CN101460520B - 肝细胞生长因子(hgf)的结合蛋白质 - Google Patents

Abstract

本发明申请提供一种结合肝细胞生长因子(HGF)(特别是人HGF)并中和其活性的结合蛋白质家族。所述结合蛋白质可以用作诊断剂和/或治疗剂。就其治疗活性而言，所述结合蛋白质可用于治疗某些HGF应答的紊乱，例如某些HGF应答的肿瘤。

Description

肝细胞生长因子(HGF)的结合蛋白质

相关申请 

本申请要求2006年6月2日提交的美国临时申请No.60/810,714、以及2006年11月21日提交的美国临时申请No.60/860,509的利益和优先权，这些申请的公开内容在此以引用方式并入本文。 

技术领域

本发明的技术领域涉及分子生物学、免疫学和肿瘤学。更具体地说，本发明的技术领域为与人肝细胞生长因子(HGF)结合的基于抗体的结合蛋白质。 

背景技术

肝细胞生长因子(HGF)，也被称为扩散因子(Scatter Factor，SF)，是一种主要由间充质细胞产生的多功能异源二聚体蛋白质，并且是表达Met酪氨酸激酶受体的细胞的效应器(参见Bottaro等人(1991)SCIENCE 251：802-804，Rubin等人(1993)BIOCHIM.BIOPHYS.ACTA 1155：357-371)。人Met受体还被称为“c-Met”。成熟的HGF包含两个多肽链，即，α链和β链。已经公开的研究指出，α链包含HGF的c-Met受体结合域。 

当HGF与其同源受体结合时，HGF调节了多种细胞活性。HGF-Met信号传导通路在肝再生、伤口愈合、神经再生、血管发生和恶性肿瘤中起作用。例如参见Cao等人(2001)PROC.NATL.ACAD.SCI.USA 98：7443-7448，Burgess等人(2006)CANCER RES.66：1721-1729，以及美国专利序号5,997,868和5,707,624。研究者已经开发出了许多HGF调节剂(包括抗体)来治疗涉及HGF活性的多种紊乱，例如某些HGF 响应的癌症(HGF responsive cancer)。例如参见国际专利申请公开序号WO 2005/017107。 

图1示意性地显示了所有抗体所共有的基本结构。抗体是含有4条多肽链的多聚体蛋白质。其中的2条多肽链被称为重链或H链，另外2条多肽链被称为轻链或L链。通过链间的二硫键连接免疫球蛋白的重链和轻链。通过多个链间二硫键连接免疫球蛋白的重链。轻链由1个可变区(图1中的V_L)和1个恒定区(图1中的C_L)构成，而重链由1个可变区(图1中的V_H)和至少3个恒定区(图1中的CH₁、CH₂和CH₃)构成。可变区决定了抗体的特异性，而恒定区则包含其他功能。 

氨基酸和结构信息表明，每个可变区都包含3个超变区(也称为互补性决定区或CDR)，其侧翼是4个相对保守的框架区或FR。所述的3个CDR(分别称为CDR₁、CDR₂和CDR₃)决定了单个抗体的结合特异性。当将抗体用作诊断剂和治疗剂时，通常理想的是产生包含对于目标分子最高度的结合特异性和亲和力的抗体。据信，可变区的差异对抗体的特异性和亲和力包含深远的影响。 

美国专利序号5,707,624描述了抗HGF的抗体在治疗卡波西肉瘤中的用途。类似的，美国专利序号5,997,868描述了通过向待治疗患者施用抗HGF的抗体，从而阻断内源HGF促进肿瘤中血管发生的能力的肿瘤治疗。最近，研究者提出，与HGF的β链结合的抗体包含成为患有HGF依赖的肿瘤患者的治疗剂的潜力(Burgess(2006)同上)。 

然而，仍需要可以被用作治疗剂和诊断剂的其他HGF调节剂。 

发明概述 

本发明部分地基于特异性地结合HGF(特别是人HGF)的结合蛋白质家族的发现。所述结合蛋白质是基于抗体的，以至于其包含基于特异性地结合HGF的抗体家族的CDR的抗原(即，HGF)结合位点。所述CDR赋予了所述结合蛋白质对HGF的结合特异性。所述结合蛋白质可以用作诊断剂和治疗剂。当将所述结合蛋白质用作治疗剂时，将该结合蛋白质改造(例如人源化)，从而减小或消除在施用至接受者(例 如人)时诱导针对所述结合蛋白质的免疫应答的风险。 

所述结合蛋白质中和了HGF的活性，因此可以被用作治疗剂。在某些实施方案中，所述的结合蛋白质抑制HGF与其同源受体(c-Met)结合，由此中和了HGF的活性。在其他实施方案中，所述的结合蛋白质与HGF结合，并中和其生物活性，但不抑制HGF与c-Met受体的结合。由于HGF涉及癌细胞的生长和增殖，因此所述结合蛋白质可用于抑制癌细胞的增殖。此外，当用施用至哺乳动物时，所述的结合蛋白质能够抑制或减少哺乳动物中肿瘤的生长。 

通过下文所述的附图、发明详述和权利要求的描述，清楚明白地显示本发明的这些和其他方面以及优点。 

附图说明

参见以下附图可以更彻底地理解本发明。 

图1是典型抗体的示意性代表的图。 

图2为显示如下氨基酸序列的示意图，所述的氨基酸序列定义了抗体的完整的免疫球蛋白重链可变区，其中所述的抗体用1A3、1D3、1F3、2B8、2F8、3A12、3B6和3D11表示。每个抗体的氨基酸序列都与另一抗体的氨基酸序列比对，并且在方框中限定了定义信号肽、CDR₁、CDR₂和CDR₃的区域。不带方框的序列表示FR序列。 

图3为显示图2中显示的每个免疫球蛋白重链可变区序列的CDR₁、CDR₂和CDR₃序列的示意图。 

图4为显示如下氨基酸序列的示意图，所述的氨基酸序列定义了抗体1A3、1D3、1F3、2B8、2F8、3A12、3B6和3D11的完整的免疫球蛋白轻链可变区。每个抗体的氨基酸序列都与另一抗体的氨基酸序列比对，并且在方框中限定了定义信号肽、CDR1、CDR₂和CDR₃的区域。不带方框的序列表示FR序列。 

图5为显示图4中显示出的每个免疫球蛋白轻链可变区序列的CDR₁、CDR₂和CDR₃序列的示意图。 

图6为由测定U87MG异种移植模型中抗HGF的抗体1D3、1F3、1A3 和2B8的肿瘤抑制活性的试验中所得的结果的汇总图。菱形对应于PBS；三角形对应于抗HGF的抗体1A3；X对应于抗HGF的抗体1D3；方形对应于抗HGF的抗体1F3；而圆形对应于抗HGF的抗体2B8。 

图7为由测定U118异种移植模型中抗HGF的抗体1D3、1F3、1A3和2B8的肿瘤抑制活性的试验中所得的结果的汇总图。菱形对应于IgG；方形对应于抗HGF的抗体1F3；三角形对应于抗HGF的抗体1D3；X对应于抗HGF的抗体1A3；而圆形对应于抗HGF的抗体2B8。 

图8为一个表，该表总结了抗原结合亲和力以及人HGF与嵌合的2B8抗体、嵌合的/人源化的2B8抗体或人源化的2B8抗体之间相互作用的动力学的表面等离子共振数据。该表列出了所测试的多对Kappa轻链和IgG1重链。在3个独立的试验中，对这些列出的包含标准偏差(STDEV)的抗体进行分析。 

图9为总结试验数据的柱状图，表明Hu2B8结合与小鼠单克隆抗体2B8相互排斥的表位。将人源化的或嵌合的2B8捕获在抗人的Fc的芯片上。然后，将HGF与人源化的或嵌合的2B8结合。测定小鼠2B8或对照抗体(多克隆的山羊抗HGF的抗体)与被捕获的HGF结合的能力。人源化的2B8抗体和嵌合的2B8都抑制鼠2B8与HGF的结合。白色的柱对应于嵌合的2B8抗体；灰色的柱对应于人源化Hu2B8抗体(Kappa可变区Kv1-39.1和重链可变区Hv5-51.1)；黑色的柱对应于人源化Hu2B8抗体(Kappa可变区Kv3-15.1和重链可变区Hv5-51.1)。 

发明详述 

本发明部分地基于特异性地结合HGF并中和HGF(特别是人HGF)的活性的结合蛋白质家族的发现。所述结合蛋白质可用于许多诊断和治疗应用。所述的结合蛋白质基于就其结合HGF并中和HGF的活性的能力而被选择的某些单克隆抗体的抗原结合位点。具体而言，所述的结合蛋白质包含多个免疫球蛋白可变区CDR序列，其一起定义了用于HGF的结合位点。

考虑到这些抗体的中和活性，它们特别适用于介导HGF应答细胞(例如癌细胞)的生长和/或增殖。当将所述的结合蛋白质用作治疗剂时，可以对其改造，从而最小化或消除在施用至接受者时诱导针对所述结合蛋白质的免疫应答的风险。此外，根据具体的应用，包括将所述结合蛋白质与其他部分(例如可检测的标签(如放射性标签)和效应器分子(如其他蛋白质和基于小分子的治疗剂))缀合。下文将对本发明的这些特征和方面中的每一个进行详细的说明。 

I-结合HGF的结合蛋白质

在一个方面中，本发明提供一种结合人HGF的分离的结合蛋白质，该结合蛋白质包含：(i)包含结构CDR_L1-CDR_L2-CDR_L3的免疫球蛋白轻链可变区；和(ii)包含3个互补性决定区(CDR)的免疫球蛋白重链可变区，其中所述的免疫球蛋白轻链可变区和所述的免疫球蛋白重链可变区一起定义了用于结合人HGF的单个结合位点。CDR_L1包含氨基酸序列X₁X₂SerX₄X₅X₆X₇X₈X₉X₁₀X₁₁X₁₂X₁₃X₁₄X₁₅，其中氨基酸X₁为Arg、Lys或Ser，X₂为Ala或Thr，X₄ is Glu、Gln或Ser，X₅为Asn、Asp或Ser，X₆为Ile或Val，X₇为Asp、Lys、Ser、Val或Tyr，X₈为肽键或Tyr，X₉为肽键或Asp，X₁₀为肽键或Gly，X₁₁为肽键或Asn，X₁₂为肽键、Ile或Ser，X₁₃为Asn或Tyr，X₁₄为Ile、Leu、Met或Val，X₁₅为Ala、Asn、His或Ser。CDR_L2包含氨基酸序列X₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁X₂₂，其中氨基酸X₁₆为Ala、Asp、Arg、Gly或Val，X₁₇为Ala、Thr或Val，X₁₈为Asn、Ser或Thr，X₁₉为Arg、Asn、Lys、或His，X₂₀为Leu或Arg，X₂₁为Ala、Asn、Glu、Val或Pro，X₂₂为Asp、Ser或Thr。CDR_L3包含氨基酸序列X₂₃X₂₄X₂₅X₂₆X₂₇X₂₈ProX₃₀Thr，其中氨基酸X₂₃为Leu、Gly或Gln，X₂₄为His或Gln，X₂₅为Phe、Ser、Trp或Tyr，X₂₆为Asp、Ile、Ser、Trp或Tyr，X₂₇为Gly、Glu、Asn或Ser，X₂₈为Asp、Asn、Phe、Thr或Tyr，X₃₀为Leu、Phe、Pro或Tyr。 

在其他方面中，本发明提供一种结合人HGF的分离的结合蛋白质，该结合蛋白质包含：(i)包含结构CDR_H1-CDR_H2-CDR_H3的免疫球蛋白重链可变区；和(ii)包含3个互补性决定区(CDR)的免疫球蛋白轻链可变 区，其中所述的免疫球蛋白重链可变区和所述的免疫球蛋白轻链可变区一起定义了用于结合人HGF的单个结合位点。CDR_H1包含氨基酸序列X₁TyrX₃X₄X₅，其中氨基酸X₁为Asp、Asn、Ser或Thr，X₃为Phe、Ser、Trp或Tyr，X₄为Ile、Leu或Met，X₅为Asn、His或Ser。CDR_H2包含氨基酸序列X₆IleX₈X₉X₁₀X₁₁GlyX₁₃X₁₄X₁₅TyrX₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁X₂₂，其中氨基酸X₆为Lys、Gln、Glu、Val或Tyr，X₈为Asn、Gly、Ser、Trp或Tyr，X₉为Ala、Pro或Ser，X₁₀为Gly或Thr，X₁₁为肽键、Asp、Asn、Gly或Ser，X₁₃为Asp、Asn、His、或Ser，X₁₄为Ser或Thr，X₁₅为Asn或Tyr，X₁₇为Asn或Pro，X₁₈为Ala、Asp、Gly、Gln、Glu、Pro或Ser，X₁₉为Asn、Lys、Met或Ser，X₂₀为Leu、Phe或Val，X₂₁为Lys、Met或Gln，X₂₂为Asp、Gly或Ser。CDR_H3包含氨基酸序列X₂₃X₂₄X₂₅X₂₆X₂₇X₂₈X₂₉X₃₀X₃₁X₃₂X₃₃X₃₄Tyr，其中氨基酸X₂₃为Arg、Asn、Gln或Glu，X₂₄为Gly、Leu、Arg、或Tyr，X₂₅为肽键、Asp或Gly，X₂₆为肽键或Gly，X₂₇为肽键或Tyr，X₂₈为肽键、Leu或Tyr，X₂₉为肽键、Gly、Leu、Arg或Val，X₃₀为肽键、Asp、Gly或Glu，X₃₁为肽键、Asn、Arg、Ser或Tyr，X₃₂为肽键、Ala、Gly、Ile或Tyr，X₃₃为Met或Phe，X₃₄为Ala或Asp。 

应该理解，所述结合蛋白质包含如上所述的免疫球蛋白轻链和免疫球蛋白重链或其片段。此外，应该理解，所述结合蛋白质可以为完整的抗体或其抗原结合片段、或生物合成的抗体位点。 

在某些实施方案中，在免疫球蛋白轻链和免疫球蛋白重链的CDR序列中插入框架区(FR)。 

在某些其他的实施方案中，将免疫球蛋白轻链和免疫球蛋白重链的CDR序列插入人或人源化的框架区之间。 

在另一方面，本发明提供一种特异性地结合人HGF的分离的结合蛋白质。该结合蛋白质包含：(a)包含结构CDR_L1-CDR_L2-CDR_L3的免疫球蛋白轻链可变区；和(b)免疫球蛋白重链可变区，其中所述的免疫球蛋白轻链可变区和所述的免疫球蛋白重链可变区一起定义了用于结合人HGF的单个结合位点。CDR_L1包含选自SEQ ID NO.8(1A3)、SEQ ID NO. 18(2B8)、SEQ ID NO.28(2F8)、SEQ ID NO.38(3B6)、SEQ ID NO.48(3D11)、SEQ ID NO.58(1D3)、SEQ ID NO.68(1F3)和SEQ ID NO.78(3A12)中的序列。CDR_L2包含选自SEQ ID NO.9(1A3)、SEQ ID NO.19(2B8)、SEQ ID NO.29(2F8)、SEQ ID NO.39(3B6)、SEQ ID NO.49(3D11)、SEQ ID NO.59(1D3)、SEQ ID NO.69(1F3)、SEQ ID NO.79(3A12)和SEQ ID NO.206(LRMR2B8LC)中的序列。CDR_L3包含选自SEQ ID NO.10(1A3)、SEQ ID NO.20(2B8)、SEQ ID NO.30(2F8)、SEQ ID NO.40(3B6)、SEQ ID NO.50(3D11)、SEQ ID NO.60(1D3)、SEQ ID NO.70(1F3)和SEQ ID NO.80(3A12)中的序列。在整个说明书和权利要求书中，由具体的SEQ ID NO.所表示的序列后为被括在括号中的抗体，该抗体为具体序列的来源。例如，SEQ ID NO.8(1A3)表示，SEQ ID NO.8的序列基于抗体1A3中的序列。 

在一个实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含CDR_L1、CDR_L2和CDR_L3，其中CDR_L1包含SEQID NO.8(1A3)所示的序列，CDR_L2包含SEQ ID NO.9(1A3)所示的序列，而CDR_L3包含SEQ ID NO.10(1A3)所示的序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含CDR_L1、CDR_L2和CDR_L3，其中CDR_L1包含SEQID NO.18(2B8)所示的序列，CDR_L2包含SEQ ID NO.19(2B8)或SEQID NO.206(LRMR2B8LC)所示的序列，而CDR_L3包含SEQ ID NO.20(2B8)所示的序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含CDR_L1、CDR_L2和CDR_L3，其中CDR_L1包含SEQID NO.28(2F8)所示的序列，CDR_L2包含SEQ ID NO.29(2F8)所示的序列，而CDR_L3包含SEQ ID NO.30(2F8)所示的序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含CDR_L1、CDR_L2和CDR_L3，其中CDR_L1包含SEQID NO.38(3B6)所示的序列，CDR_L2包含SEQ ID NO.39(3B6)所示的序列，而CDR_L3包含SEQ ID NO.40(3B6)所示的序列。

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含CDR_L1、CDR_L2和CDR_L3，其中CDR_L1包含SEQID NO.48(3D11)所示的序列，CDR_L2包含SEQ ID NO.49(3D11)所示的序列，而CDR_L3包含SEQ ID NO.50(3D11)所示的序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含CDR_L1、CDR_L2和CDR_L3，其中CDR_L1包含SEQID NO.58(1D3)所示的序列，CDR_L2包含SEQ ID NO.59(1D3)所示的序列，而CDR_L3包含SEQ ID NO.60(1D3)所示的序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含CDR_L1、CDR_L2和CDR_L3，其中CDR_L1包含SEQID NO.68(1F3)所示的序列，CDR_L2包含SEQ ID NO.69(1F3)所示的序列，而CDR_L3包含SEQ ID NO.70(1F3)所示的序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含CDR_L1、CDR_L2和CDR_L3，其中CDR_L1包含SEQID NO.78(3A12)所示的序列，CDR_L2包含SEQ ID NO.79(3A12)所示的序列，而CDR_L3包含SEQ ID NO.80(3A12)所示的序列。 

在以上所述的实施方案中的每个实施方案中，优选地将所述CDR_L1、CDR_L2和CDR_L3序列插入人或人源化的免疫球蛋白FR之间。应该理解，所述结合蛋白质可以为完整的抗体、其抗原结合片段或生物合成的抗体位点。 

在另一方面，本发明提供一种结合人HGF的分离的结合蛋白质。该结合蛋白质包含：(a)包含结构CDR_H1-CDR_H2-CDR_H3的免疫球蛋白重链可变区；和(b)免疫球蛋白轻链可变区，其中所述的免疫球蛋白重链可变区和所述的免疫球蛋白轻链可变区一起定义了用于结合人HGF的单个结合位点。CDR_H1包含选自SEQ ID NO.5(1A3)、SEQ ID NO.15(2B8)、SEQ ID NO.25(2F8)、SEQ ID NO.35(3B6)、SEQ ID NO.45(3D11)SEQ ID NO.55(1D3)、SEQ ID NO.65(1F3)和SEQ ID NO.75(3A12)中的序列；CDR_H2包含选自SEQ ID NO.6(1A3)、SEQ ID NO.16(2B8)、SEQ ID NO.26(2F8)、SEQ ID NO.36(3B6)、SEQ ID NO.46(3D11)、 SEQ ID NO.56(1D3)、SEQ ID NO.66(1F3)、SEQ ID NO.76(3A12)、SEQ ID NO.202(Hu2B8 Hv1f.1)，SEQ ID NO.203(Hu2B8 Hv5a.1或Hu2B8 Hv5-51.1)、SEQ ID NO.204(LR2B8HC)和SEQ ID NO.205(LRMR2B8HC)中的序列；以及CDR_H3包含选自SEQ ID NO.7(1A3)、SEQID NO.17(2B8)、SEQ ID NO.27(2F8)、SEQ ID NO.37(3B6)、SEQ IDNO.47(3D11)、SEQ ID NO.57(1D3)、SEQ ID NO.67(1F3)和SEQ IDNO.77(3A12)中的序列。 

在一个实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含CDR_H1、CDR_H2和CDR_H3，其中CDR_H1包含SEQID NO.5(1A3)所示的序列；CDR_H2包含SEQ ID NO.6(1A3)所示的序列；以及CDR_H3包含SEQ ID NO.7(1A3)所示的序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含CDR_H1、CDR_H2和CDR_H2，其中CDR_H1包含SEQID NO 15(2B8)所示的序列；CDR_H2包含SEQ ID NO.16(2B8)、SEQ IDNO.202(Hu2B8 Hv1f.1)、SEQ ID NO.203(Hu2B8 Hv5a.1或Hu2B8Hv5-51.1)、SEQ ID NO.204(LR2B8HC)或SEQ ID NO.205(LRMR2B8HC)所示的序列；以及CDR_H3包含SEQ ID NO.17(2B8)所示的序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含CDR_H1、CDR_H2和CDR_H3，其中CDR_H1包含SEQID NO.25(2F8)所示的序列；CDR_H2包含SEQ ID NO.26(2F8)所示的序列；以及CDR_H3包含SEQ ID NO.27(2F8)所示的序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含CDR_H1、CDR_H2和CDR_H3，其中CDR_H1包含SEQID NO.35(3B6)所示的序列；CDR_H2包含SEQ ID NO.36(3B6)所示的序列；以及CDR_H3包含SEQ ID NO.37(3B6)所示的序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含CDR_H1、CDR_H2和CDR_H3，其中CDR_H1包含SEQID NO.45(3D11)所示的序列；CDR_H2包含SEQ ID NO.46(3D11)所示的序列；以及CDR_H3包含SEQ ID NO.47(3D11)所示的序列。

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含CDR_H1、CDR_H2和CDR_H3，其中CDR_H1包含SEQID NO.55(1D3)所示的序列；CDR_H2包含SEQ ID NO.56(1D3)所示的序列；以及CDR_H3包含SEQ ID NO.57(1D3)所示的序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含CDR_H1、CDR_H2和CDR_H3，其中CDR_H1包含SEQID NO.65(1F3)所示的序列；CDR_H2包含SEQ ID NO.66(1F3)所示的序列；以及CDR_H3包含SEQ ID NO.67(1F3)所示的序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含CDR_H1、CDR_H2和CDR_H3，其中CDR_H1包含SEQID NO.75(3A12)所示的序列；CDR_H2包含SEQ ID NO.76(3A12)所示的序列；以及CDR_H3包含SEQ ID NO.77(3A12)所示的序列。 

在以上所述的实施方案中的每个实施方案中，优选地将所述CDR_H1、CDR_H2和CDR_H3序列插入人或人源化的免疫球蛋白FR之间。应该理解，所述结合蛋白质可以为完整的抗体、其抗原结合片段或生物合成的抗体位点。 

在另一方面，本发明提供一种结合人HGF的结合蛋白质。该结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区，所述的免疫球蛋白重链可变区选自：SEQ ID NO.2(1A3)的残基20-141、SEQID NO.12(2B8)的残基20-137、SEQ ID NO.22(2F8)的残基20-137、SEQ IDNO.32(3B6)的残基20-139、SEQ ID NO.42(3D11)的残基20-132、SEQ ID NO.52(1D3)的残基20-141、SEQ ID NO.62(1F3)的残基20-141以及SEQ ID NO.72(3A12)的残基20-141，所述的免疫球蛋白轻链可变区选自：SEQ ID NO.4(1A3)的残基21-127、SEQ IDNO.14(2B8)的残基21-127、SEQ ID NO.24(2F8)的残基20-131、SEQ ID NO.34(3B6)的残基23-129、SEQ ID NO.44(3D11)的残基23-128、SEQ ID NO.54(1D3)的残基21-127、SEQ ID NO.64(1F3)的残基21-127、以及SEQ ID NO.74(3A12)的残基21-127。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区 和免疫球蛋白轻链可变区，所述的免疫球蛋白重链可变区包含SEQ IDNO.2(1A3)的残基20-141的氨基酸序列，所述的免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO.4(1A3)的残基21-127的氨基酸序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区，所述的免疫球蛋白重链可变区包含SEQ IDNO.12(2B8)的残基20-137的氨基酸序列，所述的免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO.14(2B8)的残基21-127的氨基酸序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区，所述的免疫球蛋白重链可变区包含SEQ IDNO.22(2F8)的残基20-137的氨基酸序列，所述的免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO.24(2F8)的残基20-131的氨基酸序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区，所述的免疫球蛋白重链可变区包含SEQ IDNO.32(3B6)的残基20-139的氨基酸序列，所述的免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO.34(3B6)的残基23-129的氨基酸序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区，所述的免疫球蛋白重链可变区包含SEQ IDNO.42(3D11)的残基20-132的氨基酸序列，所述的免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO.44(3D11)的残基23-128的氨基酸序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区，所述的免疫球蛋白重链可变区包含SEQ IDNO.52(1D3)的残基20-141的氨基酸序列，所述的免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO.54(1D3)的残基21-127的氨基酸序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区，所述的免疫球蛋白重链可变区包含SEQ IDNO.62(1F3)的残基20-141的氨基酸序列，所述的免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO.64(1F3)的残基21-127的氨基酸序列。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区，所述的免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO.72(3A12)的残基20-141的氨基酸序列，所述的免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO.74(3A12)的残基21-127的氨基酸序列。 

在以上所述的实施方案中的每个实施方案中，所述结合蛋白质为完整的抗体、其抗原结合片段或生物合成的抗体位点。 

在另一方面，本发明提供一种结合人HGF的分离的结合蛋白质。该结合蛋白质包含：(i)免疫球蛋白轻链可变区，其选自：SEQ ID NO.173(Hu2B8Kv1-39.1轻链可变区)、SEQ ID NO.179(Hu2B8 Kv3-15.1轻链可变区)、SEQ ID NO.193(LR2B8LC轻链可变区)以及SEQ ID NO.199(LRMR2B8LC轻链可变区)；以及(ii)免疫球蛋白重链可变区，其选自：SEQ ID NO.159(Hu2B8 Hvlf.1重链可变区)，SEQ ID NO.165(Hu2B8Hv5a.1重链可变区)，SEQ ID NO.169(Hu2B8Hv5-51.1重链可变区)，SEQ ID NO.183(LR2B8HC重链可变区)以及SEQ ID NO.189(LRMR2B8HC重链可变区)。所述结合蛋白质可以是完整的抗体、其抗原结合片段或生物合成的抗体位点。 

在另一方面，本发明提供一种结合人HGF的分离的结合蛋白质。该结合蛋白质包含：(i)免疫球蛋白轻链，其选自：SEQ ID NO.177(Hu2B8Kv1-39.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异型(等位基因2))、SEQ ID NO.181(Hu2B8Kv 3-15.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异型(等位基因2))、SEQ ID NO.197(LR2B8LC+Kappa恒定区(Km(3)同种异型(等位基因1))以及SEQ ID NO.201(LRMR2B8LC+Kappa恒定区(Km(3)同种异型(等位基因1))；以及(ii)免疫球蛋白重链，其选自：SEQ IDNO.163(Hu2B8 Hvlf.1+IgG1恒定区(Glm(17，1)同种异型))、SEQID NO.167(Hu2B8Hv5a.1+IgG1恒定区(Glm(17，1)同种异型))、SEQ ID NO.171(Hu2B8 Hv5-51.1+IgG1恒定区(Glm(17，1)同种异型))、SEQ ID NO.187(LR2B8HC+IgG1恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因1))以及SEQ ID NO.191(LRMR2B8HC+IgG1恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因1))。所述结合蛋白质可以是完整的抗体、其抗原结合片段或生物合成的抗体位点。 

在另一方面，本发明提供一种结合还原的人HGF的分离的结合蛋 白质。该结合蛋白质包含：(i)包含3个CDR的免疫球蛋白轻链可变区，以及(ii)包含3个CDR的免疫球蛋白重链可变区。CDR通常被插在FR之间。免疫球蛋白轻链和免疫球蛋白重链的CDR一起定义了结合还原的人HGF的结合位点(例如还原的HGF的α链)。还原的HGF是指使用足以还原α链和β链之间二硫键的量的还原剂(例如二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇或谷胱甘肽)处理的HGF。示例性的浓度包括，例如100mM的DTT和5％的2-巯基乙醇。 

在某些实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含选自CDR_L1、CDR_L2和CDR_L3中的至少1个CDR。备选地，所述结合蛋白质包含2个CDR，例如CDR_L1和CDR_L2、或CDR_L1和CDR_L3、或CDR_L1和CDR_L3。备选地，所述结合蛋白质包含所有的3个CDR，即，CDR_L1、CDR_L2和CDR_L3。CDR_L1包含氨基酸序列X₁X₂SerX₄X₅X₆X₇X₈X₉X₁₀X₁₁X₁₂X₁₃X₁₄X₁₅，其中氨基酸X₁为Arg或Lys，X₂为Ala或Thr，X₄为Glu或Gln，X₅为Asn、Ser或Asp，X₆为Ile或Val，X₇为Tyr、Asp或Lys，X₈为肽键或Tyr，X₉为肽键或Asp，X₁₀为肽键或Gly，X₁₁为肽键或Asn，X₁₂为肽键或Ser，X₁₃为Asn或Tyr，X₁₄为Ile或Leu，X₁₅为Ala、Asn或Ser。CDR_L2包含氨基酸序列X₁₆X₁₇X₁₈X₁₉LeuX₂₁X₂₂，其中氨基酸X₁₆为Ala、Asp、Val或Arg，X₁₇为Ala或Val，X₁₈为Asn、Ser或Thr，X₁₉为Arg、Asn或His，X₂₁为Ala、Glu、Val或Pro，X₂₂为Asp或Ser。CDR_L3包含氨基酸序列X₂₃X₂₄X₂₅X₂₆X₂₇X₂₈ProX₃₀Thr，其中氨基酸X₂₃为Leu或Gln，X₂₄为His或Gln，X₂₅为Phe、Ser或Tyr，X₂₆为Asp、Ile或Trp，X₂₇为Gly或Gln，X₂₈为Asp、Phe或Thr，X₃₀为Phe、Pro或Tyr。 

在另一实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包含选自CDR_H1、CDR_H2和CDR_H3中的至少1个CDR。备选地，所述结合蛋白质包含2个CDR，例如CDR_H1和CDR_H2、或CDR_H1和CDR_H3、或CDR_H1和CDR_H3。备选地，所述结合蛋白质包含所有的3个CDR，即，CDR_H1、CDR_H2和CDR_H3。CDR_H1包含氨基酸序列X₁TyrX₃X₄X₅，其中氨基酸X₁为Asp、Asn、Ser或Thr，X₃为Phe、Trp或Tyr，X₄为 Ile或Met，X₅为Asn、His或Ser。CDR_H2包含氨基酸序列X₆IleX₈X₉GlyX₁₁GlyX₁₃X₁₄X₁₅TyrX₁₇X₁₈X₁₉X₂₀LysX₂₂，其中氨基酸X₆为Lys、Gln或Tyr，X₈为Gly、Ser或Tyr，X₉为Pro或Ser，X₁₁为Asp、Gly或Ser，X₁₃为Asp或Ser，X₁₄为Ser或Thr，X₁₅为Asn或Tyr，X₁₇为Asn或Pro，X₁₈为Ala、Asp、Gly或Glu，X₁₉为Asn、Met或Ser，X₂₀为Phe或Val，X₂₂为Asp或Gly。CDR_H3包含氨基酸序列X₂₃X₂₄X₂₅X₂₆X₂₇X₂₈X₂₉X₃₀X₃₁X₃₂X₃₃AspTyr，其中氨基酸X₂₃为Arg或Gln，X₂₄为Gly或Leu，X₂₅为Asp、Gly或肽键，X₂₆为Gly或肽键，X₂₇为肽键或Tyr，X₂₈为Leu、肽键或Tyr，X₂₉为Gly、Arg或Leu，X₃₀为Asp、Gly或Glu，X₃₁为Tyr、Arg或Asn，X₃₂为Ala、Gly或Tyr，X₃₃为Met或Phe。 

应该理解，所述结合蛋白质包含如上所述的免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链或其片段。此外，应该理解，所述结合蛋白质为完整的抗体或其抗原结合片段、或生物合成的抗体位点。 

在某些实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含：(i)CDR_L1，其具有选自SEQ ID NO.8(1A3)、SEQ ID NO.28(2F8)、SEQ ID NO.38(3B6)、SEQ ID NO.58(1D3)和SEQ ID NO.68(1F3)的序列，(ii)CDR_L2，其具有选自SEQ IDNO.9(1A3)、SEQ ID NO.29(2F8)、SEQ ID NO.39(3B6)、SEQ IDNO.59(1D3)和SEQ ID NO.69(1F3)的序列，以及(iii)CDR_L3，其具有选自SEQ ID NO.10(1A3)、SEQ ID NO.30(2F8)、SEQ ID NO.40(3B6)、SEQ ID NO.60(1D3)和SEQ ID NO.70(1F3)的序列。可以将CDR序列插入人或人源化的FR之间。在其他实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包含选自SEQ ID NO.4(1A3)的残基21-127、SEQ ID NO.24(2F8)的残基20-131、SEQ ID NO.34(3B6)的残基23-129、SEQ ID NO.54(1D3)的残基21-127以及SEQ ID NO.64(1F3)的残基21-127中的氨基酸序列。 

在某些实施方案中，所述结合蛋白质包含免疫球蛋白重链可变区， 该免疫球蛋白重链可变区包含：(i)CDR_H1，其具有选自SEQ ID NO.5(1A3)、SEQ ID NO.25(2F8)、SEQ ID NO.35(3B6)、SEQ ID NO.55(1D3)和SEQ ID NO.65(1F3)的序列，(ii)CDR_H2，其具有选自SEQ IDNO.6(1A3)、SEQ ID NO.26(2F8)、SEQ ID NO.36(3B6)、SEQ IDNO.56(1D3)和SEQ ID NO.66(1F3)的序列，以及(iii)CDR_H3，其具有选自SEQ ID NO.7(1A3)、SEQ ID NO.27(2F8)、SEQ ID NO.37(3B6)、SEQ ID NO.57(1D3)和SEQ ID NO.67(1F3)的序列。可以将CDR序列插入人或人源化的FR之间。在另一实施方案中，所述的免疫球蛋白重链可变区包含选自SEQ ID NO.2(1A3)的残基20-141、SEQID NO.22.(2F8)的残基20-137、SEQ ID NO.32(3B6)的残基20-139、SEQ ID NO.52(1D3)的残基20-141以及SEQ ID NO.62(1F3)的残基20-141中的氨基酸序列。 

在另一方面，本发明提供一种分离的结合蛋白质，其结合人HGF，并且包含免疫球蛋白轻链可变区和免疫球蛋白重链可变区。所述分离的结合蛋白质与至少1种参照抗体竞争性地结合HGF，其中所述参照抗体选自：(i)具有SEQ ID NO.24(2F8)的残基20-131的免疫球蛋白轻链可变区和SEQ ID NO.22(2F8)的残基20-137的免疫球蛋白重链可变区的抗体，(ii)具有SEQ ID NO.34(3B6)的残基23-129的免疫球蛋白轻链可变区和SEQ ID NO.32(3B6)的残基20-139的免疫球蛋白重链可变区的抗体，以及(iii)具有SEQ ID NO.44(3D11)的残基23-128的免疫球蛋白轻链可变区和SEQ ID NO.42(3D11)的残基20-132的免疫球蛋白重链可变区的抗体。在某些条件下，所述结合蛋白质结合与参照抗体之一相同的HGF相表位。 

应该理解，上文所讨论的每种结合蛋白质都可以是完整的抗体，例如单克隆抗体。备选地，所述结合蛋白质可以为抗体的抗原结合片段，或者可以为生物合成的抗体结合位点。抗体片段包括Fab、Fab′、(Fab′)₂或Fv片段。用于制备这种抗体片段的技术是本领域的技术人员已知的。多种生物合成的抗体结合位点是本领域已知的，其包括，例如单一的Fv或sFv分子，例如美国专利序号5,476,786所述。其他 生物合成的抗体结合位点包括双特异性或双功能性的结合蛋白质，例如双特异性或双功能性的抗体，其为结合至少两种不同的抗原的抗体或抗体片段。例如，双特异性结合蛋白质可以结合HGF(例如人HGF)和其他目的抗原。用于制备双特异性抗体的方法在本领域中是已知的，其包括，例如通过融合杂交瘤或通过连接Fab′片段。例如参见Songsivilai等人(1990)CLIN.EXP.IMMUNOL.79：315-325；Kostelny等人(1992)J.IMMUNOL.148：1547-1553。 

本发明的结合蛋白质可以与包含在561位置处的半胱氨酸被精氨酸取代或者在555位置处的甘氨酸被谷氨酸取代的hHGF结合。 

在另一方面中，本法提供一种分离的结合蛋白质，其与人HGF结合的k_d是4.0x10^-5s^-1或更低、3.0x10^-5s^-1或更低、或者2.0x10^-5s^-1或更低。所述分离的蛋白质与人HGF结合的k_d是5.0x10^-5s^-1至0.5x10^-5s^-1、4.0x10^-5s^-1至1.0x10^-5s^-1、或3.0x10^-5s^-1至1.5x10^-5s^-1。在另一方面中，本发明提供一种分离的结合蛋白质，其与人HGF结合的K_D是100pM或更低、20pM或更低、10pM或更低、或者5pM或更低。所述分离的蛋白质与人HGF结合的K_D是100pM至5pM、20pM至5pM、15pM至10pM、20pM至10pM、或者15pM至5pM。除非另作说明外，通过实施例6中所述的方法和条件来测定K_D值。 

在另一方面，本法提供一种分离的结合人HGF的结合蛋白质，其中所述的抗体在37℃下与人HGF结合的K_D比在25℃下与人HGF结合的K_D低。所述结合蛋白质任选地在37℃下，以低于5pM的K_D与人HGF结合。 

在其他方面和实施方案中，所述结合蛋白质抑制hHGF与c-Met的结合。例如，当采用实施例7(a)中所述的方案进行测定时，所述结合蛋白质的IC₅₀(最大抑制的50％时的浓度)至少为约4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5和7.0nM。在某些其他的实施方案中，通过使用实施例7(b)所述的方法，所述结合蛋白质中和引入到4MBr-5细胞(ATCC，Catalog No.CCL208)中的HGF BrdU。 

当使用实施例7(b)中所述的方案进行分析时，所述结合蛋白质的 IC₅₀为50nM或更低、优选为45、40、35、30、25、20、15、10、5、1、0.5nM或更低。在某些其他的实施方案中，通过使用实施例9中所述的分析，所述结合蛋白质可用于抑制PC-3细胞(ATCC，Manassus，VACatalog No.CRL-1435)中HGF刺激的c-Met磷酸化。使用实施例9中所述的分析，所述结合蛋白质以2nM或更低的IC₅₀(参见表8)来抑制PC-3细胞中HGF刺激(1.25nM)的c-Met磷酸化。 

II-结合蛋白质的制备

可以使用本领域已知的方法以多种方式制备本发明的结合蛋白质。例如，通过使用市售的合成仪器以及本文所提供的序列信息化学合成编码轻链可变区和重链可变区的DNA分子。可以将这种合成的DNA分子连接至其他合适的核苷酸序列，例如包括编码序列的恒定区和表达控制序列，从而制备出编码所需结合蛋白质的常规基因表达构建体。制备所定义的基因构建体的方法为本领域的常规技术。备选地，可以使用合成的核酸探针通过常规的杂交技术或PCR技术由杂交瘤中克隆出本文所提供的序列，其中所述核酸探针的序列基于本文所提供的序列信息或者关于杂交瘤细胞中编码小鼠抗体的重链和轻链的基因的现有技术的序列信息。这种探针的制备和使用是本领域的普通技术。 

可以将编码所需的结合蛋白质的核酸引入(连接)到表达载体中，而可以通过本领域已知的标准的转染技术或转化技术将该表达载体引入到宿主细胞中。示例性的宿主细胞包括，例如大肠杆菌细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝癌细胞(例如Hep G2)和骨髓瘤细胞，这些细胞都不会另外产生免疫球蛋白。可以在允许宿主细胞表达目的基因(例如表达免疫球蛋白轻链可变区或重链可变区的基因)的条件下培养经转染的宿主细胞。使用本领域已知的技术收获所得的表达产物。 

具体的表达和纯化条件根据所使用的表达系统而改变。例如，如果在大肠杆菌中表达基因，首先要将该基因克隆到表达载体中。通过将工程改造的基因置于合适的细菌启动子(例如Trp或Tac)和信号序列(例如编码蛋白质A的片段B(FB)的序列)的下游来实现该过程。 所得的被表达出来的融合蛋白通常在细胞的细胞质中的折射体或包涵体内累积，并且可以通过弗氏压碎器(French press)或超声波法在破碎细胞后收获。然后，溶解折射体，并使用已经针对其他重组蛋白质建立的方法重折叠和剪切表达的蛋白质。 

如果在真核宿主细胞(例如骨髓瘤细胞或CHO细胞)中表达工程基因，首先将该工程基因插入到包含合适的真核启动子、分泌信号、免疫球蛋白增强子和多个内含子的表达载体中。该表达载体任选地包含编码所有恒定区或部分恒定区的序列，从而使整个或部分的重链或轻链被表达。可以使用已经建立的转染方法将所述的基因构建体转染到骨髓瘤细胞或CHO细胞中。这种转染细胞能够表达V_L或V_H片段、V_L-V_H的异源二聚体、V_H-V_L或V_L-V_H单链多肽、完整的免疫球蛋白重链或轻链、或其部分，其中每一个都可以与包含另一功能(例如细胞毒性)的蛋白质结构域相连。 

III-结合蛋白质的修饰

应该理解，根据所述结合蛋白质的目的用途，可以对该结合蛋白质进行修饰，从而优化其性能。例如，当所述结合蛋白质用作治疗剂时，可以对该结合蛋白质进行修饰，以减少其在目的接受者中的免疫原性。备选地或另外地，可以将所述结合蛋白质与另一蛋白质或肽(例如生长因子、细胞因子或细胞毒素)融合或偶联。可以使用本领域已知的常规的基因操作技术来实现这种修饰。 

用于减小抗体和抗体片段的抗原性的多种技术是本领域中已知的。这些技术可用于减小或消除本发明的结合蛋白质的抗原性。例如，当将所述结合蛋白质施用至人时，优选地对该结合蛋白质进行改造，以减少其在人体中的抗原性。该过程通常被称为人源化过程。优选地，人源化的结合蛋白质对抗原的亲和力与其衍生而来的、原始的非人源化的结合蛋白质对抗原的亲和力相同或基本相同。 

在一个公知的人源化方法中，产生嵌合蛋白质，其中来自一种物种(例如小鼠)的抗体的免疫球蛋白恒定区被得自第二种不同的物种(例如人)的免疫球蛋白恒定区所取代。在该实施例中，所得的抗体 为小鼠-人的嵌合体，其中人恒定区序列的免疫原性在原则上比对应的小鼠的序列的免疫原性要小。这种抗体工程学在(例如)Morrison等人(1984)PROC.NAT.ACAD.SCI.81：6851-6855；Neuberger等人(1984)NATURE 312：604-608；以及美国专利序号6,893,625(Robinson)、5,500,362(Robinson)和4,816,567(Cabilly)中有所描述。 

在另一方法(称为CDR移植)中，将目的抗体的轻链可变区CDR和重链可变区的CDR移植到另一种抗体的框架(FR)中。例如，将小鼠CDR移植到人FR序列中。在一些实施方案中，将抗HGF的抗体的轻链和重链可变区的CDR移植到人FR或共有人FR中。为了形成共有人FR，比对来自多个人重链或轻链的氨基酸序列的FR，以确定共有的氨基酸序列。CDR移植在例如美国专利序号7,022,500(Queen)、6,982,321(Winter)、6,180,370(Queen)、6,054,297(Carter)、5,693,762(Queen)、5,859,205(Adair)、5,693,761(Queen)、5,565,332(Hoogenboom)、5,585,089(Queen)、5,530,101(Queen)中；以及Jones等人(1986)NATURE 321：522-525；Riechmann等人(1988)NATURE 332：323-327；Verhoeyen等人(1988)SCIENCE 239：1534-1536；和Winter(1998)FEBS LETT 430：92-94中有所描述。 

在被称为“超级人源化”的方法中，通过移植的另一种形式来产生其中人免疫原性被减小或消除的抗体。在超级人源化中，基于人CDR与待人源化的小鼠抗体的CDR的结构相似度，从一组人种系的基因中选择人FR序列。该方法在，例如美国专利序号6,881,557(Foote)和Tan等人(2002)J.IMMUNOL 169：1119-1125中有所描述。 

其他减小免疫原性的方法包括用于产生人源化抗体的称为为“改形”、“高度嵌合(hyperchimerization)”或“镶饰(veneering)/重塑(resurfacing)”的技术。例如参见Vaswami等人(1998)ANNALSOF ALLERGY，ASTHMA，& IMMUNOL.81：105；Roguska等人(1996)PROT.ENGINEER 9：895-904；以及美国专利序号6,072,035(Hardman)。在镶饰/重塑方法中，小鼠抗体中接近表面的氨基酸残基被在人抗体中相 同位置处更频繁出现的氨基酸残基所取代。这种抗体重塑技术在，例如美国专利序号5,639,641(Pedersen)中有所描述。 

