CN101322720B - 一种供静脉注射用的三氧化二砷乳剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种供静脉注射用的含三氧化二砷的稳定的水包油乳剂组合物及其制备方法。本发明使用活性成分三氧化二砷加辅料注射用油、乳化剂、稳定剂及注射用水制成的静脉注射用三氧化二砷乳剂注射液，具有稳定性好、刺激性小、不良反应少，减轻了溶剂对血管的刺激，提高了稳定性，保证临床用药安全，并提高了病人用药的顺应性等优点。

Description

一种供静脉注射用的三氧化二砷乳剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种注射用乳剂，具体涉及一种供静脉注射用的三氧化二砷乳剂及其制备方法

背景技术

三氧化二砷(As₂O₃)俗称砒霜，一味古老的中药，也是一种有毒物质，过去的三氧化二砷既作为毒药致死人命，又被作为治疗药物以毒攻毒治疗很多疾病。近代，砷及其化合物又一直被作为致癌物，作了大量流行病、毒理学及分子生物学研究，且得出了皮肤癌和肺癌直接相关的结论，最近三氧化二砷用于治疗APL取得了显著的疗效，对三氧化二砷与肿瘤的作用的机理进一步研究发现，三氧化二砷治疗肿瘤的作用是通过诱导肿瘤细胞的调亡和可能的分化作用而实现的。多少年来，恶性肿瘤的化学治疗一直停留在细胞毒性药物的研究上，局限于杀死肿瘤细胞的里理念上，诱导分化和调亡治疗是从改变恶性肿瘤的恶性本质方面着手治疗肿瘤。

很多研究表明，三氧化二砷有诱导肿瘤调亡和分化作用，有明显的抗增殖作用。不仅可以治疗APL、CML等血液系统恶性肿瘤也有可能治疗口腔癌、食管癌，胃癌症、结肠癌、鼻咽癌、肺癌、肺腺癌、肝癌、宫径癌、卵巢癌、膀胱癌、神经母细胞瘤、胰腺癌等硬质肿瘤，诸多的体外研究充分证明了这一点。目前SFDA和FDA均已批准其作为治疗APL的抗肿瘤药物生产销售。对三氧化二砷治疗实体肿瘤的研究也正进一步开展深入，已有研究结果显示：三氧化二砷对胃癌、结肠癌、肺癌等一些实体肿瘤细胞有抑制生长和诱导凋亡的作用。(SFDA已于2004年9月批准增加三氧化二砷注射液治疗原发性肝癌晚期的新适应症)

目前临床上所用的剂型为按中国发明专利ZL95108768.1制备的三氧化二砷的注射液，静脉给药后有一些毒副作用，如消化道症状、末梢神经炎、皮肤干燥、色素沉着，甚至肝肾功能损害等。另外由于三氧化二砷在水中溶解度小，其注射液在温度低于16摄氏度，尤其是低于5摄氏度时易析出结晶，影响疗效。因此，开发更适于三氧化二砷临床应用的剂型对于提高疗效、降低毒副作用有很重要的意义。

因此，本领域需要开发一种更安全、更稳定、刺激性小的三氧化二砷制剂。

发明内容

本发明旨在通过提供一种注射用三氧化二砷乳剂及其制备方法的技术方案，提供一种更稳定、更安全、刺激性小的三氧化二砷制剂。同时制备方法也更简便。

所述的注射用三氧化二砷乳剂组合物，pH范围是3~7，其组成为：

三氧化二砷或其酸                         0.01～0.2％(w/v)

注射用乙醇                               适量

注射用油                                 5～30％(w/v)

等渗调节剂                               0～20％(w/v)

乳化剂                                   1.0～20％(w/v)

助乳化剂                                 0～15％(w/v)

稳定剂                                   0％～1.0％(w/v)

注射用水                                 适量

pH调节剂                                 适量

注射用水                                 加至1000ml。

进一步的，所述的注射用三氧化二砷乳剂组合物，pH范围是3~5，其组成为：

三氧化二砷或其酸                         0.01～0.1％(w/v)

