CN101486743B - 具有抗老年痴呆症作用的新环烯醚萜类化合物 - Google Patents

Abstract

具有抗老年痴呆症作用的新环烯醚萜类化合物本发明公开了一系列具有结构通式(I)的环烯醚萜类化合物，所述化合物在制备用于预防或治疗老年痴呆症等神经系统退行性疾病的药物中的用途，包含所述化合物的药物组合物，以及制备所述化合物的方法。

Description

具有抗老年痴呆症作用的新环烯醚萜类化合物

技术领域

本发明涉及一系列环烯醚萜类化合物在防止老年痴呆症等神经退行性疾病中的应用。分别以栀子和玄参为原料，通过多种分离方法得到一系列环烯醚萜类化合物，以转基因果蝇为模型进行抗老年痴呆药的活性筛选，结果表明，这些化合物能有效地提高老年痴呆转基因果蝇的学习记忆能力，表明这些化合物具有明显的治疗老年痴呆症等神经系统退行性疾病的作用和良好的研究开发前景。

发明背景

老年痴呆症是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病^[1]。患者的生活质量低下，病程长且患病期间需要专人始终看护，加上患者情绪和行为贫乏的异常变化，给家属和社会造成极大的经济和心里负担^[1]。抗老年痴呆症药物的研制已引起全世界的高度重视。现在已建立了许多相关的生物活性筛选和评价体系，整体动物模型中的果蝇是人们最为熟知的模式生物之一。有着其他动物模型不能比拟的优势，如：个体空间占位极小(一般一个试剂瓶中可培养上千只果蝇)、饲养成本低、易培养、繁殖速度快且繁殖力强(筛选通量高)、样品消耗量少(5-50mg)、寿命周期短(约50天，活性测试周期短)、与年龄相关的神经元退化明显，是老年痴呆症等神经退行性疾病研究和药物筛选的理想模型^[3]。

环烯醚萜类化合物属单萜类化合物，广泛分布于玄参、栀子、杜仲、车前草、秦艽等双子叶植物中，由于其多样的药理活性备受研究者的关注。文献报道，京尼平苷酸对大鼠心脏有明显的负性肌力作用、负性变时作用及负性冠状动脉注率作用，提示环烯醚萜类化合物在心血管疾病的治疗中很可能发挥显著的作用^[4]。马鞭草属植物Verbenalittoralis中有一新的环烯醚萜苷类化合物gelsemiol-6’-trans-cageoyl-glucoside，对PC12D细胞实验显示，30μmol·L^-1的该化合物对神经生长因子(2ng·mL^-1)介导的PC12D细胞轴突生长有10％的增强作用^[5]。从北玄参Scrophularia buergerianaMiquel的根中提取的4个新的环烯醚萜苷：8-O-E-p-甲氧基肉桂酰哈帕苷、8-O-Z-p-甲氧基肉桂酰哈帕苷、6’-O-E-p-甲氧基肉桂酰哈帕苷和6’-O-Z-p-甲氧基肉桂酰哈帕苷，均显著阻止乳酸脱氢酶(LDH)的释放，起到神经保护作用^[6]。沿海马鞭草种也发现了具有促进神经生长因子活性的环烯醚萜类化合物。近期有研究报道以栀子组方的黄连解毒汤(黄连、黄柏、黄芩、栀子)具有抗老年痴呆的作用^[7，8]，但是黄连解毒汤抗老年痴呆的活性物质尚不清楚，有待进一步研究。基于前人的研究和完备的筛选体系，我们对栀子和玄参等植物进行了抗老年痴呆活性先导或合物的研究，发现了一系列具有显著活性的环烯醚萜类化合物。

[1]陈奇中药药效研究思路与方法北京：人民卫生出版社2005

[2]韩济生神经科学原理北京：北京医科大学出版社1999

[3]Rubin GM等人.Comparative genomics of the eukaryotes.Science2000，287(5461)，2204-2215

[4]董娟娥张靖植物中环烯醚萜类化合物的研究进展西北林学院学报2004，19(3)，131-135

[5]段静雨马鞭草属植物Verbena littoralis中一新的环烯醚萜苷类患合物寄去对神经生长因子的增强活性国外医药植物分册，2004，19(5)：207

[6]Kim S R，Koo K A，Sung S H，et al，Iridoids from Scrphulariabuergeriana attenuate glutamate-include neurotoxicity in rat corticalcultures[J].J Neurosci Res，2003，74(6)：948-955

[7]邢秀吉  老年痴呆症研究现状及中医治疗对策  福建中医学院学报2002，12(1)，58-60

[8]陈建鸿，等益气解毒法治疗老年性痴呆的临床研究  福建中医学院学报 2006，16(5)，7-8

发明概述

本发明涉及通式(I)所示的环烯醚萜类化合物

通式(I)

或其可药用盐

其中：

3-4位、6-7位和7-8位为双键或单键。

R₁为H、OH、OCH₃、直链糖基或支链糖基，所述糖基选自葡萄糖基、半乳糖基、甘露糖基、阿拉伯糖基、木糖基、核糖基、来苏糖基和夫糖基，所述糖基的糖链中的羟基任选被选自下列的酰化基团酰化：CH₃(CH₂)_nCO、HOOC(CH₂)_nCO、苯甲酰基、苯乙酰基、苯丙酰基、杂环甲酰基、杂环乙酰基和杂环丙酰基，所述杂环选自吡喃、噻喃、吡啶、嘧啶、吡嗪、三嗪、哒嗪、嗪和异

嗪，其中所述苯环和杂环可任选被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基和烷氧基的取代基取代，n＝0、1、2、3、4、5或6；

R₃、R₇和R₈独立地为H、CH₃、CHO、COOCH₃、COOH、CH₂OH、OH、直链糖基或支链糖基，所述糖基选自葡萄糖基、半乳糖基、甘露糖基、阿拉伯糖基、木糖基、核糖基、来苏糖基和夫糖基，所述糖基的糖链中的羟基任选被选自下列的酰化基团酰化：CH₃(CH₂)_nCO、HOOC(CH₂)_nCO、苯甲酰基、苯乙酰基、苯丙酰基、杂环甲酰基、杂环乙酰基和杂环丙酰基，所述杂环选自吡喃、噻喃、吡啶、嘧啶、吡嗪、三嗪、哒嗪、

嗪和异

嗪，其中所述苯环和杂环可任选被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基和烷氧基的取代基取代，n＝0、1、2、3、4、5或6；

R₂、R₄、R₅和R₆独立地为H、OCH₃、OH、直链糖基或支链糖基，所述糖基选自葡萄糖基、半乳糖基、甘露糖基、阿拉伯糖基、木糖基、核糖基、来苏糖基和夫糖基，所述糖基的糖链中的羟基任选被选自下列的酰化基团酰化：CH₃(CH₂)_nCO、HOOC(CH₂)_nCO、苯甲酰基、苯乙酰基、苯丙酰基、杂环甲酰基、杂环乙酰基和杂环丙酰基，所述杂环选自吡喃、噻喃、吡啶、嘧啶、吡嗪、三嗪、哒嗪、

嗪和异

嗪，其中所述苯环和杂环可任选被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基和烷氧基的取代基取代，n＝0、1、2、3、4、5或6；

或者在6位与7位和/或7位与8位间存在三元氧环，

条件是，所述通式(I)化合物不包括以下化合物：

和

在优选的实施方案中，在通式(I)中，3-4位为双键，R₂、R₃和R₆均为氢，R₄和R₅均为羟基，且R₈为甲基。

在一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个优选的实施方案中，在通式(I)中，3-4位和7-8位均为双键，R₂、R₄、R₅、R₆和R₈均为氢，且R₃为COOCH₃。

在一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个更优选的实施方案中，所述化合物是

本发明还涉及通式(I)所示的环烯醚萜类化合物或其可药用盐在制备用于预防或治疗神经退行性疾病的药物中的用途：

通式(I)

其中：

3-4位、6-7位和7-8位为双键或单键。

R₁为H、OH、OCH₃、直链糖基或支链糖基，所述糖基选自葡萄糖基、半乳糖基、甘露糖基、阿拉伯糖基、木糖基、核糖基、来苏糖基和夫糖基，所述糖基的糖链中的羟基任选被选自下列的酰化基团酰化：CH₃(CH₂)_nCO、HOOC(CH₂)_nCO、苯甲酰基、苯乙酰基、苯丙酰基、杂环甲酰基、杂环乙酰基和杂环丙酰基，所述杂环选自吡喃、噻喃、吡啶、嘧啶、吡嗪、三嗪、哒嗪、

