CN101185669B - 一种治疗心脑血管病的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，该组合物以三七的有效部位三七总皂苷和葛根的有效部位葛根总黄酮为活性成分，具有显著的抗脑缺血和心肌缺血作用，其疗效明显优于单独使用三七总皂苷或葛根总黄酮，为临床提供了疗效更好，使用更方便的复方组合物或其制剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物，具体地说本发明涉及治疗心脑血管疾病的药物组合物，该组合物以三七的有效部位三七总皂苷和葛根的有效部位葛根总黄酮为活性成分。
背景技术
冠心病、心绞痛等心血管疾病，是严重威胁人类生命和健康的常见病、多发病。在发达国家其患病率高，致残率高，是多数发达国家和许多发展中国家成人的主要死亡原因，也是世界范围内最常见的死亡原因。据世界卫生组织发布的数字，去年全球因心血管疾病死亡的人数约1700万，占全球死亡的三分之一，换句话说，全球每死3人就有1人是心血管疾病。心血管病占我国人群死因首位。随着人均寿命的增长、物质条件的富裕和生活文化方式的变化，心血管疾病、特别是冠心病发病率和死亡率在逐年增加，且有年轻化的趋势。因而，保护心脏、预防和治疗心血管疾病愈来愈被人们所重视和关注。虽然目前心血管药物种类较多，但研究开发高效安全的心血管药物仍是当务之急。
在心脑血管疾病的治疗药物中，中西药的应用各有侧重，中药以其副作用小的优势也占据较大的市场份额。在目前众多治疗心脑血管疾病的中成药中，以有效部位为主要活性成分如三七总皂苷、丹参总酚酸、银杏总黄酮、葛根素、灯盏花素等的中成药愈来愈受到人们的重视。治疗心脑血管疾病的各种中药有效部位的功效各有不同和侧重，因此，临床上存在联合用药的巨大需求。目前各单一有效部位和有效成分的品种，特别是有效部位的注射剂如血塞通、血栓通和有效成分注射剂如葛根素注射液等，难以满足临床联合用药的需求。另外，未经国家药品食品监督管理局的批准而将中药注射剂简单地混合使用，将冒巨大的风险，有可能引起不可预料的不良反应，如血压急剧增高，发热，过敏反应等等。因此，提供更加方便有效的中药有效部位复方制剂具有重要的临床意义和重大的社会价值。
葛根总黄酮是中药葛根中的有效部位，其中所含葛根素是其有效成分之一，药效试验表明两者均能能增加脑及冠状血管血流量，血管阻力相应降低，改善脑循环，能使外周血管扩张，特别是扩张冠状动脉血管，增加冠状动脉血管血流量，改善缺血区的血流，降低心肌耗氧量，降低缺血心肌乳酸的产生，改善高粘滞血症，高凝血症，改善微循环；并有广泛的受体阻滞作用和缓和的降压及改善脑与外周循环的作用。但近年来，临床上对葛根素的不良反应多有报道，如发热、过敏性皮疹、过敏性休克、消化道出血、溶血性贫血等。
三七总皂苷具有较好的活血化瘀作用，对改善脑血管循环、增加脑血流量有明显的效果，是治疗脑梗死的有效制剂，近年发现，本品对心血管亦有良好的扩张作用，可降低外周阻力、减少心肌耗氧量、促进侧枝循环、抑制血小板凝集，对冠心病心绞痛有较好的疗效。现有三七总皂苷注射液具有较好的活血化瘀作用。
目前，上述两种活性成分均已被用于治疗心脑血管病，例如哈尔滨圣泰制药有限公司的专利申请CN03121958.6，发明名称为“一种治疗脑血管疾病的药物组合物中”，其中公开了一种用于治疗脑血管疾病的药物组合物中，该组合物含有三七总皂苷、葛根总黄酮和西洋参总皂甙。
在03121958.6号专利申请中，所述组合物包含三种成分，成分相对较为复杂，对于中药成分的制剂而言，增加一种成分都会给生产工艺、质量控制标准带来很大的不便，例如对于注射液而言，增加一种成分意味着产品的稳定性、安全性都会收到很大挑战，而且西洋参总皂甙是以西洋参为原料获得的，也增加了生产成本和消费者的治疗成本。因此，在治疗心脑血管疾病时希望能够获得组成简单、效果优良并且成本较低的药物组合。
