推注或输液)、腹膜内、皮下或肌肉内形式给予，医药领域的普通技术人员熟知所有使用的剂型。它们可单独给药，但通常应与根据所选给药途径和标准医药实践选择的药用载体一起给予。

[00227]本发明的化合物的给药方案当然会根据已知因素而改变，例如特定药物的药效特性及其给药模式和途径；接受者的物种、年龄、性别、健康状况、医学病症和体重；症状的性质和程度；同时治疗的种类；治疗频率；给药途径、患者的肾和肝功能和所需效应。医师或兽医可确定且规定预防、抵抗或阻遏病症进展所需的药物的有效量。

[00228]作为一般指导，当用于指定效应时，每一活性成分的每日口服剂量应在介于每公斤体重约0.001mg至1000mg或介于每日每公斤体重约0.01mg至100mg或者介于每日每公斤约1.0mg至20mg的范围内。在恒定速率静脉内输液期间，剂量应在每分钟每公斤约1mg至约10mg的范围内。本发明的化合物可以单一每日剂量给予，或总日剂量可以每日两次、三次或四次分开的剂量给予。在一实施方案中，活性成分的每日口服剂量介于3mg与600mg之间，其经每日一次给予或以分开剂量每日两次给予。或者，活性成分可以每日两次给予10mg-20mg或每日一次给予40mg至100mg的剂量给予。或者，活性成分可以每日两次12.5mg或每日一次75mg的剂量给予。或者，活性成分可以每日一次或两次给予3mg、10mg、30mg、100mg、300mg和600mg的剂量给予。

[00229]本发明的化合物可通过局部使用适合的鼻内溶媒以鼻内形式给予，或通过经皮途径使用经皮皮肤贴片给予。当以经皮传递系统形式给药时，在整个给药方案中剂量给药当然应为连续的，而非间歇的。

[00230]这些化合物通常与关于预期给药形式(即，口服片剂、胶囊、酏剂、糖浆等)适当选定且符合常规医药实践的适合药用稀释剂、赋形剂或载体(在本文中统称为药用载体)混合给药。

[00231]例如，对于以片剂或胶囊形式经口给药而言，活性药物组分可与口服、无毒、药学上可接受的惰性载体(例如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、甘露糖醇、山梨糖醇等)组合；对于以液体形式经口给药而言，口服药物组分可与任何口服、无毒、药学上可接受的惰性载体(例如乙醇、甘油、水等)组合。此外，当需要或必要时，适合的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂也可掺入混合物中。适合粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成胶(例如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。这些剂型中所使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。

[00232]本发明的化合物也可以脂质体传递系统(例如单层小微脂粒、单层大微脂粒和多层微脂粒)的形式给予。脂质体可由多种磷脂(例如胆固醇、十八胺或磷脂酰胆碱)形成。

[00233]本发明的化合物也可与作为可靶向药物载体的可溶性聚合物偶合。这些聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、哌喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺-酚、聚羟基乙基天冬酰胺酚或经十六酰基残基取代的聚氧化乙烯-聚赖氨酸。此外，本发明的化合物可与一类适用于实现药物控制释放的可生物降解的聚合物偶合，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸与聚乙醇酸的共聚物、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两性嵌段共聚物。

[00234]适用于给药的剂型(药用组合物)每剂量单位可含有约1毫克至约100毫克的活性成分。在这些药用组合物中，活性成分通常应以组合物的总重量计约0.5重量％-95重量％的量存在。

[00235]明胶胶囊可含有活性成分和粉末状载体，例如乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。类似稀释剂可用于制备压制片剂。片剂与胶囊两者可被制备为持续释放产品以在一段时期内提供药物的连续释放。压制片剂可经糖包衣或经薄膜包衣以掩蔽任何令人不愉快的味道且保护片剂免于暴露在大气中，或经肠衣包衣以在胃肠道中选择性崩解。

[00236]用于经口给药的液体剂型可含有着色剂和调味剂以增加患者接受性。

[00237]一般而言，水、适合的油、盐水、右旋糖(葡萄糖)水溶液和相关的糖溶液和二醇(例如丙二醇或聚乙二醇)为非经肠溶液的适合载体。用于非经肠给药的溶液可含有活性成分的水溶性盐、适合稳定剂和(必要时)缓冲的物质。单独或组合的抗氧化剂(例如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸)为适合的稳定剂。也使用柠檬酸及其盐和乙二胺四乙酸(EDTA)钠。另外，非经肠溶液可含有防腐剂，例如苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和氯丁醇。

[00238]适合的药用载体于本领域的标准参考教科书Remington′sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company中有描述。

