CN101501485B

CN101501485B - 通过毛细管电泳法分析试样的方法

Info

Publication number: CN101501485B
Application number: CN2007800295434A
Authority: CN
Inventors: 田中喜秀; 胁田慎一; 中山雄介; 米原聪
Original assignee: Arkray Inc; National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Current assignee: Arkray Inc; National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Priority date: 2006-09-04
Filing date: 2007-08-29
Publication date: 2012-07-04
Anticipated expiration: 2027-08-29
Also published as: EP2060913B1; WO2008029685A1; US8137512B2; US20100187110A1; EP2060913A4; JPWO2008029685A1; JP4814945B2; CN101501485A; EP2060913A1

Abstract

本发明提供一种通过可实现装置的小型化、分析精度高、容易实施的毛细管电泳法分析试样的方法。本发明的分析方法，其特征在于，其是通过毛细管电泳法分析试样的方法，包括：准备上述毛细管电泳法中使用的毛细管的工序，和在上述毛细管中使试样与含有阴极性基团的化合物结合而成的复合物进行电泳的工序，其中上述毛细管是在上述毛细管内壁层叠有由含有阴极性基团的化合物形成的阴极性层的毛细管，上述阴极性层通过共价键固定在上述毛细管内壁。

Description

通过毛细管电泳法分析试样的方法

技术领域

本发明涉及通过毛细管电泳法分析试样的方法，用于该方法的毛细管和毛细管电泳装置。

背景技术

在毛细管电泳法中，集中在毛细管内壁的离子通过施加的电压移动而产生电渗流，由此试样移动而进行电泳。作为毛细管，使用熔融二氧化硅制的毛细管，有时会存在由于试样吸附而无法获得良好的电渗流。因此，提出了覆盖毛细管内壁的技术(专利文献1、2、3、4)。另一方面，血液中的血红蛋白(Hb)与血液中的葡萄糖反应，形成糖化Hb。血液中的糖化Hb由于反映了生物体血糖值的以往历程，因此作为糖尿病诊断和治疗等中的指标，其中，β链N末端的缬氨酸糖化的物质被称为血红蛋白Alc(HbAlc)，作为特别重要的指标，在临床检查等中其对进行测定。血液中的血红蛋白的测定方法有例如琼脂糖电泳法、毛细管电泳法、HPLC法、免疫法、酶法等。这些当中，能检测出血红蛋白遗传变异等微小变异的是毛细管电泳法和HPLC法。另一方面，对于血红蛋白的分析装置，要求小型化。对于这一点，HPLC法难以实现装置整体的小型化。相反，在毛细管电泳法中，通过微芯片化，能使装置整体小型化。

然而，在上述现有的毛细管电泳法中，存在难以高精度分析血红蛋白的问题，为了解决该问题，提出了用蛋白质覆盖毛细管内壁，再在其上覆盖多糖类的技术(专利文献5)。然而，在该技术中，必须在每次分析时进行用蛋白质覆盖毛细管内壁的操作，存在分析变复杂的问题。另一方面，提出了在两性离子性类型的运行缓冲液中含有脂肪族二胺等流动抑制剂以进行毛细管电泳而不覆盖毛细管内壁的方法(专利文献6)。然而，在该方法中，存在虽然能分离变异血红蛋白，但无法分离出血红蛋白Alc的问题。这些问题并不限于血红蛋白，也是其它试样的毛细管电泳法普遍的问题。

专利文献1：日本特开2005-291926号公报

专利文献2：日本特开平4-320957号公报

专利文献3：日本特表平5-503989号公报

专利文献4：日本特表平8-504037号公报

专利文献5：日本特开平9-105739号公报

专利文献6：日本特开2006-145537号公报

发明内容

于是，本发明的目的是提供一种通过可实现装置的小型化、分析精度高、容易实施的毛细管电泳法分析试样的方法，用于该方法的毛细管和毛细管电泳装置。

为了实现上述目的，本发明的分析方法，其特征在于，其是通过毛细管电泳法分析试样的方法，包括：

准备上述毛细管电泳法中使用的毛细管的工序，和

在上述毛细管中，使试样与含有阴极性基团的化合物结合而成的复合物进行电泳的工序，

其中上述毛细管是在上述毛细管内壁层叠有由含有阴极性基团的化合物形成的阴极性层的毛细管，上述阴极性层通过共价键固定在上述毛细管内壁。

本发明的毛细管，其特征在于，其是在上述本发明的分析方法中使用的毛细管电泳用的毛细管，其中，在上述毛细管内壁，层叠有由含有阴极性基团的化合物形成的阴极性层，上述阴极性层通过共价键固定在上述毛细管内壁。