本申请的发明人发现，使用一定比例的三七总皂苷和葛根总黄酮联合给药可以获得意想不到的协同效果，不仅比单独使用同等剂量的葛根总黄酮或三七总皂苷更为的效果更佳，而且在去除一种成分一西洋参总皂甙的情况下仍然可以达到与总剂量相当的03121958.6号专利产品的效果相当的效果，但是，与03121958.6号专利申请中的组合物相比，本发明的组合物组成更为简单，成本降低，更适用于大规模的工业生产，从而完成了本发明。
在现有技术中尚未发现有关于使用一定比例的三七总皂苷和葛根总黄酮具有协同作用的教导，因此，本发明的药物组合物具有专利意义上的新颖性和创造性。
发明内容
本发明的目的就是提供一种治疗心脑血管病的药物组合物，该药物组合物能活血化瘀、产生协同作用，疗效显著提高，又可大大减少葛根素用量，从而减少临床上不良反应发生的可能性，同时又克服了单一中药有效部位难以满足临床上治疗心脑血管疾病联合用药的需求的不足，避免药物简单混合使用可能造成的副反应，提供一种临床上疗效更好、更加方便的中药有效部位复方组合物及其制剂。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该药物组合物含有三七总皂苷和葛根总黄酮，能活血化瘀、产生协同作用，比单用同剂量三七总皂苷或单用同剂量葛根总黄酮或单用同剂量葛根素效果均大大提高，经药效学试验证明其疗效显著。又可大大减少葛根素用量，从而减少临床上不良反应发生的可能性。
本发明的目的是提供了一种治疗心脑血管病的药物组合物，该组合物含有三七总皂苷和葛根总黄酮作为活性成分，以及常规的药用载体。
在上述治疗心脑血管病的药物组合物中，所述的葛根总黄酮的纯度在50％以上，优选在80％以上。
本发明治疗心脑血管病的药物组合物中，所述的三七总皂苷的纯度在80％以上，优选90％以上。
在本发明治疗心脑血管病的药物组合物中，所述的三七总皂苷是由三七提取的，所述的葛根总黄酮是由葛根提取的；其中所述三七提取物中三七总皂苷的含量和葛根提取物中葛根总黄酮的含量符合上述要求。
在本发明的上述药物组合物中，二种活性成分的重量比为：三七总皂苷1份，葛根总黄酮0.1-10份。优选的，本发明药物组合物中二种活性成分的重量比为：三七总皂苷1份，葛根总黄酮1-5份。更优选的，本发明药物组合物中二种活性成分的重量比为：三七总皂苷1份，葛根总黄酮1.5-2.5份。最优选的，本发明药物组合物中二种活性成分的重量比为：三七总皂苷和葛根总黄酮为3∶7或4∶6。
该组合物中的活性成分之一葛根总黄酮可由市场上购买，也可用常规方法由葛根制备。例如，可采用下述方法制备：
所述的葛根总黄酮也可以按照下述方法制备：取葛根药材10Kg，用10倍量70％乙醇回流提取三次，每次2h，滤过，合并三次乙醇提取液，回收乙醇，浓缩至约20L，加水至约100L，静置12h，离心；上清液用20L湿的AB-8大孔树脂吸附，先用水洗至流出液无色，再用30％浓度乙醇80L解吸附，收集30％乙醇洗脱液，回收乙醇，减压干燥，即得葛根总黄酮。
(1)上述葛根总黄酮中葛根素的含量测定(高效液相色谱法)
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷链合硅胶为填充剂；甲醇-1.0％乙酸(25∶75)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按葛根素峰计算，应不低于3000。
对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品适量，用30％乙醇制成每ml含0.1mg的溶液。
供试品溶液的制备：精密称取本品约10mg，置10ml量瓶中，加30％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml置10ml量瓶中，用30％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品及供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪进行测定，其HPLC指纹图谱见图1。
