CN101193584A - 用于非侵入性测定皮肤组织胆固醇的方法和设备 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于非侵入性测定皮肤胆固醇的方法和装置设备。特别是，本发明一方面提供了用于将检测器试剂施加到皮肤的被选区的装置。本发明另一方面提供了一种指示装置，以产生与结合在皮肤内的检测器试剂量相当的视觉变化。对于特定的实施例，本发明的方法和装置通常不需要任何仪器，允许本发明适合于进行自我测试，例如，但不局限于，在家庭环境中。为此，本发明尤其用于允许个体评估他们患动脉粥样硬化和相关血管疾病的风险。

Description

用于非侵入性测定皮肤组织胆固醇的方法和设备

本申请要求享有于2005年2月28日提交的美国临时申请No.60/656,381的权益，并且其整个内容作为参考被引入本文。

发明领域

本发明涉及用于非侵入性测定皮肤或皮肤组织胆固醇的方法和设备。尤其是，本发明涉及皮肤样品内胆固醇的直接分析，通常不利用仪器，并因此适合于进行自我测试。特别是，本发明一方面提供了将检测试剂(detector reagent)施加到皮肤的被选区的装置。本发明另一方面提供了一种指示装置，以产生一个与结合在皮肤内的检测试剂量相当的视觉变化。

发明背景

在确定处于患有或正在形成动脉粥样硬化的危险之中的个体以及处于由于高胆固醇含量而引起的类似或其它疾病危险之中的个体时，鉴定具有高皮肤胆固醇的人是有用的。

在北美洲和世界的其它许多地方，由动脉粥样硬化引起的冠状动脉疾病仍然是发病和死亡的第一原因。预防和干预需要经济合算地识别那些具有该疾病的个体以及那些正有风险发生该疾病的个体。因此，人们目前对测定能够预测动脉粥样硬化疾病风险的标记物分子的含量方面具有很大的兴趣。

血浆总胆固醇的含量测定是最广泛使用的用于确定患动脉粥样硬化风险的方法之一。但是，单独的血浆总胆固醇含量不能准确预测风险，并且通过对血浆脂蛋白的测定已经获取了更好的结果。低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)内的胆固醇的测定显示出优于总胆固醇含量的测定。所有的这些测定都需要在长时间空腹后采血，从而使膳食中的胆固醇不发生干扰。另外，采样可能会不舒服，并且带来某些感染的小风险。并且，分析通常需要复杂和昂贵的设备。

在美国专利No.5,340,539中示出了能够允许使用者获取血液胆固醇含量的一种装置的例子。该专利解决了与就诊于医生或诊所相关的一些问题，并且使空腹更便利。但是，仍然需要用刺血针扎刺手指以获得血液样品，对于许多人来说，那可能是不适宜的。

但是，在许多情况下，血浆胆固醇和脂蛋白的含量与动脉粥样硬化疾病的程度不相关。因此，需要分析其它反映动脉粥样硬化程度的标记物分子，并提供对冠状动脉疾病的风险评估。

例如，除了在血浆内发现胆固醇之外，在组织中也出现了大量胆固醇，并且已经显示出组织中增加的含量在动脉粥样硬化的发展中起着至关重要的作用。已经证明组织包括皮肤内的胆固醇的堆积与在动脉壁沉积物内发现的胆固醇量密切相关。因此，皮肤内胆固醇的测定可以反映动脉粥样硬化的程度。实际上，已经显示出皮肤活检样品内的胆固醇含量与动脉粥样硬化相关，并为患有缺血性心脏病的病人提供风险评估(Bouissou H.，De GraeveJ.，等人Ann.Biol.Clin.Vol 40，364-365，1982)。并且，测定从冻干的皮肤活检样品内提取的胆固醇与正常人体内和患缺血性心脏病的病人体内的血清脂类比值相关(YP.Nikitin等人，Kardiologiia，II，48-51，1987)。

获取皮肤活检样品用于皮肤胆固醇测定以进行动脉粥样硬化风险评估的一个缺点是在获取皮肤样品时会疼痛。并且，活检部位的感染风险是可能的。获取皮肤样品一般需要经过训练的专业人员。另外，这种样品包含皮下脂肪和几层皮肤，其中一些是高度血管化的。因此，这些样品包含不同的胆固醇来源，并且不能给予可重复的和可靠的胆固醇分析结果。

在美国专利No.4,458,686中描述了一种直接分析皮肤表面下或其表面上的血液内的各种物质的方法。该专利基于电化学测定产生的氧浓度。但是，对于不通过皮肤扩散的非挥发性物质，需要在皮肤下注入酶以影响皮肤表面的氧变化。该专利公开了使用酶如胆固醇氧化酶以测定胆固醇，但是看起来，其测定的是血液胆固醇而不是皮肤胆固醇。

因此，需要一种简单的方法和装置，用于非侵入性地测定皮肤内的胆固醇，其不受其它胆固醇来源的影响。

发明概述

本发明提供了一种用于非侵入性测定皮肤胆固醇的方法和设备。尤其是，本发明一方面提供了将检测试剂施加到皮肤的被选区的装置。本发明另一方面提供了一种指示装置，以产生一个与结合在皮肤内的检测试剂量相当的视觉变化。对于特定的实施例，本发明的方法和设备通常不需要任何仪器，使得本发明适合于进行自我测试，例如，但不局限于，在家庭环境中。这样，本发明尤其用于允许个体评估他们患动脉粥样硬化和相关血管疾病的风险。

在本发明的一方面中，提供了测定皮肤胆固醇的方法，该方法包括：

a)将检测试剂施加到皮肤的被选区，以便与皮肤内存在的胆固醇结合；

b)将指示器表面施加到皮肤的被选区，该指示器表面具有一种溶液，当该指示器表面与该皮肤被选区接触时，该溶液与检测试剂发生反应，该反应产生一个与结合到皮肤内胆固醇的检测试剂量相当的可见颜色变化；并且

c)分析在指示器表面产生的颜色，以获取皮肤胆固醇的测定。

可以采用毛细作用将该检测试剂施加到皮肤的被选区。在本发明的一种优选实施例中，通过至少一个芯吸元件将检测试剂施加到皮肤的被选区。该芯吸元件可以用检测试剂饱和。在本发明的一个优选实施例中，该芯吸元件由合适的涂敷器固定。

并且，该芯吸元件以一受控量变形，以释放检测试剂。

可以选择检测试剂的浓度，使得当皮肤中存在的胆固醇超过预选阈值时，在步骤b)中就发生可见的颜色变化。

并且，该方法可以包括通过将对照用的检测试剂和测试用的检测试剂施加到皮肤被选区内的两个分开的区域而施加检测试剂。该对照用的检测试剂具有的浓度高于测试用的检测试剂的浓度。对于这个方面，选择测试用的检测试剂浓度，使得当皮肤中存在的胆固醇超过预选阈值时，在步骤b)中就发生可见的颜色变化。

并且，该方法进一步包括在步骤a)之后并在步骤b)之前去除皮肤内未与胆固醇结合的任何多余的检测试剂。可以通过合适的吸附性介质去除该多余的检测试剂。

另外，该指示器表面可以包括一种与检测试剂内的指示成分(reporter component)作用的底物溶液。该指示器表面可以是一个用底物溶液饱和的吸附性材料垫片，该底物溶液与检测试剂内的指示成分发生作用。

并且，该方法可以包括通过反射式分光光度计分析产生的颜色。可选择地，采用比色计分析产生的颜色，例如，诸如，但不局限于，分级的一系列色带。

在本发明的另一方面，提供了一种将检测试剂施加到皮肤的被选区的装置，该装置包括：

a)一个主体；和

b)至少一个涂敷器，在其一末端由主体固定，并具有一个第二末端，以接触皮肤的被选区，涂敷器的第二末端将检测试剂传递到皮肤的被选区。

该涂敷器优选利用毛细作用将检测试剂施加到皮肤的被选区。在一方面中，该涂敷器包括一个芯吸元件。

装置的主体可以包括至少一个凹槽，用于在其中容纳芯吸元件的一个末端。该凹槽具有的深度足以在其中容纳该芯吸元件，使得芯吸元件的第二末端不延伸超出该凹槽的深度。并且，在本发明的一个优选实施例中，一部分凹槽的周长(perimetrical extent)大于芯吸元件的周长。具有较大周长的凹槽部分环绕芯吸元件的第二末端，优选使得在其周围提供一个间隙。

