CN101294176B - 用核糖醇发酵液生物转化制备l-核糖的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用核糖醇发酵液生物转化制备L-核糖的方法，包括下述步骤：(1)核糖醇发酵液的制备；(2)弗氏葡萄糖杆菌细胞催化反应酶液的制备：将菌种弗氏葡萄糖杆菌(Gluconobacter frateurri ATCC 49207)从斜面转接到种子液中培养18～48h；(3)将步骤(2)制备的弗氏葡萄糖杆菌种子液接入所述步骤(1)制备的溶液中进行生物转化；(4)经离心分离除菌、活性炭脱色、减压蒸馏浓缩、色谱分离树脂柱层析、层析液浓缩和有机溶媒结晶后得到高纯度的L-核糖。本发明其原料利用率高、收率高、生产成本较低、无需用有机溶剂处理弗氏葡萄糖杆菌细胞，经济环保，产品质量稳定。

Description

用核糖醇发酵液生物转化制备L-核糖的方法

技术领域

本发明属于生物化工技术领域，特别涉及采用微生物细胞催化核糖醇发酵液进行生物转化制备L-核糖的方法。

背景技术

L-核糖是D-核糖的手性对映异构体，在自然界和生物体内并不存在，是一种价格极其昂贵的非天然糖。研究表明，L-核糖本身具有一些特殊的功效，它可以增加肿瘤细胞的死亡率、减少肿瘤细胞的扩散和延缓恶性肿瘤的生长，特别地，L-核糖不但本身对于HIV病毒具有较好的抑制作用，而且广泛用于合成具有抗病毒活性的核苷类化合物，如临床前研究表明稀有L-核糖的改性核苷衍生物1-(2-氟-5-甲基-β-L-阿拉伯-呋喃糖)尿嘧啶(L-FMAU)能有效地抗肝炎B(HBV)病毒、β-L-5-氟-2’，3’-双脱氧胞苷(β-L-5FddC)作为抗病毒剂具有很好的活性，且对人体细胞的毒性比相应的D-核糖衍生物大大降低。另外，L-核糖的衍生物2-脱氧-L-核糖与腺嘌呤等有机碱形成的核苷衍生物在癌症、乙肝等疾病的治疗方面也具有很大的应用潜能。

L-核糖的化学合成研究报道较多，在合成步骤与收率等方面均有了较大提高，但反应条件和所用试剂仍然要求较高，合成过程涉及大量有机溶剂的使用对环境也有不利的影响，因而难以适应绿色工业化生产的要求。微生物酶法具有高度的立体选择性、且具备反应条件温和、对环境友好等优点，以廉价的糖为原料通过微生物或者它们的酶进行生物转化生产稀有糖类已经成为国内外的研究热点。

目前，国内尚未有采用微生物酶法制备L-核糖的报道，利用微生物生物转化法合成L-核糖在国外已经引起广大研究者的兴趣，近十年来陆续出现相关的研究报道。1996年，日本学者Shimonishi等从嗜精不动杆菌DL-28(Acinetobacter sp.DL-28)发酵液中分离纯化得到了L-核糖异构酶，此后Ahmed等通过实验进一步分析了该酶的反应特征，它分别在35℃和40℃下表现出最高的稳定性和活性，可以催化D-甘露糖、D-来苏糖、和L-核糖的异构化反应，酶催化反应为可逆平衡反应，其中对L-核糖的异构化具有最高的选择性。1999年，Ahmed等进一步利用纹膜醋酸杆菌(Acetobacter aceti IFO3281)的静息细胞将核糖醇进行微生物氧化反应，氧化产物L-核酮糖再以嗜精不动杆菌DL-28的L-核糖异构化酶进行微生物异构化制备L-核糖，其中的氧化转化率达98％，而异构化转化率为70％。此外，更经济的策略是直接将葡萄糖通过微生物发酵生成核糖醇，再经微生物氧化、微生物异构化和分离提纯的过程合成L-核糖。如2002年Kawaguchi等的专利(USA 6348326)报道了L-核糖的微生物合成及分离提纯，将原料葡萄糖在微生物作用下发酵制备得到核糖醇，含核糖醇的发酵液进一步通过甲苯处理过的弗氏葡萄糖杆菌(Gluconobacter frateurri)静息细胞催化作用氧化成为L-核酮糖，L-核酮糖溶液再通过甲苯处理的凝胶纤维单胞菌(Cellulomonas gelida)的静息细胞催化异构化为L-核糖。粗产品溶液经蒸发浓缩，利用阳离子交换树脂UBK530，以四柱串联的树脂柱处理，再经脱盐、脱色与结晶，得到L-核糖，产品纯度达99％，分离回收率为55.1％，此工艺以葡萄糖为原料制备高价值L-核糖，具有较好的工业化前景，但制备过程涉及有机溶剂甲苯等的使用对环保有一定的影响，且分离收率不高。

