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CN101296944A - 工程改造的抗il-23抗体 - Google Patents

工程改造的抗il-23抗体 Download PDF

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CN101296944A CNA2006800401462A CN200680040146A CN101296944A CN 101296944 A CN101296944 A CN 101296944A CN A2006800401462 A CNA2006800401462 A CN A2006800401462A CN 200680040146 A CN200680040146 A CN 200680040146A CN 101296944 A CN101296944 A CN 101296944A
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B·M·拜尔
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Abstract

提供了针对人IL－23p19的工程改造的抗体，及其例如在炎性、自身免疫和增生性病症治疗中的用途。

Description

工程改造的抗IL-23抗体
发明领域
总的来说，本发明涉及白细胞介素-23p19(IL-23p19)特异性抗体及其用途。更具体而言，本发明涉及识别人IL-23p19并调节其特别是在炎性、自身免疫和增生性病症中的活性的人源化抗体。
发明背景
免疫系统发挥作用以使个体免于传染剂例如细菌、多细胞生物和病毒，以及免于癌症。这个系统包括几种类型的淋巴样和髓样细胞，例如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(DCs)、嗜酸性粒细胞、T细胞、B细胞和嗜中性粒细胞。这些淋巴样和髓样细胞通常产生称为细胞因子的信号传导蛋白。免疫应答包括炎症，即，免疫细胞全身性或在身体的特定部位中积累。响应传染剂或外来物质，免疫细胞分泌细胞因子，所述细胞因子依次调节免疫细胞增殖、发育、分化或迁移。免疫应答可以产生病理性后果，例如，当它涉及过度炎症时，如在自身免疫性病症中(参见，例如，Abbas等人，(编辑)(2000)Cellular and MolecularImmunology，W.B.Saunders Co.，Philadelphia，PA；Oppenheim和Feldmann(编辑)(2001)Cytokine Reference，Academic Press，San Diego，CA；von Andrian和Mackay(2000)New Engl.J.Med.343：1020-1034；Davidson和Diamond(2001)New Engl.J.Med.345：340-350)。
白细胞介素12(IL-12)是由p35和p40亚基组成的异二聚分子。研究已指出IL-12在幼稚T细胞分化成分泌IFNγ的T辅助1型CD4+淋巴细胞中起关键作用。同样已显示IL-12是体内T细胞依赖性免疫和炎症应答所必需的。(参见，例如，Cua等人，(2003)Nature 421：744-748。IL-12受体由IL-12β1和IL-12β2亚基组成。
白细胞介素23(IL-23)是包含2个亚基的异二聚细胞因子：IL-23特有的p19和与IL-12共有的p40。p19亚基与IL-6、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、和IL-12的p35亚基在结构上相关。IL-23通过与包含IL-23R和IL-12β1的异二聚受体结合介导信号传导，所述IL-12β1与IL-12受体共有。许多早期研究证实p40中的遗传缺陷(p40敲除小鼠；p40KO小鼠)后果比在p35KO小鼠中发现的那些更严重。这些结果中的一些通过IL-23的发现以及p40KO阻止IL-12和IL-23表达的发现最终得到解释(参见，例如，Oppmann等人，(2000)Immunity 13：715-725；Wiekowski等人，(2001)J.Immunol.166：7563-7570；Parham等人，(2002)JImmunol 168：5699-708；Frucht(2002)Sci STKE 2002，E1-E3；Elkins等人，(2002)Infection Immunity 70：1936-1948)。
通过使用p40 KO小鼠的近期研究已显示IL-23和IL-12两者的阻断是关于各种炎性和自身免疫性病症的有效治疗。然而，通过p40阻断IL-12看起来具有各种全身性后果，例如对机会性微生物感染的易感性增加。
在使用抗体作为体内治疗剂中的最主要限制是抗体的免疫原性。因为大多数单克隆抗体衍生自啮齿类动物，所以在人中重复使用导致产生针对治疗抗体的免疫应答。此类免疫应答导致治疗功效最小化和潜在的致命性过敏反应最大化的损失。减少啮齿类动物抗体免疫原性的最初努力涉及其中小鼠可变区与人恒定区融合的嵌合抗体的产生。Liu等人(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：3439-43。然而，用人可变区和小鼠恒定区的杂交体(hybrid)注射的小鼠发展针对人可变区的强烈抗抗体应答，从而暗示整个啮齿类动物Fv区在此种嵌合抗体中的保留可能仍在患者中导致不需要的免疫原性。
一般认为可变结构域的互补性决定区(CDR)环包含抗体分子的结合部位。因此，尝试将啮齿类动物CDR环嫁接到人构架上(即，人源化)以进一步使啮齿类动物序列减到最小。Jones等人(1986)Nature 321：522；Verhoeyen等人(1988)Science 239：1534。然而，CDR环交换仍不能一致地导致具有与来源抗体相同的结合性质的抗体。人源化抗体中构架残基(FR)，牵涉于CDR环支持的残基中的变化也是保持抗原结合亲和力所需的。Kabat等人(1991)J.Immunol.147：1709。尽管许多人源化抗体构建体中CDR嫁接的使用和构架残基保持已得到报道，但难以预测特定序列是否将导致具有所需结合性质和有时生物学性质的抗体。参见，例如，Queen等人(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：10029，Gorman等人(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：4181，和Hodgson(1991)Biotechnology(NY)9：421-5。此外，大多数先前研究使用不同的人序列用于动物轻和重链可变序列，从而使得此类研究的预言性有问题。已使用已知抗体的序列或，更一般地，具有已知X射线结构的抗体，抗体NEW和KOL的那些。参见，例如，Jones等人，同上；Verhoeyen等人，同上；和Gorman等人，同上。关于少数人源化构建体的确切序列信息已得到报道。本发明提供了工程改造的IL-23p19抗体及其治疗炎性、自身免疫和增生性病症的用途。
附图简述
图1A-1C显示了小鼠抗人IL-23p19抗体克隆重链可变结构域序列的比较。指出了关于克隆7G10、6H12、13F11、13B5、7E2、13G1、11C10、1E10、30F11、34E4、5B12、6H4、9C9、11B10、30E1、33D2、20A9、22E9、29D5、21A10、33B12、10H11、19E9、10G8、3D7、39G2、35F12、49A10、34F9和7D7的CDRs，以及CDR共有序列。
图2A-2C显示了小鼠抗人IL-23p19抗体克隆轻链可变结构域序列的比较。指出了关于克隆7G10、6H12、13F11、13B5、7E2、13G1、11C10、1E10、30F11、34E4、5B12、6H4、9C9、11B10、33D2、20A9、22E9、29D5、21A10、33B12、10H11、19E9、10G8、3D7、39G2、35F12、49A10、34F9和7D7的CDRs。没有提供关于克隆30E1的轻链可变结构域序列。提供了关于轻链CDR序列的3个亚家族中每一个的共有序列，在本文中称为轻链亚家族(a)、(b)和(c)。在图2A-2C中从顶端到底部显示了这些序列亚家族。
发明概述
本发明基于IL-23阻断抑制炎性、自身免疫和异常增生的观察。
本发明包含结合人IL-23p19的结合化合物，例如抗体或其片段，包括人源化或嵌合重组抗体，所述结合化合物包含至少1个抗体轻链可变区，或其结合片段，后者具有选自SEQ ID NOs：81-89的至少1个、2个或3个CDRs。在一个实施方案中，本发明的结合化合物包含轻链可变结构域，其包含选自SEQ ID NOs：81-83的至少1个CDRL1和选自SEQ ID NOs：84-86的至少1个CDRL2和选自SEQ ID NOs：87-89的至少1个CDRL3。
在一个实施方案中，结合化合物包含至少1个抗体重链可变区，或其结合片段，后者具有选自SEQ ID NOs：78-80的至少1个、2个或3个CDRs。
在一些实施方案中，结合化合物包含构架区，其中构架区的氨基酸序列是全部或基本上全部人免疫球蛋白氨基酸序列。
在另一个实施方案中，本发明的结合化合物包含具有SEQ ID NOs：81-89的序列或任选地其变体的至少1个、2个或3个轻链CDRs。在一个实施方案中，结合化合物包含具有SEQ ID NOs：78-80的序列或任选地其变体的至少1个、2个或3个重链CDRs。在各种实施方案中，相对于各自SEQ ID Nos的序列，变体包含最高达1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多保守修饰的氨基酸残基。保守氨基酸置换在表1中提供。
在其他实施方案中，结合化合物包含至少1个抗体轻链可变区，或其结合片段，后者具有选自SEQ ID Nos：69-77的至少1个、2个或3个CDRs。在一个实施方案中，本发明的结合化合物包含轻链可变结构域，其包含选自SEQ ID NOs：69-71的至少1个CDRL1和选自SEQ IDNOs：72-74的至少1个CDRL2和选自SEQ ID NOs：75-77的至少1个CDRL3。在一个实施方案中，结合化合物包含至少1个抗体重链可变区，或其结合片段，后者具有选自SEQ ID NOs：66-68的至少1个、2个或3个CDRs。
在其他实施方案中，本发明的结合化合物包含具有SEQ ID NOs：69-77的序列或其变体的至少1个、2个或3个轻链CDRs。在另一个实施方案中，本发明的结合化合物包含轻链可变结构域，其包含选自SEQ ID NOs：69-71或其变体的至少1个CDRL1，和选自SEQ ID NOs：72-74或其变体的至少1个CDRL2，和选自SEQ ID NOs：75-77或其变体的至少1个CDRL3。在一个实施方案中，本发明的结合化合物包含具有SEQ ID NOs：66-68的序列或其变体的至少1个、2个或3个重链CDRs。在各种实施方案中，相对于各自SEQ ID Nos的序列，变体包含最高达1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多保守修饰的氨基酸残基。
在另外一个实施方案中，本发明的结合化合物包含选自SEQ IDNos：2和4的残基43-53、69-75和108-116的至少1个、2个或3个轻链CDRs，以及选自SEQ ID Nos：1和3的残基45-54、69-85和118-123的至少1个、2个或3个重链CDRs。
在一个实施方案中，结合化合物包含具有SEQ ID NO：2或4的残基20-129的序列或其变体的抗体轻链可变结构域。在一个实施方案中，结合化合物包含具有SEQ ID NO：1或3的残基20-134的序列或其变体的抗体重链可变结构域。在各种实施方案中，相对于各自SEQ ID Nos的序列，变体包含最高达1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、15个、20个、30个、40个或50个或更多保守修饰的氨基酸残基。
在一个实施方案中，结合化合物包含抗体轻链，其包含SEQ ID NO：2或4的成熟形式(残基20-233)的序列，或基本上由SEQ ID NO：2或4的成熟形式(残基20-233)的序列组成。在一个实施方案中，结合化合物包含抗体重链，其包含SEQ ID NO：1或3的成熟形式(残基20-464)的序列，或基本上由SEQ ID NO：1或3的成熟形式(残基20-464)的序列组成。
在一个实施方案中，本发明的结合化合物在包含残基82-95、或残基133-140、或两者的表位处与人IL-23p19(SEQ ID NO：29)结合。在另一个实施方案中，IL-23p19结合化合物与表位结合，所述表位包含残基E82、G86、S87、D88、T91、G92、E93、P94、S95、H106、P133、S134、Q135、P136、W137、R139和L140，以及任选地残基K83、F90和L110中的一些或全部。在各种实施方案中，关于目的抗体的表位通过下述方法确定：获得抗体：抗原复合物的X射线晶体结构，并且确定IL-23p19上的哪个残基位于目的抗体上残基的指定距离内，其中指定距离是例如
Figure A20068004014600101
或
Figure A20068004014600102
在一些实施方案中，表位被定义为沿着IL-23p19序列的一段8个或更多邻接氨基酸残基，其中残基的至少50％、70％或85％位于抗体的指定距离内。
在其他实施方案中，本发明提供了结合化合物，所述结合化合物与人IL-23结合，并且具有轻链可变结构域(VL)，后者与SEQ ID NO：2或4的残基20-129具有至少95％、90％、85％、80％、75％或50％的序列同源性。在一个实施方案中，本发明提供了结合化合物，所述结合化合物与人IL-23结合，并且具有重链可变结构域(VH)，后者与SEQID NO：1或3的残基20-134具有至少95％、90％、85％、80％、75％或50％的序列同源性。
在一个实施方案中，结合化合物包含具有轻链的抗体，或基本上由具有轻链的抗体组成，所述轻链具有SEQ ID NO：2或4的成熟形式(即残基20-233)的序列。在一个实施方案中，结合化合物包含具有重链的抗体，或基本上由具有重链的抗体组成，所述重链具有SEQ ID NO：1或3的成熟形式(即残基20-464)的序列。
在一个实施方案中，本发明涉及在交叉阻断测定(cross-blockingassay)中能够阻断本发明的结合化合物与人IL-23的结合的抗体。在另一个实施方案中，本发明涉及能够阻断IL-23介导的活性的结合化合物，此类活性包括但不限于，与其受体结合或促进TH17细胞的增殖或存活。
在一些实施方案中，本发明的结合化合物进一步包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含γ1、γ2、γ3或γ4人重链恒定区或其变体。在各种实施方案中，轻链恒定区包含λ或κ人轻链恒定区。
在各种实施方案中，本发明的结合化合物是多克隆、单克隆、嵌合、人源化或全人抗体或其片段。本发明还预期结合片段是选自Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv、F(ab’)2和双抗体的抗体片段。
本发明包含抑制人受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括以有效阻断IL-23的生物学活性的量给有此需要的受试者施用对IL-23特异的抗体(或其结合片段)。在一些实施方案中，对IL-23特异的抗体是人源化或嵌合抗体。在进一步的实施方案中，免疫应答是炎症应答，包括关节炎、牛皮癣和炎性肠病。在其他实施方案中，免疫应答是自身免疫应答，包括多发性硬化、葡萄膜炎、全身性红斑狼疮和糖尿病。在另一个实施方案中，免疫应答是对于癌症的。
本发明还预期施用另外的免疫抑制剂或抗炎剂。本发明的结合化合物可以在组合物中，所述组合物包含与药学上可接受的载体或稀释剂组合的结合化合物，或其结合片段。在进一步的实施方案中，该组合物进一步包含免疫抑制剂或抗炎剂。
本发明包含编码本发明结合化合物的抗体实施方案的多肽序列的分离的核酸。核酸可以在表达载体中与控制序列可操作地连接，所述控制序列由用载体转染的宿主细胞识别。还包含的是包含载体的宿主细胞，和生产多肽的方法，所述方法包括在其中核酸序列表达的条件下培养宿主细胞，从而生产多肽，和从宿主细胞或培养基中回收多肽。
在各种实施方案中，本发明涉及包含本发明的结合化合物的药物。
详述
如本文包括附加权利要求所使用的，除非上下文另有明确说明，单词的单数形式例如“一个(a)”、“一种(an)”和“该(the)”包括其相应的复数参考。下表7提供了在本申请中使用的序列标识符列表。本文引用的所有参考文献都引入作为参考，其程度与每个单个出版物、专利申请或专利特别并个别指出引入作为参考相同。
I.定义
除非上下文另有或明确说明，“激活”、“刺激”和“处理”当应用于细胞或受体时，可以具有相同含义，例如，用配体激活、刺激或处理细胞或受体。“配体”包含天然和合成配体，例如，细胞因子、细胞因子变体、类似物、突变蛋白质和衍生自抗体的结合组合物。“配体”还包含小分子，例如，细胞因子的肽模拟物(peptide mimetics)和抗体的肽模拟物。“激活”可以指如由内部机制以及由外部或环境因素调节的细胞激活。例如，细胞、组织、器官或生物的“应答”包含生物化学或生理学行为中的变化，例如，在生物区室内的浓度、密度、附着或迁移，基因表达率，或分化状态，其中所述变化与激活、刺激或处理相关，或与内部基质例如遗传编程相关。
分子的“活性”可以描述或指分子与配体或受体的结合，催化活性；刺激基因表达或细胞信号传导、分化或成熟的能力；抗原活性，其他分子活性的调节等。分子的“活性”还可以指调节或维持细胞与细胞相互作用例如附着中的活性，或维持细胞结构例如细胞膜或细胞骨架中的活性。“活性”还可以指比活性，例如，[催化活性]/[mg蛋白质]、或[免疫活性]/[mg蛋白质]、生物区室中的浓度等。“增殖活性”包含促进例如正常细胞分裂以及癌症、肿瘤、发育异常、细胞转化、转移或血管发生，为例如正常细胞分裂以及癌症、肿瘤、发育异常、细胞转化、转移或血管发生所必需的，或与例如正常细胞分裂以及癌症、肿瘤、发育异常、细胞转化、转移或血管发生特异性相关的活性。
“施用”和“处理”当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物学流体时，指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物学流体的接触。“施用”和“处理”可以指例如治疗、药物代谢动力学、诊断、研究和实验方法。细胞的处理包含试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中所述流体与细胞接触。“施用”和“处理”还意指通过试剂、诊断、结合组合物或通过另一种细胞体外和先体外后体内处理例如细胞。“处理”当应用于人、兽医学或研究受试者时，指治疗处理、预防或预防性(preventative)措施，研究和诊断应用。“处理”当应用于人、兽医学或研究受试者，或细胞、组织或器官时，包含IL-23激动剂或IL-23拮抗剂与人或动物受试者、细胞、组织、生理区室或生理学流体的接触。“细胞的处理”还包含其中IL-23激动剂或IL-23拮抗剂例如在流体相或胶体相中接触IL-23受体(IL-23R/IL-12Rβ1异二聚体)的情况，以及其中激动剂或拮抗剂不接触细胞或受体的情况。
如本文所使用的，术语“抗体“指显示所需生物学活性的任何形式的抗体或其片段。因此，它以最广泛的含义使用，并且具体包含单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、和抗体片段，只要它们显示所需生物学活性。
如本文所使用的，术语“IL-23p19结合片段”或“其结合片段”包含这样的抗体片段或衍生物，其仍基本上保留其抑制IL-23p19活性的生物学活性。因此，术语“抗体片段”或IL-23p19结合片段指全长抗体的部分，一般是其抗原结合或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子，例如，sc-Fv；和由抗体片段形成的多特异性抗体。一般地，结合片段或衍生物保留至少10％的其IL-23p19抑制活性。优选地，结合片段或衍生物保留至少25％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％(或更多)的其IL-23p19抑制活性，尽管具有足够亲和力以发挥所需生物学作用的任何结合片段将是有用的。还预期IL-23p19结合片段可以包括基本上不改变其生物学活性的保守氨基酸置换。
如本文所使用的，术语“单克隆抗体”指得自基本上均质抗体群体的抗体，即，构成群体的个别抗体是相同的，除了可以以小量存在的可能天然存在的突变外。单克隆抗体是高特异性的，针对单个抗原表位。相比之下，常规(多克隆)抗体制剂一般包括针对不同表位(或对其特异)的许多抗体。修饰词“单克隆”指如得自抗体的基本上均质群体的抗体特征，并且不应被解释为需要通过任何具体方法生产抗体。例如，依照本发明使用的单克隆抗体可以通过首先由Kohler等人，(1975)Nature256：495描述的杂交瘤方法进行制备，或可以通过重组DNA法(参见，例如，美国专利号4,816,567)进行制备。“单克隆抗体”还可以使用例如Clackson等人，(1991)Nature 352：624-628和Marks等人，(1991)J.Mol.Biol.222：581-597中描述的技术从噬菌体抗体文库中进行分离。
本文的单克隆抗体具体包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中重和/或轻链的部分与衍生自特定物种或属于特定抗体种类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而一条或多条链的其余部分与衍生自另一个物种或属于另一个抗体种类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此种抗体的片段，只要它们显示所需生物学活性(美国专利号4,816,567；和Morrison等人，(1984)Proc.Natl.Acad Sci.USA 81：6851-6855)。
“结构域抗体”是只包含重链可变区或轻链可变区的免疫学功能性免疫球蛋白片段。在一些情况下，2个或更多VH区与肽接头共价连接以制备二价结构域抗体。二价结构域抗体的2个VH区可以靶向相同或不同抗原。
“二价抗体”包含2个抗原结合部位。在一些情况下，2个结合部位具有相同抗原特异性。然而，二价抗体可以是双特异性的(参见下文)。
如本文所使用的，术语“单链Fv”或“scFv”抗体指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单条多肽链中。一般地，Fv多肽进一步包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，这使得sFv能够形成用于抗原结合的所需结构。关于sFv的综述，参见Pluckthun(1994)THE PHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES，第113卷，Rosenburg和Moore编辑Springer-Verlag，New York，第269-315页。
本文的单克隆抗体还包括骆驼源化(camelized)单结构域抗体。参见，例如，Muyldermans等人(2001)Trends Biochem.Sci.26：230；Reichmann等人(1999)J.Immunol.Methods 231：25；WO 94/04678；WO 94/25591；美国专利号6,005,079，所述参考文献在此整体引入作为参考)。在一个实施方案中，本发明提供了包含具有修饰的2个VH结构域从而使得形成单结构域抗体的单结构域抗体。
如本文所使用的，术语“双抗体”指具有2个抗原结合部位的小抗体片段，所述片段包含在相同多肽链中与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)(VH-VL或VL-VH)。通过使用太短而不允许相同链上的2个结构域之间配对的接头，结构域被迫与另一条链的互补结构域配对并且产生2个抗原结合部位。双抗体在例如EP 404,097；WO93/11161；和Holliger等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448中更充分地描述。关于工程改造的抗体变体的综述，一般参见Holliger和Hudson(2005)Nat.Biotechnol.23：1126-1136。
如本文所使用的，术语“人源化抗体”指包含来自非人(例如，鼠)抗体以及人抗体的序列的抗体形式。此种抗体包含衍生自非人免疫球蛋白的最低限度的序列。一般而言，人源化抗体将包含基本上所有至少1个，且一般是2个可变结构域，其中所有或基本上所有高变环对应非人免疫球蛋白的那些，并且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，一般是人免疫球蛋白的那种。当必需区分人源化抗体(例如hum6H12)与亲本啮齿类动物抗体(例如小鼠6H12，或“m6H12”)时，给抗体克隆名称添加前缀“hum”。啮齿类动物抗体的人源化形式一般将包含亲本啮齿类动物抗体相同的CDR序列，尽管可以包括某些氨基酸置换以增加人源化抗体的亲和力或增加人源化抗体的稳定性。
本发明的抗体还包括具有修饰的(或阻断的)Fc区以提供改变的效应子功能的抗体。参见，例如，美国专利号5,624,821；WO2003/086310；WO2005/120571；WO2006/0057702；Presta(2006)Adv.Drug Delivery Rev.58：640-656。此种修饰可以用于增强或抑制免疫系统的各种反应，在诊断和治疗中具有可能有益的作用。Fc区的改变包括氨基酸变化(置换、缺失和插入)、糖基化或去糖基化和添加多个Fc。关于Fc的变化还可以改变治疗抗体中的抗体半衰期，并且较长的半衰期将导致频率较少的给药，与伴随的方便性增加和材料的使用减少。参见Presta(2005)J.Allergy Clin.Immunol.116：731在734-35。
术语“全人抗体”指只包含人免疫球蛋白蛋白质序列的抗体。如果在小鼠、小鼠细胞或衍生自小鼠细胞的杂交瘤中生产，那么全人抗体可以包含鼠碳水化合物链。类似地，“小鼠抗体”指只包含小鼠免疫球蛋白序列的抗体。
如本文所使用的，术语“高变区”指负责抗原结合的抗体氨基酸残基。高变区包含来自“互补性决定区”或“CDR”的氨基酸残基(例如，轻链可变结构域中的残基24-34(CDRL1)、50-56(CDRL2)和89-97(CDRL3)，和重链可变结构域中的残基31-35(CDRH1)、50-65(CDRH2)和95-102(CDRH3)；Kabat等人，(1991)Sequencesof Proteins of Immunological Interest，第5版Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.)和/或来自“高变环”的那些残基(即轻链可变结构域中的残基26-32(L1)、50-52(L2)和91-96(L3)，和重链可变结构域中的26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)；Chothia和Lesk，(1987)J. Mol.Biol.196：901-917)。如本文所使用的，术语“构架”或“FR”残基指除本文定义为CDR残基的高变区残基外的那些可变结构域残基。上文的残基编号涉及Kabat编号系统，并且不必详细对应于所附的序列表中的序列编号。参见表2和3，其中序列编号参考序列表。
“结合化合物”指能够与靶结合的分子、小分子、大分子、多肽、抗体或其片段或类似物、或可溶性受体。“结合化合物”还可以指能够与靶结合的分子复合物，例如非共价复合物，电离分子，和共价或非共价修饰的分子，例如，通过磷酸化、乙酰化、交联、环化或有限切割修饰的。当关于抗体使用时，术语“结合化合物”指抗体及其结合片段。“结合”指结合组合物与靶的结合，其中所述结合导致结合组合物的正常布朗运动减少，在其中结合组合物可以溶解或悬浮于溶液中的情况下。“结合组合物”指与稳定剂、赋形剂、盐、缓冲剂、溶剂或添加剂组合的，能够与靶结合的分子，例如结合化合物。
“保守修饰的变体”或“保守置换”指本领域技术人员已知的并且一般可以制备而不改变所得到的分子的生物学活性的氨基酸置换。本领域技术人员认识到，一般而言，多肽的非必需区中的单个氨基酸置换基本上不改变生物学活性(参见，例如，Watson等人，Molecular Biology of theGene，The Benjamin/Cummings Pub.Co.，第224页(第4版1987))。此种示例性置换优选依照如下表1中所示的那些来进行：
表1
示例性保守氨基酸置换
  原始残基     保守置换
  Ala(A)     Gly；Ser
  Arg(R)     Lys，His
  Asn(N)     Gln；His
  Asp(D)     Glu；Asn
  Cys(C)     Ser；Ala
  Gln(Q)     Asn
  Glu(E)     Asp；Gln
  Gly(G)     Ala
  His(H)     Asn；Gln
  Ile(I)     Leu；Val
  Leu(L)     Ile；Val
  Lys(K)     Arg；His
  Met(M)     Leu；Ile；Tyr
  Phe(F)     Tyr；Met；Leu
  Pro(P)     Ala
  Ser(S)     Thr
  Thr(T)     Ser
  Trp(W)     Tyr；Phe
  Tyr(Y)     Trp；Phe
  Val(V)     Ile；Leu
如说明书和权利要求自始至终所使用的，术语“基本上由......组成”或变形指包括任何所述元件或元件组，并且任选包括具有与所述元件类似或不同性质的其他元件，所述其他元件不相当大地改变指定给药方案、方法或组合物的基本或新性质。作为非限制性例子，基本上由所述氨基酸序列组成的结合化合物还可以包括一种或多种氨基酸，包括一种或多种氨基酸残基的置换，所述一种或多种氨基酸不相当大地影响结合化合物的性质。