[00239]用于给予本发明的化合物的代表性的适用药物剂型可举例说明如下：

胶囊

[00240]可通过向每一标准的两节式硬质明胶胶囊中填充100毫克粉末状活性成分、150毫克乳糖、50毫克纤维素和6毫克硬脂酸镁来制备大量单位胶囊。

软质明胶胶囊

[00241]可制备活性成分于可消化油(例如大豆油、棉籽油或橄榄油)中的混合物且藉助于容积泵将其注射于明胶中以形成含有100毫克活性成分的软质明胶胶囊。这些胶囊应经洗涤且干燥。

片剂

[00242]可以常规程序制备片剂以使得剂量单位为100毫克活性成分、0.2毫克胶状二氧化硅、5毫克硬脂酸镁、275毫克微晶纤维素、11毫克淀粉和98.8毫克乳糖。可施加适当涂层以增加可口性或延迟吸收。

注射剂

[00243]可通过将1.5重量％的活性成分于10体积％丙二醇和水中搅拌来制备适用于通过注射给药的非经肠组合物。应使得该溶液与氯化钠等渗且杀菌。

悬浮液

[00244]可制备用于经口给药的水性悬浮液，以使得每5mL含有100mg细粉状活性成分、200mg羧甲基纤维素钠、5mg苯甲酸钠、1.0g山梨糖醇溶液(U.S.P.)和0.025mL香兰素。

[00245]当本发明的化合物与其它抗凝剂组合时，例如，每日剂量可为每公斤患者体重约0.1毫克至100毫克的式I化合物和约1毫克至7.5毫克的第二抗凝剂。对于片剂剂型而言，本发明的化合物通常可以每剂量单位约5毫克至10毫克的量存在，且第二抗凝剂的量可为每剂量单位约1毫克至5毫克。

[00246]当上述第二治疗剂中的两种或更多种与实施例的化合物一起给予时，鉴于组合给予时各治疗剂的附加或协同效应，一般来说，典型每日剂量和典型剂型的每一组分的量相对于单独给予时该药物的常用剂量可有所减少。

[00247]尤其当以单一剂量单位提供时，组合的活性成分之间存在化学相互作用的可能性。为此理由，当实施例的化合物和第二治疗剂经组合于单一剂量单位中时，可对它们进行配制以使得尽管活性成分被组合于单一剂量单位中，但活性成分之间的物理接触最小化(即，减少)。例如，一种活性成分可经肠包衣。通过对活性成分中的一种进行肠包衣，有可能不仅使组合的活性成分之间的接触最小化，而且也有可能控制这些组分中的一种在胃肠道中的释放以使得这些组分中的一种并不在胃中释放而是在肠中释放。活性成分中的一种也可用在整个胃肠道中实现持续释放且也使组合的各活性成分之间的物理接触最小化的物质包衣。此外，持续释放组分可另外经肠包衣以使得此组分仅在肠中释放。另一方法涉及组合产物的配制，其中一种组分用持续释放和/或肠释放聚合物包衣，而另一组分也用聚合物例如低粘度级羟丙基甲基纤维素(HPMC)或本领域已知的其它适当物质包衣，以进一步分离活性组分。聚合物包衣用于形成与另一组分相互作用的另一屏障。

[00248]一旦理解本发明，则本领域技术人员将易于了解，使无论是以单一剂型给予或以分开的形式由相同方式同时给予的本发明的组合产物的组分之间的接触最小化的这些方式以及其它方式。

[00249]另外，在本文中所公开的某些化合物可以其它化合物的代谢物形式使用。因此，在一实施方案中，化合物可以基本上纯的化合物使用(其随后也可并入药用组合物中)，或可以在给予该化合物的前药后所产生的代谢物使用。在一实施方案中，通过适用于治疗如在本文中所述的病症，化合物可作为代谢物形式使用。

[00250]如在本文中所使用的″基本上纯″意欲包括纯度大于约90重量％，包括约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100重量％的化合物。

[00251]作为一实施例，在本文中所公开的化合物可为基本上纯的，其纯度大于约90％(以重量计)，其中剩余小于约10％的物质包含该化合物的其它代谢物、该化合物的前药和/或由其制备所产生的反应和/或处理的杂质。

[00252]显然，根据上述教导，对本发明的众多更改和变更为可能的。因此，应了解在所附权利要求的范畴内，本发明可以不同于如在本文中具体所述的其它方式实施。

Claims (20)

1.一种化合物，所述化合物选自：

(i)N-((1R，2S，5R)-2-((3S)-3-((6-叔丁基嘧啶并[5，4-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基)乙酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-(甲氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)甲酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-(二甲氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；