2007年，国际专利(WO 2007/021879 A2)公开了基因工程菌细胞催化核糖醇制备L-核糖的新技术，将洋芹菜中提取的甘露醇脱氢酶基因在大肠杆菌BL21中表达。当核糖醇浓度为2％时，用构建的工程菌细胞催化反应48h，可将约25％的核糖醇转化成L-核糖。2008年，Woodyer等的文献进一步报道重组甘露醇脱氢酶基因的大肠杆菌BL21细胞催化制备L-核糖的研究结果：反应体系中添加5-500uM ZnCl₂和5g/L的甘油均可提高L-核糖的生产；在优化的条件下，放大至1升发酵反应时，底物核糖醇(浓度100g/L)在反应72h后55％转化成L-核糖。通过基因工程菌将核糖醇生物转化制备L-核糖的转化率有待于进一步提高，同时生物转化所需时间也较长；此外，由于核糖醇本身原料价格相对较高，与以廉价的葡萄糖为原料相比，以核糖醇为原料制备L-核糖显然不经济。

事实上，Kawaguchi等以葡萄糖为原料通过三步生物法制备L-核糖时，L-核酮糖异构化为L-核糖属于可逆反应，其异构化转化率仅为70％。此外，其产品的分离收率也较低。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种用核糖醇发酵液生物转化制备L-核糖的方法。

本发明的技术方案概述如下：

用核糖醇发酵液生物转化制备L-核糖的方法，包括下述步骤：

(1)核糖醇发酵液的制备：以葡萄糖为原料，通过菌种发酵生产核糖醇，除去菌体，稀释至核糖醇含量为5～50g/L，121℃下灭菌15min；

(2)弗氏葡萄糖杆菌细胞催化反应酶液的制备：将菌种弗氏葡萄糖杆菌(Gluconobacterfrateurri ATCC 49207)从斜面转接到种子液中培养18～48h；

(3)将步骤(2)制备的弗氏葡萄糖杆菌种子液按1％～20％的体积比接入所述步骤(1)制备的溶液中，调节pH值为4.0～7.0、在转速为100～500rpm、通气流量为0.1～1.5vvm的条件下进行生物转化18～48h；

(4)将生物转化后的溶液经离心分离除菌、活性炭脱色、减压蒸馏浓缩、色谱分离树脂柱层析、层析液浓缩和有机溶媒结晶后得到高纯度的L-核糖。

优选的是所述步骤(1)为：以葡萄糖为原料，选高渗酵母球头三型孢菌(Trichosporonoides oedocephalis ATCC 16958)为出发菌株，经斜面培养、种子培养后，在温度25～45℃，pH为4～7的条件下发酵80～160h，葡萄糖完全消耗后，通过离心除去菌体，稀释至核糖醇含量为5～50g/L，121℃下灭菌15min。

所述步骤(2)为：将所述菌种弗氏葡萄糖杆菌从斜面转接到种子液中培养18～48h，所述种子培养基组成为：甘油10～25g/L、玉米浆粉10～25g/L、葡萄糖10～30g/L、NaCl 1～15g/L、核糖醇0.5～5g/L、ZnCl₂ 1～10umol/L和FeCl₃ 1～10umol/L，种子罐的培养温度为25～35℃，通气量为0.5～1.5vvm，转速为100～500rpm。

所述步骤(4)中所述色谱分离树脂为Ca型强酸性阳离子交换树脂。

所述Ca型强酸性阳离子交换树脂可以选：英国产PUROLITE PCR642钙型离子交换树脂，或国产001×7型强酸性阳离子交换树脂经0.5mol/L的CaCl₂水溶液转成Ca型，或D001型强酸性阳离子交换树脂经0.5mol/L的CaCl₂水溶液转成Ca型。