在本发明的一个优选实施例中，芯吸元件为一种纤维塞。该芯吸元件还可以由惰性聚烯烃材料制成。

可选择地，涂敷器可以是一种胶。

涂敷器优选为圆柱形的，但是，在提供两个涂敷器的地方，涂敷器可以相互隔开，使得一个涂敷器添加对照用的检测试剂而第二涂敷器添加测试用的检测试剂，并且每个涂敷器都可以在第二(或上)末端呈现不同的横截面。

该涂敷器可以用检测试剂饱和。

在本发明的另一方面中，提供了一个指示装置，以产生一个与结合在皮肤内的检测试剂量相当的视觉变化。该指示装置包括一个由装置的主体提供的指示器表面，使得该指示器表面可以与皮肤的被选区接触，该指示器表面包含足量的溶液，当该溶液接触与皮肤被选区内的胆固醇结合的检测试剂时起反应，以便在至少一部分指示器表面上产生可见的颜色变化。

该溶液可以是与检测试剂的指示成分起反应的底物溶液。

该指示器表面可以包括一种吸附性材料，优选用该溶液饱和。在一个实施例中，该吸附性材料为一垫片。该垫片可以是编织而成的，或者，可选择地，具有压制的纤维薄片结构，或者由亲水材料制造，或者是基于纤维素的吸附性薄片，或者由玻璃纤维材料制造。

在本发明的另一方面中，提供了一种用于测定皮肤胆固醇的设备，该设备包括：

a)一个主体；

b)至少一个涂敷器，在其一末端由主体固定，并具有一个第二末端，以接触皮肤的被选区，涂敷器的第二末端将检测试剂传递到皮肤的被选区；和

c)一个由主体提供的指示器表面，使得该指示器表面可以与皮肤的被选区接触，该指示器表面包含足量的溶液，当该溶液接触与皮肤的被选区内的胆固醇结合的检测试剂时起反应，以便在至少一部分指示器表面上产生可见的颜色变化。

该涂敷器可以利用毛细作用将检测试剂施加到皮肤的被选区。在一实施例中，该涂敷器包括一个芯吸元件。

另外，该主体可以包括一个外表面和至少一个凹槽，用于在其中容纳芯吸元件的一个末端。尤其是，该凹槽具有的深度足以在其中容纳该芯吸元件，使得芯吸元件的第二末端不延伸超出主体的外表面。并且，一部分凹槽的周长大于芯吸元件的周长，由此，使得凹槽环绕芯吸元件的第二末端，并且，在优选实施例中，在其周围形成一个间隙。

在一个实施例中，芯吸元件为一种纤维塞。可选择地，该芯吸元件由惰性聚烯烃材料制成。

在另一个实施例中，涂敷器可以是一种胶。

在一优选实施例中，芯吸元件可以是圆柱形的。对于其中提供两个涂敷器的实施例，涂敷器可以相互隔开，使得一个涂敷器添加对照用的检测试剂而第二涂敷器添加测试用的检测试剂。对于这种实施例，每个涂敷器都可以在第二末端呈现不同的横截面。

该涂敷器可以用检测试剂饱和。

并且，指示器表面上的溶液可以是与检测试剂的指示成分起反应的底物溶液。

该指示器表面可以包括一种吸附性材料，其在优选实施例中用该溶液饱和。

该吸附性材料可以是一垫片，并且该垫片可以是编织而成的，或者，可选择地，具有压制的纤维薄片结构，或者由亲水材料制造，或者是基于纤维素的吸附性薄片，或者由玻璃纤维材料制造。

在本发明的优选实施例中，主体提供至少一个涂敷器，并且指示器表面位于其相对侧。

进一步地，该设备可以包括一种吸附性介质，该吸附性材料位于主体上，并与该至少一个涂敷器和指示器表面隔开。在一个方面中，该吸附性介质由亲水材料构成。

进一步地，该设备可以包括至少一个位于主体表面上的标记物，该主体提供至少一个涂敷器，该至少一个标记物的形状为在邻近检测试剂已经传递到的皮肤区域的皮肤被选区内形成压痕。由此，该设备可以进一步包括至少一个位于指示器表面上的第二标记物，该至少一个第二标记物在形状上对应于至少一个标记物。

在本发明的另一方面中，提供了用于测定皮肤胆固醇的试剂盒，该试剂盒包括：

a)一个检测试剂来源；

b)一个将检测试剂添加到皮肤被选区的涂敷器；

c)一个当与检测试剂接触时起反应的溶液来源；和

d)一个接收溶液的指示器表面，使得当该指示器表面与皮肤的被选区接触时，该溶液与结合到皮肤内的胆固醇的检测试剂起反应，以便在至少一部分指示器表面上产生可见的颜色变化。

试剂盒的涂敷器优选利用毛细作用将检测试剂施加到皮肤的被选区。该涂敷器可以包括一个芯吸元件，其可以为一种纤维塞，或者，可选择地，由惰性聚烯烃材料制成。进一步地，该涂敷器可以是一种胶。

试剂盒也可以提供两个涂敷器，涂敷器相互隔开，使得一个涂敷器添加对照用的检测试剂而第二涂敷器添加测试用的检测试剂。每个涂敷器都可以在各自的第二末端呈现不同的横截面。

进一步地，涂敷器可以是检测试剂来源，并且，优选用检测试剂饱和。

并且，所述溶液可以是与检测试剂的指示成分起反应的底物溶液，其优选位于指示器表面上，该指示器表面可以是一种吸附性材料。并且，在优选的实施例中，该吸附性材料为溶液来源。进一步，该吸附性材料可以用该溶液饱和。

在本发明的一方面中，试剂盒的吸附性材料可以是一垫片。该垫片可以是编织而成的，或者，可选择地，具有压制的纤维薄片结构，或者由亲水材料制造，或者是基于纤维素的吸附性薄片，或者由玻璃纤维材料制造。

进一步，该试剂盒可以包括一种吸附性介质，并且该吸附性介质可以由亲水材料构成。

并且，试剂盒的涂敷器和指示器表面可以位于装置的相对侧上。可选择地，涂敷器、指示器表面和吸附性介质可以位于装置上。

该试剂盒可以进一步包括一个反射式分光光度计，以分析产生的颜色，或者，可选择地，分析产生的颜色的比色计，例如，但不局限于，分级的一系列色带。

进一步地，提供了一种将检测试剂添加到皮肤被选区以结合皮肤内存在的胆固醇的方法。该方法包括：

a)提供至少一个包含足量检测试剂的涂敷器，该至少一个涂敷器利用毛细作用将检测试剂传递到皮肤的被选区；和

b)用涂敷器接触皮肤的被选区，以便用检测试剂润湿皮肤。

可以通过至少一个芯吸元件将检测试剂添加到皮肤的被选区。并且，该芯吸元件可以用检测试剂饱和。

该芯吸元件以一受控量变形，以释放检测试剂。

该芯吸元件可以由合适的涂敷器固定。

另外，添加检测试剂的方法包括将对照用的检测试剂和测试用的检测试剂施加到皮肤被选区内的两个分开的区域。在一方面中，该对照用的检测试剂具有的浓度高于测试用的检测试剂浓度。