本发明的毛细管电泳装置，其特征在于，其是在上述本发明的分析方法中使用的毛细管电泳装置，其中，包含上述本发明的毛细管。如后述那样，本发明的毛细管电泳装置可以为小型化(微芯片化)的微芯片电泳装置。

在本发明的分析方法中，由于使用在毛细管内壁形成有通过共价键固定的阴极性层的毛细管，因此可以防止血红蛋白等血液试样中的蛋白质等吸附在毛细管内壁，由此，可以产生良好的电渗流。此外，在本发明的分析方法中，由于试样与含有阴极性基团的化合物结合而生成复合物并使其进行电泳，因此，与试样单独进行电泳相比，分离效率提高。由此，根据本发明的分析方法，能短时间且高精度地分析血红蛋白等的试样。此外，上述阴极性层被牢固地固定在毛细管内壁，因此一旦形成，即使清洗，也不会容易地剥离，可重复使用。因此，在本发明的分析方法中，一旦形成阴极性层，无需在每次分析时形成阴极性层，可以容易地进行分析。此外，在本发明中，由于采用毛细管电泳法，因此可以将分析装置小型化。

附图说明

图1是表示本发明一个实施例中血红蛋白分析结果的图表。

图2是表示本发明其他实施例中血红蛋白分析结果的图表。

图3是表示本发明毛细管电泳装置一个例子结构的图。图3的(A)是该例子的毛细管电泳装置的俯视图。图3的(B)是图3的(A)的I-I剖面图。图3的(C)是图3的(A)的II-II剖面图。

图4是表示本发明毛细管电泳装置其他例子的结构的图。

图5是表示本发明毛细管电泳装置另一其他例子的结构的图。

图6是表示本发明毛细管电泳装置另一其他例子的结构的图。

具体实施方式

在本发明中，上述运行缓冲液，是指在实际分离工序中使用的缓冲液(buffer)。优选在本发明分析方法的上述毛细管中，向包含含有阴极性基团的化合物的运行缓冲液中添加试样，接着，在毛细管两端施加电压，从而使上述试样与含有阴极性基团的化合物的复合物进行电泳。

在本发明的分析方法和毛细管中，作为与上述试样形成复合物的上述含有阴极性基团的化合物，优选为含有阴极性基团的多糖类。作为上述含有阴极性基团的多糖类，例如是硫酸化多糖类、羧酸化多糖类、磺酸化多糖类和磷酸化多糖类，其中，优选硫酸化多糖类和羧酸化多糖类。作为上述硫酸化多糖类，优选硫酸软骨素、肝素等，更优选为硫酸软骨素。作为上述羧酸化多糖类，优选海藻酸或其盐(例如海藻酸钠)。硫酸软骨素有A、B、C、D、E、H、K七种，可以使用任一种。

在本发明的分析方法和毛细管的形成上述阴极性层的上述含有阴极性基团的化合物中，上述阴极性基团优选为磺基和羧基的至少一种。

在本发明中，上述试样优选为含有血红蛋白的试样。

在本发明的毛细管电泳装置中，包括基板、多个液槽、毛细管，在上述基板上形成有上述多个液槽，上述多个液槽通过上述毛细管连通，上述毛细管还可以是上述本发明的毛细管。在该情况下，上述基板的最大长度例如在10～100mm的范围内，优选在30～70mm的范围内，上述基板的最大宽度例如在10～ 60mm的范围内，上述基板的最大厚度例如在0.3～5mm的范围内。另外，所谓上述基板的最大长度是指上述基板长度方向最长部分的长度，所谓上述基板的最大宽度是指上述基板的与上述长度方向垂直的方向(宽度方向)的最长部分的长度，所谓上述基板的最大厚度是指上述基板的与上述长度方向和上述宽度方向两者垂直的方向(厚度方向)的最长部分的长度。如此，本发明的毛细管电泳装置还可以是小型化(微芯片化)的微芯片电泳装置。