本发明的方法以廉价的葡萄糖为原料制备高价的L-核糖，其原料利用率高、收率高、生产成本较低、无需用有机溶剂(如甲苯)处理弗氏葡萄糖杆菌细胞，无有机溶剂造成的环境污染，产品质量稳定，本发明还提出了用Ca型阳离子交换树脂进行分离纯化L-核糖醇的工艺，分离纯化工艺简单，经济环保，可获得高收率的L-核糖产品，为L-核糖的工业化生产提供一种实用的新途径。

附图说明

图1为本发明的方法制备的L-核糖的红外光谱分析图；

图2为本发明的方法制备的L-核糖的质谱图；

图3为L-核糖的质谱碎片解析示意图；(电离方式：大气压化学电离APCI)

图4为L-核糖的质谱碎片解析示意图；(电离方式：大气压化学电离APCI)。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

用核糖醇发酵液生物转化制备L-核糖的方法，包括下述步骤：

(1)核糖醇发酵液的制备：

斜面培养：

选高渗酵母球头三型孢菌(Trichosporonoides oedocephalis ATCC 16958)为出发菌株，进行斜面培养，30℃恒温培养四天；其中斜面培养基组成为：葡萄糖20g/L、琼脂15g/L、土豆块300g/L(通过加热煮成土豆泥)；

种子培养：

将斜面培养后的高渗酵母球头三型孢菌种接入种子培养液中培养36h，种子培养基组成为：葡萄糖200g/L、酵母膏30g/L，种子培养采用有氧培养，使用500mL三角摇瓶，装液量为100mL，培养温度为30℃，摇床转速为180rpm；

发酵培养：

将种子培养液按5％的体积比转接到发酵罐中，发酵培养采用50L发酵罐，装液量为30L，其中发酵培养基组成为：葡萄糖100g/L、酵母膏100g/L，NaCl 5g/L、MgSO₄ 5g/L。发酵培养温度为30℃，pH为5.0，发酵过程通气量为1vvm，搅拌转速为350rpm，发酵99h葡萄糖完全消耗。液相色谱分析核糖醇含量为35g/L，发酵液经离心分离除去菌体后再稀释至核糖醇含量为15g/L，121℃下灭菌15min；

(2)弗氏葡萄糖杆菌细胞催化反应酶液的制备：

斜面培养：

将菌种弗氏葡萄糖杆菌(Gluconobacter frateurri ATCC 49207)为出发菌株，进行斜面培养，30℃恒温培养四天；斜面培养基为：山梨糖50g/L，酵母浸粉10.0g/L，蛋白胨10.0g/L，琼脂粉，pH值为6.0。

生物酶反应种子液培养：

将弗氏葡萄糖杆菌从斜面转接到500mL摇瓶中，种子液装液量为100mL，在30℃、摇床转速180rpm条件下培养24h后转接至装有种子液的7-L发酵罐中培养，发酵罐装液量为5L，在30℃、通气量为1vvm、转速200rpm条件下培养24h后备用，其中种子培养基的组成为(g/L)：甘油15、玉米浆粉15、葡萄糖20、NaCl 5、核糖醇2，此外添加ZnCl₂ 10umol/L，FeCl₃ 5umol/L；

(3)生物细胞催化酶反应

将步骤(1)制得的核糖醇发酵稀释液装入50L发酵罐中，装液量为30L，并在121℃下灭菌15min，将步骤(2)培养好的5L弗氏葡萄糖杆菌酶反应种子液全部转入30L上述核糖醇稀释液中，在30℃、转速350rpm、控制pH值为5.0、通气量为1vvm的条件下生物转化30h，核糖醇完全转化，生物转化液中含L-核糖和L-核酮糖，其中液相色谱分析核糖醇浓度为7.43g/L。

(4)L-核糖分离纯化及结构确证

将步骤(3)的反应液经离心分离(5000g，10min)除去菌体后，添加千分之三的活性炭(质量比)，在60℃下进行搅拌脱色1h，过滤除去活性炭后减压浓缩至原体积的10％。取浓缩液置于钙型强酸性阳离子树脂交换柱中进行分离(PUROLITE PCR642钙型离子交换树脂)，树脂柱长为4m，柱内径为16cm，去离子水洗脱流速为2L/h，将含L-核糖的洗脱液收集，减压浓缩成糖浆，添加3质量倍的无水乙醇及少量L-核糖晶种，在4℃下放置24h后析出L-核糖晶体，晶体经冷乙醇洗涤干燥后测定其纯度为99％，产品比旋光度为 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{20}=+18.5,$ 红外光谱(图1)及质谱分析(图2、图3、图4)进一步确证结构(其中m/z：149.1为准分子离子峰[M-H]^-，m/z：131.1为[M-H₂O]^-，m/z：113.1为[M-2H₂O]^-)。