一种用于将小鼠抗体转化成适于人类医药用途形式的示例性方法被称为ACTIVMAB^TM技术(Vaccinex公司，Rochester，NY)，该技术涉及在哺乳动物细胞中表达抗体的以痘苗病毒为基础的载体。据称，将产生免疫球蛋白重链和轻链的高水平的组合多样性。例如参见美国专利序号6,706,477(Zauderer)、6,800,442(Zauderwer)和6,872,518(Zauderer)。 

另一种用于将小鼠抗体转化成适于人类使用的形式的示例性方法为由KaloBios Pharmaceuticals公司(Palo Alto，CA)商业化实施的技术。该技术涉及使用专有的人“受体”库来产生用于进行抗体筛选的“表位汇集”库 

用于将小鼠抗体修饰成适于人类医药用途形式的另一种示例性方法为HUMAN ENGINEERING^TM(HE^TM)技术，该技术是由XOMA(US)LLC公司商业化实施。例如参见国际申请公开序号WO 93/11794以及美国专利序号5,766,886、5,770,196、5,821,123和5,869,619。 

包括任何上述方法在内的任何合适的方法都可以用于减小或消除目的结合蛋白质的人免疫原性。 

此外，在小鼠中产生完整的人抗体是可能的。在该方法中，使用转基因小鼠制备人抗体，所述转基因小鼠中产生小鼠抗体的基因被产生人抗体的基因的实质性部分所取代。这种小鼠产生了人免疫球蛋白分子而不产生小鼠免疫球蛋白分子。例如参见WO 98/24893(Jacobovitz等人)和Mendez等人(1997)NATURE GENETICS 15：146-156。可以使用以下方法来产生完整的人抗HGF的单克隆抗体。使用目的抗原(例如HGF)免疫含有人免疫球蛋白基因的转基因小鼠。然后，从所述小鼠中获得该小鼠的淋巴细胞，之后将其与骨髓类细胞系融合，从而制备永生化杂交瘤细胞系。筛选并选择该杂交瘤细胞系，从而鉴定出产生HGF特异性抗体的杂交瘤细胞系。 

根据本发明的结合蛋白质的目的用途，将该结合蛋白质与其他分 子缀合。例如，如果所述结合蛋白质用作治疗剂，则随后将该结合蛋白质与另一试剂(例如介导或另外促进治疗的效应器分子)缀合。就所述的效应器为非基于蛋白质的试剂(例如小分子药物、放射性标签或放射性毒素)的情况，那么可以使用标准的体内偶联化学法将该试剂与所述结合蛋白质化学偶联。另一方面，如果所述的效应器分子为蛋白质或肽(例如酶、受体、毒素、生长因子、细胞因子或其他免疫调节剂)，那么可以使用体内偶联化学法使所述结合蛋白质与效应器化学偶联，或者可以使所述结合蛋白质与效应器偶联形成融合蛋白质。可以使用与部分II中讨论的方法相似的技术来构建和表达融合蛋白质。 

IV—结合蛋白质的用途

本文所述结合蛋白质可以用作诊断剂或治疗剂。 

(1)治疗应用

由于本发明的结合蛋白质中和HGF的活性，所以其可以用于多种治疗应用中。例如，本发明的某些结合蛋白质可用于预防或治疗高增殖疾病或紊乱(例如多种形式的癌症)。 

可以使用所述结合蛋白质来抑制或减少肿瘤细胞的增殖。在该方法中，将所述的肿瘤细胞暴露于治疗有效量的结合蛋白质中，从而抑制或减少肿瘤细胞的增殖。在某些实施方案中，所述结合蛋白质抑制肿瘤细胞增殖至少为50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％。 

在某些实施方案中，所述结合蛋白质用于抑制或减少肿瘤细胞的增殖，其中所述结合蛋白质降低了hHGF与c-Met的结合能力。在其他实施方案中，即使在所述结合蛋白质结合hHGF但没有实质性地抑制hHGF与c-Met的结合时，所述结合蛋白质用于抑制或减少肿瘤细胞的增殖，如表5和6中的抗体3B6所示。 

此外，所述结合蛋白质可用于抑制或减慢哺乳动物中肿瘤的生长或发展。在该方法中，向哺乳动物施用有效量的所述结合蛋白质，从而抑制或减慢哺乳动物中肿瘤的生长。因此，所述结合蛋白质可用于治疗，例如哺乳动物中的肿瘤。所述方法包括向哺乳动物施用治疗有 效量的所述结合蛋白质。所述结合蛋白质可以单独施用或者与另一种药物活性分子组合施用，以便治疗肿瘤。 

包括本发明的结合蛋白质可用于治疗多种HGF应答紊乱，包括例如肺癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、卵巢癌、头颈癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤、肝癌、胃癌、食道癌、肾癌、鼻咽癌、胰腺癌、间皮瘤、黑素瘤和成胶质细胞瘤中的HGF应答肿瘤细胞。 

如本文所用，“治疗”、“疗法”和“治疗处理”是指对治疗哺乳动物(特别是人)中疾病状态的的治疗处理，包括：(a)预防疾病状态在哺乳动物中发生，特别是在该哺乳动物倾向于发生疾病状态但是还没有被诊断出具有该疾病状态时；(b)抑制疾病状态，即，停止疾病状态的发展；和/或(c)减轻疾病状态，即，使疾病状态消退。 

总体而言，活性成分的治疗有效量的范围是约0.1mg/kg至约100mg/kg，任选地是约1mg/kg至约100mg/kg，任选地是约1mg/kg至10mg/kg。施用量取决于多种因素，例如待治疗的疾病或适应症的类型和程度、具体患者的总体健康状态、所递送的结合蛋白质的相对生物学效力、结合蛋白质的剂型、剂型中赋形剂的存在和种类、以及施用途径。为了快速达到所需的血液水平或组织水平，将初始施用剂量提高到最高水平的范围以外，或者使初始施用剂量低于最佳剂量并在治疗过程中根据具体的状况使每日施用剂量逐渐增加。例如在经设计由0.5mg/kg至20mg/kg范围的常规的I期剂量递增研究中，优化人的剂量。用药频率根据诸如施用途径、剂量和在治疗的疾病状态的因素而变化。示例性的用药频率为每天1次、每周1次和每2周1次。优选的施用途径为肠胃外施用，例如静脉内输注。基于单克隆抗体的药物的配制是本领域的普通技术。在本发明的一些实施方案中，将所述结合蛋白质(例如单克隆抗体)冻干，并在施用时，将其在缓冲盐水中重构。 

所述结合蛋白质可以单独施用，或者与其他的药物活性组分组合施用。所述的其他活性组分(例如免疫调节剂)可以与所述结合蛋白质一起施用，或者可以在所述结合蛋白质之前或之后施用。

包含治疗用途的结合蛋白质的制剂通常含有与可药用的载体组合的结合蛋白质。如本文使用的，“可药用的载体”是指缓冲剂、载体和赋形剂，在可靠的医学判断(sound medical judgment)范围内，所述的缓冲剂、载体和赋形剂适用于与人和动物组织相接触而没有过多的毒性、刺激、变态反应或者其他问题或并发症，与合理的效益/风险比相称。从与制剂中其他组分相容的意义上说，所述的载体应该是“可接受的”，并且对接受者是无害的。就这一点而言，可药用的载体旨在包括任何及所有的与药物施用方式相兼容的缓冲剂、溶剂、分散介质、包衣、等渗和吸收延迟剂等。用于药物活性物质的这些介质和试剂的使用是本领域已知的。 

所述的制剂可以方便地以剂量单位的形式存在，并且可以通过任何合适的方法(包括药剂学领域中已知的任何方法)制备。应该将本发明的药物组合物制成与其计划的施用途径相兼容。施用途径的实例包括肠胃外施用或非肠胃外施用，例如静脉内施用、皮内施用、吸入施用、透皮施用(局部)、透粘膜施用和直肠施用。可以通过药学领域中已知的任何方法(例如在Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th ed.(Mack Publishing Company,1990)中所述的方法)制备用于口腔施用或肠胃外施用的溶液。 

适用于口腔施用的制剂为以下形式：分离的单位，例如注射剂、胶囊、明胶胶囊、袋装(sachet)、片剂、药片或锭剂，每一种分离的单位中都含有预定量的结合蛋白质；粉末或颗粒组合物；在水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液；水包油的乳液或油包水的乳液。 

适用于肠胃外施用的制剂包括，例如以下成分：无菌稀释液，例如用于注射的水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成的溶剂；抗菌剂，例如苯甲醇或羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的试剂，例如氯化钠或葡萄糖。可以使用酸或碱(例如盐酸或氢氧化钠)来调节pH。肠胃外施用的制备物可以被封装在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑 料制成的多剂量的小瓶中。 

大体上，适用于注射用途的组合物包括水性溶液(在可溶于水的情况下)或分散液、以及用于即时制备无菌注射溶液或分散液的粉末。对于静脉内施用而言，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、CremophorELTM(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸盐缓冲液(PBS)。其在生产和储存的条件下应该是稳定的，并且应该被保存起来以防止诸如细菌和真菌之类的微生物的污染。所述的载体可以是含有，例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)、以及它们的合适的混合物的溶剂或分散介质。 

药物制剂优选为无菌的。例如通过无菌过滤膜的过滤进行灭菌。在冻干所述组合物的情况下，可以在冻干和重构之前或之后进行使用了上述方法的灭菌。一旦配制成药物组合物，其就可以以溶液、悬浮液、凝胶、乳液、固体或者脱水或冻干的粉末的形式储存在，例如小瓶中。 

(2)诊断性应用

无论何时将所述结合蛋白用于体外或体内的诊断，通常用可检测的部分直接标记或间接标记该结合蛋白质。可检测的部分是能够直接或间接产生可检测的信号的任何部分。例如，可检测的部分可以为：放射性同位素，如³氢(³H)、¹⁴碳(¹⁴C)、³²磷(³²P)、³⁵硫(³⁵S)或¹²⁵碘(¹²⁵I)；荧光化合物或化学发光化合物，如异硫氰酸荧光素、罗丹明或荧光素；酶，如碱性磷酸酶、β半乳糖苷酶或辣根过氧化物酶；自旋探针，如自旋标记；或有色颗粒，如乳胶或金颗粒。应该理解，使用本领域中已知的多种方法(例如，在Hunter等人(1962)NATURE 144：945；David等人(1974)BIOCHEMISTRY 13：1014；Pain等人(1981)J.IMMUNOL.METH.40：219；以及Nygren(1982)J.HISTOCHEM.ANDCYTOCHEM.30：407中所述的方法)将结合蛋白质与可检测的部分缀合。通过例如目测或者通过分光光度计或其他检测仪来检测所述的标记。 

可以在本领域中可用的多种免疫分析法中使用所述结合蛋白质。 示例性的免疫分析法包括，例如夹心免疫分析法、竞争性免疫分析法、免疫组化方法。 

在夹心免疫分析法中，使用了两种与分析物或目的抗原结合的抗体，例如，其中一种抗体被固定到固体支持物上，而另一种抗体游离在溶液中并用可检测的部分标记。当将含有抗原的样品引入到该体系中时，该抗原既与固定化的抗体结合又与标记的抗体结合，从而在支持物的表面上形成了“夹心”免疫复合物。通过洗去未结合的样品成分和多余的标记抗体来检测复合的蛋白质，并测定支持物表面上的蛋白质复合的标记抗体的量。备选地，通过用与游离抗体结合的可检测部分标记的第三抗体来检测游离于溶液中的抗体。免疫学分析的设计、理论和方案的详细综述可以在许多文章中找到，包括Butt等人(1984)PRACTICAL IMMUNOLOGY，Marcel Dekker，New York；Harlow等人，编辑(1988)ANTIBODIES，A LABORATORY APPROACH，Cold Spring HarborLaboratory；以及Diamandis等人，编辑(1996)IMMUNOASSAY，Academic Press，Boston。 

本发明包括标记的结合蛋白质可以用作体内的显像剂，因此，结合蛋白质将显像剂靶向接受者体内的目的特定组织。用于体内显像的优选的远距离可检测部分包括反射性原子锝^-99m(^99mTc)，其为一种半衰期为约6小时的γ发射体。还可以在体内显像中使用的非放射性部分包括硝基氧自旋标记、以及镧系元素和过渡金属离子，所有这些物质都能够诱导原位质子弛豫。除了免疫显像外，可以在标准的放射免疫治疗方法中使用复合的放射性部分，从而破坏靶细胞。用于高剂量放射免疫治疗的优选的核苷酸包括放射性原子⁹⁰钇(⁹⁰Yt)、¹³¹碘(¹³¹I)或 ¹¹¹铟(¹¹¹In)。可以使用显像领域中已知的偶联技术，用¹³¹I、¹¹¹In和^99mTc来标记结合蛋白质。类似的，用于制备和施用显像剂以及捕获和处理图像的方法在显像领域中是已知的，因此在本文中不再详述。类似的，用于进行基于抗体的免疫治疗的方法在本领域中是已知的。例如参见美国专利序号5,534,254。 

在整个说明书中，当将组合物描述成具有、包含或含有具体成分 时，包括组合物也基本由所述的成分组成或由所述的成分组成。类似的，当将方法描述成具有、包括或包含具体的处理步骤时，该方法也基本由所述的处理步骤组成或由所述的处理步骤组成。除非另作说明，否则步骤的次序或用于进行某些操作的次序是不重要的，只要本发明可操作的即可。 

此外，除非另作说明，否则可以同时实施两个或多个步骤或操作。 

实施例 

以下实施例讨论了多种抗hHGF单克隆抗体的制备和特性。 

实施例1—抗hHGF的单克隆抗体的制备 

本实施例描述了一定量抗hHGF的单克隆抗体的制备。 

根据多位点重复免疫(RIMMS)方法，由MBS公司(Portland，ME)进行免疫、融合和初筛。使用重组人HGF(R&D Systems，Minneapolis，MN；Catalog No.294-HGN-025)免疫5只AJ小鼠和5只Balb/c小鼠。选择在酶联免疫吸附检测(ELISA)中其血清显示出最高抗HGF活性的2只小鼠用于随后的融合。收集来自适合小鼠的脾和淋巴结。然后收集B细胞，并使其与骨髓瘤细胞系融合。在一个或多个平板上对融合产物进行系列稀释，直至接近成克隆性。通过ELISA，就结合hHGF对来自所得的融合物的上清液进行筛选。被鉴定为包含针对HGF的抗体的上清液，通过如以下实施例所述的体内功能测试进一步表征。选择一组杂交瘤，并对该杂交瘤亚克隆并扩增。然后，通过在标准条件下，在ProteinA/G树脂上的亲和层析纯化单克隆抗体。 

实施例2—抗hHGF的单克隆抗体的序列分析 

本实施例描述了实施例1中制备的抗hHGF的单克隆抗体的同种型和序列分析。 

a.HGF的鼠单克隆抗体同种型的测定

使用IsoStrip Mouse Monoclonal Antibody Isotyping试剂盒(Roche Applied Science)，根据制造商提供的说明书测定每种单克隆抗体的轻链种类和重链的同种型。

所有的抗体都被检测出包含Kappa免疫球蛋白轻链和IgG1免疫球蛋白重链。 

b.编码免疫球蛋白重链可变区和轻链可变区的核苷酸序列的测定

使用RNeasy Miniprep试剂盒(Qiagen Venlo，The Netherlands)，根据制造商提供的说明书从每种单克隆杂交瘤细胞系中提取总RNA。使用BD SMART^TM RACE cDNA Amplification试剂盒(Clontech)，根据制造商提供的说明书，使用寡核苷酸引物BD SMART II A(5′aagcagtggtatcaacgcagagtacgcggg 3′)(SEQ ID NO.85)和5′-RACECDS引物(5′tttttttttttttttttttttttttvn 3′，其中v＝a、g或c而n＝a、g、c或t)(SEQ ID NO.86)生成全长的第一链cDNA，以进行5′RACE(cDNA末端快速扩增)。 

使用Expand High-Fidelity PCR System(Roche AppliedScience)，根据制造商提供的说明书通过PCR(聚合酶链式反应)来扩增免疫球蛋白Kappa链的可变区和重链(IgG1)的可变区。使用5′寡核苷酸引物混合物Universal Primer Mix A (5′ctaatacgactcactatagggcaagcagtggtatcaacgcagagt 3′(SEQ ID NO.87)与5′ctaatacgactcactatagggc 3′(SEQ ID NO.88)的混合物)以及3′IgG1恒定区的特定引物(5′tatgcaaggcttacaaccaca 3′(SEQID NO.89)或5′gccagtggatagacagatgggggtgtcg 3′(SEQ ID NO.90))扩增重链可变区。使用5′寡核苷酸引物混合物Universal Primer MixA和3′Kappa恒定区特定引物(5′ctcattcctgttgaagctcttgacaat 3′(SEQ ID NO.91)或5′cgactgaggcacctccagatgtt 3′(SEQ ID NO.92))扩增Kappa链的可变区。 

通过琼脂糖凝胶电泳分离单独PCR产物，并使用Qiaquick GelPurification试剂盒(Qiagen)，根据制造商提供的说明书进行纯化。随后使用基于拓扑异构酶的克隆试剂盒TOPO TA Cloning

试剂盒(具有pCR

2.1-TOPO

载体)(Invitrogen，Carlsbad，CA)，根据制造商提供的说明书将PCR产物克隆到pCR2.1 TOPO质粒中，并使用标准 的转化技术，将所得质粒转化到DH5细菌中。由Agencourt Bioscience公司使用标准的双脱氧DNA测序方法，使用T7(5′TAATACGACTCACTATAGGG 3′)(SEQ ID NO.93)、M13正向引物(5′GTAAAACGACGGCCAGT3′)(SEQ ID NO.94)和M13反向引物(5′CAGGAAACAGCTATGACC 3′)(SEQ ID NO.95)对由转化的细菌克隆中分离的质粒DNA进行测序，从而鉴定可变区序列的顺序。利用Vector NTI软件(Invitrogen，Carlsbad，CA)和IMGT/V-Quest网络服务器(http://imgt.cines.fr/textes/vquest)对所得序列进行分析，从而鉴定和验证可变区的序列。 

c.编码1A3、1D3、1F3和2B8的Kappa以及IgG1链的免疫球蛋白重链和轻链恒定区序列的核苷酸序列的测定

使用正向引物5′ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggctgccaccatgaactttgggctcagattgattttcc 3′(划线部分为起始密码子)(SEQ ID NO.96)和反向引物5′ggggaccactttgtacaagaaagctgggttcatttaccaggagagtgggagagg 3′(划线部分为终止密码子)(SEQ ID NO.97)，从上述制备的cDNA中PCR扩增1A3、1D3和1F3的IgG1链的全长的cDNA。使用正向引物5′ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggctgccaccatgggatggagctatatcatcctcttt 3′(划线部分为起始密码子)(SEQ ID NO.98)和反向引物5′ggggaccactttgtacaagaaagctgggttcatttaccaggagagtgggagag 3′(划线部分为终止密码子)(SEQ ID NO.99)，从上述制备的cDNA中扩增2B8的IgG1链的全长cDNA。 

使用正向引物5′ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggctgccaccatggaatcacagactctggtcttcata 3′(划线部分为起始密码子)(SEQ ID NO.100)和反向引物5′ggggaccactttgtacaagaaagctgggtctaacactcattcctgttgaagctc    3′(划线部分为终止密码子)(SEQ ID NO.101)扩增2B8的Kappa链的全长的cDNA。通过Gateway BP重组反应(Invitrogen，Carlsbad，CA)，将PCR片段亚克隆到pDONR221(Invitrogen，Carlsbad，CA)中，并 由Agencourt Bioscience公司使用标准的双氧化DNA测序方法对所得的质粒进行测序，从而鉴定恒定区的序列，并进一步验证可变区的序列。 

d.序列分析

利用IMGT/V-QUEST网络服务器软件(http://imgt.cines.fr/textes/vquest/)鉴定可变区(正常文本)。根据确认位于测定的可变区的上游的阅读框中的起始密码子(ATG)来预测信号肽序列。鉴定信号肽序列并在其下标记下划线。 

每个可变区的最后一个核苷酸为由可变区/恒定区连接体所产生的下一个密码子的第一个碱基。该核苷酸包含在可变区内，这是因为其为外显子的一部分。以下所列的恒定区的氨基酸序列包含该连接体密码子的翻译产物。 

为了产生完整的重链或kappa链抗体序列，以下标注的可变区序列与其各自的恒定区序列结合(信号序列带有下划线)。 

(1)1A3重链可变区(SEQ ID NO.1) 

1   atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgaa 

61  gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaactctcc 

121 tgtgcagcct ctgaattcac tttcagtaac tattacatgt cttgggttcg ccagactcca 

181 gagaagaggc tgcagtgggt cgcatacatt agtcctggtg gtggtagctc ctactatcca 

241 gccagtgtga agggtcgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg 

301 caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgcaag acaaggggat 

361 ggttactacg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 

421 tcag 

(2)1A3 Kappa轻链可变区(SEQ ID NO.3) 

1   atgagtggtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt

61  gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgttt ctgtgggaga aactgtcacc 

121 atcacatgtc gagcaagtga gaatatttat agtaatttag catggtatca gcagaaacag 

181 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca 

241 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttccctca agatcaacag cctgcagtct 

301 gaagattttg ggacttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtacac gttcggaggg 

361 gggaccaagc tggaaataaa ac

(3)2B8重链可变区(SEQ ID NO.11) 

1   atgggatgga gctatatcat cctctttttg gtagcaacag ctacagatgt ccactcccag 

61  gtccaactgc agcagcctgg ggctgaactg gtgaagcctg ggacttcagt gaagctgtcc 

121 tgcaaggctt ctggctacac cttcaccacc tactggatgc actgggtgaa tcagaggcct 

181 ggacaaggcc ttgagtggat tggagagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat 

241 gagaagttca agagcaaggc cacactgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg 

301 caactcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtgcaag aaactatgtt 

361 ggtagcatct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc ag 

(4)2B8 Kappa轻链可变区(SEQ ID NO.13) 

1   atggaatcac aggactctggt cttcatatcc atactgctct ggttatatgg tgctgatggg

61  aacattgtaa tgacccaatc tcccaaatcc atgtccatgt cagtaggaga gagggtcacc 

121 ttgagctgca aggccagtga gaatgtggtt tcttatgtat cctggtatca acagaaacca 

181 gcgcagtctc ctaaactgct gatatacggg gcatccaacc ggaacactgg ggtccccgat 

241 cgcttcacag gcagtggatc tgcaacagat ttcactctga ccatcagcag tgtgcgggct 

301 gaagaccttg cagattatca ctgtgggcag agttacaact atccgtacac gttcggaggg 

361 gggaccaggc tggaaataaa ac 

(5)2F8重链可变区(SEQ ID NO.21) 

1   atggaatgga gctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactgccag 

61  gtccagctga agcagtctgg agctgagctg gtgaggcctg ggacttcagt gaagatgtcc 

121 tgcaaggctt ctggctacac cttcactacc tactatatac actgggtgaa tcagaggcct 

181 ggacagggcc ttgagtggat tggaaagatt ggtcctggaa gtggtagtac ttactacaat 

241 gagatgttca aagacaaggc cacattgact gtagacacat cctccagcac agcctacatg 

301 cagctcagca gcctgacatc tgacgactct gcggtctatt tctgtgcaag aaggggactg 

361 ggacgtggct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc ag 

(6)2F8 Kappa轻链可变区(SEQ ID NO.23) 

1   atggagacag acacaatcct gctatgggtg ctgctgctct gggttccagg ctccactggt

61  gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 

121 atctcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggta atagttatat caactggtac 

81  caacagaaac caggacagcc acccaaagtc ctcatctatg ttgcatccaa tctagaatct 

241 gggatcccag ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 

301 ctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc aaagtattga ggatcctccc 

361 acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg aaac

(7)3B6重链可变区(SEQ ID NO.31) 

1   atggaatggc cttgtatctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgaaggtgt ccactcccag 

61  gttcagctgc agcagtctgg ggctgaactg gtgaggcctg ggtcctcagt gaagatttcc 

121 tgcaaggctt ctggctatgt attcagtagc tactggatga actgggtgaa gcagaggcct 

181 ggacagggtc ttgagtggat tggacagatt tatcctggag atggtgatag taactacaat 

241 ggaaacttca agggtaaagc cacactgact gcagacaaat cctccagtac agcctacatg 

301 cagctcagca gcctaacatc tgaggactct gcggtctatt tctgtgcatc ccagctcggg 

361 ctacgtgaga actactttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctcag 

(8)3B6 Kappa轻链可变区(2个可能的ATG起始密码子(大写字母表示))(SEQ ID NO.33) 

1   ATGgacATGa ggacccctgc tcagtttctt ggaatcttgt tgctctggtt tccaggtatc

61  aaatgtgaca tcaagatgac ccagtctcca tcttccatgt atgcatctct aggagagaga 

121 gtcacaatca cttgcaaggc gagtcaggac attaaaagct atttaagctg gttccagcag 

181 aaaccaggga aatctcctaa gaccctgatc tatcgtgtaa acagattggt agatggggtc 

241 ccatcaaggt tcagtggcag tggatctggg caagattctt ctctcaccat caccagcctg 

301 gagaatgaag atatgggaat ttattattgt ctacagtatg atgagtttcc gttcacgttc 

361 ggagggggga ccaagctgga aataaagc 

(9)3D11重链可变区(SEQ ID NO.41) 

1   atggctgtcc cggtgctgtt cctctgcctg gttgcatttc caagctgtgt cctgtcccag 

61  gtacagctga aggagtcagg acctggcctg gtggcgccct cacagagcct gtccatcact 

121 tgcactgtct ctgggttttc attaaccagc tatagtttac actgggttcg ccagcctcca 

181 ggaaagggtc tggaatggct gggagtaata tgggctggtg gaaacacaaa ttataattcg 

241 tctctcatgt ccagactgac catcaggaaa gacaactcca agagccaagt tttcttaaaa 

301 atgaacagtc tgcaaactga tgacacagcc atgtactact gtgccagaga gaggtttgct 

361 tactggggcc aagggactct ggtcactgtc tctgcag

(10)3D11 Kappa轻链可变区(SEQ ID NO.43) 

1   atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcctcagt caaaatatcc

61  agaggacaaa ttgttctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatatcc aggggagaag 

121 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgcactggta ccagcagaag 

181 tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggcttc tggagtccct 

241 gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactccc tcacaatcag tagtatggag 

301 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaacccact cacgttcggt 

361 gctgggacca agctggagct gaaac 

(11)1D3重链可变区(SEQ ID NO.51) 

1   atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgaa

61  gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaactctcc 

121 tgtgcagcct ctggattcac tttcagtgac tattacatgt cttgggttcg ccagactcca 

181 gagaagaggc tggagtgggt cgcatacatt agtagtggtg gtggtagcac ctactatcca 

241 gacagtgtga agggtcgatt caccatctcc cgagacaatg ccaagaacac cctgtacctg 

301 caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatatatt actgtgtgag acaaggggat 

361 ggttattacg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt catcgtctcc 

421 tcag 

(12)1D3 Kappa轻链可变区(SEQ ID NO.53) 

1   atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgtcagatgt

61  gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc 

121 atcacatgtc gaacaagtga gaatatttac agtaatttag cgtggtatca gcagaaacag 

181 ggaaaatctc ctcagctcct aatctatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca 

241 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttccctca ggatcaacag cctgcagtct 

301 gaagattttg ggaggtatta ctgtcaacat ttttggggga ctccgtacac gttcggaggg 

361 gggaccaaac tggaaataaa ac

(13)1F3重链可变区(SEQ ID NO.61) 

1   atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgag 

61  gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagtctg gagggtccct gaaactctcc 

121 tgtgcggcct ctggattcac tttcagtaac tatttcatgt cttgggttcg ccagactcca 

181 gagaagaggc tggagtgggt cgcatatatt agtagtggtg gtggtagcac ctactatcca 

241 gacagtgtga agggtcgatt caccatctct agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg 

301 caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgtaag acaaggggat 

361 ggttactacg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 

421 tcag 

(14)1F3 Kappa轻链可变区(SEQ ID NO.63) 

1   atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt

61  gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc 

121 atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacag 

181 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgat gcaacacact taccagatgg tgtgccatca 

241 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttccctca agatcaacag cctgcagtct 

301 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtacac gtttggaggg 

361 gggaccagac tggaaattaa ac 

(15)3A12重链可变区(SEQ ID NO.71) 

1   atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgaa

61  gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaaatctcc 

121 tgtgcagcct ctggatttac tttcagtaac tatttcatgt cttgggttcg ccagactcca 

181 gagaagaggc tggagtgggt cgcatacatt agtagtggtg gtggtagcac ctactatcca 

241 gacagtgtga agggtcgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg 

301 caaatgaaca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgtaag acaaggagat 

361 ggttactatg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 

421 tcag

(16)3A12 Kappa轻链可变区(SEQ ID NO.73) 

1   atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt

61  gacatccaga tgactcagtc gccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc 

121 atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac attaatttag catggtatca gcagaaacag 

181 ggaaaatctc ctcagctcct ggtccatgct gcaacaaagt tagcagatgg tgtgccatca 

241 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag tattccctca agatcaacag cctgcagtct 

301 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtacac gttcggaggg 

361 gggaccaaac tagaaataaa ac 

(17)参照小鼠IgG1重链恒定区(J00453)(SEQ ID NO.81) 

1   ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc caaactaact 

61  ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg acagtgacct 

121 ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg gagtctgacc 

181 tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagccc tcggcccagc gagaccgtca 

241 cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt gtgcccaggg 

301 attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc ttcatcttcc 

361 ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg tgtgttgtgg 

421 tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat gatgtggagg 

481 tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc cgctcagtca 

541 gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa tgcagggtca 

601 acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa ggcagaccga 

661 aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag gataaagtca 

721 gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag tggcagtgga 

781 atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catgaacacg aatggctctt 

841 acttcgtcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga aatactttca 

901 cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc ctctcccact 

961 ctcctggtaa atga

(18)1A3、1D3、1F3和2B8的测定的小鼠IgG1重链恒定区(衍生自AJ系小鼠)(SEQ ID NO.82) 

1   ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc caaactaact 

61  ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg acagtgacct 

121 ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg cagtctgacc 

181 tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc gagaccgtca 

241 cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt gtgcccaggg 

301 attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc ttcatcttcc 

361 ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg tgtgttgtgg 

421 tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat gatgtggagg 

481 tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc cgctcagtca 

541 gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa tgcagggtca 

601 acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa ggcagaccga 

661 aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag gataaagtca 

721 gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag tggcagtgga 

781 atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca gatggctctt 

841 acttcgtcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga aatactttca 

901 cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc ctctcccact 

961 ctcctggtaa atga 

(19)参照小鼠Kappa轻链恒定区(V00807)以及1D3、1F3和2B8的测定的小鼠Kappa轻链恒定区(衍生自AJ系小鼠)(SEQ ID NO.83) 

1   gggctgatgc tgcaccaact gtatccatct tcccaccatc cagtgagcag ttaacatctg 

61  gaggtgcctc agtcgtgtgc ttcttgaaca acttctaccc caaagacatc aatgtcaagt 

121 ggaagattga tggcagtgaa cgacaaaatg gcgtcctgaa cagttggact gatcaggaca 

181 gcaaagacag cacctacagc atgagcagca ccctcacgtt gaccaaggac gagtatgaac 

241 gacataacag ctatacctgt gaggccactc acaagacatc aacttcaccc attgtcaaga 

301 gcttcaacag gaatgagtgt tag

(20)与1D3、1F3和2B8的情况相比含有1个改变的核苷酸(用下划线表示)的，1A3的测定的小鼠Kappa轻链恒定区(SEQ ID NO.84) 

1   gggctgatgc tgcaccaact gtatccatct tcccaccatc cagtgagcag ttaacatctg 

61  gaggtgcctc agtcgtgtgc ttcttgaaca acttctaccc caaagacatc aatgtcaagt 

121 ggaagattga tggcagtgaa cgacaaaatg gcgtcctgaa cagttggact gatcaggaca 

181 gcaaagacag cacctacagc atgagcagca ccctcatgtt gaccaaggac gagtatgaac 

241 gacataacag ctatacctgt gaggccactc acaagacatc aacttcaccc attgtcaaga 

301 gcttcaacag gaatgagtgt tag 

限定实施例1所制备的抗体的免疫球蛋白重链可变区的每个氨基酸序列都列于图2中。每个序列都与其他序列比对，并且在方框中确定了限定信号肽、CDR₁、CDR₂和CDR₃的序列。图3显示了每个抗体的、单独的CDR₁、CDR₂和CDR₃的比对。 

限定了实施例1所制备的每个抗体的免疫球蛋白轻链可变区的每个氨基酸序列都列于图4中。每个序列都与其他序列比对，并且在方框中确定了限定信号肽、CDR₁、CDR₂和CDR₃的序列。图5现实了用于每个抗体的、单独的CDR₁、CDR₂和CDR₃的排列。 

为了方便，表1提供了本实施例中所讨论的抗体序列与序列表中列出的那些序列之间的对应关系的索引表。 

表1 

  

SEQ ID NO.	蛋白质或核酸
		1	重链可变区1A3-核酸
2	重链可变区1A3-蛋白质
		3	轻(kappa)链可变区1A3-核酸
4	轻(kappa)链可变区1A3-蛋白质
		5	重链CDR11A3
6	重链CDR21A3
		7	重链CDR31A3
8	轻(kappa)CDR11A3

[0328]   

9	轻(kappa)CDR21A3
		10	轻(kappa)CDR31A3
11	重链可变区2B8-核酸
		12	重链可变区2B8-蛋白质
13	轻(kappa)链可变区2B8-核酸
		14	轻(kappa)链可变区2B8-蛋白质
15	重链CDR12B8
		16	重链CDR22B8
17	重链CDR32B8
		18	轻(kappa)CDR12B8
19	轻(kappa)CDR22B8
		20	轻(kappa)CDR32B8
21	重链可变区2F8-核酸
		22	重链可变区2F8-蛋白质
23	轻(kappa)链可变区2F8-核酸
		24	轻(kappa)链可变区2F8-蛋白质
25	重链CDR12F8
		26	重链CDR22F8
27	重链CDR32F8
		28	轻(kappa)CDR12F8
29	轻(kappa)CDR22F8
		30	轻(kappa)CDR32F8
31	重链可变区3B6-核酸
		32	重链可变区3B6-蛋白质
33	轻(kappa)链可变区3B6-核酸
		34	轻(kappa)链可变区3B6-蛋白质
35	重链CDR13B6
		36	重链CDR23B6
37	重链CDR33B6

[0329]   

38	轻(kappa)CDR13B6
		39	轻(kappa)CDR23B6
40	轻(kappa)CDR33B6
		41	重链可变区3D11-核酸
42	重链可变区3D11-蛋白质
		43	轻(kappa)链可变区3D11-核酸
44	轻(kappa)链可变区3D11-蛋白质
		45	重链CDR13D11
46	重链CDR23D11
		47	重链CDR33D11
48	轻(kappa)CDR13D11
		49	轻(kappa)CDR23D11
50	轻(kappa)CDR33D11
		51	重链可变区1D3-核酸
52	重链可变区1D3-蛋白质
		53	轻(kappa)链可变区1D3-核酸
54	轻(kappa)链可变区1D3-蛋白质
		55	重链CDR11D3
56	重链CDR21D3
		57	重链CDR31D3
58	轻(kappa)CDR11D3
		59	轻(kappa)CDR21D3
60	轻(kappa)CDR31D3
		61	重链可变区1F3-核酸
62	重链可变区1F3-蛋白质
		63	轻(kappa)链可变区1F3-核酸
64	轻(kappa)链可变区1F3-蛋白质
		65	重链CDR11F3
66	重链CDR21F3

[0330]   

67	重链CDR31F3
		68	轻(kappa)CDR11F3
69	轻(kappa)CDR21F3
		70	轻(kappa)CDR31F3
71	重链可变区3A12-核酸
		72	重链可变区3A12-蛋白质
73	轻(kappa)链可变区3A12-核酸
		74	轻(kappa)链可变区3A12-蛋白质
75	重链CDR13A12
		76	重链CDR23A12
77	重链CDR33A12
		78	轻(kappa)CDR13A12
79	轻(kappa)CDR23A12
		80	轻(kappa)CDR33A12

此外，为了方便，以下序列代表了本实施例所述的每个抗体的实际的或者预计的全长重链序列和轻链序列(即，包含可变区序列和恒定区序列二者)。注意，小鼠抗体2F8、3A12、3B6和3D11的恒定区没有测序，但是假定它们包含与1D3、1F3和2B8抗体(其经过测序)相同的恒定区序列，这是因为它们都衍生自AJ系小鼠。但是，应该理解，本文所述的可变区序列可以与本领域技术人员已知的多个其他恒定区序列中的每一个序列连接，从而产生有活性的全长免疫球蛋白重链和轻链。

(1)编码全长1A3重链序列(1A3重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.122) 

1    atgaactttg ggctcagatt gattttccttgtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgaa 

61   gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaactctcc 

121  tgtgcagcct ctgaattcac tttcagtaac tattacatgt cttgggttcg ccagactcca 

181  gagaagaggc tgcagtgggt cgcatacatt agtcctggtg gtggtagctc ctactatcca 

241  gccagtgtga agggtcgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg 

301  caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgcaag acaaggggat 

361  ggttactacg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 

421  tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact 

481  aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg 

541  acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct 

601  gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc 

661  gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc 

721  agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc 

781  ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt 

841  gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg 

901  gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca 

961  gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg 

1021 gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga 

1081 ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa 

1141 gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag 

1201 tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc 

1261 tcttacttcg tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact 

1321 ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc 

1381 cactctcctg gtaaatga 

(2)限定了全长1A3重链序列(1A3重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.123) 

1   evqlvesggg lvqpggslkl scaaseftfs nyymswvrqt pekrlqwvay ispgggssyy 

61  pasvkgrfti srdnakntly lqmsslksed tamyycargg dgyygdyamd ywgqgtsvtv 

121 ssakttppsv yplapgsaaq tnsmvtlgcl vkgyfpepvt vtwnsgslss gvhtfpavlq 

181 sdlytlsssv tvpsstwpse tvtcnvahpa sstkvdkkiv prdcgckpci ctvpevssvf 

241 ifppkpkdvl titltpkvtc vvvdiskddp evqfswfvdd vevhtaqtqp reeqfnstfr 

301 svselpimhq dwlngkefkc rvnsaafpap iektisktkg rpkapqvyti pppkeqmakd 

361 kvsltcmitd ffpeditvew qwngqpaeny kntqpimdtd gsyfvyskln vqksnweagn 

421 tftcsvlheg lhnhhteksl shspgk 

(3)编码全长1A3轻链序列(1A3 Kappa可变区和恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.124) 

1   atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt

61  gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgttt ctgtgggaga aactgtcacc 

121 atcacatgtc gagcaagtga gaatatttat agtaatttag catggtatca gcagaaacag 

181 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca 

241 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttccctca agatcaacag cctgcagtct 

301 gaagattttg ggacttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtacac gttcggaggg 

361 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 

421 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 

481 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 

541 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcatg 

601 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 

661 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag

(4)限定了全长1A3轻链序列(1A3 Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.125) 

1   diqmtqspas lsvsvgetvt itcraseniy snlawyqqkq gkspqllvya atnladgvps 

61  rfsgsgsgtq fslkinslqs edfgtyycqh fwgtpytfgg gtkleikrad aaptvsifpp 

121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlm 

181 ltkdeyerhn sytceathkt  stspivksfn rnec 

(5)编码全长2B8重链序列(2B8重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.126) 

1    atgggatgga gctatatcat cctctttttg gtagcaacag ctacagatgt ccactcccag  

61   gtccaactgc agcagcctgg ggctgaactg gtgaagcctg ggacttcagt gaagctgtcc 

121  tgcaaggctt ctggctacac cttcaccacc tactggatgc actgggtgaa tcagaggcct 

181  ggacaaggcc ttgagtggat tggagagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat 

241  qagaagttca agagcaaggc cacactgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg 

301  caactcagca gcctgacatc tgaggactct qcggtctatt actgtgcaag aaactatgtt 

361  ggtagcatct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc agccaaaacg 

421  acacccccat ctgtctatcc actggcccct ggatctgctg cccaaactaa ctccatggtg 

481  accctgggat gcctggtcaa gggctatttc cctgagccag tgacagtgac ctggaactct 

541  ggatccctgt ccagcggtgt gcacaccttc ccagctgtcc tgcagtctga cctctacact 

601  ctgagcagct cagtgactgt cccctccagc acctggccca gcgagaccgt cacctgcaac 

661  gttgcccacc cggccagcag caccaaggtg gacaagaaaa ttgtgcccag ggattgtggt 

721  tgtaagcctt gcatatgtac agtcccagaa gtatcatctg tcttcatctt ccccccaaag 

781  cccaaggatg tgctcaccat tactctgact cctaaggtca cgtgtgttgt ggtagacatc 

841  agcaaggatg atcccgaggt ccagttcagc tggtttgtag atgatgtgga ggtgcacaca 

901  gctcagacgc aaccccggga ggagcagttc aacagcactt tccgctcagt cagtgaactt 

961  cccatcatgc accaggactg gctcaatggc aaggagttca aatgcagggt caacagtgca 

1021 gctttccctg cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca aaggcagacc gaaggctcca 

1081 caggtgtaca ccattccacc tcccaaggag cagatggcca aggataaagt cagtctgacc 

1141 tgcatgataa cagacttctt ccctgaagac attactgtgg agtggcagtg gaatgggcag 

1201 ccagcggaga actacaagaa cactcagccc atcatggaca cagatggctc ttacttcgtc 

1261 tacagcaagc tcaatgtgca gaagagcaac tgggaggcag gaaatacttt cacctgctct 

1321 gtgttacatg agggcctgca caaccaccat actgagaaga gcctctccca ctctcctggt 

1381 aaatga 

(6)限定了全长2B8重链序列(2B8重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.127) 

1   qvqlqqpgae lvkpgtsvkl sckasgytft tywmhwvnqr pgqglewige inptnghtny 

61  nekfkskatl tvdkssstay mqlssltsed savyycarny vgsifdywgq gttltvssak 

121 ttppsvypla pgsaaqtnsm vtlgclvkgy fpepvtvtwn sgslssgvht fpavlqsdly 

181 tlsssvtvps stwpsetvtc nvahpasstk vdkkivprdc gckpcictvp evssvfifpp 

241 kpkdvltitl tpkvtcvvvd iskddpevqf swfvddvevh taqtqpreeq fnstfrsvse 

301 lpimhqdwln gkefkcrvns aafpapiekt isktkgrpka pqvytipppk eqmakdkvsl 

361 tcmitdffpe ditvewqwng qpaenykntq pimdtdgsyf vysklnvqks nweagntftc 

421 svlheglhnh htekslshsp gk

(7)编码全长2B8轻链序列(2B8 Kappa轻链可变区和恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.128) 

1   atggaatcac agactctggt cttcatatcc atactgctct ggttatatgg tgctgatggg

61  aacattgtaa tgacccaatc tcccaaatcc atgtccatgt cagtaggaga gagggtcacc 

121 ttgagctgca aggccagtga gaatgtggtt tcttatgtat cctggtatca acagaaacca 

181 gcgcagtctc ctaaactgct gatatacggg gcatccaacc ggaacactgg ggtccccgat 

241 cgcttcacag gcagtggatc tgcaacagat ttcactctga ccatcagcag tgtgcgggct 

301 gaagaccttg cagattatca ctgtgggcag agttacaact atccgtacac gttcggaggg 

361 gggaccaggc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 

421 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 

481 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 

541 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 

601 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 

661 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 

(8)限定了全长2B8轻链序列(2B8 Kappa可变区和恒定区)的蛋白序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.129) 

1   nivmtqspks msmsvgervt lsckasenw syvswyqqkp aqspklliyg asnrntgvpd 

61  rftgsgsatd ftltissvra edladyhcgq synypytfgg gtrleikrad aaptvsifpp 

121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt 

181 ltkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec 

(9)编码全长2F8重链序列(2F8重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.130) 