进一步地，本发明还提供了一种方法，以产生与结合到皮肤内胆固醇的检测试剂量对应的可见颜色变化，以测定皮肤胆固醇，该方法包括：

a)将指示器表面施加到皮肤的被选区，该指示器表面具有一种溶液，当该指示器表面与该皮肤的被选区接触时，该溶液与检测试剂发生反应，该反应产生一个与结合到皮肤内胆固醇的检测试剂量相当的可见颜色变化；并且

b)分析在指示器表面产生的颜色，以获取皮肤胆固醇的测定。

该指示器表面可以包含与检测试剂的指示成分起反应的底物溶液。该指示器表面可以是一种由底物溶液饱和的吸附性材料垫片，该底物溶液与检测试剂内的指示成分起反应。

产生的颜色可以由反射式分光光度计分析，或者，可选择地，利用比色计分析，例如分级的一系列色带。

附图简述

为了更好地理解本发明并且更清楚地显示如何将其实施，现将通过举例的方式参照显示本发明一优选实施例的附图，其中：

图1是将检测试剂添加到皮肤被选区的本发明的装置部分的横截面图；

图2是图1的装置的俯视图；

图3是本发明的指示装置部分的俯视图；

图4是本发明的设备的透视图，包括图1的装置和图2的指示装置；

图5是图4的设备的俯视图；

图6是图4的设备的底部平面图；

图7至图12描述了利用图4的设备的本发明的一个方法实施例；和

图7a是沿图7的线7a-7a得到的横截面图。

具体实施方式

本发明提供了用于非侵入性地测定皮肤胆固醇的方法和设备。特别是，本发明一方面提供了一种将检测试剂加到皮肤被选区的装置。本发明的另一方面提供了一指示装置，用以产生与结合在皮肤中的检测试剂量相当的视觉变化。本发明的方法和设备不需要任何仪器，使得本发明适合于自我测试，例如，在家庭环境中，但不限于此。因此，本发明特别用于容许个人评估其患动脉粥样硬化和相关血管疾病的风险，将在下文中变得清楚。

通常，本发明提供了一种测定皮肤胆固醇的方法。该方法包括：施加检测试剂到皮肤的被选区，以结合到皮肤中存在的胆固醇上，该检测试剂包括指示组分；必要时，通过合适的吸附性介质除去过量的检测试剂；施加指示器表面到皮肤的被选区，该指示器表面具有一种溶液，当指示器表面与皮肤的被选区接触时，该溶液与指示成分发生反应，该反应产生相应于结合到皮肤胆固醇上的具有指示成分的检测试剂量的可见颜色变化；并且分析指示器表面产生的颜色变化，从而获得皮肤胆固醇的测量。

应当意识到皮肤的任何区域都可以用于测量，但最合适的是来自手掌表面的皮肤。手掌区域的皮肤没有皮脂腺，其分泌物包含可能影响结果的胆固醇。而且，手掌特别适于通过本发明的装置简单应用和定位，如将在下文进行解释的。后面的说明将以手掌为参照作为被测试的皮肤区。然而，本领域中的普通技术人员应当意识到，该方法并不局限于使用手掌，而是可以应用于皮肤的其它区域。

进一步地，通过使用对胆固醇具有特异性的检测试剂实现对皮肤区域上的胆固醇的分析。而且，检测试剂具有连接的指示成分，其能够在指示成分与合适的底物溶液反应时产生可测量的信号。

施加检测试剂到皮肤的被选区，导致特异性地结合到皮肤中存在的胆固醇组分，并且伴随着结合指示成分。在一种形式的分析中，检测试剂是A-C-B型化合物；其中，A表示特异性的胆固醇结合化合物，B表示指示成分，而C表示连接组分。该类型的试剂在美国专利号No.5,489,510中作了描述，其整体在此作为参考被并入。

A组分可以是任何能识别性结合到皮肤中的胆固醇上的试剂。合适的试剂的例子包括类固醇糖苷、三萜糖苷、疏水的蛋白质、多烯抗菌素、抗胆固醇抗体，但不限于此。

可以使用A-C-B型的化合物，其中，B组分是酶。合适的酶的例子包括过氧化物酶、碱性磷酸酶、尿素酶、半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶以及乙酰基胆碱脂酶，但不限于此。

进一步地，将特异性的胆固醇结合组分A连接到指示成分B的合适的连接组分C包括但不局限于例如零长度的交联剂、同双官能团的交联剂以及异双官能团的交联剂。零长度的交联剂通过在A和B分子之间形成不包含其它原子的键而介导它们之间的连接。同双官能团的交联剂具有两个相同的反应基团，用于连接A和B分子，并且在它们之间形成连接，具有可变数量的原子，取决于所使用的特定同双官能团试剂的长度。类似的，异双官能团的交联剂具有两个的不同官能团，用于连接A和B分子，并且在它们之间形成连接，具有可变数量的原子，取决于所使用的特定异双官能团试剂的长度。C组分也可以是一种聚合交联剂，其具有多个官能团，为同样类型或不同类型，并且能够将多个分子A和B结合到聚合物骨架上。

A-C-B型的特别有用的试剂，例如，其中A是洋地黄皂苷、B是辣根过氧物酶，并且C是马来酐-N-乙烯基吡咯烷酮共聚物。

现在将更加详细地对本发明的装置和仪器的不同方面进行描述。随后将是本发明的方法，其借助于实施例而利用了本文描述的装置和仪器。

图1和2示出了根据本发明一个方面的将检测试剂施加到皮肤的被选区的装置。该装置10包括主体12和至少一个涂敷器14。根据图1和图2的意图，仅显示了一部分主体12。应当意识到主体的形状和结构可以改变。而且，主体能够制造成各种把手型(未示出)，以容许用户容易抓住和使用用于本发明方法的装置。

通过主体12将涂敷器14固定在一端16(图1中示出的涂敷器的下端)。涂敷器的第二端18(图1中示出的涂敷器的上端)设置成与皮肤的被选区进行接触(参见图7a)。通过涂敷器14的第二端18使具有检测试剂的皮肤被选区润湿，如将在下文进行描述的。

在本发明的优选实施方式中，涂敷器14利用毛细作用将检测试剂传递到皮肤的被选区。为了进行自我检测，例如，在家庭环境中，需要将检测试剂施加到操作者皮肤上的有效方法(practical means)，并且不需要测量的和其它的仪器。本发明人已发现通过利用毛细作用将检测试剂稳定地施加到皮肤的限定区域。在图1和2中示出的实施方式中，芯吸元件20用于发挥毛细作用。

对于所示出的实施方式，主体12包括容纳涂敷器14的槽22。特别是，槽22具有下部24和上部26。涂敷器14的末端16可以形成并制造成固定在槽22的下部24，例如，通过摩擦配合，但不限于此。

槽22的上部26的周长大于涂敷器14的周长。特别是，如所示出的，主体12中的槽22的上部26围绕着涂敷器14的第二端18，使得在周围提供了环形的间隙28。

另外，优选实施方式的涂敷器14凹入主体12中，使得涂敷器14的第二端18的接触面17不会延伸高于主体的表面30。

在优选的实施方式中，涂敷器14用检测试剂饱和，以便当接触时将检测试剂传输到皮肤上。当接触时，必须发生检测试剂的传递，从而润湿皮肤，并且相对独立于操作者施加的压力。尽管优选使涂敷器饱和，应当意识到，对于本领域中的普通技术人员来说，涂敷器不需要进行饱和；然而，它需要包含足量的检测试剂，以便当接触时润湿皮肤区。

在本发明中可以使用不同形式的涂敷器14。例如，涂敷器可以是凝胶或纤维塞，其通过毛细作用保持液体。惰性聚烯烃材料制成的塞子是很有用的，因为它们可以以亲水的形式使用，并且由此容易吸收水基液体，如检测试剂。具有增强壁以及具有纵向定向的纤维成分的塞子是有用的，因为它们具有很好的轴向强度，能够很容易沿其轴向传导液体，并且当接触时将液体传输到皮肤。

涂敷器14可以具有各种横截面形状、宽度和长度。圆柱形塞便于作为涂敷器14使用，这是因为直径确定了传输到皮肤的检测试剂的区域，并且由此在指示器表面上产生了色斑区域，如将在下文进行说明的。例如，但不限于此，合适的塞可以具有约3mm到约15毫米的直径，并且更优选大约4mm到约10mm直径。此外，塞的长度可以是大约4mm到大约10mm。