实施例2

(1)核糖醇发酵液的制备

将高渗酵母球头三型孢菌(Trichosporonoides oedocephalis ATCC 16958)菌种接入装有2.0L种子培养液的7-L发酵罐中，在30℃、通气量为1vvm、转速200rpm的条件下培养48h，然后将2L种子液转接入装有30L发酵液的50L发酵罐进行核糖醇的发酵制备，其中发酵液组成为：葡萄糖质量百分含量为10％，酵母膏质量百分含量为2％、NaCl含量为0.5g/L、MgSO₄含量为0.5g/L，及泡敌3mL。发酵条件为搅拌转速350rpm、温度30℃、空气流量为1vvm，发酵至葡萄糖完全消耗即终止，液相色谱分析其中核糖醇浓度为25g/L；

(2)L-核糖的制备反应

首先将弗氏葡萄糖杆菌从斜面转接到500mL摇瓶中，种子液装液量为100mL，在30℃、摇床转速180rpm条件下培养24h后转接至装有种子液的7L发酵罐中培养，发酵罐装液量为5L，在30℃、转速200rpm条件下培养24h后备用。其中种子培养基的组成为(g/L)：甘油15、玉米浆粉15、葡萄糖20、NaCl 5、核糖醇2，此外添加ZnCl₂ 10umol/L，FeCl₃5umol/L。然后，将除去菌体的核糖醇发酵液稀释至含核糖醇浓度为15g/L后装入50L发酵罐中，装液量为30L，并在121℃下灭菌15min。最后将培养好的5L弗氏葡萄糖杆菌酶反应种子液全部转入30L上述核糖醇稀释液中，在30℃、转速350rpm、控制pH值为5.0、通气量为1vvm的条件下生物转化30h，核糖醇完全转化，生物转化液中含L-核糖和L-核酮糖，其中液相色谱分析核糖醇浓度为7.43g/L；

(3)L-核糖分离纯化及结构确证

将上述(2)步的反应液经离心分离(5000g，10min)除去菌体后，添加千分之三(质量含量)的活性炭在60℃下进行搅拌脱色1h，过滤除去活性炭后减压浓缩至原体积的10％。取浓缩液置于强酸性型阳离子树脂交换柱中进分离(PUROLITE PCR642钙型离子交换树脂)，树脂柱长为4m，柱内径为16cm，去离子水洗脱流速为2L/h。将含L-核糖的洗脱液收集，减压浓缩成糖浆，添加3倍的无水乙醇及少量L-核糖晶种，在4℃下放置24h后析出L-核糖晶体，晶体经冷乙醇洗涤干燥后测定其纯度为99％。

实施例3

用核糖醇发酵液生物转化制备L-核糖的方法，包括下述步骤：

(1)核糖醇发酵液的制备：

斜面培养：

选高渗酵母球头三型孢菌(Trichosporonoides oedocephalis ATCC 16958)为出发菌株，进行斜面培养，25℃恒温培养四天；其中斜面培养基组成为：葡萄糖20g/L、琼脂15g/L、土豆块300g/L(通过加热煮成土豆泥)；

种子培养：

将斜面培养后的高渗酵母球头三型孢菌种接入种子培养液中培养36h，种子培养基组成为：葡萄糖200g/L、酵母膏30g/L，种子培养采用有氧培养，使用500mL三角摇瓶，装液量为100mL，培养温度为30℃，摇床转速为180rpm；

发酵培养：

将种子培养液按5％的体积比转接到发酵罐中，发酵培养采用50L发酵罐，装液量为30L，其中发酵培养基组成为：葡萄糖100g/L、酵母膏100g/L，NaCl 5g/L、MgSO₄ 5g/L。发酵培养温度为25℃，pH为4.0，发酵过程通气量为1vvm，搅拌转速为350rpm，发酵160h葡萄糖完全消耗。液相色谱分析核糖醇含量，发酵液经离心分离除去菌体后再稀释至核糖醇含量为5g/L，121℃下灭菌15min；

