CN101315382B - 用于检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法 - Google Patents
用于检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101315382B CN101315382B CN 200810116854 CN200810116854A CN101315382B CN 101315382 B CN101315382 B CN 101315382B CN 200810116854 CN200810116854 CN 200810116854 CN 200810116854 A CN200810116854 A CN 200810116854A CN 101315382 B CN101315382 B CN 101315382B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- kanamycin
- pad
- colloidal gold
- sample
- days
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 61
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 37
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 19
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 claims abstract description 62
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 48
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 claims abstract description 40
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical group O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 claims abstract description 40
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 claims abstract description 40
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims abstract description 28
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims abstract description 28
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 27
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims abstract description 9
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims abstract description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 55
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 14
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 11
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 10
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 10
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 8
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 6
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 claims description 6
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 5
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims description 5
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 4
- OOYGSFOGFJDDHP-KMCOLRRFSA-N kanamycin A sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N OOYGSFOGFJDDHP-KMCOLRRFSA-N 0.000 claims description 4
- 229960002064 kanamycin sulfate Drugs 0.000 claims description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 4
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 3
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 claims description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 2
- 229920002535 Polyethylene Glycol 1500 Polymers 0.000 claims description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 2
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 claims description 2
- 238000007667 floating Methods 0.000 claims description 2
- 239000007973 glycine-HCl buffer Substances 0.000 claims description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 claims description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 2
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 claims description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims description 2
- VUYXVWGKCKTUMF-UHFFFAOYSA-N tetratriacontaethylene glycol monomethyl ether Chemical compound COCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO VUYXVWGKCKTUMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 claims 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims 1
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 claims 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 claims 1
- -1 polypropylene Polymers 0.000 claims 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 claims 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 claims 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 abstract description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- SPFYMRJSYKOXGV-UHFFFAOYSA-N Baytril Chemical compound C1CN(CC)CCN1C(C(=C1)F)=CC2=C1C(=O)C(C(O)=O)=CN2C1CC1 SPFYMRJSYKOXGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 3
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 3
- 229940106164 cephalexin Drugs 0.000 description 3
- ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N cephalexin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N 0.000 description 3
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 3
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 3
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 3
- 229960000740 enrofloxacin Drugs 0.000 description 3
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 3
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 3
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 229960000973 sulfadimethoxine Drugs 0.000 description 3
- ZZORFUFYDOWNEF-UHFFFAOYSA-N sulfadimethoxine Chemical compound COC1=NC(OC)=CC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=N1 ZZORFUFYDOWNEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 231100000703 Maximum Residue Limit Toxicity 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 1
- 229940126574 aminoglycoside antibiotic Drugs 0.000 description 1
- 239000002647 aminoglycoside antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002967 competitive immunoassay Methods 0.000 description 1