如前提及的，涂敷器14优选凹入主体12内，使得涂敷器14的第二端18不会延伸高于主体12的表面30。其提出了当接触手掌和其它的皮肤区域时，需要限制由操作者施加到涂敷器14的第二端18的压力值。过多的力会除去过量的检测试剂，并且导致待润湿皮肤具有大并且不受控制的区域。相反，太小的力将导致与皮肤接触不良，并且不足以润湿皮肤。因此，需要控制施加到涂敷器的压力值，但仍保持与皮肤有很好的接触。

在优选的实施方式中，该控制是通过将涂敷器14凹入主体12的凹部22内而进行的，如图1所示，其中，涂敷器14的第二端18刚好凹入主体12的表面30下。该涂敷器14可以凹入，但不限于此，例如，大约0.2mm到大约2mm，并且更优选从大约0.5mm到大约1mm。以该方式，由手或其它皮肤区域施加的任何多余的力通常传递到主体12的周围表面30，而不是传递到涂敷器14(参见图7a)。通常，当涂敷器14与皮肤的被选区接触时，一部分皮肤以及下层肉多的区域很容易变形，并且适合于与涂敷器14的第二端18接触。手掌的小鱼际区域肉多的部分(参见图7)特别适合并且容易变形，以便很好地与涂敷器14的第二端18接触。

间隙28或环形空隙也能够防止当涂敷器14与手掌接触时过量的检测试剂不受控制地挤出到皮肤上。施加到涂敷器14的第二端18上的任何多余压力可能导致涂敷器向外形变。这将通过间隙28进行调节，因为涂敷器14并没有被凹部22的上部26的壁32限制在第二端18。

没有间隙28时，施加过量的压力到涂敷器上与该涂敷器具有同样直径的凹部中，将引起过量的检测试剂从涂敷器中不受控制地排出，导致过度润湿皮肤。事实上，间隙28或环形空隙提供了一个储液槽，任何从涂敷器挤压出的过量检测试剂能够得以保持在其中。间隙28可以是，例如，但不限于，大约0.2mm到大约2mm宽，最优选大约0.5mm到1mm的间隙。

上面给出的涂敷器尺寸仅是说明本发明的一种示例性实施方式，应当理解本发明并不局限于这些尺寸，并且本发明可预期其它的形状、结构以及尺寸。

图3示出了一种指示装置50，用以产生相应于结合到皮肤中胆固醇的检测试剂量的可见颜色变化。该指示装置具有壳体52和由壳体52提供的指示器表面54。该指示器表面54设置在壳体52上，使得其可以接触皮肤的被选区域。而且，如之后将描述的，该指示器表面54包含足够量的溶液，当与结合到皮肤中胆固醇的检测试剂接触时发生反应，以便在至少一部分指示器表面上产生可视的颜色变化。

在图3示出的实施方式中，指示器表面54是呈垫片56形状的吸收性材料，优选用溶液饱和，诸如，例如与检测试剂的指示成分发生反应的底物溶液。特别是，通过底物溶液或与检测试剂的指示成分反应的产生信号的化合物实现对特异性结合的检测试剂的检测。最方便实现检测的是检测试剂的指示成分是酶并且底物溶液是对酶显色的底物。辣根过氧化酶是通常用于这些体系中的酶，其利用了过氧化物底物，例如过氧化氢，与产生颜色的氧化还原指示成分结合。

在许多临床化验和免疫测定中，酶组分与流动相中的底物反应，以产生有颜色的溶液，其强度可以通过光谱法进行测定。任选地，在酶指示成分被固定在固相上的化验中，如免疫印迹化验，可沉淀的形成颜色的底物溶液覆盖到固定化酶上。其在结合酶的地方产生沉积的有色产物。

在本发明的方法中，固定化酶通过检测试剂的特异性胆固醇结合组分结合到皮肤上，并且不顺从于常规的检测方法，使用了如上所述的用于流体相和免疫印迹化验的底物溶液。

在本发明的一个创新方面，我们发现将含有足量底物溶液(并且优选用该溶液进行饱和)的吸收材料垫片56与具有结合指示成分的皮肤区域接触时，导致生成颜色。该颜色的生成在本质上是流体相，但引起在底物垫片上生成颜色，以类似于在免疫印迹方法中产生颜色的方法。由酶反应产生的可溶或不可溶的有色指示成分收集在垫片56的间隙空间(未示出)并且只能慢慢扩散，由此形成显色区域。

产生颜色的区域相应于固定在所应用的皮肤上的酶传感器的区域。例如，当检测试剂被施加到皮肤上时，利用了涂敷器14，如上参照图1和2所描述的，然后，根据下文对方法的更详细说明将变得清楚，从垫片56上获得相应的圆形色斑58。

除了产生在区域上相应于特异性结合的检测剂的色斑58之外，色斑58的强度与所使用的检测试剂的浓度相关。斑点的颜色强度能够很容易并且方便地被测量，例如，但不限于，使用反射式分光光度计，并且记录颜色的量，如色度、反射率或光密度。

几种类型的材料可用于垫片56，适于吸收底物溶液。应当意识到，用于构成垫片的材料和间隙开放程度对如何吸收底物溶液有影响，并且这反过来确定如何产生明确的色斑58。

薄的、编织或压制的纤维膜材料是最适合的，并且亲水材料对采用水基底物溶液的垫片56特别有用。基于纤维素的吸附性薄片很容易获得，并且当用作垫片56时，能够产生很好的色斑58。用作滤膜的玻璃纤维材料薄膜是最有用的。玻璃纤维是高亲水性的，且膜级材料制成的致密弯曲的毛细管产生很好确定的斑点58，其显示很少的颜色扩散。另外，玻璃纤维很白，并且对于显示色斑58提供了很好的背景，特别是对于那些具有低色度的斑点。

也希望使用合适的底物溶液浸透垫片56，以产生很好的色斑58。例如，当检测试剂是A-C-B型时，以辣根过氧化物酶作为酶组分，然后，高灵敏度的、可从市场获得的底物试剂可以用来作为指示成分。这些指示成分一般包含过氧化氢和基于联苯胺的氧化还原指示剂染料，例如3，3′，5，5′-四甲基联苯胺，并且与过氧化氢酶产生显蓝色的反应产物。这些基于液体的试剂对于浸泡指示装置的垫片56特别有用，以便随后产生色斑。

众所周知，包括指示剂染料、具有或不具有过氧化物的干燥试剂条和垫片被用于检测过氧化物酶或准过氧化物酶的活性。一种类型的干试剂垫片使用了过氧化物酶指示成分，但是不含过氧化物组分，并且用于粪便中血红蛋白(准过氧化物酶)的检测。血红蛋白作为潜隐血的标记物，并且试剂垫片用于结肠癌的检测。在该体系中，氧化还原指示成分通常是吸附在多孔基材上的愈创木树脂(guaiac)。将粪便物质施加到多孔垫片的一侧，然后送去测试。在测试现场，将过氧化氢溶液施加到垫片的第二侧，其通过底物进行扩散，并且与任何存在的血红蛋白进行反应。随后与愈疮木树脂反应产生蓝色的反应产物，表明了血红蛋白的存在。本领域中的普通技术人员应当意识到，除了愈疮木树脂外，用于过氧化物酶的氧化还原指示成分显然也能够用于该垫片，并且在此处通过扩展被包含。

第二种类型的干试剂垫片用于检测过氧化物酶的活性，例如尿量液条(dipsticks)，用于检测血红蛋白。通常，该体系使用有机过氧化氢(例如，过氧化氢异丙苯、过氧化氢丁酯或类似化合物)以及氧化还原指示剂染料(邻-联甲苯胺(tolidene)，3，3`，5，5`-四甲基苯胺或类似的氧化还原指示剂)。将这些试剂的溶液与稳定剂、缓冲液以及其它成分吸附到多孔基材上，然后进行干燥，以形成稳定的指示剂垫片。例如参见美国专利No.4,071,318和No.5,318,894，其全部在此作为参考引入，其中给出了制备该干燥试剂材料的方法。