(2)弗氏葡萄糖杆菌细胞催化反应酶液的制备：

斜面培养：

将菌种弗氏葡萄糖杆菌(Gluconobacter frateurri ATCC 49207)为出发菌株，进行斜面培养，30℃恒温培养四天；斜面培养基为：山梨糖50g/L，酵母浸粉10.0g/L，蛋白胨10.0g/L，琼脂粉，pH值为6.0。

生物酶反应种子液培养：

将弗氏葡萄糖杆菌从斜面转接到500mL摇瓶中，种子液装液量为100mL，在30℃、摇床转速180rpm条件下培养48h后转接至装有种子液的7L发酵罐中培养，发酵罐装液量为5L，在35℃、通气量为1.5vvm、转速500rpm条件下培养48h后备用，其中种子培养基的组成为(g/L)：甘油25、玉米浆粉10、葡萄糖30、NaCl 15、核糖醇0.5，此外添加ZnCl₂ 1umol/L，FeCl₃ 10umol/L；

(3)生物细胞催化酶反应

将步骤(1)制得的核糖醇发酵液稀释液装入50L发酵罐中，装液量为30L，并在121℃下灭菌15min，将步骤(2)培养好的0.3L弗氏葡萄糖杆菌酶反应种子液全部转入30L上述核糖醇稀释液中，在30℃、转速500rpm、控制pH值为4.0、通气量为0.1vvm的条件下生物转化48h，核糖醇完全转化，生物转化液中含L-核糖和L-核酮糖；

(4)L-核糖分离纯化及结构确证

将上述(3)步的反应液经离心分离(5000g，10min)除去菌体后，添加干分之三的活性炭(质量比)，在60℃下进行搅拌脱色1h，过滤除去活性炭后减压浓缩至原体积的10％。取浓缩液置于国产001×7型强酸性阳离子交换树脂经0.5mol/L的CaCl₂水溶液转成Ca型进行分离，树脂柱长为4m，柱内径为16cm，去离子水洗脱流速为2L/h，将含L-核糖的洗脱液收集，减压浓缩成糖浆，添加2质量倍的无水乙醇及少量L-核糖晶种，在4℃下放置24h后析出L-核糖晶体，晶体经冷乙醇洗涤干燥后测定其纯度。

实施例4

用核糖醇发酵液生物转化制备L-核糖的方法，包括下述步骤：

(1)核糖醇发酵液的制备：

斜面培养：

选高渗酵母球头三型孢菌(Trichosporonoides oedocephalis ATCC 16958)为出发菌株，进行斜面培养，35℃恒温培养四天；其中斜面培养基组成为：葡萄糖20g/L、琼脂15g/L、土豆块300g/L(通过加热煮成土豆泥)；

种子培养：

将斜面培养后的高渗酵母球头三型孢菌种接入种子培养液中培养36h，种子培养基组成为：葡萄糖200g/L、酵母膏30g/L，种子培养采用有氧培养，使用500mL三角摇瓶，装液量为100mL，培养温度为30℃，摇床转速为180rpm；

发酵培养：

将种子培养液按5％的体积比转接到发酵罐中，发酵培养采用50L发酵罐，装液量为30L，其中发酵培养基组成为：葡萄糖200g/L、酵母膏100g/L，NaCl 5g/L、MgSO₄ 5g/L。发酵培养温度为45℃，pH为7.0，发酵过程通气量为1vvm，搅拌转速为350rpm，发酵80h葡萄糖完全消耗。液相色谱分析核糖醇含量为65g/L，发酵液经离心分离除去菌体后再稀释至核糖醇含量为50g/L，121℃下灭菌15min；

(2)弗氏葡萄糖杆菌细胞催化反应酶液的制备：

斜面培养：

将菌种弗氏葡萄糖杆菌(Gluconobacter frateurri ATCC 49207)为出发菌株，进行斜面培养，30℃恒温培养四天；斜面培养基为：山梨糖50g/L，酵母浸粉10.0g/L，蛋白胨10.0g/L，琼脂粉，pH值为6.0。