- 210000003792 cranial nerve Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003640 drug residue Substances 0.000 description 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000000273 veterinary drug Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
一种用于检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条，包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬，在PVC背衬上依次连续粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫与所述硝酸纤维素膜之间有搭接，所述硝酸纤维素膜与所述吸水垫之间有搭接；所述结合垫上包被有抗卡那霉素单克隆抗体-胶体金标记物，所述硝酸纤维素膜上分别包被有卡那霉素-载体蛋白(牛血清白蛋白)偶联物构成的检测线和兔抗鼠IgG构成的质控线。本发明的试纸条，具有特异性强，灵敏度高，检测时间短(10分钟)，可现场操作，检测成本低，操作简便，不需由专业人员操作等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种兽药残留的免疫化学速测技术，特别是涉及一种用于快速检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法。
背景技术
卡那霉素是一种氨基糖苷类抗生素，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有显著的抗菌效果，作为饲料添加剂和治疗疾病的抗生素广泛应用于畜牧业。然而，卡那霉素对人类具有明显的毒害作用，对脑神经、听觉以及肾脏的损害严重。近些年，由于卡那霉素的严重滥用而导致动物源性食品中残留过高，已成为国内外广为关注的食品安全问题之一。许多国家和国际组织均明确规定了食品中该药物残留的最大残留限量(MRL)。例如，欧盟规定，牛奶中的最大残留量为150ug/kg，肌肉、脂肪中的最大残留量为100ug/kg。因此，加强对食品中卡那霉素残留的监测具有十分重要的意义。
目前检测卡那霉素残留常用的方法主要包括：微生物法、色谱法(如高效液相色谱法，HPLC)或色谱-质谱联用技术(如液相色谱-质谱串联法，LC-MS)，酶联免疫吸附法(ELISA)。
微生物检测法操作简单，但其检测周期长且结果误差较大。色谱法或色谱-质谱联用技术灵敏度高，结果可靠，但测定方法繁琐、费时，成本高，操作人员需要经过专业培训，难以普及。ELISA法是利用酶标记物的竞争性免疫检测方法，近年来被广为用作定性或半定量检测的快速筛查方法，虽然在一定程度上缩短了检测时间，但仍然需要专门的仪器(如酶标仪)，操作过程仍较复杂。更为主要的是，以上检测方法均为实验室方法，难于在现场应用，不利于推广使用。
胶体金免疫层析是20世纪80年代发展起来的一项新的免疫分析方式，是应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，利用抗原抗体特异性反应的一种新型免疫检测方法，基于胶体金免疫层析技术可以制备成胶体金免疫层析试纸条。使之操作更简便、更快速，因生产成本和测试成本均很低廉等而得到广大基层用户的青睐。试纸条检测方便，不需大型实验室仪器，因此特别适合于现场使用，日益成为食品安全例行检测控制中不可或缺的手段。
发明内容
本发明的目的在于提供一种特异性强、灵敏度高，操作简便，检测快速、准确并适合现场使用的专门用于检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法，填补目前尚未有卡那霉素残留免疫胶体金检测试纸条的空白。
一种用于检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条，包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬，在PVC背衬上依次连续粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫与所述硝酸纤维素膜之间有搭接，所述硝酸纤维素膜与所述吸水垫之间有搭接；所述结合垫上包被有抗卡那霉素单克隆抗体-胶体金标记物，所述硝酸纤维素膜上分别包被有卡那霉素-载体蛋白(牛血清白蛋白)偶联物构成的检测线和兔抗鼠IgG构成的质控线。
本发明的免疫胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：
1)将卡那霉素与载体蛋白(血蓝蛋白)偶联，合成卡那霉素-载体蛋白偶联物即免疫原；
2)用步骤1)合成的免疫原免疫小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗卡那霉素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；
3)以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用Protein G柱进行纯化，获得抗卡那霉素单克隆抗体IgG；
4)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；
5)将步骤3)制备的抗卡那霉素单克隆抗体加入步骤4)制备的胶体金中，得到抗卡那霉素单克隆抗体-胶体金标记物；
6)将步骤5)制备的抗卡那霉素单克隆抗体-胶体金标记物包被在结合垫上；
7)将卡那霉素与载体蛋白(牛血清白蛋白)偶联，合成卡那霉素-载体蛋白偶联物即包被原；
8)将步骤7)合成的包被原包被在硝酸纤维素膜上构成检测线；并将兔抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜上构成质控线；