以下，对本发明进行详细说明。

如上所述，本发明中的毛细管在其内壁形成有上述阴极性层。

对上述毛细管的材料没有特别的限定，可以列举例如玻璃、熔融二氧化硅、塑料等。玻璃制、熔融二氧化硅制的毛细管的内壁通常为具有阴性电荷的状态。塑料制的毛细管内壁根据塑料中有无极性基团或极性基团的种类而成为具有阳性或阴性电荷的状态或为无电荷(无极性)的状态。此外，即使是不具有极性基团的塑料，也能通过导入极性基团，从而成为具有电荷的状态。作为上述塑料制的毛细管，可以使用市售品，可以列举例如由聚甲基丙烯酸甲酯、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚四氟乙烯(PTFE)、聚醚醚酮(PEEK)等形成的毛细管。上述毛细管的内径例如在10～200μm的范围内，优选在25～100μm的范围内。上述毛细管的长度例如在10～1000mm的范围内。

由上述含有阴极性基团的化合物在上述毛细管内壁形成上述阴极性层时，例如，使用包含前述阴极性基团和反应基团的化合物即可。在上述毛细管为玻璃制或熔融二氧化硅制的情况下，可以使用具有阴极性基团和硅的化合物(甲硅烷基化剂)。作为上述阴极性基团，如上所述，优选磺基和羧基中的至少一个，这一点如前所述。

上述甲硅烷基化剂例如是2-(4-氯代磺酰基苯基)乙基三甲氧基硅烷、2-(4-氯代磺酰基苯基)乙基三氯硅烷。

在上述甲硅烷基化剂中，还可以使用硅原子被钛或锆取代的物质。上述甲硅烷基化剂可以单独使用一种，也可以将二种以上并用。

使用上述甲硅烷基化剂形成阴极性层时，例如如下进行。首先，制备在有机溶剂中溶解或分散甲硅烷基化剂的处理液。作为在上述处理液的制备中使用的上述有机溶剂，可以使用例如二氯甲烷、甲苯等。对上述处理液中的甲硅烷基化剂的浓度没有特别的限定。将该处理液通入到玻璃制或熔融二氧化硅制的毛细管内，加热。通过该加热，上述甲硅烷基化剂通过共价键键合到上述毛细管内壁，其结果，阴极性基团被配置在上述毛细管内壁。然后，使用有机溶剂(二氯甲烷、甲醇、丙酮等)、酸性溶液(磷酸等)、碱性溶液和表面活性剂溶液的至少一种进行洗涤(后处理)。另外，该洗涤是任意进行的，优选进行洗涤。通过上述甲硅烷基化剂形成有阴极性层的毛细管可以使用市售品。

对上述运行缓冲液没有特别的限定，优选为使用酸的缓冲液。上述酸例如是马来酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、邻苯二甲酸、丙二酸、苹果酸。此外，上述运行缓冲液优选为含有弱碱。作为上述弱碱，例如是精氨酸、赖氨酸、组氨酸和三羟基甲基氨基甲烷(tris)等。上述运行缓冲液的pH例如在pH4.5～6的范围内。上述运行缓冲液的缓冲液种类有MES、ADA、ACES、BES、MOPS、TES、HEPES等。在上述运行缓冲液中，与上述试样形成复合物的上述含有阴极性基团的化合物的浓度例如在0.01～5重量％的范围内。

接着，本发明的分析方法例如对含有血红蛋白的试样可以如下实施。

首先，制备玻璃制或熔融二氧化硅制的毛细管。在该毛细管的内壁，通过共价键固定有含有阴极性基团的化合物。在该毛细管中通入提纯水洗涤。上述提纯水的通液时间例如为1～10分钟，上述通液时的压力例如为0.05～0.1MPa。接着，在上述毛细管内，通过泵施加压力，通入包含硫酸软骨素等含有阴极性基团的多糖类的运行缓冲液。该通液的时间例如为10～60分钟，通液的压力例如为0.05～0.1MPa。在上述毛细管内填充有上述运行缓冲液的状态下，在上述毛细管内导入含有血红蛋白的试样，在上述毛细管的两端施加电压，进行电泳。上述含有血红蛋白的试样没有特别的限制，可以列举例如对全血进行溶血处理的试样，此外，还可以用提纯水或运行缓冲液稀释该试样。上述含血红蛋白的试样的导入是从上述毛细管的阳极侧进行。被导入的血红蛋白与上述运行缓冲液中的含阴极性基团的多糖类结合，形成复合物。通过施加电压，在上述毛细管内的运行缓冲液中产生电渗流，上述复合物向毛细管的阴极侧移动。上述电压施加的程度例如为10～30kV。该移动通过光学方法检测。对光学方法的检测没有特别限制，优选在415nm的波长下进行。