采用共有指纹峰中峰面积较大且相对稳定的共有峰葛根素作为参照峰，以参照峰为基础计算相对保留时间和相对峰面积。上述葛根总黄酮的指纹图谱应有4-7个共有峰，一般为5个共有峰。5个共有峰的相对保留时间依次为0.52-0.65(3’-羟基葛根素峰)，1.0(葛根素峰即参照峰S)，1.10-1.20(3’-甲氧基葛根素峰)，1.40-1.55，1.70-1.85。共有峰中单峰面积占总峰面积大于20％的只有葛根素峰(即参照峰)，葛根素峰的峰面积占总峰面积的45％-90％，其相对峰面积为1；相对保留时间为1.10-1.20的共有峰(3’-甲氧基葛根素峰)峰面积占总峰面积的3％-18％，其相对峰面积为0.03-0.25。非共有峰总面积不大于总峰面积的5％。
(2)上述葛根总黄酮总黄酮的测定(紫外-可见分光光度法)
对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品适量，用30％乙醇制成每ml含10ug的溶液，即得。
供试品溶液的制备：精密称取本品约10mg，置10ml量瓶中，用30％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加30％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别取对照品与供试品溶液，以30％乙醇为空白，照紫外一可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA))，在250nm波长处测定吸收度，计算，即得。
本发明组合物中的另一活性成分三七总皂苷可由市场上购买，购买的产品必须符合国家部颁标准WS3-B-3590-2001(Z)或WS3-B-3829-98的规定”，也可以采用以下方法从三七中提取：取三七药材，用水或乙醇提取，收集提取液，浓缩或回收乙醇后的提取液过大孔吸附树脂，先用水或5-20％的低浓度乙醇洗脱，除去溶于极性溶剂的杂质，弃去，再用30-95％的高浓度乙醇洗脱，收集此高浓度乙醇洗脱液，将回收乙醇后的洗脱液干燥，即得三七总皂苷。
(1)上述三七总皂苷中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量测定(高效液相色谱法)
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速：1.0ml/min；检测波长为203nm；柱温：35℃；流动相A为乙腈，B为水，梯度如下：
| 时间(分钟) | A(乙腈) | B(水) |
| 0 | 20 | 80 |
| 13 | 40 | 60 |
| 19 | 20 | 80 |
| 30 | 20 | 80 |
对照品溶液的制备：精密称取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇分别制成每ml含0.2mg三七皂苷R1的溶液，每ml含0.4mg人参皂苷Rg1的溶液，每ml含0.4mg人参皂苷Rb1的溶液。
供试品溶液的制备：精密称取本品约15mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得HPLC指纹图谱，见图2。