嗪和异嗪，其中所述苯环和杂环可任选被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基和烷氧基的取代基取代，n＝0、1、2、3、4、5或6；

R₃、R₇和R₈独立地为H、CH₃、CHO、COOCH₃、COOH、CH₂OH、OH、直链糖基或支链糖基，所述糖基选自葡萄糖基、半乳糖基、甘露糖基、阿拉伯糖基、木糖基、核糖基、来苏糖基和夫糖基，所述糖基的糖链中的羟基任选被选自下列的酰化基团酰化：CH₃(CH₂)_nCO、HOOC(CH₂)_nCO、苯甲酰基、苯乙酰基、苯丙酰基、杂环甲酰基、杂环乙酰基和杂环丙酰基，所述杂环选自吡喃、噻喃、吡啶、嘧啶、吡嗪、三嗪、哒嗪、

嗪和异

嗪，其中所述苯环和杂环可任选被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基和烷氧基的取代基取代，n＝0、1、2、3、4、5或6；

R₂、R₄、R₅和R₆独立地为H、OCH₃、OH、直链糖基或支链糖基，所述糖基选自葡萄糖基、半乳糖基、甘露糖基、阿拉伯糖基、木糖基、核糖基、来苏糖基和夫糖基，所述糖基的糖链中的羟基任选被选自下列的酰化基团酰化：CH₃(CH₂)_nCO、HOOC(CH₂)_n CO、苯甲酰基、苯乙酰基、苯丙酰基、杂环甲酰基、杂环乙酰基和杂环丙酰基，所述杂环选自吡喃、噻喃、吡啶、嘧啶、吡嗪、三嗪、哒嗪、嗪和异

嗪，其中所述苯环和杂环可任选被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基和烷氧基的取代基取代，n＝0、1、2、3、4、5或6；

或者在6位与7位和/或7位与8位间存在三元氧环。

在一个优选的实施方案中，所述神经退行性疾病是血管性痴呆、血管性认知障碍、老年痴呆症、记忆力减退、脑组织退行性病变症候群或胆碱能神经退行性病变。

在一个优选的实施方案中，在通式(I)中，3-4位和7-8位均为双键，R₂、R₄、R₅、R₆和R₈均为氢，且R₃为COOCH₃。

在一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在一个优选的实施方案中，在通式(I)中，3-4位和7-8位均为双键，R₂、R₄、R₅、R₆和R₈均为氢，且R₃为COOCH₃。

在一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个更优选的实施方案中，所述化合物是

在另一个实施方案中，所述化合物选自

和

本发明还涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含如上所述的通式(I)的环烯醚萜类化合物与可药用载体。

本发明还涉及制备如上所述的通式(I)的环烯醚萜类化合物的方法，所述方法包括采用中药玄参和栀子作为原料，用溶剂进行提取并且进行分离。

所述溶剂优选为有机溶剂和/或水。所述有机溶剂优选为低级醇。优选地，所述低级醇选自甲醇和乙醇。所述有机溶剂也可以选自丙酮和乙酸乙酯。

所述分离优选通过层析法和/或萃取法来进行。

发明详述

本发明涉及一系列环烯醚萜类化合物及其中任意一种或一种以上化合物构成的组合物在拮抗和防治老年痴呆症等神经系统退行性疾病中的应用。

发明者通过多种化学手段从中药玄参和栀子中得到了一系列环烯醚萜类化合物(由以下通式I表示)，并通过转基因果蝇活性筛选体系证明了其预防/治疗老年痴呆症的作用。

通式(I)

其中各基团的定义如前文所述。

第一组优选的化合物，其中3，4位间存在双键，R₂，R₃，R₆均为氢，R₄，R₅，羟基，R₈为甲基。

优选R₁为O-β-D-Glu-6-O-caffeoyl，R₇为OH，化学名为6”-O-咖啡酰基哈帕苷(6”-O-caffeoylharpagide)的新化合物，简称(SN-1)。

优选R₁为O-β-D-Glu-6-O-feruloyl，R₇为OH，化学名为6”-O-阿魏酰基哈帕苷(6”-O-feruloyl harpagide)的新化合物，简称(SN-2)。

优选R₁为O-β-D-Glu-6-O-β-D-Glu，R₇为O-cinnamoyl，化学名为6”-O-β-D-吡喃葡萄基哈帕俄苷(6”-O-β-glucopyranosylharpagoside)的新化合物，简称(SN-3)。

优选R₁为O-β-D-Glu-6-O-α-D-Glu，R₇为O-cinnamoyl，化学名为6”-O-α-D-吡喃葡萄基哈帕俄苷(6”-O-α-glucopyranosylharpagoside)的新化合物，简称(SN-4)。

第二组优选的化合物，其中3和4位，7和8位间存在双键，R₂，R₄，R₅，R₆，R₈均为氢，R₃为COOCH₃。

优选R₁为O-β-D-Glu，R₇为CH₂OCOCH₂CH₂COOH，化学名为丁二酸单京尼平苷酯(geniposide 10-succinate)的新化合物，简称(GJ-1)。

优选R₁为O-β-D-Glu-6-O-sinapoyl，R₇为CH₂OH，化学名为6’-O-芥子酰基京尼平苷(6’-O-sinapoyl geniposide)的新化合物，简称(GJ-2)。

优选R₁为O-β-D-Glu-6-O-p-hydroxy cinnamoyl，R₇为CH₂OH，化学名6’-O-对羟基桂皮酰基京尼平苷(6’-O-p-hydroxy cinnamoyl geniposide)的新化合物，简称(GJ-3)。

优选R₁为O-β-D-Glu-6-O-Ac，R₇为CH₂OH，化学名6’-乙酰基京尼平苷(6’-acetyl geniposide)的新化合物，简称(GJ-4)。

此外，在通式(I)范围内的以下化合物是已知的：

简称

化合物结构式

本发明所提供的化合物，具有显著的改善转基因老年痴呆果蝇学习记忆的作用，可用于包括血管性痴呆、血管性认知障碍，老年痴呆症(又称为阿尔茨海默症)，胆碱能神经退行病变，学习记忆能力减退等神经系统退行性疾病的预防和治疗。

上述的环烯醚萜化合物通式I，包括所优选的任何一个化合物应用于老年痴呆等神经退行性疾病的预防和治疗。并且，可用上述的化合物组成组合物，任何一种或一种以上，与药学意义上可用的各种辅料，制成各种制剂和剂型应用于预防和治疗老年痴呆症等神经退行性疾病。

具体说，本发明中提供的环烯醚萜化合物是从中药玄参和栀子中提取分离得到的。用于提取的溶剂可采用通常用于植物提取的溶剂，例如，可单独或组合使用甲醇、乙醇等低级醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂及水。提取的方法可采用常规方法，一般提取温度为20-100℃，总提取时间可1-48小时，可采用热提取或冷提取。所得提取物经过减压浓缩的到浸膏。总浸膏可通过多种化学方法，如柱层析法、萃取法等多种方法富集得到总环烯醚萜苷。随后，采用多种分离手段分离精制得到单体环烯醚萜化合物。

本发明的结果是提供了具有预防/治疗老年痴呆病等神经推行性疾病作用的总环烯醚萜苷、单体化合物及其组合物。

在本申请说明书和权利要求书中使用的术语“可药用盐”是指其中母体化合物通过形成其酸或者碱盐而得到修饰的衍生物。可药用盐的实例包括但不限于，碱性残基(比如胺)的无机或者有机酸盐；酸性残基(比如羧酸)的碱金属或者有机盐；等等。可药用盐包括母体化合物形成的常规无毒盐或者季铵盐，例如，由无毒无机酸或者有机酸形成的盐。例如，所述常规的无毒盐包括由无机酸得到的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、胺磺酸盐、磷酸盐和硝酸盐等等；以及由有机酸制备的盐，例如醋酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、乙醇酸盐、硬脂酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、双羟萘酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、苯基马来酸盐、谷氨酸盐、安息香酸盐、水杨酸盐、磺胺酸盐、2-乙酰氧基-安息香酸盐、富马酸盐、甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙基二磺酸盐、草酸盐和羟乙磺酸盐等等。