1    atggaatgga gctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactgccag 

61   gtccagctga agcagtctgg agctgagctg gtgaggcctg ggacttcagt gaagatgtcc 

121  tgcaaggctt ctggctacac cttcactacc tactatatac actgggtgaa tcagaggcct 

181  ggacagggcc ttgagtggat tggaaagatt ggtcctggaa gtggtagtac ttactacaat 

241  gagatgttca aagacaaggc cacattgact gtagacacat cctccagcac agcctacatg 

301  cagctcagca gcctgacatc tgacgactct gcggtctatt tctgtgcaag aaggggactg 

361  ggacgtggct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc agccaaaacg 

421  acacccccat ctgtctatcc actggcccct ggatctgctg cccaaactaa ctccatggtg 

481  accctgggat gcctggtcaa gggctatttc cctgagccag tgacagtgac ctggaactct 

541  ggatccctgt ccagcggtgt gcacaccttc ccagctgtcc tgcagtctga cctctacact 

601  ctgagcagct cagtgactgt cccctccagc acctggccca gcgagaccgt cacctgcaac 

661  gttgcccacc cggccagcag caccaaggtg gacaagaaaa ttgtgcccag ggattgtggt 

721  tgtaagcctt gcatatgtac agtcccagaa gtatcatctg tcttcatctt ccccccaaag 

781  cccaaggatg tgctcaccat tactctgact cctaaggtca cgtgtgttgt ggtagacatc 

841  agcaaggatg atcccgaggt ccagttcagc tggtttgtag atgatgtgga ggtgcacaca 

901  gctcagacgc aaccccggga ggagcagttc aacagcactt tccgctcagt cagtgaactt 

961  cccatcatgc accaggactg gctcaatggc aaggagttca aatgcagggt caacagtgca 

1021 gctttccctg cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca aaggcagacc gaaggctcca 

1081 caggtgtaca ccattccacc tcccaaggag cagatggcca aggataaagt cagtctgacc 

1141 tgcatgataa cagacttctt ccctgaagac attactgtgg agtggcagtg gaatgggcag 

1201 ccagcggaga actacaagaa cactcagccc atcatggaca cagatggctc ttacttcgtc 

1261 tacagcaagc tcaatgtgca gaagagcaac tgggaggcag gaaatacttt cacctgctct 

1321 gtgttacatg agggcctgca caaccaccat actgagaaga gcctctccca ctctcctggt 

1381 aaatga

(10)限定了全长2F8重链序列(2F8重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.131) 

1   qvqlkqsgae lvrpgtsvkm sckasgytft tyyihwvnqr pgqglewigk igpgsgstyy 

61  nemfkdkatl tvdtssstay mqlssltsdd savyfcarrg 1grgfdywgq gttltvssak 

121 ttppsvypla pgsaaqtnsm vtlgclvkgy fpepvtvtwn sgslssgvht fpavlqsdly 

181 tlsssvtvps stwpsetvtc nvahpasstk vdkkivprdc gckpcictvp evssvfifpp 

241 kpkdvltitl tpkvtcvvvd iskddpevqf swfvddvevh taqtqpreeq fnstfrsvse 

301 lpimhqdwln gkefkcrvns aafpapiekt isktkgrpka pqvytipppk eqmakdkvsl 

361 tcmitdffpe ditvewqwng qpaenykntq pimdtdgsyf vysklnvqks nweagntftc 

421 svlheglhnh htekslshsp gk 

(11)编码全长2F8轻链序列(2F8 Kappa可变区和恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.132) 

1   atggagacag acacaatcct gctatgggtg ctgctgctct gggttccagg ctccactggt

61  gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 

121 atctcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggta atagttatat caactggtac 

181 caacagaaac caggacagcc acccaaagtc ctcatctatg ttgcatccaa tctagaatct 

241 gggatcccag ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 

301 cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc aaagtattga ggatcctccc 

361 acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 

421 atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg 

481 aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa 

541 aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc 

601 agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc 

661 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgttag 

(12)限定了全长2F8轻链序列(2F8 Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.133) 

1   divltqspas lavslgqrat isckasqsvd ydgnsyinwy qqkpgqppkv liyvasnlcs 

61  giparfsgsg sgtdftlnih pveeedaaty ycqqsiedpp tfgagtklel kradaaptvs 

121 ifppsseqlt sggasvvcfl nnfypkdinv kwkidgserq ngvlnswtdq dskdstysms 

181 stltltkdey erhnsytcea thktstspiv ksfnrnec 

(13)编码全长3B6重链序列(3B6重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.134) 

1   atggaatggc cttgtatctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgaaggtgt ccactcccag 

61  gttcagctgc agcagtctgg ggctgaactg gtgaggcctg ggtcctcagt gaagatttcc 

121 tgcaaggctt ctggctatgt attcagtagc tactggatga actgggtgaa gcagaggcct 

181 ggacagggtc ttgagtggat tggacagatt tatcctggag atggtgatag taactacaat

241  ggaaacttca agggtaaagc cacactgact gcagacaaat cctccagtac agcctacatg 

301  cagctcagca gcctaacatc tgaggactct gcggtctatt tctgtgcatc ccagctcggg 

361  ctacgtgaga actactttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctcagcc 

421  aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc 

481  atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctgg 

541  aactctggat ccctgtccag cggtgtgcac accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc 

601  tacactctga gcagctcagt gactgtcccc tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc 

661  tgcaacgttg cccacccggc cagcagcacc aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat 

721  tgtggttgta agccttgcat atgtacagtc ccagaagtat catctgtctt catcttcccc 

781  ccaaagccca aggatgtgct caccattact ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta 

841  gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg 

901  cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt 

961  gaacttccca tcatgcacca ggactggctc aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac 

1021 agtgcagctt tccctgcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag 

1081 gctccacagg tgtacaccat tccacctccc aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt 

1141 ctgacctgca tgataacaga cttcttccct gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat 

1201 gggcagccag cggagaacta caagaacact cagcccatca tggacacaga tggctcttac 

1261 ttcgtctaca gcaagctcaa tgtgcagaag agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc 

1321 tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac caccatactg agaagagcct ctcccactct 

1381 cctggtaaat ga 

(14)限定了全长3B6重链序列(3B6重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.135) 

1   qvqlqqsgae lvrpgssvki sckasgyvfs sywmnwvkqr pgqglewigq iypgdgdsny 

61  ngnfkgkatl tadkssstay mqlssltsed savyfcasql glrenyfdyw gqgttltvss 

121 akttppsvyp lapgsaaqtn smvtlgclvk gyfpepvtvt wnsgslssgv htfpavlqsd 

181 lytlsssvtv psstwpsetv tcnvahpass tkvdkkivpr dcgckpcict vpevssvfif 

241 ppkpkdvlti tltpkvtcvv vdiskddpev qfswfvddve vhtaqtqpre eqfnstfrsv 

301 selpimhqdw lngkefkcrv nsaafpapie ktisktkgrp kapqvytipp pkeqmakdkv 

361 sltcmitdff peditvewqw ngqpaenykn tqpimdtdgs yfvysklnvq ksnweagntf 

421 tcsvlheglh nhhtekslsh spgk 

(15)编码全长3B6轻链序列(3B6 Kappa可变区和恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.136) 

1   ATGgacATGa ggacccctgc tcagtttctt ggaatcttgt tgctctggtt tccaggtatc

61  aaatgtgaca tcaagatgac ccagtctcca tcttccatgt atgcatctct aggagagaga 

121 gtcacaatca cttgcaaggc gagtcaggac attaaaagct atttaagctg gttccagcag 

181 aaaccaggga aatctcctaa gaccctgatc tatcgtgtaa acagattggt agatggggtc 

241 ccatcaaggt tcagtggcag tggatctggg caagattctt ctctcaccat caccagcctg 

301 gagaatgaag atatgggaat ttattattgt ctacagtatg atgagtttcc gttcacgttc 

361 ggagggggga ccaagctgga aataaagcgg gctgatgctg caccaactgt atccatcttc 

421 ccaccatcca gtgagcagtt aacatctgga ggtgcctcag tcgtgtgctt cttgaacaac 

481 ttctacccca aagacatcaa tgtcaagtgg aagattgatg gcagtgaacg acaaaatggc 

541 gtcctgaata gttggactga tcaggacagc aaagacagca cctacagcat gagcagcacc 

601 ctcacgttga ccaaggacga gtatgaacga cataacagct atacctgtga ggccactcac 

661 aagacatcaa cttcacccattgtcaagagc ttcaacagga atgagtgtta g 

(16)限定了全长3B6轻链序列(3B6 Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.137) 

1   dikmtqspss myaslgervt itckasqdik sylswfqqkp gkspktliyr vnrlvdgvps 

61  rfsgsgsgqd ssltitslen edmgiyyclq ydefpftfgg gtkleikrad aaptvsifpp 

121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt 

181 ltkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec 

(17)编码全长3D11重链序列(3D11重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.138)

1    atggctgtcc cggtgctgtt cctctgcctg gttgcatttc caagctgtgt cctgtcccag 

61   gtacagctga aggagtcagg acctggcctg gtggcgccct cacagagcct gtccatcact 

121  tgcactgtct ctgggttttc attaaccagc tatagtttac actgggttcg ccagcctcca 

181  ggaaagggtc tggaatggct gggagtaata tgggctggtg gaaacacaaa ttataattcg 

241  tctctcatgt ccagactgac catcaggaaa gacaactcca agagccaagt tttcttaaaa 

301  atgaacagtc tgcaaactga tgacacagcc atgtactact gtgccagaga gaggtttgct 

361  tactggggcc aagggactct ggtcactgtc tctgcagcca aaacgacacc cccatctgtc 

421  tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa actaactcca tggtgaccct gggatgcctg 

481  gtcaagggct atttccctga gccagtgaca gtgacctgga actctggatc cctgtccagc 

541  ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag tctgacctct acactctgag cagctcagtg 

601  actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc 

661  agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata 

721  tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc 

781  accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc 

841  gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc 

901  cgggaggagc agttcaacag cactttccgc tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag 

961  gactggctca atggcaagga gttcaaatgc agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc 

1021 atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt 

1081 ccacctccca aggagcagat ggccaaggat aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac 

1141 ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac 

1201 aagaacactc agcccatcat ggacacagat ggctcttact tcgtctacag caagctcaat 

1261 gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat actttcacct gctctgtgtt acatgagggc 

1321 ctgcacaacc accatactga gaagagcctc tcccactctc ctggtaaatg a 

(18)限定了全长3D11重链序列(3D11重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.139) 

1   qvqlkesgpg lvapsqslsi tctvsgfslt syslhwvrqp pgkglewlgv iwaggntnyn 

61  sslmsrltir kdnsksqvfl kmnslqtddt amyycarerf aywgqgtlvt vsaakttpps 

121 vyplapgsaa qtnsmvtlgc lvkgyfpepv tvtwnsgsls sgvhtfpavl qsdlytlsss 

181 vtvpsstwps etvtcnvahp asstkvdkki vprdcgckpc ictvpevssv fifppkpkdv 

241 ltitltpkvt cvvvdiskdd pevqfswfvd dvevhtaqtq preeqfnstf rsvselpimh 

301 qdwlngkefk crvnsaafpa piektisktk grpkapqvyt ipppkeqmak dkvsltcmit 

361 dffpeditve wqwngqpaen ykntqpimdt dgsyfvyskl nvqksnweag ntftcsvlhe 

421 glhnhhteks lshspgk 

(19)编码全长3D11轻链序列(3D11 Kappa可变区和恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.140) 

1   atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcctcagt caaaatatcc

61  agaggacaaa ttgttctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatatcc aggggagaag 

121 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgcactggta ccagcagaag 

181 tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggcttc tggagtccct 

241 gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactccc tcacaatcag tagtatggag 

301 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaacccact cacgttcggt 

361 gctgggacca agctggagct gaaacgggct gatgctgcac caactgtatc catcttccca 

421 ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc 

481 taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc 

541 ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct acagcatgag cagcaccctc 

601 acgttgacca aggacgagta tgaacgacat aacagctata cctgtgaggc cactcacaag 

661 acatcaactt cacccattgt caagagcttc aacaggaatg agtgttag 

(20)限定了全长3D11轻链序列(3D11 Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.141) 

1   qivltqspai msaypgekvt mtcsasssvs ymhwyqqksg tspkrwiydt sklasgvpar 

61  fsgsgsgtsy sltissmeae daatyycqqw ssnpltfgag tklelkrada aptvsifpps 

121 seqltsggas vvcflnnfyp kdinvkwkid gserqngvln swtdqdskds tysmsstltl 

181 tkdeyerhns ytceathkts tspivksfnr nec

(21)编码全长1D3重链序列(1D3重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.142) 

1   atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgaa 

61   gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaactctcc 

121  tgtgcagcct ctggattcac tttcagtgac tattacatgt cttgggttcg ccagactcca 

181  gagaagaggc tggagtgggt cgcatacatt agtagtggtg gtggtagcac ctactatcca 

241  gacagtgtga agggtcgatt caccatctcc cgagacaatg ccaagaacac cctgtacctg 

301  caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatatatt actgtgtgag acaaggggat 

361  ggttattacg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt catcgtctcc 

421  tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact 

481  aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg 

541  acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct 

601  gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc 

661  gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc 

721  agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc 

781  ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt 

841  gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg 

901  gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca 

961  gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg 

1021 gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga 

1081 ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa 

1141 gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag 

1201 tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc 

1261 tcttacttcg tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact 

1321 ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc 

1381 cactctcctg gtaaatga 

(22)限定了全长1D3重链序列(1D3重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.143) 

1   evqlvesggg lvqpggslkl scaasgftfs dyymswvrqt pekrlewvay issgggstyy 

61  pdsvkgrfti srdnakntly lqmsslksed taiyycvrqg dgyygdyamd ywgqgtsviv 

121 ssakttppsv yplapgsaaq tnsmvtlgcl vkgyfpepvt vtwnsgslss gvhtfpavlq 

181 sdlytlsssv tvpsstwpse tvtcnvahpa sstkvdkkiv prdcgckpci ctvpevssvf 

241 ifppkpkdvl titltpkvtc vvvdiskddp evqfswfvdd vevhtaqtqp reeqfnstfr 

301 svselpimhq dwlngkefkc rvnsaafpap iektisktkg rpkapqvyti pppkeqmakd 

361 kvsltcmitd ffpeditvew qwngqpaeny kntqpimdtd gsyfvyskln vqksnweagn 

421 tftcsvlheg lhnhhteksl shspgk 

(23)编码全长1D3轻链序列(1D3 Kappa可变区和恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.144) 

1   atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgtcagatgt

61  gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc 

121 atcacatgtc gaacaagtga gaatatttac agtaatttag cgtggtatca gcagaaacag 

181 ggaaaatctc ctcagctcct aatctatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca 

241 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttccctca ggatcaacag cctgcagtct 

301 gaagattttg ggaggtatta ctgtcaacat ttttggggga ctccgtacac gttcggaggg 

361 gggaccaaac tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 

421 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 

481 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 

541 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 

601 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 

661 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 

(24)限定了全长1D3轻链序列(1D3 Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.145)

1   diqmtqspas lsvsvgetvt itcrtseniy snlawyqqkq gkspqlliya atnladgvps 

61  rfsgsgsgtq fslrinslqs edfgryycqh fwgtpytfgg gtkleikrad aaptvsifpp 

121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt 

181 ltkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec 

(25)编码全长1F3重链序列(1F3重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.146) 

1    atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgag 

61   gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagtctg gagggtccct gaaactctcc 

121  tgtgcggcct ctggattcac tttcagtaac tatttcatgt cttgggttcg ccagactcca 

181  gagaagaggc tggagtgggt cgcatatatt agtagtggtg gtggtagcac ctactatcca 

241  gacagtgtga agggtcgatt caccatctct agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg 

301  caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgtaag acaaggggat 

361  ggttactacg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 

421  tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact 

481  aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg 

541  acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct 

601  gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc 

661  gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc 

721  agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc 

781  ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt 

841  gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg 

901  gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca 

961  gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg 

1021 gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga 

1081 ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa 

1141 gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag 

1201 tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc 

1261 tcttacttcg tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact 

1321 ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc 

1381 cactctcctg gtaaatga 

(26)限定了全长1F3重链序列(1F3重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.147) 

1   evqlvesggg lvqsggslkl scaasgftfs nyfmswvrqt pekrlewvay issgggstyy 

61  pdsvkgrfti srdnakntly lqmsslksed tamyycvrqg dgyygdyamd ywgqgtsvtv 

121 ssakttppsv yplapgsaaq tnsmvtlgcl vkgyfpepvt vtwnsgslss gvhtfpavlq 

181 sdlytlsssv tvpsstwpse tvtcnvahpa sstkvdkkiv prdcgckpci ctvpevssvf 

241 ifppkpkdvl titltpkvtc vvvdiskddp evqfswfvdd vevhtaqtqp reeqfnstfr 

301 svselpimhq dwlngkefkc rvnsaafpap iektisktkg rpkapqvyti pppkeqmakd 

361 kvsltcmitd ffpeditvew qwngqpaeny kntqpimdtd gsyfvyskln vqksnweagn 

421 tftcsvlheg lhnhhteksl shspgk 

(27)编码全长1F3轻链序列(1F3 Kappa可变区和恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.148)

1   atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt

61  gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc 

121 atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacag 

181 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgat gcaacacact taccagatgg tgtgccatca 

241 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttccctca agatcaacag cctgcagtct 

301 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtacac gtttggaggg 

361 gggaccagac tggaaattaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 

421 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 

481 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 

541 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 

601 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 

661 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 

(28)限定了全长1F3轻链序列(1F3 Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.149) 

1   diqmtqspas lsvsvgetvt itcraseniy snlawyqqkq gkspqllvyd athlpdgvps 

61  rfsgsgsgtq fslkinslqs edfgsyycqh fwgtpytfgg gtrleikrad aaptvsifpp 

121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt 

181 ltkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec 

(29)编码全长3A12重链序列(3A12重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.150) 

1    atgaacttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgaa 

61   gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaaatctcc 

121  tgtgcagcct ctggatttac tttcagtaac tatttcatgt cttgggttcg ccagactcca 

181  gagaagaggc tggagtgggt cgcatacatt agtagtggtg gtggtagcac ctactatcca 

241  gacagtgtga agggtcgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg 

301  caaatgaaca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgtaag acaaggagat 

361  ggttactatg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 

421  tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact 

481  aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg 

541  acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct 

601  gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc 

661  gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc 

721  agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc 

781  ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt 

841  gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg 

901  gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca 

961  gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg 

1021 gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga 

1081 ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa 

1141 gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acsttactgt ggagtggcag 

1201 tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc 

1261 tcttacttcg tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact 

1321 ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc 

1381 cactctcctg gtaaatga 

(30)限定了全长3A12重链序列(3A12重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.151) 

1   evqlvesggg lvqpggslki scaasgftfs nyfmswvrqt pekrlewvay issgggstyy 

61  pdsvkgrfti srdnakntly lqmnslksed tamyycvrqg dgyygdyamd ywgqgtsvtv 

121 ssakttppsv yplapgsaaq tnsmvtlgcl vkgyfpepvt vtwnsgslss gvhtfpavlq 

181 sdlytlsssv tvpsstwpse tvtcnvahpa sstkvdkkiv prdcgckpci ctvpevssvf 

241 ifppkpkdvl titltpkvtc vvvdiskddp evqfswfvdd vevhtaqtqp reeqfnstfr 

301 svselpimhq dwlngkefkc rvnsaafpap iektisktkg rpkapqvyti pppkeqmakd 

361 kvsltcmitd ffpeditvew qwngqpaeny kntqpimdtd gsyfvyskln vqksnweagn 

421 tftcsvlheg lhnhhteksl shspgk

(31)编码全长3A12轻链序列(3A12 Kappa可变区和恒定区)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.152) 

1   atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt

61  gacatccaga tgactcagtc gccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc 

121 atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac attaatttag catggtatca gcagaaacag 

181 ggaaaatctc ctcagctcct ggtccatgct gcaacaaagt tagcagatgg tgtgccatca 

241 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag tattccctca agatcaacag cctgcagtct 

301 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtacac gttcggaggg 

361 gggaccaaac tagaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 

421 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 

481 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 

541 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 

601 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 

661 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 

(32)限定了全长3A12轻链序列(3A12 Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.153) 

1   diqmtqspas lsvsvgetvt itcraseniy inlawyqqkq gkspqllvha atkladgvps 

61  rfsgsgsgtq yslkinslqs edfgsyycqh fwgtpytfgg gtkleikrad aaptvsifpp 

121 sseqltsgga svvcflnnfy pkdinvkwki dgserqngvl nswtdqdskd stysmsstlt 

181 ltkdeyerhn sytceathkt stspivksfn rnec 

为了方便，表2提供了本实施例中所讨论的抗体的全长序列与序列表中列出的那些序列之间的对应关系的索引表。 

表2 

  

SEQ ID NO.	蛋白质或核酸
		122	1A3重链可变区+IgG1恒定区-核酸
123	1A3重链可变区+IgG1恒定区-蛋白质
		124	1A3轻链可变区+恒定区-核酸
125	1A3轻链可变区+恒定区-蛋白质
		126	2B8重链可变区+IgG1恒定区-核酸
127	2B8重链可变区+IgG1恒定区-蛋白质
		128	2B8轻链可变区+恒定区-核酸
129	2B8轻链可变区+恒定区-蛋白质
		130	2F8重链可变区+IgG1恒定区-核酸
131	2F8重链可变区+IgG1恒定区-蛋白质
		132	2F8轻链可变区+恒定区-核酸
133	2F8轻链可变区+恒定区-蛋白质
		134	3B6重链可变区+IgG1恒定区-核酸
135	3B6重链可变区+IgG1恒定区-蛋白质
		136	3B6轻链可变区+恒定区-核酸
137	3B6轻链可变区+恒定区-蛋白质
		138	3D11重链可变区+IgG1恒定区-核酸
139	3D11重链可变区+IgG1恒定区-蛋白质
		140	3D11轻链可变区+恒定区-核酸
141	3D11轻链可变区+恒定区-蛋白质

[0750]   

142	1D3重链可变区+IgG1恒定区-核酸
		143	1D3重链可变区+IgG1恒定区-蛋白质
144	1D3轻链可变区+恒定区-核酸
		145	1D3轻链可变区+恒定区-蛋白质
146	1F3重链可变区+IgG1恒定区-核酸
		147	1F3重链可变区+IgG1恒定区-蛋白质
148	1F3轻链可变区+恒定区-核酸
		149	1F3轻链可变区+恒定区-蛋白质
150	3A12重链可变区+IgG1恒定区-核酸
		151	3A12重链可变区+IgG1恒定区-蛋白质
152	3A12轻链可变区+恒定区-核酸
		153	3A12轻链可变区+恒定区-蛋白质

实施例3—多种重组hHGF蛋白质的制备 

本实施例描述了用于表征实施例1和实施例14中制备的抗体的多种重组蛋白质的克隆和表达。具体而言，本实施例描述了以下蛋白质的克隆和表达，所述的蛋白质为：重组hHGF蛋白质、含有在555位置处甘氨酸被谷氨酸取代的重组hHGF蛋白质(G555E)、含有在561位置处半胱氨酸被精氨酸取代的重组hHGF蛋白质(C561R)、含有置于小鼠HGF序列中的人V495-L585 HGF序列的重组小鼠-人-小鼠(mhm)嵌合体HGF蛋白质、含有置于小鼠HGF序列中的人I499-R566 HGF序列的重组mhm嵌合体HGF蛋白质、以及含有置于小鼠HGF序列中的人W507-L585 HGF序列的重组mhm嵌合体HGF蛋白质。 

利用标准的分子技术产生以下的表达构建体，并通过DNA测序验证所得的cDNA序列。 

a.hHGF-Fc

在PCR的第一轮中，产生2个重叠的PCR片段，其中在hHGF和hIgFc之间引入了Not I位点并编码了6xHis标签。在第二轮中，重叠的PCR片段作为模板以扩增hHGF-his-IgFc。用NheI和BamHI消化所得的片段，再克隆到pcDNA5/FRT(Invitrogen，#35-3014)中。然后，从Invitrogen克隆序号：IOH29794(人HGF cDNA)中扩增hHGF。发现，所得的序列对应于NCBI中储存的收录号为NM_000601.4的序列。 

(1)5′hHGF NheI引物

ACTGGCTAGCATGTGGGTGACCAAACTCCT(SEQ ID NO.102) 

(2)3′hHGF Notl His标签引物

GTGATGGTGATGGTGATGGCGGCCGCATGACTGTGGTACCTTATATG(SEQ IDNO.103) 

(3)5′HisIgFc引物

ACTGGCGGCCGCCATCACCATCACCATCAC(SEQ ID NO.104) 

(4)3′IgFc BamHI引物

ACTGGGATCCTCACTATTTACCCGGGGACAG(SEQ ID NO.105) 

b.hHGF-Fc G555E和hHGF-Fc C561R

使用QuikChange II XL定点突变试剂盒(Stratagene)，根据制造商提供的说明书，通过定点突变产生hHGF-Fc突变体G555E和hHGF-Fc突变体C561R。 

(1)hHGF-Fc(G555E)正义引物

CATGATGTCCACGAAAGAGGAGATGAG(SEQ ID NO.106) 

(2)hHGF-Fc(G555E)反义引物

CTCATCTCCTCTTTCGTGGACATCATG(SEQ ID NO.107) 

(3)hHGF-Fc(C561R)正义引物

GGAAGAGGAGATGAGAAACGCAAACAGGTTCTCAATG(SEQ ID NO.108) 

(4)hHGF-Fc(C561R)反义引物

CATTGAGAACCTGTTTGCGTTTCTCATCTCCTCTTCC(SEQ ID NO.109) 

c.小鼠-人-小鼠嵌合体Fc

小鼠-人-小鼠嵌合体IgFc构建体包含mHGFα链-hHGF、人HGF的β链氨基酸Val495-Leu585、以及其后为6xHis标签和IgG-Fc的mHGFC末端β链。 

从Invitrogen克隆序号：IOH29794(人HGF cDNA)扩增编码氨基酸V495-L585的人HGF cDNA。该序列对应于NCBI中储存的收录号为NM_000601.4的序列。使用来自Invitrogen的Super Script One StepRT-PCR试剂盒(#10928-034)，根据制造商提供的说明书，从小鼠肝的总RNA(Clontech，# 636603)中，通过RT-PCR扩增小鼠HGF序列。所 得的mHGF cDNA序列对应于NCBI中储存的收录号为D 10213.1的序列。 

使用重叠的PCR引物产生3个片段(分别被称为片段1、2和3)，并在PCR扩增的连续的轮次中退火。将终产物用NheI和NotI酶切，并克隆到pcDNA5/FRT IgGFc中。 

(1)用于mHGF α链5’NheI的片段1的引物

5′ATCGGCTAGCATGATGTGGGGGACCAAAC(SEQ ID NO.110) 

3′GAATCCCATTTACAACCCGCAGTTGTTTTGTTTTGG(SEQ ID NO.111) 

(2)用于hHGF β链aa V495-L585的片段2的引物

5′CCAAAACAAAACAACTGCGGGTTGTAAATGGGATTC(SEQ ID NO.112) 

3′CAGGATTGCAGGTCGAGCAAGCTTCATTAAAACCAGATCT(SEQ ID NO.113) 

(3)用于mHGF β链C末端3’NotI的片段3的引物

5′AGATCTGGTTTTAATGAAGCTTGCTCGACCTGCAATCCTG(SEQ ID NO.114) 

3′GTAATTTTGACATACAAGTTGTGCGGCCGCCATCACCATCACCATCAC(SEQ ID NO.115) 

d.hHGF和mhm嵌合体的构建

通过定点突变产生不含有Fc-标签的、编码hHGF和mhm嵌合体(V495-L585)的载体，即pcDNA5/FRT hHGF和pcDNA5/FRT-mhm嵌合体(V495-L585)。使用QuikChange II XL定点突变试剂盒(Stratagene)，根据制造商提供的说明书将终止密码子引入6xHis-标签的3’端。突变引物包括引物1和引物2，其中引物1为： 

CATCACCATCACCATCACTAAGCGGGTCTGGTGCCACG(SEQ ID NO.116)， 

引物2为： 

CGTGGCACCAGACCCGCTTAGTGATGGTGATGGTGATG(SEQ ID NO.117)。 

此外，使用QuikChange II XL定点突变试剂盒(Stratagene)，根据制造商提供的说明书，通过定点突变由pcDNA5/FRT-mhm(V495-L585)构建体产生2个另外的mhm嵌合体。其中1个mhm构建体含有位于小鼠序列之间的hHGF的I499-R556区域。另一个mhm构建体含有位于小鼠序列之间的hHGF的W507-L585区域。 

对于mhm嵌合体(I499-R556)，利用合适的寡核苷酸序列，在模板 pcDNA5/FRT-mhm嵌合体(V495-L585)构建体中依次制造以下点突变：D558E、C561R、V564I、V567I和M583L。对于mhm嵌合体(W507-L585)，利用合适的寡核苷酸序列，在模板pcDNA5/FRT-mhm嵌合体(V495-L585)构建体中在一个步骤中引入以下点突变：Q502R、N504T和I505V。 

所得的hHGF-Fc蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID NO.118所示，包含信号序列(核苷酸1-93)和原结构域(prodomain)(核苷酸94-162)。hHGF-Fc蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.119所示。 

所得的编码mhm(V495-L585)-Fc嵌合体蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID NO.120所示，包含信号序列(核苷酸1-96)和原结构域(核苷酸97-165)。mhm(V495-L585)-Fc嵌合体蛋白质的氨基酸序列如SEQ IDNO.121所示。 

所得的编码mhm(V495-L585)构建体的核苷酸序列和限定mhm(V495-L585)构建体的蛋白质序列分别如SEQ ID NO.211和212所示。如SEQ ID NO.211所示的核酸序列包含信号序列(核苷酸1-96)和原结构域(核苷酸97-165)，而如SEQ ID NO.212所示的蛋白质序列包含活性蛋白质序列(不含有信号序列或原结构域)。所得的编码mhm(I499-R556)构建体的核苷酸序列和限定mhm(I499-R556)构建体的蛋白质序列分别如SEQ ID NO.213和214所示。如SEQ ID NO.213所示的核酸序列包含信号序列(核苷酸1-96)和原结构域(核苷酸97-165)，而如SEQ ID NO.214所示的蛋白质序列包含活性蛋白质序列(不含有信号序列或原结构域)。所得的编码mhm(W507-L585)的核苷酸序列和限定mhm(W507-L585)的蛋白质序列分别如SEQ ID NO.215和216所示。如SEQ ID NO.215所示的核酸序列包含信号序列(核苷酸1-96)和原结构域(核苷酸97-165)，而如SEQ ID NO.216所示的蛋白质序列包含活性蛋白质序列(不含有信号序列或原结构域)。 

e.蛋白质的表达

(1)细胞培养

在37℃、5％ CO₂以及100μg/mL Zeocin(Invitrogen，Catalog No.R250-01)条件下，在F12K培养基(ATCC，Catalog No.30-2004)、10％ FCS(Invitrogen，Catalog No.10438026)、1％青霉素(10000units/mL)/链霉素(10,000μg/mL)(Invitrogen，Catalog No.15140-122)中培养CHO FlpIn细胞(Invitrogen，Catalog No.R758-07)。 

(2)稳定的CHO FlpIn细胞系的产生

使用Lipofectamine 2000(Invitrogen，Catalog No.11668-027)，根据制造商提供的说明书，用比例为9:1的pOG44:pcDNA5/FRT表达质粒DNA转染CHO FlpIn宿主细胞。使用空的pcDNA5/FRT载体/pOG44和单独的pOG44质粒(Invitrogen，CatalogNo.35-3018)转染细胞，作为对照。转染后24小时，分开细胞，并在48小时后，向该细胞中加入0.5mg/mL潮霉素B(Sigma，Catalog No.H0654-SPEC)。在F12K、10％ FCS、1％青霉素/链霉素、0.5mg/mL潮霉素B中，选择多克隆的稳定的细胞。 

(3)在稳定的CHO FlpIn细胞系中蛋白质的表达

将大约2x10⁶个细胞接种于15cm的平板中，并在37℃、5％ CO₂下，在比例为1:1的F12K(ATCC，Catalog No.30-2004)/DMEM高糖(Invitrogen，Catalog No.11995065)、以及5％极低IgG FCS(Invitrogen，#16250-78)中培养5-6天。收集上清液，并通过ELISA和表面等离子体共振分析所得的蛋白质。 

实施例4—抗hHGF单克隆抗体的结合特性 

实施例1制备的单克隆抗体以及实施例3中制备的一些重组HGF蛋白质可通过它们结合hHGF的能力来表征， 

使用BIAcore T100装置，通过表面等离子体共振来分析所述的抗体以及一些在实施例3中所讨论的融合蛋白质，从而评估它们结合HGF的能力。使用胺偶联(BIAcore，Catalog No.BR-1000-50)，根据制造商提供的说明书，通过标准的偶联方法将每种抗体固定于羧甲基化的葡聚糖CM5的传感器芯片(BIAcore，Catalog No.BR-1006-68) 上。 

在25℃下，使用PBS(GIBCO，Catalog No.14040-133)作为运行缓冲剂来进行分析，所述的PBS含有0.05％表面活性剂P20(BIAcore，Catalog No.R-1000-54)、2mg/mL BSA  (EMD，Catalog No.2930)和10mg/mL CM-葡聚糖的钠盐(Fluka，Catalog No.86524)。将含有不同HGF融合蛋白质的上清液或者来自用空载体转染的细胞的上清液以30μL/min的流速注射在每种抗体上，时间持续3分钟。在注射完毕后30秒时，在基线上，以共振单位(RU)测定所得的结合。将结合与稀释于运行缓冲剂中的人HGF(R&D Systems，Catalog No.294-HGN-025)比较。通过比较与对照表面的结合，监测到不存在特异性的结合，其中所述的对照表面上包含使用相同的胺偶联方法固定的小鼠IgG(Rockland，Catalog No.010-0102)。 

所得的结果总结于表3中。 

表3 

  

抗体

rhHGF(R&D  Systems)

rmHGF(R&D  Systems)

mhm嵌合体       (V495-L585)

人HGF

G555E

C561R

1A3

结合

不结合

不结合

结合

结合

结合

1D3

结合

不结合

结合

结合

结合

结合

1F3

结合

结合

结合

结合

结合

结合

2B8

结合

不结合

结合

结合

结合

结合

2F8

结合

结合

不结合

结合

结合

结合

3A12

结合

不结合

不结合

结合

结合

结合

3B6

结合

不结合

不结合

结合

结合

结合

3D11

结合

不结合

不结合

结合

结合

结合

表3中的结果表明，每种抗体都与rHGF和纯化的人HGF结合。此外，所有的抗体都与含有点突变G555E和C561R的hHGF结合。总体而言，除了1F3和2F8之外的所有抗体都不与小鼠HGF结合，表明抗体1A3、1D3、2B8、3A12、3B6和3D11特异性地结合人HGF。抗体1D3、1F3和2B8结合小鼠-人-小鼠嵌合体，而其他抗体则不结合该嵌合体。这些结果表明抗体1D3和2B8至少部分地结合人HGF的残基495-585。抗体1A3、3A12、3B6和3D11似乎结合人hHGF的除了残基495-585之外的部分。目前尚不确定为什么2F8不结合mhm嵌合体，而其似乎 结合hHGF和mHGF。 

实施例5—抗hHGF的单克隆抗体结合还原的和非还原的HGF的能力 

在本实施例中，对实施例1制备的抗hHGF的单克隆抗体结合还原的和非还原的HGF的能力进行分析。 

通过免疫印迹法评估抗HGF的血清与重组hHGF的反应性。在4-12％ Bis-Tris 1.0mmX2D孔凝胶(well gel)(Invitrogen，Carlsbad，CA)上，对在含有或不含有NuPAGE样品还原缓冲剂(Invitrogen的NuPAGE MOPS SDS运行缓冲剂(Invitrogen)中的8μg重组hHGF进行分级。然后，使用标准的方法将分级的蛋白质转移至硝化纤维膜上。将该硝化纤维膜用溶于含有0.1％ Tween-

(TBST)的Tris缓冲盐溶液中的5％脱脂奶粉溶液封闭，然后封片到Mini Protean IIMulti-Screen仪器(BioRad)中以便进一步封闭。 

用纯化的抗体在Multi-Screen仪器上探针检查所得的膜。将纯化的抗体在封闭缓冲剂中稀释成5μg/mL。然后，将硝化纤维膜从所述仪器中取出，并与辣根过氧化物酶标记的抗小鼠的IgG抗体温育。所得的结果总结于表4中，其中数字反应了结合的程度，-代表最少结合(几乎不结合或不结合)而3+代表最多结合。 

表4 

  

抗体	还原的HGF       (暴露3-5分钟)	非还原的HGF  (暴露20秒)
			1A3	2+	2+
1D3	2+	2+
			1F3	2+	2+
2B8	-	1+
			2F8	2+	2+
3A12	-	2+
			3B6	3+	2+
3D11	-	3+

表4中的数据表明，所有的抗体都与非还原的rhHGF结合。与此形成对比的是，单克隆抗体1A3、1D3、1F3、2F8和3B6结合还原的rhHGF，但抗体2B8、3A12和3D11不结合还原的rhHGF。

实施例6—结合亲和力 

通过表面等离子体共振测定实施例1制备的每种抗体与hHGF的结合亲和力及相互作用的动力学。 

使用胺偶联(BIAcore，Catalog No.BR-1000-50)，根据制造商提供的说明书，通过标准的偶联方法将兔抗小鼠免疫球蛋白(BIAcore，Catalog No.BR-1005-14)固定于羧甲基化的葡聚糖CM5的传感器芯片(BIAcore，Catalog No.BR-1006-68)上。在25℃下，使用PBS(GIBCO，Catalog No.14040-133)作为运行缓冲剂来进行分析，所述的PBS含有0.05％表面活性剂P20(BIAcore，Catalog No.BR-1000-54)、2mg/mL BSA(EMD，Catalog No.2930)和10mg/mL CM-葡聚糖的钠盐(Fluka，Catalog No.86524)。 

将抗体捕获在流速为10μL/min的单个流动的细胞上。用于每种抗体的注射时间是可变的，从而使每个循环中捕获大约20RU的抗体。以60μL/min的速度，在2分钟内向参照表面(没有被捕获的抗体)和活性表面(有待测试的抗体)上依次注射缓冲剂或稀释于运行缓冲剂中的HGF(R&D Systems，Catalog No.294-HGN-025)。根据浓度，对解离相监测15或90分钟。然后，再开始另一个循环之前，使用10mM的甘氨酸-HCl，pH 1.7(BIAcore，Catalog No.BR-1003-54)使所述的表面再生，其中所述的甘氨酸-HCl是在3分钟内以60μL/min的流速注入的。所测试的HGF的浓度为0.46nM至7.5nM。 

利用BIAevalutation软件的动力学函数及推荐的差级，确定动力学参数。每种抗体的动力学参数(k_a(结合速率常数)，k_d(解离速率常数)和K_D(平衡解离常数))总结于表5中。 

表5 

  

抗体

ka/(1/Ms)

SE(ka)

kd(1/s)

SE(kd)

KD(pM)

SD

1A3

1.7x106

7.3x104

5.2x10-5

8.4x10-7

30.1

5.6

1D3

1.7x106

3.1x104

8.2x10-5

1.7x10-6

54.2

27.4

1F3

1.5x106

5.0x104

2.6x10-5

6.6x10-7

18.1

8.2

2B8

1.6x106

2.9x104

2.1x10-5

1.4x10-7

13.5

4.4

3A12

1.6x106

3.7x104

1.6x10-5

1.6x10-6

103.0

10.4

3B6

2.0x106

6.5x104

3.9x10-5

3.2x10-7

17.0

3.4

[0826] 表5中的数据表明，所述抗体结合hHGF的K_D为约100pM或更低、约50pM或更低、或者20pM或更低。 

实施例7—抗hHGF的抗体的中和活性 

在本实施例中，用抗体(a)抑制hHGF与c-Met结合的能力和(b)抑制4MBr-5细胞中HGF刺激的BrdU引入的能力来表征实施例1制备的抗体。 

a.HGF-Met结合抑制分析(中和作用分析)

使用ELISA测试抗体抑制hHGF与c-Met结合的能力。 

具体而言，在4℃下，用碳酸盐包被缓冲剂(15mM Na₂CO₃和34mMNaHCO₃，pH 9.0)中的100μL 6.25μg/mL HGF(R&D Systems，Catalog No.294-HGN-025)包被Wallac 96孔DELFIA分析平板(Wallac公司，Catalog No.AAAND-0001)16小时。然后，在室温下将该分析平板用PBS中的200μL 5％的非脱脂奶粉封闭1小时。通过将升高浓度的处于研究中的抗体(0.033-667nM，3倍系列稀释)加入到含5％非脱脂奶粉的PBS中的2nM c-Met(R&D Systems，Catalog No.358-MT/CF)中，在分开的板中制备该抗体。将每个孔中的100μL的样品转移至分析平板中，并在4℃下温育过夜。然后，将该分析平板用PBS-0.1％Tween 20洗涤3次，并在室温下，与100μL/孔的2μg/mL生物素标记的抗人c-Met的抗体(R&D Systems，Catalog No.BAF358)温育，其中所述的抗人c-Met的抗体在含5％非脱脂奶粉的PBS中中制备。 

然后，将所得平板用PBS-0.1％ Tween 20洗涤3次，并在室温下，与在DELFIA分析缓冲液(Wallac，Catalog No.4002-0010)中以1：1000稀释的Eu标记的链霉亲和素(Wallac，Catalog No.1244-360)温育1小时。将所得平板用DELFIA洗涤液(Wallac，Catalog No.4010-0010)洗涤3次，并在室温下，在搅拌条件下与100μL/孔的DELFIA增强溶液(Wallac #4001-0010)温育15分钟。 

使用铕示踪法，在Victor³V仪器(Perkin Elmer)上读取所述平板。计算IC₅₀的值，并总结于表6中。

表6 

  

抗体	IC50(nM)	SD
			1A3	5.65	0.91
1D3	4.43	2.27
			1F3	6.57	0.28
2B8	5.57	1.19
			2F8	5.36	0.88
3A12	5.26	2.11
			3B6	-	-
3D11	5.66	2.75

这些结果表明，除了3B6以外的所有抗体(即，1D3、1A3、2B8、3A12、1F3、3D11和2F8)有效地中和HGF与c-Met的结合。 

b.中和4MBr-5细胞中HGF刺激产生的BrdU的引入

将10μL 12.5nM的hHGF分配到96孔组织培养微孔板(CostarCatalog No.3903)的每个孔中。将10μL浓度为6667、2222、740、247、82、27、9.1、3.0、1.0和0.33nM的系列稀释的抗体加入每个孔中。然后在室温下，将HGF-抗体混合物温育30分钟。将培养在F-12K(ATCC5 30-2004)、15％FBS(Gibco 10438-026)、30ng/mL EGF(SigmaE9644)以及1％青霉素/链霉素(PS，Gibco Catalog No.15140-122)中的猴支气管上皮细胞4MBr-5(ATCC，CCL208)用胰蛋白酶(GibcoCatalog No.25200-056)解离，并以75,000细胞/mL重悬于分析培养基(F-12K、2.5％ FBS、1％ PS)中，然后将80μL细胞悬浮液分配到HGF-抗体混合物中。 

将所得的细胞在37℃、5％ CO₂下温育。48小时后，加入10μL 100μM的BrdU(Roche Catalog No.1669915)。72小时后，除去培养基，用电吹风干燥所述平板，并用BrdU ELISA(Roche Catalog No.1669915)根据制造商提供的说明书进行处理。 

使用Synergy HT平读取器(Bio-Tek)对荧光信号进行定量。所得数据与GraphPad Prism(GraphPad Software)中斜率可变的反曲剂量应答(sigmoidal dose response)曲线相拟合，所述曲线的等式为：y＝底值+(顶值-底值)/(1+10^(1og(EC50-x)*曲线斜率))。在相同的样品中，每个试验都重复至少3次，并且平均EC₅₀值示于表7中。

表7 

  

抗体	IC50(nM)
		1A3	4.69
1D3	4.99
		1F3	1.94
2B8	1.41
		2F8	19.24
3A12	30.30
		3B6	36.08
3D11	51.12

表7中的结果表明，所有的抗体(1A3、1D3、1F3、2B8、2F8、3A12、3B6和3D11)都抑制HGF诱导的4MBr-5细胞增殖。 

实施例8—抗hHGF抗体的抗扩散活性 

本实施例描述了实施例1制备的抗体抑制HGF诱导的扩散活性的能力的特征。HGF诱导了MDCK细胞(ATCC，Manassas，VA，Catalog No.CCL-34)簇的“扩散”(运动性)。 

将MDCK细胞以每孔4x10³个细胞的密度接种于96孔Costar组织培养平板(Corning Incorporated，Corning，NY3 Catalog No.3595)中，其中每个孔装有80μL的包含10％胎牛血清(InvitrogenCatalog No.10438026)和1％青霉素-链霉素(Invitrogen Catalog No.15140122)的MEM(ATCC Manassas，VA，Catalog No.30-2003)。将待研究的每种抗体在含有10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素的MEM中稀释成6,667nM。然后，将每种不同的抗体稀释液、以及含有10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素但不含有抗体的MEM分别与等体积的含有10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素的MEM、以及100ng/ml HGF(R&DSystems Catalog No.294-HGN-025)混合。在25℃下，将抗体/HGF稀释液温育30分钟。将20μL的每种抗体/HGF稀释液分别加入到各个孔中，使得最终的抗体浓度为666.7nM，而最终的HGF浓度为10ng/ml。然后，在37℃、5％ CO₂下，将MDCK细胞温育24小时。 