在本发明中，对作为分析对象的血红蛋白没有特别限制，例如是正常血红蛋白、糖化血红蛋白(例如HbAlc、不稳定型HbAlc、GHbLys等)、遗传变异型血红蛋白等。在本发明中，可以将HbAlc与其他血红蛋白分离并分析。

接着，通过举例对本发明的毛细管电泳装置进行说明。然而，本发明的毛细管电泳装置并不限定在下述例子。

在图3中示出本发明毛细管电泳装置的一个例子。图3的(A)是该例的毛细管电泳装置的俯视图，图3的(B)是图3的(A)的I-I剖面图，图3的(C)是图3的(A)的II-II的剖面图。此外，在该图中，为了容易看懂，各结构要素的大小和比率等与实际不同。该例的毛细管电泳装置是小型化(微芯片化)的微芯片电泳装置。如图所示，该微芯片电泳装置包含基板1、多个(在该例中为4个)的液槽2a～2d、4根毛细管3x1、3x2、3y1和3y2。上述4根毛细管全部是上述本发明的毛细管。上述4个液槽2a～2d包括第1导入槽2a、第1回收槽2b、第2导入槽2c和第2回收槽2d。上述4根毛细管其各自的一端在中心部分c集合，连结成十字状。其结果，上述4根毛细管在其内部连通。在上述基板1中设有用于嵌入上述4根毛细管的空洞(未图示)。将上述毛细管3x1嵌入上述基板1中，使其另一端位于上述第1导入槽2a的底面。将上述毛细管3x2嵌入上述基板1中，使其另一端位于上述第1回收槽2b的底面。上述毛细管3x1和3x2构成试样分析用的毛细管流路3x。将上述毛细管3y1嵌入上述基板1中，使其另一端位于上述第2导入槽2c的底面，将上述毛细管3y2嵌入上述基板1中，使其另一端位于上述第2回收槽2d的底面。上述毛细管3y1和3y2构成试样导入用的毛细管流路3y。上述多个液槽2a～2d分别在上述基板1上形成为凹部。上述基板1在上述试样导入用的毛细管流路3y的第1回收槽2b侧具有长方体状的开口部分(窗)9。另外，该例的微芯片电泳装置为长方体状。然而，本发明并不限定于这些。本发明的微芯片毛细管电泳装置只要在电泳测定中没有障碍，就可以是任意的形状。此外，该例的微芯片电泳装置的平面形状是长方形。然而，本发明并不限定于这些。本发明微芯片电泳装置的平面形状例如还可以是正方形或其他形状。此外，在该例的微芯片电泳装置中，上述试样分析用的毛细管流路3x和上述试样导入用的毛细管流路3y的最大长度不同。然而，本发明并不限定于此。在本发明的微芯片电泳装置中，上述试样分析用的毛细管流路3x和上述试样导入用的毛细管流路3y的最大长度也可以相同。对此外的结构来说，本发明微芯片电泳装置的结构也并不限定于该例。

接着，对该例的微芯片电泳装置的制造方法进行说明。不过，上述微芯片电泳芯片也可以通过下述制造方法以外的方法制造。

在该例的微芯片电泳装置中，作为上述基板1，可以使用例如由玻璃、聚合物材料等形成的基板。作为上述玻璃材料，可以列举例如合成石英玻璃、硼硅酸玻璃等。作为上述聚合物材料，可以列举例如聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、环烯烃聚合物(COP)、聚碳酸酯(PC)、聚二甲基硅氧烷(PDMS)、聚苯乙烯(PS)、聚乳酸等。

在该例的微芯片电泳装置中，上述基板1的最大长度、最大宽度和最大厚度如前所述。

上述4根毛细管的内径分别如上述本发明毛细管的内径。上述试样分析用的毛细管流路3x和上述试样导入用的毛细管流路3y的最大长度，例如在0.5～15cm的范围内。上述4根毛细管的长度分别根据上述试样分析用的毛细管流路3x和上述试样导入用的毛细管流路3y的最大长度决定。