在本发明更进一步的方面，上述类型的两种干燥试剂垫片均可以用作指示系统，用于给出结合到皮肤胆固醇的检测试剂的过氧化活性信号。在第一个实例中，包含愈创木树脂或其它过氧化指示剂的干燥垫片用稀释的过氧化氢溶液进行润湿，并且在本发明的方法中，将带有结合检测试剂的手掌与润湿的垫片接触。过氧化物酶特异性地结合到皮肤中的胆固醇上，使得在相应于结合检测器的区域的指示剂垫片上产生颜色的变化。

在第二个例子中，用水润湿包含过氧化氢和指示剂的干燥垫片。然后，将带有结合检测试剂的手掌与润湿的垫片接触。检测试剂特异性地与皮肤中的胆固醇结合，导致在相应于结合过氧化物酶的区域的垫片上产生颜色的变化。

在所有情况下，依据本发明使用浸润底物的吸附性垫片56，避免了直接将液体底物溶液施加到皮肤上，并且这将会招致很有限的容量问题。

希望图1和图2中所示的用于施加检测试剂的装置10和图3中示出的指示装置50能够很容易地结合在一个设备100中，最好如图4、5和6中示出的。通过将单个设备100中的装置10的涂敷器14与指示装置50相结合，本发明容许实现一种相对简单的方法，用于胆固醇含量的自我检测，特别是，例如，但不限于，在家庭环境中。

涉及的设备100将使用来自图1和图2用于装置10以及来自图3用于指示装置50的同样的参考标记，但是在前面加上“1”。例如，在图4中，其中图1中示出的涂敷器14以114来标记，而在图6中，其中图3中示出的指示器表面54以154来标记。对于新引入的部件，在其前面加“2”，例如，设备100包括壳体202，在一端具有手柄204、并且在其另一端为接触皮肤部分(或端)206，具有涂敷器114和指示器表面154。应当理解，设备100表示将用于施加检测试剂的装置10和指示装置50组合起来的一个说明性的实施方式。如所示，设备100在末端206的一侧上具有涂敷器114，并且在其相反的一侧具有指示器表面154。希望对于本领域中的普通技术人员而言显而易见的是其它结构也被本发明所覆盖。例如，当需要时，该设备100也能够为其它的吸附性介质提供空间(未示出)，以吸干过量的检测试剂。吸附性介质可与涂敷器和指示器表面隔开。

相应于图1和图2对用于施加前面提供的检测试剂的装置10的描述适用于描述设备100，就设备100用于施加检测试剂而言。特别是，设备100具有至少一个涂敷器114(对于示例性的实施方式示出了两个)，位于凹部122中(参见图5)。此外，该涂敷器114是凹入的，使得第二端118不能进行任何延伸而高于设备100的壳体202的表面130。

设备100的表面130具有许多定位标记物208a，围绕末端206的一部分而间隔设置。这些标记物的目的是当施加检测试剂时，留下设备100与皮肤接触的区域的印记，如将在下文进行解释的。

在本发明的优选实施方式中，设备100具有两个彼此间隔的涂敷器114，如图5中所示。其中一个涂敷器将对照用的检测试剂施加到皮肤区，而第二涂敷器施加测试用的检测试剂。虽然如图4和5中所示的设备100的实施方式显示了涂敷器114具有同样的横截面，但是应当理解，每一个涂敷器在其第二端能够具有不同的横截面，用于接触皮肤。这将容许快速直观地检查哪一个是对照用的检测试剂以及哪一个是测试用的检测试剂。

同样，上面提供的并相应于图3对指示装置50的说明，适用于对设备100的说明，就设备100用作指示装置而言。特别是，设备100具有至少一个指示器表面154(对于图6中的说明性实施方式，示出了两个)。只要指示器表面154与皮肤的被选区接触，指示器表面154能够产生可见的颜色变化，对应于结合到皮肤中胆固醇的检测试剂量。如前所述，关于图3中的指示装置50，指示装置154是垫片156形式的吸收性材料，并且优选用溶液饱和，例如，一种与由设备100的涂敷器114施加的检测试剂的指示成分反应的底物溶液。

同样，对于设备100的表面130，末端206的表面210具有许多间隔设置在周围的定位标记物208b。这些标记物的目的是当施加检测试剂时，与由标记物208a留在皮肤区域的相应印记匹配，从而该垫片156能够覆盖皮肤的同样区域，如将在下文进行解释的。

在本发明设备100的优选实施方式中，具有两个彼此间隔的垫片156，如图6所示。每一垫片156相当于一个涂敷器114。然而，应当意识到，一个垫片的尺寸可包含类似于为设备100示出的两个垫片156的面积。垫片的其它形状和结构也能够由本领域中的技术人员预期。

应当意识到为了测试的目的，皮肤区域既能够与对照用的检测试剂接触，也能和测试用的检测试剂接触，每一检测试剂由分开的涂敷器114施加。实际上，相同的检测试剂利用两个涂敷器来使用；然而，高浓度的检测试剂用于对照中。高浓度的对照用检测试剂是这样选择的，即在指示器表面154上随后显影后，所有测试者，不管他们皮肤中的胆固醇含量如何，都将产生清晰可见的显色斑。给出容易与对照用检测器区分的色斑确保了测试者的皮肤区域，例如手掌，与检测试剂有充足和很好的接触。

传递检测用的检测试剂的涂敷器包含较低浓度的作为对照用的检测试剂的同一检测试剂。测试用的检测试剂浓度是这样选择的，即在指示器表面上显影后，产生了显色斑，其强度反映了皮肤中胆固醇的含量。

在本发明的另一方面，检测试剂的浓度是这样选择的，使得具有设定阈值含量的皮肤胆固醇的测试者将不会在指示器表面上产生色斑。皮肤胆固醇含量高于该阈值含量的测试者将产生斑点，其强度反映了他们的皮肤胆固醇含量。在该方式中提供了一种简单的测试，用以确定皮肤胆固醇含量高于选择值(即，产生可见的色斑)的测试者，并因此被认为高于预选的阈值，使得他们处于增大了的患动脉粥样硬化和其它相关心血管疾病的危险中。

在本发明的另一方面，检测试剂的浓度能够这样被选择，使得所有测试者都给出色斑，并且其强度与他们的皮肤胆固醇含量成正比。具有高含量皮肤胆固醇的测试者在给定的接触时间中将比具有低含量皮肤胆固醇的测试者结合到更多的检测试剂，并且产生的颜色与结合的检测器量成正比。在该类型的化验中，色斑的强度能够与比色器卡片上的若干规定的颜色之一相符合，如将在下文进行描述的。产生的斑点颜色能够半定量地确定测试者的皮肤胆固醇，然后分配到几个风险组之一，例如低风险、正常和高风险组。

可以通过使用仪器来测量着色量而更精确地测定随这些化验一起出现的色斑强度。例如，能够使用简单的反射式分光光度计，并且颜色的属性，例如色度、反射率和光密度能够用于确定颜色量，如在国际专利申请公开号为No.WO01/011359 A3中描述的，其全部在此通过参考被包含。

现在将参照图7、7a、8、9、10、11和12对本发明的方法进行详细描述，并且为进行说明而使用了本发明的设备100。然而，应当理解，同样的方法能够被实现，例如，使用单独的装置10和指示装置50，并且应用以下的步骤。

首先，使用设备100将检测试剂施加到皮肤的被选区，例如，手掌300。对于这个例子，涂敷器114是两个圆形的吸收性聚烯烃滤膜114a和114b，直径为5mm，并且长度为5mm，它们可以从菲尔特罗纳(Filtrona Inc.)公司获得(Richmond，VA)。将该滤膜插入注射成模的聚丙烯卡盘装置中，容许滤膜通过摩擦配合固定在卡盘装置中，并且第二端118位于该装置表面130下大约0.5mm。另外，每一滤膜的第二端118由约0.75mm宽的环隙环绕。每一滤膜用将洋地黄皂苷(A)和辣根过氧化物酶(B)结合到马来酸酐-N-乙烯基吡咯烷酮共聚物(C)形成的A-B-C共轭物的检测试剂饱和。一个滤膜114a指定为阳性对照，用高浓度的检测试剂饱和，而第二滤膜114b，指定为测试用滤膜，用低浓度的检测试剂饱和。通常，阳性对照将含有大约50-100ug/mL的检测试剂，而测试用的检测试剂为大约1-10ug/mL。