当本发明化合物为碱性时，所述盐可以由可药用无毒酸进行制备，包括无机或者有机酸。所述酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸和对甲苯磺酸等等。在本发明的一方面中，所述盐为柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸、富马酸和酒石酸盐。应当理解，如本文中所应用，对通式(I)化合物的参照还意指包括可药用盐。

在本申请说明书和权利要求书中使用的术语烷氧基优选是C₁-C₆烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等等。

在本申请说明书和权利要求书中使用的术语“组合物”意指包括含有特定量的特定成分的产品，以及任何由指定量的指定成分组合直接或者间接得到的产品。涉及药物组合物的该术语意指包括含有活性成分和组成载体的惰性成分的产品，以及任何由组合、配合或者聚集任何两种或更多种成分、分解一种或多种成分、或者由一种或多种成分的其它类型反应或相互作用直接或者间接得到的产品。据此，本发明的药物组合物包括任何通过混合本发明化合物和可药用载体而制备的组合物。“可药用”意指载体、稀释剂或者赋形剂必须与其它制剂成分相容并且对其受者无害。

本发明化合物可以通过口服、胃肠外(例如，肌内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射或者输注、皮下注射或者植入)、通过吸入喷雾剂、经鼻、阴道、直肠、舌下或者局部给药途径给药，并且可以将它们单独或者一起配制成含有适用于各种给药途径的常规无毒可药用载体、助剂和赋形剂的适宜剂量单元制剂。

用于给药本发明化合物的药物组合物可以适宜地以剂量单元形式存在，并且可以通过药学领域任何熟知的方法进行制备。所有方法都包括使活性成分与包括一种或者多种可药用载体混合的步骤。通常，药物组合物通过以下方式进行制备：使活性成分与液体载体或者细碎的固体载体或者二者均匀和密切混合，和然后，如果必要，将产品成形为期望的制剂。在药物组合物中，所述活性成分以足以对疾病过程或者症状产生预期效果的量包含在其中。在本文中使用的术语“组合物”意图包括含有指定量的指定成分的产品，以及任何由指定量的指定成分组合直接或者间接得到的产品。

含有活性成分的药物组合物可以为适用于口服应用的形式，例如，为片剂、药片、锭剂、含水或者含油混悬剂、可分散性粉剂或者粒剂、乳剂、液剂、硬胶囊或者软胶囊、或者糖浆剂或者酏剂。设计用于口服应用的组合物可以根据制造药物组合物领域熟知的任何方法进行制备，并且为了提供药学上精美并且可口的制剂，所述组合物可以含有一种或者多种选自甜味剂、增香剂、着色剂和防腐剂的试剂。片剂含有与适用于制造片剂的无毒可药用赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂可以为，例如，惰性稀释剂，比如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或者磷酸钠；粒化和崩解剂，例如玉米淀粉或者藻酸；粘合剂，例如淀粉、凝胶或者阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或者滑石。所述片剂可以未经包衣或者它们可以通过已知工艺进行包衣以延迟崩解和吸收在胃肠道内，从而提供较长时间内的持续作用。例如，可以使用延时材料，比如单硬脂酸甘油酯或者二硬脂酸甘油酯。它们还可以进行包衣，从而形成用于控释的渗透治疗学片剂。还可以将口服片剂配制用于速释，比如致密融化片剂或者干胶片、快速溶解片剂或者致密溶解膜剂。

用于口服应用的制剂还可以作为硬胶囊存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或者高岭土)混合，或者作为软胶囊存在，其中活性成分与含水或者含油介质(例如花生油、液体石蜡或者橄榄油)混合。

含水混悬剂含有与适用于制造含水混悬剂的无毒可药用赋形剂混合的活性物质。所述赋形剂为助悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟基-丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍树胶和阿拉伯树胶；分散或者润湿剂可以是天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、或者氧化烯与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、或者乙烯化氧与长链脂族醇的缩合产物(例如十七烷乙烯氧基十六醇)、或者乙烯化氧与源于脂肪酸和己糖醇的偏酸的缩合产物(比如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)或者乙烯化氧与源于脂肪酸的偏酯和己糖醇酸酐的缩合产物(例如聚乙烯单油酸山梨醇酐酯)。所述含水混悬剂还可以含有一种或者多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或者对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或者多种着色剂、一种或者多种增香剂和一种或者多种甜味剂(比如蔗糖或者糖精)。

含油混悬剂可以通过将活性成分悬浮在植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或者椰子油)中或者悬浮在矿物油(比如液体石蜡)中进行制备。所述含油混悬剂可以含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或者鲸蜡醇。可以将比如如上所述的那些甜味剂和增香剂加入其中，从而提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂(比如抗坏血酸)得到保持。

适用于制备含水混悬剂的可分散性粉剂和粒剂通过加入水，提供了与分散剂或者润湿剂、助悬剂和一种或者多种防腐剂混合的活性成分。适宜的分散剂或者润湿剂和助悬剂为上述例证说明的那些试剂。其中还可以存在其它赋形剂(例如甜味剂、增香剂和着色剂)。

本发明药物组合物还可以为水包油乳化剂形式。所述油相可以为植物油(例如橄榄油或者花生油)或者矿物油(例如液体石蜡)或者它们的混合物。适宜的乳化剂可以为天然存在的树胶(例如阿拉伯树胶或者黄蓍树胶)、天然存在的磷脂(例如大豆、卵磷脂)和源于脂肪酸与己糖醇酸酐的酯或者偏酯(例如单油酸山梨醇酐酯)以及所述偏酯与乙烯化氧的缩合产物(例如聚氧乙烯单油酸山梨醇酐酯)。所述乳剂还可以含有甜味剂或者增香剂。

糖浆剂和酏剂可以利用甜味剂(例如，甘油、丙二醇、山梨醇或者蔗糖)进行配制。所述制剂还可以含有润湿剂、防腐剂和增香剂以及着色剂。

药物组合物可以为无菌可注射含水或者含油混悬剂的形式。所述混悬剂可以根据本领域熟知的工艺，利用上述适宜的分散剂或者润湿剂和助悬剂进行配制。所述可注射的无菌制剂还可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或者溶剂中的可注射无菌溶液或者悬浮液，例如为1，3-丁二醇溶液。在可接受的赋形剂和溶剂中，可以使用的为水、生理盐水和等渗氯化钠溶液。此外，通常将无菌、固定油类用作溶剂或者悬浮介质。基于上述目的，任何无味的固定油都可以使用，包括合成单或者甘油二酯。此外，在可注射制剂中可以应用比如油酸的脂肪酸。

本发明化合物还可以为用于直肠给药药物的栓剂形式。这些组合物可以通过将药物与在常温下为固体但是在直肠温度下为液体并且由此将在直肠中熔化从而释放药物的适宜无刺激性赋形剂混合得到制备。所述物质为可可脂和聚乙二醇。

对于局部应用，可以使用含有本发明化合物的乳膏剂、膏剂、胶状物、液剂或者混悬剂等等。类似地，透皮贴片也可以用于局部给药。

提供下列实施例来进一步举例说明本发明，但这不是对本发明的限制。

实施例

实施例1

第一部分：玄参中环烯醚萜类化合物的提取分离

取玄参科植物玄参(Scrophularia ningpoensis Hemsl)干燥根18kg，用60％乙醇加热回流提取，浓缩提取物，分别采用乙酸乙酯，正丁醇进行等体积萃取3次，正丁醇萃取部分通过D101大孔树脂柱，用水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇进行梯度洗脱。50％乙醇洗脱部分50.2g经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇95∶5-70∶30梯度洗脱，得到SN-9(14g)；将子馏分Fr.1-Fr.7(3.9g)，经ODS柱，甲醇-水40∶60洗脱，再经过反向HPLC，甲醇-水35∶65洗脱，得到SN-2(117.1mg)，SN-6(17.9mg)，SN-7(10.1mg)，SN-8(28.2mg)，子馏分Fr.5(6.1g)经反向HPLC，甲醇-水50∶50洗脱，得到化合物SN-3(237.6mg)，SN-4(110.1mg)，SN-5(13.0mg)。30％乙醇洗脱部分51.4g经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇90∶10-60∶40梯度洗脱，子馏分Fr.4(13g)经ODS反向柱色谱，甲醇-水20∶80-60∶40梯度洗脱，再经过HPLC纯化，甲醇-水25∶75洗脱，得到SN-1(27.2mg)。子馏分Fr.6(5.6g)，经ODS反向柱色谱，甲醇-水20∶80-60∶40梯度洗脱，再经过HPLC纯化，甲醇-水25∶75洗脱，得到SN-10(21.7mg)。