9)在PVC背衬上按顺序依次粘附所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，得到所述用于检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条。
本发明的制备方法，所述步骤4)中胶体金的制备采用柠檬酸三钠还原法。制备的胶体金为15～40nm胶体金颗粒。
本发明中的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、PVC背衬均购自Millipore公司。
与现有技术相比，本发明具有下列优点：
1、本发明的检测卡那霉素的免疫胶体金试纸条，具有特异性强，灵敏度高，检测时间短(10分钟)等优点。
2、本发明的检测试纸条不需要任何特殊仪器、设备，可现场操作，检测成本低。
3、本发明的检测试纸条操作简便，不需由专业人员操作。
4、本发明的检测试纸条储存方便，对温度要求不高，在4～8℃下有效保存期可达一年；在室温下可保存六个月。
附图说明
图1是本发明免疫胶体金试纸条的结构示意图；
图2是图1的俯视图；
图3是本发明免疫胶体金试纸条检测结果判定示意图；
图4是实施例3中敏感性试验的结果图。
具体实施方式
为进一步说明本发明，结合以下实施例具体阐述：
实施例1：本发明免疫胶体金试纸条的结构
如图1和图2所示，一种用于检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条，包括样品垫2、结合垫3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5和PVC背衬1，在PVC背衬1上依次连续粘附有样品垫2、结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水垫5，结合垫3与硝酸纤维素膜4之间有搭接，硝酸纤维素膜4与吸水垫5之间有搭接；结合垫3上包被有抗卡那霉素单克隆抗体-胶体金标记物，硝酸纤维素膜4上分别包被有卡那霉素-载体蛋白(牛血清白蛋白)偶联物构成的检测线T和兔抗鼠IgG构成的质控线C。最后切成3mm宽的小条，真空封装。
在使用时，对样品进行一定处理后将之滴入样品垫上即可。样品垫上可制作出专门的加样孔。
本发明选用卡那霉素-载体蛋白偶联物作为检测线，抗卡那霉素特异性单克隆抗体为胶体金标记的抗体，利用竞争法来检测待测样品中是否含有卡那霉素。通过待检样品中的卡那霉素与包被于硝酸纤维膜上的卡那霉素-载体蛋白偶联物共同竞争抗卡那霉素单克隆抗体-胶体金标记物，在检测线处出现颜色深浅不同的红色条带或不出现条带，质控线处出现红色条带。若待测样品试纸条检测线颜色明显浅于阴性样品试纸条检测线颜色，同时质控线上出现红色条带则判断为阳性样品，即待测样品中卡那霉素的浓度在1～10ng/mL范围内；若待测样品试纸条检测线无颜色出现，同时质控线上出现红色条带也判断为阳性样品，即待测样品中卡那霉素的浓度高于10ng/mL；若待测样品试纸条检测线颜色等于或深于阴性样品试纸条检测线颜色，同时质控线上出现红色条带则判断为阴性样品，即卡那霉素的浓度小于1ng/mL；如果质控线上没有红色条带出现，则该试纸条无效(如图3所示)。
实施例2(制备实施例)
检测卡那霉素的免疫胶体金试纸条的制备方法
1、卡那霉素-载体蛋白偶联物的制备
免疫原的合成：称取45mg卡那霉素硫酸盐和10mg血蓝蛋白(KLH)溶于1.5mL PBS，于磁力搅拌器上搅拌。取300mg EDC·HCl溶于1mL PBS中，调pH值至7.4，再逐滴加入到上述混合溶液中，在室温下搅拌1小时，然后于4℃放置3天。用PBS透析3天，每天更换透析液2～3次，过葡聚糖凝胶层析柱(SephadexG-25)进一步提纯，分装，-20℃贮存。
包被原的合成：称取45mg卡那霉素硫酸盐和10mg BSA溶于1.5mL PBS，于磁力搅拌器上搅拌。取300mg EDC·HCl溶于1mL PBS中，再逐滴加入到上述混合溶液中，在室温下搅拌反应3小时。用PBS透析3天，每天更换透析液2～3次，过SephadexG-25柱进一步提纯，分装，-20℃贮存。
2、抗卡那霉素单克隆抗体的制备
利用申请人所制备的卡那霉素-血蓝蛋白(KLH)偶联物免疫8周龄BAL/C小鼠4只(购自军事科学研究院实验动物中心)，免疫程序是取含卡那霉素-血蓝蛋白(KLH)偶联物100μg的溶液与等体积的弗氏完全佐剂(购自Sigma公司)乳化，注射小鼠腹腔，免疫15天后，换用弗氏不完全佐剂乳化(购自Sigma公司)加强免疫，每间隔15天一次，共3次，分别于每次免疫后10天小鼠眼眶后缘静脉采血，测定抗体效价。选血清抗体效价最高的小鼠于融合前4天腹腔强化免疫卡那霉素-血蓝蛋白(KLH)偶联物100μg，不加佐剂。融合时，取经最后强化免疫的BALB/C小鼠，摘除眼球放血处死(收集血清，即为阳性血清)，无菌取出小鼠脾脏，分离出脾细胞，与新鲜制备的SP2/0骨髓瘤细胞按1～2×106个SP2/0与108个免疫细胞的比例于50mL离心管中混匀，2500rpm，离心10min。弃上清，轻轻敲击管底，使细胞沉淀略加松动。将装有细胞混合物的离心管放于37℃水浴中。然后在1min内慢慢滴入预温至37℃的50％聚乙二醇(PEG 1500)1.5mL(购自Pierce公司)，边加边轻轻用吸管尖搅拌，继续搅拌1min。然后慢慢加入37℃预温的DMEM(购自Gibco公司)完全培养基10mL，并不断轻轻地搅拌。最后加入30mL DMEM液，1500rpm离心5min，弃上清，于37℃放置5～8min。用HAT(购自Gibco公司)培养基悬浮，同时也用HAT培养基悬浮制备好的饲养脾细胞并与融合后的细胞混合。分种于4块96孔培养板中，约100μL/孔。于37℃，8％CO2培养箱中培养。融合后第8～10天吸去100μL培养基换HT(购自Gibco公司)培养基100μL。待融合细胞集落长至培养孔1/4，培养基略变黄时，进行抗体检测。采用卡那霉素-牛清白蛋白(BSA)作为筛选抗原，利用ELISA方法筛选出分泌抗卡那霉素的阳性孔。对筛选出来的阳性孔用有限稀释法进行克隆、筛选。最终筛选出分泌抗卡那霉素的单克隆杂交瘤细胞株。
将上述细胞扩大培养后注射BALB/C小鼠腹腔，体内诱生腹水法大量生产单克隆抗体。小鼠腹腔注射弗氏不完全佐剂0.5mL/只，5天后腹腔注射杂交瘤细胞106个/只，再7天后取小鼠腹水。