选择手掌300的小鱼际区域、洗净、干燥，然后放在设备100的末端206上，使得与涂敷器114a和114b上的检测试剂进行接触。这使得检测试剂结合到皮肤中的胆固醇上，如图8中的304a和304b所示，其中，304a表示来自涂敷器114a的对照用检测试剂，而304b表示来自涂敷器114b的测试用检测试剂。供选地，该装置能够被放置成与手掌300进行接触。在与涂敷器114a和114b接触大约1分钟后，将手掌300和设备100分开，如图8所示。同样，如图8所示，标记物208a在手掌300上留下了印记306，描绘出了已经施加过检测试剂的皮肤区域。如果需要的话，标记物208a可以为印在皮肤上的合适的单词标记，诸如“对照”或“检测”，将它们分别印在304a和304b旁边，在这里，对照用的检测试剂和测试用的检测试剂与皮肤中的胆固醇相结合。

如果有任何未结合的检测试剂，那么通过立即使用吸附性介质或如图9所示的吸收垫片302除去该试剂。通过将手掌放到纤维素材料的新区域而完成两个进一步的吸收步骤。所有的吸收步骤是通过施加确定的压力到具有吸收垫片302的手掌300的小鱼际区域上进行的。已经发现尽管对皮肤施加单次吸收几乎除去了所有的非特异性结合的检测剂，但施加三次是最方便的，以去除过量物。多于三次的施加通常是不必要的，并且不会再除去更多的非特异性结合的检测剂。

如果存在的话，除去过量的未结合检测器是必要的，这是因为只有特异性结合的检测器才能产生有意义的信号。清洗是可选择的并且等价的除去非特异性结合的检测试剂的手段，但是对于其后依次有多个步骤并且由装置，诸如该例中的设备100执行的简单快速地检测，将更不方便使用。

任何类型的吸附性介质302都适合于作为吸收材料。高吸收性的编织而成的亲水性材料诸如棉花或基于纤维素的组织就特别适合。一次性的厨房毛巾和其它类似的普通薄板材为优选的，并且最优选不会在手掌上留下棉球残留物的材料。

如前所述关于设备100的讨论，吸附性介质302可以是装置的一部分，邻近保持涂敷器114的表面130。在该方式中，在施加检测试剂后，简单的方法是将手掌移到吸附性介质302，用以除去非特异性结合的检测器。在另一个形式的方法中，并且如图9所示，吸附性介质与用来施加检测试剂的装置分开，并随后将手掌移动到分离的吸附性介质302进行吸收。

然后，将具有特异性结合的检测试剂的小鱼际手掌区域300放在新准备的垫片156上，诸如垫片156a和156b，如图10所示，用底物溶液进行饱和。通常使用玻璃纤维材料934AH(whatman公司)和K-Blue Max底物溶液(Neogen公司)。供选地，该设备100能够与手掌300接触。在每一位置，垫片156a和156b必须分别对准检测试剂结合到皮肤中胆固醇的位置，如图8中的304a和304b所示。因此，在设备100的末端206的一侧210上的标记物208b用于将末端206对准通过标记物208a而留在手掌300上的印记306。

在与垫片156a和156b上的底物溶液接触大约1分钟后，将手掌移开，如图11所示。

将手掌300从垫片156a和156b移开时，将有一个或两个圆，分别是蓝色斑点158a和158b，在垫片上具有大约5mm的直径。这些斑点，158a和158b对应于来自涂敷器114a和114b的检测试剂结合到手掌的位置，分别如304a和304b所示。

所有的测试者将在对应于阳性对照涂敷器的位置具有蓝色的斑点。在测试涂敷器中，如果使用低阈值浓度的检测器，那么第二斑点也许看得见或者也许看不见，取决于测试者皮肤胆固醇的含量。测试者具有低或正常含量的皮肤胆固醇时，将不会给出第二测试斑点，而具有高含量皮肤胆固醇的测试者将显影第二斑点。

在第二测试涂敷器中，如果使用了非阈值含量的检测器，那么所有的测试者将产生两个蓝色斑点。除了很强的蓝色阳性对照斑点外，将能够看到具有不同强度的第二蓝色斑点。第二斑点的强度将取决于正在测试的测试者皮肤的胆固醇含量，并且使用比色器卡308测量强度，如图12中所示。

采用比色器卡308测量测试斑点的色度，卡具有不同强度的蓝色染料带310。在一个实施方式中，每一个带在其中心具有直径约4mm的孔312。在该实施方式中，比色器卡308能够被定向在垫片156b的测试斑点158b上，使得测试斑点出现在每一色带310的中心孔312中。每一色带310中的孔312依次放置在测试斑点之上，直到实现测试斑点和所围绕的色带310具有相匹配的强度。

每一色带310可以给出一个分值，该分值反映了基于相应的皮肤胆固醇含量的风险系数。具有高皮肤胆固醇含量的测试者将显影蓝色更深的斑点，获得较高的分值，并具有增加的患有或产生动脉粥样硬化的风险以及患有可归因于高胆固醇含量的类似的或其它疾病的风险。

尽管在正常人群和风险人群中的皮肤胆固醇含量的范围决定了比色器卡308上的带310的强度，但带310的颜色由使用的底物溶液确定。对于3，3`，5，5`-四甲基苯胺底物，显影的斑点为浅绿蓝。利用该底物，基于产生的色彩和色度范围，制造适合的且正确的比色卡。对于其它的底物，产生了不同的颜色，并且需要相应的比色器卡。

在垫片156a和156b中包含背景基色染料能够容许显色范围与强度发生改变。对于干燥的试剂板，可以将黄色或橙色染料与生成蓝色的指示剂混合。处于低含量的底物转换时，色斑保持黄色或橙色，在中间含量时，色斑为浅绿色，而在高含量时色斑为蓝绿色。这将容许实现不同的比色，代替了强度的比较，并且可以提供可选择的和有利的读取色斑。

应当意识到，虽然使用设备100对本发明的方法进行了描述，但是可以使用许多替换的装置，诸如用于施加检测试剂的单独装置和单独的指示装置。因此，本发明很容易适用于试剂盒，其适于自我检测皮肤的胆固醇，特别是，例如，但不限于，在家庭环境中。

试剂盒将包括检测试剂来源；施加检测试剂到皮肤被选区的涂敷器；溶液来源，当与检测试剂接触时发生反应；和指示器表面，用以接收溶液，使得当指示器表面与皮肤被选区接触时，该溶液与检测试剂反应，该检测试剂结合到皮肤中的胆固醇上，使得在至少一部分指示器表面上产生可见的颜色变化。

应当意识到，试剂盒中的涂敷器可以与装置10中或设备100中的相同，如在前所描述的。特别是，在优选的实施方式中，该涂敷器是检测试剂的来源(即，其预先已经使用检测试剂进行饱和)。然而，可以由本发明预期的是，试剂盒可以单独包括检测试剂，并由此用户将必须润湿该涂敷器。

相类似的，试剂盒中的指示器表面可以与在前描述的装置50和100中见到的相同。因此，指示器表面可以是溶液来源(即，先前用底物溶液浸泡)。然而，再次可以由本发明预期的是，该试剂盒可以单独包括底物溶液，并由此使用者将必须浸润指示器表面(垫片)。