采用共有指纹峰中峰面积较大且相对稳定的共有峰人参皂苷Rg1作为参照峰，以参照峰为基础计算相对保留时间和相对峰面积。上述三七提取物的指纹图谱应有8-12个共有峰，一般为11个共有峰。所述三七提取物的HPLC指纹图谱有11个共有峰，11个共有峰的相对保留时间依次为0.80-0.90(三七总皂苷R1峰)，1(人参皂苦Rg1峰即参照峰)，1.65-1.75，1.80-1.85，1.90-2.10，2.20-2.30(人参皂苷Rb1峰)，2.45-2.51，2.53-2.59，2.70-2.80(人参皂苷Rd峰)，3.45-3.63，3.65-3.82。共有峰中单峰面积占总峰面积大于20％的有人参皂苷Rg1峰和人参皂苷Rb1峰。人参皂苷Rg1峰(即参照峰)的峰面积占总峰面积的30％-50％，其相对峰面积为1.0，人参皂苷Rb1峰的峰面积占总峰面积的20％-50％，其相对峰面积为0.85-2.50：三七总皂苷R1峰的蜂面积占总峰面积的2％-10％，其相对峰面积为0.06-0.40。非共有峰总面积不大于总峰面积的5％。
(2)上述三七总皂苷中总皂苷的测定(紫外-可见分光光度法)
标准曲线的制备：精密称取人参皂苷Rg1适量，加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg 125ug的溶液，摇匀。精密吸取对照液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，分别置具塞试管中，水浴挥去溶剂，放冷，精密加入新鲜配制的5％香兰素冰醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，于60℃水浴中加热15min，冰浴冷却，分别精密加入乙酸5ml，混匀，放置10min。并取同样条件下空白液作空白，在550nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备及测定：精密称取本品30mg，置锥形瓶中，加水少量润湿后，加水饱和的正丁醇回流提取三次，溶剂用量分别为30、20、15ml，每次1小时，合并正丁醇液，加正丁醇饱和的水少量洗涤，弃去水液，用水饱和的正丁醇稀释至100ml，摇匀。精密吸取10ml，置50ml量瓶中，加水饱和的正丁醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取0.5ml，水浴蒸干，放冷，精密加入新鲜配制的5％香兰素冰醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，于60℃水浴中加热15min，冰浴冷却，分别精密加入乙酸5ml，混匀，放置10min。在550nm波长处测定吸收度，根据标准曲线计算总皂苷含量。
本发明的另一目的是提供了本发明药物组合物的制备方法，该方法可以采用制药领域的常规方法，使用常规的药用载体进行。例如采用一般方法将三七总皂苷和葛根总黄酮均匀混合后，与任何一种或一种以上药剂学上常用的载体或辅料混合，然后制成各种所需的剂型。所述的载体例如赋形剂、填料、稀释剂、润滑剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂、防腐剂、甜味剂、芳香剂等。具体的，所述载体例如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、甘氨酸等。
根据需要，本发明的药物组合物可制成适于各种途径用药的制剂，特别是适于口服和注射的剂型。所述适于口服的剂型可以是选自下述的任一剂型：片剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、滴丸、分散片、缓释片、控释片或口腔速崩片。所述适于注射的剂型可以是注射液、输液或粉针制剂。
当本发明的药物组合物被制成适于注射的剂型如注射剂或粉针剂时，其中葛根总黄酮中总黄酮含量在80％以上，三七提取物中总皂苷含量在80％以上。
本发明的另一目的是提供了本发明药物组合物在治疗心脑血管病方面的应用，所述的心脑血管病主要包括脑血栓、脑缺血、冠心病、心绞痛、心肌缺血、心衰、心律失常等。
在用于治疗心脑血管疾病时，可根据病情的需要，采用口服和注射途径用药，所述注射用药包括例如静脉注射或滴注的形式。用药剂量可根据病情的轻重，患者的体质、年龄、性别、体重等因素确定。一般来说，成人口服剂量为360-600mg，可一次给药或多次给药；以注射形式给药时，日剂量可在200-400mg。