“有效量”包含足以改善或预防医学状况的症状或病征的量。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。关于特定患者或兽医学受试者的有效量可以依赖于此种因素而变，如待治疗的状况、患者的总体健康、施用的方法途径和剂量以及副作用严重性(参见，例如，颁发给Netti等人的美国专利号5,888,530)。有效量可以是避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。作用将导致诊断测量或参数改善至少5％、通常至少10％、更通常至少20％、最通常至少30％、优选至少40％、更优选至少50％、最优选至少60％、理想地至少70％、更理想地至少80％、和最理想地至少90％，其中100％被定义为由正常受试者显示的诊断参数(参见，例如，Maynard等人，(1996)A Handbook of SOPs for GoodClinical Practice，Interpharm Press，Boca Raton，FL；Dent(2001)GoodLaboratory and Good Clinical Practice，Urch Publ.，London，UK)。
“外源性”指取决于背景，在生物、细胞或人体外产生的物质。“内源性”指取决于背景，在细胞、生物或人体内产生的物质。
“免疫状况”或“免疫病症”包含，例如，病理炎症、炎性病症、和自身免疫性病症或疾病。“免疫状况”还指感染、持续感染和增生性状况，例如癌症、肿瘤和血管发生，包括对抗经由免疫系统的根除的感染、肿瘤和癌症。“癌性状况”包括例如，癌症、癌细胞、肿瘤、血管发生和癌变前状况例如发育异常。
“炎性病症”意指这样的病症或病理学状况，其中所述病理学整体或部分起因于例如免疫系统的细胞数目中的变化，迁移率中的变化，或激活中的变化。免疫系统的细胞包括例如，T细胞、B细胞、单核细胞或巨噬细胞、抗原呈递细胞(APCs)、树突细胞、小胶质细胞、NK细胞、NKT细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、或与免疫学特异性相关的任何其他细胞，例如细胞因子生产性内皮或上皮细胞。
“IL-17生产细胞”意指不是经典TH1型T细胞或经典TH2型细胞，被称为TH17细胞的T细胞。TH17细胞在Cua和Kastelein(2006)Nat.Immunol.7：557-559；Tato和O’Shea(2006)Nature 441：166-168；Iwakura和Ishigame(2006)J. Clin Invest.116：1218-1222中更详细地讨论，所述参考文献的公开内容在此整体引入作为参考。“IL-17生产细胞”还意指表达美国专利申请公开号2004/0219150的表10B的基因或多肽(例如，促分裂原应答性P蛋白；趋化因子配体2；白细胞介素17(IL-17)；转录因子RAR相关的；和/或细胞因子信号传导3抑制剂)的T细胞，所述专利的公开内容在此整体引入作为参考，其中通过IL-23激动剂处理的表达大于用IL-12激动剂的处理，其中“大于”如下定义。用IL-23激动剂的表达为用IL-12处理的一般至少5倍、一般至少10倍、更一般至少15倍、最一般至少20倍、优选至少25倍、和最优选至少30倍。表达可以例如用基本上纯的IL-17生产细胞群体处理进行测量。
此外，“IL-17生产细胞”包括在细胞发育或细胞分化途径中定型为分化成如上定义的IL-17生产细胞的祖细胞或前体细胞。关于IL-17生产细胞的祖细胞或前体细胞可以在引流(draining)淋巴结(DLN)中找到。此外，“IL-17生产细胞”包含如上定义的IL-17生产细胞，其已例如通过佛波酯、离子载体和/或致癌剂激活，进一步分化，贮存，冷冻，脱水，灭活，例如通过细胞凋亡、蛋白酶解、或脂质氧化部分降解，或例如通过重组技术修饰。
如本文所使用的，术语“分离的核酸分子”指被鉴定并且与至少一种污染核酸分子分开的核酸分子，在抗体核酸的天然来源中它一般与所述污染核酸分子结合。分离的核酸分子不同于其中它在自然界中发现的形式或设置。因此分离的核酸分子区别于当它存在于天然细胞中时的核酸分子。然而，分离的核酸分子包括在一般表达抗体的细胞中包含的核酸分子，其中例如核酸分子在染色体定位中不同于天然细胞的那种。
表达“控制序列”指可操作地连接的编码序列在特定宿主生物中表达所必需的DNA序列。适合于原核生物的控制序列例如包括启动子、任选地操纵基因序列和核糖体结合位点。已知真核细胞利用启动子、多腺苷酸化信号和增强子。
当将核酸置于与另一种核酸序列的功能关系内时，它是“可操作地连接的”。例如，关于前序列或分泌前导序列的DNA与关于多肽的DNA可操作地连接，如果它表达为参与多肽分泌的前蛋白的话；启动子或增强子与编码序列可操作地连接，如果它影响序列的转录的话；或核糖体结合位点与编码序列可操作地连接，如果它被这样放置以促进翻译的话。一般地，“可操作地连接的”意指被连接的DNA序列是邻接的，并且在分泌前导序列的情况下，是邻接的和在阅读相(reading phase)中。然而，增强子不必是邻接的。通过在方便的限制位点上连接来实现相连。如果此种位点不存在，那么依照常规实践使用合成寡核苷酸衔接子或接头。
如本文所使用的，表达“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用，并且所有此种名称都包括后代。因此，单词“转化体”和“转化的细胞”包括原代受试细胞和由其衍生的培养物而不考虑转移数目。还应当理解由于故意或非有意的突变，所有后代在DNA含量方面可能不是精确相同的。包括了具有与最初转化的细胞中筛选的相同的功能或生物学活性的突变体后代。当预期不同名称时，它根据上文将是清楚的。
如本文所使用的，“聚合酶链反应”或“PCR”指其中微量核酸-RNA和/或DNA的特定部分如例如美国专利号4,683,195中所述进行扩增的程序或技术。一般地，来自目的区域末端或超出所述末端的序列信息需要是可获得的，从而使得可以设计寡核苷酸引物；这些引物在序列方面将与待扩增模板的相反链相同或相似。2个引物的5’末端核苷酸可以与扩增材料的末端一致。PCR可以用于扩增特定DNA序列、来自总基因组DNA的特定DNA序列、和由总细胞RNA转录的cDNA、噬菌体或质粒序列等。一般参见Mullis等人(1987)Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.51：263；Erlich，编辑(1989)PCR TECHNOLOGY(StocktonPress，N.Y.)如本文所使用的，PCR被视为用于扩增核酸测试样品的一个但不是唯一的核酸聚合酶反应法的例子，所述方法包括使用已知核酸作为引物和核酸聚合酶以扩增或产生核酸的特定部分。
如本文所使用的，术语“种系序列”指未重排的免疫球蛋白DNA序列的序列。可以使用未重排免疫球蛋白DNA的任何合适来源。
“抑制剂”和“拮抗剂”或“激活剂”和“激动剂”分别指例如用于激活例如配体、受体、辅因子、基因、细胞、组织或器官的抑制或激活分子。例如基因、受体、配体或细胞的调节剂是改变基因、受体、配体或细胞的活性的分子，其中活性在其调节性质方面可以被激活、抑制或改变。调节剂可以单独起作用，或它可以使用辅因子，例如蛋白质、金属离子或小分子。抑制剂是减少、阻断、阻止、延迟激活、灭活、脱敏、或下调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的化合物。激活剂是增加、激活、促进、增强激活、敏化、或上调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的化合物。抑制剂也可以被定义为减少、阻断或灭活组成型活性的组合物。“激动剂”是与靶相互作用以引起或促进靶激活中的增加的化合物。“拮抗剂”是对抗激动剂的作用的化合物。拮抗剂阻止、减少、抑制或中和激动剂的活性。拮抗剂还可以阻止、抑制或减少靶例如靶受体的组成型活性，甚至在不存在经鉴定的激动剂时。
为了检查抑制程度，例如，包含给定例如蛋白质、基因、细胞或生物的样品或测定用潜在的激活或抑制剂处理，并且与不使用试剂的对照样品比较。对照样品，即不用试剂处理，被指定100％的相对活性值。当相对于对照活性值是约90％或更少、一般85％或更少、更一般80％或更少、最一般75％或更少、通常70％或更少、更通常65％或更少、最通常60％或更少、一般55％或更少、通常50％或更少、更通常45％或更少、最通常40％或更少、优选35％或更少、更优选30％或更少、再更优选25％或更少、和最优选小于25％时，达到抑制。当相对于对照活性值是约110％、一般至少120％、更一般至少140％、更一般至少160％、通常至少180％、更通常至少2倍、最通常至少2.5倍、一般至少5倍、更一般至少10倍、优选至少20倍、更优选至少40倍、和最优选高于40倍时，达到激活。
激活或抑制中的终点可以如下进行监控。例如细胞、生理学流体、组织、器官和动物或人受试者的激活、抑制和对处理的应答可以通过终点进行监控。终点可以包含预定量或百分比的例如炎症、致癌性、或细胞脱粒或分泌标记(indicia)，例如细胞因子、有毒氧或蛋白酶的释放。终点可以包含例如预定量的离子流或运输；细胞迁移；细胞粘附；细胞增殖；转移潜力；细胞分化；和表型中的变化，例如，涉及炎症、细胞凋亡、转化、细胞周期或转移的基因表达中的变化(参见，例如，Knight(2000)Ann.Clin.Lab.Sci.30：145-158；Hood和Cheresh(2002)NatureRev.Cancer 2：91-100；Timme等人，(2003)Curr.Drug Targets 4：251-261；Robbins和Itzkowitz(2002)Med.Clin.North Am.86：1467-1495；Grady和Markowitz(2002)Annu.Rev.Genomics Hum.Genet.3：101-128；Bauer等人，(2001)Glia 36：235-243；Stanimirovic和Satoh(2000)Brain Pathol.10：113-126)。
抑制终点一般是对照的75％或更少、优选对照的50％或更少、更优选对照的25％或更少、和最优选对照的10％或更少。一般地，激活终点是对照的至少150％、优选对照的至少2倍、更优选对照的至少4倍、和最优选对照的至少10倍。
“配体”指例如可以充当受体的激动剂或拮抗剂的小分子、肽、多肽和膜相关或膜结合分子、或其复合物。“配体”还包含不是激动剂或拮抗剂，但可以与受体结合的试剂。此外，“配体”包括这样的膜结合配体，其已例如通过化学或重组方法变成可溶形式的膜结合配体。按照惯例，当配体是在第一种细胞上膜结合的时，受体通常存在于第二种细胞上。第二种细胞可以具有与第一种细胞相同或不同的特性。配体或受体可以完全是细胞内的，即，它可以位于胞质、核或一些其他细胞内区室中。配体或受体可以改变其定位，例如从细胞内区室至质膜的外表面。配体和受体的复合物被称为“配体受体复合物”。当配体和受体涉及信号传导途径时，配体存在于信号传导途径的上游位置处而受体存在于下游位置处。
提供“小分子”用于毛囊的生理学和病症处理。“小分子”被定义为具有小于10kD、一般小于2kD、和优选小于1kD的分子量的分子。小分子包括但不限于，无机分子、有机分子、包含无机组分的有机分子、包含放射性原子的分子、合成分子、肽模拟物和抗体模拟物(antibodymimetics)。作为治疗剂，小分子可以比大分子对细胞更可透过、对降解更不易感、和更不易于引发免疫应答。小分子，例如抗体和细胞因子的肽模拟物，以及小分子毒素得到了描述(参见，例如，Casset等人，(2003)Biochem.Biophys.Res.Commun.307：198-205；Muyldermans(2001)J.Biotechnol.74：277-302；Li(2000)Nat.Biotechnol.18：1251-1256；Apostolopoulos等人，(2002)Curr.Med.Chem.9：411-420；Monfardini等人，(2002)Curr.Pharm.Des.8：2185-2199；Domingues等人，(1999)Nat.Struct.Biol.6：652-656；Sato和Sone(2003)Biochem.J.371：603-608；颁发给Stewart等人的美国专利号6,326,482)。
“特异性地”或“选择性地”结合当涉及配体/受体、抗体/抗原、或其他结合对时，指作为蛋白质和其他生物产品的异质群体中蛋白质存在的决定因素的结合反应。因此，在指定条件下，指定配体与特定受体结合并且不以显著量与样品中存在的其他蛋白质结合。
预期方法的抗体、或衍生自抗体的抗原结合部位的结合组合物与其抗原结合，其亲和力为无关抗原的亲和力的至少2倍、优选至少10倍、更优选至少20倍、和最优选至少100倍。在优选实施方案中，抗体将具有大于约109升/摩尔的亲和力，如例如通过Scatchard分析(Munsen等人，(1980)Analyt.Biochem.107：220-239)测定的。
如本文所使用的，术语“免疫调谐剂”指抑制或调节免疫应答的天然或合成试剂。免疫应答可以是体液或细胞应答。免疫调谐剂包含免疫抑制剂或抗炎剂。
如本文所使用的，“免疫抑制剂(immunosuppressive agent)”、“免疫抑制药物”或“免疫抑制剂(immunosuppressant)”是在免疫抑制治疗中用于抑制或阻止免疫系统活性的治疗剂。在临床上它们用于阻止移植的器官和组织(例如，骨髓、心脏、肾、肝)排斥，和/或自身免疫性疾病或最可能是自身免疫起源的疾病(例如类风湿性关节炎、重症肌无力、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、多发性硬化)治疗中。免疫抑制药物可以分类为4个组：糖皮质激素类细胞抑制剂；抗体(包括生物应答调节剂(Biological Response Modifiers)或DMARDs)；作用于亲免素的药物；其他药物，包括在增生性病症治疗中使用的已知化学治疗剂。特别地，对于多发性硬化，本发明的抗体可以与称为copaxones的新类型髓鞘结合蛋白样治疗剂结合施用。
“抗炎剂”或“消炎药”用于表示类固醇或非类固醇类治疗剂。类固醇也称为皮质类固醇是紧密类似皮质醇的药物，所述皮质醇是由肾上腺天然生产的激素。类固醇用作关于某些炎性状况的主要治疗，例如：系统性脉管炎(血管炎症)；和肌炎(肌肉炎症)。类固醇还可以选择性用于治疗炎性状况例如：类风湿性关节炎(在身体两侧上的关节中发生的慢性炎症性关节炎)；全身性红斑狼疮(由异常免疫系统功能引起的泛发性疾病)；
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氏综合征(引起眼睛干涩和口干的慢性病症)。
非类固醇消炎药，通常缩写为NSAIDs，是具有止痛、退热和抗炎作用的药物-它们减少疼痛、发热和炎症。术语“非类固醇”用于区别这些药物与类固醇，所述药物(在广泛范围的其他作用中)具有类似的类二十烷酸抑制、抗炎作用。NSAIDs一般指示用于下列状况的症状缓解：类风湿性关节炎；骨关节炎；炎性关节病(例如强直性脊柱炎、牛皮癣性关节炎、Reiter氏综合征)；急性痛风；痛经；转移性骨痛；头痛和偏头痛；手术后疼痛；由于炎症和组织损伤的轻度至中等疼痛；发热；和肾绞痛。NSAIDs包括水杨酸盐、芳基链烷酸(arlyalknoic acids)、2-芳基丙酸(profens)、N-芳基邻氨基苯甲酸(灭酸)、昔康类(oxicams)、昔布类(coxibs)和N-磺酰苯胺(sulphonanilides)。
II.概要
本发明提供了工程改造的抗IL-23抗体，及其治疗炎性、自身免疫和增生性病症的用途。
许多细胞因子在神经学病症的病理学或修复中具有作用。IL-6、IL-17、干扰素γ(IFNγ)、和粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)已与多发性硬化相关(Matusevicius等人，(1999)Multiple Sclerosis 5：101-104；Lock等人，(2002)Nature Med.8：500-508)。IL-1α、IL-1β和转化生长因子β1(TGF-β1)在ALS、帕金森氏病和阿尔茨海默氏病中起作用(Hoozemans等人，(2001)Exp.Gerontol.36：559-570；Griffin和Mrak(2002)J.Leukocyte Biol.72：233-238；Ilzecka等人，(2002)Cytokine20：239-243)。TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、干扰素γ(IFNγ)和IL-17看起来调节针对脑缺血的应答(参见，例如，Kostulas等人，(1999)Stroke 30：2174-2179；Li等人，(2001)J.Neuroimmunol.116：5-14)。血管内皮生长因子(VEGF)与ALS相关(Cleveland和Rothstein(2001)Nature 2：806-819)。
炎性肠病症例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻和过敏性肠综合征，由免疫系统的细胞和细胞因子介导。例如，克罗恩氏病与增加的IL-12和IFNγ相关，而溃疡性结肠炎与增加的IL-5、IL-13和转化生长因子β(TGFβ)相关。IL-17表达还可以在克罗恩氏病和溃疡性结肠炎中增加(参见，例如，Podolsky(2002)New Engl.J.Med.347：417-429；Bouma和Strober(2003)Nat.Rev.Immunol.3：521-533；Bhan等人，(1999)Immunol.Rev.169：195-207；Hanauer(1996)New Engl.J.Med.334：841-848；Green(2003)The Lancet 362：383-391；McManus(2003)New Engl.J.Med. 348：2573-2574；Horwitz和Fisher(2001)New Engl.J. Med.344：1846-1850；Andoh等人，(2002)Int.J. Mol.Med.10：631-634；Nielsen等人，(2003)Scand.J.Gastroenterol.38：180-185；Fujino等人，(2003)Gut 52：65-70)。
皮肤、关节、CNS的炎性疾病以及增生性病症引发类似的免疫应答，因此IL-23阻断应提供这些免疫介导的炎性病症的抑制，而不构成宿主对抗全身性感染的能力。拮抗IL-23应减轻与炎性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、牛皮癣和特应性皮炎相关的炎症。IL-23抑制剂的使用还将提供增生性病症例如癌症，和自身免疫性病症例如多发性硬化、I型糖尿病和SLE的抑制。IL-23在这些各种病症中的描述可以在下述公开的PCT申请中找到：WO04/081190；WO 04/071517；WO 00/53631；和WO 01/18051，所有所述专利都引入本文作为参考。
IL-23的p19亚基是造血细胞因子的‘长链’家族成员(Oppmann等人(2000)同上)，并且包含称为A、B、C和D的4个填充的(packed)α螺旋，具有上-上-下-下拓扑结构。4个螺旋通过3个多肽环进行连接。A-B和C-D环被制作得相对长，因为它们连接平行螺旋。短B-C环连接反向平行的B和C螺旋。IL-23的p19亚基是螺旋状细胞因子的IL-6家族成员。这个细胞因子家族通过3个保守表位(部位I、II和III；Bravo和Heath(2000)EMBO J.19：2399-2411)与其同族受体结合。p19亚基与3个细胞因子受体亚基相互作用以形成感受态信号传导复合物。当在细胞中表达时，p19亚基首先与p40亚基形成复合物，它与IL-12共有所述p40亚基。如上所述，p19p40复合物作为异二聚蛋白质从细胞中分泌，并且称为IL-23(参见，例如，Oppmann等人，同上)。转导IL-23信号所需的细胞受体复合物由IL-6/IL-12细胞因子家族的tall信号传导受体亚基的2个成员组成：IL-23特异性IL-23R(参见，例如Parham等人，同上)和与IL-12共有的IL-12Rb1。
对‘长链’细胞因子/受体识别的结构基础的了解已显示，尽管大面积的蛋白质表面被隐藏在细胞因子-受体复合物的构造中，但相互作用的亲和力受少数、通常紧密聚簇的氨基酸残基控制，所述氨基酸残基在结合界面的中心内形成能量‘热点’。支配大蛋白质-蛋白质界面的结合能的残基身份已称为‘功能表位’。相互作用的亲和力(和因此的生物学特异性)因而由配体和受体的功能表位的结构互补性限定。详细的诱变研究已显示构成细胞因子和受体的功能表位的最重要残基是疏水性接触，其涉及非极性侧链例如色氨酸、非极性侧链的脂族组分或多肽主链。非极性‘核心’由对结合能较不重要的极性残基环(halo)围绕。动力学研究指出功能表位的主要作用是通过减少复合物的解离速率来稳定蛋白质-蛋白质相互作用。已建议细胞因子和受体之间的初始接触受随机扩散或蛋白质表面‘滚动’控制，产生许多不稳定的接触。当受体和配体的功能表位连接时，复合物随后被稳定化(参见，例如Bravo和Heath，同上)。
III.IL-23特异性抗体的产生
可以使用用于产生单克隆抗体的任何合适的方法。例如，可以用连接或未连接(例如，天然存在的)形式的IL-23异二聚体，或其片段免疫受体。可以使用任何合适的免疫接种方法。此种方法可以包括佐剂、其他免疫刺激剂、重复加强免疫接种、和一种或多种免疫接种途径的使用。
任何合适的IL-23来源都可以用作免疫原用于产生对p19亚基特异的非人抗体，本文公开的组合物和方法。此种形式包括但不限于，全蛋白，包括通过本领域已知的重组、合成、化学或酶促降解方法产生的连接和天然存在的异二聚体、一种或多种肽和表位。
足以产生生物学活性抗体的任何形式的抗原都可以用于产生抗体。因此，引发抗原可以是单个表位、单个表位、或单独或与本领域已知的一种或多种免疫原性增强剂组合的整个蛋白质。引发抗原可以是分离的全长蛋白质、细胞表面蛋白(例如，用由至少部分抗原转染的细胞免疫)、或可溶蛋白(例如，只用蛋白质的细胞外结构域部分免疫)。抗原可以在基因修饰细胞中产生。编码抗原的DNA可以是基因组或非基因组的(例如cDNA)，且编码至少部分细胞外结构域。如本文所使用的，术语“部分”指适当地最小数目的氨基酸或核酸，以构成目的抗原的免疫原性表位。可以使用适合于转化目的细胞的任何遗传载体，包括但不限于，腺病毒载体、质粒、和非病毒载体例如阳离子脂质。
任何合适的方法都可以用于引发具有抑制IL-23的所需生物学性质的抗体。需要由各种哺乳动物宿主例如小鼠、啮齿类动物、灵长类动物、人等制备单克隆抗体(mAbs)。用于制备此种单克隆抗体的技术描述可以在例如下述参考文献中找到：例如，Stites等人，(编辑)BASIC ANDCLINICAL IMMUNOLOGY(第4版)Lange Medical Publications，Los Altos，CA，以及其中引用的参考文献；Harlow和Lane(1988)ANTIBODIES：ALABORATORY MANUAL CSH Press；Goding(1986)MONOCLONALANTIBODIES：PRINCIPLES AND PRACTICE(2d ed.)Academic Press，NewYork，NY。因此，单克隆抗体可以通过本领域技术人员熟悉的多种技术来获得。一般地，来自用所需抗原免疫的动物的脾细胞通常通过与骨髓瘤细胞融合进行无限增殖化。参见Kohler和Milstein(1976)Eur.J.Immunol.6：511-519。无限增殖化的可替代方法包括用EB病毒、癌基因或逆转录病毒、或本领域已知的其他方法转化。参见，例如，Doyle，等人(编辑，1994和周期增刊)CELL AND TISSUE CULTURE：LABORATORYPROCEDURES，John Wiley and Sons，New York，NY。就具有对抗原的所需特异性和亲和力的抗体生产筛选起于单一无限增殖化细胞的集落，并且通过此种细胞生产的单克隆抗体得率可以通过各种技术得到增强，包括注射入脊椎动物宿主的腹膜腔内。可替代地，根据例如由Huse等人，(1989)Science 246：1275-1281概述的一般规程，通过筛选来自人B细胞的DNA文库可以分离编码单克隆抗体或其结合片段的DNA序列。
其他合适的技术涉及在噬菌体或相似载体中选择抗体文库。参见，例如，Huse等人，Science 246：1275-1281(1989)；和Ward等人，Nature341：544-546(1989)。本发明的多肽和抗体可以连同或不连同修饰使用，包括嵌合或人源化抗体。经常地，多肽和抗体将通过与提供可检测信号的物质共价或非共价连接进行标记。广泛多样的标记和缀合技术是已知的，并且在科学和专利文献中广泛报道。合适的标记包括放射性核素、酶、底物、辅因子、抑制剂、荧光部分、化学发光部分、磁性颗粒等。教导此种标记使用的专利包括美国专利号3,817,837；3,850,752；3,939,350；3,996,345；4,277,437；4,275,149；和4,366,241。同样，可以生产重组免疫球蛋白，参见，Cabilly美国专利号4,816,567；和Queen等人(1989)Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 86：10029-10033；或可以在转基因小鼠中制备，参见Mendez等人(1997)Nature Genetics 15：146-156；还参见Abgenix和Medarex技术。
针对IL-23的预定片段的抗体或结合组合物可以通过用多肽、片段、肽或表位与载体蛋白质的缀合物免疫接种动物来产生。单克隆抗体由分泌所需抗体的细胞制备。可以就与正常或缺陷型IL-23的结合筛选这些抗体。通常通过ELISA测定的，这些单克隆抗体通常将以至少约1μM的Kd结合、更通常至少约300nM、一般至少约30nM、优选至少约10nM、更优选至少约3nM或更佳。合适的非人抗体还可以使用下文实施例5中描述的生物学测定进行鉴定。
IV.IL-23特异性抗体的人源化
任何合适的非人抗体都可以用作关于高变区的来源。关于非人抗体的来源包括但不限于，鼠、兔类动物(Lagomorphs)(包括兔)、牛和灵长类动物。在极大程度上，人源化抗体是这样的人免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体的高变区残基被来自具有所需特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)的高变区残基替换，所述非人物种例如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv构架区(FR)残基被相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可以包含在受体抗体或供体抗体中未找到的残基。制备这些修饰以进一步改善所需生物学活性的抗体表现。关于进一步的细节，参见Jones等人(1986)Nature321：522-525；Reichmann等人(1988)Nature 332：323-329；和Presta(1992)Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596。
关于重组改造抗体的方法已例如由Boss等人(美国专利号4,816,397)，Cabilly等人(美国专利号4,816,567)，Law等人(欧洲专利申请公开号438 310)和Winter(欧洲专利申请公开号239400)描述。
人源化抗IL-23抗体的氨基酸序列变体通过将合适的核苷酸变化引入人源化抗IL-23抗体DNA内或通过肽合成来制备。此种变体包括，例如，来自对于人源化抗IL-23F(ab)显示的氨基酸序列(例如，如SEQID Nos：1和2中)内的残基的缺失、和/或插入到所述残基内和/或所述残基的置换。制备缺失、插入和置换的任何组合以获得最终构建体，前提是所述最终构建体具有所需特征。氨基酸变化还可以改变人源化抗IL-23抗体的翻译后加工，例如改变糖基化位点的数目或位置。
用于鉴定作为用于诱变的优选位置的人源化抗IL-23p19抗体多肽的某些残基或区域的有用方法被称为“丙氨酸分区诱变”，如由Cunningham和Wells(1989)Science 244：1081-1085描述的。此处，残基或靶残基组被鉴定(例如，带电残基例如Arg、Asp、His、Lys和Glu)并且被中性或带负电的氨基酸(最优选丙氨酸或聚丙氨酸)替换，以影响氨基酸与IL-23抗原的相互作用。显示对置换的功能敏感性的氨基酸残基随后通过在置换位点处或对于置换位点引入进一步或其他变体进行改善。因此，尽管用于引入氨基酸序列变异的位点是预定的，但突变自身的性质无需是预定的。例如，为了分析给定位点处的突变表现，在靶密码子或区域处进行Ala分区或随机诱变，并且就所需活性筛选表达的人源化抗IL-23p19抗体变体。
氨基酸序列插入包括长度为1个残基至包含100个或更多残基的多肽的氨基和/或羧基末端融合物，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有N末端甲硫氨酰残基的人源化抗IL-23抗体或与附加表位融合的抗体。人源化抗IL-23抗体分子的其他插入变体包括酶或多肽与人源化抗IL-23抗体的N或C末端的融合物，所述多肽增加抗体的血清半衰期。
另一种类型的变体是氨基酸置换变体。这些变体在人源化抗IL-23p19抗体分子中具有至少一个氨基酸残基被去除并且在其位置中插入不同残基。对于置换诱变最感兴趣的位点包括高变环，但FR改变也是预期的。涉及抗原结合的高变区残基或FR残基一般以相对保守的方式进行置换。
抗体的另一种类型的氨基酸变体改变抗体的最初糖基化模式。改变意指缺失抗体中发现的一个或多个碳水化合物部分，和/或添加抗体中不存在的一个或多个糖基化位点。抗体的糖基化一般是N联或O联的。N联指碳水化合物部分与天冬酰胺残基侧链的附着。其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸的三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸，是关于碳水化合物部分与天冬酰胺侧链的酶促附着的识别序列。因此，多肽中这些三肽序列中任一个的存在产生潜在糖基化位点。O联糖基化指糖N-乙酰半乳糖胺(aceylgalactosamine)、半乳糖或木糖之一与羟基氨基酸、最通常为丝氨酸或苏氨酸的附着，尽管5-羟脯氨酸或5-羟赖氨酸也可以使用。