注射用乙醇                               适量

注射用油                                 5～20％(w/v)

等渗调节剂                               10～15％(w/v)

乳化剂                                   1.5～15％(w/v)

助乳化剂                                 0～7.5％(w/v)

稳定剂                                   0.005％～0.5％(w/v)

注射用水                                 适量

pH调节剂                                 适量

注射用水                                 加至1000ml。

其中注射用乙醇的适量是指能溶解三氧化二砷或其酸的用量。

其中注射用水的适量是指在制备水相时能溶解乳化剂或乳化剂和其他成分的用量。

其中PH调节剂的适量是指把PH调节到所述的PH范围的用量。

该乳剂的成分为三氧化二砷或其酸和药用辅料，其余为注射用水。药用辅料包括注射用油、乳化剂、助乳化剂、稳定剂、pH调节剂、等渗调节剂。其中三氧化二砷以静脉输液用的用量被加溶到所述注射用油中，所述三氧化二砷和注射用油在水中形成稳定的分散相。

上述组合物中三氧化二砷或其酸以及其他药用辅料的百分比含量，除非特别说明，均指该成分和乳剂的质量体积百分比。

上述组合物中所述的注射用油为植物油(如大豆油、棉子油、红花油、芝麻油、茶油、橄榄油)、动物油(如鱼油)、中链脂肪酸甘油三酯(MCT)、长链脂肪酸甘油三酯(LCT)中的一种或几种的组合。

上述组合物中所述的乳化剂为磷脂，泊洛沙姆、聚乙二醇硬脂酸酯15、合成非离子表面活性剂中的一种或几种的组合。

上述组合物中所述的助乳化剂为油酸。

上述组合物中所述的等渗调节剂可选自甘油、甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖等中的一种或几种的组合。

上述组合物中所述的pH调节剂可选自盐酸、醋酸、醋酸钠、磷酸柠檬酸、柠檬酸钠、苹果酸、酒石酸等中的一种或几种的组合。

上述组合物中所述的稳定剂可选自无水亚硫酸钠、V_C、氮气、二丁基羟基甲苯、EDTA及二钠、α-生育酚(VE)、α-醋酸生育酚、氢醌等中的一种或几种的组合。

注射用三氧化二砷乳剂的制备方法如下：

(1)在配制设备中，将三氧化二砷或其盐溶解于注射用乙醇中；

(2)在配制设备中，将注射用油加入三氧化二砷或其盐乙醇溶液中；

(3)在配制设备中，抽真空将乙醇蒸发至2％以下，得到油相；或者还可以在配制设备中，抽真空将乙醇蒸发至2％以下，加入助乳化剂、稳定剂中的一种或几种地组合得到油相；

(4)在配制设备中制备水相：将乳化剂加入注射用水中，加热搅拌，使之完全溶解；或者还可以将等渗调节剂、稳定剂中的一种或几种的组合加入注射用水中，加热搅拌，使之完全溶解；

(5)在一定的温度条件下，将油相和水相混合，高速搅拌剪切，制备得初乳；

(6)用pH调节剂，调节pH3～7；

(7)过高压均质机，反复匀化，得到均匀的乳剂，过微孔滤膜，灌封，灭菌，即得本品。

本发明的优点：提高了三氧化二砷在注射制剂中的溶解度，并且刺激性小，均为生物相容性辅料；制剂稳定性好。减轻了对血管的刺激性，增加了临床用药的安全，并提高了病人用药的顺应性等优点；制备方法易实现规模化大生产。

附图说明

图1：按实施例10制备得到的三氧化二砷乳剂的粒径分布图横坐标：粒径，单位为纳米(nm)；纵坐标：光强百分比

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行说明。这些实施例仅仅是说明性的，而不以任何方式限制本发明的范围。

实施例1

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.01g加入注射用乙醇10ml溶解后加入卵磷脂1.5g、大豆油5g加热混合均匀，真空蒸发乙醇，至2％以下得油相；取蔗糖10g、EDTA二钠0.005g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率、含量均符合要求(包封率达90％以上，含量达90以上，下面实施例同此要求)。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