3、抗卡那霉素单克隆抗体的纯化
用0.1M磷酸缓冲液(pH7.2)平衡Protein G柱，将小鼠腹水样品和磷酸缓冲液按1∶1比例混合后加样，待样品完全通过Protein G柱后用磷酸缓冲液充分淋洗柱上残存的杂蛋白，用0.1M glycine-HCl缓冲液(pH3.0)洗脱抗体IgG，再用PBS缓冲液4℃透析1天。以紫外分光光度法测定纯化后的抗体浓度；经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定所纯化得到的抗卡那霉素单克隆抗体。
4、抗卡那霉素单克隆抗体-胶体金标记物的制备
(1)胶体金的制备：
采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒。用双蒸去离子水将1％氯金酸稀释成0.01％，取0.01％氯金酸水溶液100mL，用恒温微波搅拌加热至95℃，一次性加入1％柠檬酸三钠水溶液2.5mL，继续搅拌加热，直至溶液呈酒红色，室温冷却。制备好的胶体金外观应纯净、透亮、无沉淀和漂浮物。
(2)抗卡那霉素单克隆抗体-胶体金标记物的制备：
取20nm胶体金溶液10mL，用0.1mol/L碳酸钾溶液调pH到8.0。边搅拌边加入卡那霉素单克隆抗体溶液(0.2mg/mL)0.8mL，继续搅拌混匀30min，加入10％BSA至终浓度为1％，静置30min。12000rpm、4℃离心30min，弃上清，沉淀用0.02M pH9.0硼酸盐缓冲液洗涤两次，用1/20初始胶体金体积的0.02M pH9.0的硼酸盐缓冲液将沉淀重悬，置4℃备用。
5、结合垫的包被
将结合垫浸泡于0.01M pH 7.4磷酸缓冲液30min，于37℃烘干。然后用Biodot点膜仪将制备好的抗卡那霉素单克隆抗体-胶体金标记物均匀包被在结合垫上，真空干燥，真空封装，置4℃备用。
6、样品垫的处理
将样品垫浸泡于0.01M pH 7.4磷酸缓冲液50mL(含5mL 10％BSA，2.5mL 10％Tween-20)中30min，于37℃烘干，真空封装，置4℃备用。
7、硝酸纤维素膜的包被
用0.01M pH 7.4PBS缓冲液(含3％的甲醇)将卡那霉素-牛血清白蛋白(BSA)偶联物稀释到0.25mg/mL，用Biodot点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜作为检测线，检测线靠近结合垫端，距结合垫端约5mm；用PBS缓冲液(0.01M pH 7.4，含3％的甲醇)将兔抗鼠IgG抗体稀释到1mg/mL，用Biodot点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜作为质控线，靠近吸水垫，距吸收垫约5mm。检测线与质控线两线距离5～8mm。37℃烘干，封装备用。
8、试纸条的组装
将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫按图1所示的顺序依次粘附在PVC背衬上，切成3mm宽的小条，真空封装。4～8℃保存，有效期一年；常温保存，有效期6个月。
实施例3(应用实施例)
检测卡那霉素的免疫胶体金试纸条的应用评价
1、特异性试验
将卡那霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素、氯霉素、头孢氨苄、磺胺二甲氧嘧啶、恩诺沙星配制成浓度为10ng/mL的样品，将之滴于样品垫上或加样孔上进行试验。试验结果(见表1)表明，卡那霉素样品检测线无颜色出现，同时质控线上出现红色条带，而庆大霉素、新霉素、链霉素、氯霉素、头孢氨苄、磺胺二甲氧嘧啶、恩诺沙星样品试纸条检测线和质控线都出现红色条带，这表明庆大霉素、新霉素、链霉素、氯霉素、头孢氨苄、磺胺二甲氧嘧啶、恩诺沙星与本发明试纸条无交叉反应，显示本发明试纸条具有良好的特异性。
表1本发明试纸条特异性试验结果
注：“+”表示有交叉反应；“-”表示无交叉反应。
2、敏感性试验
用本发明试纸条分别检测浓度为0、1、5、10、50、100ng/mL的卡那霉素标准品，结果见图4。1ng/mL卡那霉素标准品的检测线颜色与0ng/mL卡那霉素标准品的检测线颜色差异极显著，当卡那霉素标准品浓度高于10ng/mL时检测线无颜色出现。因此，本发明检测试纸条灵敏度为1ng/mL，符合欧盟规定的“卡那霉素的残留限量标准”。
3、重复性试验
用卡那霉素标准品配制成1、10、100ng/mL三个不同浓度的样品溶液，阴性样品及待检样品用本发明试纸条进行检测，每个浓度设6个重复，检验其重复性，结果见表2。检测结果完全一致，显色度均一，证明本发明检测试纸条检测结果稳定可靠，具有良好的重复性。
表2本发明试纸条重复性试验结果
注：“+”表示阳性结果；“-”表示阴性结果。
实施例4(应用实施例)
检测卡那霉素的免疫胶体金试纸条的使用方法
1、样品的预处理
①血液：取待检动物血液1-3mL，离心后取透明上清液，若血清有溶血现象，将血清用蒸馏水稀释一倍，待测。
②牛奶：取1-5mL，于4℃、5000r/min离心15min，去除上层脂肪，待测。
③尿样：用尿液直接进行测试，如混浊，先离心取上清液或用蒸馏水稀释一倍。
④组织样品：去5-10g组织样捣碎后，加入20-30mL PBS，80℃孵育30min，然后置于冰浴10min，4℃，5000r/min，离心15min，去除表面的脂肪层，取上清液待测。
⑤饲料：取0.5-2g磨碎的待测饲料加入8-20mL PBS，于80℃孵育30min，然后置于冰浴10min，于4℃、5000r/min离心15min，取上清液待测。
2、检测
阴性样品及待检样品各取100μL加入试纸条加样孔中，10分钟后观察结果。
3、结果判定
若待测样品试纸条检测线颜色明显浅于阴性样品试纸条检测线颜色，同时质控线上出现红色条带则判定为阳性样品，即待测样品中卡那霉素的浓度在1～10ng/mL范围内；若待测样品试纸条检测线无颜色出现，同时质控线上出现红色条带也判定为阳性样品，即待测样品中卡那霉素的浓度高于10ng/mL；若待测样品试纸条检测线颜色等于或深于阴性样品试纸条检测线颜色，同时质控线上出现红色条带则判定为阴性样品；如果质控线上没有红色条带出现，则该试纸条无效。