进一步地，本发明的试剂盒在需要时也可以包括吸附性介质，用于进行吸收的步骤。

如前所描述的，例如设备100，该涂敷器和指示器表面可以位于相同装置上(例如，位于其相对侧上)，并且象这样组合而包括在试剂盒中。

而且，试剂盒可以在同一装置上提供涂敷器、指示器表面和吸附性介质。

最后，试剂盒可以提供相同的装置，当执行该方法时，用以分析产生的颜色。例如，该试剂盒可以包括比色计，用以分析产生的颜色。该比色计可以是分级的一系列色带，如前所述的。可选择的，该试剂盒可以包括反射式分光光度计，用以分析产生的颜色。

以下说明仅为示例性的，并且不限于此。对于本领域中的普通技术人员而言，依据本文的描述，本发明的其它实施方式将会是显而易见的。

然而，本发明所公开的实施方式被认为是优选的，可以进行各种改变和变形，将不会脱离本发明的范围。本文公开的内容被认为是示例性的，而非穷举。对于本领域中的普通技术人员而言，该描述将暗示出很多变化和替换物。所有这些替换物和变化将被认为包含在权利要求的范围中。熟悉该领域的人可以认识到，其它与描述的特定实施方式等同的替代物也意味着被权利要求所包含。

Claims (111)

1.一种测定皮肤胆固醇的方法，该方法包括：

a)将检测试剂施加到皮肤的被选区，以便与皮肤内存在的胆固醇结合；

b)将指示器表面施加到皮肤的被选区，该指示器表面具有一种溶液，当该指示器表面与皮肤的被选区接触时，该溶液与检测试剂发生反应，该反应产生一个与结合到皮肤内胆固醇的检测试剂量相当的可见颜色变化；并且

c)分析在指示器表面上产生的颜色，以获取对皮肤胆固醇的测定。

2.根据权利要求1的方法，其中，采用毛细作用将该检测试剂施加到皮肤的被选区。

3.根据权利要求2的方法，其中，通过至少一个芯吸元件将检测试剂施加到皮肤的被选区。

4.根据权利要求3的方法，其中，该芯吸元件用检测试剂饱和。

5.根据权利要求3或4的方法，其中，该芯吸元件变形一个受控量，以释放检测试剂。

6.根据权利要求3至5的任何一个的方法，其中，该芯吸元件由合适的涂敷器固定。

7.根据权利要求1至6的任何一个的方法，其中，选择该检测试剂的浓度，使得当皮肤中存在的胆固醇超过预先选择的阈值时，在步骤b)中就发生可见的颜色变化。

8.根据权利要求1至6的任何一个的方法，其中，施加检测试剂包括将对照用的检测试剂和测试用的检测试剂施加到皮肤被选区内的两个分开的区域中。

9.根据权利要求8的方法，其中，对照用的检测试剂的浓度高于测试用的检测试剂的浓度。

10.根据权利要求8或9的方法，其中，至少选择测试用的检测试剂浓度，使得当皮肤中存在的胆固醇超过预先选择的阈值时，在步骤b)中就发生可见的颜色变化。

11.根据权利要求1至10的任何一个的方法，进一步包括：在步骤a)之后并在步骤b)之前，去除未与皮肤内胆固醇结合的任何多余的检测试剂。

12.根据权利要求11的方法，其中，通过合适的吸附性介质去除该多余的检测试剂。

13.根据权利要求1至12的任何一个的方法，其中，指示器表面包括一种与检测试剂内的指示成分发生作用的底物溶液。

14.根据权利要求1至12的任何一个的方法，其中，该指示器表面是一个用底物溶液饱和的吸附性材料垫片，该底物溶液与检测试剂内的指示成分发生作用。

15.根据权利要求1至14的任何一个的方法，其中，通过反射式分光光度计分析产生的颜色。

16.权利要求1至14的任何一个的方法，其中，采用比色计分析产生的颜色。

17.根据权利要求16的方法，其中，比色计是分级的一系列色带。

18.一种将检测试剂施加到皮肤被选区的装置，该装置包括：

a)一个主体；和

b)至少一个涂敷器，在其一末端由主体固定，并具有一个第二末端，以接触皮肤的被选区，涂敷器的第二末端将检测试剂传递到皮肤的被选区。

19.根据权利要求18中的装置，其中，该涂敷器利用毛细作用将检测试剂施加到皮肤的被选区。

20.根据权利要求18或19中的装置，其中，该涂敷器包括一个芯吸元件。

21.根据权利要求20中的装置，其中，主体包括至少一个凹槽，用于在其中容纳芯吸元件的一个末端。

22.根据权利要求21中的装置，其中，该凹槽具有的深度足以在其中容纳芯吸元件，使得芯吸元件的第二末端不延伸超出该凹槽的深度。

23.根据权利要求21或22中的装置，其中，一部分凹槽的周长大于芯吸元件的周长。

24.根据权利要求23中的装置，其中，具有较大周长的凹槽部分环绕芯吸元件的第二末端。

25.根据权利要求24中的装置，其中，具有较大周长的凹槽部分环绕芯吸元件的第二末端，使得在其周围提供一个间隙。

26.根据权利要求20至25中任何一个的装置，其中，芯吸元件为一种纤维塞。

27.根据权利要求20至25中任何一个的装置，其中，芯吸元件由惰性聚烯烃材料制成。

28.根据权利要求18至25中任何一个的装置，其中，涂敷器是一种胶。

29.根据权利要求18至28中任何一个的装置，其中，涂敷器为圆柱形的。

30.根据权利要求18至29中任何一个的装置，其中，提供两个涂敷器，涂敷器相互隔开，使得一个涂敷器添加对照用的检测试剂而第二涂敷器添加测试用的检测试剂。

31.根据权利要求30的装置，其中，每个涂敷器都在所述第二末端上呈现不同的横截面。

32.根据权利要求18至31中任何一个的装置，其中，涂敷器用检测试剂饱和。

33.一种指示装置，以产生一个与皮肤内胆固醇结合的检测试剂量相当的视觉变化，该指示装置包括一个由装置的主体提供的指示器表面，使得该指示器表面可以与皮肤的被选区接触，该指示器表面包含足量的溶液，当该溶液接触与皮肤的被选区内的胆固醇结合的检测试剂时起反应，以便在至少一部分指示器表面上产生可见的颜色变化。

34.根据权利要求33的指示装置，其中，该溶液是与检测试剂的指示成分起反应的底物溶液。

35.根据权利要求33或34的指示装置，其中，该指示器表面包括一种吸附性材料。

36.根据权利要求35的指示装置，其中，该吸附性材料用该溶液饱和。

37.根据权利要求35至36中任何一个的指示装置，其中，该吸附性材料为一垫片。

38.根据权利要求37的指示装置，其中，该垫片是编织而成的。

39.根据权利要求37的指示装置，其中，该垫片具有压制的纤维薄片结构。

40.根据权利要求37的指示装置，其中，该垫片由亲水材料制造。

41.根据权利要求37的指示装置，其中，该垫片是基于纤维素的吸附性材料薄片。

42.根据权利要求37的指示装置，其中，该垫片由玻璃纤维材料制造。

43.一种用于测定皮肤胆固醇的装置，该装置包括：

a)一个主体；

b)至少一个涂敷器，在其一末端由主体固定，并具有一个第二末端，以接触皮肤的被选区，涂敷器的第二末端将检测试剂传递到皮肤的被选区；和

c)一个由主体提供的指示器表面，使得该指示器表面可以与皮肤的被选区接触，该指示器表面包含足量的溶液，当该溶液接触与皮肤的被选区内的胆固醇结合的检测试剂时起反应，以便在至少一部分指示器表面上产生可见的颜色变化。