温育24小时后，将MDCK细胞小心地用每孔100μL的冰冷的PBS(Invitrogen Catalog No.14190144)洗涤1次，并用每孔100μL的冰冷的甲醇固定，同时在25℃下摇动10分钟。然后将平板用蒸馏 水小心地洗涤1次。将每个孔中加入100μL的结晶紫溶液，其由0.5％的结晶紫(Sigma，St.Louis，MO，Catalog No.C3886)和50％的溶于蒸馏水中的乙醇构成，并将细胞在25℃下摇动温育20分钟。 

将使用结晶紫溶液染色后，将所得的细胞用蒸馏水小心地洗涤3次。然后，向每个孔中加入PBS以防止样品干燥。使用Leica DMIRB显微镜(Leica Microsystems GmbH，Wetzler，Germany)、DC500照相机(Leica Microsystems GmbH，Wetzler，Germany)和MagnaFire 2.1C软件(Optronics，Goleta，CA)对细胞成像，并评定样品的扩散水平。所得的结果总结于表8中。 

表8 

-不抑制 

+++极强，接近完全抑制 

++强烈抑制 

+可检测程度的抑制 

表8所示的结果表明，抗体2B8比其他抗体更能抑制HGF诱导的扩散。抗体1D3和3B6显示出中等水平的抑制；抗体1A3显示出低于中等水平的抑制；抗体1F3和2F8显示出低水平的抑制；而抗体3A12和3D11几乎不产生抑制或检测不到抑制。 

实施例9—对HGF刺激的c-Met磷酸化的抑制 

本实施例描述了实施例1制备的抗体抑制PC-3细胞中HGF刺激的c-Met磷酸化的能力的特征。HGF诱导了PC-3细胞(ATCC No.CRL-1435)中Met的磷酸化。 

将PC-3细胞以每孔4.5x10⁴个细胞的密度接种于96孔Costar组 织培养平板(Corning Catalog No.3595)的每个孔中，其中每个孔装有100μL的包含10％胎牛血清(Invitrogen Catalog No.10438026)和1％青霉素-链霉素(Invitrogen Catalog No.15140122)的F-12K(ATCC，Manassas，VA，Catalog No.30-2004)。在37℃、5％ CO₂下经过24小时之后，除去培养基，并用不含血清但含有1％青霉素-链霉素的F-12K漂洗细胞1次。然后将细胞在100μL的含有1％青霉素-链霉素的无血清F-12K中温育24小时。 

在含有1％青霉素-链霉素的无血清F-12K中制备待研究的每种抗体的以下10种不同的稀释液：6667nM、2222nM、741nM、247nM、82.3nM、27.4nM、9.1nM、3.0nM、1.0nM和0.3nM。将每种抗体稀释液、以及不含抗体的含有1％青霉素-链霉素的无血清F-12K分别与等体积的含有1％青霉素-链霉素的无血清F-12K和500ng/mL HGF(R&D Systems Catalog No.294-HGN-025)混合。在25℃下，将这些抗体/HGF的稀释液温育30分钟。由此得到最终浓度为1.25nM的HGF。 

然后，将PC-3细胞用含有1％青霉素-链霉素的无血清F-12K漂洗1次。接着向细胞中加入70μL含有1％青霉素-链霉素的无血清F-12K，然后再加入10μL含有10mM Na₃VO₄(Sigma Catalog No.S6508)的含有1％青霉素-链霉素的无血清F-12K。然后，将细胞在37℃、5％ CO₂下温育60分钟。温育后，将20μL的每种抗体/HGF分别加入各个孔中，得到HGF的最终浓度为50ng/mL，每种抗体的最终浓度如下：666.7nM、222.2nM、74.1nM、24.7nM、8.23nM、2.74nM、0.91nM、0.30nM、0.10nM和0.03nM。然后，将细胞在37℃、5％CO₂下温育10分钟，其后除去培养基/抗体/HGF的混合物，并将平板放在冰上。接着，用每孔100μL的含有1mM Na₃VO₄的冰冷的PBS(InvitrogenCatalog No.14190144)漂洗细胞1次。然后，将细胞在4℃下，在每孔100μL冰冷的裂解缓冲剂中温育30分钟，所述的裂解缓冲剂由1％ OmniPur Triton X-100(MERCK KGaA，Darmstadt，Germany，Catalog No.9410)、50mM Tris-HCl pH 8.0、100mM NaCl、0.3mMNa₃VO₄、1x蛋白酶抑制剂混合物(Sigma Catalog No.P8340)以及1x 磷酸酶抑制剂混合物2(Sigma Catalog No.5726)构成。 

将生物素标记的抗人HGF-R(c-met)的抗体(R&D Systems CatalogNo.BAF358)在包含1％胎牛血清(Sigma Catalog No.A2153)的DELFIA分析缓冲液(PerkinElmer，Turku，Finland，Catalog No.4002-0010)中稀释至浓度为2μg/mL，并将50μL的这种稀释液加入到黄色链霉亲和素微孔平板(PerkinElmer Catalog No.AAAND-0005)的每个孔中。然后，在25℃下将所述平板与抗体摇动温育30分钟。温育后，用DELFIA洗涤液(PerkinElmer Catalog No.4010-0010)洗涤所述平板，并将80μL每种不同的PC-3细胞裂解物分别加入经洗涤的链霉亲和素微孔平板的各个孔中。 

将含有PC-3细胞裂解物的链霉亲和素微孔平板在25℃下摇动温育60分钟，然后用DELFIA洗涤液洗涤。将100μL稀释有600ng/mLDELFIA Eu-N1P-Tyr-100抗体(PerkinElmer Catalog No.AD0159)的含有1％胎牛血清的DELFIA分析缓冲液中加入之前与PC-3细胞裂解物温育的经洗涤的链霉亲和素微孔平板中。将该平板在25℃下摇动温育60分钟。将所述平板用DELFIA洗涤液洗涤最后1次。然后，将200μL的DELFIA增强溶液(PerkinElmer Catalog No.4001-0010)加入到经洗涤的链霉亲和素微孔平板的各个孔中，并将该板在25℃下在黑暗中摇动温育5分钟。 

然后，使用铕示踪法，在Victor3V仪器(PerkinElmer)上测定信号。使用Prism 4 for Windows(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)和反曲剂量应答等式计算EC₅₀的值。 

以nM计的作为EC₅₀而总结出的结果列于表9中。 

表9 

  

抗体	2次试验的平均值	标准偏差
			1A3	0.684	0.242
1D3	0.984	0.129
			1F3	1.19	1.01
2B8	0.287	0.104
			2F8	1.39	2.12
3A12	2.00	0.553
			3B6	1.01	1.11
3D11	2.28	N/A

[0867] 表9中的数据表明，所有的8个抗体都是PC-3细胞中HGF诱导的c-Met磷酸化的有效抑制剂。 

实施例10—U87MG异种移植物模型中的肿瘤抑制 

在U87MG异种移植物模型中测试本发明的小鼠单克隆抗体抑制肿瘤生长的能力。在37℃下在含有5％ CO₂和95％空气的气氛中培养条件下扩增U87MG细胞(ATCC)，其中使用的培养基包括含有10％胎牛血清、100单位/mL青霉素和100μg/mL链霉素的Dulbecco′s ModifiedEagle培养基(DMEM)。通过使用胰蛋白酶-EDTA分离培养皿壁上的细胞对细胞进行次级培养和维持。 

通过胰蛋白酶消化作用来收集接近汇合的细胞，然后将50％Matrigel(BD Biosciences；catalog no.356237)中的5x106个细胞皮下注射到7周龄雌性ICR SCID小鼠(Taconic Labs)的肩胛骨之间的背部上侧的区域中。使用卡尺测量肿瘤的长直径(L)和短直径(W)(mm)。如下计算肿瘤的体积(vol.)：体积(mm3)＝L x W2/2。当肿瘤生长到大约200mm3时，将带有肿瘤的小鼠随机分成5组，每组10只小鼠。其中的一组小鼠接受PBS。其他4组中的每组小鼠接受抗体1A3、1D3、1F3或2B8中的一种抗体。所有抗体的剂量均为1mg/kg体重，每周2次，并通过腹膜内注射5个剂量。每星期记录2次肿瘤的体积和小鼠的体重。利用学生t检验分析肿瘤生长的抑制。结果总结于图6和表10中。 

表10 

在2B8治疗组中，取得了部分衰退(参见图6)。在1A3治疗组和1F3治疗组中观察到统计学显著的生长抑制(参见表10)。1D3的肿瘤生长抑制为51％，其p值为0.075。没有观察到明显的体重损失。

实施例11—U118异种移植物模型中肿瘤的抑制 

在U118异种移植物模型中测试抗体1A3、1D3、1F3和2B8抑制肿瘤生长的能力。按照实施例10(上述实施例)中针对U87MG细胞所述增值U118细胞(ATCC)。 

如上文实施例10所述建立皮下肿瘤模型，不同之处在于所用的小鼠为7周龄的雌性NCr裸鼠(Taconic)，并且当肿瘤生长至大约80mm³时开始治疗。如同在U87MG模型中那样，所有抗体的剂量均为1mg/kg体重，每周2次，并通过腹膜内注射4个剂量。每星期记录2次肿瘤的体积和小鼠的体重。利用学生t检验分析肿瘤生长的抑制。结果总结于图7和表11中。 

表11 

在2B8和1A3治疗组中观察到统计学显著的生长抑制(参见图7)。在1F3和1D3组中有适度的肿瘤的生长抑制，其p值小于0.05(在本研究中，这种情况被定义为统计学显著)(参见表11)。没有观察到明显的体重损失。 

实施例12—小鼠单克隆抗体的人源化 

本实施例描述了贤淑鼠2B8抗体的人源化，以及所得人源化抗体的特征。通过两种方法使小鼠2B8重链可变区和轻链可变区“人源化”。 

A.人源化方法1

在第一种方法中，根据在Hwang等人(2005)METHODS 36：35-42；Tan等人(2002)J.IMMUNOL.169：1119-1125；以及美国专利序号6,881,557中所述的“超级人源化”，设计3个人源化的重链可变区和2个人源化的kappa轻链可变区。 

根据CDR的长度和氨基酸的组成来确定每个小鼠2B8CDR的Chothia正规结构类型(Chothia canonical structural class)。根据在International Immunogentics Information System(IMGT) 网址(在环球网的imgt.cines.fr andbiochem.unizh.ch/antibody/Sequences/index.html上可得)中描述的已知的人种系可变区参照等位基因来鉴定由相同的Chothia正规结构类型的轻链可变区和重链可变区构成的人种系可变区。通过计算CDR氨基酸残基之间的百分同一性或相似性，将这些相同结构类型的人种系可变区与小鼠2B8可变区比较。选择与小鼠2B8CDR残基同一性和/或相似性最高的那些人种系可变区，用于CDR移植。在将小鼠2B8CDR残基用于替换在小鼠2B8CDR和人种系CDR之间不同的相应人种系可变区残基时，保留人种系可变区的框架残基。然后，将与2B8小鼠J区最相似的人J区加入到“超级人源化”的可变区的羧基端。接着，将信号序列加入到“超级人源化”的可变区的氨基端，并将这些氨基酸序列转化为核酸序列。 

利用基因合成PCR方法(Young等人，(2004)NUCL.ACIDS RES.32:e59)构建完整的可变区核酸序列，并使用标准的分子生物学技术将其克隆到含有人恒定IgG1(Glm(17，1)同种异型)或Kappa(Km(3)同种异型(等位基因2))区(可变区的下游)的哺乳动物表达载体(基于pcDNA3.2 DEST(Invitrogen))中。使所有的4条重链IgG1抗体(嵌合体2B8和3条人源化的重链(Hu2B8 Hv1-f.1、Hu2B8 Hv5-a.1和Hu2B8Hv5-51.1))与所有的3条kappa链抗体(嵌合体2B8和2条人源化的轻链(Hu2B8 Kv1-39.1和Hu2B8 Kv3-15.1))的可能的组合表达，从而产生12种不同的抗体蛋白质。然后，按照以下所述测定嵌合体、嵌合/人源化的抗体、以及人源化的抗体与人HGF的结合，并将结果总结于图8中。表12A中列出了免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链的可变区的每一种可能组合。 

表12A 

  

重链可变区	轻链可变区
		嵌合体2B8(SEQ ID NO：12)	嵌合体2B8(SEQ ID NO：14)
嵌合体2B8(SEQ ID NO：12)	Hu2B8 Kv1-39.1(SEQ ID NO：173)
		嵌合体2B8(SEQ ID NO：12)	Hu2B8 Kv3-15.1(SEQ ID NO：179)
Hu2B8 Hy1-f.1(SEQ ID NO：159)	嵌合体2B8(SEQ ID NO：14)
		Hu2B8 Hy1-f.1(SEQ ID NO：159)	Hu2B8 Kv1-39.1(SEQ ID NO：173)
Hu2B8 Hy1-f.1(SEQ ID NO：159)	Hu2B8 Kv3-15.1(SEQ ID NO：179)
		Hu2B8 Hv5-a.1(SEQ ID NO：165)	嵌合体2B8(SEQ ID NO：14)
Hu2B8 Hv5-a.1(SEQ ID NO：165)	Hu2B8 Kv1-39.1(SEQ ID NO：173)
		Hu2B8 Hv5-a.1(SEQ ID NO：165)	Hu2B8 Kv3-15.1(SEQ ID NO：179)
Hu2B8 Hv5-51.1(SEQ ID NO：169)	嵌合体2B8(SEQ ID NO：14)
		Hu2B8 Hv5-51.1(SEQ ID NO：169)	Hu2B8 Kv1-39.1(SEQ ID NO：173)
Hu2B8 Hv5-51.1(SEQ ID NO：169)	Hu2B8 Kv3-15.1(SEQ ID NO：179)

[0888] 表12B中列出了免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链的每一种可能组合。 

表12B 

  

免疫球蛋白重链	免疫球蛋白轻链
		嵌合体2B8 IgG1(SEQ ID NO：155)	嵌合体2B8 Kappa(Km(3))(SEQ ID NO：157)
嵌合体2B8 IgG1(SEQ ID NO：155)	Hu2B8 Kv1-39.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异       型)(等位基因2)(SEQ ID NO：177)
		嵌合体2B8 IgG1(SEQ ID NO：155)	Hu2B8 Kv3-15.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异       型)(等位基因2)(SEQ ID NO：181)
Hu2B8 Hv1-f.1+IgG1恒定区           (Glm(17，1))同种异型(SEQ ID         NO：163)	嵌合体2B8 Kappa(Km(3))(SEQ ID NO：157)
		Hu2B8 Hv1-f.1+IgG1恒定区           (Glm(17，1))同种异型(SEQ ID         NO：163)	Hu2B8 Kv1-39.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异       型)(等位基因2)(SEQ ID NO：177)
Hu2B8 Hv1-f.1+IgG1恒定区           (Glm(17，1))同种异型(SEQ ID         NO：163)	Hu2B8 Kv3-15.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异       型)(等位基因2)(SEQ ID NO：181)
		Hu2B8 Hv5-a.1+IgG1恒定区           (Glm(17，1))同种异型(SEQ ID NO：      167)	嵌合体2B8 Kappa(Km(3))(SEQ ID NO：157)
Hu2B8 Hv5-a.1+IgG1恒定区           (Glm(17，1))同种异型(SEQ ID NO：      167)	Hu2B8 Kv1-39.1+Kappa恒定区(Km(3)同种         异型)(等位基因2)(SEQ ID NO：177)
		Hu2B8 Hv5-a.1+IgG1恒定区           (Glm(17，1))同种异型(SEQ ID NO：      167)	Hu2B8 Kv3-15.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异       型)(等位基因2)(SEQ ID NO：181)
Hu2B8 Hv5-51.1+IgG1恒定区          (Glm(17，1))同种异型(SEQ ID         NO：171)	嵌合体2B8 Kappa(Km(3))(SEQ ID NO：157)
		Hu2B8 Hv5-51.1+IgG1恒定区          (Glm(17，1))同种异型(SEQ ID         NO：171)	Hu2B8 Kv1-39.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异       型)(等位基因2)(SEQ ID NO：177)
Hu2B8 Hv5-51.1+IgG1恒定区          (Glm(17，1))同种异型(SEQ ID         NO：171)	Hu2B8 Kv3-15.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异       型)(等位基因2)(SEQ ID NO：181)

含有全长免疫球蛋白重链和轻链(含有人源化的可变区)的两种可能的抗体构建设计如下： 

sh2B8-9(Glm(17，1))＝hu2B8 Hv5-51.1(+IgG1恒定区(Glm(17，1)

                   同种异型)(SEQ ID NO.171)+hu2B8 Kv 1-39.1(+ 

                   Kappa恒定区(Km(3)同种异型(等位基因2))) 

                  (SEQ ID NO.177)； 

sh2B8-12(Glm(17，1))＝hu2B8 Hv5-51.1(+IgG1恒定区(Glm(17，1) 

                  同种异型))(SEQ ID NO.171)+hu2B8 Kv 3-15.1(+ 

                  Kappa恒定区(Km(3)同种异型(等位基因 

                  2)))(SEQ ID NO.181)。 

编码每一种人源化抗体的核酸序列以及限定每一种人源化抗体的蛋白质序列总结如下。在该部分中，每个可变区的最后一个核苷酸为由可变区/恒定区连接体产生的下一个密码子的第一个碱基。该核苷酸包含在可变区内，这是因为其是外显子的一部分。以下列出的恒定区的氨基酸序列包含了该连接体密码子的翻译产物。 

(1)编码全长嵌合体2B8重链(小鼠可变区和人IgG1恒定区)(同种异型Glm(17，1))的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.154) 

1    atgggatgga gctatatcat cctctttttg gtagcaacag ctacagatgt ccactcccag 

61   gtccaactgc agcagcctgg ggctgaactg gtgaagcctg ggacttcagt gaagctgtcc 

121  tgcaaggctt ctggctacac cttcaccacc tactggatgc actgggtgaa tcagaggcct 

181  ggacaaggcc ttgagtggat tggagagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat 

241  gagaagttca agagcaaggc cacactgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg 

301  caactcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtgcaag aaactatgtt 

361  ggtagcatct ttgactactg gggccaaggc accactctca ccgtctcctc agcctccacc 

421  aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 

481  gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 

541  ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 

601  tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 

661  aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 

721  gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 

781  ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 

841  tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 

901  ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 

961  cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 

1021 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 

1081 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 

1141 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 

1201 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 

1261 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 

1321 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 

1381 ctctccctgt ctccgggtaa atga 

(2)限定了全长嵌合体2B8重链(嵌合体2B8 IgG1(Glm(17，1)同种异型)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.155)

1   qvqlqqpgae lvkpgtsvkl sckasgytft tywmhwvnqr pgqglewige inptnghtny 

61  nekfkskatl tvdkssstay mqlssltsed savyycarny vgsifdywgq gttltvssas 

121 tkgpsvfpla psskstsggt aalgclvkdy fpepvtvswn sgaltsgvht fpavlqssgl 

181 yslssvvtvp ssslgtqtyi cnvnhkpsnt kvdkkvepks cdkthtcppc papellggps 

241 vflfppkpkd tlmisrtpev tcvvvdvshe dpevkfnwyv dgvevhnakt kpreeqynst 

301 yrvvsvltvl hqdwlngkey kckvsnkalp apiektiska kgqprepqvy tlppsrdelt 

361 knqvsltclv kgfypsdiav ewesngqpen nykttppvld sdgsfflysk ltvdksrwqq 

421 gnvfscsvmh ealhnhytqk slslspgk 

(3)编码全长嵌合体2B8轻链(小鼠可变区和人恒定区)(嵌合体2B8 Kappa(Km(3)))的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQIDNO.156) 

1   atggaatcac agactctggt cttcatatcc atactgctct ggttatatgg tgctgatggg

61  aacattgtaa tgacccaatc tcccaaatcc atgtccatgt cagtaggaga gagggtcacc 

121 ttgagctgca aggccagtga gaatgtggtt tcttatgtat cctggtatca acagaaacca 

181 gcgcagtctc ctaaactgct gatatacggg gcatccaacc ggaacactgg ggtccccgat 

241 cgcttcacag gcagtggatc tgcaacagat ttcactctga ccatcagcag tgtgcgggct 

301 gaagaccttg cagattatca ctgtgggcag agttacaact atccgtacac gttcggaggg 

361 gggaccaggc tggaaataaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 

421 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 

481 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 

541 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 

601 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 

661 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttga 

(4)限定了全长嵌合体2B8轻链(嵌合体2B8 Kappa(Km(3)))的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.157) 

1   nivmtqspks msmsvgervt lsckasenvv syvswyqqkp aqspklliyg asnrntgvpd 

61  rftgsgsatd ftltissvra edladyhcgq synypytfgg gtrleikrtv aapsvfifpp 

121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 

181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec 

(5)编码人源化Hu2B8 Hv1-f.1重链可变区的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.158) 

1   atggactgca cctggaggat cctcctcttg gtggcagcag ctacaggcac ccacgccgag 

61  gtccagctgg tacagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg gggctacagt gaaaatctcc 

121 tgcaaggttt ctggatacac cttcaccacc tactggatgc actgggtgca acaggcccct 

181 ggaaaagggc ttgagtggat gggagagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat 

241 gagaagttcc agggcagagt caccataacc gcggacacgt ctacagacac agcctacatg 

301 gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcaac aaactatgtt 

361 ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc ag 

(6)限定了人源化Hu2B8 Hv1-f.1重链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.159) 

1  evqlvqsgae vkkpgatvki sckvsgytft tywmhwvqqa pgkglewmge inptnghtny 

61 nekfqgrvti tadtstdtay melsslrsed tavyycatny vgsifdywgq gtlvtvss 

(7)编码人IgG1重链恒定区(Glm(17，1)同种异型)的核酸序列 (SEQ ID NO.160) 

1   cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg 

61  gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt 

121 ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag 

181 gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct 

241 acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaaa gttgagccca 

301 aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc ctggggggac 

361 cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg 

421 aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt 

481 acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca 

541 gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg 

601 agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca 

661 aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggatgagc 

721 tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg 

781 ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc 

841 tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc 

901 agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc 

961 agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat ga 

(8)限定了人IgG1重链恒定区(Glm(17，1)同种异型)的蛋白质序列(SEQ ID NO.161)。第一个氨基酸得自可变区的最后一个核苷酸与IgG1重链序列的开始2个核苷酸的翻译产物。 

1   astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 

61  glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkkvep kscdkthtcp pcpapellgg 

121 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 

181 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsrde 

241 ltknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 

301 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk 

(9)编码全长重链人源化Hu2B8 Hy1f.1可变区和人IgG1(Glm(17，1)同种异型)重链恒定区的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.162) 

1    atggactgca cctggaggat cctcctcttg gtggcagcag ctacaggcac ccacgccgag 

61   gtccagctgg tacagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg gggctacagt gaaaatctcc 

121  tgcaaggttt ctggatacac cttcaccacc tactggatgc actgggtgca acaggcccct 

181  ggaaaagggc ttgagtggat gggagagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat 

241  gagaagttcc agggcagagt caccataacc gcggacacgt ctacagacac agcctacatg 

301  gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcaac aaactatgtt 

361  ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 

421  aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 

481  gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 

541  ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 

601  tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 

661  aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 

721  gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 

781  ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 

841  tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 

901  ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 

961  cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 

1021 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 

1081 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 

1141 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 

1201 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 

1261 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 

1321 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 

1381 ctctccctgt ctccgggtaa atga 

(10)限定了全长重链人源化Hu2B8 Hv1f.1可变区和人IgG1重链恒定区(Glm(17，1)同种异型)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ IDNO.163) 

1   evqlvqsgae vkkpgatvki sckvsgytft tywmhwvqqa pgkglewmge inptnghtny 

61  nekfqgrvti tadtstdtay melsslrsed tavyycatny vgsifdywgq gtlvtvssas 

121 tkgpsvfpla psskstsggt aalgclvkdy fpepvtvswn sgaltsgvht fpavlqssgl 

181 yslssvvtvp ssslgtqtyi cnvnhkpsnt kvdkkvepks cdkthtcppc papellggps 

241 vflfppkpkd tlmisrtpev tcvvvdvshe dpevkfnwyv dgvevhnakt kpreeqynst 

301 yrvvsvltvl hqdwlngkey kckvsnkalp apiektiska kgqprepgvy tlppsrdelt 

361 knqvsltclv kgfypsdiav ewesngqpen nykttppvld sdgsfflysk ltvdksrwqq 

421 gnvfscsvmh ealhnhytqk slslspgk 

(11)编码人源化Hu2B8 Hv5a.1重链可变区的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.164) 

1   atggggtcaa ccgccatcct cgccctcctc ctggctgttc tccaaggagt ctgtgccgaa 

61  gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aaaaagcccg gggagtctct gaggatctcc 

121 tgtaagggtt ctggatacag ctttaccacc tactggatgc actgggtgcg ccagatgccc 

181 gggaaaggcc tggagtggat gggggagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat

241 ccgtccttcc aaggccacgt caccatctca gctgacaagt ccatcagcac tgcctacctg 

301 cagtggagca gcctgaaggc ctcggacacc gccatgtatt actgtgcgag aaactatgtt 

361 ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc ag 

(12)限定了人源化Hu2B8 Hv5a.1重链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.165) 

1  evqlvqsgae vkkpgeslri sckgsgysft tywmhwvrqm pgkglewmge inptnghtny 

61 npsfqghvti sadksistay lqwsslkasd tamyycarny vgsifdywgq gtlvtvss 

(13)编码全长人源化Hu2B8 Hv5a.1重链可变区和人IgG1(Glm(17，1)同种异型)重链恒定区的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.166) 

1    atggggtcaa ccgccatcct cgccctcctc ctggctgttc tccaaggagt ctgtgccgaa 

61   gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aaaaagcccg gggagtctct gaggatctcc 

121  tgtaagggtt ctggatacag ctttaccacc tactggatgc actgggtgcg ccagatgccc 

181  gggaaaggcc tggagtggat gggggagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat 

241  ccgtccttcc aaggccacgt caccatctca gctgacaagt ccatcagcac tgcctacctg 

301  cagtggagca gcctgaaggc ctcggacacc gccatgtatt actgtgcgag aaactatgtt 

361  ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 

421  aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 

481  gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 

541  ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 

601  tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 

661  aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 

721  gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 

781  ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 

841  tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 

901  ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 

961  cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 

1021 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 

1081 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 

1141 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 

1201 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 

1261 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 

1321 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 

1381 ctctccctgt ctccgggtaa atga 

(14)限定了全长人源化Hu2B8 Hv5a.1重链可变区和人IgG1(Glm(17，1)同种异型)重链恒定区的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQID NO.167) 

1   evqlvqsgae vkkpgeslri sckgsgysft tywmhwvrgm pgkglewmge inptnghtny 

61  npsfqghvti sadksistay lqwsslkasd tamyycarny vgsifdywgq gtlvtvssas 

121 tkgpsvfpla psskstsggt aalgclvkdy fpepvtvswn sgaltsgvht fpavlqssgl 

181 yslssvvtvp ssslgtqtyi cnvnhkpsnt kvdkkvepks cdkthtcppc papellggps 

241 vflfppkpkd tlmisrtpev tcvvvdvshe dpevkfnwyv dgvevhnakt kpreeqynst 

301 yrvvsvltvl hqdwlngkey kckvsnkalp apiektiska kgqprepqvy tlppsrdelt 

361 knqvsltclv kgfypsdiav ewesngqpen nykttppvld sdgsfflysk ltvdksrwqq 

421 gnvfscsvmh ealhnhytqk slslspgk 

(15)编码人源化Hu2B8 Hv5-51.1重链可变区的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.168)

1   atggggtcaa ccgccatcct cgccctcctc ctggctgttc tccaaggagt ctgtgccgaa 

61  gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aaaaagcccg gggagtctct gaagatctcc 

121 tgtaagggtt ctggatacag ctttaccacc tactggatgc actgggtgcg ccagatgccc 

181 gggaaaggcc tggagtggat gggggagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat 

241 ccgtccttcc aaggccaggt caccatctca gctgacaagt ccatcagcac tgcctacctg 

301 cagtggagca gcctgaaggc ctcggacacc gccatgtatt actgtgcgag aaactatgtt 

361 ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc ag 

(16)限定了人源化Hu2B8 Hv5-51.1重链可变区序列的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.169) 

1  evqlvqsgae vkkpgeslki sckgsgysft tywmhwvrqm pgkglewmge inptnghtny 

61 npsfqgqvti sadksistay lqwsslkasd tamyycarny vgsifdywgq gtlvtvss 

(17)编码全长人源化Hu2B8 Hv5-51.1重链可变区和人IgG1(Glm(17，1)同种异型)重链恒定区的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.170) 

1    atggggtcaa ccgccatcct cgccctcctc ctggctgttc tccaaggagt ctgtgccgaa 

61   gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aaaaagcccg gggagtctct gaagatctcc 

121  tgtaagggtt ctggatacag ctttaccacc tactggatgc actgggtgcg ccagatgccc 

181  gggaaaggcc tggagtggat gggggagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat 

241  ccgtccttcc aaggccaggt caccatctca gctgacaagt ccatcagcac tgcctacctg 

301  cagtggagca gcctgaaggc ctcggacacc gccatgtatt actgtgcgag aaactatgtt 

361  ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 

421  aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 

481  gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 

541  ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 

601  tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 

661  aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 

721  gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 

781  ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 

841  tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 

901  ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 

961  cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 

1021 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 

1081 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 

1141 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 

1201 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 

1261 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 

1321 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 

1381 ctctccctgt ctccgggtaa atga 

(18)限定了全长人源化Hu2B8 Hv5-51.1重链可变区和人IgG1(Glm(17，1)同种异型)重链恒定区的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQID NO.171)

1   evqlvqsgae vkkpgeslki sckgsgysft tywmhwvrqm pgkglewmge inptnghtny 

61  npsfqgqvti sadksistay lqwsslkasd tamyycarny vgsifdywgq gtlvtvssas 

121 tkgpsvfpla psskstsggt aalgclvkdy fpepvtvswn sgaltsgvht fpavlqssgl 

181 yslssvvtvp ssslgtqtyi cnvnhkpsnt kvdkkvepks cdkthtcppc papellggps 

241 vflfppkpkd tlmisrtpev tcvvvdvshe dpevkfnwyv dgvevhnakt kpreeqynst 

301 yrvvsvltvl hqdwlngkey kckvsnkalp apiektiska kgqprepqvy tlppsrdelt 

361 knqvsltclv kgfypsdiav ewesngqpen nykttppvld sdgsfflysk ltvdksrwqq 

421 gnvfscsvmh ealhnhytqk slslspgk 

(19)编码人源化Hu2B8 Kv1-39.1 Kappa链可变区的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.172)。两个可能的起始ATG以大些字母示出。 

1   ATGgacATGa gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc

61  agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 

121 gtcaccatca cttgcaaggc cagtgagaat gtggtttctt atgtatcctg gtatcagcag 

181 aaaccaggga aagcccctaa gctcctgatc tatggggcat ccaaccggaa cactggggtc 

241 ccatcaaggt tcagtggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagtctg 

301 caacctgaag attttgcaac ttactactgt gggcagagtt acaactatcc gtacacgttt 

361 ggccagggga ccaagctgga gatcaaac 

(20)限定了人源化Hu2B8 Kv1-39.1 Kappa链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.173) 

1  diqmtqspss lsasvgdrvt itckasenvv syvswyqqkp gkapklliyg asnrntgvps 

61 rfsgsgsgtd ftltisslqp edfatyycgq synypytfgq gtkleik 

(21)编码人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因2)的核酸序列(SEQ ID NO.174) 

1   gaactgtggc tgcaccatct gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg 

61  gaactgcctc tgttgtgtgc ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt 

121 ggaaggtgga taacgccctc caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca 

181 gcaaggacag cacctacagc ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga 

241 aacacaaagt ctacgcctgc gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga 

301 gcttcaacag gggagagtgt tga 

(22)限定了人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因2)的蛋白质序列(SEQ ID NO.175)。第一个氨基酸得自可变区最后一个核苷酸和Kappa轻链序列的开始两个核苷酸的翻译产物。

1  rtvaapsvfi fppsdeqlks gtasvvclln nfypreakvq wkvdnalqsg nsqesvteqd 

61 skdstyslss tltlskadye khkvyacevt hqglsspvtk sfnrgec 

(23)编码全长人源化Hu2B8 KvI-39.1轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因2)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.176) 

1   atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc

61  agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 

121 gtcaccatca cttgcaaggc cagtgagaat gtggtttctt atgtatcctg gtatcagcag 

181 aaaccaggga aagcccctaa gctcctgatc tatggggcat ccaaccggaa cactggggtc 

241 ccatcaaggt tcagtggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagtctg 

301 caacctgaag attttgcaac ttactactgt gggcagagtt acaactatcc gtacacgttt 

361 ggccagggga ccaagctgga gatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 

421 ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 

481 ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 

541 tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 

601 ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccac 

661 cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgttg a 

(24)限定了全长人源化Hu2B8 KvI-39.1轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)的蛋白质序列(SEQ IDNO.177) 

1   diqmtqspss lsasvgdrvt itckasenvv syvswyqqkp gkapklliyg asnrntgvps 

61  rfsgsgsgtd ftltisslqp edfatyycgq synypytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp 

121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 

181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec 

(25)编码人源化Hu2B8 Kv3-15.1轻链可变区的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.178) 

1   atggaagccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccactgga

61  gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 

121 ctctcctgca aggccagtga gaatgtggtt tcttatgtat cctggtacca gcagaaacct 

181 ggccaggctc ccaggctcct catctatggg gcatccaacc ggaacactgg tatcccagcc 

241 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 

301 gaagattttg cagtttatta ctgtgggcag agttacaact atccgtacac gtttggccag 

361 gggaccaagc tggagatcaa ac 

(26)限定了人源化Hu2B8 Kv3-15.1轻链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.179) 

1  eivmtqspat lsvspgerat lsckasenvv syvswyqqkp gqaprlliyg asnrntgipa 

61 rfsgsgsgte ftltisslqs edfavyycgq synypytfgq gtkleik 

(27)编码全长人源化Hu2B8 Kv3-15.1轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因2)的核酸(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.180) 

1   atggaagccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccactgga

61  gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 

121 ctctcctgca aggccagtga gaatgtggtt tcttatgtat cctggtacca gcagaaacct 

181 ggccaggctc ccaggctcct catctatggg gcatccaacc ggaacactgg tatcccagcc 

241 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 

301 gaagattttg cagtttatta ctgtgggcag agttacaact atccgtacac gtttggccag 

361 gggaccaagc tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 

421 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 

481 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 

541 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 

601 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 

661 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttga 

(28)限定了人源化Hu2B8 Kv3-15.1轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因2)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.181) 

1   eivmtqspat lsvspgerat lsckasenvv syvswyqqkp gqaprlliyg asnrntgipa 

61  rfsgsgsgte ftltisslqs edfavyycgq synypytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp 

121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 

181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec 

为了方便，表13提供了本部分中讨论的抗体的全长序列与序列表中列出的那些序列之间的对应关系的索引表。 

表13 

  

SEQ ID NO.	蛋白质或核酸
		154	嵌合体2B8 IgG1(Glm(17，1))-核酸
155	嵌合体2B8 IgG1(Glm(17，1))-蛋白质
		156	嵌合体2B8 Kappa(Km(3))-核酸
157	嵌合体2B8 Kappa(Km(3))-蛋白质
		158             159	Hu2B8 Hv1f.1重链可变区-核酸
Hu2B8 Hv1f.1重链可变区-蛋白质
		160	人IgG1重链恒定区(Glm(17，1))同种异型-核酸
161	人IgG1重链恒定区(Glm(17，1))同种异型-蛋白质
		162	Hu2B8 Hv1f.1+IgG1恒定区(Glm(17，1)同种异型-核酸
163	Hu2B8 Hv1f.1+IgG1恒定区(Glm(17，1)同种异型-蛋白质
		164	Hu2B8 Hv5a.1重链可变区-核酸
165	Hu2B8 Hv5a.1重链可变区-蛋白质
		166	Hu2B8 Hv5a.1+IgG1恒定区(Glm(17，1)同种异型)-核酸
167	Hu2B8 Hv5a.1+IgG1恒定区(Glm(17，1)同种异型)-蛋白质
		168	Hu2B8 Hv5-51.1重链可变区-核酸
169	Hu2B8 Hv5-51.1重链可变区-蛋白质
		170	Hu2B8 Hv5-51.1+IgG1恒定区(Glm(17，1)同种异型)-核酸

[1184]   

171	Hu2B8 Hv5-51.1+IgG1恒定区(Glm(17，1)同种异型)-蛋白          质
		172	Hu2B8 Kv1-39.1 Kappa链可变区-核酸
173	Hu2B8 Kv1-39.1 Kappa链可变区-蛋白质
		174	人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因2)-核酸
175	人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因2)-蛋白质
		176	Hu2B8 Kv1-39.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因         2)-核酸
177	Hu2B8 Kv1-39.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因         2)-蛋白质
		178	Hu2B8 Kv3-15.1轻链可变区-核酸
179	Hu2B8 Kv3-15.1轻链可变区-蛋白质
		180	Hu2B8 Kv3-15.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因         2)-核酸
181	Hu2B8 Kv3-15.1+Kappa恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因         2)-蛋白质

B.人源化方法2 

用于减小小鼠2B8抗体免疫原性的第二种人源化方法是基于Studnicka等人(1994)PROTEIN ENG.7：805-814中所述的方法。鉴定出与小鼠2B8的重链可变区和kappa链可变区的同一性最高(在氨基酸的水平上)的重链和kappa链人种系可变区。根据残基变化影响结合或免疫原性的可能的风险，将在小鼠与人之间不同的残基转换成人的序列。在重链可变区(产生LR2B8HC)和kappa可变区(产生LR2B8LC)，将低风险的残基(即，在其变化时可能不影响抗原的结合而且还会减小潜在的免疫原性的残基)变为人的氨基酸。此外，在重链可变区(产生LRMR2B8HC)和kappa可变区(产生LRMR2B8LC)中，将低风险和中等风险的残基(即，在其变化时稍有可能影响抗原的结合但是还会减小潜在的免疫原性的残基)变为人的氨基酸。将人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型(等位基因1))加入到两个经改造的人重链可变区的羧基末端，并将人Kappa恒定区(Km(3)同种异型(等位基因1))加入到两个经改造的人轻链可变区的羧基末端，由此产生四个经改造的人抗体链。首先，通过基因合成的方法合成可变区核酸序列，然后将该序列加入到人恒定区序列中。将这些经改造的人抗体克隆到哺乳动物蛋白质表达载体中，而后以四种可能的重链加轻链的组合表达蛋白 质。如下所述，使用常规的技术测定嵌合体、嵌合体/人源化抗体、或人源化抗体与人HGF的结合。 

编码每一种人源化抗体的核酸序列和限定每一种人源化抗体的蛋白质序列总结如下。在该部分中，每个可变区的最后一个核苷酸是由可变区/恒定区连接体所产生的下一个密码子的第一个碱基。该核苷酸包含在可变区中，这是因为其为外显子的一部分。以下所列的恒定区的氨基酸序列包含该连接体密码子的翻译产物。 

(1)编码人源化LR2B8HC重链可变区的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.182) 

1   atgggctggt catatattat tctctttctt gttgctaccg ctaccgatgt gcactctcaa 

61  gtccaactcg tacaaccagg cgctgaagtc gtaaaacccg gaacatctgt taaactctca 

121 tgcaaagcct caggatacac tttcacaact tactggatgc attgggtcaa tcaagccccc 

181 ggacaaggcc tcgaatggat tggcgaaatt aacccaacta acggacatac taattataat 

241 gaaaaattta agggcaaagc tacactcacc gtcgataaat caacctctac agcttatatg 

301 gaactttcat ccctgagatc agaagataca gccgtctact attgcgccag aaactacgta 

361 ggatcaatat tcgattactg gggtcaaggc actctcctca cagtcagctc ag 

(2)限定了人源化LR2B8HC重链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.183) 

1  qvqlvqpgae vvkpgtsvkl sckasgytft tywmhwvnqa pgqglewige inptnghtny 

61 nekfkgkatl tvdkststay melsslrsed tavyycarny vgsifdywgq gtlltvss

(3)编码人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因1)的核酸序列(SEQ ID NO.184) 

1   ccagcacaaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg 

61  gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt 

121 ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag 

181 gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct 

241 acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga gttgagccca 

301 aatcttgtga caaaactcac acatgtccac cgtgcccagc acctgaactc ctggggggac 

361 cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg 

421 aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt 

481 acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca 

541 gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg 

601 agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca 

661 aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga 

721 tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg 

781 ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc 

841 tggactccga cggctccttc ttcctctata gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc 

901 agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc 

961 agaagagcct ctccctgtcc ccgggtaaat ga 

(4)限定了人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因1或2)的蛋白质序列(SEQ ID NO.185)。第一个氨基酸得自可变区最后一个核苷酸和IgG1重链序列的开始两个核苷酸的翻译产物。 

1   astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 

61  glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 

121 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 

181 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 

241 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttppv ldsdgsffly skltvdksrw 

301 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk

(5)编码全长重链人源化LR2B8HC重链可变区和人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因1)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.186) 

1    atgggctggt catatattat tctctttctt gttgctaccg ctaccgatgt gcactctcaa 

61   gtccaactcg tacaaccagg cgctgaagtc gtaaaacccg gaacatctgt taaactctca 

121  tgcaaagcct caggatacac tttcacaact tactggatgc attgggtcaa tcaagccccc 

181  ggacaaggcc tcgaatggat tggcgaaatt aacccaacta acggacatac taattataat 

241  gaaaaattta agggcaaagc tacactcacc gtcgataaat caacctctac agcttatatg 

301  gaactttcat ccctgagatc agaagataca gccgtctact attgcgccag aaactacgta 

361  ggatcaatat tcgattactg gggtcaaggc actctcctca cagtcagctc agccagcaca 

421  aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 

481  gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 

541  ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 

601  tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 

661  aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt 

721  gacaaaactc acacatgtcc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 

781  ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 

841  tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 

901  ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 

961  cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 

1021 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 

1081 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 

1141 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 

1201 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 

1261 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 

1321 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 

1381 ctctccctgt ccccgggtaa atga 

(6)限定了全长重链人源化LR2B8HC重链可变区和人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因1)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.187) 

1   qvqlvqpgae vvkpgtsvkl sckasgytft tywmhwvnqa pgqglewige inptnghtny 

61  nekfkgkatl tvdkststay melsslrsed tavyycarny vgaifdywgq gtlltvssas 

121 tkgpsvfpla psskstsggt aalgclvkdy fpepvtvswn sgaltsgvht fpavlqssgl 

181 yslssvvtvp ssslgtqtyi cnvnhkpsnt kvdkrvepks cdkthtcppc papellggps 

241 vflfppkpkd tlmisrtpev tcvvvdvshe dpevkfnwyv dgvevhnakt kpreeqynst 

301 ytvvsvltvl hqdwlngkey kckvsnkalp apiektiska kgqprepqvy tlppsreemt 

361 knqvsltclv kgfypsdiav ewesngqpen nykttppvld sdgsfflysk ltvdksrwqq 

421 gnvfscsvmh ealhnhytqk slslspgk     

(7)编码人源化LRMR2B8HC重链可变区的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.188) 

1   atgggttggt catatattat actctttctc gtagccaccg ccaccgacgt acactctcag 

61  gttcaactcg tacaacccgg cgccgaagtc aagaaaccag gaacatcagt caaactctca 

121 tgtaaagcaa gcggatacac ctttactact tattggatgc attgggtaag acaagccccc 

181 ggacaaggac tcgaatggat aggcgaaata aatcccacta atggacatac aaattataat 

241 caaaaatttc aaggacgcgc tacactcacc gtcgataaat caacctcaac cgcatacatg 

301 gaactcagct ccctccgatc cgaagacact gccgtttatt attgtgccag aaactatgta 

361 ggatctattt tcgattactg gggacaagga acacttctca ccgtaagctc ag

(8)限定了人源化LRMR2B8HC重链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.189) 

1  qvqlvqpgae vkkpgtsvkl sckasgytft tywmhwvrqa pgqglewige inptnghtny 

61 nqkfqgratl tvdkststay melsslrsed tavyycarny vgsifdywgq gtlltvss 

(9)编码全长重链人源化LRMR2B8HC重链可变区和人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因1)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.190) 