注：
本说明书中的术语解释：
1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC.HCl)
本发明中涉及的％如无特殊说明外，均指的是重量百分比。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。
Claims (1)
1.一种用于检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)卡那霉素-载体蛋白偶联物的制备：
免疫原的合成：称取45mg卡那霉素硫酸盐和10mg血蓝蛋白溶于1.5mL PBS，于磁力搅拌器上搅拌；取300mg EDC·HCl溶于1mL PBS中，调pH值至7.4，再逐滴加入到上述混合溶液中，在室温下搅拌1小时，然后于4℃放置3天；用PBS透析3天，每天更换透析液2～3次，过葡聚糖凝胶层析柱SephadexG-25进一步提纯，分装，-20℃贮存；
包被原的合成：称取45mg卡那霉素硫酸盐和10mgBSA溶于1.5mL PBS，于磁力搅拌器上搅拌；取300mg EDC·HCl溶于1mL PBS中，再逐滴加入到上述混合溶液中，在室温下搅拌反应3小时；用PBS透析3天，每天更换透析液2～3次，过SephadexG-25柱进一步提纯，分装，-20℃贮存；
(2)抗卡那霉素单克隆抗体的制备：
利用所制备的卡那霉素-血蓝蛋白偶联物免疫8周龄BALB/C小鼠4只，免疫程序是取含卡那霉素-血蓝蛋白偶联物100μg的溶液与等体积的弗氏完全佐剂乳化，注射小鼠腹腔，免疫15天后，换用弗氏不完全佐剂乳化加强免疫，每间隔15天一次，共3次，分别于每次免疫后10天小鼠眼眶后缘静脉采血，测定抗体效价；选血清抗体效价最高的小鼠于融合前4天腹腔强化免疫卡那霉素-血蓝蛋白偶联物100μg，不加佐剂；融合时，取经最后强化免疫的BALB/C小鼠，摘除眼球放血处死，收集血清，即为阳性血清；无菌取出小鼠脾脏，分离出脾细胞，与新鲜制备的SP2/0骨髓瘤细胞按1～2×106个SP2/0与108个免疫细胞的比例于50mL离心管中混匀，2500rpm，离心10min；弃上清，轻轻敲击管底，使细胞沉淀略加松动；将装有细胞混合物的离心管放于37℃水浴中；然后在1min内慢慢滴入预温至37℃的50％聚乙二醇PEG 15001.5mL，边加边轻轻用吸管尖搅拌，继续搅拌1min；然后慢慢加入37℃预温的DMEM完全培养基10mL，并不断轻轻地搅拌；最后加入30mL DMEM液，1500rpm离心5min，弃上清，于37℃放置5～8min；用HAT培养基悬浮，同时也用HAT培养基悬浮制备好的饲养脾细胞并与融合后的细胞混合；分种于4块96孔培养板中，约100μL/孔；于37℃，8％CO2培养箱中培养；融合后第8～10天吸去100μL培养基换HT培养基100μL；待融合细胞集落长至培养孔1/4，培养基略变黄时，进行抗体检测；采用卡那霉素-牛清白蛋白作为筛选抗原，利用ELISA方法筛选出分泌抗卡那霉素的阳性孔；对筛选出来的阳性孔用 有限稀释法进行克隆、筛选；最终筛选出分泌抗卡那霉素的单克隆杂交瘤细胞株；
将上述细胞扩大培养后注射BALB/C小鼠腹腔，体内诱生腹水法大量生产单克隆抗体；小鼠腹腔注射弗氏不完全佐剂0.5mL/只，5天后腹腔注射杂交瘤细胞106个/只，再7天后取小鼠腹水；
(3)抗卡那霉素单克隆抗体的纯化
用pH7.2的0.1M磷酸缓冲液平衡Protein G柱，将小鼠腹水样品和磷酸缓冲液按1∶1比例混合后加样，待样品完全通过Protein G柱后用磷酸缓冲液充分淋洗柱上残存的杂蛋白，用pH3.0的0.1M glycine-HCl缓冲液洗脱抗体IgG，再用PBS缓冲液4℃透析1天；以紫外分光光度法测定纯化后的抗体浓度；经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定所纯化得到的抗卡那霉素单克隆抗体；
(4)抗卡那霉素单克隆抗体-胶体金标记物的制备
胶体金的制备：
采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒：用双蒸去离子水将1％氯金酸稀释成0.01％，取0.01％氯金酸水溶液100mL，用恒温微波搅拌加热至95℃，一次性加入1％柠檬酸三钠水溶液2.5mL，继续搅拌加热，直至溶液呈酒红色，室温冷却；制备好的胶体金外观应纯净、透亮、无沉淀和漂浮物；
抗卡那霉素单克隆抗体-胶体金标记物的制备：
取20nm胶体金溶液10mL，用0.1mol/L碳酸钾溶液调pH到8.0，边搅拌边加入0.2mg/mL卡那霉素单克隆抗体溶液0.8mL，继续搅拌混匀30min，加入10％BSA至终浓度为1％，静置30min；12000rpm、4℃离心30min，弃上清，沉淀用0.02M pH9.0硼酸盐缓冲液洗涤两次，用1/20初始胶体金体积的0.02M pH9.0的硼酸盐缓冲液将沉淀重悬，置4℃备用；
(5)结合垫的包被
将结合垫浸泡于0.01M pH 7.4磷酸缓冲液30min，于37℃烘干；然后用Biodot点膜仪将制备好的抗卡那霉素单克隆抗体-胶体金标记物均匀包被在结合垫上，真空干燥，真空封装，置4℃备用；
(6)样品垫的处理
将样品垫浸泡于包含5mL 10％BSA和2.5mL 10％Tween-20的0.01M pH 7.4磷酸缓冲液50mL中30min，于37℃烘干，真空封装，置4℃备用；
(7)硝酸纤维素膜的包被
用0.01M pH 7.4、含3％的甲醇的PBS缓冲液将卡那霉素-牛血清白蛋白偶联物稀释到0.25mg/mL，用Biodot点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜作为检测线，检测线靠近结合垫端， 距结合垫端约5mm；用0.01M pH 7.4、含3％的甲醇的PBS缓冲液将兔抗鼠IgG抗体稀释到1mg/mL，用Biodot点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜作为质控线，靠近吸水垫，距吸收垫约5mm；检测线与质控线两线距离5～8mm；37℃烘干，封装备用；
(8)试纸条的组装