给抗体添加糖基化位点通过下述方便地完成：改变氨基酸序列从而使得它包含上述三肽序列中的一种或多种(对于N联糖基化位点)。改变还可以通过下述进行：给原始抗体的序列添加一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基，或经由给原始抗体的序列置换一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基(对于O联糖基化位点)。
再另一种类型的氨基酸变体是残基置换以提供最终人源化抗体的更大化学稳定性。例如，天冬酰胺(N)残基可以进行改变，以减少在啮齿类动物CDR内的任何NG序列处形成异天冬氨酸(isoaspartate)的可能性。在一个实施方案中，使天冬酰胺变成谷氨酰胺(Q)。异天冬氨酸形成可能使抗体与其靶抗原的结合变弱，或完全取消抗体与其靶抗原的结合。Presta(2005)J.Allergy Clin.Immunol.116：731在734。此外，啮齿类动物CDRs中的甲硫氨酸残基可以进行改变，以减少甲硫氨酸硫会氧化的可能性，所述氧化可以减少抗原结合亲和力并且还有助于最终抗体制剂中的分子异质性。同前。在一个实施方案中，使甲硫氨酸变成丙氨酸(A)。随后筛选具有此种置换的抗体，以确保所述置换不使IL-23p19结合亲和力减少至无法接受的水平。
编码人源化IL-23特异性抗体的氨基酸序列变体的核酸分子通过本领域已知的多种方法进行制备。这些方法包括但不限于，从天然来源中分离(在天然存在的氨基酸序列变体的情况下)，或通过人源化抗IL-23p19抗体的早期制备的变体或非变体形式的寡核苷酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变和盒式诱变制备。
一般地，人源化抗IL-23抗体的氨基酸序列变体将具有这样的氨基酸序列，其与重或轻链的原始人源化抗体氨基酸序列具有至少75％的氨基酸序列同一性、更优选至少80％、更优选至少85％、更优选至少90％、和最优选至少95％。关于这种序列的同一性或同源性在本文中被定义为，在该序列比对和必要时引入缺口以达到最大限度的百分比序列同一性，并且任何保守置换不视为序列同一性的部分后，候选序列中与人源化抗IL-23残基相同的氨基酸残基的百分比。N末端、C末端、或抗体序列内的内部延伸、缺失或插入中无一应被解释为影响序列同一性或同源性。
人源化抗体可以选自免疫球蛋白的任何种类，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE。优选地，抗体是IgG抗体。可以使用IgG的任何同种型，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。还预期了IgG同种型的变体。人源化抗体可以包含来自超过一个种类或同种型的序列。通过在下文描述的生物学测定中筛选抗体容易地达到必需恒定结构域序列的最优化，以产生所需生物学活性。
同样地，任一种类的轻链可以在本文的组合物和方法中使用。具体地，κ、λ或其变体在本组合物和方法中是有用的。
可以使用来自非人抗体的CDR序列的任何合适的部分。CDR序列可以通过置换、插入或缺失至少一个残基进行诱变，从而使得CDR序列不同于使用的人和非人抗体序列。预期此种突变将是最低限度的。一般地，至少75％的人源化抗体残基将对应非人CDR残基的那些、更通常90％、且最优选大于95％。
可以使用来自人抗体的FR序列的任何合适的部分。FR序列可以通过置换、插入或缺失至少一个残基进行诱变，从而使得FR序列不同于使用的人和非人抗体序列。预期此种突变将是最低限度的。一般地，至少75％的人源化抗体残基将对应人FR残基的那些、更通常90％、且最优选大于95％。
CDR和FR残基根据Kabat的标准序列定义进行确定。Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，National Institutes ofHealth，Bethesda Md.(1987)。SEQ ID NOs：5-16和31-48显示了各种小鼠抗人IL-23p19抗体的重链可变结构域序列，且SEQ ID NOs：17-28和49-65描述了轻链可变结构域序列。SEQ ID NOs：66-68是关于重链CDRs(CDRH1、CDRH2和CDRH3)的共有序列，并且包含关于抗体家族的重链CDRs中每个位置上最常见的氨基酸残基，所述抗体家族由7G10、6H12、13F11、13B5、7E2、13G1、11C10、1E10、30F11、34E4、5B12、6H4、9C9、11B10、30E1、33D2、20A9、22E9、29D5、21A10和33B12组成。图1A-1C提供了本发明的各种抗体的重链的序列队列。
如图2A-2C中所示，本文公开的本发明抗体的轻链CDRs被分成3个亚家族，称为(a)、(b)和(c)。轻链亚家族(a)由抗体7G10、6H12、13F11、13B5、7E2、13G1、11C10、30F11、34E4、6H4、33D2和33B12组成。轻链亚家族(b)由抗体1E10、20A9、22E9、29D5、5B12、9C9和11B10组成。轻链亚家族(c)由抗体10H11、19E9、10G8、39G2、35F12、49A10、34F9和7D7组成。这些轻链亚家族用于衍生CDRL1(a)、CDRL1(b)和CDRL1(c)的共有CDR序列(SEQ ID NOs：69-71)，以及关于每个亚家族的相应共有序列CDRL2(SEQ ID NOs：72-74)和CDRL3(SEQ ID NOs：75-77)。关于轻链CDRs的共有序列包含关于每个抗体亚家族的轻链CDRs中每个位置上最常见的氨基酸残基。
表2和3限定人源化抗IL-23p19抗体6H12、7G10、10H11和22E9的各种结构域，以及本发明的几种鼠抗体的轻和重链可变结构域。SEQID Nos：1-4的残基1-19代表关于hum6H12和hum7G10的重和轻链的信号序列。hum6H12和hum7G10的轻链恒定结构域分别位于SEQ IDNos：2和4的残基130-233处。hum6H12和hum7G10的重链恒定结构域分别位于SEQ ID Nos：1和3的残基135-464处，其中CH1位于残基135-242处，CH2+铰链位于残基243-357处且CH3位于残基358-464处。所有其他抗体都作为轻和重链可变区(VL和VH)呈现，并且因此缺乏信号序列和恒定结构域。
表2
轻链序列和结构域
Figure A20068004014600321
表3
重链序列和结构域
在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含CDRs，所述CDRs包含在某些位置处的几个可变氨基酸之一。在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含SEQ ID NOs：78-89处列出的“CDR可变”结构域。这些“CDR可变”序列包括相关抗体的每个家族的共有序列以及包含那个家族内所有观察到的序列变体的可变位置。此类序列变体显示于图1A-1C和2A-2C中。
在另一个实施方案中，潜在CDRs中的可变氨基酸选自在本文报道的家族中出现2次或更多次的那些氨基酸。这些抗体是上文描述的“CDR可变”抗体的亚群，其中在给定序列家族中CDR的给定位置处只出现1次的氨基酸不包括在潜在CDRs的库中。通过简单检查图1A-1C和2A-2C，这些“单次出现”的氨基酸置换容易地进行确定，并且因此从“CDR可变”序列中排除。这个狭窄范围的潜在CDR序列在本文中被称为“多次出现的可变CDR”。为了方便起见，这种命名在本文中用于指“CDR可变”序列的这种亚群。
在再一实施方案中，潜在CDRs不限于上文描述的“CDR可变”序列，还包括任何观察到的氨基酸的保守修饰变体，如使用表1的数据确定的。
在进一步的实施方案中，潜在CDRs包括本文公开的任何单个序列CDR的变体，包括共有序列SEQ ID NOs：66-77，其中所述变体包含相对于公开的序列的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多保守氨基酸置换，如使用表1的数据确定的。
还预期了嵌合抗体。如上所述，一般的嵌合抗体包含与衍生自特定物种或属于特定抗体种类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源的重和/或轻链的部分，而一条或多条链的其余部分与衍生自另一个物种或属于另一个抗体种类或亚类的抗体的相应序列相同或同源，以及此种抗体的片段，只要它们显示所需生物学活性(美国专利号4,816,567；和Morrison等人(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851-6855)。
双特异性抗体在本方法和组合物中也是有用的。如本文所使用的，术语“双特异性抗体”指具有关于至少2种不同抗原表位，例如IL-23p19和IL-23p40的结合特异性的抗体，一般是单克隆抗体。在一个实施方案中，表位来自相同抗原。在另一个实施方案中，表位来自2种不同抗原。用于制备双特异性抗体的方法是本领域已知的。例如，双特异性抗体可以使用2个免疫球蛋白重链/轻链对的共表达来重组生产。参见，例如，Milstein等人(1983)Nature 305：537-39。可替代地，双特异性抗体可以使用化学连接进行制备。参见，例如，Brennan等人，(1985)Science229：81。双特异性抗体包括双特异性抗体片段。参见，例如，Hollinger等人，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：6444-48，Gruber等人，，J.Immunol.152：5368(1994)。
在再其他的实施方案中，可以给本文提供的人源化VL和VH区附加不同的恒定结构域。例如，如果本发明的抗体(或片段)的特定预期用途要求改变的效应子功能，那么可以使用除IgG1外的重链恒定结构域。尽管IgG1抗体提供长半衰期和效应子功能，例如补体激活和依赖抗体的细胞毒性，但此种活性可能不是抗体的所有用途需要的。在此类情况下可以使用例如IgG4恒定结构域。
V.人源化抗IL-23的生物学活性
可以就体外抑制性生物学活性或合适的结合亲和力筛选具有在本文中鉴定为人源化抗IL-23抗体中所需特征的抗体。为了筛选与由目的抗体(例如，阻断细胞因子与其受体结合的那些)结合的人IL-23(即p19亚基)上的表位结合的抗体，可以执行常规交叉阻断测定，例如ANTIBODIES，A LABORATORY MANUAL，Cold Spring Harbor Laboratory，编辑Harlow和David Lane(1988)中描述的那种。与相同表位结合的抗体可能在此类测定中交叉阻断，但并非所有交叉阻断抗体都将必然在精确相同的表位处结合，因为交叉阻断可以起因于由抗体在附近或甚至重叠表位处结合的抗体结合的空间位阻。
可替代地，可以执行例如如在Champe等人(1995)J.Biol.Chem.270：1388-1394中描述的表位作图，以确定抗体是否结合目的表位。如由Cunningham和Wells(1989)Science 244：1081-1085描述的“丙氨酸分区诱变”，或人IL-23中氨基酸残基的一些其他形式的点诱变也可以用于确定关于本发明的抗IL-23抗体的功能表位。然而，诱变研究还可以揭示对IL-23的总体三维结构关键的、但不直接涉及抗体-抗原接触的氨基酸残基，并且因此可能需要其他方法以证实使用这种方法确定的功能表位。
还可以通过评估抗体与包含人IL-23p19片段(SEQ ID NO：39)的肽的结合来确定由特异性抗体结合的表位。可以合成包含IL-23p19序列的一系列重叠肽，并且筛选例如在直接ELISA、竞争ELISA中(在其中评估肽阻止抗体与IL-23p19的结合的能力，所述IL-23p19与微量滴定板的孔结合)、或在芯片上的结合。此类肽筛选方法可能不能检测一些不连续的功能表位，即涉及沿着IL-23p19多肽链的一级序列不是邻接的氨基酸残基的功能表位。
由本发明的抗体结合的表位还可以通过结构方法进行确定，例如X射线晶体结构测定(例如，WO2005/044853)、分子建模和核磁共振(NMR)分光术，包括当游离时和当在与目的抗体的复合物中结合时，IL-23中不稳定酰胺氢的H-D交换速率的NMR测定(Zinn-Justin等人(1992)Biochemistry 31，11335-11347；Zinn-Justin等人(1993)Biochemistry 32，6884-6891)。
关于X射线晶体学，结晶化可以使用本领域已知方法(例如Giege等人(1994)Acta Crystallogr.D50：339-350；McPherson(1990)Eur.J.Biochem.189：1-23)中的任何一种来完成，包括微分批(microbatch)(例如Chayen(1997)Structure 5：1269-1274)、悬滴蒸气扩散(例如McPherson(1976)J. Biol.Chem.251：6300-6303)、放入晶种和透析。需要使用浓度为至少约1mg/mL且优选约10mg/mL-约20mg/mL的蛋白质制剂。结晶化可以在沉淀剂溶液中最佳地达到，所述沉淀剂溶液包含聚乙二醇1000-20,000(PEG；平均分子量为约1000-约20,000 Da)，优选约5000-约7000 Da，更优选约6000 Da，而浓度为约10％-约30％(w/v)。还可能需要包括蛋白质稳定剂，例如，浓度为约0.5％-约20％的甘油。在沉淀剂溶液中还可能需要合适的盐，例如氯化钠、氯化锂或柠檬酸钠，优选以约1mM-约1000mM的浓度。沉淀剂优选被缓冲至约3.0-约5.0，优选约4.0的pH。在沉淀剂溶液中有用的特定缓冲剂可以不同，并且是本领域众所周知的(Scopes，Protein Purification：Principles and Practice，第3版(1994)Springer-Verlag，New York)。有用的缓冲剂的例子包括但不限于，HEPES、Tris、MES和乙酸盐。晶体可以在广泛的温度范围下生长，包括2℃、4℃、8℃和26℃。
抗体：抗原晶体可以使用众所周知的X射线衍射技术进行研究，并且可以使用计算机软件例如X-PLOR(Yale University，1992，由Molecular Simulations，Inc.分发的；参见，例如Blundell和Johnson(1985)Meth.Enzymol.114和115，H.W. Wyckoff等人，编辑，AcademicPress；美国专利申请公开号2004/0014194)，和BUSTER(Bricogne(1993)Acta Cryst.D49：37-60；Bricogne(1997)Meth.Enzymol.276A：361-423，Carter和Sweet，编辑；Roversi等人(2000)Acta Cryst.D56：1313-1323)进行改善，所述参考文献的公开内容在此整体引入作为参考。
与本发明的抗体结合相同的表位的另外抗体可以通过下述方法获得，例如，就与表位的结合筛选针对IL-23产生的抗体，或用包含人IL-23片段的肽免疫接种动物，所述人IL-23片段包含表位序列。与相同的功能表位结合的抗体可以预期显示相似的生物学活性，例如阻断受体结合，并且此种活性可以通过抗体的功能测定加以证实。
抗体亲和力(例如，对于人IL-23)可以使用标准分析进行测定。优选的人源化抗体是以仅仅约1x10-7的KD值结合人IL-23p19的那些；优选仅仅约1x10-8；更优选仅仅约1x10-9；和最优选仅仅约1x10-10M。
在本组合物和方法中有用的抗体及其片段是生物学活性抗体和片段。如本文所使用的，术语“生物学活性”指能够结合所需抗原表位并且直接或间接发挥生物学作用的抗体或抗体片段。一般地，这些作用起因于IL-23与其受体结合的失败。如本文所使用的，术语“特异性”指抗体与靶抗原表位的选择性结合。通过在一组给定条件下比较与IL-23的结合和与无关抗原或抗原混合物的结合，可以测试抗体的结合特异性。如果抗体与IL-23的结合为与无关抗原或抗原混合物的结合的至少10倍，且优选50倍，那么它被视为特异性的。与IL-23“特异性结合”的抗体不与不包含IL-23衍生序列的蛋白质结合，即，如本文所使用的，“特异性”涉及IL-23特异性，而不涉及可能存在于所研究中的蛋白质中的任何其他序列。例如，如本文所使用的，与IL-23“特异性结合”的抗体一般将与FLAG-hIL-23结合，所述FLAG-hIL-23是包含IL-23和
Figure A20068004014600371
肽标记的融合蛋白，但它不与单独或当与除IL-23外的蛋白质融合时的
Figure A20068004014600372
肽标记结合。
本发明的IL-23特异性结合化合物，例如抑制性IL-23p19特异性抗体，可以以任何方式抑制其生物学活性，包括但不限于，通过腹膜巨噬细胞生产IL-1β和TNF，和通过TH17细胞生产IL-17(参见Langrish等人(2004)Immunol.Rev.202：96-105)。抗IL-23p19抗体还将能够抑制IL-17A、IL-17F、CCL7、CCL17、CCL20、CCL22、CCR1和GM-CSF的基因表达(参见Langrish等人(2005)J. Exp.Med. 201：233-240)。本发明的IL-23特异性结合化合物，例如抗IL-23p19抗体，还将阻断IL-23增强TH17细胞增殖或存活的能力。Cua和Kastelein(2006)Nat.Immunol.7：557-559。工程改造的抗IL-23p19的抑制活性将在炎性、自身免疫和增生性病症治疗中是有用的。此种病症在PCT专利申请公开WO04/081190；WO 04/071517；WO 00/53631；和WO 01/18051中描述，所述专利的公开内容在此整体引入作为参考。
VI.药物组合物
为了制备包括IL-23激动剂或拮抗剂的药物或无菌组合物，使细胞因子类似物或突变蛋白质、对于其的抗体、或其核酸与药学上可接受的载体或赋形剂混合，参见，例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences andU.S.Pharmacopeia：National Formulary，Mack Publishing Company，Easton，PA(1984)。
治疗和诊断剂制剂可以通过与例如冻干粉末、浆、水溶液或悬浮液形式的生理学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合来制备(参见，例如，Hardman等人，(2001)Goodman and Gilman′s The PharmacologicalBasis of Therapeutics，McGraw-Hill，New York，NY；Gennaro(2000)Remington ：The Science and Practice of Pharmacy，Lippincott，Williams，和Wilkins，New York，NY；Avis等人，(编辑)(1993)Pharmaceutical Dosage Forms：Parenteral Medications，MarcelDekker，NY；Lieberman等人，(编辑)(1990)Pharmaceutical DosageForms：Tablets，Marcel Dekker，NY；Lieberman等人，(编辑)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms：Disperse Systems，MarcelDekker，NY；Weiner和Kotkoskie(2000)Excipient Toxicity and Safety，Marcel Dekker，Inc.，New York，NY)。
单独或与免疫抑制剂组合施用的抗体组合物的毒性和治疗功效可以通过细胞培养或实验动物中的标准药学程序来测定，例如用于测定LD50(对50％的群体致死的剂量)和ED50(在50％的群体中治疗上有效的剂量)。毒性和疗效之间的剂量比是治疗指数，并且它可以表示为LD50和ED50之间的比。显示高治疗指数的抗体是优选的。由这些细胞培养测定和动物研究获得的数据可以用于配制用于在人中使用的一系列剂量。此种化合物的剂量优选位于包括具有很少毒性或没有毒性的ED50的循环浓度范围内。取决于使用的剂型和利用的施用途径，剂量可以在这个范围内变化。
施用方式不是特别重要的。合适的施用途径可以例如包括经口、直肠、跨粘膜或肠施用；肠胃外递送，包括肌内、皮下、髓内注射，以及鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射。用于药物组合物中或实践本发明方法的抗体的施用可以以多种常规方式来进行，例如，经口摄食、吸入、局部应用或皮肤、皮下、腹膜内、肠胃外、动脉内或静脉内注射。静脉内施用于患者是优选的。
可替代地，可以以局部而不是全身方式施用抗体，例如，经由将抗体直接注射到关节炎关节或特征在于免疫病理学的病原体诱导的病灶内，通常在贮存或持续释放制剂中。此外，可以施用在靶向的药物递送系统中的抗体，例如，在用组织特异性抗体包被的脂质体中，靶向例如关节炎关节或特征在于免疫病理学的病原体诱导的病灶。脂质体将靶向受累组织并且由受累组织选择性吸收。
选择关于治疗剂的施用方案取决于几种因素，包括实体的血清或组织周转率、症状水平、实体的免疫原性、和生物基质中靶细胞的可接近性。优选地，施用方案使递送给患者的治疗剂的量达到最大，与可接受的副作用水平一致。因此，递送的生物制剂的量部分取决于特定实体和待治疗状况的严重性。在抗体、细胞因子和小分子的合适剂量选择中的指导是可获得的(参见，例如，Wawrzynczak(1996)Antibody Therapy，Bios Scientific Pub.Ltd，Oxfordshire，UK；Kresina(编辑)(1991)Monoclonal Antibodies，Cytokines and Arthritis，Marcel Dekker，NewYork，NY；Bach(ed.)(1993)Monoclonal Antibodies and PeptideTherapy in Autoimmune Diseases，Marcel Dekker，New York，NY；Baert等人，(2003)New Engl.J. Med.348：601-608；Milgrom等人，(1999)New Engl.J.Med.341：1966-1973；Slamon等人，(2001)NewEngl.J.Med.344：783-792；Beniaminovitz等人，(2000)New Engl.J.Med.342：613-619；Ghosh等人，(2003)New Engl.J.Med.348：24-32；Lipsky等人，(2000)New Engl.J.Med.343：1594-1602)
合适剂量的确定由临床医生进行，例如，使用本领域已知或怀疑影响治疗或预测影响治疗的参数或因素。一般地，剂量从略微小于最佳剂量的量开始，并且其后它通过小增量进行增加，直至相对于任何负面副作用达到所需或最佳作用。重要的诊断测量包括例如产生的炎症症状或产生的炎性细胞因子水平的那些。优选地，将使用的生物制剂衍生自与靶向用于治疗的动物相同的物种，从而使针对试剂的炎性、自身免疫或增生性应答减到最小。
抗体、抗体片段和细胞因子可以通过连续输注、或通过例如1天、1周、或1-7次/周时间间隔的给药提供。剂量可以静脉内、皮下、局部、经口、鼻、直肠、肌内、大脑内、脊柱内或通过吸入提供。优选的给药方案是涉及避免明显不需要的副作用的最大剂量或给药频率的给药方案。周总剂量通常是至少0.05μg/kg体重、更通常至少0.2μg/kg、最通常至少0.5μg/kg、一般至少1μg/kg、更一般至少10μg/kg、最一般至少100μg/kg、优选至少0.2mg/kg、更优选至少1.0mg/kg、最优选至少2.0mg/kg、最佳至少10mg/kg、更最佳至少25mg/kg、和最最佳至少50mg/kg(参见，例如，Yang等人，(2003)New Engl. J. Med.349：427-434；Herold等人，(2002)New Engl. J. Med.346：1692-1698；Liu等人，(1999)J. Neurol.Neurosurg.Psych.67：451-456；Portielji等人，(20003)Cancer Immunol.Immunother.52：133-144)。小分子治疗剂，例如肽模拟物、天然产物或有机化学制品的所需剂量在摩尔/kg基础上约与对于抗体或多肽的相同。
如本文所使用的，“抑制”或“治疗”或“处理”包括与自身免疫疾病或病原体诱导的免疫病理学相关的症状发展的延缓，和/或将要或预期发展的此种症状的严重性中的减少。该术语进一步包括改善现有的不受控制或有害的自身免疫相关或病原体诱导的免疫病理学症状，预防另外的症状、和改善或预防此种症状的潜在原因。因此，该术语指已对脊椎动物受试者赋予有利的结果，所述受试者具有自身免疫或病原体诱导的免疫病理学疾病或症状，或具有发展此种疾病或症状的可能。
如本文所使用的，术语“治疗有效量”或“有效量”指IL-23p19特异性结合化合物例如和抗体的量，当单独或与另外的治疗剂组合施用于细胞、组织或受试者时，所述量有效预防或改善自身免疫疾病或病原体诱导的免疫病理学相关疾病或状况或疾病进展。治疗有效剂量进一步指这样的化合物量，其足以导致症状的改善，例如，相关医学状况的治疗、治愈、预防或改善，或此种状况的治疗、治愈、预防或改善率的增加。
当应用于单独施用的单个活性成分时，治疗有效剂量指单独的那种成分。当应用于组合时，治疗有效剂量指导致疗效的活性成分的组合量，无论是组合、顺次还是同时施用。治疗剂的有效量将使症状一般减少至少10％；通常至少20％；优选至少约30％；更优选至少40％；和最优选至少50％。
关于与第二种治疗剂，例如细胞因子、类固醇、化学治疗剂、抗生素或放射共施用或治疗的方法是本领域众所周知的，参见，例如，Hardman等人，(编辑)(2001)Goodman and Gilman’s ThePharmacological Basis of Therapeutics，第10版，McGraw-Hill，NewYork，NY；Poole和Peterson(编辑)(2001)Pharmacotherapeutics forAdvanced Practice ：A Practical Approach，Lippincott，Williams &Wilkins，Phila.，PA；Chabner和Longo(编辑)(2001)CancerChemotherapy and Biotherapy，Lippincott，Williams & Wilkins，Phila.，PA。本发明的药物组合物还可以包含其他免疫抑制剂或免疫调谐剂。可以使用任何合适的免疫抑制剂，包括但不限于，抗炎剂、皮质类固醇、环孢菌素、他克莫司(即，FK-506)、西罗莫司、干扰素、可溶性细胞因子受体(例如，sTNRF和sIL-1R)，中和细胞因子活性的试剂(例如，英夫单抗、依那西普(etanercept))、霉酚酸酯、15-脱氧精胍菌素(15-deoxyspergualin)、沙立度胺、格拉太咪尔、硫唑嘌呤、来氟洛米、环磷酰胺、氨甲蝶呤等。药物组合物还可以与其他治疗方式例如光线疗法和放射一起使用。
一般的兽医学、实验或研究受试者包括猴、狗、猫、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、马和人。
VII.抗体生产
关于本发明抗体的重组生产，分离编码2条链的核酸并插入一种或多种可复制载体内，用于进一步克隆(DNA扩增)或用于表达。使用常规程序(例如，通过使用能够与编码抗体的重和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)容易地分离并测序编码单克隆抗体的DNA。许多载体是可用的。载体组分一般包括但不限于，下述中的一种或多种：信号序列、复制起点、一种或多种标记基因、增强子元件、启动子和转录终止序列。在一个实施方案中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的轻和重链两者由相同载体例如质粒或腺病毒载体表达。
本发明的抗体可以通过本领域已知的任何方法来生产。在一个实施方案中，抗体在培养的哺乳动物或昆虫细胞中表达，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、人胚肾(HEK)293细胞、小鼠骨髓瘤NSO细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢(Sf9)细胞。在一个实施方案中，由CHO细胞分泌的抗体被回收并通过标准层析法进行纯化，例如A蛋白、阳离子交换、阴离子交换、疏水相互作用和羟磷灰石层析。所得到的抗体被浓缩并贮存于20mM乙酸钠，pH 5.5中。
在另一个实施方案中，本发明的抗体根据WO2005/040395中所述方法在酵母中进行生产。简言之，将编码目的抗体的单独轻或重链的载体引入不同的酵母单倍体细胞内，例如，不同交配型的酵母巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)，所述酵母单倍体细胞是任选互补的营养缺陷体。转化的单倍体酵母细胞随后可以进行交配或融合，以产生能够生产重和轻链两者的二倍体酵母细胞。二倍体菌株随后能够分泌完全装配的和生物学活性抗体。2条链的相对表达水平可以通过下述进行最优化，例如使用具有不同拷贝数的载体、使用不同强度的转录启动子、或诱导来自驱动编码1条或2条链的基因转录的诱导型启动子的表达。
在一个实施方案中，将多种不同抗IL-23p19抗体(“原始”抗体)各自的重和轻链引入酵母单倍体细胞内，以制备表达多条轻链的一种交配型的单倍体酵母菌株文库，和表达多条重链的不同交配型的单倍体酵母菌株文库。这些单倍体菌株文库可以进行交配(或融合为原生质球)，以生产表达包含轻和重链的各种可能排列的抗体组合文库的一系列二倍体酵母细胞。随后可以筛选抗体组合文库，以确定任何抗体中的任一个是否具有优于(例如对于IL-23更高的亲和力)原始抗体那些的性质。参见，例如，WO2005/040395。