所获得的各化合物的纯度以及量如下表A所示：

表A

No.   编号    纯度    重量           结构

1^*    SN-1    95％    27.2mg

2^*    SN-2    95％    117.1mg

3^*    SN-3    95％    237.6mg

4^*    SN-4    95％    110.1mg

5     SN-5    95％    13.0mg

6    SN-6    95％    17.9mg

7    SN-7    95％    10.1mg

8    SN-8    95％    28.2mg

9    SN-9    90％    14g   

10   SN-10   75％    21.7mg

注：有^*号者为新化合物

所获得的各化合物的物理化学常数如下：

化合物SN-1(6″-O-咖啡酰基哈帕苷)：浅棕色不定型粉末，[α]_D ²⁶-37.6°(c＝1.0，MeOH)。Molish和FeCl₃反应均为阳性。UV(MeOH)λ_max nm(logε)：203(2.56)，227(2.48)，312(2.60)；IR(KBr)cm^-1：3394(OH)，1605，1520(phenyl nucleus)。HR-ESI-MS：m/z549.1592[M+Na]⁺(Calcd for：549.1584)，确认化合物SN-1的分子式为C₂₄H₃₀O₁₃。¹³C及¹H NMR数据见表1。

化合物SN-2(6″-O-阿魏酰基哈帕苷)：浅棕色不定型粉末。Molish和FeCl₃反应均为阳性。[α]_D ²⁶-35.2°(MeOH，c＝1.0)；UV(MeOH)λ_maxnm(logε)：204(2.58)，235(2.48)，325(2.61)；IR(KBr)cm^-1：3417(OH)，1601，1516(phenyl nucleus)。HR-ESI-MS：m/z 563.1752[M+Na]⁺(Calcdfor：563.1741)，确认化合物SN-2的分子式为C₂₅H₃₂O₁₃。¹³C及¹H NMR数据见表1。

化合物SN-3(6″-O-β-D-吡喃葡萄基哈帕俄苷)：浅棕色不定型粉末。Molish反应阳性。[α]_D ²⁶-81.6°(c＝1.0，MeOH)；UV(MeOH)λ_maxnm(logε)：206(2.16)，281(1.50)，325(1.18)；IR(KBr)cm^-1：3337(OH)，1635，1516(phenyl nucleus)。HR-ESI-MS：m/z679.2192[M+Na]⁺(Calcdfor：679.2214)，确认化合物SN-3的分子式为C₂₆H₄₀O₁₆。¹³C及¹H NMR数据见表2。

化合物SN-4(6″-O-α-D-吡喃葡萄基哈帕俄苷)：浅棕色不定型粉末。Molish反应阳型。[α]_D ²⁶-82.3°(c＝1.0，MeOH)；IR(KBr)cm^-1：3421(OH)，1700(-C＝O)，1508，1454(phenyl nucleus)。HR-ESI-MS：m/z679.2164[M+Na]⁺(Calcd for：679.2214)，确认化合物SN-4的分子式为C₂₆H₄₀O₁₆。¹³C及¹H NMR数据见表2。

化合物SN-5(6″-O-α-D-吡喃半乳糖基哈帕苷)：浅棕色不定型粉末。Molish反应阳性。ESI-MS：m/z 679[M+Na]⁺，655[M-H]^-，提示化合物SN-5的分子量为656。¹³C及¹H NMR数据见表2。

化合物SN-6(6″-O-对羟基肉桂酰基哈帕苷)：浅棕色不定型粉末，Molish和FeCl₃反应均为阳性。ESI-MS：m/z533[M+Na]⁺，519[M-H]^-，提示化合物SN-6的分子量为520。¹³C及¹H NMR数据见表3。

化合物SN-7(8-O-对羟基肉酰基哈帕苷)：浅棕色不定型粉末，Molish和FeCl₃反应均为阳性。ESI-MS：m/z533[M+Na]⁺，519[M-H]^-，提示化合物SN-7的分子量为520。¹³C及¹H NMR数据见表3。

化合物SN-8(8-O-阿魏酰基哈帕苷)：浅棕色不定型粉末，Molish和FeCl₃反应均为阳性。ESI-MS：m/z563[M+Na]⁺，539[M-H]^-，提示化合物SN-8的分子量为540。¹³C及¹H NMR数据见表3。

化合物SN-9(哈帕俄苷)：浅棕色不定型粉末，Molish和反应阳性。ESI-MS：m/z517[M+Na]⁺，493[M-H]^-，提示化合物SN-9的分子量为494。¹³C及¹H NMR数据见表4。

化合物SN-10(哈帕苷)：白色不定型粉末，Molish反应阳性。ESI-MS：m/z 387[M+Na]⁺，363[M-H]^-，提示化合物SN-10的分子量为364。¹³C及¹H NMR数据见表

表1：化合物SN-1和SN-2的NMR数据(400和100MHz，CD₃OD)

No.	1		2
					δH，J(Hz)	δc	δH，J(Hz)	δc
	123456789101’2’3’4’5’6’αβ-C＝O1”2”3”4”5”6”	5.65，d(1.2)6.32，d(6.4)4.93，dd(6.4，1.4)3.67，t(3.9)1.85，dd(13.7，4.6)；1.75dd(13.8，3.0)2.54，s1.18，s7.03，d(2.0)6.76，d(8.2)6.93，dd(8.2，2.0)6.28，d(15.9)7.56，d(15.9)4.59，d(7.9)3.25，t(8.9)3.39，t(7.4)3.40，t(7.4)3.56，m4.48，dd(12.0 2.1)4.35，dd(12.0，5.8)	93.1142.5108.472.878.346.978.459.525.0127.7115.2146.8149.6116.5123.1114.8147.2169.199.274.477.471.775.764.5	5.65，d(1.2)6.30，d(6.4)4.93，dd(6.4，1.5)3.67，t(3.9)1.84，dd(13.7，4.6)1.73dd(13.7 3.2)2.54，s1.17，s7.16，d(1.9)6.79，d(8.2)7.05，dd(8.2，1.9)6.38，d(15.9)7.62，d(15.9)4.59，d(7.9)3.24，t(9.0)3.41，t(6.2)3.40，t(6.2)3.55，m4.48，dd(12.0，2.2)；4.36，dd(12.0，5.8)					93.1142.5108.472.778.346.978.459.525.0127.6117.7149.3150.6116.5124.2115.2147.1169.199.274.477.471.775.664.5

表2：化合物SN-3，SN-4和SN-5的NMR数据(400和100MHz，CD₃OD)

No

3

4

5

δH，J(Hz)

δc

δH，J(Hz)

δc

δH，J(Hz)

δc

123456789101’2’3’4’5’6’αβ-C＝O-OCH31”2”3”4”5”6”1”2”3”4”5”6”

6.19，d(1.2)6.39，d(6.4)4.93，dd(6.4，1.6)3.74，t(3.4)2.24，d(15.1)1.99dd(15.1 4.4)2.92，s1.53，s7.58，m7.37，m7.39，m7.37，m7.58，m6.50，d(16.0)7.70，d(16.0)4.63，d(7.9)3.23，t(9.1)3.45，m3.38，t(7.4)3.55，m4.20，dd(12.0，1.8)；3.89，dd(12.0，6.5)4.59，d(7.9)3.23，t(9.1)3.41，m3.38，t(7.4)3.53 d(9.1)3.90，dd(12.0，2.3)3.68，dd(12.0，5.8)

94.3143.8107.073.677.746.388.555.422.9136.0129.2130.0131.3130.0129.2120.3146.0168.399.374.477.771.777.769.6104.675.477.771.777.762.8

6.19，d(1.2)6.39，d(6.4)4.93，dd(6.4，1.6)3.75，m2.24，d(15.1)1.98dd(15.1 4.4)2.92，s1.53，s7.60，m7.37，m7.39，m7.37，m7.60，m6.49，d(16.0)7.68，d(16.0)4.63，d(7.9)3.23，t(8.6)3.45，m3.38，m3.57，m3.96，m；3.85，m4.98，d(3.5)3.57，m3.40，t(6.2)3.36，m3.95m3.78，m

94.2143.8107.173.777.846.388.555.522.8136.0129.3130.0131.3130.0129.3120.4145.9168.299.374.577.871.776.867.8100.371.972.470.671.363.1

6.20，d(1.2)6.40，d(6.4)4.93，dd(6.4，2.0)3.74，m2.34，d(15.1)2.00Dd(15.1 4.4)2.93，s1.53，s7.59，m7.38，m7.38，m7.38，m7.59，m6.49，d(16.0)7.68，d(16.0)4.64，d(7.9)3.23，t(8.9)3.40，m

94.4143.8107.173.577.846.388.555.522.8136.0129.3130.0131.4130.0129.3120.2146.099.674.077.8

表3：化合物SN-6，SN-7和SN-8的NMR数据(400和100MHz，CD₃OD)

No.