将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫按图1所示的顺序依次粘附在PVC背衬上，切成3mm宽的小条，真空封装。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200810116854 CN101315382B (zh) | 2008-07-18 | 2008-07-18 | 用于检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200810116854 CN101315382B (zh) | 2008-07-18 | 2008-07-18 | 用于检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101315382A CN101315382A (zh) | 2008-12-03 |
| CN101315382B true CN101315382B (zh) | 2012-12-05 |
Family
ID=40106463
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200810116854 Expired - Fee Related CN101315382B (zh) | 2008-07-18 | 2008-07-18 | 用于检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101315382B (zh) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2488871B1 (en) * | 2009-10-16 | 2017-01-04 | Åmic AB | An assay method involving the use of magnetic particles |
| CN101852800B (zh) * | 2010-05-18 | 2012-11-07 | 同昕生物技术（北京）有限公司 | 半定量检测人全血中他克莫司药物浓度的胶体金试纸条及检测方法 |
| CN102478575A (zh) * | 2010-11-29 | 2012-05-30 | 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 | 一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法 |
| CN102721807A (zh) * | 2011-03-29 | 2012-10-10 | 北京宝瑞源科技孵化有限公司 | 安眠酮检测试剂盒及其制备方法 |
| CN103509068B (zh) * | 2012-06-19 | 2017-07-21 | 北京勤邦生物技术有限公司 | 丁胺卡那霉素半抗原及其制备方法和应用 |
| CN103808932A (zh) * | 2012-11-06 | 2014-05-21 | 江苏维赛科技生物发展有限公司 | 马杜霉素胶体金检测卡 |
| CN103018440B (zh) * | 2012-11-23 | 2015-09-16 | 河南科技学院 | 一种氯羟吡啶胶体金层析检测试纸条或卡 |
| CN104678100B (zh) * | 2013-11-27 | 2017-01-11 | 北京维德维康生物技术有限公司 | 庆大霉素、喹诺酮类二合一金标微孔试纸条 |
| CN104678101B (zh) * | 2013-11-27 | 2017-01-11 | 中国农业大学 | 三聚氰胺、喹诺酮类二合一金标微孔试纸条 |
| CN104678095B (zh) * | 2013-11-27 | 2016-08-31 | 北京维德维康生物技术有限公司 | 卡那霉素、红霉素二合一金标微孔试纸条 |
| CN104678069B (zh) * | 2013-11-27 | 2016-08-10 | 中国农业大学 | 卡那霉素、红霉素、林可霉素三合一金标微孔试纸条 |
| CN103728451B (zh) * | 2014-01-23 | 2015-06-24 | 湖南大学 | 一种检测赭曲霉素a的胶体金免疫试剂盒及其制备方法 |
| JP6397224B2 (ja) | 2014-06-04 | 2018-09-26 | 田中貴金属工業株式会社 | 免疫学的測定試薬におけるプロゾーン現象の解消法 |
| CN104330568A (zh) * | 2014-10-15 | 2015-02-04 | 南京医科大学 | 检测蓝藻毒素的胶体金免疫层析试剂盒 |
| CN104914222A (zh) * | 2015-05-20 | 2015-09-16 | 集美大学 | 检测孔雀石绿的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN104977407A (zh) * | 2015-05-20 | 2015-10-14 | 集美大学 | 检测四环素类药物的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN106770235A (zh) * | 2016-12-03 | 2017-05-31 | 无锡艾科瑞思产品设计与研究有限公司 | 一种卡那霉素检测方法及检测卡 |
| CN107449898B (zh) * | 2017-07-11 | 2022-11-25 | 中检国研(北京)科技有限公司 | 一种卡那霉素残留荧光免疫层析试纸及其制备方法 |
| CN108872611B (zh) * | 2018-05-23 | 2021-04-02 | 浙江安吉赛安芙生物科技有限公司 | 一种胶体金利用标记羊抗鼠二抗后间接连接鼠抗标记的金标免疫层析试纸条的制备方法 |