生物酶反应种子液培养：

将弗氏葡萄糖杆菌从斜面转接到500mL摇瓶中，种子液装液量为100mL，在25℃、摇床转速100rpm条件下培养18h后转接至装有种子液的7L发酵罐中培养，发酵罐装液量为5L，在25℃、通气量为0.5vvm、转速100rpm条件下培养18h后备用，其中种子培养基的组成为(g/L)：甘油10、玉米浆粉25、葡萄糖10、NaCl 1、核糖醇5，此外添加ZnCl₂ 5umol/L，FeCl₃ 1umol/L；

(3)生物细胞催化酶反应

将步骤(1)制得的核糖醇发酵液稀释液装入50L发酵罐中，装液量为30L，并在121℃下灭菌15min，将步骤(2)步培养好的6L弗氏葡萄糖杆菌酶反应种子液全部转入30L上述核糖醇稀释液中，在30℃、转速100rpm、控制pH值为7.0、通气量为1.5vvm的条件下生物转化18h，核糖醇完全转化，生物转化液中含L-核糖和L-核酮糖；

(4)L-核糖分离纯化及结构确证

将步骤(3)的反应液经离心分离(5000g，10min)除去菌体后，添加千分之三的活性炭(质量比)，在60℃下进行搅拌脱色1h，过滤除去活性炭后减压浓缩至原体积的10％。取浓缩液置于D001型强酸性阳离子交换树脂经0.5mol/L的CaCl₂水溶液转成Ca型进行分离，树脂柱长为4m，柱内径为16cm，去离子水洗脱流速为2L/h。将含L-核糖的洗脱液收集，减压浓缩成糖浆，添加4质量倍的无水乙醇及少量L-核糖晶种，在4℃下放置24h后析出L-核糖晶体，晶体经冷乙醇洗涤干燥后测定其纯度。

各实施例中核糖醇发酵液的制备还可以选用Trichosoporonoides madida，Trichosoporonoides nigrescens，Trichosporonoides oedocephalis，Trichosoporonoidesmegachillensis，Trichosporonoides spathulata等菌发酵葡萄糖制备得到。

Claims (4)

1.用核糖醇发酵液生物转化制备L-核糖的方法，其特征是包括下述步骤：

(1)核糖醇发酵液的制备：以葡萄糖为原料，选高渗酵母球头三型孢菌(Trichosporonoidesoedocephalis)ATCC 16958为出发菌株，经斜面培养、种子培养后，在温度25～45℃，pH为4～7的条件下发酵80～160h，葡萄糖完全消耗后，通过离心除去菌体，稀释至核糖醇含量为5～50g/L，121℃下灭菌15min；

(2)弗氏葡萄糖杆菌细胞催化反应酶液的制备：将菌种弗氏葡萄糖杆菌(Gluconobacterfrateurii)ATCC 49207从斜面转接到种子液中培养18～48h；

(3)将步骤(2)制备的弗氏葡萄糖杆菌种子液按1％～20％的体积比接入所述步骤(1)制备的溶液中，调节pH值为4.0～7.0、在转速为100～500rpm、通气流量为0.1～1.5vvm的条件下进行生物转化18～48h；

(4)将生物转化后的溶液经离心分离除菌、活性炭脱色、减压蒸馏浓缩、色谱分离树脂柱层析、层析液浓缩和有机溶媒结晶后得到L-核糖。

2.根据权利要求1所述的一种用核糖醇发酵液生物转化制备L-核糖的方法，其特征是所述步骤(2)为：将所述菌种弗氏葡萄糖杆菌从斜面转接到种子液中培养18～48h，所述种子培养基组成为：甘油10～25g/L、玉米浆粉10～25g/L、葡萄糖10～30g/L、NaCl 1～15g/L、核糖醇0.5～5g/L、ZnCl₂ 1～10umol/L和FeCl₃ 1～10umol/L，种子罐的培养温度为25～35℃，通气量为0.5～1.5vvm，转速为100～500rpm。

3.根据权利要求1所述的一种用核糖醇发酵液生物转化制备L-核糖的方法，其特征是所述步骤(4)中所述色谱分离树脂为Ca型强酸性阳离子交换树脂。

4.根据权利要求3所述的一种用核糖醇发酵液生物转化制备L-核糖的方法，其特征是所述Ca型强酸性阳离子交换树脂为英国产PUROLITE PCR642钙型离子交换树脂，或国产001×7型强酸性阳离子交换树脂经0.5mol/L的CaCl₂水溶液转成Ca型，或D001型强酸性阳离子交换树脂经0.5mol/L的CaCl₂水溶液转成Ca型。

Images