本发明中药组合物原料来源易得，易于产业化，可根据需要制成各种剂型，为临床提供更加方便、更加有效、质量更加可控的现代中药，为患者带来更多的利益，从而产生巨大的社会效益。
附图说明
图1为葛根总黄酮的HPLC指纹图谱；和
图2为三七总皂苷的HPLC指纹图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
实施例1原料准备
(1)葛根总黄酮
取葛根药材10Kg，用10倍量70％乙醇回流提取三次，每次2h，滤过，合并三次乙醇提取液，回收乙醇，浓缩至约20L，加水至约100L，静置12h，离心；上清液用20L湿的AB-8大孔树脂吸附，先用水洗至流出液无色，再用30％浓度乙醇80L解吸附，收集30％乙醇洗脱液，回收乙醇，减压干燥，即得葛根总黄酮”。其中葛根素含量为45.2％，总黄酮含量为86.7％，其HPLC指纹图谱如图1所示。
(2)三七总皂苷
购自云南植物药业有限公司，其中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的总和为68.55％，总皂苷含量为82.7％，其HPLC指纹图谱如图2所示。
实施例2本发明药物组合物的粉针剂型
配方：
葛根总黄酮2g，三七总皂苷8g，甘露醇5g，和500ml注射用水。
制备：
将实施例1所述购买的三七总皂苷8g、实施例1制得的葛根总黄酮2g以及甘露醇5g混合并溶于500ml注射用水中，滤过，灭菌，喷雾干燥，无菌分装，制得含有1份葛根总黄酮和4份三七总皂苷的粉针剂型的药物组合物。
实施例3 本发明药物组合物的粉针剂型
配方：
葛根总黄酮5g，三七总皂苷5g，甘露醇5g，和1000ml注射用水。
制备：
将实施例1所述购买的三七总皂苷5g、实施例1制得的葛根总黄酮5g以及甘露醇5g混合并溶于1000ml注射用水中，滤过，灭菌，无菌分装，冷冻干燥，制得含有1份葛根总黄酮和1份三七总皂苷的粉针剂型的药物组合物。
实施例4 本发明药物组合物的粉针剂型
配方：
葛根总黄酮8g，三七总皂苷2g，甘露醇10g，和2000ml注射用水。
制备：
采用与实施例3相同的方法，按照上述配方制得含有4份葛根总黄酮和1份三七总皂苷的粉针剂型的药物组合物。
实施例5 本发明药物组合物的注射液或输液剂型
配方：
葛根总黄酮3g，三七总皂苷7g，0.05g EDTA-Na，和200ml 50％丙二醇。
制备：
采用常规的注射剂制备工艺，用实施例1所提供的原料，按照上述配方制得含有3份葛根总黄酮和7份三七总皂苷的注射液或输液剂型的药物组合物。
实施例6 本发明药物组合物的注射液或输液剂型
配方：
葛根总黄酮4g，三七总皂苷6g，0.05g EDTA-Na，和100ml 50％丙二醇。
制备：
采用常规的注射剂制备工艺，用实施例1所提供的原料，按照上述配方制得含有2份葛根总黄酮和3份三七总皂苷的注射液或输液剂型的药物组合物。
实施例7 本发明药物组合物的滴丸剂型
配方：
葛根总黄酮1g，和三七总皂苷10g。
制备：
采用常规制备滴丸的工艺，用实施例1所提供的原料，按照上述配方制得含有1份葛根总黄酮和10份三七总皂苷的滴丸。
实施例8 本发明药物组合物的软胶囊剂型
配方：
葛根总黄酮10g，三七总皂苷1g，和植物油25g。
制备：
采用常规制备软胶囊的工艺，用实施例1所提供的原料，取葛根总黄酮10g，三七总皂苷1g，植物油25g，混匀，用明胶作囊壳材料，压制成软胶囊，制得含有1份葛根总黄酮和0.1份三七总皂苷的软胶囊。
实施例9 本发明药物组合物的胶囊剂型
配方：
葛根总黄酮10g，三七总皂苷2g，和淀粉100g。
制备：
采用常规制备胶囊剂的工艺，用实施例1所提供的原料，取葛根总黄酮10g，三七总皂苷2g，和淀粉100g混匀，装入胶囊壳，制成胶囊剂。制得含有1份葛根总黄酮和0.2份三七总皂苷的胶囊。