6

7

8

δH，J(Hz)

δc

δH，J(Hz)

δc

δH，J(Hz)

δc

123456789101’2’3’4’5’6’αβ-C＝O-OCH31”2”3”4”5”6”

5.65，d(1.2)6.31，d(6.4)4.94，dd(6.4，1.4)3.66，t(3.9)1.85，dd(13.7，4.6)1.75dd(13.7，3.6)2.53，s1.17，s7.44，d(8.7)6.79，d(8.7)6.79，d(8.7)7.44，d(8.7)6.34，d(15.9)7.63，d(15.9)4.59，d(7.9)3.25，t(9.0)3.39，t(6.8)3.40，t(6.8)3.55，m4.48，dd(12.0 2.1)4.36，dd(12.0，5.8)

93.1142.5108.572.878.347.078.459.525.0127.1131.2116.9161.4116.9131.2114.9146.9169.199.274.577.471.775.764.5

6.16，d(1.2)6.40，d(6.4)4.92，dd(6.4，1.6)3.74，m2.24，d(15.2)2.00dd(15.2，4.6)2.92，s1.51，s7.44，d(8.7)6.79，d(8.7)6.79，d(8.7)7.44，d(8.7)6.29，d(16.0)7.58，d(16.0)4.61，d(7.9)3.21，t(8.9)3.32，m3.40，t(7.8)3.55，m3.90，dd(12.0 1.7)；3.73，dd(12.0 5.8)

94.7143.9106.973.477.746.388.455.622.7127.2131.1116.8161.2116.8131.1116.5146.3168.4100.074.678.271.877.663.0

6.17，d(1.2)6.39，d(6.4)4.92，dd(6.4，1.6)3.74，m2.24，d(15.2)2.00dd(15.2，4.5)2.92，s1.51，s7.16，d(1.9)6.80，d(8.2)7.05，dd(8.2，1.9)6.32，d(16.0)7.57，d(16.0)3.88，s4.61，d(7.9)3.21，t(9.0)3.33，m3.40，t(8.7)3.55，m3.92，dd(12.1 2.1)；3.70，dd(12.15.8)

94.7---143.9106.973.477.646.388.455.622.7127.8111.7149.4150.6116.5124.1116.8146.6169.356.5100.074.677.771.878.163.0

表4：化合物SN-9和SN-10的NMR数据(400和100MHz，CD₃OD)

No.	9		10
						δH，J(Hz)	δc	δH，J(Hz)	δc
123456789101’2’3’4’5’6’αβ-C＝O-OCH31”2”3”4”5”6”	6.17，d(1.2)6.40，d(6.4)4.93，dd(6.4，1.6)3.73，t(3.9)2.26，dd(13.7，4.6)1.99dd(13.7，3.2)2.93，s1.52，s7.57，m7.38，m7.38，m7.38，m7.57，m6.48，d(16.0)7.64，d(16.0)4.59，d(7.9)3.24，t(9.0)3.41，t(7.2)3.40，t(7.2)3.55，dd(9.2，4.5)4.48，dd(12.0，2.2)4.36，dd(12.0，5.7)	94.6143.9106.873.478.146.288.755.622.6135.7130.0129.2131.5129.2130.0120.1146.1168.7100.074.577.771.777.663.0	5.72，d(1.1)6.30，d(6.4)4.93，dd(6.4，1.5)3.69，t(4.3)1.89，dd(13.6，4.8)1.78dd(13.6，1.0)2.53，s1.23，s4.56，d(8.0)3.21，t(8.9)3.34，m3.34，m3.36，m3.89，dd(11.7，1.5)3.66，dd(12.1，5.6)	93.2142.5108.472.478.247.278.159.624.999.474.578.371.777.562.8

第二部分：从玄参中分离的环烯醚萜类化合物抗老年痴呆作用测试

老年痴呆果蝇的培育

通过将携带有elav启动基因的亲本果蝇，和携带有Aβ42蛋白基因的亲本果蝇杂交，获得整合有elav启动基因和Aβ42蛋白基因的子代疾病果蝇。

老年痴呆果蝇的给药

试验设置健康蝇无药对照、疾病蝇无药对照和疾病蝇给不同的药三种组合。每种组合(健康蝇无药对照、疾病蝇无药对照、疾病蝇喂某一个药)有250只果蝇，分置于2个玻璃指瓶中(每个玻璃指瓶装125只果蝇)，每天先空腹2小时，然后在仍隔离食物的条件下给药40μl，强制喂药4小时(此时40μl的药已被吃尽)，最后再将吃完药的果蝇转移到有食物的玻璃指瓶中。喂药方法(专利申请号2005100117054)已经获得专利授权(专利名称：一种昆虫给药方法和装置及其在大规模药物筛选中的用途)。

每个药重复试验8组，喂药连续进行6天。

果蝇给药后记忆障碍修复效果评价

果蝇置于自动训练仪接受训练，训练时先后通入气味(1.5‰辛醇octanol，溶剂为二甲基硅油，发泡散发的气味)伴随电击(CS+)，然后通入另一种气味(1‰甲基环己醇methylcyclohexanol，溶剂为二甲基硅油)，但不伴随电击(CS-)，1个周期训练结束后立即检测其记忆，检测时将果蝇置于相对而吹的两种气味(1.5‰辛醇octanol和1‰甲基环己醇methylcyclohexanol，分别发泡散发的气味)中央，任其自由选择120秒，根据选择每种气味的果蝇数目计算出每次实验的学习记忆指数PI(Performance Index)，辛醇octanol伴随气味刺激产生的学习指数以PI_OCT表示，计算公式为PI_OCT＝{2[MCH/(OCT^*+MCH)]-1}*100

果蝇置于自动训练仪接受训练，训练时先后通入气味(1‰甲基环己醇methylcyclohexanol，溶剂为二甲基硅油)伴随电击(CS+)，然后通入另一种气味(1.5‰辛醇octanol，溶剂为二甲基硅油，发泡散发的气味)，但不伴随电击(CS-)，1个周期训练结束后立即检测其记忆，检测时将果蝇置于相对而吹的两种气味(1.5‰辛醇octanol和1‰甲基环己醇methylcyclohexanol，分别发泡散发的气味)中央，任其自由选择120秒，根据选择每种气味的果蝇数目计算出每次实验的学习记忆指数PI(Performance Index)，甲基环己醇methylcyclohexanol伴随气味刺激产生的学习指数以PI_MCH表示，计算公式为PI_MCH＝{2[OCT/(MCH^*+OCT)]-1}*100

最终结果以总学习记忆指数(PI_TOTAL)表示，计算公式为PI_TOTAL＝0.5(PI_MCH+PI_OCT)。

进行活性测试时，同时进行不喂药的同遗传背景健康蝇、不喂药的老年痴呆疾病蝇，喂测试药的老年痴呆疾病蝇的嗅觉短期记忆缺陷测试，分别计算它们的总学习记忆指数，将喂测试药的老年痴呆疾病蝇学习记忆指数与同遗传背景健康蝇学习记忆指数、老年痴呆疾病蝇学习记忆指数相比较，评价测试物抗老年痴呆的作用。喂食测试物的老年痴呆疾病蝇学习记忆指数相对越高则说明测试物抗老年痴呆作用越强。