1    atgggttggt catatattat actctttctc gtagccaccg ccaccgacgt acactctcag 

61   gttcaactcg tacaacccgg cgccgaagtc aagaaaccag gaacatcagt caaactctca 

121  tgtaaagcaa gcggatacac ctttactact tattggatgc attgggtaag acaagccccc 

181  ggacaaggac tcgaatggat aggcgaaata aatcccacta atggacatac aaattataat 

241  caaaaatttc aaggacgcgc tacactcacc gtcgataaat caacctcaac cgcatacatg 

301  gaactcagct ccctccgatc cgaagacact gccgtttatt attgtgccag aaactatgta  

361  ggatctattt tcgattactg gggacaagga acacttctca ccgtaagctc agccagcaca 

421  aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 

481  gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 

541  ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 

601  tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 

661  aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt 

721  gacaaaactc acacatgtcc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 

781  ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 

841  tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 

901  ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 

961  cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 

1021 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 

1081 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 

1141 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 

1201 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 

1261 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 

1321 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 

1381 ctctccctgt ccccgggtaa atga 

(10)限定了全长重链人源化LRMR2B8HC重链可变区和人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因1)的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.191) 

1   qvqlvqpgae vkkpgtsvkl sckasgytft tywmhwvrqa pgqglewige inptnghtny 

61  nqkfqgratl tvdkststay melsslrsed tavyycarny vgsifdywgq gtlltvssas 

121 tkgpsvfpla psskstsggt aalgclvkdy fpepvtvswn sgaltsgvht fpavlqssgl 

181 yslssvvtvp ssslgtqtyi cnvnhkpsnt kvdkrvepks cdkthtcppc papellggps 

241 vflfppkpkd tlmisrtpev tcvvvdvshe dpevkfnwyv dgvevhnakt kpreeqynst 

301 yrvvsvltvl hqdwlngkey kckvsnkalp apiektiska kgqprepqvy tlppsreemt 

361 knqvsltclv kgfypsdiav ewesngqpen nykttppvld sdgsfflysk ltvdksrwqq 

421 gnvfscsvmh ealhnhytqk slslspgk

(11)编码人源化LR2B8LC轻链可变区的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.192) 

1   atggaaagtc agacccttgt attcatctct attcttcttt ggttgtatgg agcagacggc

61  gacattgtga tgacccaatc ccccgatagt atggccatga gtgtaggaga aagagtcacc 

121 cttaattgca aagcctccga aaatgtcgtt tcatatgtgt cttggtatca acaaaaaccc 

181 ggccaatcac ccaaacttct catatacggc gcttcaaaca gaaacacagg cgttcccgac 

241 agatttagtg gatccggatc agctacagat ttcaccctta ccatcagttc agttcaagca 

301 gaagacgttg cagactatca ttgcggacaa tcttataact acccttacac attcggacaa 

(12)限定了人源化LR2B8LC轻链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.193) 

1  divmtqspds mamsvgervt lnckasenvv syvswyqqkp gqspklliyg asnrntgvpd 

61 rfsgsgsatd ftltissvqa edvadyhcgq synypytfgq gtkleik 

(13)编码人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)的核酸序列(SEQ ID NO.194) 

1   gtacggtggc tgcaccatct gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg 

61  gaactgcctc tgttgtgtgc ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt 

121 ggaaggtgga taacgccctc caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca 

181 gcaaggacag cacctacagc ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga 

241 aacacaaagt ctacgcctgc gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga 

301 gcttcaacag gggagagtgt tag 

(14)限定了人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)的蛋白质序列(SEQ ID NO.195)。第一个氨基酸得自可变区最后一个核苷酸和Kappa轻链序列的开始两个核苷酸的翻译产物。 

1  rtvaapsvfi fppsdeqlks gtasvvclln nfypreakvq wkvdnalqsg nsqesvteqd 

61 skdstyslss tltlskadye khkvyacevt hqglsspvtk sfnrgec 

(15)编码全长人源化LR2B8LC轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)的核酸序列(SEQ ID NO.196) 

1   atggaaagtc agacccttgt attcatctct attcttcttt ggttgtatgg agcagacggc

61  gacattgtga tgacccaatc ccccgatagt atggccatga gtgtaggaga aagagtcacc 

121 cttaattgca aagcctccga aaatgtcgtt tcatatgtgt cttggtatca acaaaaaccc 

181 ggccaatcac ccaaacttct catatacggc gcttcaaaca gaaacacagg cgttcccgac 

241 agatttagtg gatccggatc agctacagat ttcaccctta ccatcagttc agttcaagca 

301 gaagacgttg cagactatca ttgcggacaa tcttataact acccttacac attcggacaa 

361 ggaaccaaac tcgaaattaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 

421 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 

481 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 

541 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 

601 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 

661 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag

(16)编码人源化LR2B8LC轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)的蛋白质序列(SEQ ID NO.197) 

1   divmtqspds mamsvgervt lnckasenvv syvswyqqkp ggspklliyg asnrntgvpd 

61  rfsgsgsatd ftltissvga edvadyhcgq synypytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp 

121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 

181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec 

(17)编码人源化LRMR2B8LC轻链可变区的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.198) 

1   atggaatccc aaacccttgt tttcatctct atccttctct ggctttatgg cgccgacgga

61  gacatcgtaa tgacacaatc ccctgactct cttgctatga gcttgggcga acgagtaaca 

121 cttaactgca aagcatccga aaatgtcgta tcttacgtat cctggtatca gcaaaaacct 

181 ggtcaaagtc ctaaacttct tatatatggt gcaagtaatc gtgaaagtgg cgtcccagac 

241 agatttagcg gttcaggttc agcaactgac tttacactta caatttctag cgttcaggcc 

301 gaagacgttg cagactatca ttgtggacaa tcttataact atccttatac tttcggacaa 

361 ggcactaaac ttgaaattaa ac 

(18)限定了人源化LRMR2B8LC轻链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.199) 

1  divmtqspds lamslgervt lnckasenvv syvswyqqkp gqspklliyg asaresgvpd 

61 rfsgsgsatd ftltissvqa edvadyhcgq synypytfgq gtkleik 

(19)编码全长人源化LRMR2B8LC轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.200) 

1   atggaatccc aaacccttgt tttcatctct atccttctct ggctttatgg cgccgacgga

61  gacatcgtaa tgacacaatc ccctgactct cttgctatga gcttgggcga acgagtaaca 

121 cttaactgca aagcatccga aaatgtcgta tcttacgtat cctggtatca gcaaaaacct 

181 ggtcaaagtc ctaaacttct tatatatggt gcaagtaatc gtgaaagtgg cgtcccagac 

241 agatttagcg gttcaggttc agcaactgac tttacactta caatttctag cgttcaggcc 

301 gaagacgttg cagactatca ttgtggacaa tcttataact atccttatac tttcggacaa 

361 ggcactaaac ttgaaattaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 

421 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 

481 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 

541 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 

601 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 

661 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 

(20)限定了全长人源化LRMR2B8LC轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)的蛋白质序列(SEQ ID NO.201) 

1   divmtqspds lamslgervt lnckasenvv syvswyqqkp gqspklliyg asnresgvpd 

61  rfsgsgsatd ftltissvqa edvadyhcgq synypytfgq gtkleikrtv aapsvfifpp 

121 sdeqlksgta svvcllnnfy preakvqwkv dnalqsgnsq esvteqdskd styslsstlt 

181 lskadyekhk vyacevthqg lsspvtksfn rgec

为了方便，表14提供了本部分中讨论的抗体的全长序列与序列表中列出的那些序列之间的对应关系的索引表。 

表14 

  

SEQ ID NO.	蛋白质或核酸
		182	LR2B8HC重链可变区-核酸
183	LR2B8HC重链可变区-蛋白质
		184	人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型(等位基因1)-核酸
185	人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型(等位基因1)-蛋白质
		186	LR2B8HC+IgG1恒定区(Glm(3)同种异型(等位基因1)-核酸
187	LR2B8HC+IgG1恒定区(Glm(3)同种异型(等位基因1)-蛋白        质
		188	LRMR2B8HC重链可变区-核酸
189	LRMR2B8HC重链可变区-蛋白质
		190	LRMR2B8HC+IgG1恒定区(Glm(3)同种异型(等位基因1)-核        酸
191	LRMR2B8HC+IgG1恒定区(Glm(3)同种异型(等位基因1)-蛋        白质
		192	LR2B8LC轻链可变区-核酸
193	LR2B8LC轻链可变区-蛋白质
		194	人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)-核酸
195	人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)-蛋白质
		196	LR2B8LC+Kappa恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)-核        酸
197	LR2B8LC+Kappa恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)-蛋        白质
		198	LRMR2B8LC轻链可变区-核酸
199	LRMR2B8LC轻链可变区-蛋白质
		200	LRMR2B8LC+Kappa恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)-        核酸
201	LRMR2B8LC+Kappa恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)-        蛋白质

表15总结了通过在上文中描述的本实施例的人源化方法1和人源化方法2制备的人源化2B8抗体的重链CDR序列(Kabat定义)。

表15 

  

抗体	CDR1	CDR2	CDR3	全长重链可变区
					小鼠2B8重链	TYWMH             (SEQ ID N0：15)	EINPTNGHTNYNEKFKS  (SEQ ID NO：16)	NYVGSIFDY         (SEQ ID NO：17)	SEQ ID N0：12
Hu2B8 Hv1f.1	TYWMH             (SEQ ID N0：15)	EINPTNGHTNYNEKFQG  (SEQ ID NO：202)	NYVGSIFDY         (SEQ ID N0：17)	SEQ ID N0：159
					Hu2B8 Hv5a.1	TYWMH             (SEQ ID NO：15)	EINPTNGHTNYNPSFQG  (SEQ ID NO：203)	NYVGSIFDY         (SEQ ID N0：17)	SEQ ID NO：165
Hu2B8 Hv5-51.1	TYWMH             (SEQ ID N0：15)	EINPTNGHTNYNPSFQG  (SEQ ID N0：203)	NYVGSIFDY         (SEQ ID NO：17)	SEQ ID NO：169
					LR2B8HC	TYWMH             (SEQ ID N0：15)	EINPTNGHTNYNEKFKG  (SEQ ID NO：204)	NYVGSIFDY         (SEQ ID NO：17)	SEQ ID N0：183
LRMR2B8HC	TYWMH             (SEQ ID NO：15)	EINPTNGHTNYNQKFQG  (SEQ ID NO：205)	NYVGSIFDY         (SEQ ID NO：17)	SEQ ID N0：189

表16总结了通过在上文中描述的本实施例的人源化方法1和人源化方法2制备的人源化2B8抗体的轻链CDR序列(Kabat定义)。 

表16 

  

抗体	CDR1	CDR2	CDR3	全长轻链可变区
					小鼠2B8轻链	KASENVVSYVS       (SEQ ID N0：18)	GASNRNT           (SEQ ID NO：19)	GQSYNYPYT         (SEQ ID N0：20)	SEQ ID NO：14
Hu2B8 Kv1-39.1	KASENVVSYVS       (SEQ ID NO：18)	GASNRNT           (SEQ ID NO：19)	GQSYNYPYT         (SEQ ID N0：2O)	SEQ ID NO：173
					Hu2B8 Kv3-15.1	KASENVVSYVS       (SEQ ID NO：18)	GASNRNT           (SEQ ID NO：19)	GQSYNYPYT         (SEQ ID N0：20)	SEQ ID N0：179
LR2B8LC	KASENVVSYVS       (SEQ ID N0：18)	GASNRNT           (SEQ ID NO：19)	GQSYNYPYT         (SEQ ID N0：2O)	SEQ ID N0：193
					LRMR2B8LC	KASENVVSYVS       (SEQ ID NO：18)	GASNRES           (SEQ ID N0：206)	GQSYNYPYT         (SEQ ID NO：2O)	SEQ ID N0：199

C.人源化2B8抗体的结合亲和力 

使用BIAcore T100装置通过表面等离子体共振来评估抗体结合亲和力以及相互作用的动力学。使用胺偶联(BIAcore，Catalog No.BR-1000-50)，根据制造商的建议，通过标准的偶联方法将小鼠抗人免疫球蛋白(Jackson ImmunoResearch Labs，209-005-098)固定于羧甲基化的葡聚糖CM4的传感器芯片(BIAcore，Catalog No.BR-1005-34)上。在25℃下，使用PBS(GIBCO，Catalog No.14040-133)作为运行缓冲剂进行分析，所述PBS含有0.05％表面活性剂P20(BIAcore，Catalog No.BR-1000-54)、2mg/mL BSA(EMD，Catalog No.2930)以 及10mg/mL CM-葡聚糖的钠盐(Fluka，Catalog No.86524)。 

抗体被捕获在流速为10μL/min的单个流动的细胞上。用于每种抗体的注射时间是可变的，从而使每个循环中捕获大约20RU的抗体。以60μL/min的速度向参照表面(没有被捕获的抗体)和活性表面(捕获了待测试的抗体)上依次注射缓冲剂或稀释于运行缓冲剂中的HGF(R&D Systems，Catalog No.294-HGN-025)，时间为2分钟。根据浓度，对解离相监测15或90分钟。然后在开始另一个循环之前，使用10mM pH 2.0的甘氨酸-HCl(BIAcore，Catalog No.BR-1003-55)使所述的表面再生，其中所述甘氨酸-HCl在3分钟内以60μL/min的流速注入。所测试的HGF的浓度为1.88、3.75和7.5nM。利用BIAevalutation软件的动力学函数及推荐的差级，确定动力学参数。每种抗体的动力学参数(k_a(结合速率常数)，k_d(解离速率常数)和K_D(平衡解离常数))总结于图8中。 

图8总结的结果表明，超级人源化重链(Hu2B8 Hv5a.1、Hu2B8Hv5-51.1或Hu2B8 Hv1-f.1)和轻链(Hu2B8 Kv1-39.1或Hu2B8Kv3-15.1)的某些组合保持了与嵌合体2B8(小鼠可变区与人恒定区)和2B8相同的与HGF的结合亲和力(K_D)(表5)。 

D.互斥结合分析 

使用BIAcore T100装置通过表面等离子体共振技术来评估与HGF的互斥结合。使用胺偶联(BIAcore，Catalog No.BR-1000-50)，根据制造商的建议，通过标准的偶联方法将小鼠抗人免疫球蛋白(Jackson ImmunoResearch Labs，209-005-098)固定于羧甲基化的葡聚糖CM5的传感器芯片(BIAcore，Catalog No.BR-1006-68)上。在25℃下，使用PBS(GIBCO，Catalog No.14040-133)作为运行缓冲剂来进行分析，所述PBS含有0.05％表面活性剂P20(BIAcore，#BR-1000-54)、2mg/mL BSA(EMD，Catalog No.2930)以及10mg/mL CM-葡聚糖的钠盐(Fluka，Catalog No.86524)。 

人源化的抗体被捕获在流速为30μL/min的单个流动的细胞上。用于每种抗体的注射时间是可变的，从而使每个循环中捕获大约150 RU的抗体。以30μL/min的速度向捕获的人源化的抗体上注射稀释于运行缓冲剂中的最终浓度为7.5μg/mL的HGF(R&D Systems，Catalog No.294-HGN-025)，时间持续90秒。监测HGF的结合，随后以30μL/min的速率注入小鼠2B8抗体或多克隆山羊抗HGF的抗体(R& D Systems，AF294)，时间持续3分钟。然后在开始另一个循环之前，使用10mM pH 2.0的甘氨酸-HCl(BIAcore，Catalog No.BR-1003-55)使所述的表面再生，其中所述甘氨酸-HCl是在3分钟内以60μL/min的流速注入。所得结果总结于图9中。 

图9中总结的结果表明，人源化的2B8抗体和嵌合体2B8抗体二者都抑制了小鼠2B8与HGF的结合。这些结果证明，人源化的抗体仍如同原始的2B8抗体结合相同的HGF表位。 

实施例13-人源化的2B8变体的制备 

a.HUMAN ENGINEERED ^TM 抗体

将密码子和表达优化的低风险的以及低风险至中等风险的经改造的人轻链(分别为LR2B8LC和LRMR2B8LC)和重链(分别为LR2B8HC和LRMR2B8HC)同步克隆到XOMA的瞬时抗体表达载体中，该载体含有人Kappa和Gamma-1恒定区结构模块(module)。通过瞬时转染到HEK293E细胞中产生4种经改造的人2B8变体。所产生的4种抗体如下： 

HE2B8-1＝LR2B8HC(+IgG1恒定区(Glm(3)同种异型(等位基因 

1))(SEQ ID NO.187)+LR2B8LC(+Kappa恒定区(Km(3)同种异型(等位基因1)))(SEQ ID NO.197) 

HE2B8-2＝LR2B8HC(+IgG1恒定区(Glm(3)同种异型(等位基因1))(SEQ ID NO.187)+LRMR2B8LC(+Kappa恒定区(Km(3)同种异型(等位基因1)))(SEQ ID NO.201) 

HE2B8-3＝LRMR2B8HC(+IgG1恒定区(Glm(3)同种异型(等位基因1))(SEQ ID NO.191)+LR2B8LC(+Kappa恒定区(Km(3)同种异型(等位基因1)))(SEQ ID NO.197) 

HE2B8-4＝LRMR2B8HC(+IgG1恒定区(Glm(3)同种异型(等位基因1))(SEQ ID NO.191)+LRMR2B8LC(+Kappa恒定区(Km(3)同种异型 (等位基因1)))(SEQ ID NO.201) 

将轻链和重链共转染到XOMA的悬浮适应HEK293E细胞中，所述细胞培养在2升的摇瓶的IS293培养基(Irvine Scientific，Irvine，CA)中。在摇瓶中24小时后，对200mL的转染细胞离心，然后重悬于40mL的新鲜培养基中并转移至Integra烧瓶(Wilson WolfManufacturing公司，MN)中，用于生产。温育7天后，将细胞悬浮液从Integra瓶中取出，离心，并保留培养物上清液。在蛋白质A离心柱(Pro-Chem)上纯化培养物上清液中的抗体，然后用PBS透析，再进行浓缩和除菌过滤。 

b.SUPERHUMANIZED ^TM 抗体

利用HindIII和EcoRI限制性位点，将全长Hu2B8_Hv5-51.1+人IgG1恒定区(Glm(3)同种异型)cDNA克隆到pEE6.4(Lonza Biologics，Berkshire，UK)中。利用HindIII和EcoRI限制性位点，将全长Hu2B8_Kv1-39.1可变区+人Kappa恒定区cDNA、以及全长Hu2B8_Kv3-15.1可变区+人Kappa恒定区cDNA分别克隆到pEE14.4(Lonza Biologies)中。通过NotI/SalI消化，移取hCMV-MIE启动子+全长Hu2B8_Hv5-51.1+人IgG1恒定区结构域(Glm(3)同种异型)cDNA+SV40 poly A片段(在pEE6.4中)，并通过NotI/SalI位点，插入到任一个Kappa链pEE14.4载体中，由此产生2个不同的表达载体，每一贯都同时表达重链和轻链，从而产生以下抗体： 

sh2B8-9(Glm(3))＝hu2B8 Hv5-51.1(+IgG1恒定区(Glm(3)同种异 

             型)(等位基因2))(SEQ ID NO.210)+hu2B8 Kv 

             1-39.1(+Kappa恒定区(Km(3)同种异型(等位基因 

             2)))(SEQ ID NO：177) 

sh2B8-12(Glm(3))＝hu2B8 Hv5-51.1(+IgG1恒定区(Glm(3)同种异 

             型)(等位基因2))(SEQ ID NO.210)+hu2B8 Kv 

             3-15.1(+Kappa恒定区(Km(3)同种异型(等位基因 

             2)))(SEQ ID No.181)

以下列出编码人IgG1重链恒定区Glm(3)同种异型(等位基因2)以及每种全长重链序列的核酸序列、以及限定了人IgG1重链恒定区Glm(3)同种异型(等位基因2)以及每种全长重链序列的蛋白质序列。轻链序列与实施例12中所述的相同。 

(1)编码人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因2)的核酸序列(SEQ ID NO.207) 

1   cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg 

61  gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt 

121 ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag 

181 gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct 

241 acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga gttgagccca 

301 aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc ctggggggac 

361 cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg 

421 aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt 

481 acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca 

541 gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg 

601 agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaag accatctcca 

661 aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga 

721 tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg 

781 ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc 

841 tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc 

901 agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc 

961 agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat ga 

(2)限定了人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因1或2)的蛋白质序列(SEQ ID NO.208)。第一个氨基酸得自可变区最后一个核苷酸和IgG1重链序列的开始两个核苷酸的翻译产物。

1   astkgpsvfp lapsskstsg gtaalgclvk dyfpepvtvs wnsgaltsgv htfpavlqss 

61  glyslssvvt vpssslgtqt yicnvnhkps ntkvdkrvep kscdkthtcp pcpapellgg 

121 psvflfppkp kdtlmisrtp evtcvvvdvs hedpevkfnw yvdgvevhna ktkpreeqyn 

181 styrvvsvlt vlhqdwlngk eykckvsnka lpapiektis kakgqprepq vytlppsree 

241 mtknqvsltc lvkgfypsdi avewesngqp ennykttpv ldsdgsffly skltvdksrw 

301 qqgnvfscsv mhealhnhyt qkslslspgk 

(3)编码含有人源化的Hu2B8 Hv5-51.1重链可变区和人IgG1重链恒定区Glm(3)同种异型(等位基因2)的全长链的核酸序列(下划线的为信号序列)(SEQ ID NO.209) 

1    atggggtcaa ccgccatcct cgccctcctc ctggctgttc tccaaggagt ctgtgccgaa 

61   gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aaaaagcccg gggagtctct gaagatctcc 

121  tgtaagggtt ctggatacag ctttaccacc tactggatgc actgggtgcg ccagatgccc 

181  gggaaaggcc tggagtggat gggggagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat 

241  ccgtccttcc aaggccaggt caccatctca gctgacaagt ccatcagcac tgcctacctg 

301  cagtggagca gcctgaaggc ctcggacacc gccatgtatt actgtgcgag aaactatgtt 

361  ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 

421  aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 

481  gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 

541  ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 

601  tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 

661  aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt 

721  gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 

781  ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 

841  tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 

901  ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 

961  cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 

1021 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga agaccatctc caaagccaaa 

1081 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 

1141 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 

1201 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 

1261 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 

1321 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 

1381 ctctccctgt ctccgggtaa atga 

(4)限定了含有人源化的Hu2B8 Hv5-51.1重链可变区和人IgG1重链恒定区Glm(3)同种异型(等位基因2)的全长重链的蛋白质序列(没有信号序列)(SEQ ID NO.210) 

1   evqlvqsgae vkkpgeslki sckgsgysft tywmhwvrqm pgkglewmge inptnghtny 

61  npsfqgqvti sadksistay lqwsslkasd tamyycarny vgsifdywgq gtlvtvssas 

121 tkgpsvfpla psskstsggt aalgclvkdy fpepvtvswn sgaltsgvht fpavlqssgl 

181 yslssvvtvp ssslgtqtyi cnvnhkpsnt kvdkrvepks cdkthtcppc papellggps 

241 vflfppkpkd tlmisrtpev tcvvvdvshe dpevkfnwyv dgvevhnakt kpreeqynst 

301 yrvvsvltvl hqdwlngkey kckvsnkalp apiektiska kgqprepqvy tlppsreemt 

361 knqvsltclv kgfypsdiav ewesngqpen nykttppvld sdgsfflysk ltvdksrwqq 

421 gnvfscsvmh ealhnhytqk slslspgk 

将每个双表达载体都转染到293T细胞中，并使用含有10％胎牛血 清的DMEM进行瞬时表达。转染48小时后，将细胞用含有4mM L-谷氨酰胺的无血清培养基IS GRO^TM(Irvine Scientific，Santa Ana，CA)洗涤，并用该培养基代替原来的培养基。每天收集上清液，并用新的培养基代替收集的上清液，如此持续10天。将培养物上清液离心，过滤(0.45μm)并浓缩10-100倍。在ProSep vA树脂(Millipore)上纯化抗体，并用PBS透析，再进行浓缩和除菌过滤。 

实施例14—人源化2B8变体的结合特性 

实施例13中制备的人源化的抗体以及实施例3中制备的重组HGF蛋白质通过它们结合hHGF的能力来表征。 

使用BIAcore T100装置通过表面等离子体共振来分析抗体以评估其结合hHGF和实施例3中讨论的融合蛋白质的能力。使用胺偶联(BIAcore，Catalog No.BR-1000-50)，根据制造商提供的说明书通过标准的偶联方法将每种抗体固定于羧甲基化的葡聚糖CM5的传感器芯片(BIAcore，Catalog No.BR-1006-68)上。 

在25℃下，使用PBS(GIBCO，Catalog No.14040-133)作为运行缓冲剂来进行分析，所述PBS含有0.05％表面活性剂P20(BIAcore，Catalog No.R-1000-54)、2mg/mL BSA(EMD，Catalog No.2930)和10mg/mL CM-葡聚糖的钠盐(Fluka，Catalog No.86524)。将含有不同HGF融合蛋白质的上清液或得自经空载体转染的细胞的上清液以30μL/min的流速注射到每种抗体上，时间持续3分钟。在注射完毕后30秒时，在基线上，以共振单位(RU)测定所得的结合。将结合与稀释于运行缓冲剂中的人HGF(R&D Systems，Catalog No.294-HGN-025)相比较。通过将结合与对照表面相比较，监测到不存在特异性的结合。结果总结于表17中。

表17 

  

抗体	rhHGF(R&D  Systems)	rmHGF(R&D  Systems)	MHM嵌合体  (495-585)	MHM嵌合体     (507-585)	MHM嵌合体     (499-556)
						2B8	结合	不结合	结合	结合	结合
HE2B8-1	结合	不结合	结合	结合	结合
						HE2B8-2	结合	不结合	结合	结合	结合
HE2B8-3	结合	不结合	结合	结合	结合
						HE2B8-4	结合	不结合	结合	结合	结合
sh2B8-9       (Glm(3))	结合	不结合	结合	结合	结合
						sh2B8-12      (Glm(3))	结合	不结合	结合	结合	结合

表17中的结果表明，每种基于人源化的2B8的抗体以及所有的3中小鼠-人-小鼠嵌合体都结合rhHGF。 

实施例15—人源化2B8变体的结合亲和力 

使用表面等离子体共振测定表15中列出的抗体的结合亲和力以及相互作用的动力学。 

使用胺偶联(BIAcore，Catalog No.BR-1000-50)，根据制造商提供的说明书通过标准的偶联方法将小鼠抗人免疫球蛋白(JacksonLabs，Catalog No.209-005)固定于羧甲基化的葡聚糖CM4的传感器芯片(BIAcore，Catalog No.BR-1006-68)上。在25℃下，使用含有0.05％表面活性剂P20(BIAcore，Catalog No.BR-1000-54)和2mg/mLBSA(EMD，Catalog No.2930)的PBS(GIBCO，Catalog No.14040-133)进行分析。 

抗体被捕获在流速为10μL/min的单个流动的细胞上。用于每种抗体的注射时间是可变的，从而使每个循环中捕获大约20RU的抗体。以60μL/min的速度向参照表面(没有被捕获的抗体)和活性表面(捕获了待测试的抗体)上依次注射缓冲剂或稀释于运行缓冲剂中的HGF(R&D Systems，Catalog No.294-HGN-025)，时间持续2分钟。根据浓度，对解离相监测15或90分钟。然后在开始另一个循环之前，使用10mM pH 2.2的甘氨酸-HCl(BIAcore，Catalog No.BR-1003-54)使所述的表面再生，其中所述的甘氨酸-HCl是在3分钟内以60μ L/min的流速注入的。所测试的HGF的浓度为0.46nM至7.5nM。 

利用BIAevalutation^TM软件的动力学函数及推荐的差级，确定动力学参数。每种抗体的动力学参数(k_a(结合速率常数)，k_d(解离速率常数)以及K_D(平衡解离常数))总结于表18中。 

表18 

  

抗体	ka(1/Ms)	kd(1/s)	KD(pM)	SD
					2B8	1.4x106	1.0x10-5	7.3	-
HE2B8-1	2.2x106	1.4x10-5	7.1	5.2
					HE2B8-2	1.8x106	9.6x10-5	5.2	2.7
HE2B8-3	2.0x106	4.1x10-5	2.0	1.1
					HE2B8-4	1.7x106	1.1x10-5	6.5	1.3
sh2B8-9         (Glm17，1)	2.0x106	1.7x10-5	8.1	5.3
					sh2B8-12        (Glm17，1)	1.9x106	2.3x10-5	12	0.4

这些数据表明，人源化的抗体具有快的结合速率(k_a)、极慢的解离速率(k_d)和极高的亲和力(K_D)。具体而言，所述抗体的亲和力为2.0-12pM。 

实施例16—比较25℃下和37℃下的结合亲和力 

使用表面等离子体共振，在不同的条件下测定抗体HE2B8-4、sh2B8-9、sh2B8-12以及小鼠2B8的结合亲和力以及相互作用的动力学。 

使用胺偶联(BIAcore，Catalog No.BR-1000-50)，根据制造商提供的说明书通过标准的偶联方法将小鼠抗人免疫球蛋白(JacksonLabs，Catalog No.209-005)或兔抗小鼠免疫球蛋白(BIAcore，Catalog No.BR-1005-14)固定于羧甲基化的葡聚糖CM4的传感器芯片(BIAcore，Catalog No.BR-1006-68)上。在25℃下测定抗体sh2b8-9和sh2B8-12时，使用CM5传感器芯片(BIAcore，Catalog No.BR-1006-68)。在25℃和37℃下，使用含有0.05％表面活性剂P20(BIAcore，Catalog No.BR-1000-54)和2mg/mL BSA(EMD，CatalogNo.2930)的PBS(GIBCO，Catalog No.14040-133)作为运行缓冲剂来 进行分析。 

抗体被捕获在流速为10μL/min的单个流动的细胞上。用于每种抗体的注射时间是可变的，从而使每个循环中捕获大约20RU的抗体。以60μL/min的速度向参照表面(没有被捕获的抗体)和活性表面(捕获了待测试的抗体)上依次注射缓冲剂或稀释于运行缓冲剂中的HGF(R&D Systems，Catalog No.294-HGN-025)，时间持续2分钟。根据浓度，对解离相监测15或90分钟。然后在开始另一个循环之前，使用10mM pH 2.2的甘氨酸-HCl(BIAcore，Catalog No.BR-1003-54)使小鼠抗人免疫球蛋白传感器芯片的表面再生，其中所述的甘氨酸-HCl是在3分钟内以60L/min的流速注入的。在开始另一个循环之前，使用10mM pH 1.7的甘氨酸-HCl(BIAcore，Catalog No.BR-1003-54)使兔抗小鼠免疫球蛋白传感器芯片的表面再生，其中所述的甘氨酸-HCl是在3分钟内以60L/min的流速注入的。所测试的HGF的浓度为0.46nM至7.5nM。 

利用BIAevaluation软件的动力学函数及推荐的差级，确定动力学参数。每种抗体的动力学参数(k_a(结合速率常数)，k_d(解离速率常数)以及K_D(平衡解离常数))总结于表19中。 

表19 

  

抗体	温度(℃)	ka(1/Ms)	kd(1/s)	KD(pM)
					2B8	25	1.6x106	2.1x10-5	13.5
2B8	37	2.8x106	1.3x10-5	4.5
					HE2B8-4	25	2.0x106	1.2x10-5	5.6
HE2B8-4	37	3.1x106	1.0x10-5	3.3
					sh2B8-9         (Glm(17，1))	25	2.0x106	1.7x10-5	8.1
sh2B8-9         (Glm(3))	37	2.5x106	1.4x10-5	5.8
					sh2B8-12        (Glm(17，1))	25	1.9x106	2.3x10-5	12.0
sh2B8-12        (Glm(3))	37	2.4x106	1.1x10-5	4.8

如所预计的那样，结合速率常数随着温度的升高而升高。另人惊奇地是，解离常数没有随着温度的相应升高而明显改变。因此，总体 的平衡解离常数(K_D)比生理温度(37℃)下的平衡解离常数小大约1.4至3倍(亲和力更高)。 

实施例17—人源化的2B8变体的中和活性 

表征实施例14制备的抗体的(a)抑制hHGF与c-Met结合的能力以及(b)抑制4MBr-5细胞中由引入的BrdU所刺激产生的HGF的能力。 

按照以下所述进行HGF-Met的结合抑制分析(中和分析)。通过ELISA检测抗体抑制hHGF与c-Met结合的能力。具体而言，在4℃下，将Wallac 96孔DELFIA分析平板(Wallac公司，Catalog No.AAAND-0001)用100μL碳酸盐包被缓冲剂(15mM Na₂CO₃和34mMNaHCO₃，pH 9.0)中的6.25μg/mL HGF(R&D Systems，Catalog No.294-HGN-025)包被16小时。然后，在室温下将该分析平板用200μLPBS中的5％非脱脂奶粉封闭1小时。在单独的分析平板中，通过将浓度升高的处于研究中的抗体(0.033-250nM，2倍系列稀释)加入到2nM生物素标记的c-Met中来制备该抗体，其中所述的c-Met溶于含有5％由非脱脂奶粉的PBS中。根据制造商提供的说明书，以10：1的生物素：c-Met的比例(Pierce，Catalog No.21335)对c-Met(R&D Systems，Catalog No.358-MT/CF)进行生物素标记。将每孔中的100μL样品转移至分析平板中，并在室温下温育2小时。然后，将所得分析平板用PBS-0.1％ Tween 20洗涤3次，并在室温下，与Eu标记的链霉亲和素(Wallac，Catalog No.1244-360)温育1小时，其中Eu标记的链霉亲和素以1:1000的比例稀释于DELFIA分析缓冲液(Wallac，CatalogNo.4002-0010)中。将所得板用DELFIA洗涤液(Wallac，Catalog No.4010-0010)洗涤3次，并在室温下与100μL/孔的DELFIA增强溶液(Wallac #4001-0010)搅拌温育15分钟。使用铕示踪法，在Victor³V仪器(Perkin Elmer)上读取所述平板。使用Prism计算IC₅₀的值。 

所得的IC₅₀值示于表20中。

表20 

  

抗体	I50(nM)	SD
			2B8	9.2	1.2
HE2B8-1	6.0	1.2
			HE2B8-2	5.7	1.1
HE2B8-3	5.9	1.1
			HE2B8-4	6.5	1.2
sh2B8-9(Glm(3))	4.2	-
			sh2B8-12(Glm(3))	6.8	-

表20的结果表明，所测试的人源化的抗体有效地中和HGF与c-Met的结合。 

此外，在实施例7(b)所述的细胞增殖分析中，对表17中的抗体也进行了测试。结果总结于表21中。 

表21 

  

抗体	IC50(nM)	SD
			2B8	0.86	0.35
HE2B8-1	0.47	0.15
			HE2B8-2	0.66	0.13
HE2B8-3	0.55	0.28
			HE2B8-4	0.58	0.26
sh2B8-9(Glm(3))	0.52	0.11
			sh2B8-12(Glm(3))	0.81	0.22

表212的结果表明，所有测试的人源化的抗体都抑制HGF诱导的4MBr-5细胞的增殖。 

实施例18—人源化2B8变体的抗扩散活性 

在实施例8所述的抗扩散分析中，对表17中的抗体进行测试。结果总结于表22中。 

表22 

-不抑制

+++极强，接近完全抑制 

++强烈抑制 

+可检测程度的抑制 

表22中的结果表明，所有测试的人源化抗体对HGF诱导的扩散的抑制程度都与小鼠单克隆抗体2B8的抑制程度相同。 

实施例19—对HGF刺激的c-Met磷酸化的抑制 

在实施例9所述的c-Met磷酸化分析中，对表17中的抗体进行测试。结果总结于表23中。 

表23 

  

抗体	2次试验的平均值	标准误差
			2B8	0.91	0.02
HE2B8-1	0.80	0.04
			HE2B8-2	0.88	0.15
HE2B8-3	0.79	0.05
			HE2B8-4	0.75	0.14
sh2B8-9(Glm(3))	0.93	0.03
			sh2B8-12(Glm(3))	0.81	0.07

表23的结果表明，所有测试的人源化的抗体都是PC-3细胞中HGF诱导的c-Met磷酸化的有效抑制剂。 

实施例20—U87MG异种移植物模型中的肿瘤抑制 

在U87MG异种移植物模型中，测试本发明的人源化单克隆抗体抑制肿瘤生长的能力。在37℃下在含有5％ CO₂和95％空气的气氛的培养中扩增U87MG细胞(ATCC)，其中包括含有10％胎牛血清、100单位/mL青霉素和100μg/mL链霉素的Dulbecco′s Modified Eagle培养基(DMEM)的培养基。对细胞进行次级培养，并通过使用胰蛋白酶-EDTA移取培养皿壁上的细胞进行维持。 

通过胰蛋白酶消化来收集接近汇合的细胞，随后将50％ Matrigel(BD Biosciences；catalog no.356237)中的5x10⁶个细胞皮下注射到7周龄雌性ICR SCID小鼠(Taconic Labs)的肩胛骨之间的背部上侧的区域中。使用卡尺测量肿瘤的长直径(L)和短直径(W)(mm)。如下计算肿瘤的体积(vol.)：体积(mm³)＝L x W²/2。当肿瘤生长到大约200 mm³时，将带有肿瘤的小鼠随机分成5组，每组10只小鼠。一组小鼠接受PBS，一组小鼠接受人IgG对照。其他4组中的每组小鼠接受人源化的抗体(HE2B8-1、HE2B8-2、HE2B8-3和HE2B8-4)中的一种。所有抗体的剂量均为0.25mg/kg体重，每周2次，并通过腹膜内注射5个剂量。每星期记录2次肿瘤的体积和小鼠的体重。利用学生t检验分析肿瘤生长的抑制。 

所测试的人源化的抗体在体内是有活性的。HE2B8-1的肿瘤生长抑制为57％，其p值为0.02；HE2B8-2的肿瘤生长抑制为61％，其p值为0.02；HE2B8-3的肿瘤生长抑制为85％，其p值为0.0004；而HE2B8-4的肿瘤生长抑制为74％，其p值为0.001。没有观察到明显的体重损失。 

在肋侧皮下接种U87MG肿瘤的雌性NCR裸鼠(Taconic Labs)中，如上所述进行随后的研究。每组小鼠(每组10只)都以0.5mg/kg的量接受以下治疗中的一种：PBS载体对照、huIgG对照、HE2B8-4或sh2B8-9。在最少5个星期内，每周2次腹膜内给予治疗。每个治疗组都表现为相似的肿瘤衰退，其中sh2B8-9的肿瘤生长抑制为113％，HE2B8-4的肿瘤生长抑制为115％，而最短的肿瘤生长延迟为30天。所述两种治疗的耐受性均良好，并且明显的体重没有损失。 

通过引用并入本文 

为所有目的，本文所提及的每份专利文献和科学文章的全部公开内容均以引用方式并入本文。 

等价物 

本发明可以表现为其他具体形式，而不脱离本发明的精神或基本特征。因此，上述实施方案在任何情况下都被认为是示意性的，而不是限定本文所述的发明。因此，本发明的范围由所附的权利要求书而不是上述说明来表明，并且在与权利要求等价的意义和范围内的所有改变都被认为包含在本发明的范围内。

序列表

<110>W.M.温斯顿

     S.K.赖特

     M.韩

     L.布劳尔特

     林杰

     B.伊特麦德-吉尔伯森

     C.克尼赫

     J.久里斯

<120>肝细胞生长因子(HGF)的结合蛋白质

<130>AVO-001B

<150>60/810,714

<151>2006-06-02

<150>60/860,509

<151>2006-11-21

<160>216

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>424

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区1A3

<400>1

atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgaa    60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaactctcc    120

tgtgcagcct ctgaattcac tttcagtaac tattacatgt cttgggttcg ccagactcca    180

gagaagaggc tgcagtgggt cgcatacatt agtcctggtg gtggtagctc ctactatcca    240

gccagtgtga agggtcgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg    300

caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgcaag acaaggggat  360

ggttactacg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc  420

tcag                                                               424

<210>2

<211>141

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区1A3

<400>2

Met Asn Phe Gly Leu Arg Leu Ile Phe Leu Val Leu Val Leu Lys Gly

1               5                   10                  15

Val Lys Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

            20                  25                  30

Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe

        35                  40                  45

Ser Asn Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu

    50                  55                  60

Gln Trp Val Ala Tyr Ile Ser Pro Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Tyr Pro

65                  70                  75                  80

Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

                85                  90                  95

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met

            100                 105                 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Ala Met

        115                 120                 125

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

    130                 135                 140

<210>3

<211>382

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区1A3

<400>3

atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt   60

gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgttt ctgtgggaga aactgtcacc  120

atcacatgtc gagcaagtga gaatatttat agtaatttag catggtatca gcagaaacag  180

ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca  240

aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttccctca agatcaacag cctgcagtct  300

gaagattttg ggacttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtacac gttcggaggg  360

gggaccaagc tggaaataaa ac                                           382

<210>4

<211>127

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区1A3

<400>4

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1               5                   10                  15

Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser

            20                  25                  30

Val Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn

        35                  40                  45

Ile Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro

    50                  55                  60

Gln Leu Leu Val Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser

65                  70                  75                  80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn

                85                  90                  95

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp

            100                 105                 110

Gly Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

        115                 120                 125

<210>5

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR1 1A3

<400>5

Asn Tyr Tyr Met Ser

1               5

<210>6

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR2 1A3

<400>6

Tyr Ile Ser Pro Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Tyr Pro Ala Ser Val Lys

1               5                   10                  15

Gly

<210>7

<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR3 1A3

<400>7

Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr

1               5                   10

<210>8

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR1 1A3

<400>8

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala

1               5                   10

<210>9

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR2 1A3

<400>9

Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp

1               5

<210>10

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR3 1A3

<400>10

Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr Thr

1               5

<210>11

<211>412

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区2B8

<400>11

atgggatgga gctatatcat cctctttttg gtagcaacag ctacagatgt ccactcccag     60

gtccaactgc agcagcctgg ggctgaactg gtgaagcctg ggacttcagt gaagctgtcc    120

tgcaaggctt ctggctacac cttcaccacc tactggatgc actgggtgaa tcagaggcct    180

ggacaaggcc ttgagtggat tggagagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat    240

gagaagttca agagcaaggc cacactgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg    300

caactcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtgcaag aaactatgtt    360

ggtagcatct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc ag            412

<210>12

<211>137

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区2B8

<400>12

Met Gly Trp Ser Tyr Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Asp

1               5                   10                  15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys

            20                  25                  30

Pro Gly Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

        35                  40                  45

Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn

65                  70                  75                  80

Glu Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser

                85                  90                  95

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val

            100                 105                 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly

        115                 120                 125

Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

    130                 135

<210>13

<211>382

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区2B8

<400>13

atggaatcac agactctggt cttcatatcc atactgctct ggttatatgg tgctgatggg     60

aacattgtaa tgacccaatc tcccaaatcc atgtccatgt cagtaggaga gagggtcacc    120

ttgagctgca aggccagtga gaatgtggtt tcttatgtat cctggtatca acagaaacca    180

gcgcagtctc ctaaactgct gatatacggg gcatccaacc ggaacactgg ggtccccgat    240

cgcttcacag gcagtggatc tgcaacagat ttcactctga ccatcagcag tgtgcgggct    300

gaagaccttg cagattatca ctgtgggcag agttacaact atccgtacac gttcggaggg    360

gggaccaggc tggaaataaa ac                                             382

<210>14

<211>127

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区2B8

<400>14

Met Glu Ser Gln Thr Leu Val Phe Ile Ser Ile Leu Leu Trp Leu Tyr

1               5                   10                  15

Gly Ala Asp Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser

            20                  25                  30

Met Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn

        35                  40                  45

Val Val Ser Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Gln Ser Pro

    50                  55                  60

Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp

65                  70                  75                  80

Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

                85                  90                  95

Ser Val Arg Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr

            100                 105                 110

Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

        115                 120                 125

<210>15

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR1 2B8

<400>15

Thr Tyr Trp Met His

1               5

<210>16

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR2 2B8

<400>16

Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1               5                   10                  15

Ser

<210>17

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR3 2B8

<400>17

Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr

1               5

<210>18

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR1 2B8

<400>18

Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Ser Tyr Val Ser

1               5                   10

<210>19

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR2 2B8

<400>19

Gly Ala Ser Asn Arg Asn Thr

1               5

<210>20

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR3 2B8

<400>20

Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Tyr Thr

1               5

<210>21

<211>412

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区2F8

<400>21

atggaatgga gctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactgccag     60

gtccagctga agcagtctgg agctgagctg gtgaggcctg ggacttcagt gaagatgtcc    120

tgcaaggctt ctggctacac cttcactacc tactatatac actgggtgaa tcagaggcct    180

ggacagggcc ttgagtggat tggaaagatt ggtcctggaa gtggtagtac ttactacaat    240

gagatgttca aagacaaggc cacattgact gtagacacat cctccagcac agcctacatg    300

cagctcagca gcctgacatc tgacgactct gcggtctatt tctgtgcaag aaggggactg    360

ggacgtggct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc ag            412

<210>22

<211>137

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区2F8

<400>22

Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1               5                   10                  15