实施例10本发明药物组合物的颗粒剂或片剂剂型
配方：
葛根总黄酮10g，三七总皂苷10g，和蔗糖80g。
制备：
采用常规制备颗粒剂的工艺，用实施例1所提供的原料，取葛根总黄酮10g，三七总皂苷10g，和蔗糖80g混匀，制粒，过筛，干燥，即制得合有1份葛根总黄酮和1份三七总皂苷的颗粒剂型的药物组合物。
将制得的颗粒经进一步压片，干燥，即制得合有1份葛根总黄酮和1份三七总皂苷的片剂剂型的药物组合物。
实施例11 本发明药物组合物的缓释片剂剂型
配方：
葛根总黄酮2g，三七总皂苷20g，和聚乙烯吡咯烷酮(K30)70g
制备：
采用常规制备片剂的工艺，用实施例1所提供的原料，取葛根总黄酮2g，三七总皂苷20g，和聚乙烯70g混匀，制粒，过筛，压片，干燥，即制得含有1份三七总皂苷和10份葛根总黄酮的缓释片剂型的药物组合物。
实施例12本发明药物组合物的分散片剂剂型
配方：
葛根总黄酮7g，三七总皂苷3g，微晶纤维素22g，羟丙纤维素8g，和微粉硅胶0.1g。
制备：
采用常规制备片剂的工艺，用实施例1所提供的原料，取葛根总黄酮7g、三七总皂苷3g、微晶纤维素22g、羟丙纤维素8g和微粉硅胶0.1g混合均匀，压片，即制得含有31份三七总皂苷和7份葛根总黄酮的分散片剂型的药物组合物。
实施例13 本发明药物组合物的药效试验
本发明药物的疗效由以下药效学试验证明：设计了三七总皂苷、葛根总黄酮及两者的不同配比样品，采用阻断大鼠大脑中动脉致大鼠脑缺血模型、静脉注射高分子右旋糖酐造成大鼠高粘滞血症模型及大鼠体外血栓形成模型，观察三七总皂苷与葛根总黄酮不同配比的作用效果，确定最佳配比。
(一)实验材料
1、药品与试剂
(1)葛根总黄酮：棕褐色粉末，批号050301，按照实施例1的方法制备；
(2)三七总皂苷：浅黄色粉末，批号050812，购自云南植物药业有限公司，总皂苷含量82.7％；
(3)葛根素注射液：安徽联谊药业股份有限公司产品，批号050149；
(4)血塞通注射液(三七总皂苷，含量大于80％)：昆明制药股份有限公司产品，批号20040943.02；
(5)10％高分子右旋糖酐：分子量30万，中科院血液研究所科技公司产品，批号050512。
2、仪器LG-R-80C型锥板粘度计：北京中勤世帝科学仪器有限公司产品；BT87-3型实验性体内血栓形成测定仪：包头医学院产品。
3、动物 大鼠：Wistar种，由天津药物院动物室提供。
(二)实验方法与结果
1、不同配比的三七总皂苷与葛根总黄酮对阻断大鼠大脑中动脉所致脑缺血的治疗作用
选用健康雄性Wistar种大鼠，体重290～350g，腹腔注射水合氯醛350mg/kg麻醉。按阻断大鼠大脑中动脉法进行实验操作，暴露出右侧大脑中动脉，在手术显微镜下，用高频电刀将大脑中动脉灼断，术后回笼饲养，室温保持在20～23℃，4小时后进行行为评分，将有典型脑缺血特征的大鼠，按症状轻重均匀分为模型对照组、75mg/kg的样品1～9剂量组(三七总皂苷与葛根总黄酮的比例分别为样品1(10∶0)、样品2(8∶2)、样品3(7∶3)、样品4(6∶4)、样品5(5∶5)、样品6(4∶6)、样品7(3∶7)、样品8(2∶8)、样品9(0∶10)、75mg/kg的血塞通注射液、40mg/kg的葛根注射液，进行静脉注射给药，每天1次，连续7天，每天对动物的行为进行评分，结果见表1。
末次给药后将动物断头取脑，在手术显微镜下证实大脑中动脉已被阻断后，再放入冷生理盐水中，10分钟后，去嗅球、小脑及低位脑干，沿冠状面切成5片，将脑切片置于含有1.5ml 4％红四氮唑及0.1ml 1MK2HPO4的5ml染色液中，避光，37℃温孵30分钟后，取出放入福尔马林液中，避光保存，正常组织呈玫瑰红色，梗塞区呈白色，将白色组织仔细挖下称重，并计算梗塞组织重量占大脑半球重量的百分比，观察药物的作用，结果，试验结果采用两组均数统计分析-t值法进行显著性检验，见表2。
行为评分标准如下：