采用T检验比较，喂食测试物的老年痴呆疾病蝇学习记忆指数，和不喂药(仅给不含药样品的溶剂)的老年痴呆疾病蝇学习记忆指数，P小于0.05为有差别，P小于0.01为有显著差别，P小于0.001为有极显著差别。

玄参中分离的环烯醚萜类化合物测试结果疾病蝇不给药和给药的T检验对比为：SN-1的T检验P＝0.000010、SN-2的T检验P＝0.000041、SN-3的T检验P＝0.001297、SN-4的T检验P＝0.000777、SN-5的T检验P＝0.000177、SN-6的T检验P＝0.000172、SN-7的T检验P＝0.031647、SN-8的T检验P＝0.000063、SN-9的T检验P＝0.000001、SN-10的T检验P＝0.000000。表明SN1-10对果蝇老年痴呆疾病短期记忆衰退都有不同程度的阻断活性效果。具体每个化合物的试验数据见下列各对应表：

(1)SN-1活性测试结果

(1-1)SN-1背景信息和测试结果

(1-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(1-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(1-4)疾病蝇喂0.050‰SN-1学习指数测试结果

(2)SN-2活性测试结果

(2-1)SN-2背景信息和测试结果

(2-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(2-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(2-4)疾病蝇喂0.050‰SN-2学习指数测试结果

(3)SN-3活性测试结果

(3-1)SN-3背景信息和测试结果

(3-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(3-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(3-4)疾病蝇喂0.050‰SN-3学习指数测试结果

(4)SN-4活性测试结果

(4-1)SN-4背景信息和测试结果

(4-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(4-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(4-4)疾病蝇喂0.050‰SN-4学习指数测试结果

(5)SN-5活性测试结果

(5-1)SN-5背景信息和测试结果

(5-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(5-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(5-4)疾病蝇喂0.050‰SN-5学习指数测试结果

(6)SN-6活性测试结果

(6-1)SN-6背景信息和测试结果

(6-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(6-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(6-4)疾病蝇喂0.050‰SN-6学习指数测试结果

(7)SN-7活性测试结果

(7-1)SN-7背景信息和测试结果

(7-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(7-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(7-4)疾病蝇喂0.050‰SN-7学习指数测试结果

(8)SN-8活性测试结果

(8-1)SN-8背景信息和测试结果

(8-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(8-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(8-4)疾病蝇喂0.050‰SN-8学习指数测试结果

(9)SN-9活性测试结果

(9-1)SN-9背景信息和测试结果

(9-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(9-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(9-4)疾病蝇喂0.050‰SN-9学习指数测试结果

(10)SN-10活性测试结果

(10-1)SN-10背景信息和测试结果

(10-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(10-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(10-4)疾病蝇喂0.050‰SN-10学习指数测试结果

实施例2

第一部分：栀子中环烯醚萜类化合物的提取分离

取茜草科栀子属植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)干燥果实5kg，用60％乙醇加热回流提取，浓缩提取物，所得提取物悬浮水中，通过D101大孔树脂柱，用水、30％、50％、70％及95％乙醇梯度洗脱。50％乙醇洗脱部分，经硅胶柱色谱(200-300目)，以氯仿-甲醇-水(100∶0∶0)至甲醇梯度洗脱。子馏分Fr7(9g)经ODS柱色谱，甲醇-水(10∶90-90∶10)梯度洗脱，子馏分Fr.1经Toyopearl HW-40柱，甲醇-水(20∶80-80∶20)梯度洗脱，再经反向HPLC，甲醇-水40∶60洗脱，纯化得到GJ-1(6mg)，GJ-4(28.9mg)，GJ-5(45mg)，GJ-6(22.0mg)；子馏分Fr.3经Toyopearl HW-40柱，甲醇-水(20∶80-80∶20)梯度洗脱，反向HPLC纯化得到GJ-2(35.7mg)；子馏分Fr.4经Toyopearl HW-40柱，甲醇-水(20∶80-80∶20)梯度洗脱，反向HPLC纯化得到GJ-3(28.5mg)。

所获得的各化合物的纯度以及量如下表A所示

表B

No.    编号    纯度    重量          结构

1^*     GJ-1     90％   6mg   

2^*     GJ-2     90％   35.7mg

3^*     GJ-3     95％   28.5mg

4^*     GJ-4    88％    28.9mg

5      GJ-5    90％    45mg  

6      GJ-6    95％    22.0mg

注：有^*号者为新化合物

所获得的各化合物的物理化学常数如下：

化合物GJ-1(丁二酸单京尼平苷酯)：淡黄色无定型粉末，Molish反应阳性。[α]_D ¹⁸+15.0°(c＝0.4，MeOH)；UV(MeOH)λ_max nm(logε)：202.0(3.99)，238.0(4.01)；IR(KBr)cm^-1：3414(OH)，1700(C＝O)，2927(CH₃)；HR-ESI-MS：m/z511.1400[M+Na]⁺(calcd for C₂₁H₂₈O₁₃)；确认化合物GJ-1的分子式为C₂₁H₂₈O₁₃。¹³C及¹H NMR数据见表5。

化合物GJ-2(6’-O-芥子酰基京尼平苷)：黄色油状物，Molish反应阳性。[α]_D ¹⁸-21.0°(c＝0.4，MeOH)；UV(MeOH)λ_max nm(logε)：203.5(3.85)，238.0(3.81)，329(3.66)；IR(KBr)cm^-1：3425(OH)，1700(C＝O)，2927(CH₃)；HR-ESI-MS：m/z617.1829[M+Na]⁺(calcd forC₂₈H₃₄O₁₄)；确认化合物GJ-2的分子式C₂₈H₃₄O₁₄。¹³C及¹H NMR数据见表5。

化合物GJ-3(6’-O-对羟基桂皮酰基京尼平苷)：黄色油状物，Molish反应阳性。[α]_D ¹⁸-16.0°(c＝0.4，MeOH)；UV(MeOH)λ_max nm(logε)：203.5(4.06)，238(4.02)，329(3.86)；IR(KBr)cm^-1：3425(OH)，1708(C＝O)，2927(CH₃)。HR-ESI-MS：m/z 557.1641[M+Na]⁺(calcd for C₂₆H₃₀O₁₂)；确认化合物GJ-3的分子式为C₂₆H₃₀O₁₂。¹³C及¹H NMR数据见表5。

化合物GJ-4(6’-乙酰基京尼平苷)：淡黄色无定型粉末，Molish反应阳性。[α]_D ¹⁸+10.0°(c＝0.4，MeOH)；UV(MeOH)λ_max nm(logε)：203.5(3.59)，237(3.70)；IR(KBr)cm^-1：3438(OH)，1645(C＝C)，2925(CH₃)；HR-ESI-MS：m/z453.1394[M+Na]⁺(calcd for C₁₉H₂₆O₁₁，)；确认化合物GJ-4的分子式为C₁₉H₂₆O₁₁。¹³C及¹H NMR数据见表6。

化合物GJ-5(京尼平苷)：白色无定型粉末，分子式为C₁₇H₂₄O₁₀，Molish反应阳性。ESI-MS：m/z799(2M+Na)⁺，411(M+Na)⁺，775(2M-H)^-，387(M-H)^-，提示化合物分子量388。¹³C及¹H NMR数据见表6。

化合物GJ-6(10-乙酰基京尼平苷)：白色无定型粉末，分子式为C₁₉H₂₆O₁₁，Molish反应阳性。ESI-MS：m/z453[M+Na]⁺，429[M-H]^-，提示化合物分子量430。¹³C及¹H NMR数据见表6。

表5：化合物GJ-1，GJ-2和GJ-3的NMR数据(400和100MHz，CD₃OD)

No.