对上述多个液槽2a～2d的容积没有特别限制，例如分别在1～1000mm³的范围内，优选在50～100mm³的范围内。在图3中，上述多个液槽2a～2d的形状为圆柱状。不过，本发明并不限定于此。在本发明的微芯片电泳装置中，上述多个液槽的形状只要对后述的试样的导入和回收没有妨害，就没有限制，可以是例如四棱柱状、四棱锥状、圆锥状、将它们组合的形状等任意的形状。此外，上述多个液槽的容积和形状可以全部相同，也可以各自不同。

以下示出该例的微芯片电泳装置制造工序的一个例子。不过，上述微芯片电泳装置还可以通过下述制造工序以外的工序制造。

首先，制备上述基板1。在上述基板1中形成上述4个液槽2a～2d和上述开口部分(窗)9的形成方法没有特别的限制。例如，在上述基板1的材料是上述玻璃的情况下，作为上述形成方法，可以列举例如超声波加工等。例如，在上述基板1的材料是上述聚合物材料的情况下，作为上述形成方法，可以列举例如使用模具的注射成型、浇铸成型、挤压成型等成型法或切削加工法等。上述4个液槽2a～2d和上述开口部分(窗)9可以分别另行形成，也可以全部同时形成。在另行形成上述4个液槽2a～2d和上述开口部分(窗)9的情况下，可以以任意顺序形成。通过上述使用模具的方法等，上述4个液槽2a～2d和上述开口部分(窗)9全部同时形成时，工序少，是优选的。

接着，在上述基板1中嵌入上述4根毛细管。由此可以获得该例的微芯片电泳装置。

上述微芯片电泳装置还可以进一步具有多个电极。在图4中示出上述具有多个电极的该例的微芯片电泳装置。在该图中，与图3相同的部分标有相同符号。如图所示，该微芯片电泳装置具有4个电极6a～6d。将上述4个电极6a～6d分别嵌入上述基板1中，使其一端位于上述多个液槽2a～2d内。上述4个电极6a～6d，例如可以在制造上述基板1时在上述基板1侧面预先形成上述4个电极6a～6d的导入孔，从而容易地设置。另外，在上述微芯片电泳装置中，上述多个电极为任意的结构部件。还可以在例如上述微芯片电泳装置使用时将上述多个电极插入到上述多个液槽内。

上述多个电极6a～6d只要是能在电泳法中使用的电极，就可以是任意的物质。上述多个电极6a～6d例如分别为不锈钢(SUS)制电极、铂(Pt)电极、金(Au)电极等。

上述微芯片电泳装置还可以包括用于将含有血红蛋白等的试样溶血并稀释的前处理槽。前述含有血红蛋白的试样的溶血处理没有特别限制，例如，可以为通过溶血剂将上述含有血红蛋白的试样进行溶血的处理。上述溶血剂例如可以破坏上述含有血红蛋白的试样中的血细胞成分的细胞膜。作为上述溶血剂，可以列举例如上述运行缓冲液、皂甙、Nacalai Tesque，Inc.制造的商品名“Triton X-100”等，特别优选上述运行缓冲液。上述前处理槽优选例如与上述导入槽连通。上述前处理槽只要形成在与其连通的液槽、例如上述第2导入槽2c的附近等适当的地方即可。在具有上述前处理槽的情况下，将上述含有血红蛋白的试样导入上述前处理槽。由此经过前处理的上述含有血红蛋白的试样，通过连接上述前处理槽和与其连通的液槽、例如上述第2导入槽2c的流路，被导入上述第2导入槽2c中。上述前处理槽还可以是将用于使上述含有血红蛋白的试样溶血的槽和用于稀释上述含有血红蛋白的试样的槽这2个槽连通的结构。