Val His Cys Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg

            20                  25                  30

Pro Gly Thr Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

        35                  40                  45

Thr Thr Tyr Tyr Ile His Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Ile Gly Lys Ile Gly Pro Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn

65                  70                  75                  80

Glu Met Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser

                85                  90                  95

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val

            100                 105                 110

Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Gly Leu Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly

        115                 120                 125

Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

    130                 135

<210>23

<211>394

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区2F8

<400>23

atggagacag acacaatcct gctatgggtg ctgctgctct gggttccagg ctccactggt   60

gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc  120

atctcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggta atagttatat caactggtac  180

caacagaaac caggacagcc acccaaagtc ctcatctatg ttgcatccaa tctagaatct  240

gggatcccag ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat  300

cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc aaagtattga ggatcctccc  360

acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg aaac                              394

<210>24

<211>131

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区2F8

<400>24

Met Glu Thr Asp Thr Ile Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1               5                   10                  15

Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala

            20                  25                  30

Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser

        35                  40                  45

Val Asp Tyr Asp Gly Asn Ser Tyr Ile Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

    50                  55                  60

Gly Gln Pro Pro Lys Val Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Leu Glu Ser

65                  70                  75                  80

Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

                85                  90                  95

Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

            100                 105                 110

Gln Gln Ser Ile Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu

        115                 120                 125

Glu Leu Lys

    130

<210>25

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR1 2F8

<400>25

Thr Tyr Tyr Ile His

1               5

<210>26

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR2 2F8

<400>26

Lys Ile Gly Pro Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Met Phe Lys

1               5                   10                  15

Asp

<210>27

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR3 2F8

<400>27

Arg Gly Leu Gly Arg Gly Phe Asp Tyr

1               5

<210>28

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR1 2F8

<400>28

Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asn Ser Tyr Ile Asn

1               5                   10                  15

<210>29

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR2 2F8

<400>29

Val Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1               5

<210>30

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR3 2F8

<400>30

Gln Gln Ser Ile Glu Asp Pro Pro Thr

1               5

<210>31

<211>418

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区3B6

<400>31

atggaatggc cttgtatctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgaaggtgt ccactcccag   60

gttcagctgc agcagtctgg ggctgaactg gtgaggcctg ggtcctcagt gaagatttcc  120

tgcaaggctt ctggctatgt attcagtagc tactggatga actgggtgaa gcagaggcct  180

ggacagggtc ttgagtggat tggacagatt tatcctggag atggtgatag taactacaat  240

ggaaacttca agggtaaagc cacactgact gcagacaaat cctccagtac agcctacatg  300

cagctcagca gcctaacatc tgaggactct gcggtctatt tctgtgcatc ccagctcggg  360

ctacgtgaga actactttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctcag    418

<210>32

<211>139

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区3B6

<400>32

Met Glu Trp Pro Cys Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Glu Gly

1               5                   10                  15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg

            20                  25                  30

Pro Gly Ser Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Val Phe

        35                  40                  45

Ser Ser Tyr Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Ile Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ser Asn Tyr Asn

65                  70                  75                  80

Gly Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser

                85                  90                  95

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val

            100                 105                 110

Tyr Phe Cys Ala Ser Gln Leu Gly Leu Arg Glu Asn Tyr Phe Asp Tyr

        115                 120                 125

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

    130                 135

<210>33

<211>388

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区3B6

(2个可能的ATG起始密码子)

<400>33

atggacatga ggacccctgc tcagtttctt ggaatcttgt tgctctggtt tccaggtatc     60

aaatgtgaca tcaagatgac ccagtctcca tcttccatgt atgcatctct aggagagaga    120

gtcacaatca cttgcaaggc gagtcaggac attaaaagct atttaagctg gttccagcag    180

aaaccaggga aatctcctaa gaccctgatc tatcgtgtaa acagattggt agatggggtc    240

ccatcaaggt tcagtggcag tggatctggg caagattctt ctctcaccat caccagcctg    300

gagaatgaag atatgggaat ttattattgt ctacagtatg atgagtttcc gttcacgttc    360

ggagggggga ccaagctgga aataaagc                                       388

<210>34

<21l>129

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区3B6

(2个可能的起始甲硫氨酸)

<400>34

Met Asp Met Arg Thr Pro Ala Gln Phe Leu Gly Ile Leu Leu Leu Trp

1               5                   10                  15

Phe Pro Gly Ile Lys Cys Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser

            20                  25                  30

Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser

        35                  40                  45

Gln Asp Ile Lys Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys

    50                  55                  60

Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Val Asn Arg Leu Val Asp Gly Val

65                  70                  75                  80

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Ser Ser Leu Thr

                85                  90                  95

Ile Thr Ser Leu Glu Asn Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln

            100                 105                 110

Tyr Asp Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

        115                 120                 125

Lys

<210>35

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR1 3B6

<400>35

Ser Tyr Trp Met Asn

1               5

<210>36

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR2 3B6

<400>36

Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ser Asn Tyr Asn Gly Asn Phe Lys

1               5                   10                  15

Gly

<210>37

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR3 3B6

<400>37

Gln Leu Gly Leu Arg Glu Asn Tyr Phe Asp Tyr

1               5                   10

<210>38

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR1 3B6

<400>38

Lys Ala Ser Gln Asp Ile Lys Ser Tyr Leu Ser

1               5                   10

<210>39

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR2 3B6

<400>39

Arg Val Asn Arg Leu Val Asp

1               5

<210>40

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR3 3B6

<400>40

Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Phe Thr

1               5

<210>41

<211>397

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区3D11

<400>41

atggctgtcc cggtgctgtt cctctgcctg gttgcatttc caagctgtgt cctgtcccag     60

gtacagctga aggagtcagg acctggcctg gtggcgccct cacagagcct gtccatcact    120

tgcactgtct ctgggttttc attaaccagc tatagtttac actgggttcg ccagcctcca    180

ggaaagggtc tggaatggct gggagtaata tgggctggtg gaaacacaaa ttataattcg    240

tctctcatgt ccagactgac catcaggaaa gacaactcca agagccaagt tttcttaaaa    300

atgaacagtc tgcaaactga tgacacagcc atgtactact gtgccagaga gaggtttgct    360

tactggggcc aagggactct ggtcactgtc tctgcag                             397

<210>42

<211>132

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区3D11

<400>42

Met Ala Val Pro Val Leu Phe Leu Cys Leu Val Ala Phe Pro Ser Cys

1               5                   10                  15

Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala

            20                  25                  30

Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu

        35                  40                  45

Thr Ser Tyr Ser Leu His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Ser

65                  70                  75                  80

Ser Leu Met Ser Arg Leu Thr Ile Arg Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln

                85                  90                  95

Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr

            100                 105                 110

Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

        115                 120                 125

Thr Val Ser Ala

    130

<210>43

<211>385

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区3D11

<400>43

atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcctcagt caaaatatcc     60

agaggacaaa ttgttctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatatcc aggggagaag    120

gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgcactggta ccagcagaag    180

tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggcttc tggagtccct    240

gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactccc tcacaatcag tagtatggag    300

gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaacccact cacgttcggt    360

gctgggacca agctggagct gaaac                                          385

<210>44

<211>128

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区3D11

<400>44

Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser

1               5                   10                  15

Val Lys Ile Ser Arg Gly Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile

            20                  25                  30

Met Ser Ala Tyr Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser

        35                  40                  45

Ser Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser

    50                  55                  60

Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro

65                  70                  75                  80

Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile

                85                  90                  95

Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp

            100                 105                 110

Ser Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

        115                 120                 125

<210>45

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR1 3D11

<400>45

Ser Tyr Ser Leu His

1               5

<210>46

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR2 3D11

<400>46

Val Ile Trp Ala Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Ser Ser Leu Met Ser

1               5                   10                  15

<210>47

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR3 3D11

<400>47

Glu Arg Phe Ala Tyr

1               5

<210>48

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR1 3D11

<400>48

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His

1               5                   10

<210>49

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR2 3D11

<400>49

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

1               5

<210>50

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR3 3D11

<400>50

Gln G1n Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr

1               5

<210>51

<211>424

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区1D3

<400>51

atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgaa     60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaactctcc    120

tgtgcagcct ctggattcac tttcagtgac tattacatgt cttgggttcg ccagactcca    180

gagaagaggc tggagtgggt cgcatacatt agtagtggtg gtggtagcac ctactatcca    240

gacagtgtga agggtcgatt caccatctcc cgagacaatg ccaagaacac cctgtacctg    300

caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatatatt actgtgtgag acaaggggat    360

ggttattacg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt catcgtctcc    420

tcag                                                                 424

<210>52

<211>141

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区1D3

<400>52

Met Asn Phe Gly Leu Arg Leu Ile Phe Leu Val Leu Val Leu Lys Gly

1               5                   10                  15

Val Lys Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

            20                  25                  30

Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

        35                  40                  45

Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro

65                  70                  75                  80

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

                85                  90                  95

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile

            100                 105                 110

Tyr Tyr Cys Val Arg Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Ala Met

        115                 120                 125

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Ile Val Ser Ser

    130                 135                 140

<210>53

<211>382

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区1D3

<400>53

atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgtcagatgt   60

gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc  120

atcacatgtc gaacaagtga gaatatttac agtaatttag cgtggtatca gcagaaacag  180

ggaaaatctc ctcagctcct aatctatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca  240

aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttccctca ggatcaacag cctgcagtct  300

gaagattttg ggaggtatta ctgtcaacat ttttggggga ctccgtacac gttcggaggg  360

gggaccaaac tggaaataaa ac                                           382

<210>54

<211>127

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区1D3

<400>54

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1               5                   10                  15

Asp Val Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser

            20                  25                  30

Val Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn

        35                  40                  45

Ile Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro

    50                  55                  60

Gln Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser

65                  70                  75                  80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Arg Ile Asn

                85                  90                  95

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Gly Arg Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp

            100                 105                 110

Gly Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

        115                 120                 125

<210>55

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR1 1D3

<400>55

Asp Tyr Tyr Met Ser

1               5

<210>56

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR2 1D3

<400>56

Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

1               5                   10                  15

Gly

<210>57

<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR3 1D3

<400>57

Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr

1               5                   10

<210>58

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR1 1D3

<400>58

Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala

1               5                   10

<210>59

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR2 1D3

<400>59

Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp

1               5

<210>60

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR3 1D3

<400>60

Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr Thr

1               5

<210>61

<211>424

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区1F3

<400>61

atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgag   60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagtctg gagggtccct gaaactctcc  120

tgtgcggcct ctggattcac tttcagtaac tatttcatgt cttgggttcg ccagactcca  180

gagaagaggc tggagtgggt cgcatatatt agtagtggtg gtggtagcac ctactatcca  240

gacagtgtga agggtcgatt caccatctct agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg  300

caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgtaag acaaggggat  360

ggttactacg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc  420

tcag                                                               424

<210>62

<211>141

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区1F3

<400>62

Met Asn Phe Gly Leu Arg Leu Ile Phe Leu Val Leu Val Leu Lys Gly

1               5                   10                  15

Val Lys Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

            20                  25                  30

Ser Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

        35                  40                  45

Ser Asn Tyr Phe Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro

65                  70                  75                  80

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

                85                  90                  95

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met

            100                 105                 110

Tyr Tyr Cys Val Arg Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Ala Met

        115                 120                 125

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

    130                 135                 140

<210>63

<211>382

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区1F3

<400>63

atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt     60

gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc    120

atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacag    180

ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgat gcaacacact taccagatgg tgtgccatca    240

aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttccctca agatcaacag cctgcagtct    300

gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtacac gtttggaggg    360

gggaccagac tggaaattaa ac                                             382

<210>64

<211>127

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区1F3

<400>64

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1               5                   10                  15

Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser

            20                  25                  30

Val Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn

        35                  40                  45

Ile Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro

    50                  55                  60

Gln Leu Leu Val Tyr Asp Ala Thr His Leu Pro Asp Gly Val Pro Ser

65                  70                  75                  80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn

                85                  90                  95

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp

            100                 105                 110

Gly Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

        115                 120                 125

<210>65

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR1 1F3

<400>65

Asn Tyr Phe Met Ser

1               5

<210>66

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR2 1F3

<400>66

Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

1               5                   10                  15

Gly

<210>67

<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR3 1F3

<400>67

Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr

1               5                   10

<210>68

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR1 1F3

<400>68

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala

1               5                   10

<210>69

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR2 1F3

<400>69

Asp Ala Thr His Leu Pro Asp

1               5

<210>70

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR3 1F3

<400>70

Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr Thr

1               5

<210>71

<211>424

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区3A12

<400>71

atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgaa   60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaaatctcc  120

tgtgcagcct ctggatttac tttcagtaac tatttcatgt cttgggttcg ccagactcca  180

gagaagaggc tggagtgggt cgcatacatt agtagtggtg gtggtagcac ctactatcca  240

gacagtgtga agggtcgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg  300

caaatgaaca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgtaag acaaggagat  360

ggttactatg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc  420

tcag                                                               424

<210>72

<211>141

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链可变区3A12

<400>72

Met Asn Phe Gly Leu Arg Leu Ile Phe Leu Val Leu Val Leu Lys Gly

1               5                   10                  15

Val Lys Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

            20                  25                  30

Pro Gly Gly Ser Leu Lys Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

        35                  40                  45

Ser Asn Tyr Phe Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro

65                  70                  75                  80

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

                85                  90                  95

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met

            100                 105                 110

Tyr Tyr Cys Val Arg Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Ala Met

        115                 120                 125

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

    130                 135                 140

<210>73

<211>382

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区3A12

<400>73

atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt     60

gacatccaga tgactcagtc gccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc    120

atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac attaatttag catggtatca gcagaaacag    180

ggaaaatctc ctcagctcct ggtccatgct gcaacaaagt tagcagatgg tgtgccatca    240

aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag tattccctca agatcaacag cctgcagtct    300

gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtacac gttcggaggg    360

gggaccaaac tagaaataaa ac                                             382

<210>74

<211>127

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链可变区3A12

<400>74

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1               5                   10                  15

Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser

            20                  25                  30

Val Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn

        35                  40                  45

Ile Tyr Ile Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro

    50                  55                  60

Gln Leu Leu Val His Ala Ala Thr Lys Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser

65                  70                  75                  80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn

                85                  90                  95

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp

            100                 105                 110

Gly Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

        115                 120                 125

<210>75

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR1 3A12

<400>75

Asn Tyr Phe Met Ser

1               5

<210>76

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR2 3A12

<400>76

Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

1               5                   10                  15

Gly

<210>77

<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的重链CDR3 3A12

<400>77

Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr

1               5                   10

<210>78

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR1 3A12

<400>78

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ile Asn Leu Ala

1               5                   10

<210>79

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR2 3A12

<400>79

Ala Ala Thr Lys Leu Ala Asp

1               5

<210>80

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的轻(kappa)链CDR3 3A12

<400>80

Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr Thr

1               5

<210>81

<211>974

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>参照小鼠IgG1重链恒定区(J00453)

<400>81

ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc caaactaact   60

ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg acagtgacct  120

ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg gagtctgacc  180

tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagccc tcggcccagc gagaccgtca  240

cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt gtgcccaggg    300

attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc ttcatcttcc    360

ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg tgtgttgtgg    420

tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat gatgtggagg    480

tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc cgctcagtca    540

gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa tgcagggtca    600

acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa ggcagaccga    660

aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag gataaagtca    720

gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag tggcagtgga    780

atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catgaacacg aatggctctt    840

acttcgtcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga aatactttca    900

cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc ctctcccact    960

ctcctggtaa atga                                                      974

<210>82

<211>974

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>确定为1A3、1D3、1F3和2B8的小鼠IgG1重链恒定区(来自AJ种系小鼠)

<400>82

ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc caaactaact     60

ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg acagtgacct    120

ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg cagtctgacc    180

tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc gagaccgtca    240

cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt gtgcccaggg    300

attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc ttcatcttcc    360

ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg tgtgttgtgg    420

tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat gatgtggagg    480

tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc cgctcagtca    540

gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa tgcagggtca    600

acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa ggcagaccga    660

aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag gataaagtca    720

gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag tggcagtgga    780

atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca gatggctctt    840

acttcgtcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga aatactttca    900

cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc ctctcccact    960

ctcctggtaa atga                                                      974

<210>83

<211>323

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>确定为1D3、1F3和2B8的参照小鼠Kappa轻链恒定区(V00807)

     和小鼠Kappa轻链恒定区(来自AJ种系小鼠)

<400>83

gggctgatgc tgcaccaact gtatccatct tcccaccatc cagtgagcag ttaacatctg     60

gaggtgcctc agtcgtgtgc ttcttgaaca acttctaccc caaagacatc aatgtcaagt    120

ggaagattga tggcagtgaa cgacaaaatg gcgtcctgaa cagttggact gatcaggaca    180

gcaaagacag cacctacagc atgagcagca ccctcacgtt gaccaaggac gagtatgaac    240

gacataacag ctatacctgt gaggccactc acaagacatc aacttcaccc attgtcaaga    300

gcttcaacag gaatgagtgt tag                                            323

<210>84

<211>323

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>确定为1A3的合成小鼠Kappa轻链恒定区，其包含与1D3、1F3和2B8相比

     的207位置处的1个改变的核苷酸

<400>84

gggctgatgc tgcaccaact gtatccatct tcccaccatc cagtgagcag ttaacatctg     60

gaggtgcctc agtcgtgtgc ttcttgaaca acttctaccc caaagacatc aatgtcaagt    120

ggaagattga tggcagtgaa cgacaaaatg gcgtcctgaa cagttggact gatcaggaca    180

gcaaagacag cacctacagc atgagcagca ccctcatgtt gaccaaggac gagtatgaac    240

gacataacag ctatacctgt gaggccactc acaagacatc aacttcaccc attgtcaaga    300

gcttcaacag gaatgagtgt tag                                            323

<210>85

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸引物BD SMART II A

<400>85

aagcagtggt atcaacgcag agtacgcggg                                      30

<210>86

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸引物RACE CDS

<220>

<221>misc_feature

<222>(27)..(27)

<223>n is a，c，g，t or u

<400>86

tttttttttt tttttttttt tttttvn                                        27

<210>87

<211>45

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸引物Universal Primer Mix A

<400>87

ctaatacgac tcactatagg gcaagcagtg gtatcaacgc agagt                    45

<210>88

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸引物Universal Primer Mix A

<400>88

ctaatacgac tcactatagg gc                                             22

<210>89

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的IgG1恒定区特异引物

<400>89

tatgcaaggc ttacaaccac a                                              21

<210>90

<211>28

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的IgG1恒定区特异引物

<400>90

gccagtggat agacagatgg gggtgtcg                                       28

<210>91

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸引物

<400>91

ctcattcctg ttgaagctct tgacaat                                        27

<210>92

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸引物

<400>92

cgactgaggc acctccagat gtt                                            23

<210>93

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸引物T7

<400>93

taatacgact cactataggg                                                20

<210>94

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸引物M13正向

<400>94

gtaaaacgac ggccagt                                                   17

<210>95

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸引物M13反向

<400>95

caggaaacag ctatgacc                                                  18

<210>96

<211>63

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸正向引物

<400>96

ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggctg ccaccatgaa ctttgggctc agattgattt    60

tcc                                                                  63

<210>97

<211>54

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸反向引物

<400>97

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtt catttaccag gagagtggga gagg          54

<210>98

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸正向引物

<400>98

ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggctg ccaccatggg atggagctat atcatcctct    60

tt                                                                   62

<210>99

<211>53

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸反向引物

<400>99

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtt catttaccag gagagtggga gag           53

<210>100

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸正向引物

<400>100

ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggctg ccaccatgga atcacagact ctggtcttca    60

ta                                                                   62

<210>101

<211>54

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸反向引物

<400>101

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtc taacactcat tcctgttgaa gctc          54

<210>102

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸5引物hHGF NheI引物

<400>102

actggctagc atgtgggtga ccaaactcct                                     30

<210>103

<211>46

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸3引物hHGF NotI his标签引物

<400>103

gtgatggtga tggtgatggc ggccgcatga ctgtggtacc ttatat                   46

<210>104

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸5引物His IgFc引物

<400>104

actggcggcc gccatcacca tcaccatcac                                     30

<210>105

<211>31

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的寡核苷酸3引物IgFc BamHI引物

<400>105

actgggatcc tcactattta cccggggaca g                                   31

<210>106

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的hHGF-Fc(G555E)正义引物

<400>106

catgatgtcc acgaaagagg agatgag                                        27

<210>107

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的hHGF-Fc(G555E)反义引物

<400>107

ctcatctcct ctttcgtgga catcatg                                        27

<210>108

<211>37

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的hHGF-Fc(C561R)正义引物

<400>108

ggaagaggag atgagaaacg caaacaggtt ctcaatg                             37

<210>109

<211>37

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的hHGF-Fc(C561R)反义引物

<400>109

cattgagaac ctgtttgcgt ttctcatctc ctcttcc                             37

<210>110

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于mHGFα链5引物NheI的合成的片段1的引物

<400>110

atcggctagc atgatgtggg ggaccaaac                                      29

<210>111

<211>36

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于mHGFα链5引物NheI的合成的片段1的引物

<400>111

ggttttgttt tgttgacgcc caacatttac cctaag                              36

<210>112

<211>36

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于hHGFβ链aa V495-L585的合成的片段2的引物

<400>112

ccaaaacaaa acaactgcgg gttgtaaatg ggattc                              36

<210>113

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于hHGFβ链aa V495-L585的合成的片段2的引物

<400>113

tctagaccaa aattacttcg aacgagctgg acgttaggac                          40

<210>114

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于mHGFβ链C-末端3引物NotI的片段3的引物

<400>114

agatctggtt ttaatgaagc ttgctcgacc tgcaatcctg                          40

<210>115

<211>48

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于mHGFβ链C-末端3引物NotI的片段3的引物

<400>115

cactaccact accactaccg ccggcgtgtt gaacatacag ttttaatg                 48

<210>116

<211>38

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的突变的引物1

<400>116

catcaccatc accatcacta agcgggtctg gtgccacg                            38

<210>117

<211>38

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的突变的引物2

<400>117

cgtggcacca gacccgctta gtgatggtga tggtgatg                            38

<210>118

<211>2922

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的hHGF-Fc蛋白质的核苷酸序列

<400>118

atgtgggtga ccaaactcct gccagccctg ctgctgcagc atgtcctcct gcatctcctc    60

ctgctcccca tcgccatccc ctatgcagag ggacaaagga aaagaagaaa tacaattcat   120

gaattcaaaa aatcagcaaa gactacccta atcaaaatag atccagcact gaagataaaa   180

accaaaaaag tgaatactgc agaccaatgt gctaatagat gtactaggaa taaaggactt   240

ccattcactt gcaaggcttt tgtttttgat aaagcaagaa aacaatgcct ctggttcccc   300

ttcaatagca tgtcaagtgg agtgaaaaaa gaatttggcc atgaatttga cctctatgaa   360

aacaaagact acattagaaa ctgcatcatt ggtaaaggac gcagctacaa gggaacagta   420

tctatcacta agagtggcat caaatgtcag ccctggagtt ccatgatacc acacgaacac   480

agctttttgc cttcgagcta tcggggtaaa gacctacagg aaaactactg tcgaaatcct   540

cgaggggaag aagggggacc ctggtgtttc acaagcaatc cagaggtacg ctacgaagtc   600

tgtgacattc ctcagtgttc agaagttgaa tgcatgacct gcaatgggga gagttatcga   660

ggtctcatgg atcatacaga atcaggcaag atttgtcagc gctgggatca tcagacacca   720

caccggcaca aattcttgcc tgaaagatat cccgacaagg gctttgatga taattattgc   780

cgcaatcccg atggccagcc gaggccatgg tgctatactc ttgaccctca cacccgctgg   840

gagtactgtg caattaaaac atgcgctgac aatactatga atgacactga tgttcctttg   900

gaaacaactg aatgcatcca aggtcaagga gaaggctaca ggggcactgt caataccatt   960

tggaatggaa ttccatgtca gcgttgggat tctcagtatc ctcacgagca tgacatgact  1020

cctgaaaatt tcaagtgcaa ggacctacga gaaaattact gccgaaatcc agatgggtct  1080

gaatcaccct ggtgttttac cactgatcca aacatccgag ttggctactg ctcccaaatt  1140

ccaaactgtg atatgtcaca tggacaagat tgttatcgtg ggaatggcaa aaattatatg    1200

ggcaacttat cccaaacaag atctggacta acatgttcaa tgtgggacaa gaacatggaa    1260

gacttacatc gtcatatctt ctgggaacca gatgcaagta agctgaatga gaattactgc    1320

cgaaatccag atgatgatgc tcatggaccc tggtgctaca cgggaaatcc actcattcct    1380

tgggattatt gccctatttc tcgttgtgaa ggtgatacca cacctacaat agtcaattta    1440

gaccatcccg taatatcttg tgccaaaacg aaacaattgc gagttgtaaa tgggattcca    1500

acacgaacaa acataggatg gatggttagt ttgagataca gaaataaaca tatctgcgga    1560

ggatcattga taaaggagag ttgggttctt actgcacgac agtgtttccc ttctcgagac    1620

ttgaaagatt atgaagcttg gcttggaatt catgatgtcc acggaagagg agatgagaaa    1680

tgcaaacagg ttctcaatgt ttcccagctg gtatatggcc ctgaaggatc agatctggtt    1740

ttaatgaagc ttgccaggcc tgctgtcctg gatgattttg ttagtacgat tgatttacct    1800

aattatggat gcacaattcc tgaaaagacc agttgcagtg tttatggctg gggctacact    1860

ggattgatca actatgatgg cctattacga gtggcacatc tctatataat gggaaatgag    1920

aaatgcagcc agcatcatcg agggaaggtg actctgaatg agtctgaaat atgtgctggg    1980

gctgaaaaga ttggatcagg accatgtgag ggggattatg gtggcccact tgtttgtgag    2040

caacataaaa tgagaatggt tcttggtgtc attgttcctg gtcgtggatg tgccattcca    2100

aatcgtcctg gtatttttgt ccgagtagca tattatgcaa aatggataca caaaattatt    2160

ttaacatata aggtaccaca gtcatgcggc cgccatcacc atcaccatca ctccgcgggt    2220

ctggtgccac gcggtagtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc    2280

ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc    2340

cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag    2400

ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag    2460

cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg  2520

aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa  2580

accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc  2640

cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc  2700

agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg  2760

cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctata gcaagctcac cgtggacaag  2820

agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac  2880

cactacacgc agaagagcct ctccctgtcc ccgggtaaat ag                     2922

<210>119

<211>919

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的hHGF-Fc蛋白质(没有信号序列和原结构域)的氨基酸序列

<400>119

Pro Ala Leu Lys Ile Lys Thr Lys Lys Val Asn Thr Ala Asp Gln Cys

1               5                   10                  15

Ala Asn Arg Cys Thr Arg Asn Lys Gly Leu Pro Phe Thr Cys Lys Ala

            20                  25                  30

Phe Val Phe Asp Lys Ala Arg Lys Gln Cys Leu Trp Phe Pro Phe Asn

        35                  40                  45

Ser Met Ser Ser Gly Val Lys Lys Glu Phe Gly His Glu Phe Asp Leu

    50                  55                  60

Tyr Glu Asn Lys Asp TyrIle Arg Asn Cys Ile Ile Gly Lys Gly Arg

65                  70                  75                  80

Ser Tyr Lys Gly Thr Val Ser Ile Thr Lys Ser GlyIle Lys Cys Gln

                85                  90                  95

Pro Trp Ser Ser Met Ile Pro His Glu His Ser Phe Leu Pro Ser Ser

            100                 105                 110

Tyr Arg Gly Lys Asp Leu Gln Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Arg Gly

        115                 120                 125

Glu Glu Gly Gly Pro Trp Cys Phe Thr Ser Asn Pro Glu Val Arg Tyr

    130                 135                 140

Glu Val Cys Asp Ile Pro Gln Cys Ser Glu Val Glu Cys Met Thr Cys

145                 150                 155                 160

Asn Gly Glu Ser Tyr Arg Gly Leu Met Asp His Thr Glu Ser Gly Lys

                165                 170                 175

Ile Cys Gln Arg Trp Asp His Gln Thr Pro His Arg His Lys Phe Leu

            180                 185                 190

Pro Glu Arg Tyr Pro Asp Lys Gly Phe Asp Asp Asn Tyr Cys Arg Asn

        195                 200                 205

Pro Asp Gly Gln Pro Arg Pro Trp Cys Tyr Thr Leu Asp Pro His Thr

    210                 215                 220

Arg Trp Glu Tyr Cys Ala Ile Lys Thr Cys Ala Asp Asn Thr Met Asn

225                 230                 235                 240

Asp Thr Asp Val Pro Leu Glu Thr Thr Glu Cys Ile Gln Gly Gln Gly

                245                 250                 255

Glu Gly Tyr Arg Gly Thr Val Asn Thr Ile Trp Asn Gly Ile Pro Cys

            260                 265                 270

Gln Arg Trp Asp Ser Gln Tyr Pro His Glu His Asp Met Thr Pro Glu

        275                 280                 285

Asn Phe Lys Cys Lys Asp Leu Arg Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp

    290                 295                 300

Gly Ser Glu Ser Pro Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Ile Arg Val

305                 310                 315                 320

Gly Tyr Cys Ser Gln Ile Pro Asn Cys Asp Met Ser His Gly Gln Asp

                325                 330                 335

Cys Tyr Arg Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Met Gly Asn Leu Ser Gln Thr

            340                 345                 350

Arg Ser Gly Leu Thr Cys Ser Met Trp Asp Lys Asn Met Glu Asp Leu

        355                 360                 365

His Arg His Ile Phe Trp Glu Pro Asp Ala Ser Lys Leu Asn Glu Asn

    370                 375                 380

Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asp Asp Ala His Gly Pro Trp Cys Tyr Thr

385                 390                 395                 400

Gly Asn Pro Leu Ile Pro Trp Asp Tyr Cys Pro Ile Ser Arg Cys Glu

                405                 410                 415

Gly Asp Thr Thr Pro Thr Ile Val Asn Leu Asp His Pro Val Ile Ser

            420                 425                 430

Cys Ala Lys Thr Lys Gln Leu Arg Val Val Asn Gly Ile Pro Thr Arg

        435                 440                 445

Thr Asn Ile Gly Trp Met Val Ser Leu Arg Tyr Arg Asn Lys His Ile

    450                 455                 460

Cys Gly Gly Ser Leu Ile Lys Glu Ser Trp Val Leu Thr Ala Arg Gln

465                 470                 475                 480

Cys Phe Pro Ser Arg Asp Leu Lys Asp Tyr Glu Ala Trp Leu Gly Ile

                485                 490                 495

His Asp Val His Gly Arg Gly Asp Glu Lys Cys Lys Gln Val Leu Asn

            500                 505                 510

Val Ser Gln Leu Val Tyr Gly Pro Glu Gly Ser Asp Leu Val Leu Met

        515                 520                 525

Lys Leu Ala Arg Pro Ala Val Leu Asp Asp Phe Val Ser Thr Ile Asp

    530                 535                 540

Leu Pro Asn Tyr Gly Cys Thr Ile Pro Glu Lys Thr Ser Cys Ser Val

545                 550                 555                 560

Tyr Gly Trp Gly Tyr Thr Gly Leu Ile Asn Tyr Asp Gly Leu Leu Arg

                565                 570                 575

Val Ala His Leu Tyr Ile Met Gly Asn Glu Lys Cys Ser Gln His His

            580                 585                 590

Arg Gly Lys Val Thr Leu Asn Glu Ser Glu Ile Cys Ala Gly Ala Glu

        595                 600                 605

Lys Ile Gly Ser Gly Pro Cys Glu Gly Asp Tyr Gly Gly Pro Leu Val

    610                 615                 620

Cys Glu Gln His Lys Met Arg Met Val Leu Gly Val Ile Val Pro Gly

625                 630                 635                 640

Arg Gly Cys Ala Ile Pro Asn Arg Pro Gly Ile Phe Val Arg Val Ala

                645                 650                 655

Tyr Tyr Ala Lys Trp Ile His Lys Ile Ile Leu Thr Tyr Lys Val Pro

            660                 665                 670

Gln Ser Cys Gly Arg His His His His His His Ser Ala Gly Leu Val

        675                 680                 685

Pro Arg Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

    690                 695                 700

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

705                 710                 715                 720

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

                725                 730                 735

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

            740                 745                 750

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

        755                 760                 765

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

    770                 775                 780

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

785                 790                 795                 800

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

                805                 810                 815

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

            820                 825                 830

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

        835                 840                 845

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

    850                 855                 860

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

865                 870                 875                 880

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

                885                 890                 895

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

            900                 905                 910

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

        915

<210>120

<211>2901

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的mhm(V495-L585)-Fc嵌合体蛋白质的核苷酸序列

<400>120

atgatgtggg ggaccaaact tctgccggtc ctgttgctgc agcatgtcct cctgcacctc   60

ctcctgcttc atgtcgccat cccctatgca gaaggacaga agaaaagaag aaatacactt  120

catgaattta aaaagtcagc aaaaactact cttaccaagg aagacccatt actgaagatt  180

aaaaccaaaa aagtgaactc tgcagatgag tgtgccaaca ggtgtatcag gaacaggggc  240

tttacgttca cttgcaaggc cttcgttttt gataagtcaa gaaaacgatg ctactggtat  300

cctttcaata gtatgtcaag tggagtgaaa aaagggtttg gccatgaatt tgacctctat  360

gaaaacaaag actatattag aaactgcatc attggtaaag gaggcagcta taaagggacg  420

gtatccatca ctaagagtgg catcaaatgc cagccttgga attccatgat cccccatgaa  480

cacagctatc gcggtaaaga cctacaggaa aactactgtc gaaatcctcg aggggaagaa  540

gggggaccct ggtgtttcac aagcaatcca gaggtacgct acgaagtctg tgacattcct  600

cagtgttcag aagttgaatg catgacctgc aatggtgaaa gctacagagg tcccatggat  660

cacacagaat caggcaagac ttgtcagcgc tgggaccagc agacaccaca ccggcacaag  720

ttcttgccag aaagatatcc cgacaagggc tttgatgata attattgccg caatcctgat  780

ggcaagccga ggccatggtg ctacactctt gaccctgaca ccccttggga gtattgtgca  840

attaaaacgt gcgctcacag tgctgtgaat gagactgatg tccctatgga aacaactgaa  900

tgcattcaag gccaaggaga aggttacagg ggaaccagca ataccatttg gaatggaatt  960

ccctgtcagc gttgggattc gcagtaccct cacaagcatg atatcactcc cgagaacttc 1020

aaatgcaagg accttagaga aaattattgc cgcaatccag atggggctga atcaccatgg 1080

tgttttacca ctgacccaaa catccgagtt ggctactgct ctcaaattcc caagtgtgac 1140

gtgtcaagtg gacaagattg ttatcgtggc aatgggaaaa attacatggg caacttatcc 1200

aaaacaaggt ctggacttac atgttccatg tgggacaaga atatggagga tttacaccgt    1260

catatcttct gggagccaga tgctagcaaa ttgaataaga attactgccg gaatcctgat    1320

gatgatgccc atggaccttg gtgctacacg gggaatcctc ttattccttg ggattattgc    1380

cctatttccc gttgtgaagg agatactaca cctacaattg tcaatttgga ccatcctgta    1440

atatcctgtg ccaaaacaaa acaactgcgg gttgtaaatg ggattccaac acgaacaaac    1500

ataggatgga tggttagttt gagatacaga aataaacata tctgcggagg atcattgata    1560

aaggagagtt gggttcttac tgcacgacag tgtttccctt ctcgagactt gaaagattat    1620

gaagcttggc ttggaattca tgatgtccac ggaagaggag atgagaaatg caaacaggtt    1680

ctcaatgttt cccagctggt atatggccct gaaggatcag atctggtttt aatgaagctt    1740

gctcgacctg caatcctgga taactttgtc agtacaattg atttacctag ttatggttgt    1800

acaatccctg aaaagaccac ttgcagtatt tacggctggg gctacactgg attgatcaac    1860

gcggatggtt tattacgagt agctcatctg tatattatgg ggaatgagaa atgcagtcag    1920

caccatcaag gcaaggtgac tttgaatgag tctgagttat gtgctggggc tgaaaagatt    1980

ggatcaggac catgtgaggg agattatggt ggcccactca tttgtgaaca acacaaaatg    2040

agaatggttc ttggtgtcat tgttcctggt cgtggatgtg ccatcccaaa tcgtcctggt    2100

atttttgttc gagtagcata ttatgcaaaa tggatacaca aagtaatttt gacatacaag    2160

ttgtgcggcc gccatcacca tcaccatcac tccgcgggtc tggtgccacg cggtagtgac    2220

aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc    2280

ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc    2340

gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc    2400

gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt    2460

gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc    2520

aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg  2580

cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac  2640

caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg  2700

gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac  2760

ggctccttct tcctctatag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac  2820

gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc  2880

tccctgtccc cgggtaaata g                                            2901

<210>121

<211>911

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的mhm-Fc活性形式(去除信号序列和原结构域)的氨基酸序列

<400>121

Pro Leu Leu Lys Ile Lys Thr Lys Lys Val Asn Ser Ala Asp Glu Cys

1               5                   10                  15

Ala Asn Arg Cys Ile Arg Asn Arg Gly Phe Thr Phe Thr Cys Lys Ala

            20                  25                  30

Phe Val Phe Asp Lys Ser Arg Lys Arg Cys Tyr Trp Tyr Pro Phe Asn

        35                  40                  45

Ser Met Ser Ser Gly Val Lys Lys Gly Phe Gly His Glu Phe Asp Leu

    50                  55                  60

Tyr Glu Asn Lys Asp Tyr Ile Arg Asn Cys Ile Ile Gly Lys Gly Gly

65                  70                  75                  80

Ser Tyr Lys Gly Thr Val Ser Ile Thr Lys Ser Gly Ile Lys Cys Gln

                85                  90                  95

Pro Trp Asn Ser Met Ile Pro His Glu His Ser Tyr Arg Gly Lys Asp

            100                 105                 110

Leu Gln Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Arg Gly Glu Glu Gly Gly Pro

        115                 120                 125

Trp Cys Phe Thr Ser Asn Pro Glu Val Arg Tyr Glu Val Cys Asp Ile

    130                 135                 140

Pro Gln Cys Ser Glu Val Glu Cys Met Thr Cys Asn Gly Glu Ser Tyr

145                 150                 155                 160

Arg Gly Pro Met Asp His Thr Glu Ser Gly Lys Thr Cys Gln Arg Trp

                165                 170                 175

Asp Gln Gln Thr Pro His Arg His Lys Phe Leu Pro Glu Arg Tyr Pro

            180                 185                 190

Asp Lys Gly Phe Asp Asp Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Lys Pro

        195                 200                 205

Arg Pro Trp Cys Tyr Thr Leu Asp Pro Asp Thr Pro Trp Glu Tyr Cys

    210                 215                 220

Ala Ile Lys Thr Cys Ala His Ser Ala Val Asn Glu Thr Asp Val Pro

225                 230                 235                 240

Met Glu Thr Thr Glu Cys Ile Gln Gly Gln Gly Glu Gly Tyr Arg Gly

                245                 250                 255

Thr Ser Asn Thr Ile Trp Asn Gly Ile Pro Cys Gln Arg Trp Asp Ser

            260                 265                 270

Gln Tyr Pro His Lys His Asp Ile Thr Pro Glu Asn Phe Lys Cys Lys

        275                 280                 285

Asp Leu Arg Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Ala Glu Ser Pro

    290                 295                 300

Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Ile Arg Val Gly Tyr Cys Ser Gln

305                 310                 315                 320

Ile Pro Lys Cys Asp Val Ser Ser Gly Gln Asp Cys Tyr Arg Gly Asn

                325                 330                 335

Gly Lys Asn Tyr Met Gly Asn Leu Ser Lys Thr Arg Ser Gly Leu Thr

            340                 345                 350

Cys Ser Met Trp Asp Lys Asn Met Glu Asp Leu His Arg His Ile Phe

        355                 360                 365

Trp Glu Pro Asp Ala Ser Lys Leu Asn Lys Asn Tyr Cys Arg Asn Pro

    370                 375                 380

Asp Asp Asp Ala His Gly Pro Trp Cys Tyr Thr Gly Asn Pro Leu Ile

385                 390                 395                 400

Pro Trp Asp Tyr Cys Pro Ile Ser Arg Cys Glu Gly Asp Thr Thr Pro

                405                 410                 415

Thr Ile Val Asn Leu Asp His Pro Val Ile Ser Cys Ala Lys Thr Lys

            420                 425                 430

Gln Leu Arg Val Val Asn Gly Ile Pro Thr Arg Thr Asn Ile Gly Trp

        435                 440                 445

Met Val Ser Leu Arg Tyr Arg Asn Lys His Ile Cys Gly Gly Ser Leu

    450                 455                 460

Ile Lys Glu Ser Trp Val Leu Thr Ala Arg Gln Cys Phe Pro Ser Arg

465                 470                 475                 480

Asp Leu Lys Asp Tyr Glu Ala Trp Leu Gly Ile His Asp Val His Gly

                485                 490                 495

Arg Gly Asp Glu Lys Cys Lys Gln Val Leu Asn Val Ser Gln Leu Val

            500                 505                 510

Tyr Gly Pro Glu Gly Ser Asp Leu Val Leu Met Lys Leu Ala Arg Pro

        515                 520                 525

Ala Ile Leu Asp Asn Phe Val Ser Thr Ile Asp Leu Pro Ser Tyr Gly

    530                 535                 540

Cys Thr Ile Pro Glu Lys Thr Thr Cys Ser Ile Tyr Gly Trp Gly Tyr

545                 550                 555                 560

Thr Gly Leu Ile Asn Ala Asp Gly Leu Leu Arg Val Ala His Leu Tyr

                565                 570                 575

Ile Met Gly Asn Glu Lys Cys Ser Gln His His Gln Gly Lys Val Thr

            580                 585                 590

Leu Asn Glu Ser Glu Leu Cys Ala Gly Ala Glu Lys Ile Gly Ser Gly

        595                 600                 605

Pro Cys Glu Gly Asp Tyr Gly Gly Pro Leu Ile Cys Glu Gln His Lys

    610                 615                 620

Met Arg Met Val Leu Gly Val Ile Val Pro Gly Arg Gly Cys Ala Ile

625                 630                 635                 640

Pro Asn Arg Pro Gly Ile Phe Val Arg Val Ala Tyr Tyr Ala Lys Trp

                645                 650                 655

Ile His Lys Val Ile Leu Thr Tyr Lys Leu Cys Gly Arg His His His

            660                 665                 670

His His His Ser Ala Gly Leu Val Pro Arg Gly Ser Asp Lys Thr His

        675                 680                 685

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

    690                 695                 700

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

705                 710                 715                 720

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

                725                 730                 735

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

            740                 745                 750

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

        755                 760                 765

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

    770                 775                 780

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

785                 790                 795                 800

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

                805                 810                 815

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

            820                 825                 830

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

        835                 840                 845

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

    850                 855                 860

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

865                 870                 875                 880

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

                885                 890                 895

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

            900                 905                 910

<210>122

<211>1398

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长1A3重链序列(1A3重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列

<400>122

atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgaa    60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaactctcc    120

tgtgcagcct ctgaattcac tttcagtaac tattacatgt cttgggttcg ccagactcca    180

gagaagaggc tgcagtgggt cgcatacatt agtcctggtg gtggtagctc ctactatcca    240

gccagtgtga agggtcgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg    300

caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgcaag acaaggggat    360

ggttactacg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc    420

tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact    480

aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg    540

acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct    600

gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc    660

gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc    720

agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc    780

ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt    840

gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg    900

gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca    960

gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg   1020

gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga   1080

ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa   1140

gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag   1200

tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc   1260

tcttacttcg tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact   1320

ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc   1380

cactctcctg gtaaatga                                                 1398

<210>123

<211>446

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长1A3重链序列(1A3重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有

信号序列)

<400>123

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1               5                   10                  15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

            20                  25                  30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Gln Trp Val

        35                  40                  45

Ala Tyr Ile Ser Pro Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Tyr Pro Ala Ser Val

    50                  55                  60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp

            100                 105                 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro

        115                 120                 125

Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met

    130                 135                 140

Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145                 150                 155                 160

Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro

                165                 170                 175

Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val

            180                 185                 190

Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His

        195                 200                 205

Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys

    210                 215                 220

Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe

225                 230                 235                 240

Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro

                245                 250                 255

Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val

            260                 265                 270

Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr

        275                 280                 285

Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu

    290                 295                 300

Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys

305                 310                 315                 320

Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

                325                 330                 335

Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro

            340                 345                 350

Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile

        355                 360                 365

Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly

    370                 375                 380

Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp

385                 390                 395                 400

Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp

                405                 410                 415

Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His

            420                 425                 430

Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

<210>124

<211>705

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长1A3轻链序列(1A3Kappa可变区和恒定区)的核酸序列