1

2

3

δH，J(Hz)

δc

δH，J(Hz)

δc

δH，J(Hz)

δc

123456789101111-OCH31’2’3’4’5’6’1”2”3”4”5”6”7”8”9”6”-OCH38”-OCH3

5.15，d(8.0)7.50，brs3.19，m2.10，ddt(16.4，8.0，2.0)2.83，q(8.2)5.85，brs2.78，t(7.4)4.78，brd(0.8)3.71，s4.71，d(8.0)3.22，m3.36，m3.27，m3.28，m3.85，dd(12.0，1.8)3.63，dd(12.0，5.6)2.462.60

98.2153.3112.636.439.9131.2139.747.163.8169.551.7100.374.777.971.578.462.7175.331.633.1181.8

4.98，d(7.6)7.48，brs3.10，m2.72，ddt(16.4，8.0，2.0)2.92，m5.78，brs2.69，m4.20，q3.63，s4.71，d(8.0)3.283.403.383.554.45，m4.35，m6.38，d(15.8)7.58，d(15.8)6.88，s6.88，s3.88，s3.88，s

98.8153.2112.536.939.9128.8144.946.661.6169.451.7100.574.877.871.975.864.6168.9115.7147.3126.7107.1149.5139.6149.5107.056.956.9

5.03，d(7.0)7.45，d(1.0)3.02，m1.94，ddt(16.4，8.0，2.0)2.59，m5.63．brs2.65，m3.99，d(14.3)4.06，dd(14.3 1.8)3.61，s4.59，d(7.9)3.05，m3.21，m3.15，m3.45，m4.34，dd(12.0 2.1)4.05，dd(12.0 6.8)6.34，d(16.0)7.51，d(16.0)7.49，d(8.6)6.77，d(8.6)6.77，d(8.6)7.49，d(8.6)

96.1151.4110.934.538.0125.8144.045.559.2166.750.998.973.176.470.274.064.3166.4113.9144.7124.9130.2115.7160.0115.7130.2

表6：化合物GJ-4，GJ-5和GJ-6的NMR数据(400和100MHz，CD₃OD)

No.

4

5

6

δH，J(Hz)

δc

δH，J(Hz)

δc

δH，J(Hz)

δc

123456789101111-OCH31’2’3’4’5’6’-C＝O-OCH3

5.16，d(8.0)7.50，d(1.2)3.16，m2.08，ddt(16.4，8.0，2.0)2.82，q(8.3)5.79，brs2.71，t(7.6)4.30，d(14.3)4.19，dd(14.3 1.8)3.71，s4.70，d(7.9)3.23，m3.38，m3.31，m3.46，m4.35，m4.25，m2.02，s

98.8153.3112.636.839.8128.7145.046.861.4169.551.7100.774.777.771.575.664.3172.720.7

5.17，d(7.6)7.51，d(1.2)3.17，m2.09，ddt(16.4，8.0，2.0)2.83，dd(16.5 8.3)5.80，brs2.73，t(7.6)4.31，brd(14.3)4.19，dd(14.3 1.8)3.71，s4.70，d(7.9)3.23，m3.37，m3.27，m3.29，m3.86，dd(12.8，1.8)3.63，dd(12.8，5.6)

98.3153.3112.636.639.7128.3144.847.061.4169.551.7100.374.977.971.678.462.7

5.17，d(8.0)7.51，d(1.2)3.18，m2.08，ddt(16.4，8.0，2.0)2.82，q(8.3)5.85，brs2.76，t(7.6)4.78，brd(0.8)3.71，s4.71，d(7.9)3.22，m3.37，m3.27，m3.29，m3.87，dd(12.0，1.6)3.63，dd(12.0，4.2)

98.3153.4112.436.439.9131.3139.647.463.7169.451.7100.574.977.971.578.462.8172.720.8

第二部分：从栀子中分离的环烯醚萜类化合物抗老年痴呆作用测试

老年痴呆果蝇的培育

通过将携带有elav启动基因的亲本果蝇，和携带有Aβ42蛋白基因的亲本果蝇杂交，获得整合有elav启动基因和Aβ42蛋白基因的子代疾病果蝇。

老年痴呆果蝇的给药

试验设置健康蝇无药对照、疾病蝇无药对照和疾病蝇给不同的药三种组合。每种组合(健康蝇无药对照、疾病蝇无药对照、疾病蝇喂某一个药)有250只果蝇，分置于2个玻璃指瓶中(每个玻璃指瓶装125只果蝇)，每天先空腹2小时，然后在仍隔离食物的条件下给药40μl，强制喂药4小时(此时40μl的药已被吃尽)，最后再将吃完药的果蝇转移到有食物的玻璃指瓶中。喂药方法(专利申请号2005100117054)已经获得专利授权(专利名称：一种昆虫给药方法和装置及其在大规模药物筛选中的用途)。

每个药重复试验8组，喂药连续进行6天。

果蝇给药后记忆障碍修复效果评价

果蝇置于自动训练仪接受训练，训练时先后通入气味(1.5‰辛醇octanol，溶剂为二甲基硅油，发泡散发的气味)伴随电击(CS+)，然后通入另一种气味(1‰甲基环己醇methylcyclohexanol，溶剂为二甲基硅油)，但不伴随电击(CS-)，1个周期训练结束后立即检测其记忆，检测时将果蝇置于相对而吹的两种气味(1.5‰辛醇octanol和1‰甲基环己醇methylcyclohexanol，分别发泡散发的气味)中央，任其自由选择120秒，根据选择每种气味的果蝇数目计算出每次实验的学习记忆指数PI(Performance Index)，辛醇octanol伴随气味刺激产生的学习指数以PI_OCT表示，计算公式为PI_OCT＝{2[MCH/(OCT^*+MCH)]-1}*100

果蝇置于自动训练仪接受训练，训练时先后通入气味(1‰甲基环己醇methylcyclohexanol，溶剂为二甲基硅油)伴随电击(CS+)，然后通入另一种气味(1.5‰辛醇octanol，溶剂为二甲基硅油，发泡散发的气味)，但不伴随电击(CS-)，1个周期训练结束后立即检测其记忆，检测时将果蝇置于相对而吹的两种气味(1.5‰辛醇octanol和1‰甲基环己醇methylcyclohexanol，分别发泡散发的气味)中央，任其自由选择120秒，根据选择每种气味的果蝇数目计算出每次实验的学习记忆指数PI(Performance Index)，甲基环己醇methylcyclohexanol伴随气味刺激产生的学习指数以PI_MCH表示，计算公式为PI_MCH＝{2[OCT/(MCH^*+OCT)]-1}*100

最终结果以总学习记忆指数(PI_TOTAL)表示，计算公式为PI_TOTAL＝0.5(PI_MCH+PI_OCT)。

进行活性测试时，同时进行不喂药的同遗传背景健康蝇、不喂药的老年痴呆疾病蝇，喂测试药的老年痴呆疾病蝇的嗅觉短期记忆缺陷测试，分别计算它们的总学习记忆指数，将喂测试药的老年痴呆疾病蝇学习记忆指数与同遗传背景健康蝇学习记忆指数、老年痴呆疾病蝇学习记忆指数相比较，评价测试物抗老年痴呆的作用。喂食测试物的老年痴呆疾病蝇学习记忆指数相对越高则说明测试物抗老年痴呆作用越强。

采用T检验比较，喂食测试物的老年痴呆疾病蝇学习记忆指数，和不喂药(仅给不含药样品的溶剂)的老年痴呆疾病蝇学习记忆指数，P小于0.05为有差别，P小于0.01为有显著差别，P小于0.001为有极显著差别。

栀子中分离的环烯醚萜类化合物测试结果疾病蝇不给药和给药的T检验对比为：GJ-1的T检验P＝0.000747、GJ-2的T检验P＝0.000031、GJ-3的T检验P＝0.000002、GJ-4的T检验P＝0.000004、GJ-5的T检验P＝0.000289、GJ-6的T检验P＝0.000000。表明GJ1-6对果蝇老年痴呆疾病短期记忆衰退都有不同程度的阻断活性效果。具体每个化合物的试验数据见下列各对应表：

(1)GJ-1活性测试结果

(1-1)GJ-1背景信息和测试结果

(1-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(1-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(1-4)疾病蝇喂0.050‰GJ-1学习指数测试结果

(2)GJ-2活性测试结果

(2-1)GJ-2背景信息和测试结果

(2-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(2-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(2-4)疾病蝇喂0.050‰GJ-2学习指数测试结果

(3)GJ-3活性测试结果

(3-1)GJ-3背景信息和测试结果

(3-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(3-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(3-4)疾病蝇喂0.050‰GJ-3学习指数测试结果

(4)GJ-4活性测试结果

(4-1)GJ-4背景信息和测试结果

(4-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(4-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(4-4)疾病蝇喂0.050‰GJ-4学习指数测试结果