N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-6-叔丁基-2-吡啶甲酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-氨基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)丙酰胺；

2-叔丁基-N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-4-(叔丁氨基)-2-(甲烷磺酰基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-4-嘧啶甲酰胺；

2-叔丁基-N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-4-(叔丁氨基)-2-(丙酰基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-4-嘧啶甲酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁氨基)-2-((3S)-3-((6-叔丁基嘧啶并[5，4-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)甲烷磺酰胺；和

N-(((1S，2S，5R)-5-甲氧基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)甲基)乙酰胺；或

(ii)(i)的药学上可接受的盐。

2.权利要求1的化合物，其为N-((1R，2S，5R)-2-((3S)-3-((6-叔丁基嘧啶并[5，4-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)-5-(异丙基(甲基)氨基)环己基)乙酰胺或其药学上可接受的盐。

3.权利要求1的化合物，其为N-((1R，2S，5R)-5-(甲氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺或其药学上可接受的盐。

4.权利要求1的化合物，其为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)甲酰胺或其药学上可接受的盐。

5.权利要求1的化合物，其为N-((1R，2S，5R)-5-(二甲氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺或其药学上可接受的盐。

6.权利要求1的化合物，其为N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰氨基-4-(异丙基(甲基)氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-6-叔丁基-2-吡啶甲酰胺或其药学上可接受的盐。

7.权利要求1的化合物，其为N-((1R，2S，5R)-5-氨基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)丙酰胺或其药学上可接受的盐。

8.权利要求1的化合物，其为2-叔丁基-N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-4-(叔丁氨基)-2-(甲烷磺酰基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-4-嘧啶甲酰胺或其药学上可接受的盐。

9.权利要求1的化合物，其为2-叔丁基-N-((3S)-1-((1S，2R，4R)-4-(叔丁氨基)-2-(丙酰基氨基)环己基)-2-氧代-3-吡咯烷基)-4-嘧啶甲酰胺或其药学上可接受的盐。

10.权利要求1的化合物，其为N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁氨基)-2-((3S)-3-((6-叔丁基嘧啶并[5，4-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)甲烷磺酰胺或其药学上可接受的盐。

11.权利要求1的化合物，其为N-(((1S，2S，5R)-5-甲氧基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)甲基)乙酰胺或其药学上可接受的盐。

12.一种化合物，其选自：

(i)N-((1R，2S，5R)-5-(异丙氨基)-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-氨基-2-((3S)-2-氧代-3-((6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((3S)-3-((1-氧化-6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；

N-((1R，2S，5R)-5-(异丙氨基)-2-((3S)-3-((1-氧化-6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；和

N-((1R，2S，5R)-5-(叔丁氨基)-2-((3S)-3-((1-氧化-6-(三氟甲基)-4-喹唑啉基)氨基)-2-氧代-1-吡咯烷基)环己基)乙酰胺；或

(ii)(i)的药学上可接受的盐。

13.一种药用组合物，其包含权利要求1-12中任一项的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

14.一种治疗哺乳动物的疾病的方法，其包括向所述哺乳动物给予治疗有效量的权利要求1-12中任一项的化合物，其中所述疾病选自糖尿病、肥胖症、代谢综合征、中风、神经病疼痛、缺血性心肌病、牛皮癣、高血压、硬皮病、骨关节炎、动脉瘤、发热、心血管疾病、克罗恩氏病、充血性心脏衰竭、自身免疫性疾病、HIV-感染、HIV相关痴呆、牛皮癣、特发性肺纤维化、移植性动脉硬化、物理或化学诱发的脑损伤、炎性肠道疾病、肺泡炎、结肠炎、全身性红斑狼疮、肾毒性血清肾炎、肾小球性肾炎、哮喘、多发性硬化、动脉粥样硬化、血管炎、易损斑块、类风湿性关节炎、再狭窄、静脉新生血管内膜增生、透析移植物新生血管内膜增生、动静脉分流血管内膜增生、器官移植、慢性同种异体移植肾病变和癌症。

15.权利要求14的方法，其中所述疾病选自糖尿病、肥胖症、克罗恩氏病、全身性红斑狼疮、肾小球性肾炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、再狭窄和器官移植。

16.权利要求14或15的方法，其中所述疾病选自多发性硬化、动脉粥样硬化、克罗恩氏病和糖尿病。

17.权利要求14-16中任一项的方法，其中所述疾病为糖尿病。

18.权利要求14-16中任一项的方法，其中所述疾病为动脉粥样硬化。

19.权利要求14-16中任一项的方法，其中所述疾病为克罗恩氏病。

20.权利要求14-16中任一项的方法，其中所述疾病为多发性硬化。

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