在另一个实施方案中，本发明的抗体是其中抗体可变结构域的部分连接在分子量约13kDa的多肽中的人结构域抗体。参见，例如，美国专利公开号2004/0110941。此种单结构域、低分子量试剂提供了就合成的容易性、稳定性和施用途径而言的众多优点。
VIII.用途
本发明提供了关于使用工程改造的抗IL-23用于治疗和诊断例如中枢神经系统、外周神经系统和胃肠道的炎性病症和状况，以及自身免疫和增生性病症的方法。
提供了用于治疗下述疾病的方法：例如多发性硬化(MS)，包括复发-缓解型MS和原发性进行性MS，阿尔茨海默氏病，肌萎缩性侧索硬化(也称为ALS；Lou Gehrig氏病)，缺血性脑损伤，朊病毒病和HIV相关痴呆。还提供了用于治疗神经病性疼痛、创伤后神经病、Guillain-Barre综合征(GBS)、末梢多发性神经病和神经再生的方法。
提供了用于治疗或改善多发性硬化、或神经系统的其他炎性病症或状况的一种或多种下述特征、症状、方面、表现或病征的方法：脑损害、髓鞘损害、脱髓鞘、脱髓鞘斑、视觉障碍、平衡或协调缺失、痉挛状态、感觉障碍、失禁、疼痛、虚弱、疲劳、麻痹、认知缺损、智力迟钝、复视、视神经炎、感觉异常、步态共济失调、疲劳、Uhtoff氏症状、神经痛、失语、运用不能、癫痫发作、视野缺失、痴呆、锥体束外现象、抑郁、健康感、或其他情绪症状、慢性进行性脊髓病、和通过磁共振成像(MRI)包括钆增强损害、诱发电位记录、或检查脑脊液检测的症状(参见，例如，Kenealy等人(2003)J. Neuroimmunol.143：7-12；Noseworthy等人(2000)New Engl.J. Med.343：938-952；Miller等人(2003)NewEngl.J.Med.348：15-23；Chang等人(2002)New Engl.J. Med.346：165-173；Bruck和Stadelmann(2003)Neurol.Sci.24 Suppl.5：S265-S267)。
此外，本发明提供了用于治疗和诊断炎性肠病症，例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻和过敏性肠综合征的方法。提供了用于治疗或改善炎性肠病症的一种或多种下述症状、方面、表现或病征的方法：食物吸收不良、改变的肠运动性、感染、发热、腹痛、腹泻、直肠出血、体重减轻、营养不良病征、肛门周围疾病、腹部块，和生长不足，以及肠并发症例如狭窄、瘘、中毒性巨结肠、穿孔和癌症，并且包括内窥镜所见，例如，脆性、口疮和线性溃疡、鹅卵石样表现、假息肉和直肠受累，和此外抗酵母抗体(参见，例如，Podolsky，同上；Hanauer，同上；Horwitz和Fisher，同上)。
还预期了下述病症的治疗：炎性病症，例如牛皮癣，特应性皮炎，关节炎，包括类风湿性关节炎、骨关节炎和牛皮癣关节炎，自身免疫病症，例如全身性红斑狼疮和I型糖尿病，和增生性病症例如癌症(参见，例如，PCT专利申请WO 04/081190；WO 04/071517；WO 00/53631；和WO 01/18051)。
本发明的IL-23p19结合化合物还可以与其他细胞因子的一种或多种拮抗剂(例如抗体)组合使用，所述其他细胞因子包括但不限于，IL-17A、IL-1β、IL-6和TGF-β。参见，例如，Veldhoen(2006)Immunity24：179-189；Dong(2006)Nat.Rev.Immunol.6(4)：329-333。在各种实施方案中，本发明的IL-23p19结合化合物在另一种或多种拮抗剂例如抗IL-17A抗体的施用之前、同时或之后施用。在一个实施方案中，IL-17A结合化合物单独或与本发明的IL-23拮抗剂抗体组合用于治疗不利的免疫应答(例如，MS、克罗恩氏病)的急性早期。在后面一种情况下，IL-17A结合化合物可以逐步减少，并且用单独的IL-23拮抗剂的治疗持续以维持不利应答的抑制。可替代地，针对IL-1β、IL-6和/或TGF-β的拮抗剂可以与在本发明的IL-23p19结合化合物同时、在其之前或之后施用。参见Cua和Kastelein(2006)Nat.Immunol.7：557-559；Tato和O’Shea(2006)Nature 441：166-168；Iwakura和Ishigame(2006)J.Clin.Invest.116：1218-1222。
参考下述实施例可以最佳理解本发明的广泛范围，所述实施例不预期使本发明限制于具体实施方案。
本文的所有引用都引入本文作为参考，其程度与每个单个出版物或专利申请特别并个别指出引入作为参考相同。
如对于本领域技术人员将是显而易见的，在不背离本发明的精神和范围的情况下，可进行本发明的许多修饰和变化。本文描述的具体实施方案仅为了举例而提供，并且本发明将受到附加权利要求的条款，连同此种权利要求对其授权的等同方案的全部范围的限制；并且本发明不受具体实施方案的限制，所述具体实施方案在本文中为了举例而呈现。
实施例
实施例1
一般方法
分子生物学的标准方法得到了描述(Maniatis等人(1982)MolecularCloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，NY；Sambrook和Russell(2001)Molecular Cloning，第3版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY；Wu(1993)Recombinant DNA，第217卷，Academic Press，San Diego，CA)。标准方法也出现于Ausbel等人(2001)Current Protocols inMolecular Biology，第1-4卷，John Wiley and Sons，Inc.New York，NY，所述参考文献描述了在细菌细胞中的克隆和DNA诱变(第1卷)、在哺乳动物细胞和酵母中的克隆(第2卷)、复合糖和蛋白质表达(第3卷)以及生物信息学(第4卷)。
关于蛋白质纯化的方法包括免疫沉淀、层析、电泳、离心和结晶化得到了描述(Coligan等人(2000)Current Protocols in Protein Science，第1卷，John Wiley and Sons，Inc.，New York)。化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白的生产、蛋白质的糖基化得到了描述(参见，例如，Coligan等人(2000)Current Protocols in Protein Science，第2卷，John Wiley and Sons，Inc.，New York；Ausubel等人(2001)CurrentProtocols in Molecular Biology，第3卷，John Wiley and Sons，Inc.，NY，NY，第16.0.5-16.22.17页；Sigma-Aldrich，Co.(2001)Products for LifeScience Research，St.Louis，MO；第45-89页；Amersham PharmaciaBiotech(2001)BioDirectory，Piscataway，N.J.，第384-391页)。多克隆和单克隆抗体的生产、纯化和断裂得到了描述(Coligan等人(2001)Current Protcols in Immunology，第1卷，John Wiley and Sons，Inc.，NewYork；Harlow和Lane(1999)Using Antibodies，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，NY；Harlow和Lane，同上)。用于表征配体/受体相互作用的标准技术是可用的(参见，例如，Coligan等人(2001)Current Protcols in Immunology，第4卷，John Wiley，Inc.，New York)。
关于流式细胞术，包括荧光激活细胞分选术(FACS)的方法是可用的(参见，例如，Owens等人(1994)Flow Cytometry Principles forClinical Laboratory Practice，John Wiley and Sons，Hoboken，NJ；Givan(2001)Flow Cytometry，第2版；Wiley-Liss，Hoboken，NJ；Shapiro(2003)Practical Flow Cytometry，John Wiley and Sons，Hoboken，NJ)。适合于修饰核酸，包括核酸引物和探针，多肽和抗体，用于作为例如诊断试剂使用的荧光试剂是可用的(Molecular Probes(2003)Catalogue，Molecular Probes，Inc.，Eugene，OR；Sigma-Aldrich(2003)Catalogue，St.Louis，MO)。
免疫系统组织学的标准方法得到了描述(参见，例如，Muller-Harmelink(ed.)(1986)Human Thymus：Histopathology andPathology，Springer Verlag，New York，NY；Hiatt等人，(2000)ColorAtlas of Histology，Lippincott，Williams，and Wilkins，Phila，PA；Louis等人，(2002)Basic Histology：Text and Atlas，McGraw-Hill，NewYork，NY)。
用于测定例如抗原片段、前导序列、蛋白质折叠、功能结构域、糖基化位点和序列比对的软件包和数据库是可用的(参见，例如，GenBank，Vector
Figure A20068004014600461
Suite(Informax，Inc，Bethesda，MD)；GCGWisconsin Package(Accelrys，Inc.，San Diego，CA)；De
Figure A20068004014600462
(TimeLogic Corp.，Crystal Bay，Nevada)；Menne等人(2000)Bioinformatics 16：741-742；Menne等人(2000)BioinformaticsApplications Note 16：741-742；Wren等人(2002)Comput.MethodsPrograms Biomed. 68：177-181；von Heijne(1983)Eur.J.Biochem.133：17-21；von Heijne(1986)Nucleic Acids Res.14：4683-4690)。
实施例2
抗人IL-23p19抗体的人源化
小鼠抗人IL-23p19抗体6H12和7G10的人源化基本上如PCT专利申请公开WO 2005/047324和WO 2005/047326中所述来进行，所述专利引入作为参考。
将所选抗IL-23单克隆抗体(6H12和7G10)的可变轻和重结构域克隆并分别与人κ轻链(CL结构域)和人IgG1重链(CH1-铰链-CH2-CH3)融合。
将非人VH结构域的氨基酸序列与一组5个人VH种系氨基酸序列进行比较；来自亚群IGHV1和IGHV4的1个代表和来自亚群IGHV3的3个代表。VH亚群列举于M.-P.Lefranc，″Nomenclature of the HumanImmunoglobulin Heavy(IGH)Genes″，Experimental和ClinicalImmunogenetics，18：100-116，2001中。6H12和7G10抗体针对亚群VH1中的人重链种系DP-14评分最高。
对于所有非人抗体，VL序列是VL的κ亚类。将非人VL结构域的氨基酸序列与一组4个人VLκ种系氨基酸序列进行比较。4个的组包含来自4个确定的人VL亚群中每一个的1个代表，所述人VL亚群列举于V.Barbie and M.-P.Lefranc，″The Human Immunoglobulin KappaVariable(IGKV)Genes and Joining(IGKJ)Segments″，Experimental andClinical Immunogenetics，15：171-183，1998和M.-P.Lefranc，″Nomenclature of the Human Immunoglobulin Kappa(IGK)Genes″，Experimental and Clinical Immunogenetics，18：161-174，2001中。4个亚群还对应Kabat等人″Sequences of Proteins of Immunological Interest″，U.S.Department of Health and Human Services，NIH Pub.91-3242，第5版，1991，第103-130页中列举的4个亚群。6H12和7G10抗体针对亚群VLkI中的人轻链种系Z-012评分最高。
一旦确定了可变重和轻链的靶氨基酸序列，就产生编码全长人源化抗体的质粒。从编码具有VH3 DP-46和VLkI Z-012种系构架的人源化抗IL-10抗体的质粒开始，使用Kunkel诱变(参见，例如，Kunkel T A.(1985)Proc.Natl.Acad. Sci.U.S.A82：488-492)改变质粒，以使DNA序列变成靶人源化6H12或7G10序列。同时，将密码子最优化掺入变化内以提供潜在最优化表达。所得到的人源化重和轻链序列，包括信号序列，分别在SEQ ID Nos：1和2(抗体6H12)处以及SEQ ID Nos：3和4(对于抗体7G10)处提供。
进行类似程序以确定关于抗体10H11和22E9人源化的正确人构架。抗体10H11针对亚群VH3中的人抗体重链种系DP-46和亚群VLkIII中的轻链种系Z-A27评分最高。抗体22E9针对亚群VH1中的人抗体重链种系DP-14和亚群VLkIV中的轻链种系Z-B3评分最高。所得到的人源化重和轻链可变结构域序列，分别在SEQ ID Nos：90和91(抗体10H11)处以及SEQ ID Nos：92和93(对于抗体22E9)处提供。
实施例3
使用KinExA技术测定关于人源化抗人IL-23的平衡解离常数(KD)
关于抗人IL-23抗体的平衡解离常数(KD)使用KinExA 3000仪器(Sapidyne Instruments Inc.，www.sapidyne.com)进行测定。KinExA使用动态排除测定法(Kinetic Exclusion Assay method)的原理，其基于抗体、抗原和抗体-抗原复合物的混合物中未复合抗体的浓度测量。游离抗体的浓度通过使混合物暴露于固相固定化的抗原非常短暂的时间段进行测量。在实践中，这通过使溶液相抗原-抗体混合物流经流动池中捕获的抗原包被的颗粒来完成。由该仪器产生的数据使用定制软件进行分析。使用数学理论基于下述假定计算平衡常数：
1.结合遵循关于平衡的可逆结合等式：
kon[Ab][Ag]＝koff[AbAg]
2.抗体和抗原1∶1结合，并且总抗体等于抗原-抗体复合物加游离抗体。
3.仪器信号与游离抗体浓度线性相关。
根据Sapidyne“Protocol for coating PMMA particles with biotinylatedligands having short or nonexistent linker arms”，用生物素化的rhIL-23包被98微米PMMA颗粒(Sapidyne，目录号440198)。关于rhIL-23的生物素化，根据制造商的建议(Pierce公告(bulletin)0874)使用EZ-linkTFP PEO-生物素(Pierce，目录号21219)。所有实验程序均根据KinExA3000手册来进行。
使用3种形式的异二聚IL-23蛋白质。天然或非连接的人IL-23包含通过二硫键共价连接的2条链，p19和p40。“非连接的”IL-23包含在293T细胞中与人p19：FLAG-标记肽共表达的人p40，并且经过抗FLAG肽亲和柱进行纯化。通过非还原SDS-PAGE，纯化的非连接的IL-23显示在对应于二聚体、三聚体等的分子量处的多聚IL-23形式的存在。
“Elastikine”IL-23是包含FLAG-标记肽：GLU-标记肽：人p40：elasti-接头：人p19的单链肽。elasti-接头肽序列衍生自R&D Systems形式的商品化IL-23。Elastikine在293T细胞中进行表达并且经过抗FLAG肽亲和柱进行纯化。通过非还原SDS-PAGE，纯化的elastikine IL-23显示在对应于二聚体、三聚体等的分子量处的多聚IL-23形式的存在。
在SF9细胞中共表达的非标记的、非连接形式的天然人IL-23p19/p40购自eBioscience(目录号34-8239)。通过非还原SDS-PAGE，纯化的eBioscience人IL-23没有显示多聚IL-23形式的存在。
所有运行在下述条件下一式两份地进行：样品体积：1.5mL；样品流速：0.25mL/分钟；标记体积：0.5mL；标记流速：0.25mL/分钟；mAb浓度：0.1nM；最高的Ag(hIL-23)浓度：4.0nM；最低的Ag(hIL-23)浓度：3.91nM。制备抗原的2倍系列稀释物并且与恒定浓度的抗体混合。使混合物在室温下温育2小时至平衡。
表4显示了KinExA分析结果。
表4
通过KinExa测定的KD值
人IL-23                 抗体               KD(pM)
-----------             --------           -----------
elastikine              6H12               54，48
非连接的                6H12               ＞1200
eBioscience             6H12               ＞1000，＞920
elastikine              hu6H12             28，36
elastikine              7G10               41，9.2
elastikine              hu7G10             49，16
elastikine              39G2               19
非连接的                39G2               34
eBioscience             39G2               620
elastikine              35F12              53
eBioscience             35F12              ＞700
elastikine              13B5               22
eBioscience             13B5               55
elastikine              7D7                2.7
elastikine              3D7                0.84
elastikine              49A10              7.4
elastikine              13F11              11
elastikine              33B12              6.8
实施例4
使用BIAcore技术测定
关于人源化抗人IL-23p19抗体的平衡解离常数(KD)
使用标准胺偶联程序将所有配体(抗IL-23mAbs)固定化在BIAcoreCM5传感器芯片上。所有实验于25℃并且在PBS中以10μL/分钟的流速来进行。所有IL-23形式在PBS中进行稀释以产生各种浓度。关于各种相互作用的动力学常数使用BIAevaluation软件3.1进行测定。使用计算的解离和结合速率常数确定KD。蛋白质以下述浓度使用：以0.33mg/mL溶于PBS中的抗IL-23 mAb hu7G10；以0.2mg/mL溶于PBS中的抗IL-23mAb hu6H12；以0.30mg/mL溶于PBS中的bac-wt人IL-23；以0.10mg/mL溶于PBS中的eBioscience人IL-23；以0.33mg/mL溶于PBS中的N222Q人IL-23。
除了上述蛋白质外，还使用其他形式。“Bac-wt”人IL-23在序列方面等同于“elastikine”人IL-23。这种IL-23在SF9细胞中进行表达并且经过抗FLAG肽亲和柱进行纯化。通过非还原SDS-PAGE，纯化的IL-23没有显示多聚IL-23形式的存在。“N222Q”人IL-23在序列方面等同于“elastikine”人IL-23，只是除了在p40亚基中Asn222改变成Gln(GenBank登记号P29460)。这种IL-23在SF9细胞中进行表达并且经过抗FLAG肽亲和柱进行纯化。通过非还原SDS-PAGE，纯化的N222Q IL-23没有显示多聚IL-23形式的存在。
对于所有实验使用下述固定化和再生条件：流速：5μL/分钟；NHS/EDC：10μL；蛋白质：溶于10mM乙酸钠(NaAcetate)，pH 5.0的5μg/mL：10μL；乙醇胺：40μL；再生：5μL 50mM NaOH。
表5提供了如通过BIAcore测定的KD值。
表5
通过BIAcore的KD测定
人IL-23                  抗体              KD(nM)
-----------              --------          ---------
bac-wt                   hu7G10            10
N222Q                    hu7G10            0.3，1.0
eBioscience              hu7G10            3.2，9.0
bac-wt                   hu6H12            5.1
N222Q                    hu6H12            0.5
eBioscience              hu6H12            4.1
实施例5
用于评估中和性抗IL-23抗体的增殖生物测定
单克隆抗体生物学中和IL-23的能力通过应用短期增殖生物测定进行评估，所述短期增殖生物测定使用表达重组IL-23受体的细胞。转化体Ba/F3-2.2lo细胞响应  IL-23而增殖并且所述应答可以被中和性抗IL-23抗体抑制。针对在剂量应答曲线的线性区域内、接近平台和在EC50之上选择的IL-23浓度滴定抗体。通过比色法使用Alamar Blue测量增殖或其缺乏，所述Alamar Blue是基于代谢活性检测的生长指示剂染料。抗体中和IL-23的能力通过其IC50值，或诱导IL-23增殖半数最大抑制的抗体浓度进行评估。
IL-23R转染子细胞系和细胞培养
细胞系                IL-23R表达                   IL-23应答
Ba/F3-2.2lo-hIL-23R   hIL-23R，hIL-12RB1           人，Cyno
将Ba/F3转染子维持在RPMI-1640培养基、10％胎牛血清、50μM 2-巯基乙醇、2mM L-谷氨酰胺、50μg/mL青霉素-链霉素和10ng/mL小鼠IL-3中。“Cyno”指食蟹猴IL-23。
增殖生物测定培养基
Ba/F3增殖生物测定在RPMI-1640培养基、10％胎牛血清、50 uM 2-巯基乙醇、2 mM L-谷氨酰胺和50 ug/mL青霉素-链霉素中进行。
程序
测定在96孔平底平板(Falcon 3072或类似的)中进行。所有试剂制备和细胞悬浮液使用合适的生物测定培养基。测定体积是150μL/孔。抗IL-23抗体的滴定与IL-23在室温下预温育30-60分钟，在这期间制备细胞。在抗体-细胞因子预温育后将细胞加入平板中。使生物测定平板在增湿的组织培养室(37C，5％CO2)中温育40-48小时。在培养时间结束时，以16.5μL/孔加入Alamar Blue(Biosource目录#DAL1100)并允许显色5-12小时。随后在570nm和600nm处阅读吸光度(VERSAmax Microplate Reader，Molecular Probes)，并且获得OD570-600。对于每种样品一式两份地进行。
细胞制备
使用健康生长状态的细胞，一般为3-8x105/mL的密度。将细胞计数，沉淀，在生物测定培养基中洗涤2次，并悬浮至合适的密度用于铺平板。
IL-23剂量-应答
将IL-23制备至工作浓度(3ng/mL)并且以75μL加入第1个孔中。通过横过孔在生物测定培养基中25∶50μL滴定进行1∶3的系列稀释，剩余50μL/孔。使细胞悬浮至合适的密度用于以100μL/孔铺平板。中和抗体剂量-应答
将抗体制备至工作浓度(30μg/mL)并且以75μL加入第1个孔中。通过横过孔在生物测定培养基中25∶50μL滴定进行1∶3的系列稀释，剩余50μL/孔。合适浓度的IL-23以50μL/孔加入包含滴定的抗体的孔中。使细胞悬浮至合适的密度以用于以50μL/孔铺平板，并且在抗体-细胞因子预温育后加入。
IC50测定
使用GraphPad Prism 3.0软件，针对细胞因子或抗体浓度标绘吸光度，并且使用S形剂量-应答的非线性回归(曲线拟合)测定IC50值。
表6显示通过抗IL-23p19抗体用于阻断Ba/F3细胞增殖的IC50值
表6
通过抗IL-23抗体用于阻断Ba/F3细胞增殖的IC50值
                IC50(nM)
人IL-23         抗体                IC50(nM)
-----------     --------            -----------
elastikine      7G10                22，18
非连接的        7G10                3000
eBioscience     7G10                3100，510
elastikine      hu7G10              29
非连接的        hu7G10              10000
eBioscience     hu7G10              7800
elastikine      6H12                9，11
非连接的        6H12                1500
eBioscience     6H12                1300，500
elastikine      hu6H12              27
非连接的        hu6H12              4000
eBioscience     hu6H12              3200
elastikine      13B5                7，5
非连接的        13B5                113
eBioscience     13B5                31
elastikine      33B12               4，3
非连接的        33B12               193
eBioscience     33B12               57
elastikine      39G2                9，5
非连接的        39G2                67
eBioscience     39G2                11
elastikine      35F12               15，5
非连接的        35F12               73
eBioscience     35F12               12
elastikine      3D7                 3，3
非连接的        3D7                 37
eBioscience     3D7                 2
实施例6
关于抗IL-23p19抗体7G10的表位
关于抗体7G10与人IL-23p19(SEQ ID NO：29)结合的表位通过X射线晶体学进行测定。测定关于抗体7G10的嵌合形式的Fab片段和非连接的人IL-23的复合物的座标，所述非连接的人IL-23包含p19和p40亚基。人IL-23p19的序列在SEQ ID NO：29处找到，并且人IL-12/IL-23p40的成熟形式的序列在GenBank登记号P29460的残基23-328处找到。抗体7G10的嵌合形式包含i)这样的重链，其包含与人重链恒定区(SEQ ID NO：3的残基135-464)融合的小鼠7G10 VH结构域(SEQ IDNO：6)，和ii)这样的轻链，其包含与人轻链恒定区(SEQ ID NO：4的残基130-233)融合的小鼠7G10 VL结构域(SEQ ID NO：18)。
在抗体7G10上的残基内的IL-23氨基酸残基包括E82、G86、S87、D88、T91、G92、E93、P94、S95、H106、P133、S134、Q135、P136、W137、R139、L140。另外的残基K83、F90和L110在
Figure A20068004014600542
内。IL-23p19上的氨基酸残基被视为在抗体的给定距离(例如
Figure A20068004014600543
或
Figure A20068004014600544
)内，如果残基的任何原子的座标在抗体的任何原子的座标的给定距离内的话。
大多数这些接触的残基落入沿着IL-23p19的一级结构的2个主要聚簇内，其中第1个聚簇包含残基82-95(其中14个残基中的11个在抗体的
Figure A20068004014600545
内，且14个中的9个在内)，且第二个聚簇包含残基133-140(其中8个残基中的7个在抗体的
Figure A20068004014600547
内)。这些聚簇限定了包含IL-23p19的8个或更多邻接氨基酸残基段的表位，其中50％、70％和85％或更多残基位于抗体的
Figure A20068004014600548
内。