实施例2

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.01g加入注射用乙醇10ml溶解后加入卵磷脂5g、大豆油5g加热混合均匀，真空蒸发乙醇，至2％以下，得油相；取葡萄糖10g、甘油5g，EDTA二钠0.005g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率、含量均符合要求。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

实施例3

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.05g加入注射用乙醇10ml溶解后加入卵磷脂5g、大豆油10g加热混合均匀，真空蒸发乙醇，至2％以下，得油相；取甘露醇8g、甘油5g，Vc0.15g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率、含量均符合要求。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

实施例4

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.05g加入注射用乙醇10ml溶解后加入大豆油20g、聚氧乙烯蓖麻油10g加热混合均匀，真空蒸发乙醇，至2％以下，再加入油酸7.5g，混合均匀得油相；取甘油5g、葡萄糖8g、EDTA-2Na0.005g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率、含量均符合要求。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

实施例5

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.1g加入注射用乙醇10ml溶解后加入大豆油20g、卵磷脂5g，抽真空蒸发乙醇至2％以下，加油酸0.5g得到油相，混合均匀得油相；将注射用甘油10g、EDTA-2Na0.005g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率、含量均符合要求。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

实施例6

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.1g加入注射用乙醇10ml溶解后加入大豆油20g，抽真空蒸发乙醇至2％以下，加油酸7.5g得到油相，混合均匀得油相；将泊洛沙姆10g、注射用甘油10g、EDTA-2Na0.005g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率、含量均符合要求。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

实施例7

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.1g加入注射用乙醇10ml溶解后加入大豆油20g，蛋黄卵磷脂5g，抽真空蒸发乙醇至2％以下，加油酸7.5g得到油相，混合均匀得油相；取泊洛沙姆5g、甘油3g、葡萄糖10g、EDTA-2Na0.005g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率、含量均符合要求。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

实施例8

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.1g加入注射用乙醇10ml溶解后加入大豆油20g，蛋黄卵磷脂5g，抽真空蒸发乙醇至2％以下，加油酸7.5g得到油相，混合均匀得油相；取泊洛沙姆5g、甘油3g、葡萄糖10g、α-生育酚0.4g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率、含量均符合要求。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

实施例9

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.1g加入注射用乙醇10ml溶解后加入中链脂肪酸酯20g、蛋黄卵磷脂10g，抽真空蒸发乙醇至2％以下，加油酸7.5g得到油相，混合均匀得油相；取蔗糖15g、EDTA-2Na0.005g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率、含量均符合要求。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

实施例10

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.1g加入注射用乙醇10ml溶解后加入注射用大豆油15g、蛋黄卵磷脂2g，抽真空蒸发乙醇至2％以下，加油酸7.5g得到油相，混合均匀得油相；取蔗糖15g、EDTA-2Na0.005g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率、含量均符合要求。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

实施例11

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.2g加入注射用乙醇10ml溶解后加入注射用大豆油30g、蛋黄卵磷脂2g，抽真空蒸发乙醇至2％以下，加油酸15g得到油相，混合均匀得油相；取蔗糖20g、EDTA-2Na0.005g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率、含量均符合要求。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

实施例12

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.01g加入注射用乙醇10ml溶解后加入卵磷脂1.0g、大豆油5g加热混合均匀，真空蒸发乙醇，至2％以下得油相；取蔗糖10g、Vcl.0g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率含量均符合要求。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

实施例13

在氮气保护下，称取三氧化二砷0.1g加入注射用乙醇10ml溶解后加入注射用大豆油10g、中链脂肪酸甘油三酯5g、蛋黄卵磷脂2g，抽真空蒸发乙醇至2％以下，加油酸7.5g得到油相，混合均匀得油相；取蔗糖15g、二丁基羟基甲苯0.5g加注射用水溶解，混匀作为水相。在高速搅拌下将油相加入水相中制成初乳。测PH值为3~5，加注射用水至100ml，经高压均质机反复均质，测得平均粒径大小均为300nm以下，包封率含量均符合要求。乳液滤过通氮、灌封，旋转式蒸汽灭菌冷却，检查合格后即得。