<400>124

atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt   60

gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgttt ctgtgggaga aactgtcacc  120

atcacatgtc gagcaagtga gaatatttat agtaatttag catggtatca gcagaaacag  180

ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca  240

aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttccctca agatcaacag cctgcagtct  300

gaagattttg ggacttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtacac gttcggaggg  360

gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca  420

tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac  480

cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg  540

aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcatg  600

ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca  660

tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag                  705

<210>125

<211>214

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长1A3轻链序列(1A3Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信

号序列)

<400>125

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

            20                  25                  30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

        35                  40                  45

Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly

        115                 120                 125

Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile

    130                 135                 140

Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu

145                 150                 155                 160

Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Met Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr

            180                 185                 190

Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser

        195                 200                 205

Phe Asn Arg Asn Glu Cys

    210

<210>126

<211>1386

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长2B8重链序列(2B8重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列

<400>126

atgggatgga gctatatcat cctctttttg gtagcaacag ctacagatgt ccactcccag   60

gtccaactgc agcagcctgg ggctgaactg gtgaagcctg ggacttcagt gaagctgtcc  120

tgcaaggctt ctggctacac cttcaccacc tactggatgc actgggtgaa tcagaggcct  180

ggacaaggcc ttgagtggat tggagagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat  240

gagaagttca agagcaaggc cacactgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg  300

caactcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtgcaag aaactatgtt  360

ggtagcatct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc agccaaaacg  420

acacccccat ctgtctatcc actggcccct ggatctgctg cccaaactaa ctccatggtg  480

accctgggat gcctggtcaa gggctatttc cctgagccag tgacagtgac ctggaactct  540

ggatccctgt ccagcggtgt gcacaccttc ccagctgtcc tgcagtctga cctctacact  600

ctgagcagct cagtgactgt cccctccagc acctggccca gcgagaccgt cacctgcaac  660

gttgcccacc cggccagcag caccaaggtg gacaagaaaa ttgtgcccag ggattgtggt  720

tgtaagcctt gcatatgtac agtcccagaa gtatcatctg tcttcatctt ccccccaaag  780

cccaaggatg tgctcaccat tactctgact cctaaggtca cgtgtgttgt ggtagacatc  840

agcaaggatg atcccgaggt ccagttcagc tggtttgtag atgatgtgga ggtgcacaca   900

gctcagacgc aaccccggga ggagcagttc aacagcactt tccgctcagt cagtgaactt   960

cccatcatgc accaggactg gctcaatggc aaggagttca aatgcagggt caacagtgca  1020

gctttccctg cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca aaggcagacc gaaggctcca  1080

caggtgtaca ccattccacc tcccaaggag cagatggcca aggataaagt cagtctgacc  1140

tgcatgataa cagacttctt ccctgaagac attactgtgg agtggcagtg gaatgggcag  1200

ccagcggaga actacaagaa cactcagccc atcatggaca cagatggctc ttacttcgtc  1260

tacagcaagc tcaatgtgca gaagagcaac tgggaggcag gaaatacttt cacctgctct  1320

gtgttacatg agggcctgca caaccaccat actgagaaga gcctctccca ctctcctggt  1380

aaatga                                                             1386

<210>127

<211>442

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长2B8重链序列(2B8重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没

有信号序列)

<400>127

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro

        115                 120                 125

Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly

    130                 135                 140

Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

                165                 170                 175

Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr

            180                 185                 190

Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser

        195                 200                 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro

    210                 215                 220

Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro

225                 230                 235                 240

Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys

                245                 250                 255

Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp

            260                 265                 270

Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu

        275                 280                 285

Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met

    290                 295                 300

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser

305                 310                 315                 320

Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly

                325                 330                 335

Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln

            340                 345                 350

Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe

        355                 360                 365

Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu

    370                 375                 380

Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe

385                 390                 395                 400

Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn

                405                 410                 415

Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr

            420                 425                 430

Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

        435                 440

<210>128

<211>705

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长2B8轻链序列(2B8Kappa轻链可变区和恒定区)的核酸序列

<400>128

atggaatcac agactctggt cttcatatcc atactgctct ggttatatgg tgctgatggg   60

aacattgtaa tgacccaatc tcccaaatcc atgtccatgt cagtaggaga gagggtcacc  120

ttgagctgca aggccagtga gaatgtggtt tcttatgtat cctggtatca acagaaacca  180

gcgcagtctc ctaaactgct gatatacggg gcatccaacc ggaacactgg ggtccccgat  240

cgcttcacag gcagtggatc tgcaacagat ttcactctga ccatcagcag tgtgcgggct  300

gaagaccttg cagattatca ctgtgggcag agttacaact atccgtacac gttcggaggg  360

gggaccaggc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca  420

tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac  480

cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg  540

aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg  600

ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca  660

tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag                  705

<210>129

<211>214

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长2B8轻链序列(2B8Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信

号序列)

<400>129

Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Ser Tyr

            20                  25                  30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Arg Ala

65                  70                  75                  80

Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly

        115                 120                 125

Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile

    130                 135                 140

Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu

145                 150                 155                 160

Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr

            180                 185                 190

Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser

        195                 200                 205

Phe Asn Arg Asn Glu Cys

    210

<210>130

<211>1386

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长2F8重链序列(2F8重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列

<400>130

atggaatgga gctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactgccag   60

gtccagctga agcagtctgg agctgagctg gtgaggcctg ggacttcagt gaagatgtcc  120

tgcaaggctt ctggctacac cttcactacc tactatatac actgggtgaa tcagaggcct  180

ggacagggcc ttgagtggat tggaaagatt ggtcctggaa gtggtagtac ttactacaat  240

gagatgttca aagacaaggc cacattgact gtagacacat cctccagcac agcctacatg  300

cagctcagca gcctgacatc tgacgactct gcggtctatt tctgtgcaag aaggggactg    360

ggacgtggct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc agccaaaacg    420

acacccccat ctgtctatcc actggcccct ggatctgctg cccaaactaa ctccatggtg    480

accctgggat gcctggtcaa gggctatttc cctgagccag tgacagtgac ctggaactct    540

ggatccctgt ccagcggtgt gcacaccttc ccagctgtcc tgcagtctga cctctacact    600

ctgagcagct cagtgactgt cccctccagc acctggccca gcgagaccgt cacctgcaac    660

gttgcccacc cggccagcag caccaaggtg gacaagaaaa ttgtgcccag ggattgtggt    720

tgtaagcctt gcatatgtac agtcccagaa gtatcatctg tcttcatctt ccccccaaag    780

cccaaggatg tgctcaccat tactctgact cctaaggtca cgtgtgttgt ggtagacatc    840

agcaaggatg atcccgaggt ccagttcagc tggtttgtag atgatgtgga ggtgcacaca    900

gctcagacgc aaccccggga ggagcagttc aacagcactt tccgctcagt cagtgaactt    960

cccatcatgc accaggactg gctcaatggc aaggagttca aatgcagggt caacagtgca   1020

gctttccctg cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca aaggcagacc gaaggctcca   1080

caggtgtaca ccattccacc tcccaaggag cagatggcca aggataaagt cagtctgacc   1140

tgcatgataa cagacttctt ccctgaagac attactgtgg agtggcagtg gaatgggcag   1200

ccagcggaga actacaagaa cactcagccc atcatggaca cagatggctc ttacttcgtc   1260

tacagcaagc tcaatgtgca gaagagcaac tgggaggcag gaaatacttt cacctgctct   1320

gtgttacatg agggcctgca caaccaccat actgagaaga gcctctccca ctctcctggt   1380

aaatga                                                              1386

<210>131

<211>442

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长2F8重链序列(2F8重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有

信号序列)

<400>131

Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Tyr Ile His Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Lys Ile Gly Pro Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Met Phe

    50                  55                  60

Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85                  90                  95

Ala Arg Arg Gly Leu Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

                100                 105                 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro

            115                 120                 125

Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly

        130                 135                 140

Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

                165                 170                 175

Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr

            180                 185                 190

Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser

        195                 200                 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro

    210                 215                 220

Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro

225                 230                 235                 240

Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys

                245                 250                 255

Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp

            260                 265                 270

Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu

        275                 280                 285

Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met

    290                 295                 300

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser

305                 310                 315                 320

Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly

                325                 330                 335

Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln

            340                 345                 350

Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe

        355                 360                 365

Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu

    370                 375                 380

Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe

385                 390                 395                 400

Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn

                405                 410                 415

Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr

            420                 425                 430

Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

        435                 440

<210>132

<211>717

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长2F8轻链序列(2F8Kappa可变区和恒定区)的核酸序列

<400>132

atggagacag acacaatcct gctatgggtg ctgctgctct gggttccagg ctccactggt     60

gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc    120

atctcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggta atagttatat caactggtac    180

caacagaaac caggacagcc acccaaagtc ctcatctatg ttgcatccaa tctagaatct    240

gggatcccag ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat    300

cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc aaagtattga ggatcctccc    360

acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc    420

atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg    480

aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa    540

aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc    600

agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc    660

actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgttag       717

<210>133

<211>218

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长2F8轻链序列(2F8Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信

号序列)

<400>133

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1               5                   10                  15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

            20                  25                  30

Gly Asn Ser Tyr Ile Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

        35                  40                  45

Lys Val Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

    50                  55                  60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65                  70                  75                  80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ile

                85                  90                  95

Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg

            100                 105                 110

Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln

        115                 120                 125

Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr

    130                 135                 140

Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln

145                 150                 155                 160

Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

                165                 170                 175

Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg

            180                 185                 190

His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro

        195                 200                 205

Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

    210                 215

<210>134

<211>1392

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长3B6重链序列(3B6重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列

<400>134

atggaatggc cttgtatctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgaaggtgt ccactcccag   60

gttcagctgc agcagtctgg ggctgaactg gtgaggcctg ggtcctcagt gaagatttcc  120

tgcaaggctt ctggctatgt attcagtagc tactggatga actgggtgaa gcagaggcct  180

ggacagggtc ttgagtggat tggacagatt tatcctggag atggtgatag taactacaat  240

ggaaacttca agggtaaagc cacactgact gcagacaaat cctccagtac agcctacatg  300

cagctcagca gcctaacatc tgaggactct gcggtctatt tctgtgcatc ccagctcggg  360

ctacgtgaga actactttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctcagcc  420

aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc  480

atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctgg  540

aactctggat ccctgtccag cggtgtgcac accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc  600

tacactctga gcagctcagt gactgtcccc tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc  660

tgcaacgttg cccacccggc cagcagcacc aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat  720

tgtggttgta agccttgcat atgtacagtc ccagaagtat catctgtctt catcttcccc  780

ccaaagccca aggatgtgct caccattact ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta  840

gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg  900

cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt  960

gaacttccca tcatgcacca ggactggctc aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac 1020

agtgcagctt tccctgcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag 1080

gctccacagg tgtacaccat tccacctccc aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt  1140

ctgacctgca tgataacaga cttcttccct gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat  1200

gggcagccag cggagaacta caagaacact cagcccatca tggacacaga tggctcttac  1260

ttcgtctaca gcaagctcaa tgtgcagaag agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc  1320

tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac caccatactg agaagagcct ctcccactct  1380

cctggtaaat ga                                                      1392

<210>135

<211>444

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长3B6重链序列(3B6重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有

信号序列)

<400>135

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Val Phe Ser Ser Tyr

            20                  25                  30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ser Asn Tyr Asn Gly Asn Phe

    50                  55                  60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

                85                  90                  95

Ala Ser Gln Leu Gly Leu Arg Glu Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

            100                 105                 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val

        115                 120                 125

Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr

    130                 135                 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr

145                 150                 155                 160

Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

                165                 170                 175

Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser

            180                 185                 190

Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala

        195                 200                 205

Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys

    210                 215                 220

Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe

225                 230                 235                 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val

                245                 250                 255

Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe

            260                 265                 270

Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro

        275                 280                 285

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro

    290                 295                 300

Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val

305                 310                 315                 320

Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr

                325                 330                 335

Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys

            340                 345                 350

Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp

        355                 360                 365

Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro

    370                 375                 380

Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser

385                 390                 395                 400

Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala

                405                 410                 415

Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His

            420                 425                 430

His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

        435                 440

<210>136

<211>711

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长3B6轻链序列(3B6Kappa可变区和恒定区)的核酸序列

<400>136

atggacatga ggacccctgc tcagtttctt ggaatcttgt tgctctggtt tccaggtatc     60

aaatgtgaca tcaagatgac ccagtctcca tcttccatgt atgcatctct aggagagaga    120

gtcacaatca cttgcaaggc gagtcaggac attaaaagct atttaagctg gttccagcag    180

aaaccaggga aatctcctaa gaccctgatc tatcgtgtaa acagattggt agatggggtc    240

ccatcaaggt tcagtggcag tggatctggg caagattctt ctctcaccat caccagcctg    300

gagaatgaag atatgggaat ttattattgt ctacagtatg atgagtttcc gttcacgttc    360

ggagggggga ccaagctgga aataaagcgg gctgatgctg caccaactgt atccatcttc    420

ccaccatcca gtgagcagtt aacatctgga ggtgcctcag tcgtgtgctt cttgaacaac    480

ttctacccca aagacatcaa tgtcaagtgg aagattgatg gcagtgaacg acaaaatggc    540

gtcctgaaca gttggactga tcaggacagc aaagacagca cctacagcat gagcagcacc    600

ctcacgttga ccaaggacga gtatgaacga cataacagct atacctgtga ggccactcac    660

aagacatcaa cttcacccat tgtcaagagc ttcaacagga atgagtgtta g             711

<210>137

<211>214

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长3B6轻链序列(3B6Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信

号序列)

<400>137

Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Lys Ser Tyr

            20                  25                  30

Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Arg Val Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Gln Asp Ser Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Glu Asn

65                  70                  75                  80

Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Phe

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly

        115                 120                 125

Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile

    130                 135                 140

Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu

145                 150                 155                 160

Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr

            180                 185                 190

Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser

        195                 200                 205

Phe Asn Arg Asn Glu Cys

    210

<210>138

<211>1361

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长3D11重链序列(3D11重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列

<400>138

atggctgtcc cggtgctgtt cctctgcctg gttgcatttc caagctgtgt cctgtcccag   60

gtacagctga aggagtcagg acctggcctg gtggcgccct cacagagcct gtccatcact  120

tgcactgtct ctgggttttc attaaccagc tatagtttac actgggttcg ccagcctcca  180

ggaaagggtc tggaatggct gggagtaata tgggctggtg gaaacacaaa ttataattcg  240

tctctcatgt ccagactgac catcaggaaa gacaactcca agagccaagt tttcttaaaa  300

atgaacagtc tgcaaactga tgacacagcc atgtactact gtgccagaga gaggtttgct  360

tactggggcc aagggactct ggtcactgtc tctgcagcca aaacgacacc cccatctgtc  420

tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa actaactcca tggtgaccct gggatgcctg  480

gtcaagggct atttccctga gccagtgaca gtgacctgga actctggatc cctgtccagc  540

ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag tctgacctct acactctgag cagctcagtg   600

actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc   660

agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata   720

tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc   780

accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc   840

gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc   900

cgggaggagc agttcaacag cactttccgc tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag   960

gactggctca atggcaagga gttcaaatgc agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc  1020

atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt  1080

ccacctccca aggagcagat ggccaaggat aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac  1140

ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac  1200

aagaacactc agcccatcat ggacacagat ggctcttact tcgtctacag caagctcaat  1260

gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat actttcacct gctctgtgtt acatgagggc  1320

ctgcacaacc accatactga tcccactctc ctggtaaatg a                      1361

<210>139

<211>437

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长3D11重链序列(3D11重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没

有信号序列)

<400>139

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1               5                   10                  15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr

            20                  25                  30

Ser Leu His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

        35                  40                  45

Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Ser Ser Leu Met

    50                  55                  60

Ser Arg Leu Thr Ile Arg Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65                  70                  75                  80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala

                85                  90                  95

Arg Glu Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

            100                 105                 110

Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser

        115                 120                 125

Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly

    130                 135                 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser

145                 150                 155                 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr

                165                 170                 175

Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr

            180                 185                 190

Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys

        195                 200                 205

Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val

    210                 215                 220

Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val

225                 230                 235                 240

Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile

                245                 250                 255

Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val

            260                 265                 270

Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

        275                 280                 285

Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu

    290                 295                 300

Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala

305                 310                 315                 320

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro

                325                 330                 335

Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys

            340                 345                 350

Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr

        355                 360                 365

Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr

    370                 375                 380

Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu

385                 390                 395                 400

Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser

                405                 410                 415

Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser

            420                 425                 430

His Ser Pro Gly Lys

        435

<210>140

<211>708

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长3D11轻链序列(3D11 Kappa可变区和恒定区)的核酸序列

<400>140

atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcctcagt caaaatatcc     60

agaggacaaa ttgttctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatatcc aggggagaag    120

gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgcactggta ccagcagaag    180

tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggcttc tggagtccct    240

gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactccc tcacaatcag tagtatggag    300

gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaacccact cacgttcggt    360

gctgggacca agctggagct gaaacgggct gatgctgcac caactgtatc catcttccca    420

ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc    480

taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc    540

ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct acagcatgag cagcaccctc    600

acgttgacca aggacgagta tgaacgacat aacagctata cctgtgaggc cactcacaag    660

acatcaactt cacccattgt caagagcttc aacaggaatg agtgttag                 708

<210>141

<211>213

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长3D11轻链序列(3D11 Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有

信号序列)

<400>141

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Tyr Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

            20                  25                  30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

        35                  40                  45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

    50                  55                  60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65                  70                  75                  80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro

            100                 105                 110

Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly

        115                 120                 125

Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn

    130                 135                 140

Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn

145                 150                 155                 160

Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser

                165                 170                 175

Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr

            180                 185                 190

Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe

        195                 200                 205

Asn Arg Asn Glu Cys

    210

<210>142

<211>1398

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长1D3重链序列(1D3重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列

<400>142

atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgaa    60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaactctcc    120

tgtgcagcct ctggattcac tttcagtgac tattacatgt cttgggttcg ccagactcca    180

gagaagaggc tggagtgggt cgcatacatt agtagtggtg gtggtagcac ctactatcca    240

gacagtgtga agggtcgatt caccatctcc cgagacaatg ccaagaacac cctgtacctg    300

caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatatatt actgtgtgag acaaggggat    360

ggttattacg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt catcgtctcc    420

tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact    480

aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg    540

acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct    600

gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc    660

gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc    720

agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc    780

ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt    840

gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg    900

gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca    960

gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg   1020

gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga   1080

ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa   1140

gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag   1200

tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc   1260

tcttacttcg tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact   1320

ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc   1380

cactctcctg gtaaatga                                                 1398

<210>143

<211>446

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长1D3重链序列(1D3重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有

信号序列)

<400>143

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1               5                   10                  15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

            20                  25                  30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

    50                  55                  60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Val Arg Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp

            100                 105                 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Ile Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro

        115                 120                 125

Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met

    130                 135                 140

Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145                 150                 155                 160

Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro

                165                 170                 175

Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val

            180                 185                 190

Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His

        195                 200                 205

Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys

    210                 215                 220

Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe

225                 230                 235                 240

Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro

                245                 250                 255

Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val

            260                 265                 270

Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr

        275                 280                 285

Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu

    290                 295                 300

Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys

305                 310                 315                 320

Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

                325                 330                 335

Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro

            340                 345                 350

Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile

        355                 360                 365

Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly

    370                 375                 380

Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp

385                 390                 395                 400

Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp

                405                 410                 415

Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His

            420                 425                 430

Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

<210>144

<211>705

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长1D3轻链序列(1D3Kappa可变区和恒定区)的核酸序列

<400>144

atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgtcagatgt     60

gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc    120

atcacatgtc gaacaagtga gaatatttac agtaatttag cgtggtatca gcagaaacag    180

ggaaaatctc ctcagctcct aatctatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca    240

aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttccctca ggatcaacag cctgcagtct    300

gaagattttg ggaggtatta ctgtcaacat ttttggggga ctccgtacac gttcggaggg    360

gggaccaaac tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca    420

tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac    480

cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg    540

aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg    600

ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca    660

tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag                    705

<210>145

<211>214

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长1D3轻链序列(1D3Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信

号序列)

<400>145

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

            20                  25                  30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Arg Ile Asn Ser Leu Gln Ser

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Gly Arg Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly

        115                 120                 125

Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile

    130                 135                 140

Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu

145                 150                 155                 160

Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr

            180                 185                 190

Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser

        195                 200                 205

Phe Asn Arg Asn Glu Cys

    210

<210>146

<211>1398

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长1F3重链序列(1F3重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列

<400>146

atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgag   60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagtctg gagggtccct gaaactctcc  120

tgtgcggcct ctggattcac tttcagtaac tatttcatgt cttgggttcg ccagactcca  180

gagaagaggc tggagtgggt cgcatatatt agtagtggtg gtggtagcac ctactatcca  240

gacagtgtga agggtcgatt caccatctct agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg  300

caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgtaag acaaggggat  360

ggttactacg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc  420

tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact  480

aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg  540

acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct  600

gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc  660

gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc  720

agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc  780

ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt  840

gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg   900

gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca   960

gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg  1020

gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga  1080

ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa  1140

gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag  1200

tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc  1260

tcttacttcg tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact  1320

ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc  1380

cactctcctg gtaaatga                                                1398

<210>147

<211>446

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了全长1F3重链序列(1F3重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没有信号序

列)

<400>147

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ser Gly Gly

1               5                   10                  15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

            20                  25                  30

Phe Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

    50                  55                  60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Val Arg Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp

            100                 105                 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro

        115                 120                 125

Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met

    130                 135                 140

Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145                 150                 155                 160

Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro

                165                 170                 175

Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val

            180                 185                 190

Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His

        195                 200                 205

Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys

    210                 215                 220

Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe

225                 230                 235                 240

Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro

                245                 250                 255

Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val

            260                 265                 270

Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr

        275                 280                 285

Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu

    290                 295                 300

Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys

305                 310                 315                 320

Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

                325                 330                 335

Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro

            340                 345                 350

Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile

        355                 360                 365

Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly

    370                 375                 380

Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp

385                 390                 395                 400

Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp

                405                 410                 415

Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His

            420                 425                 430

Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

<210>148

<211>705

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长1F3轻链序列(1F3Kappa可变区和恒定区)的核酸序列

<400>148

atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt   60

gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc  120

atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacag  180

ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgat gcaacacact taccagatgg tgtgccatca  240

aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttccctca agatcaacag cctgcagtct  300

gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtacac gtttggaggg  360

gggaccagac tggaaattaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca  420

tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac  480

cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg  540

aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg  600

ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca  660

tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag                  705

<210>149

<211>214

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长1F3轻链序列(1F3Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信

号序列)

<400>149

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

            20                  25                  30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

        35                  40                  45

Tyr Asp Ala Thr His Leu Pro Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly

        115                 120                 125

Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile

    130                 135                 140

Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu

145                 150                 155                 160

Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr

            180                 185                 190

Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser

        195                 200                 205

Phe Asn Arg Asn Glu Cys

    210

<210>150

<211>1398

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长3A12重链序列(3A12重链可变区和IgG1恒定区)的核酸序列

<400>150

atgaactttg ggctcagatt gattttcctt gtccttgttt taaaaggtgt gaagtgtgaa   60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaaatctcc  120

tgtgcagcct ctggatttac tttcagtaac tatttcatgt cttgggttcg ccagactcca  180

gagaagaggc tggagtgggt cgcatacatt agtagtggtg gtggtagcac ctactatcca  240

gacagtgtga agggtcgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg  300

caaatgaaca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgtaag acaaggagat    360

ggttactatg gggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc    420

tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact    480

aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg    540

acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct    600

gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc    660

gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc    720

agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc    780

ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt    840

gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg    900

gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca    960

gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg   1020

gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga   1080

ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa   1140

gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag   1200

tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc   1260

tcttacttcg tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact   1320

ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc   1380

cactctcctg gtaaatga                                                 1398

<210>151

<211>446

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长3A12重链序列(3A12重链可变区和IgG1恒定区)的蛋白质序列(没

有信号序列)

<400>151

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1               5                   10                  15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

            20                  25                  30

Phe Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

        35                  40                  45

Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

    50                  55                  60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Val Arg Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp

            100                 105                 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro

        115                 120                 125

Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met

    130                 135                 140

Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145                 150                 155                 160

Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro

                165                 170                 175

Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val

            180                 185                 190

Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His

        195                 200                 205

Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys

    210                 215                 220

Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe

225                 230                 235                 240

Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro

                245                 250                 255

Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val

            260                 265                 270

Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr

        275                 280                 285

Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu

    290                 295                 300

Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys

305                 310                 315                 320

Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

                325                 330                 335

Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro

            340                 345                 350

Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile

        355                 360                 365

Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly

    370                 375                 380

Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp

385                 390                 395                 400

Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp

                405                 410                 415

Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His

            420                 425                 430

Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

<210>152

<211>705

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长3A12轻链序列(3A12Kappa可变区和恒定区)的核酸序列

<400>152

atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt     60

gacatccaga tgactcagtc gccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc    120

atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac attaatttag catggtatca gcagaaacag    180

ggaaaatctc ctcagctcct ggtccatgct gcaacaaagt tagcagatgg tgtgccatca    240

aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag tattccctca agatcaacag cctgcagtct    300

gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtacac gttcggaggg    360

gggaccaaac tagaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca    420

tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac    480

cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg    540

aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg    600

ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca    660

tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag                    705

<210>153

<211>214

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了全长3A12轻链序列(3A12Kappa可变区和恒定区)的蛋白质序列(没有信号序

列)

<400>153

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ile Asn

            20                  25                  30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

        35                  40                  45

His Ala Ala Thr Lys Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly

        115                 120                 125

Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile

    130                 135                 140

Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu

145                 150                 155                 160

Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr

            180                 185                 190

Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser

        195                 200                 205

Phe Asn Arg Asn Glu Cys

    210

<210>154

<211>1404

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长嵌合体2B8重链(小鼠可变区和人IgG1恒定区)(同种异型

Glm(17，1V)的核酸序列

<400>154

atgggatgga gctatatcat cctctttttg gtagcaacag ctacagatgt ccactcccag   60

gtccaactgc agcagcctgg ggctgaactg gtgaagcctg ggacttcagt gaagctgtcc  120

tgcaaggctt ctggctacac cttcaccacc tactggatgc actgggtgaa tcagaggcct  180

ggacaaggcc ttgagtggat tggagagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat  240

gagaagttca agagcaaggc cacactgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg  300

caactcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtgcaag aaactatgtt  360

ggtagcatct ttgactactg gggccaaggc accactctca ccgtctcctc agcctccacc  420

aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg  480

gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca  540

ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac  600

tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc  660

aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt  720

gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc  780

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca  840

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac  900

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac  960

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 1020

tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa  1080

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag  1140

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag  1200

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc  1260

gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg  1320

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc  1380

ctctccctgt ctccgggtaa atga                                         1404

<210>155

<211>448

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长嵌合体2B8重链(嵌合体2B8IgG1(Glm(17，1)同种异型)的蛋白质

序列(没有信号序列)

<400>155

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

        115                 120                 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

    130                 135                 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

                165                 170                 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

            180                 185                 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

        195                 200                 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

    210                 215                 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

                245                 250                 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

            260                 265                 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

        275                 280                 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

    290                 295                 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305                 310                 315                 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

                325                 330                 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

            340                 345                 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

        355                 360                 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

    370                 375                 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385                 390                 395                 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

                405                 410                 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

            420                 425                 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

<210>156

<211>705

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长嵌合体2B8轻链(小鼠可变区和人恒定区)(嵌合体2B8Kappa

(Km(3)))的核酸序列

<400>156

atggaatcac agactctggt cttcatatcc atactgctct ggttatatgg tgctgatggg     60

aacattgtaa tgacccaatc tcccaaatcc atgtccatgt cagtaggaga gagggtcacc    120

ttgagctgca aggccagtga gaatgtggtt tcttatgtat cctggtatca acagaaacca    180

gcgcagtctc ctaaactgct gatatacggg gcatccaacc ggaacactgg ggtccccgat    240

cgcttcacag gcagtggatc tgcaacagat ttcactctga ccatcagcag tgtgcgggct    300

gaagaccttg cagattatca ctgtgggcag agttacaact atccgtacac gttcggaggg    360

gggaccaggc tggaaataaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca    420

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat    480

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag    540

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg    600

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc    660

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttga                    705

<210>157

<211>214

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长嵌合体2B8轻链(嵌合体2B8Kappa(Km(3)))的蛋白质序列(没有

信号序列)

<400>157

Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Ser Tyr

            20                  25                  30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Arg Ala

65                  70                  75                  80

Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

        115                 120                 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

    130                 135                 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145                 150                 155                 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

            180                 185                 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

        195                 200                 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

    210

<210>158

<211>412

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人源化Hu2B8 Hv1-f.1重链可变区的核酸序列

<400>158

atggactgca cctggaggat cctcctcttg gtggcagcag ctacaggcac ccacgccgag     60

gtccagctgg tacagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg gggctacagt gaaaatctcc    120

tgcaaggttt ctggatacac cttcaccacc tactggatgc actgggtgca acaggcccct    180

ggaaaagggc ttgagtggat gggagagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat    240

gagaagttcc agggcagagt caccataacc gcggacacgt ctacagacac agcctacatg    300

gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcaac aaactatgtt    360

ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc ag            412

<210>159

<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人源化Hu2B8Hv1-f.1重链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>159

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Thr Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

        115

<210>160

<211>992

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人IgG1重链恒定区(Glm(17，1)同种异型)的核酸序列

<400>160

cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg   60

gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt  120

ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag  180

gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct  240

acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaaa gttgagccca  300

aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc ctggggggac  360

cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg  420

aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt  480

acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca  540

gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg  600

agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca  660

aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggatgagc  720

tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg  780

ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc  840

tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc  900

agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc  960

agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat ga                                992

<210>161

<211>330

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人IgG1重链恒定区(Glm(17，1)同种异型)的蛋白质序列

<400>161

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1               5                   10                  15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

            20                  25                  30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

        35                  40                  45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

    50                  55                  60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65                  70                  75                  80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

                85                  90                  95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

            100                 105                 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

        115                 120                 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

    130                 135                 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145                 150                 155                 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

                165                 170                 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

            180                 185                 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

        195                 200                 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

    210                 215                 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225                 230                 235                 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

                245                 250                 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

            260                 265                 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

        275                 280                 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

    290                 295                 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305                 310                 315                 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                325                 330

<210>162

<211>1404

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长重链人源化Hu2B8Hv1f.1可变区和人IgG1(Glm(17，1)同种异型)重

链恒定区的核酸序列

<400>162

atggactgca cctggaggat cctcctcttg gtggcagcag ctacaggcac ccacgccgag   60

gtccagctgg tacagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg gggctacagt gaaaatctcc  120

tgcaaggttt ctggatacac cttcaccacc tactggatgc actgggtgca acaggcccct  180

ggaaaagggc ttgagtggat gggagagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat  240

gagaagttcc agggcagagt caccataacc gcggacacgt ctacagacac agcctacatg  300

gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcaac aaactatgtt  360

ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc  420

aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg  480

gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca  540

ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac  600

tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc  660

aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt  720

gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc  780

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca  840

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac  900

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac   960

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag  1020

tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa  1080

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag  1140

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag  1200

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc  1260

gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg  1320

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc  1380

ctctccctgt ctccgggtaa atga                                         1404

<210>163

<211>448

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长重链人源化Hu2B8Hv1f.1可变区和人IgG1重链恒定区(Glm(17，1)

同种异型)的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>163

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Thr Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

        115                 120                 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

    130                 135                 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

                165                 170                 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

            180                 185                 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

        195                 200                 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

    210                 215                 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

                245                 250                 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

            260                 265                 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

        275                 280                 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

    290                 295                 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305                 310                 315                 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

                325                 330                 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

            340                 345                 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

        355                 360                 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

    370                 375                 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385                 390                 395                 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

                405                 410                 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

            420                 425                 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

<210>164

<211>412

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人源化Hu2B8Hv5a.1重链可变区的核酸序列

<400>164

atggggtcaa ccgccatcct cgccctcctc ctggctgttc tccaaggagt ctgtgccgaa   60

gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aaaaagcccg gggagtctct gaggatctcc  120

tgtaagggtt ctggatacag ctttaccacc tactggatgc actgggtgcg ccagatgccc  180

gggaaaggcc tggagtggat gggggagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat  240

ccgtccttcc aaggccacgt caccatctca gctgacaagt ccatcagcac tgcctacctg  300

cagtggagca gcctgaaggc ctcggacacc gccatgtatt actgtgcgag aaactatgtt  360

ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc ag          412

<210>165

<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人源化Hu2B8Hv5a.1重链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>165

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1               5                   10                  15

Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Phe

    50                  55                  60

Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

        115

<210>166

<211>1404

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长人源化Hu2B8Hv5a.1重链可变区和人IgG1(Glm(17，1)同种异型)重

链恒定区的核酸序列

<400>166

atggggtcaa ccgccatcct cgccctcctc ctggctgttc tccaaggagt ctgtgccgaa    60

gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aaaaagcccg gggagtctct gaggatctcc     120

tgtaagggtt ctggatacag ctttaccacc tactggatgc actgggtgcg ccagatgccc     180

gggaaaggcc tggagtggat gggggagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat     240

ccgtccttcc aaggccacgt caccatctca gctgacaagt ccatcagcac tgcctacctg     300

cagtggagca gcctgaaggc ctcggacacc gccatgtatt actgtgcgag aaactatgtt     360

ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc     420

aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg     480

gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca     540

ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac     600

tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc     660

aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt     720

gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc     780

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca     840

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac     900

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac     960

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag    1020

tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa    1080

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag    1140

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag    1200

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc    1260

gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg    1320

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc    1380

ctctccctgt ctccgggtaa atga                                           1404

<210>167

<211>448

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长人源化Hu2B8Hv5a.1重链可变区和人IgG1(Glm(17，1)同种异型)

重链恒定区的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>167

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1               5                   10                  15

Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Phe

    50                  55                  60

Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

        115                 120                 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

    130                 135                 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

                165                 170                 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

            180                 185                 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

        195                 200                 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

    210                 215                 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

                245                 250                 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

            260                 265                 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

        275                 280                 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

    290                 295                 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305                 310                 315                 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

                325                 330                 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

            340                 345                 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

        355                 360                 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

    370                 375                 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385                 390                 395                 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

                405                 410                 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

            420                 425                 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

<210>168

<211>412

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人源化Hu2B8 Hv5-51.1重链可变区的核酸序列

<400>168

atggggtcaa ccgccatcct cgccctcctc ctggctgttc tccaaggagt ctgtgccgaa     60

gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aaaaagcccg gggagtctct gaagatctcc    120

tgtaagggtt ctggatacag ctttaccacc tactggatgc actgggtgcg ccagatgccc    180

gggaaaggcc tggagtggat gggggagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat    240

ccgtccttcc aaggccaggt caccatctca gctgacaagt ccatcagcac tgcctacctg    300

cagtggagca gcctgaaggc ctcggacacc gccatgtatt actgtgcgag aaactatgtt    360

ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc ag            412

<210>169

<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人源化Hu2B8Hv5-51.1重链可变区序列的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>169

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1               5                   10                  15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

        115

<210>170

<211>1404

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长人源化Hu2B8Hv5-51.1重链可变区和人IgG1(Glm(17，1)同种异型)

重链恒定区的核酸序列

<400>170

atggggtcaa ccgccatcct cgccctcctc ctggctgttc tccaaggagt ctgtgccgaa     60

gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aaaaagcccg gggagtctct gaagatctcc    120

tgtaagggtt ctggatacag ctttaccacc tactggatgc actgggtgcg ccagatgccc    180

gggaaaggcc tggagtggat gggggagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat    240

ccgtccttcc aaggccaggt caccatctca gctgacaagt ccatcagcac tgcctacctg    300

cagtggagca gcctgaaggc ctcggacacc gccatgtatt actgtgcgag aaactatgtt    360

ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc    420

aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg    480

gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca    540

ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac   600

tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc   660

aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt   720

gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc   780

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca   840

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac   900

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac   960

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag  1020

tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa  1080

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag  1140

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag  1200

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc  1260

gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg  1320

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc  1380

ctctccctgt ctccgggtaa atga                                         1404

<210>171

<211>448

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长人源化Hu2B8Hv5-51.1重链可变区和人IgG1(Glm(17，1)同种异

型)

     重链恒定区的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>171

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1               5                   10                  15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

        115                 120                 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

    130                 135                 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

                165                 170                 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

            180                 185                 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

        195                 200                 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

    210                 215                 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

                245                 250                 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val yal Asp Val Ser His Glu Asp Pro

            260                 265                 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

        275                 280                 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

    290                 295                 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305                 310                 315                 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

                325                 330                 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

            340                 345                 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

        355                 360                 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

    370                 375                 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385                 390                 395                 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

                405                 410                 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

            420                 425                 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

<210>172

<211>388

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人源化Hu2B8Kv1-39.1Kappa链可变区的核酸序列

<400>172

atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc     60

agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga    120

gtcaccatca cttgcaaggc cagtgagaat gtggtttctt atgtatcctg gtatcagcag    180

aaaccaggga aagcccctaa gctcctgatc tatggggcat ccaaccggaa cactggggtc    240

ccatcaaggt tcagtggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagtctg    300

caacctgaag attttgcaac ttactactgt gggcagagtt acaactatcc gtacacgttt    360

ggccagggga ccaagctgga gatcaaac                                      388

<210>173

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人源化Hu2B8Kv1-39.1Kappa链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>173

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Ser Tyr

            20                  25                  30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105

<210>174

<211>323

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因2)的核酸序列

<400>174

gaactgtggc tgcaccatct gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg   60

gaactgcctc tgttgtgtgc ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt  120

ggaaggtgga taacgccctc caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca  180

gcaaggacag cacctacagc ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga  240

aacacaaagt ctacgcctgc gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga  300

gcttcaacag gggagagtgt tga                                          323

<210>175

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因2)的蛋白质序列

<400>175

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1               5                   10                  15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

            20                  25                  30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

        35                  40                  45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

    50                  55                  60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65                  70                  75                  80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

                85                  90                  95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

            100                 105

<210>176

<211>711

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长人源化Hu2B8Kv1-39.1轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种

异型)(等位基因2)的核酸序列

<400>176

atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc     60

agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga    120

gtcaccatca cttgcaaggc cagtgagaat gtggtttctt atgtatcctg gtatcagcag    180

aaaccaggga aagcccctaa gctcctgatc tatggggcat ccaaccggaa cactggggtc    240

ccatcaaggt tcagtggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagtctg    300

caacctgaag attttgcaac ttactactgt gggcagagtt acaactatcc gtacacgttt    360

ggccagggga ccaagctgga gatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc    420

ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac    480

ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac    540

tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc    600

ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat    660

cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgttg a             711

<210>177

<211>214

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长人源化Hu2B8Kv1-39.1轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同

种异型)(等位基因1)的蛋白质序列

<400>177

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Ser Tyr

            20                  25                  30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

        115                 120                 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

    130                 135                 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145                 150                 155                 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

            180                 185                 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

        195                 200                 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

    210

<210>178

<211>382

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人源化Hu2B8Kv3-15.1轻链可变区的核酸序列

<400>178

atggaagccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccactgga     60

gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc    120

ctctcctgca aggccagtga gaatgtggtt tcttatgtat cctggtacca gcagaaacct    180

ggccaggctc ccaggctcct catctatggg gcatccaacc ggaacactgg tatcccagcc    240

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct    300

gaagattttg cagtttatta ctgtgggcag agttacaact atccgtacac gtttggccag    360

gggaccaagc tggagatcaa ac                                             382

<210>179

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人源化Hu2B8Kv3-15.1轻链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>179

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Ser Tyr

            20                  25                  30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105

<210>180

<211>705

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长人源化Hu2B8Kv3-15.1轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种

异型)(等位基因2)的核酸

<400>180

atggaagccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccactgga  60

gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc  120

ctctcctgca aggccagtga gaatgtggtt tcttatgtat cctggtacca gcagaaacct  180

ggccaggctc ccaggctcct catctatggg gcatccaacc ggaacactgg tatcccagcc  240

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct  300

gaagattttg cagtttatta ctgtgggcag agttacaact atccgtacac gtttggccag  360

gggaccaagc tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca  420

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat  480

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag  540

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg  600

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc  660

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttga                  705

<210>181

<211>214

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人源化Hu2B8Kv3-15.1轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异

型)(等位基因2)的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>181

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Ser Tyr

            20                  25                  30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

        115                 120                 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

    130                 135                 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145                 150                 155                 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

            180                 185                 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

        195                 200                 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

    210

<210>182

<211>412

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人源化LR2B8HC重链可变区的核酸序列

<400>182

atgggctggt catatattat tctctttctt gttgctaccg ctaccgatgt gcactctcaa   60

gtccaactcg tacaaccagg cgctgaagtc gtaaaacccg gaacatctgt taaactctca  120

tgcaaagcct caggatacac tttcacaact tactggatgc attgggtcaa tcaagccccc  180

ggacaaggcc tcgaatggat tggcgaaatt aacccaacta acggacatac taattataat  240

gaaaaattta agggcaaagc tacactcacc gtcgataaat caacctctac agcttatatg  300

gaactttcat ccctgagatc agaagataca gccgtctact attgcgccag aaactacgta  360

ggatcaatat tcgattactg gggtcaaggc actctcctca cagtcagctc ag          412

<210>183

<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人源化LR2B8HC重链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>183

Gln Val Gln Leu Val Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Thr

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Asn Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Leu Thr Val Ser Ser

        115

<210>184

<211>992

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因1)的核酸序列

<400>184

ccagcacaaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg   60

gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt  120

ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag  180

gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct  240

acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga gttgagccca  300

aatcttgtga caaaactcac acatgtccac cgtgcccagc acctgaactc ctggggggac  360

cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg  420

aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt  480

acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca  540

gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg  600

agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca  660

aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga  720

tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg  780

ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc  840

tggactccga cggctccttc ttcctctata gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc  900

agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc  960

agaagagcct ctccctgtcc ccgggtaaat ga                                992

<210>185

<211>330

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因1或2)的蛋白质序列

<400>185

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1               5                   10                  15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

            20                  25                  30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

        35                  40                  45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

    50                  55                  60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65                  70                  75                  80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

                85                  90                  95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

            100                 105                 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

        115                 120                 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

    130                 135                 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145                 150                 155                 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

                165                 170                 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

            180                 185                 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

        195                 200                 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

    210                 215                 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225                 230                 235                 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

                245                 250                 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

            260                 265                 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

        275                 280                 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

    290                 295                 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305                 310                 315                 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                325                 330

<210>186

<211>1404

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长重链人源化LR2B8HC重链可变区和人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异

型)(等位基因1)的核酸序列

<400>186

atgggctggt catatattat tctctttctt gttgctaccg ctaccgatgt gcactctcaa     60

gtccaactcg tacaaccagg cgctgaagtc gtaaaacccg gaacatctgt taaactctca    120

tgcaaagcct caggatacac tttcacaact tactggatgc attgggtcaa tcaagccccc    180

ggacaaggcc tcgaatggat tggcgaaatt aacccaacta acggacatac taattataat    240

gaaaaattta agggcaaagc tacactcacc gtcgataaat caacctctac agcttatatg    300

gaactttcat ccctgagatc agaagataca gccgtctact attgcgccag aaactacgta    360

ggatcaatat tcgattactg gggtcaaggc actctcctca cagtcagctc agccagcaca    420

aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg    480

gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca    540

ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac    600

tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc    660

aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt    720

gacaaaactc acacatgtcc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc    780

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca    840

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac    900

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac    960

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag   1020

tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa   1080

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag  1140

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag  1200

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc  1260

gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg  1320

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc  1380

ctctccctgt ccccgggtaa atga                                         1404

<210>187

<211>448

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长重链人源化LR2B8HC重链可变区和人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种

异型)(等位基因1)的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>187

Gln Val Gln Leu Val Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Thr

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Asn Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

    50                  55                  60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

        115                 120                 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

    130                 135                 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

                165                 170                 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

            180                 185                 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

        195                 200                 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

    210                 215                 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

                245                 250                 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

            260                 265                 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

        275                 280                 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

    290                 295                 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305                 310                 315                 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

                325                 330                 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

            340                 345                 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

        355                 360                 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

    370                 375                 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385                 390                 395                 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

                405                 410                 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

            420                 425                 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

<210>188

<211>412

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人源化LRMR2B8HC重链可变区的核酸序列

<400>188

atgggttggt catatattat actctttctc gtagccaccg ccaccgacgt acactctcag   60

gttcaactcg tacaacccgg cgccgaagtc aagaaaccag gaacatcagt caaactctca  120

tgtaaagcaa gcggatacac ctttactact tattggatgc attgggtaag acaagccccc  180

ggacaaggac tcgaatggat aggcgaaata aatcccacta atggacatac aaattataat  240

caaaaatttc aaggacgcgc tacactcacc gtcgataaat caacctcaac cgcatacatg  300

gaactcagct ccctccgatc cgaagacact gccgtttatt attgtgccag aaactatgta  360

ggatctattt tcgattactg gggacaagga acacttctca ccgtaagctc ag          412

<210>189

<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人源化LRMR2B8HC重链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>189