| CN108709994A (zh) * | 2018-05-29 | 2018-10-26 | 吉林大学 | 一种n-羟乙酰神经氨酸快速检测试纸及检测方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1807601A (zh) * | 2006-01-09 | 2006-07-26 | 华中农业大学 | 检测磺胺嘧啶残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法 |
| CN101017171A (zh) * | 2007-03-12 | 2007-08-15 | 北京望尔康泰生物技术有限公司 | 卡那霉素残留酶联免疫分析试剂盒及其应用 |
-
2008
- 2008-07-18 CN CN 200810116854 patent/CN101315382B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1807601A (zh) * | 2006-01-09 | 2006-07-26 | 华中农业大学 | 检测磺胺嘧啶残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法 |
| CN101017171A (zh) * | 2007-03-12 | 2007-08-15 | 北京望尔康泰生物技术有限公司 | 卡那霉素残留酶联免疫分析试剂盒及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Yong Jin等.Development of immunoassays for the detection of kanamycin in veterinary fields.《Journal of Veterinary Science》.2006,第7卷(第2期),第111-117页. * |
| 赵海锋等.胶体金免疫层析法检测小分子物质.《农药》.2007,第46卷(第7期),第439-446页. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101315382A (zh) | 2008-12-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101315382B (zh) | 用于检测卡那霉素残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法 | |
| CN1653336A (zh) | 肝细胞癌的诊断 | |
| CN112877296B (zh) | 一种抗非那西丁单克隆抗体杂交瘤细胞株ad及其制备方法与应用 | |
| CN102288753A (zh) | 快速检测四环素、金霉素、土霉素与多西环素残留的四联胶体金免疫层析试纸条及其制备方法 | |
| CN101226195A (zh) | 一种检测肿瘤型m2丙酮酸激酶的试剂盒及其制备方法 | |
| US20080254440A1 (en) | Anti-Sars Virus Antibody, Hybridoma Producing the Antibody and Immunoassay Reagent Using the Antibody | |
| CN100396774C (zh) | 检测磺胺类药物残留的免疫胶体金试纸条 | |
| WO2020248316A1 (zh) | 毒黄素半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用 | |
| CN111154000A (zh) | 一种抗西马特罗单克隆抗体及其应用 | |
| CN116675696A (zh) | 一种石房蛤毒素单克隆抗体及其制备方法与应用 | |
| JPS6210070A (ja) | ヒスタミン誘導体、免疫原接合体およびそれに対してレイズされた抗体 | |
| JP4663831B2 (ja) | モノクローナル抗体、細胞株及びｎ１，ｎ１２−ジアセチルスペルミンの測定法 | |
| CN211453649U (zh) | 基于量子点荧光微球的免疫层析试纸条 | |
| CN110468108B (zh) | 分泌人铁蛋白轻链单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用 | |
| JPH021553A (ja) | ヒトｉｖ型コラーゲンのサンドイッチ酵素免疫学的定量法 | |
| CN105838680A (zh) | 一株抗雌三醇特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株NaN-2及其应用 | |
| CN119390842B (zh) | 结合Beclin1的抗体及其应用 | |
| CN114516916B (zh) | 一种抗gpr65的单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株及应用 | |
| CN119371543B (zh) | 抗Beclin1的抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
| CN118530365B (zh) | 特异性检测mmp12蛋白的单克隆抗体及其应用 | |
| CN118834298B (zh) | Chi3l1的抗体、抗体组合物及其应用 | |
| JP4664340B2 (ja) | モノクローナル抗体、細胞株及びｎ１，ｎ１２−ジアセチルスペルミンの測定法 | |
| US20080220538A1 (en) | Novel Cancer Associated Antibodies And Their Use In Cancer Diagnosis | |
| CN110054663B (zh) | Ckap4抗原表位肽、抗原、单克隆抗体及其应用和ckap4检测试纸条 | |
| CN104211807B (zh) | 一种抗两种多肽的单克隆抗体及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20121205 Termination date: 20130718 |