理化性质考察试验

根据本发明实施例10制得的三氧化二砷注射用乳剂的理化特征：

[性状]：三氧化二砷注射用乳剂为乳白色均匀乳浊液；

[粒径分布]：用5％葡萄糖注射液作为稀释溶剂，稀释500倍后，用激光衍射粒子测定仪[Nicomt-380，美国Particle Sizing Systems(PSS)公司]的样品管中，测定粒径大小，平均粒径为185.1nm，粒径分布见图1。

本发明中其他实施例测定粒径的方法均与实施例10的测定方法相同。

稳定性考察试验

由于三氧化二砷注射液在温度低于16摄氏度，尤其是低于5摄氏度时易析出结晶，而本发明恰好改善了这种状况，所以针对这种情况，对按本发明实施例1、实施例5、实施例9、实施例10制得的三氧化二砷乳剂同按ZL95108768.1制备的药物溶液(简称对比制剂)置光照(45001X)、高温(60℃)、高温(40℃)、低温(10℃)、低温(4℃)进行稳定性考察，实验结果见表1。

表1 三氧化二砷乳剂稳定性考察

项目      时间(天)	外观1      5      9      10      x	含量(％)1     5     9      10     X
			光照      045001X    510	外观1  外观1  外观1  外观1   外观2外观1  外观1  外观1  外观1   外观2外观1  外观1  外观1  外观1   外观2	99.8  99.7  99.8   99.9   99.299.5  99.6  99.2   99.9   99.199.8  95.6  95.8   100.0  99.2

高温     0(60℃)   510	外观1  外观1  外观1  外观1  外观2外观1  外观1  外观1  外观1  外观2外观1  外观1  外观1  外观1  外观2	99.8  99.7  99.8  99.9  99.299.6  99.5  99.6  99.8  99.592.4  99.5  99.8  99.9  99.2
			高温     0(40℃)   510	外观1  外观1  外观1  外观1  外观2外观1  外观1  外观1  外观1  外观2外观1  外观1  外观1  外观1  外观2	99.8  99.7  99.8  99.9  99.799.5  99.8  99.6  99.8  99.699.7  99.7  99.9  99.6  99.8
低温     0(10℃)   510	外观1  外观1  外观1  外观1  外观2外观1  外观1  外观1  外观1  有析出外观1  外观1  外观1  外观1  有析出	99.8  99.7  99.8  99.9  99.599.8  99.6  99.6  99.8  92.499.6  99.8  99.9  99.8  90.2
			低温     0(4℃)    510	外观1  外观1  外观1  外观1  外观2外观1  外观1  外观1  外观1  有析出外观1  外观1  外观1  外观1  有析出	99.8  99.7  99.8  99.9  99.699.4  99.3  99.3  99.8  88.899.5  99.3  99.4  99.8  80.8

附表说明：外观1---白色乳状液体  外观2----无色澄明液体1----本发明实施例1制备所得成品5---本发明实施例5制备所得成品9----本发明实施例9制备所得成品10----本发明实施例10制备所得成品X----按ZL95108768.1制备所得药物

刺激性考察试验

将本发明实施例1、实施例5、实施例9和实施例10制得的三氧化二砷乳剂以及对比溶液(按ZL95108768.1制备的药物溶液)，进行家兔血管刺激实验，试验结果见表2：

表2 三氧化二砷乳剂家兔血管壁刺激实验结果数据表

检查项目	肉眼检查	病理组织学检查
			本发明乳剂(实施例1)	分级为0～1级	分级为1级
本发明乳剂(实施例5)	分级为0～1级	分级为1级
			本发明乳剂(实施例9)	分级为0～1级	分级为1级
本发明乳剂(实施例10)	分级为0～1级	分级为1级
			5％葡萄糖注射	分级为0～1级	分级为1级