Gln Val Gln Leu Val Gln Pro Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Leu Thr Val Ser Ser

        115

<210>190

<211>1404

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长重链人源化LRMR2B8HC重链可变区和人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种

异型)(等位基因1)的核酸序列

<400>190

atgggttggt catatattat actctttctc gtagccaccg ccaccgacgt acactctcag     60

gttcaactcg tacaacccgg cgccgaagtc aagaaaccag gaacatcagt caaactctca    120

tgtaaagcaa gcggatacac ctttactact tattggatgc attgggtaag acaagccccc    180

ggacaaggac tcgaatggat aggcgaaata aatcccacta atggacatac aaattataat    240

caaaaatttc aaggacgcgc tacactcacc gtcgataaat caacctcaac cgcatacatg     300

gaactcagct ccctccgatc cgaagacact gccgtttatt attgtgccag aaactatgta     360

ggatctattt tcgattactg gggacaagga acacttctca ccgtaagctc agccagcaca     420

aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg     480

gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca     540

ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac     600

tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc     660

aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt     720

gacaaaactc acacatgtcc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc     780

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca     840

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac     900

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac     960

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag    1020

tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa    1080

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag    1140

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag    1200

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc    1260

gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg    1320

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc    1380

ctctccctgt ccccgggtaa atga                                           1404

<210>191

<211>448

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长重链人源化LRMR2B8HC重链可变区和人IgG1重链恒定区(Glm(3)

同种异型)(等位基因1)的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>191

Gln Val Gln Leu Val Gln Pro Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

        115                 120                 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

    130                 135                 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

                165                 170                 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

            180                 185                 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

        195                 200                 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

    210                 215                 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu MetI le Ser Arg

                245                 250                 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

            260                 265                 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

        275                 280                 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

    290                 295                 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305                 310                 315                 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

                325                 330                 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

            340                 345                 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

        355                 360                 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

    370                 375                 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385                 390                 395                 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

                405                 410                 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

            420                 425                 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

<210>192

<211>360

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人源化LR2B8LC轻链可变区的核酸序列

<400>192

atggaaagtc agacccttgt attcatctct attcttcttt ggttgtatgg agcagacggc    60

gacattgtga tgacccaatc ccccgatagt atggccatga gtgtaggaga aagagtcacc    120

cttaattgca aagcctccga aaatgtcgtt tcatatgtgt cttggtatca acaaaaaccc    180

ggccaatcac ccaaacttct catatacggc gcttcaaaca gaaacacagg cgttcccgac    240

agatttagtg gatccggatc agctacagat ttcaccctta ccatcagttc agttcaagca    300

gaagacgttg cagactatca ttgcggacaa tcttataact acccttacac attcggacaa    360

<210>193

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人源化LR2B8LC轻链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>193

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Met Ala Met Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Val Thr Leu Asn Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Ser Tyr

            20                  25                  30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65                  70                  75                  80

Glu Asp Val Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105

<210>194

<211>323

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)的核酸序列

<400>194

gtacggtggc tgcaccatct gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg     60

gaactgcctc tgttgtgtgc ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt    120

ggaaggtgga taacgccctc caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca    180

gcaaggacag cacctacagc ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga    240

aacacaaagt ctacgcctgc gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga    300

gcttcaacag gggagagtgt tag                                            323

<210>195

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基因1)的蛋白质序列

<400>195

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1               5                   10                  15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

            20                  25                  30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

        35                  40                  45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

    50                  55                  60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65                  70                  75                  80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

                85                  90                  95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

            100                 105

<210>196

<211>705

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长人源化LR2B8LC轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等

位基因1)的核酸序列

<400>196

atggaaagtc agacccttgt attcatctct attcttcttt ggttgtatgg agcagacggc     60

gacattgtga tgacccaatc ccccgatagt atggccatga gtgtaggaga aagagtcacc    120

cttaattgca aagcctccga aaatgtcgtt tcatatgtgt cttggtatca acaaaaaccc    180

ggccaatcac ccaaacttct catatacggc gcttcaaaca gaaacacagg cgttcccgac    240

agatttagtg gatccggatc agctacagat ttcaccctta ccatcagttc agttcaagca    300

gaagacgttg cagactatca ttgcggacaa tcttataact acccttacac attcggacaa    360

ggaaccaaac tcgaaattaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca    420

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat    480

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag    540

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg    600

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc    660

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag                    705

<210>197

<211>214

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人源化LR2B8LC轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异型)(等位基

因1)的蛋白质序列

<400>197

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Met Ala Met Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Val Thr Leu Asn Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Ser Tyr

            20                  25                  30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65                  70                  75                  80

Glu Asp Val Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

        115                 120                 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

    130                 135                 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145                 150                 155                 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

            180                 185                 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

        195                 200                 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

    210

<210>198

<211>382

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人源化LRMR2B8LC轻链可变区的核酸序列

<400>198

atggaatccc aaacccttgt tttcatctct atccttctct ggctttatgg cgccgacgga   60

gacatcgtaa tgacacaatc ccctgactct cttgctatga gcttgggcga acgagtaaca  120

cttaactgca aagcatccga aaatgtcgta tcttacgtat cctggtatca gcaaaaacct  180

ggtcaaagtc ctaaacttct tatatatggt gcaagtaatc gtgaaagtgg cgtcccagac  240

agatttagcg gttcaggttc agcaactgac tttacactta caatttctag cgttcaggcc  300

gaagacgttg cagactatca ttgtggacaa tcttataact atccttatac tttcggacaa  360

ggcactaaac ttgaaattaa ac                                           382

<210>199

<211>107

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人源化LRMR2B8LC轻链可变区的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>199

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Val Thr Leu Asn Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Ser Tyr

            20                  25                  30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65                  70                  75                  80

Glu Asp Val Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

            100                 105

<210>200

<211>705

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的全长人源化LRMR2B8LC轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异

型)(等位基因1)的核酸序列

<400>200

atggaatccc aaacccttgt tttcatctct atccttctct ggctttatgg cgccgacgga   60

gacatcgtaa tgacacaatc ccctgactct cttgctatga gcttgggcga acgagtaaca  120

cttaactgca aagcatccga aaatgtcgta tcttacgtat cctggtatca gcaaaaacct  180

ggtcaaagtc ctaaacttct tatatatggt gcaagtaatc gtgaaagtgg cgtcccagac  240

agatttagcg gttcaggttc agcaactgac tttacactta caatttctag cgttcaggcc  300

gaagacgttg cagactatca ttgtggacaa tcttataact atccttatac tttcggacaa  360

ggcactaaac ttgaaattaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca  420

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat  480

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag  540

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg  600

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc  660

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag                  705

<210>201

<211>214

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的全长人源化LRMR2B8LC轻链可变区和人Kappa链恒定区(Km(3)同种异

型)(等位基因1)的蛋白质序列

<400>201

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Val Thr Leu Asn Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Ser Tyr

            20                  25                  30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65                  70                  75                  80

Glu Asp Val Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr Asn Tyr Pro Tyr

                85                  90                  95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

            100                 105                 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

        115                 120                 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

    130                 135                 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145                 150                 155                 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

                165                 170                 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

            180                 185                 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

        195                 200                 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

    210

<210>202

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的人源化Hu2B8 Hv1f.1抗体的重链CDR2序列(Kabat定义)

<400>202

Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Gln

1               5                   10                  15

Gly

<210>203

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的人源化Hu2B8Hv5a.1抗体的重链CDR2序列(Kabat定义)

<400>203

Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Phe Gln

1               5                   10                  15

Gly

<210>204

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的人源化LR2B8HC抗体的重链CDR2序列(Kabat定义)

<400>204

Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1               5                   10                  15

Gly

<210>205

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的人源化LRMR2B8HC抗体的重链CDR2序列(Kabat定义)

<400>205

Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Gln

1               5                   10                  15

Gly

<210>206

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的人源化LRMR2BLC抗体的轻链CDR2序列(Kabat定义)

<400>206

Gly Ala Ser Asn Arg Glu Ser

1               5

<210>207

<211>992

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编码合成的人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因2)的核酸序列

<400>207

cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg     60

gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt    120

ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag    180

gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct    240

acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga gttgagccca    300

aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc ctggggggac    360

cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg    420

aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt    480

acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca    540

gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg    600

agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaag accatctcca    660

aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga    720

tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg    780

ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc    840

tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc    900

agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc    960

agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat ga                                  992

<210>208

<211>330

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了合成的人IgG1重链恒定区(Glm(3)同种异型)(等位基因1或2)的蛋白质序列

<400>208

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1               5                   10                  15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

            20                  25                  30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

        35                  40                  45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

    50                  55                  60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65                  70                  75                  80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

                85                  90                  95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

            100                 105                 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

        115                 120                 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

    130                 135                 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145                 150                 155                 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

                165                 170                 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

            180                 185                 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

        195                 200                 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

    210                 215                 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225                 230                 235                 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

                245                 250                 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

            260                 265                 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

        275                 280                 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

    290                 295                 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305                 310                 315                 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                325                 330

<210>209

<211>1404

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>编编码含有人源化的Hu2B8Hv5-51.1重链可变区和人IgG1重链恒定区Glm(3)同种

异型(等位基因2)的合成的全长链的核酸序列

<400>209

atggggtcaa ccgccatcct cgccctcctc ctggctgttc tccaaggagt ctgtgccgaa   60

gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aaaaagcccg gggagtctct gaagatctcc  120

tgtaagggtt ctggatacag ctttaccacc tactggatgc actgggtgcg ccagatgccc  180

gggaaaggcc tggagtggat gggggagatt aatcctacca acggtcatac taactacaat  240

ccgtccttcc aaggccaggt caccatctca gctgacaagt ccatcagcac tgcctacctg     300

cagtggagca gcctgaaggc ctcggacacc gccatgtatt actgtgcgag aaactatgtt     360

ggtagcatct ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc     420

aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg     480

gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca     540

ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac     600

tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc     660

aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt     720

gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc     780

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca     840

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac     900

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac     960

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag    1020

tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga agaccatctc caaagccaaa    1080

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag    1140

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag    1200

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc    1260

gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg    1320

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc    1380

ctctccctgt ctccgggtaa atga                                           1404

<210>210

<211>448

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>限定了含有人源化的Hu2B8Hv5-51.1重链可变区和人IgG1重链恒定区Glm(3)同种

异型(等位基因2)的合成的全长重链的蛋白质序列(没有信号序列)

<400>210

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1               5                   10                  15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr

            20                  25                  30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Glu Ile Asn Pro Thr Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Phe

    50                  55                  60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Asn Tyr Val Gly Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

        115                 120                 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

    130                 135                 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

                165                 170                 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

            180                 185                 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

        195                 200                 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

    210                 215                 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225                 230                 235                 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

                245                 250                 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

            260                 265                 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

        275                 280                 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

    290                 295                 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305                 310                 315                 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

                325                 330                 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

            340                 345                 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

        355                 360                 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

    370                 375                 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385                 390                 395                 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

                405                 410                 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

            420                 425                 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

        435                 440                 445

<210>211

<211>2209

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的HGF mhm(V495-L585)

<400>211

atgatgtggg ggaccaaact tctgccggtc ctgttgctgc agcatgtcct cctgcacctc    60

ctcctgcttc atgtcgccat cccctatgca gaaggacaga agaaaagaag aaatacactt     120

catgaattta aaaagtcagc aaaaactact cttaccaagg aagacccatt actgaagatt     180

aaaaccaaaa aagtgaactc tgcagatgag tgtgccaaca ggtgtatcag gaacaggggc     240

tttacgttca cttgcaaggc cttcgttttt gataagtcaa gaaaacgatg ctactggtat     300

cctttcaata gtatgtcaag tggagtgaaa aaagggtttg gccatgaatt tgacctctat     360

gaaaacaaag actatattag aaactgcatc attggtaaag gaggcagcta taaagggacg     420

gtatccatca ctaagagtgg catcaaatgc cagccttgga attccatgat cccccatgaa     480

cacagctttt tgccttcgag ctatcgcggt aaagacctac aggaaaacta ctgtcgaaat     540

cctcgagggg aagaaggggg accctggtgt ttcacaagca atccagaggt acgctacgaa     600

gtctgtgaca ttcctcagtg ttcagaagtt gaatgcatga cctgcaatgg tgaaagctac     660

agaggtccca tggatcacac agaatcaggc aagacttgtc agcgctggga ccagcagaca     720

ccacaccggc acaagttctt gccagaaaga tatcccgaca agggctttga tgataattat     780

tgccgcaatc ctgatggcaa gccgaggcca tggtgctaca ctcttgaccc tgacaccact     840

tgggagtatt gtgcaattaa aacgtgcgct cacagtgctg tgaatgagac tgatgtccct     900

atggaaacaa ctgaatgcat tcaaggccaa ggagaaggtt acaggggaac cagcaatacc     960

atttggaatg gaattccctg tcagcgttgg gattcgcagt accctcacaa gcatgatatc    1020

actcccgaga acttcaaatg caaggacctt agagaaaatt attgccgcaa tccagatggg    1080

gctgaatcac catggtgttt taccactgac ccaaacatcc gagttggcta ctgctctcag    1140

attcccaagt gtgacgtgtc aagtggacaa gattgttatc gtggcaatgg gaaaaattac    1200

atgggcaact tatccaaaac aaggtctgga cttacatgtt ccatgtggga caagaatatg    1260

gaggatttac accgtcatat cttctgggag ccagatgcta gcaaattgaa taagaattac    1320

tgccggaatc ctgatgatga tgcccatgga ccttggtgct acacggggaa tcctcttatt    1380

ccttgggatt attgccctat ttcccgttgt gaaggagata ctacacctac aattgtcaat  1440

ttggaccatc ctgtaatatc ctgtgccaaa acaaaacaac tgcgggttgt aaatgggatt  1500

ccaacacgaa caaacatagg atggatggtt agtttgagat acagaaataa acatatctgc  1560

ggaggatcat tgataaagga gagttgggtt cttactgcac gacagtgttt cccttctcga  1620

gacttgaaag attatgaagc ttggcttgga attcatgatg tccacggaag aggagatgag  1680

aaatgcaaac aggttctcaa tgtttcccag ctggtatatg gccctgaagg atcagatctg  1740

gttttaatga agcttgctcg acctgcaatc ctggataact ttgtcagtac aattgattta  1800

cctagttatg gttgtacaat ccctgaaaag accacttgca gtatttacgg ctggggctac  1860

actggattga tcaacgcgga tggtttatta cgagtagctc atctgtatat tatggggaat  1920

gagaaatgca gtcagcacca tcaaggcaag gtgactttga atgagtctga gttatgtgct  1980

ggggctgaaa agattggatc aggaccatgt gagggagatt atggtggccc actcatttgt  2040

gaacaacaca aaatgagaat ggttcttggt gtcattgttc ctggtcgtgg atgtgccatc  2100

ccaaatcgtc ctgttatttt tgttcgagta gcatattatg caaaatggat acacaaagta  2160

attttgacat acaagttgtg cggccgccat caccatcacc atcactaag              2209

<210>212

<211>680

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的HGF mhm495-585有活性的

<400>212

Pro Leu Leu Lys Ile Lys Thr Lys Lys Val Asn Ser Ala Asp Glu Cys

1               5                   10                  15

Ala Asn Arg Cys Ile Arg Asn Arg Gly Phe Thr Phe Thr Cys Lys Ala

            20                  25                  30

Phe Val Phe Asp Lys Ser Arg Lys Arg Cys Tyr Trp Tyr Pro Phe Asn

        35                  40                  45

Ser Met Ser Ser Gly Val Lys Lys Gly Phe Gly His Glu Phe Asp Leu

    50                  55                  60

Tyr Glu Asn Lys Asp Tyr Ile Arg Asn Cys Ile Ile Gly Lys Gly Gly

65                  70                  75                  80

Ser Tyr Lys Gly Thr Val Ser Ile Thr Lys Ser Gly Ile Lys Cys Gln

                85                  90                  95

Pro Trp Asn Ser Met Ile Pro His Glu His Ser Phe Leu Pro Ser Ser

            100                 105                 110

Tyr Arg Gly Lys Asp Leu Gln Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Arg Gly

        115                 120                 125

Glu Glu Gly Gly Pro Trp Cys Phe Thr Ser Asn Pro Glu Val Arg Tyr

    130                 135                 140

Glu Val Cys Asp Ile Pro Gln Cys Ser Glu Val Glu Cys Met Thr Cys

145                 150                 155                 160

Asn Gly Glu Ser Tyr Arg Gly Pro Met Asp His Thr Glu Ser Gly Lys

                165                 170                 175

Thr Cys Gln Arg Trp Asp Gln Gln Thr Pro His Arg His Lys Phe Leu

            180                 185                 190

Pro Glu Arg Tyr Pro Asp Lys Gly Phe Asp Asp Asn Tyr Cys Arg Asn

        195                 200                 205

Pro Asp Gly Lys Pro Arg Pro Trp Cys Tyr Thr Leu Asp Pro Asp Thr

    210                 215                 220

Thr Trp Glu Tyr Cys Ala Ile Lys Thr Cys Ala His Ser Ala Val Asn

225                 230                 235                 240

Glu Thr Asp Val Pro Met Glu Thr Thr Glu Cys Ile Gln Gly Gln Gly

                245                 250                 255

Glu Gly Tyr Arg Gly Thr Ser Asn Thr Ile Trp Asn Gly Ile Pro Cys

            260                 265                 270

Gln Arg Trp Asp Ser Gln Tyr Pro His Lys His Asp Ile Thr Pro Glu

        275                 280                 285

Asn Phe Lys Cys Lys Asp Leu Arg Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp

    290                 295                 300

Gly Ala Glu Ser Pro Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Ile Arg Val

305                 310                 315                 320

Gly Tyr Cys Ser Gln Ile Pro Lys Cys Asp Val Ser Ser Gly Gln Asp

                325                 330                 335

Cys Tyr Arg Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Met Gly Asn Leu Ser Lys Thr

            340                 345                 350

Arg Ser Gly Leu Thr Cys Ser Met Trp Asp Lys Asn Met Glu Asp Leu

        355                 360                 365

His Arg His Ile Phe Trp Glu Pro Asp Ala Ser Lys Leu Asn Lys Asn

    370                 375                 380

Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asp Asp Ala His Gly Pro Trp Cys Tyr Thr

385                 390                 395                 400

Gly Asn Pro Leu Ile Pro Trp Asp Tyr Cys Pro Ile Ser Arg Cys Glu

                405                 410                 415

Gly Asp Thr Thr Pro Thr Ile Val Asn Leu Asp His Pro Val Ile Ser

            420                 425                 430

Cys Ala Lys Thr Lys Gln Leu Arg Val Val Asn Gly Ile Pro Thr Arg

        435                 440                 445

Thr Asn Ile Gly Trp Met Val Ser Leu Arg Tyr Arg Asn Lys His Ile

    450                 455                 460

Cys Gly Gly Ser Leu Ile Lys Glu Ser Trp Val Leu Thr Ala Arg Gln

465                 470                 475                 480

Cys Phe Pro Ser Arg Asp Leu Lys Asp Tyr Glu Ala Trp Leu Gly Ile

                485                 490                 495

His Asp Val His Gly Arg Gly Asp Glu Lys Cys Lys Gln Val Leu Asn

            500                 505                 510

Val Ser Gln Leu Val Tyr Gly Pro Glu Gly Ser Asp Leu Val Leu Met

        515                 520                 525

Lys Leu Ala Arg Pro Ala Ile Leu Asp Asn Phe Val Ser Thr Ile Asp

    530                 535                 540

Leu Pro Ser Tyr Gly Cys Thr Ile Pro Glu Lys Thr Thr Cys Ser Ile

545                 550                 555                 560

Tyr Gly Trp Gly Tyr Thr Gly Leu Ile Asn Ala Asp Gly Leu Leu Arg

                565                 570                 575

Val Ala His Leu Tyr Ile Met Gly Asn Glu Lys Cys Ser Gln His His

            580                 585                 590

Gln Gly Lys Val Thr Leu Asn Glu Ser Glu Leu Cys Ala Gly Ala Glu

        595                 600                 605

Lys Ile Gly Ser Gly Pro Cys Glu Gly Asp Tyr Gly Gly Pro Leu Ile

    610                 615                 620

Cys Glu Gln His Lys Met Arg Met Val Leu Gly Val Ile Val Pro Gly

625                 630                 635                 640

Arg Gly Cys Ala Ile Pro Asn Arg Pro Val Ile Phe Val Arg Val Ala

                645                 650                 655

Tyr Tyr Ala Lys Trp Ile His Lys Val Ile Leu Thr Tyr Lys Leu Cys

            660                 665                 670

Gly Arg His His His His His His

        675                 680

<210>213

<211>2194

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的HGF mhm(I499-R556)

<400>213

atgatgtggg ggaccaaact tctgccggtc ctgttgctgc agcatgtcct cctgcacctc      60

ctcctgcttc atgtcgccat cccctatgca gaaggacaga agaaaagaag aaatacactt     120

catgaattta aaaagtcagc aaaaactact cttaccaagg aagacccatt actgaagatt     180

aaaaccaaaa aagtgaactc tgcagatgag tgtgccaaca ggtgtatcag gaacaggggc     240

tttacgttca cttgcaaggc cttcgttttt gataagtcaa gaaaacgatg ctactggtat     300

cctttcaata gtatgtcaag tggagtgaaa aaagggtttg gccatgaatt tgacctctat     360

gaaaacaaag actatattag aaactgcatc attggtaaag gaggcagcta taaagggacg     420

gtatccatca ctaagagtgg catcaaatgc cagccttgga attccatgat cccccatgaa     480

cacagctatc gcggtaaaga cctacaggaa aactactgtc gaaatcctcg aggggaagaa     540

gggggaccct ggtgtttcac aagcaatcca gaggtacgct acgaagtctg tgacattcct     600

cagtgttcag aagttgaatg catgacctgc aatggtgaaa gctacagagg tcccatggat     660

cacacagaat caggcaagac ttgtcagcgc tgggaccagc agacaccaca ccggcacaag     720

ttcttgccag aaagatatcc cgacaagggc tttgatgata attattgccg caatcctgat     780

ggcaagccga ggccatggtg ctacactctt gaccctgaca ccccttggga gtattgtgca     840

attaaaacgt gcgctcacag tgctgtgaat gagactgatg tccctatgga aacaactgaa     900

tgcattcaag gccaaggaga aggttacagg ggaaccagca ataccatttg gaatggaatt     960

ccctgtcagc gttgggattc gcagtaccct cacaagcatg atatcactcc cgagaacttc    1020

aaatgcaagg accttagaga aaattattgc cgcaatccag atggggctga atcaccatgg    1080

tgttttacca ctgacccaaa catccgagtt ggctactgct ctcagattcc caagtgtgac    1140

gtgtcaagtg gacaagattg ttatcgtggc aatgggaaaa attacatggg caacttatcc    1200

aaaacaaggt ctggacttac atgttccatg tgggacaaga atatggagga tttacaccgt    1260

catatcttct gggagccaga tgctagcaaa ttgaataaga attactgccg gaatcctgat    1320

gatgatgccc atggaccttg gtgctacacg gggaatcctc ttattccttg ggattattgc  1380

cctatttccc gttgtgaagg agatactaca cctacaattg tcaatttgga ccatcctgta  1440

atatcctgtg ccaaaacaaa acaactgcgg gttgtaaatg ggattccaac acgaacaaac  1500

ataggatgga tggttagttt gagatacaga aataaacata tctgcggagg atcattgata  1560

aaggagagtt gggttcttac tgcacgacag tgtttccctt ctcgagactt gaaagattat  1620

gaagcttggc ttggaattca tgatgtccac ggaagaggag aggagaaaag aaaacagatt  1680

ctcaatattt cccagctggt atatggccct gaaggatcag atctggtttt actgaagctt  1740

gctcgacctg caatcctgga taactttgtc agtacaattg atttacctag ttatggttgt  1800

acaatccctg aaaagaccac ttgcagtatt tacggctggg gctacactgg attgatcaac  1860

gcggatggtt tattacgagt agctcatctg tatattatgg ggaatgagaa atgcagtcag  1920

caccatcaag gcaaggtgac tttgaatgag tctgagttat gtgctggggc tgaaaagatt  1980

ggatcaggac catgtgaggg agattatggt ggcccactca tttgtgaaca acacaaaatg  2040

agaatggttc ttggtgtcat tgttcctggt cgtggatgtg ccatcccaaa tcgtcctggt  2100

atttttgttc gagtagcata ttatgcaaaa tggatacaca aagtaatttt gacatacaag  2160

ttgtgcggcc gccatcacca tcaccatcac taag                              2194

<210>214

<211>675

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的HGF mhm 499-556有活性的

<400>214

Pro Leu Leu Lys Ile Lys Thr Lys Lys Val Asn Ser Ala Asp Glu Cys

1               5                   10                  15

Ala Asn Arg Cys Ile Arg Asn Arg Gly Phe Thr Phe Thr Cys Lys Ala

            20                  25                  30

Phe Val Phe Asp Lys Ser Arg Lys Arg Cys Tyr Trp Tyr Pro Phe Asn

        35                  40                  45

Ser Met Ser Ser Gly Val Lys Lys Gly Phe Gly His Glu Phe Asp Leu

    50                  55                  60

Tyr Glu Asn Lys Asp Tyr Ile Arg Asn Cys Ile Ile Gly Lys Gly Gly

65                  70                  75                  80

Ser Tyr Lys Gly Thr Val Ser Ile Thr Lys Ser Gly Ile Lys Cys Gln

                85                  90                  95

Pro Trp Asn Ser Met Ile Pro His Glu His Ser Tyr Arg Gly Lys Asp

            100                 105                 110

Leu Gln Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Arg Gly Glu Glu Gly Gly Pro

        115                 120                 125

Trp Cys Phe Thr Ser Asn Pro Glu Val Arg Tyr Glu Val Cys Asp Ile

    130                 135                 140

Pro Gln Cys Ser Glu Val Glu Cys Met Thr Cys Asn Gly Glu Ser Tyr

145                 150                 155                 160

Arg Gly Pro Met Asp His Thr Glu Ser Gly Lys Thr Cys Gln Arg Trp

                165                 170                 175

Asp Gln Gln Thr Pro His Arg His Lys Phe Leu Pro Glu Arg Tyr Pro

            180                 185                 190

Asp Lys Gly Phe Asp Asp Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Lys Pro

        195                 200                 205

Arg Pro Trp Cys Tyr Thr Leu Asp Pro Asp Thr Pro Trp Glu Tyr Cys

    210                 215                 220

Ala Ile Lys Thr Cys Ala His Ser Ala Val Asn Glu Thr Asp Val Pro

225                 230                 235                 240

Met Glu Thr Thr Glu Cys Ile Gln Gly Gln Gly Glu Gly Tyr Arg Gly

                245                 250                 255

Thr Ser Asn Thr Ile Trp Asn Gly Ile Pro Cys Gln Arg Trp Asp Ser

            260                 265                 270

Gln Tyr Pro His Lys His Asp Ile Thr Pro Glu Asn Phe Lys Cys Lys

        275                 280                 285

Asp Leu Arg Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Ala Glu Ser Pro

    290                 295                 300

Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Ile Arg Val Gly Tyr Cys Ser Gln

305                 310                 315                 320

Ile Pro Lys Cys Asp Val Ser Ser Gly Gln Asp Cys Tyr Arg Gly Asn

                325                 330                 335

Gly Lys Asn Tyr Met Gly Asn Leu Ser Lys Thr Arg Ser Gly Leu Thr

            340                 345                 350

Cys Ser Met Trp Asp Lys Asn Met Glu Asp Leu His Arg His Ile Phe

        355                 360                 365

Trp Glu Pro Asp Ala Ser Lys Leu Asn Lys Asn Tyr Cys Arg Asn Pro

    370                 375                 380

Asp Asp Asp Ala His Gly Pro Trp Cys Tyr Thr Gly Asn Pro Leu Ile

385                 390                 395                 400

Pro Trp Asp Tyr Cys Pro Ile Ser Arg Cys Glu Gly Asp Thr Thr Pro

                405                 410                 415

Thr Ile Val Asn Leu Asp His Pro Val Ile Ser Cys Ala Lys Thr Lys

            420                 425                 430

Gln Leu Arg Val Val Asn Gly Ile Pro Thr Arg Thr Asn Ile Gly Trp

        435                 440                 445

Met Val Ser Leu Arg Tyr Arg Asn Lys His Ile Cys Gly Gly Ser Leu

    450                 455                 460

Ile Lys Glu Ser Trp Val Leu Thr Ala Arg Gln Cys Phe Pro Ser Arg

465                 470                 475                 480

Asp Leu Lys Asp Tyr Glu Ala Trp Leu Gly Ile His Asp Val His Gly

                485                 490                 495

Arg Gly Glu Glu Lys Arg Lys Gln Ile Leu Asn Ile Ser Gln Leu Val

            500                 505                 510

Tyr Gly Pro Glu Gly Ser Asp Leu Val Leu Leu Lys Leu Ala Arg Pro

        515                 520                 525

Ala Ile Leu Asp Asn Phe Val Ser Thr Ile Asp Leu Pro Ser Tyr Gly

    530                 535                 540

Cys Thr Ile Pro Glu Lys Thr Thr Cys Ser Ile Tyr Gly Trp Gly Tyr

545                 550                 555                 560

Thr Gly Leu Ile Asn Ala Asp Gly Leu Leu Arg Val Ala His Leu Tyr

                565                 570                 575

Ile Met Gly Asn Glu Lys Cys Ser Gln His His Gln Gly Lys Val Thr

            580                 585                 590

Leu Asn Glu Ser Glu Leu Cys Ala Gly Ala Glu Lys Ile Gly Ser Gly

        595                 600                 605

Pro Cys Glu Gly Asp Tyr Gly Gly Pro Leu Ile Cys Glu Gln His Lys

    610                 615                 620

Met Arg Met Val Leu Gly Val Ile Val Pro Gly Arg Gly Cys Ala Ile

625                 630                 635                 640

Pro Asn Arg Pro Gly Ile Phe Val Arg Val Ala Tyr Tyr Ala Lys Trp

                645                 650                 655

Ile His Lys Val Ile Leu Thr Tyr Lys Leu Cys Gly Arg His His His

            660                 665                 670

His His His

        675

<210>215

<211>2193

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的HGF mhm(W507-L585)

<400>215

atgatgtggg ggaccaaact tctgccggtc ctgttgctgc agcatgtcct cctgcacctc      60

ctcctgcttc atgtcgccat cccctatgca gaaggacaga agaaaagaag aaatacactt     120

catgaattta aaaagtcagc aaaaactact cttaccaagg aagacccatt actgaagatt     180

aaaaccaaaa aagtgaactc tgcagatgag tgtgccaaca ggtgtatcag gaacaggggc     240

tttacgttca cttgcaaggc cttcgttttt gataagtcaa gaaaacgatg ctactggtat     300

cctttcaata gtatgtcaag tggagtgaaa aaagggtttg gccatgaatt tgacctctat     360

gaaaacaaag actatattag aaactgcatc attggtaaag gaggcagcta taaagggacg     420

gtatccatca ctaagagtgg catcaaatgc cagccttgga attccatgat cccccatgaa     480

cacagctatc gcggtaaaga cctacaggaa aactactgtc gaaatcctcg aggggaagaa     540

gggggaccct ggtgtttcac aagcaatcca gaggtacgct acgaagtctg tgacattcct     600

cagtgttcag aagttgaatg catgacctgc aatggtgaaa gctacagagg tcccatggat     660

cacacagaat caggcaagac ttgtcagcgc tgggaccagc agacaccaca ccggcacaag     720

ttcttgccag aaagatatcc cgacaagggc tttgatgata attattgccg caatcctgat     780

ggcaagccga ggccatggtg ctacactctt gaccctgaca ccccttggga gtattgtgca     840

attaaaacgt gcgctcacag tgctgtgaat gagactgatg tccctatgga aacaactgaa     900

tgcattcaag gccaaggaga aggttacagg ggaaccagca ataccatttg gaatggaatt     960

ccctgtcagc gttgggattc gcagtaccct cacaagcatg atatcactcc cgagaacttc    1020

aaatgcaagg accttagaga aaattattgc cgcaatccag atggggctga atcaccatgg    1080

tgttttacca ctgacccaaa catccgagtt ggctactgct ctcagattcc caagtgtgac    1140

gtgtcaagtg gacaagattg ttatcgtggc aatgggaaaa attacatggg caacttatcc    1200

aaaacaaggt ctggacttac atgttccatg tgggacaaga atatggagga tttacaccgt    1260

catatcttct gggagccaga tgctagcaaa ttgaataaga attactgccg gaatcctgat  1320

gatgatgccc atggaccttg gtgctacacg gggaatcctc ttattccttg ggattattgc  1380

cctatttccc gttgtgaagg agatactaca cctacaattg tcaatttgga ccatcctgta  1440

atatcctgtg ccaaaacaaa acaactgcgg gttgtaaatg ggattccaac acaaacaaca  1500

gtaggatgga tggttagttt gagatacaga aataaacata tctgcggagg atcattgata  1560

aaggagagtt gggttcttac tgcacgacag tgtttccctt ctcgagactt gaaagattat  1620

gaagcttggc ttggaattca tgatgtccac ggaagaggag atgagaaatg caaacaggtt  1680

ctcaatgttt cccagctggt atatggccct gaaggatcag atctggtttt aatgaagctt  1740

gctcgacctg caatcctgga taactttgtc agtacaattg atttacctag ttatggttgt  1800

acaatccctg aaaagaccac ttgcagtatt tacggctggg gctacactgg attgatcaac  1860

gcggatggtt tattacgagt agctcatctg tatattatgg ggaatgagaa atgcagtcag  1920

caccatcaag gcaaggtgac tttgaatgag tctgagttat gtgctggggc tgaaaagatt  1980

ggatcaggac catgtgaggg agattatggt ggcccactca tttgtgaaca acacaaaatg  2040

agaatggttc ttggtgtcat tgttcctggt cgtggatgtg ccatcccaaa tcgtcctggt  2100

atttttgttc gagtagcata ttatgcaaaa tggatacaca aagtaatttt gacatacaag  2160

ttgtgcggcc gccatcacca tcaccatcac taag                              2194

<210>216

<211>675

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的HGF mhm507-585有活性的

<400>216

Pro Leu Leu Lys Ile Lys Thr Lys Lys Val Asn Ser Ala Asp Glu Cys

1               5                   10                  15

Ala Asn Arg Cys Ile Arg Asn Arg Gly Phe Thr Phe Thr Cys Lys Ala

            20                  25                  30

Phe Val Phe Asp Lys Ser Arg Lys Arg Cys Tyr Trp Tyr Pro Phe Asn

        35                  40                  45

Ser Met Ser Ser Gly Val Lys Lys Gly Phe Gly His Glu Phe Asp Leu

    50                  55                  60

Tyr Glu Asn Lys Asp Tyr Ile Arg Asn Cys Ile Ile Gly Lys Gly Gly

65                  70                  75                  80

Ser Tyr Lys Gly Thr Val Ser Ile Thr Lys Ser Gly Ile Lys Cys Gln

                85                  90                  95

Pro Trp Asn Ser Met Ile Pro His Glu His Ser Tyr Arg Gly Lys Asp

            100                 105                 110

Leu Gln Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Arg Gly Glu Glu Gly Gly Pro

        115                 120                 125

Trp Cys Phe Thr Ser Asn Pro Glu Val Arg Tyr Glu Val Cys Asp Ile

    130                 135                 140

Pro Gln Cys Ser Glu Val Glu Cys Met Thr Cys Asn Gly Glu Ser Tyr

145                 150                 155                 160

Arg Gly Pro Met Asp His Thr Glu Ser Gly Lys Thr Cys Gln Arg Trp

                165                 170                 175

Asp Gln Gln Thr Pro His Arg His Lys Phe Leu Pro Glu Arg Tyr Pro

            180                 185                 190

Asp Lys Gly Phe Asp Asp Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Lys Pro

        195                 200                 205

Arg Pro Trp Cys Tyr Thr Leu Asp Pro Asp Thr Pro Trp Glu Tyr Cys

    210                 215                 220

Ala Ile Lys Thr Cys Ala His Ser Ala Val Asn Glu Thr Asp Val Pro

225                 230                 235                 240

Met Glu Thr Thr Glu Cys Ile Gln Gly Gln Gly Glu Gly Tyr Arg Gly

                245                 250                 255

Thr Ser Asn Thr Ile Trp Asn Gly Ile Pro Cys Gln Arg Trp Asp Ser

            260                 265                 270

Gln Tyr Pro His Lys His Asp Ile Thr Pro Glu Asn Phe Lys Cys Lys

        275                 280                 285

Asp Leu Arg Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Ala Glu Ser Pro

    290                 295                 300

Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Ile Arg Val Gly Tyr Cys Ser Gln

305                 310                 315                 320

Ile Pro Lys Cys Asp Val Ser Ser Gly Gln Asp Cys Tyr Arg Gly Asn

                325                 330                 335

Gly Lys Asn Tyr Met Gly Asn Leu Ser Lys Thr Arg Ser Gly Leu Thr

            340                 345                 350

Cys Ser Met Trp Asp Lys Asn Met Glu Asp Leu His Arg His Ile Phe

        355                 360                 365

Trp Glu Pro Asp Ala Ser Lys Leu Asn Lys Asn Tyr Cys Arg Asn Pro

    370                 375                 380

Asp Asp Asp Ala His Gly Pro Trp Cys Tyr Thr Gly Asn Pro Leu Ile

385                 390                 395                 400

Pro Trp Asp Tyr Cys Pro Ile Ser Arg Cys Glu Gly Asp Thr Thr Pro

                405                 410                 415

Thr Ile Val Asn Leu Asp His Pro Val Ile Ser Cys Ala Lys Thr Lys

            420                 425                 430

Gln Leu Arg Val Val Asn Gly Ile Pro Thr Gln Thr Thr Val Gly Trp

        435                 440                 445

Met Val Ser Leu Arg Tyr Arg Asn Lys His Ile Cys Gly Gly Ser Leu

    450                 455                 460

Ile Lys Glu Ser Trp Val Leu Thr Ala Arg Gln Cys Phe Pro Ser Arg

465                 470                 475                 480

Asp Leu Lys Asp Tyr Glu Ala Trp Leu Gly Ile His Asp Val His Gly

                485                 490                 495

Arg Gly Asp Glu Lys Cys Lys Gln Val Leu Asn Val Ser Gln Leu Val

            500                 505                 510

Tyr Gly Pro Glu Gly Ser Asp Leu Val Leu Met Lys Leu Ala Arg Pro

        515                 520                 525

Ala Ile Leu Asp Asn Phe Val Ser Thr Ile Asp Leu Pro Ser Tyr Gly

    530                 535                 540

Cys Thr Ile Pro Glu Lys Thr Thr Cys Ser Ile Tyr Gly Trp Gly Tyr

545                 550                 555                 560

Thr Gly Leu Ile Asn Ala Asp Gly Leu Leu Arg Val Ala His Leu Tyr

                565                 570                 575

Ile Met Gly Asn Glu Lys Cys Ser Gln His His Gln Gly Lys Val Thr

            580                 585                 590

Leu Asn Glu Ser Glu Leu Cys Ala Gly Ala Glu Lys Ile Gly Ser Gly

        595                 600                 605

Pro Cys Glu Gly Asp Tyr Gly Gly Pro Leu Ile Cys Glu Gln His Lys

    610                 615                 620

Met Arg Met Val Leu Gly Val Ile Val Pro Gly Arg Gly Cys Ala Ile

625                 630                 635                 640

Pro Asn Arg Pro Gly Ile Phe Val Arg Val Ala Tyr Tyr Ala Lys Trp

                645                 650                 655

Ile His Lys Val Ile Leu Thr Tyr Lys Leu Cys Gly Arg His His His

            660                 665                 670

His His His

        675

Claims (16)

1.一种结合人肝细胞生长因子(HGF)的分离的结合蛋白质，其包含：

(a)包含结构CDR_H1-CDR_H2-CDR_H3的免疫球蛋白重链可变区，其中

(i)CDR_H1由氨基酸序列SEQ ID NO.15组成，

(ii)CDR_H2由氨基酸序列SEQ ID NO.204或SEQ ID NO.205组成，以及

(iii)CDR_H3由氨基酸序列SEQ ID NO.17组成；以及

(b)包含结构CDR_L1-CDR_L2-CDR_L3的免疫球蛋白轻链可变区，其中

(i)CDR_L1由氨基酸序列SEQ ID NO.18组成，

(ii)CDR_L2由氨基酸序列SEQ ID NO.19或SEQ ID NO.206组成，以及

(iii)CDR_L3由氨基酸序列SEQ ID NO.20组成；

其中所述免疫球蛋白重链可变区和所述免疫球蛋白轻链可变区一起限定了用于结合人HGF的单个结合位点。

2.权利要求1所述的结合蛋白质，其中免疫球蛋白重链可变区包含结构CDR_H1-CDR_H2-CDR_H3，其中

(i)CDR_H1由氨基酸序列SEQ ID NO.15组成，

(ii)CDR_H2由氨基酸序列SEQ ID NO.205组成，以及

(iii)CDR_H3由氨基酸序列SEQ ID NO.17组成；

并且免疫球蛋白轻链可变区包含结构CDR_L1-CDR_L2-CDR_L3，其中

(i)CDR_L1由氨基酸序列SEQ ID NO.18组成，

(ii)CDR_L2由氨基酸序列SEQ ID NO.206组成，以及

(iii)CDR_L3由氨基酸序列SEQ ID NO.20组成。

3.权利要求1或2所述的结合蛋白质，其中所述CDR被插在人或人源化的免疫球蛋白框架区之间。

4.权利要求1或2所述的结合蛋白质，其中所述结合蛋白质为单克隆抗体或其抗原结合片段。

5.权利要求1或2所述的分离的结合蛋白质，其中所述结合蛋白质与人肝细胞生长因子结合的k_d为4.0x10^-5s^-1或更低。

6.权利要求1或2所述的分离的结合蛋白质，其中所述结合蛋白质与人肝细胞生长因子结合的K_D为20pM或更低。

7.权利要求1所述的结合人肝细胞生长因子(HGF)的结合蛋白质，其包含选自如下的免疫球蛋白轻链可变区和免疫球蛋白重链可变区：

(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO.193的免疫球蛋白轻链可变区，和包含氨基酸序列SEQ ID NO.183的免疫球蛋白重链可变区；

(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO.193的免疫球蛋白轻链可变区，和包含氨基酸序列SEQ ID NO.189的免疫球蛋白重链可变区；

(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO.199的免疫球蛋白轻链可变区，和包含氨基酸序列SEQ ID NO.183的免疫球蛋白重链可变区；

(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO.199的免疫球蛋白轻链可变区，和包含氨基酸序列SEQ ID NO.189的免疫球蛋白重链可变区。

8.权利要求7所述的结合蛋白质，其中所述免疫球蛋白轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO.199，和所述免疫球蛋白重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO.189。

9.权利要求1所述的结合人肝细胞生长因子(HGF)的结合蛋白质，其包含选自如下的免疫球蛋白轻链序列和免疫球蛋白重链序列：

(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO.197的免疫球蛋白轻链序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO.187的免疫球蛋白重链序列；

(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO.197的免疫球蛋白轻链序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO.191的免疫球蛋白重链序列；

(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO.201的免疫球蛋白轻链序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO.187的免疫球蛋白重链序列；

(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO.201的免疫球蛋白轻链序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO.191的免疫球蛋白重链序列。

10.权利要求9所述的结合蛋白质，其中所述免疫球蛋白轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO.201，和所述免疫球蛋白重链包含氨基酸序列SEQ ID NO.191。

11.权利要求1、2或7-10中任一项所述的结合蛋白质在制备药物中的用途，所述药物用于抑制或减少哺乳动物中的肿瘤生长。

12.一种分离的核酸，其包含编码权利要求2所述的结合蛋白质的免疫球蛋白轻链可变区的核苷酸序列和编码权利要求2所述的结合蛋白质的免疫球蛋白重链可变区的核苷酸序列。

13.一种表达载体，其包含权利要求12所述的核酸。

14.一种宿主细胞，其包含编码权利要求13所述的表达载体。

15.一种宿主细胞，其包含第一表达载体和第二表达载体，所述第一表达载体包含编码权利要求2所述的结合蛋白质的免疫球蛋白轻链可变区的核苷酸序列，而所述第二表达载体包含编码权利要求2所述的结合蛋白质的免疫球蛋白重链可变区的核苷酸序列。

16.一种制备结合人肝细胞生长因子(HGF)的结合蛋白质的方法，所述结合蛋白质是单克隆抗体，或其抗原结合片段，该方法包括：

(i)在一定条件下培养权利要求14或15所述的宿主细胞，使得该宿主细胞表达包含免疫球蛋白重链可变区的多肽和包含免疫球蛋白轻链可变区的多肽；以及

(ii)纯化抗体或其抗原结合片段。

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