上述微芯片电泳装置还可以具有分析部分。在图5中，示出具有上述分析部分的该例的微芯片电泳装置。在该图中，与图3和图4相同的部分标有相同符号。如图所示，该微芯片电泳装置具有分析部分7。在该例的微芯片电泳装置中，上述分析部分7是检测器(线检测器)。上述线检测器以位于从上述试样分析用的毛细管流路3x与上述试样导入用的毛细管流路3y的交叉部分的上述第1回收槽2b侧的方式直接设置在上述毛细管3x2上。在该微芯片电泳装置中，在基板1上除了设置用于嵌入上述4根毛细管的空洞以外，还设置用于嵌入上述分析部分(线检测器)7的空洞(未图示)。上述线检测器内设光源和检测部分。上述线检测器由上述光源向试样发出光并通过上述检测部分检测来自试样的反射光，从而测定吸光度。上述分析部分7并不限定于上述线检测器，例如，只要是能分析含有血红蛋白的试样的仪器，就可以任意使用。例如，上述分析部分7还可以由设置在上述微芯片电泳装置的下方的光源和设置在与上述线检测器的部位对应的位置的检测部分构成。在该情况下，通过由上述光源向试样发出光并由上述检测部分检测从试样透过的透射光，从而测定吸光度。

在图6中示出本发明微芯片电泳装置的另一例子。在该图中，与图5相同的部分标有相同符号。如图所示，该例的微芯片电泳装置除了分析部分7不同以外，具有与图5中所示微芯片电泳装置相同的结构。如该例所示，上述分析部分7还可以在1点上测定吸光度。

使用图5和6中所示的微芯片电泳装置的本发明的分析方法例如可以针对含有血红蛋白的试样，如下进行。

首先，在上述试样分析用的毛细管流路3x和上述试样导入用的毛细管流路3y中，通入提纯水进行洗涤。上述提纯水的通液时间和上述通液时的压力例如如上所述。接着，通过泵等施加压力，将包含硫酸软骨素等含有阴极性基团的多糖类的缓冲液通入上述试样分析用的毛细管流路3x和上述试样导入用的毛细管流路3y中。该通液时间和通液压力例如如上所述。接着，在上述试样分析用的毛细管流路3x和上述试样导入用的毛细管流路3y中，通过压力或毛细管作用填充上述运行缓冲液。

另外，在微芯片电泳装置不使用时(不分析时)，如果预先完成上述运行缓冲液的填充工序，则可以省略上述各工序，直接进行以下工序，故优选。

接着，向上述第2导入槽2c中导入含有血红蛋白的试样。作为上述含有血红蛋白的试样，如上所述。在微芯片电泳装置具有上述前处理槽(未图示)的情况下，向上述前处理槽中导入上述含有血红蛋白的试样，在此处进行前处理。接着，对上述电极6c和上述电极6d施加电压，在上述试样导入用的毛细管流路3y的两端产生电位差。由此，在上述试样导入用的毛细管流路3y中导入上述含有血红蛋白的试样。被导入的血红蛋白与上述运行缓冲液中的含有阴极性基团的多糖类结合而形成复合物。通过施加电压，从而在上述试样导入用毛细管流路3y内的运行缓冲液中产生电渗流，上述复合物移动至上述试样分析用的毛细管流路3x与上述试样导入用的毛细管流路3y的交叉部分。

上述电极6c和上述电极6d之间的电位差例如在0.5～5kV的范围内。

接着，对上述电极6a和上述电极6b施加电压，在上述试样分析用的毛细管流路3x的两端产生电位差。由此，通过将两端具有电位差的毛细管流路由上述试样导入用的毛细管流路3y瞬间切换为上述试样分析用的毛细管流路3x，从而如图5和6中箭头所示，将上述试样8从上述试样分析用的毛细管流路3x与上述试样导入用的毛细管流路3y的交叉部分向上述第1回收槽2b侧移动。

上述电极6a和上述电极6b之间的电位差例如在0.5～5kV的范围内。

接着，通过上述检测器7，对由于移动速度之差而分离的上述含有血红蛋白的试样中的各成分进行检测。由此，可以将上述含有血红蛋白的试样中的各成分分离来进行分析。

实施例

以下，对本发明的实施例进行说明。

(实施例1)