液
			对比溶液	分级为1～2级	分级为1～2级

结果表明：本品刺激性小，更安全。

注：1、大体检查分级：

分值                               管壁刺激反应
	0                                  无明显反应1                                  轻度充血2                                  轻-中度充血，肿胀3                                  中-重度充血，肿胀，耳下垂4                                  同3，且轻-中度坏死5                                  同3，且有重度广泛坏死

2、病理组织学分级

分值                                     血管反应
	0 基本无变化1 血管变化限于耳缘静脉，可能坏死或栓塞，一般限于给药耳C-D，A段无变化，也可见中度水肿，纤维素蛋白沉积或出血，但仅限于血管周围。2 变化类似“1”，水肿，纤维素蛋白沉积，出血或炎性浸润，扩展至半只耳壳，A段血管无变化。。3 变化类似“2”，但耳缘静脉以外的静脉也有栓塞和坏死/水肿，纤维素蛋白沉积，出血或炎性浸润扩展至半只耳壳以上，但栓塞和坏死仅限于半只耳壳。4 变化类似“3”，病变扩展至2/3耳壳。5 变化类似“4”，但全耳发生弥漫性变化。

Claims (6)

1.一种供静脉注射用的三氧化二砷乳剂，其特征为：pH值范围为3～7，其组成为：

其中所述的乳化剂为磷脂、聚氧乙烯蓖麻油、泊洛沙姆、聚乙二醇硬脂酸酯15、吐温的一种或几种的组合；所述的助乳化剂为油酸；所述的稳定剂选自无水亚硫酸钠、V_c、氮气、二丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠、α-生育酚、α-醋酸生育酚、氢醌中的一种或几种的组合。

2.根据权利要求1所述的供静脉注射用的三氧化二砷乳剂，其特征为：pH值范围为3～5，其组成为：

其中所述的乳化剂为磷脂、聚氧乙烯蓖麻油、泊洛沙姆、聚乙二醇硬脂酸酯15、吐温的一种或几种的组合；所述的助乳化剂为油酸；所述的稳定剂选自无水亚硫酸钠、V_c、氮气、二丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠、α-生育酚、α-醋酸生育酚、氢醌中的一种或几种的组合。 

3.根据权利要求2所述的供静脉注射用的三氧化二砷乳剂，其特征在于：注射用油选自植物油，中链或长链脂肪酸酯中的一种或几种的组合；

等渗调节剂选自甘油、甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖中的一种或几种的组合；

pH调节剂选自盐酸、醋酸、醋酸钠、磷酸、柠檬酸、柠檬酸钠、苹果酸、酒石酸中的一种或几种的组合。

4.根据权利要求3所述的供静脉注射用的三氧化二砷乳剂，其特征在于：所述的磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂中的一种或两种的组合。

5.根据权利要求4所述的供静脉注射用的三氧化二砷乳剂，其特征在于：pH范围是3～5，其配方为：

6.一种制备如权利要求1所述的供静脉注射用的三氧化二砷乳剂的方法，其制备过程如下：

(1)在配制设备中，将三氧化二砷溶解于注射用乙醇中；

(2)在配制设备中，将注射用油加入三氧化二砷乙醇溶液中；

(3)在配制设备中，抽真空将乙醇蒸发至2％以下，得到油相；或者在配制设备中，抽真空将乙醇蒸发至2％以下，加入助乳化剂、稳定剂中的一种或几种的组合得到油相；

(4)在配制设备中制备水相：将乳化剂加入注射用水中，加热搅拌，使之完全溶解；或者将等渗调节剂、稳定剂中的一种或几种的组合加入注射用水中，加热搅拌，使之完全溶解；

(5)在一定的温度条件下，将油相和水相混合，高速搅拌剪切，制备得初乳；

(6)用pH调节剂，调节pH3～7；

(7)过高压均质机，反复匀化，得到均匀的乳剂，过微孔滤膜，灌封，灭菌，即得。 

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