与这些聚簇中任一或两者结合的抗体将预期阻断抗体7G10的结合。已知所有6个CDR序列之间的强序列同源性(参见图1A-1C和2A-2C)，可能包含“(a)轻链亚家族”的其他抗体(6H12、33B12、13F11、13B5、13G1、11C10、7E2、30F11、34E4、6H4、33D2)也将与IL-23p19中的和抗体7G10基本上相同的表位结合。关于“(a)轻链亚家族”可变结构域序列的抗体的共有CDR序列在SEQ ID NOs：69、72和75提供。相应的重链可变结构域共有序列在SEQ ID NOs：66-68提供。与和抗体7G10相同的表位结合的抗体将预期显示类似的生物学活性，例如在实施例5和表6处描述的测定中阻断Ba/F3细胞增殖，尽管可能具有某些可变亲和力和IC50s。
表7提供了序列表中序列的简述。
表7
序列标识符
 SEQ ID NO：   描述
 1   hum6H12HC
 2   hum6H12LC
 3   hum7G10HC
 4   hum7G10LC
 5   m6H12VH
 6   m7G10VH
 7   m13F11VH
 8   m13B5VH
 9   m21A10VH
 10   m33B12VH
 11   m39G2VH
 12   m35F12VH
 13   m49A10VH
 14   m3D7VH
 15   m34F9VH
 16   m7D7VH
  17   m6H12VL
  18   m7G10VL
  19   m13F11VL
  20   m13B5VL
  21   m21A10VL
  22   m33B12VL
  23   m39G2VL
  24   m35F12VL
  25   m49A10VL
  26   m34F9VL
  27   m7D7VL
  28   m3D7VL
  29   人IL23p19
  30   鼠IL23p19
  31 m13G1VH
  32 m11C10VH
  33 m7E2VH
  34 m30F11VH
  35 m34E4VH
  36 m6H4VH
  37 m33D2VH
  38 m1E10VH
  39 m20A9VH
  40 m22E9VH
  41 m29D5VH
  42 m5B12VH
  43 m9C9VH
  44 m11B10VH
  45 m30E1VH
  46 m10G8VH
  47 m19E9VH
  48 m10H11VH
  49 m13G1VL
  50 m11C10VL
  51 m7E2VL
  52 m30F11VL
  53 m34E4VL
  54 m6H4VL
  55 m33D2VL
  56 m1E10VL
  57 m20A9VL
  58 m22E9VL
  59 m29D5VL
  60 m5B12VL
  61 m9C9VL
  62 m11B10VL
  63 m10G8VL
  64 m19E9VL
  65 m10H11VL
  66   CDR-H1共有序列
  67   CDR-H2共有序列
  68   CDR-H3共有序列
  69   CDR-L1(a)共有序列
  70   CDR-L1(b)共有序列
  71   CDR-L1(c)共有序列
  72   CDR-L2(a)共有序列
  73   CDR-L2(b)共有序列
  74   CDR-L2(c)共有序列
  75   CDR-L3(a)共有序列
  76   CDR-L3(b)共有序列
  77   CDR-L3(c)共有序列
  78   CDR-H1可变
  79 CDR-H2可变
  80 CDR-H3可变
  81   CDR-L1(a)可变
  82   CDR-L1(b)可变
  83   CDR-L1(c)可变
  84   CDR-L2(a)可变
  85 CDR-L2(b)可变
  86 CDR-L2(c)可变
  87   CDR-L3(a)可变
  88   CDR-L3(b)可变
  89   CDR-L3(c)可变
  90   hum10H11VH
  91   hum10H11VL
  92   hum22E9VH
  93   hum22E9VL
如对于本领域技术人员将是显而易见的，在不背离本发明的精神和范围的情况下，可进行本发明的许多修饰和变化。本文描述的具体实施方案仅为了举例而提供，并且本发明将受到附加权利要求的条款，连同此种权利要求对其授权的等同方案的全部范围的限制；并且本发明不受具体实施方案的限制，所述具体实施方案在本文中为了举例而呈现。
上述出版物或文件的引用并不意味着承认前述中的任何一种是有关的现有技术，也不意味着它构成这些出版物或文件的内容或日期的任何承认。本文参考的美国专利其他出版物在此引入作为参考。
序列表
<110>Schering Corporation
<120>工程改造的抗IL-23抗体
<130>BP06380
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<213>人工的
<220>
<223>人构架，啮齿类动物CDRs
<220>
<221>SIGNAL
<222>(1)..(19)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(20)..(134)
<223>重链可变结构域
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(45)..(54)
<223>CDR-H1
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(69)..(85)
<223>CDR-H2
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(118)..(123)
<223>CDR-H3
<220>
<221>DOMAIN
<222>(135)..(242)
<223>重链恒定结构域1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(243)..(357)
<223>重链恒定结构域2和铰链
<220>
<221>DOMAIN
<222>(358)..(464)
<223>重链恒定结构域3
<400>1
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1               5                   10                  15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
            20                  25                  30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
        35                  40                  45
Asn Arg Tyr Leu Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
    50                  55                  60
Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Asn Asn Ala Gly Thr Asn Tyr Asn
65                  70                  75                  80
Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser
                85                  90                  95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
            100                 105                 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Trp Asp Gln Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
        115                 120                 125
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
    130                 135                 140
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
145                 150                 155                 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
                165                 170                 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
            180                 185                 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
        195                 200                 205
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
    210                 215                 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
225                 230                 235                 240
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
                245                 250                 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
            260                 265                 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
        275                 280                 285
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
    290                 295                 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
305                 310                 315                 320
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
                325                 330                 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
            340                 345                 350
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
        355                 360                 365
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
    370                 375                 380
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385                 390                 395                 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
                405                 410                 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
        420                 425                 430
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
    435                 440                 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
    450                 455                 460
<210>2
<211>233
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人构架，啮齿类动物CDRs
<220>
<221>SIGNAL
<222>(1)..(19)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(20)..(129)
<223>轻链可变结构域
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(43)..(53)
<223>CDR-L1
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(69)..(75)
<223>CDR-L2
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(108)..(116)
<223>CDR-L3
<220>
<221>DOMAIN
<222>(130)..(233)
<223>轻链恒定结构域
<400>2
Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala
1               5                   10                  15
Met Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
            20                  25                  30
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
Ser Asp Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
    50                  55                  60
Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Gln Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
                85                  90                  95
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser
            100                 105                 110
Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
    130                 135                 140
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145                 150                 155                 160
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
                165                 170                 175
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
            180                 185                 190
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
        195                 200                 205
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
    210                 215                 220
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230
<210>3
<211>464
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人构架，小鼠CDRs
<220>
<221>SIGNAL
<222>(1)..(19)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(20)..(134)
<223>重链可变结构域
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(45)..(54)
<223>CDR-H1
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(69)..(85)
<223>CDR-H2
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(118)..(123)
<223>CDR-H3
<220>
<221>DOMAIN
<222>(135)..(242)
<223>CH1结构域
<220>
<221>DOMAIN
<222>(243)..(357)
<223>CH2结构域和铰链
<220>
<221>DOMAIN
<222>(358)..(464)
<223>CH3结构域
<400>3
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1               5                   10                  15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
            20                  25                  30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
        35                  40                  45
Thr Ser Asn Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
    50                  55                  60
Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn
65                  70                  75                  80
Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser
                85                  90                  95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
            100                 105                 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Trp Asp Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
        115                 120                 125
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
    130                 135                 140
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
145                 150                 155                 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
                165                 170                 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
            180                 185                 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
        195                 200                 205
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
    210                 215                 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
225                 230                 235                 240
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
                245                 250                 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
            260                 265                 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
        275                 280                 285
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
    290                 295                 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
305                 310                 315                 320
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
                325                 330                 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
            340                 345                 350
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
        355                 360                 365
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
    370                 375                 380
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385                 390                 395                 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
                405                 410                 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
            420                 425                 430
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
        435                 440                 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
    450                 455                 460
<210>4
<211>233
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人构架，小鼠CDRs
<220>
<221>SIGNAL
<222>(1)..(19)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(20)..(129)
<223>轻链可变结构域
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(43)..(53)
<223>CDR-L1
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(69)..(75)
<223>CDR-L2
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(108)..(116)
<223>CDR-L3
<220>
<221>DOMAIN
<222>(130)..(233)
<223>轻链恒定结构域
<400>4
Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala
1               5                   10                  15
Met Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
            20                  25                  30
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
Ser Asp Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
    50                  55                  60
Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
                85                  90                  95
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser
            100                 105                 110
Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
    130                 135                 140
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145                 150                 155                 160
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
                165                 170                 175
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
            180                 185                 190
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
        195                 200                 205
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