44.根据权利要求43中的装置，其中，该涂敷器利用毛细作用将检测试剂施加到皮肤的被选区。

45.根据权利要求43或44中的装置，其中，该涂敷器包括一个芯吸元件。

46.根据权利要求45中的装置，其中，主体包括一个外表面和至少一个用于在其中容纳芯吸元件的一个末端的凹槽。

47.根据权利要求46中的装置，其中，该凹槽具有的深度足以在其中容纳该芯吸元件，使得芯吸元件的第二末端不延伸超出主体的外表面。

48.根据权利要求46或47中的装置，其中，一部分凹槽的周长大于芯吸元件的周长。

49.根据权利要求48中的装置，其中，具有较大周长的凹槽部分环绕芯吸元件的第二末端。

50.根据权利要求49中的装置，其中，具有较大周长的凹槽部分环绕芯吸元件的第二末端，使得在其周围提供一个间隙。

51.根据权利要求45至50中任何一个的装置，其中，芯吸元件为一种纤维塞。

52.根据权利要求45至50中任何一个的装置，其中，芯吸元件由惰性聚烯烃材料制成。

53.根据权利要求43至50中任何一个的装置，其中，涂敷器是一种胶。

54.根据权利要求45至50中任何一个的装置，其中，涂敷器为圆柱形的。

55.根据权利要求43至54中任何一个的装置，其中，提供两个涂敷器，涂敷器相互隔开，使得一个涂敷器添加对照用的检测试剂而第二涂敷器添加测试用的检测试剂。

56.根据权利要求55的装置，其中，每个涂敷器都在所述第二末端上呈现不同的横截面。

57.根据权利要求43至56中任何一个的装置，其中，涂敷器用检测试剂饱和。

58.根据权利要求43至57中任何一个的装置，其中，该溶液是与检测试剂的指示成分起反应的底物溶液。

59.根据权利要求43或58的装置，其中，该指示器表面包括一种吸附性材料。

60.根据权利要求59的装置，其中，该吸附性材料用该溶液饱和。

61.根据权利要求59或60的装置，其中，该吸附性材料为一垫片。

62.根据权利要求61的装置，其中，该垫片是编织而成的。

63.根据权利要求61的装置，其中，该垫片具有压制的纤维薄片结构。

64.根据权利要求61的装置，其中，该垫片由亲水材料制造。

65.根据权利要求61的装置，其中，该垫片是基于纤维素的吸附性材料薄片。

66.根据权利要求61的装置，其中，该垫片由玻璃纤维材料制造。

67.根据权利要求43至66中任何一个的装置，其中，主体提供至少一个涂敷器，并且指示器表面位于其相对侧上。

68.根据权利要求43至67中任何一个的装置，进一步包括一种吸附性介质，该吸附性介质位于主体上，并与该至少一个涂敷器和指示器表面隔开。

69.根据权利要求68的装置，其中，该吸附性介质由亲水材料构成。

70.根据权利要求67、68或69中任何一个的装置，其进一步包括至少一个位于主体表面上的标记物，该主体提供了至少一个涂敷器，该至少一个标记物被形成为在邻近检测试剂已经传递到的皮肤区域的皮肤被选区内形成压痕。

71.根据权利要求70的装置，进一步包括至少一个位于指示器表面上的第二标记物，该至少一个第二标记物在形状上对应于该至少一个标记物。

72.一种用于测定皮肤胆固醇的试剂盒，该试剂盒包括：

a)一个检测试剂来源；

b)一个将检测试剂添加到皮肤被选区的涂敷器；

c)一个当与检测试剂接触时起反应的溶液来源；和

d)一个接收溶液的指示器表面，使得当该指示器表面与皮肤的被选区接触时，该溶液与结合到皮肤内的胆固醇的检测试剂起反应，以便在至少一部分指示器表面上产生可见的颜色变化。

73.根据权利要求72的试剂盒，其中，涂敷器利用毛细作用将检测试剂施加到皮肤的被选区。

74.根据权利要求72或73的试剂盒，其中，该涂敷器包括一个芯吸元件。

75.根据权利要求74的试剂盒，其中，芯吸元件为一种纤维塞。

76.根据权利要求74的试剂盒，其中，芯吸元件由惰性聚烯烃材料制成。

77.根据权利要求72、73或74的试剂盒，其中，涂敷器是一种胶。

78.根据权利要求72至77中任何一个的试剂盒，其中，提供两个涂敷器，涂敷器相互隔开，使得一个涂敷器添加对照用的检测试剂而第二涂敷器添加测试用的检测试剂。

79.根据权利要求78的试剂盒，其中，每个涂敷器都在所述第二末端呈现不同的横截面。

80.根据权利要求72至79中任何一个的试剂盒，其中，涂敷器是检测试剂来源。

81.根据权利要求80的试剂盒，其中，涂敷器用检测试剂饱和。

82.根据权利要求72至81中任何一个的试剂盒，其中，所述溶液是与检测试剂的指示成分起反应的底物溶液。

83.根据权利要求72至82中任何一个的试剂盒，其中，指示器表面包含一种吸附性材料。

84.根据权利要求83的试剂盒，其中，该吸附性材料为溶液来源。

85.根据权利要求84的试剂盒，其中，该吸附性材料用该溶液饱和。

86.根据权利要求83、84或85的试剂盒，其中，该吸附性材料为一垫片。

87.根据权利要求86的试剂盒，其中，该垫片是编织而成的。

88.根据权利要求86的试剂盒，其中，该垫片具有压制的纤维薄片结构。

89.根据权利要求86的试剂盒，其中，该垫片由亲水材料制造。

90.根据权利要求86的试剂盒，其中，该垫片是基于纤维素的吸附剂薄片。

91.根据权利要求86的试剂盒，其中，该垫片由玻璃纤维材料制造。

92.根据权利要求72至91中任何一个的试剂盒，进一步包括一种吸附性介质。

93.根据权利要求92的试剂盒，其中，该吸附性介质由亲水材料制造。

94.根据权利要求72至93中任何一个的试剂盒，其中，涂敷器和指示器表面位于装置的相对侧上。

95.根据权利要求92或93的试剂盒，其中，涂敷器、指示器表面和吸附性介质都位于装置上。

96.根据权利要求72至95中任何一个的试剂盒，进一步包括一个反射式分光光度计，以分析产生的颜色。

97.根据权利要求72至95中任何一个的试剂盒，进一步包括一个比色计，以分析产生的颜色。

98.根据权利要求97的试剂盒，其中，比色计为分级的一系列色带。

99.一种将检测试剂添加到皮肤被选区以结合到皮肤内存在的胆固醇上的方法，该方法包括：

a)提供至少一个包含足量检测试剂的涂敷器，该至少一个涂敷器利用毛细作用将检测试剂传递到皮肤的被选区；和

b)用涂敷器接触皮肤的被选区，以便用检测试剂润湿皮肤。

100.根据权利要求99的方法，其中，通过至少一个芯吸元件将检测试剂添加到皮肤的被选区。

101.根据权利要求100的方法，其中，该芯吸元件用检测试剂饱和。

102.根据权利要求100或101的方法，其中，该芯吸元件以一受控量变形，以释放检测试剂。

103.根据权利要求99至102中任何一个的方法，其中，该芯吸元件由合适的涂敷器固定。

104.根据权利要求99至103中任何一个的方法，其中，添加检测试剂包括将对照用的检测试剂和测试用的检测试剂施加到皮肤被选区内的两个分开的区域。

105.根据权利要求104的方法，其中，对照用的检测试剂的浓度高于测试用的检测试剂的浓度。

106.一种产生一个与结合到皮肤内胆固醇的检测试剂量对应的可见颜色变化以测定皮肤胆固醇的方法，该方法包括：

a)将指示器表面施加到皮肤的被选区，该指示器表面具有一种溶液，当该指示器表面与该皮肤的被选区接触时，该溶液与检测试剂反应，该反应产生一个与结合到皮肤内胆固醇的检测试剂量相当的可见颜色变化；并且

b)分析在指示器表面产生的颜色，以获取皮肤胆固醇的测定。

107.根据权利要求106的方法，其中，该指示器表面包含与检测试剂的指示成分起反应的底物溶液。

108.根据权利要求106或107的方法，其中，该指示器表面是一种用底物溶液饱和的吸附性材料垫片，该底物溶液与检测试剂内的指示成分起反应。

109.根据权利要求106至108中任何一个的方法，其中，利用反射式分光光度计分析产生的颜色。

110.根据权利要求106至108中任何一个的方法，其中，利用比色计分析产生的颜色。

111.根据权利要求110的方法，其中，比色计为分级的一系列色带。

Images