制备在内壁具有通过共价键固定具有磺基的甲硅烷基化剂而形成的阴极性层的熔融二氧化硅制的毛细管(全长32cm、有效长度8.5cm、内径50μm)。在该毛细管中，以0.1MPa(1000mbar)的压力通入提纯水20分钟，洗涤。接着，在100mM苹果酸和精氨酸水溶液中，以0.5重量％的比例添加硫酸软骨素，制备运行缓冲液(pH5.5)。以与上述相同的压力将该运行缓冲液通入上述毛细管内。在上述毛细管内填充有运行缓冲液的状态下，向上述毛细管内注入由血红蛋白溶解于提纯水中得到的试样，在上述毛细管的两端施加10kV的电压进行电泳。上述含有血红蛋白的试样的注入是从上述毛细管的阳极侧进行。以415nm的吸光度检测移动的血红蛋白。其结果在图1的图表中示出。如图所示，在本实施例中，可以将正常血红蛋白(HbA0)和糖化血红蛋白(HbAlc)分离并检测。此外，本实施例中使用的毛细管在洗涤后可以立即进行分析。

(实施例2)

除了使用在内壁具有通过共价键固定具有羧基的甲硅烷基化剂而形成的阴极性层的熔融二氧化硅制的毛细管(全长32cm、有效长度8.5cm、内径50μm)以外，与实施例1同样进行毛细管电泳，分析血红蛋白。其结果在图2的图表中示出。如图所示，在本实施例中，可以将正常血红蛋白(HbA0)和糖化血红蛋白(HbAlc)分离并检测。此外，本实施例中使用的毛细管可以在洗涤后立即进行分析。

工业上的可利用性

如上所述，根据本发明，通过毛细管电泳法，可以容易且高精度地进行血红蛋白等的试样分析。而且，本发明由于采用毛细管电泳法，因此还可以使分析装置小型化。本发明可以在临床检查、生化检查、医学研究等分析血红蛋白等试样的所有领域中适用，对其用途没有限定，可以在广泛的领域中使用。

Claims

1.一种分析方法，其特征在于，其是通过毛细管电泳法分析试样的方法，该方法包括：

准备所述毛细管电泳法中使用的毛细管的工序，和

在所述毛细管中，使试样与含有阴极性基团的化合物结合而成的复合物进行电泳的工序，其中，与所述试样形成复合物的所述含有阴极性基团的化合物是含有阴极性基团的多糖类，

所述毛细管是在所述毛细管内壁层叠有由含有阴极性基团的化合物形成的阴极性层的毛细管，所述阴极性层通过共价键固定在所述毛细管内壁，其中，在形成所述阴极性层的所述含有阴极性基团的化合物中，所述阴极性基团是磺基和羧基中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其中，在所述毛细管中，在包含含有阴极性基团的化合物的运行缓冲液中添加试样，接着，在毛细管的两端施加电压，使试样与含有阴极性基团的化合物的复合物进行电泳。

3.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述含有阴极性基团的多糖类是选自由硫酸化多糖类、羧酸化多糖类、磺酸化多糖类和磷酸化多糖类所组成的组中的至少一种多糖类。

4.根据权利要求3所述的分析方法，其中，所述硫酸化多糖类是硫酸软骨素。

5.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述试样是含有血红蛋白的试样。

6.一种毛细管，其特征在于，其是在权利要求1的分析方法中使用的毛细管电泳用的毛细管，其中，在所述毛细管内壁，层叠有由含有阴极性基团的化合物形成的阴极性层，所述阴极性层通过共价键固定在所述毛细管内壁，其中，与所述试样形成复合物的所述含有阴极性基团的化合物是含有阴极性基团的多糖类，并且其中，在形成所述阴极性层的所述含有阴极性基团的化合物中，所述阴极性基团是磺基和羧基中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的毛细管，其中，所述含有阴极性基团的多糖类是选自由硫酸化多糖类、羧酸化多糖类、磺酸化多糖类和磷酸化多糖类所组成的组中的至少一种多糖类。

8.根据权利要求7所述的毛细管，其中，所述硫酸化多糖类是硫酸软骨素。

9.一种毛细管电泳装置，其特征在于，其是在权利要求1所述的分析方法中使用的毛细管电泳装置，包含权利要求6所述的毛细管。

10.根据权利要求9所述的毛细管电泳装置，其包含基板、多个液槽和毛细管，在所述基板上形成有所述多个液槽，所述多个液槽通过所述毛细管连通，所述毛细管是权利要求6所述的毛细管。

11.根据权利要求10所述的毛细管电泳装置，其中，所述基板的最大长度在10～100mm的范围内，所述基板的最大宽度在10～60mm的范围内，所述基板的最大厚度在0.3～5mm的范围内。