    210                 215                 220
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230
<210>5
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>5
Glu Val His Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Arg Tyr
            20                  25                  30
Leu Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Asn Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ala Asn Trp Asp Gln Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ala
        115
<210>6
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>6
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1                   5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Asn
                20                  25                  30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
            35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
        50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asn Trp Asp Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ala
        115
<210>7
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>7
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Thr Leu Thr Arg Tyr
            20                  25                  30
Leu Met His Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asn Trp Asp Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ala
        115
<210>8
<211>116
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(105)
<223>CDRH3
<400>8
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
            20                  25                  30
Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asn Trp Asp Val Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
        115
<210>9
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>9
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Thr Ser Asn Trp Asp Arg Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>10
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>10
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                 25                 30
Ser Leu Lys Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Glu Ile His Pro Arg Ser Gly Asn Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Asn Trp Asp Leu Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Ile Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>11
<211>118
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(107)
<223>CDRH3
<400>11
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
            20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Thr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gly Met Ile Thr Ala Pro Thr Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
        115
<210>12
<211>118
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(107)
<223>CDRH3
<400>12
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Met Arg Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Ser
            20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Asn Phe
    50                  55                  60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Asn Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gly Met Ile Thr Ala Pro Ser Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
        115
<210>13
<211>119
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(108)
<223>CDRH3
<400>13
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
            20                  25                  30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Phe
        35                  40                  45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Asp Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Pro His Tyr Arg Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Ile Val Ser Ser
        115
<210>14
<211>122
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(111)
<223>CDRH3
<400>14
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Trp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Ala Ser Ala Val Tyr Phe Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Gly Leu His Tyr Phe Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly His Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>15
<211>124
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(113)
<223>CDRH3
<400>15
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Pro Thr Phe
            20                  25                  30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Tyr Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Ser Pro Pro Tyr Tyr Tyr Asp Ser Thr Tyr Trp Ser Phe Asp
            100                 105                 110
Val Trp Gly Thr Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>16
<211>124
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(113)
<223>CDRH3
<400>16
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
             20                  25                  30
Trp Met Asp Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Val Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Tyr Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Thr Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Tyr Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Ser Pro Pro Tyr Tyr Tyr Ala Asn Thr Tyr Trp Ser Phe Asp
            100                 105                 110
Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>17
<211>108
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(34)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(56)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(89)..(97)
<223>CDRL3
<400>17
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Tyr Thr Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>18
<211>108
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(34)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(56)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(89)..(97)
<223>CDRL3
<400>18
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr Arg Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>19
<211>108
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(34)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(56)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(89)..(97)
<223>CDRL3
<400>19
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser His Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>20
<211>108
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(34)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(56)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(89)..(97)
<223>CDRL3
<400>20
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
             100                 105
<210>21
<211>108
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(34)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(56)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(89)..(97)
<223>CDRL3
<400>21
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
        35                  40                  45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Thr Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>22
<211>108
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(34)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(56)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(89)..(97)
<223>CDRL3
<400>22
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>23
<211>112
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(38)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(54)..(60)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(93)..(101)
<223>CDRL3
<400>23
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Ala Tyr Ser Tyr Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
        35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
    50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
                85                  90                  95
Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Pro
            100                 105                 110
<210>24
<211>112
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(38)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(54)..(60)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(93)..(101)
<223>CDRL3
<400>24
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Ala Tyr Ser Tyr Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
        35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
    50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Glu Gly Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
                85                  90                  95
Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Arg
            100                 105                 110
<210>25
<211>112
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(38)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(54)..(60)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(93)..(101)
<223>CDRL3
<400>25
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Val Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Tyr Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
        35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
    50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Ala Glu Asp Ala Thr Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
                85                  90                  95
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Arg
            100                 105                 110
<210>26
<211>112
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(38)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(54)..(60)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(93)..(101)
<223>CDRL3
<400>26
Asp Ile Gly Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ala Phe
            20                  25                  30
Gly Tyr Asn Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
        35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
    50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65                  70                  75                  80
Ala Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
                85                  90                  95
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
            100                 105                 110
<210>27
<211>112
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(38)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(54)..(60)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(93)..(101)
<223>CDRL3
<400>27
Asp Ile Gly Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Tyr Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
        35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
    50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Asn Ile His
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
                85                  90                  95
Glu Leu Pro Leu Ala Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Thr Pro
            100                 105                 110
<210>28
<211>108
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(34)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(56)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(89)..(97)
<223>CDRL3
<400>28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu  Ile
        35                  40                  45
Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Tyr
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>29
<211>170
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>29
Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln
1               5                   10                  15
Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu Val
            20                  25                  30
Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp
        35                  40                  45
Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg
    50                  55                  60
Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly Leu Ile Phe
65                  70                  75                  80
Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu
                85                  90                  95
Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly Leu
            100                 105                 110
Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln Ile
        115                 120                 125
Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe
    130                 135                 140
Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg Val
145                 150                 155                 160
Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro
                165                 170
<210>30
<211>175
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>30
Val Pro Arg Ser Ser Ser Pro Asp Trp Ala Gln Cys Gln Gln Leu Ser
1               5                   10                  15
Arg Asn Leu Cys Met Leu Ala Trp Asn Ala His Ala Pro Ala Gly His
            20                  25                  30
Met Asn Leu Leu Arg Glu Glu Glu Asp Glu Glu Thr Lys Asn Asn Val
        35                  40                  45
Pro Arg Ile Gln Cys Glu Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Lys Asp
    50                  55                  60
Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile Arg Gln Gly Leu Ala Phe Tyr
65                  70                  75                  80
Lys His Leu Leu Asp Ser Asp Ile Phe Lys Gly Glu Pro Ala Leu Leu
                85                  90                  95
Pro Asp Ser Pro Met Glu Gln Leu His Thr Ser Leu Leu Gly Leu Ser
            100                 105                 110
Gln Leu Leu Gln Pro Glu Asp His Pro Arg Glu Thr Gln Gln Met Pro
        115                 120                 125
Ser Leu Ser Ser Ser Gln Gln Trp Gln Arg Pro Leu Leu Arg Ser Lys
    130                 135                 140
Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Leu Ala Ile Ala Ala Arg Val Phe
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Thr Glu Pro Leu Val Pro Thr Ala
                165                 170                 175
<210>31
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>31
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ile Asn Trp Asp Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ala
        115
<210>32
<211>114
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>32
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
            20                  25                  30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Val Pro Asn Tyr Asn Glu Asn Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Ser
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Val Trp Asp Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
        100                 105                 110
Ser Ala
<210>33
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>33
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
            20                  25                  30
Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Thr Lys Asn Trp Asp Lys Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>34
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>34
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Leu Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Ala Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
            20                  25                  30
Leu Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Arg Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asn Trp Asp Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ala
        115
<210>35
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDR3
<400>35
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ala Tyr
            20                  25                  30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Asn Asn Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asn Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Phe Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Leu Asn Trp Asp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Ser
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>36
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
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<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>36
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
            20                  25                  30
Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asn Trp Asp Val Thr Cys Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
           100                 105                 110
Val Ser Ala
        115
<210>37
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
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<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
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<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>37
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Pro Lys Tyr Asn Glu Gln Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asn Trp Asp Val Thr Cys Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ala
        115
<210>38
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
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<220>
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<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>38
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Asn Trp Asp Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>39
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
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<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>39
Glu Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Leu Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ala His
            20                  25                  30
Leu Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Asn Trp Asp Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>40
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
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<220>
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<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>40
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Ala Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Asn Trp Asp Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
           100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>41
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
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<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>41
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Asn Trp Asp Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>42
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
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<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>42
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys His Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Thr Ser Asn Trp Asp Val Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>43
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>43
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Arg Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Asn Trp Asp Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>44
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>44
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Asn Trp Asp Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
           100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>45
<211>115
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRH3
<400>45
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ala Tyr
            20                  25                  30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asn Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Thr Leu Asn Trp Asp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>46
<211>118
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(107)
<223>CDRH3
<400>46
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Thr Ile Ser Arg Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Arg Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Trp Pro Phe Ser Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>47
<211>118
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(107)
<223>CDRH3
<400>47
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
            20                  25                  30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Thr Ile Ser Arg Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Val Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ser Arg Trp Pro Phe Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>48
<211>118
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(107)
<223>CDRH3
<400>48
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Thr Ile Ser Arg Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Asn Asn Asn Leu Phe
65                  70                  75                  80
Leu Arg Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Trp Pro Phe Ser Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>49
<211>108
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(34)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(56)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(89)..(97)
<223>CDRL3
<400>49
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Tyr
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>50
<211>108
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<213>小鼠(Mus musculus)
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Tyr
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>51
<211>108
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Glu Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Thr Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>53
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<400>53
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Tyr
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>54
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<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
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<222>(24)..(34)
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<220>
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<222>(89)..(97)
<223>CDRL3
<400>54
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr His Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>55
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<222>(89)..(97)
<223>CDRL3
<400>55
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser  Ile Asn Ser Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>56
<211>114
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
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<221>DOMAIN
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<400>56
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Ile Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Tyr Ser
            20                  25                  30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Arg Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
                85                  90                  95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105                 110
Lys Arg
<210>57
<211>114
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<213>小鼠(Mus musculus)
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<223>CDRL3
<400>57
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Val Ala Val Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
            20                  25                  30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Thr Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
                85                  90                  95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105                 110
Lys Arg
<210>58
<211>114
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(40)
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<221>DOMAIN
<222>(56)..(62)
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<220>
<221>DOMAIN
<222>(95)..(103)
<223>CDRL3
<400>58
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Val Ala Val Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
            20                  25                  30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Val Arg Ala Glu Asp Leu Ala Phe Tyr Tyr Cys Gln Gln
                85                  90                  95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105                 110
Lys Arg
<210>59
<211>114
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(40)
<223>CDRL1
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<221>DOMAIN
<222>(56)..(62)
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<220>
<221>DOMAIN
<222>(95)..(103)
<223>CDRL3
<400>59
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Gln Thr Val Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
            20                  25                  30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile His Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln
                85                  90                  95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105                 110
Lys Arg
<210>60
<211>114
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(40)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(56)..(62)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(95)..(103)
<223>CDRL3
<400>60
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
            20                  25                  30
Thr Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
                85                  90                  95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105                 110
Lys Arg
<210>61
<211>114
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(40)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(56)..(62)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(95)..(103)
<223>CDRL3
<400>61
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Val Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
            20                  25                  30
Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Ser Gln Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
                85                  90                  95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105                 110
Lys Arg
<210>62
<211>114