(5)GJ-5活性测试结果

(5-1)GJ-5背景信息和测试结果

(5-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(5-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(5-4)疾病蝇喂0.050‰GJ-5学习指数测试结果

(6)GJ-6活性测试结果

(6-1)GJ-6背景信息和测试结果

(6-2)同背景健康蝇学习指数测试结果

(6-3)疾病蝇不给药对照学习指数测试结果

(6-4)疾病蝇喂0.050‰GJ-6学习指数测试结果

实施例3：片剂形式的药物组合物的制备

组成：

化合物SN-1    0.5克

化合物SN-2    0.5克

可压性淀粉    150克

17％淀粉浆    适量

硬脂酸镁    1.8克

制备步骤：将SN-1与SN-2同淀粉混合均匀，加入淀粉浆制成软材，制粒后置于80℃下干燥后于12目筛整粒，加入硬脂酸镁混合后，单冲压片机压片，即得。

实施例4：胶囊剂形式的药物组合物的制备

组成：

化合物SN-9    1克

化合物GJ-2    0.5克

淀粉          150克

17％淀粉浆    适量

硬脂酸镁      1.8克

制备步骤：将SN-9与GJ-2同淀粉混合均匀，加入淀粉浆制成软材，制粒后置于80℃下干燥后于12目筛整粒，灌装胶囊，即得。

实施例5：注射剂形式的药物组合物的制备

组成：

化合物SN-9    2克

化合物SN-10   1克

化合物GJ-5    1克

化合物GJ-6    1克

氯化钠        430毫克

吐温80        0.05毫升

注射用水      加至5毫升

制备步骤：将四种化合物和氯化钠用80％的注射用水及吐温80混合均匀，使其全部溶解，再将注射用水加至5毫升，过滤，灌封，100℃灭菌30分钟即得。

已经参考某些具体实施例对本发明进行了描述和说明，但是本领域熟练技术人员应当理解，可以对所述方法和方案进行多种修改、改变、变型、替换、删除或者添加，这并不背离本发明的实质和范围。本发明的范围由权利要求书限定，并且应当将这些权利要求书解释为合理宽的范围。

Claims (28)

1.通式(I)所示的环烯醚萜类化合物

通式(I)

或其可药用盐

其中：

3-4位为双键；6-7位和7-8位为双键或单键；R₂、R₃和R₆均为氢；R₄和R₅均为羟基；且R₈为甲基；或者

3-4位和7-8位均为双键；6-7位为双键或单键；R₂、R₄、R₅、R₆和R₈均为氢，且R₃为COOCH₃；

R₁为H、OH、OCH₃、直链糖基或支链糖基，所述糖基选自葡萄糖基、半乳糖基、甘露糖基、阿拉伯糖基、木糖基、核糖基、来苏糖基和夫糖基，所述糖基的糖链中的羟基任选被选自下列的酰化基团酰化：CH₃(CH₂)_nCO、HOOC(CH₂)_nCO、苯甲酰基、苯乙酰基、苯丙酰基、杂环甲酰基、杂环乙酰基和杂环丙酰基，所述杂环选自吡喃、噻喃、吡啶、嘧啶、吡嗪、三嗪、哒嗪、

嗪和异

嗪，其中所述苯环和杂环可任选被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基和烷氧基的取代基取代，n＝0、1、2、3、4、5或6；

R₇为H、CH₃、CHO、COOCH₃、COOH、CH₂OH、OH、直链糖基或支链糖基，所述糖基选自葡萄糖基、半乳糖基、甘露糖基、阿拉伯糖基、木糖基、核糖基、来苏糖基和夫糖基，所述糖基的糖链中的羟基任选被选自下列的酰化基团酰化：CH₃(CH₂)_nCO、HOOC(CH₂)_nCO、苯甲酰基、苯乙酰基、苯丙酰基、杂环甲酰基、杂环乙酰基和杂环丙酰基，所述杂环选自吡喃、噻喃、吡啶、嘧啶、吡嗪、三嗪、哒嗪、

嗪和异嗪，其中所述苯环和杂环可任选被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基和烷氧基的取代基取代，n＝0、1、2、3、4、5或6；

或者在6位与7位和/或7位与8位间存在三元氧环，

条件是，所述通式(I)化合物不包括以下化合物：

2.权利要求1的化合物，其中所述化合物是

3.权利要求1的化合物，其中所述化合物是

4.权利要求1的化合物，其中所述化合物是

5.权利要求1的化合物，其中所述化合物是

6.权利要求1的化合物，其中所述化合物是

7.权利要求1的化合物，其中所述化合物是

8.权利要求1的化合物，其中所述化合物是

9.权利要求1的化合物，其中所述化合物是

10.通式(I)所示的环烯醚萜类化合物或其可药用盐在制备用于预防或治疗神经退行性疾病的药物中的用途：

通式(I)

其中：

3-4位为双键；6-7位和7-8位为双键或单键；R₂、R₃和R₆均为氢；R₄和R₅均为羟基；且R₈为甲基；或者

3-4位和7-8位均为双键；6-7位为双键或单键；R₂、R₄、R₅、R₆和R₈均为氢，且R₃为COOCH₃；

R₁为H、OH、OCH₃、直链糖基或支链糖基，所述糖基选自葡萄糖基、半乳糖基、甘露糖基、阿拉伯糖基、木糖基、核糖基、来苏糖基和夫糖基，所述糖基的糖链中的羟基任选被选自下列的酰化基团酰化：CH₃(CH₂)_nCO、HOOC(CH₂)_nCO、苯甲酰基、苯乙酰基、苯丙酰基、杂环甲酰基、杂环乙酰基和杂环丙酰基，所述杂环选自吡喃、噻喃、吡啶、嘧啶、吡嗪、三嗪、哒嗪、

嗪和异

嗪，其中所述苯环和杂环可任选被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基和烷氧基的取代基取代，n＝0、1、2、3、4、5或6；

R₇为H、CH₃、CHO、COOCH₃、COOH、CH₂OH、OH、直链糖基或支链糖基，所述糖基选自葡萄糖基、半乳糖基、甘露糖基、阿拉伯糖基、木糖基、核糖基、来苏糖基和夫糖基，所述糖基的糖链中的羟基任选被选自下列的酰化基团酰化：CH₃(CH₂)_nCO、HOOC(CH₂)_nCO、苯甲酰基、苯乙酰基、苯丙酰基、杂环甲酰基、杂环乙酰基和杂环丙酰基，所述杂环选自吡喃、噻喃、吡啶、嘧啶、吡嗪、三嗪、哒嗪、

嗪和异

嗪，其中所述苯环和杂环可任选被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基和烷氧基的取代基取代，n＝0、1、2、3、4、5或6；

或者在6位与7位和/或7位与8位间存在三元氧环，

条件是，所述通式(I)化合物不包括以下化合物：

11.权利要求10的用途，其中所述神经退行性疾病是血管性痴呆、血管性认知障碍、老年痴呆症、记忆力减退、脑组织退行性病变症候群或胆碱能神经退行性病变。

12.权利要求10的用途，其中所述化合物是

13.权利要求10的用途，其中所述化合物是

14.权利要求10的用途，其中所述化合物是

15.权利要求10的用途，其中所述化合物是

16.权利要求10的用途，其中所述化合物是

17.权利要求10的用途，其中所述化合物是

18.权利要求10的用途，其中所述化合物是

19.权利要求10的用途，其中所述化合物是

20.权利要求10或11的用途，其中所述化合物是

21.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1中所述的通式(I)的环烯醚萜类化合物与可药用载体。

22.制备权利要求21所述的药物组合物的方法，所述方法包括将如权利要求1中所述的通式(I)的环烯醚萜类化合物与可药用载体混合。

23.制备如权利要求1中所述的通式(I)的环烯醚萜类化合物的方法，所述方法包括采用中药玄参和栀子作为原料，用溶剂进行提取并且进行分离。

24.权利要求23的方法，其中所述溶剂为有机溶剂和/或水。

25.权利要求24的方法，其中所述有机溶剂为低级醇。

26.权利要求25的方法，其中所述低级醇选自甲醇和乙醇。

27.权利要求24的方法，其中所述有机溶剂选自丙酮和乙酸乙酯。

28.权利要求23的方法，其中所述分离是通过层析法和/或萃取法来进行的。