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(40)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(56)..(62)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(95)..(103)
<223>CDRL3
<400>62
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Val Ala Val Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Asn Leu Leu Tyr Ser
            20                  25                  30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Val Arg Ala Glu Asp Leu Ala Phe Tyr Tyr Cys Gln Gln
                85                  90                  95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105                 110
Lys Arg
<210>63
<211>112
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(38)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(54)..(60)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(93)..(101)
<223>CDRL3
<400>63
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Phe Ala Val Ala Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Asp Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
        35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro Ala
    50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
                85                  90                  95
Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105                 110
<210>64
<211>112
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(38)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(54)..(60)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(93)..(101)
<223>CDRL3
<400>64
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Asp Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
        35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
    50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
                85                  90                  95
Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg Arg
            100                 105                 110
<210>65
<211>112
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(38)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(54)..(60)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(93)..(101)
<223>CDRL3
<400>65
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ala Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
            20                 25                 30
Asp Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
        35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro Ala
    50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
                85                  90                  95
Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105                 110
<210>66
<211>10
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>66
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Leu Met His
1               5                   10
<210>67
<211>17
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>67
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>68
<211>6
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>68
Asn Trp Asp Val Gly Tyr
1               5
<210>69
<211>11
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>69
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His
1               5                   10
<210>70
<211>17
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>70
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>71
<211>15
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>71
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Asp Tyr Ser Tyr Met His
1               5                   10                  15
<210>72
<211>7
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>72
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1               5
<210>73
<211>7
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>73
Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser
1               5
<210>74
<211>7
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>74
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1               5
<210>75
<211>9
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>75
Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe Thr
1               5
<210>76
<211>9
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>76
Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr
1               5
<210>77
<211>9
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>77
Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Tyr Thr
1               5
<210>78
<211>10
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>VARIANT
<222>(1)..(1)
<223>可以是Gly或Ala
<220>
<221>VARIANT
<222>(2)..(2)
<223>可以是Tyr或His
<220>
<221>VARIANT
<222>(3)..(3)
<223>可以是Thr或Ser
<220>
<221>VARIANT
<222>(4)..(4)
<223>可以是Phe或Leu
<220>
<221>VARIANT
<222>(6)..(6)
<223>可以是Ser，Arg，Ala或Thr
<220>
<221>VARIANT
<222>(7)..(7)
<223>可以是Tyr，Asn或His
<220>
<221>VARIANT
<222>(8)..(8)
<223>可以是Leu，Asn或Val
<220>
<221>VARIANT
<222>(9)..(9)
<223>可以是Leu，Met或Ile
<220>
<221>VARIANT
<222>(9)..(9)
<223>可以是Lys或His
<220>
<221>misc_feature
<222>(10)..(10)
<223>Xaa可以是任意天然存在的氨基酸
<400>78
Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1               5                   10
<210>79
<211>17
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>VARIANT
<222>(5)..(5)
<223>可以是Tyr或Asn
<220>
<221>VARIANT
<222>(7)..(7)
<223>可以是Asp，Gly或Ala
<220>
<221>VARIANT
<222>(8)..(8)
<223>可以是Ile，Gly或Val
<220>
<221>VARIANT
<222>(9)..(9)
<223>可以是Thr或Pro
<220>
<221>VARIANT
<222>(10)..(10)
<223>可以是Asn或Lys
<220>
<221>VARIANT
<222>(13)..(13)
<223>可以是Glu或Gln
<220>
<221>VARIANT
<222>(14)..(14)
<223>可以是Asn或Lys
<220>
<221>VARIANT
<222>(16)..(16)
<223>可以是Arg或Lys
<220>
<221>VARIANT
<222>(17)..(17)
<223>可以是Gly或His
<400>79
Tyr Ile Asn Pro Xaa Asn Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Asn Xaa Xaa Phe Xaa
1               5                   10                  15
Xaa
<210>80
<211>6
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>VARIANT
<222>(4)..(4)
<223>可以是Val，Arg，Leu，Gln或Phe
<220>
<221>VARIANT
<222>(5)..(5)
<223>可以是Gly，Ala，Asp或Thr
<220>
<221>VARIANT
<222>(6)..(6)
<223>可以是Tyr，Cys of Phe
<400>80
Asn Trp Asp Xaa Xaa Xaa
1               5
<210>81
<211>11
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>VARIANT
<222>(5)..(5)
<223>可以是Ser，Thr或Arg
<220>
<221>VARIANT
<222>(7)..(7)
<223>可以是Ser或Arg
<400>81
Arg Ala Ser Gln Xaa Ile Xaa Asp Tyr Leu His
1               5                   10
<210>82
<211>17
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>VARIANT
<222>(5)..(5)
<223>可以是Ser，Asn或Thr
<220>
<221>VARIANT
<222>(10)..(10)
<223>可以是Ser或Thr
<220>
<221>VARIANT
<222>(11)..(11)
<223>可以是Asn或Ser
<220>
<221>VARIANT
<222>(15)..(15)
<223>可以是Phe或Tyr
<400>82
Lys Ser Ser Gln Xaa Leu Leu Tyr Ser Xaa Xaa Gln Lys Asn Xaa Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>83
<211>15
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>VARIANT
<222>(8)..(8)
<223>可以是Thr或Ala
<220>
<221>VARIANT
<222>(9)..(9)
<223>可以是Ser或Phe
<220>
<221>VARIANT
<222>(10)..(10)
<223>可以是Asp，Gly或Ala
<220>
<221>VARIANT
<222>(12)..(12)
<223>可以是Ser或Asn
<220>
<221>VARIANT
<222>(13)..(13)
<223>可以是Tyr或Phe
<220>
<221>VARIANT
<222>(14)..(14)
<223>可以是Met，Phe或Leu
<220>
<221>VARIANT
<222>(15)..(15)
<223>可以是His或Asn
<400>83
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa
1               5                   10                  15
<210>84
<211>7
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>VARIANT
<222>(1)..(1)
<223>可以是Tyr或Phe
<220>
<221>VARIANT
<222>(2)..(2)
<223>可以是Ala或Thr
<400>84
Xaa Xaa Ser Gln Ser Ile Ser
1               5
<210>85
<211>7
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>VARIANT
<222>(2)..(2)
<223>可以是Ala或Thr
<220>
<221>VARIANT
<222>(6)..(6)
<223>可以是Lys或Glu
<400>85
Trp Xaa Ser Thr Arg Xaa Ser
1               5
<210>86
<211>7
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>VARIANT
<222>(6)..(6)
<223>可以是Glu或Asp
<400>86
Leu Ala Ser Asn Leu Xaa Ser
1               5
<210>87
<211>9
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>VARIANT
<222>(8)..(8)
<223>可以是Phe或Tyr
<400>87
Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Xaa Thr
1               5
<210>88
<211>9
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>VARIANT
<222>(1)..(1)
<223>可以是Gln或His
<400>88
Xaa Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr
1               5
<210>89
<211>9
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<220>
<221>VARIANT
<222>(8)..(8)
<223>可以是Tyr，Leu或Trp
<400>89
Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Xaa Thr
1               5
<210>90
<211>118
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人构架，啮齿类动物CDRs
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(107)
<223>CDRH3
<400>90
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Thr Ile Ser Arg Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Trp Pro Phe Ser Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>91
<211>114
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人构架，啮齿类动物CDRs
<220>
<221>DOMAIN
<222>(26)..(35)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(50)..(66)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(99)..(104)
<223>CDRL3
<400>91
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Asp Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
        35                  40                  45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Asp Ser Gly Ile Pro Asp
    50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65                  70                  75                  80
Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
                85                  90                  95
Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            100                 105                 110
Thr Val
<210>92
<211>115
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人构架，啮齿类动物CDRs
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(38)
<223>CDRH1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(54)..(60)
<223>CDRH2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(93)..(101)
<223>CDRH3
<400>92
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Ala Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asn Trp Asp Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>93
<211>116
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人构架，啮齿类动物CDRs
<220>
<221>DOMAIN
<222>(24)..(40)
<223>CDRL1
<220>
<221>DOMAIN
<222>(56)..(62)
<223>CDRL2
<220>
<221>DOMAIN
<222>(95)..(103)
<223>CDRL3
<400>93
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
            20                  25                  30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
                85                  90                  95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
            100                 105                 110
Lys Arg Thr Val
        115

Claims (32)

1.一种与人IL-23结合的结合化合物，其包含：
至少1个抗体轻链可变区，或其结合片段，包含选自SEQ ID NOs：81-89的至少1个CDR序列；和
至少1个抗体重链可变区，或其结合片段，包含选自SEQ ID NOs：78-80的至少1个CDR序列。
2.权利要求1的结合化合物，其中：
所述抗体轻链可变区，或其结合片段，包含选自SEQ ID NOs：81-89的至少2个CDR序列；和
所述抗体重链可变区，或其结合片段，包含选自SEQ ID NOs：78-80的至少2个CDR序列。
3.权利要求1的结合化合物，其中：
所述抗体轻链可变区，或其结合片段，具有选自SEQ ID NOs：81-89的至少3个CDR序列；和
所述抗体重链可变区，或其结合片段，具有选自SEQ ID NOs：78-80的至少3个CDR序列。
4.权利要求3的结合化合物，其包含：
来自SEQ ID NOs：81-83的至少1个CDRL1；
来自SEQ ID NOs：84-86的至少1个CDRL2；和
来自SEQ ID NOs：87-89的至少1个CDRL3。
5.权利要求4的结合化合物，其包含：
来自SEQ ID NOs：69-71的至少1个CDRL1；
来自SEQ ID NOs：72-74的至少1个CDRL2；和
来自SEQ ID NOs：75-77的至少1个CDRL3。
6.一种与人IL-23结合的结合化合物，其包含：
抗体轻链可变区，或其结合片段，包含：
来自SEQ ID NOs：69-71或其变体的至少1个CDRL1；
来自SEQ ID NOs：72-74或其变体的至少1个CDRL2；
来自SEQ ID NOs：75-77或其变体的至少1个CDRL3；和
抗体重链可变区，或其片段，包含SEQ ID NOs：66-68的CDR序列或其变体，
其中所述变体包含最高达5个保守修饰的氨基酸置换。
7.权利要求6的结合化合物，其中：
CDRL1包含SEQ ID NO：69的所述序列或其变体；
CDRL2包含SEQ ID NO：72的所述序列或其变体；和
CDRL1包含SEQ ID NO：75的所述序列或其变体。
8.一种与人IL-23结合的结合化合物，其包含：
抗体轻链可变区，或其结合片段，包含SEQ ID NO：2或4的残基20-129的序列，或其变体；和
抗体重链可变区，或其结合片段，包含SEQ ID NO：1或3的残基20-134的序列，或其变体；
其中所述变体包含最高达20个保守修饰的氨基酸置换。
9.权利要求8的结合化合物，其中所述结合化合物是包含下述的抗体或其结合片段：
包含SEQ ID NO：2或4的残基20-129的轻链可变区；和
包含SEQ ID NO：1或3的残基20-134的重链可变区。
10.权利要求9的结合化合物，其包含：
基本上由SEQ ID NO：2的成熟形式(残基20-233)组成的轻链；和
基本上由SEQ ID NO：1的成熟形式(残基20-464)组成的重链。
11.一种结合化合物，其在包含SEQ ID NO：29的残基82-95或残基133-140的表位处与人IL-23结合。
12.权利要求11的结合化合物，其中所述结合化合物与包含SEQ IDNO：29的残基82-95和残基133-140的表位结合。
13.权利要求12的结合化合物，其中所述结合化合物与包含SEQ IDNO：29的残基E82、G86、S87、D88、T91、G92、E93、P94、S95、H106、P133、S134、Q135、P136、W137、R139和L140的表位结合。
14.一种与人IL-23结合的结合化合物，其包含：
与SEQ ID NO：2或4的残基20-129具有至少90％同源性的轻链可变区；和
与SEQ ID NO：1或3的残基20-134具有至少90％同源性的重链可变区。
15.一种抗体，其在交叉阻断测定中能够阻断权利要求4的结合化合物与人IL-23的结合。
16.权利要求4的结合化合物，其中所述结合化合物阻断IL-23介导的活性。
17.一种分离的核酸，其编码权利要求4的结合化合物的至少1个所述轻链可变区或重链可变区。
18.一种表达载体，其包含与控制序列可操作地连接的权利要求17的核酸，当用所述载体转染宿主细胞时，所述控制序列由所述宿主细胞识别。
19.一种宿主细胞，其包含权利要求18的表达载体。
20.一种生产多肽的方法，其包括：
在其中核酸序列表达的条件下在培养基中培养权利要求19的宿主细胞，从而生产包含轻和重链可变区的多肽；和
从所述宿主细胞或培养基中回收所述多肽。
21.权利要求4的结合化合物，其进一步包含重链恒定区，所述重链恒定区包含γ1人重链恒定区或其变体，其中所述变体包含最高达20个保守修饰的氨基酸置换。
22.权利要求4的结合化合物，其进一步包含重链恒定区，所述重链恒定区包含γ4人重链恒定区或其变体，其中所述变体包含最高达20个保守修饰的氨基酸置换。
23.权利要求4的结合化合物，其中所述结合化合物是选自Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv、F(ab’)2和双抗体的抗体片段。
24.一种抑制人受试者中的免疫应答的方法，其包括以有效阻断IL-23的生物学活性的量给有此需要的受试者施用对IL-23特异的抗体，或其结合片段，其中所述抗体是权利要求4的抗体。
25.权利要求24的方法，其中所述免疫应答是炎症应答。
26.权利要求25的方法，其中所述受试者患有选自关节炎、牛皮癣和炎性肠病的病症。
27.权利要求24的方法，其中所述免疫应答是自身免疫应答。
28.权利要求27的方法，其中所述受试者患有选自多发性硬化、全身性红斑狼疮和糖尿病的病症。
29.权利要求24的方法，其中所述受试者患有癌症。
30.权利要求24的方法，其进一步包括施用免疫抑制剂或抗炎剂。
31.一种组合物，其包含与药学上可接受的载体或稀释剂组合的权利要求4的结合化合物。
32.权利要求31的组合物，其进一步包含免疫抑制剂或抗炎剂。
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