(1)提鼠尾：离开地面约1尺，观察两前肢活动情况。正常动物两前肢前伸，对称。手术后，缺血脑半球对侧前肢内旋和内收，视程度不同，评0～4分。
(2)将动物置平滑地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。正常大鼠双侧阻力对称，向手术对侧推动时阻力下降者，根据下降程度不同，评0～3分。
(3)牵拉两前肢，正常对称，手术后对侧前肢无力，根据程度不同，评0～3分。
(4)动物有不停地向一侧转圈者，加一分。
根据以上评分标准，满分为11分，分数越高，动物的行为障碍越严重。行为评分由经过训练的人员专人进行评定。
表1.不同配比的三七总皂苷与葛根总黄酮静脉给药对阻断大鼠大脑中动脉所致行为障碍的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量(1mg/kg) | 配比 | 给药前 | 给药后 | ||||||
| 1天 | 2天 | 3天 | 4天 | 5天 | 6天 | 7天 | ||||
| 模型对照1号样品2号样品3号样品4号样品5号样品6号样品7号样品8号样品9号样品血塞通葛根素 | 7575757575757575757540 | 10∶08∶27∶36∶45∶54∶63∶72∶80∶10 | 8.5±1.38.6±1.38.7±1.58.5±1.28.6±1.08.5±1.08.7±1.38.6±1.38.6±1.38.5±1.58.6±1.29.1±1.6 | 8.1±1.57.4±1.37.3±1.27.4±1.27.6±1.47.7±1.17.8±1.37.3±1.47.6±1.17.4±1.77.7±1.38.1±1.7 | 7.6±1.76.8±1.36.8±1.37.1±1.06.9±0.77.6±1.26.8±1.26.5±1.06.7±1.16.5±1.87.0±0.97.1±1.6 | 7.0±2.06.3±1.16.2±1.36.1±1.16.3±0.86.4±1.25.7±0.95.6±0.7*6.1±1.45.9±1.46.2±0.86.2±1.2 | 6.9±2.35.5±1.05.6±1.05.5±1.15.7±1.05.3±0.8*5.2±0.8*5.2±0.8*5.2±1.0*5.1±1.15.6±0.85.2±0.9 | 6.7±2.15.0±0.7*5.1±1.2*5.2±0.9*5.1±1.0*4.8±0.9*5.0±0.9*4.9±1.1*5.0±1.1*4.9±1.2*5.0±0.9*5.1±1.1* | 6.6±2.24.7±0.6*4.7±1.0*4.7±1.0*4.8±0.9*4.6±0.9*4.5±0.4*4.3±0.7**4.6±0.6*4.5±1.2*4.7±0.7*4.7±1.3* | 6.3±1.84.5±0.7**4.6±1.0*4.6±0.8*4.4±0.8**4.3±1.0**4.4±0.4**4.2±0.7**4.5±0.5**4.4±0.9**4.4±0.6**4.2±1.1** |
*：P＜0.05 **：P＜0.01(与模型对照组比较)
表2.不同配比的三七总皂苷与葛根总黄酮对阻断大鼠大脑中动脉所致脑缺血面积的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 动物数(只) | 梗塞组织重量(mg) | 大脑半球重量(mg) | 梗塞组织重量/大脑半球重量(％) | 梗塞组织减少(％) |
| 对照组1号样品2号样品3号样品4号样品5号样品6号样品7号样品8号样品9号样品血塞通葛根素 | 10∶08∶7∶36∶45∶54∶63∶72∶80∶1063 | 11119111011111111111110 | 118.9±17.591.2±22.296.4±26.090.6±30.087.1±26.984.4±27.781.5±16.479.5±18.992.4±25.394.3±26.989.1±17.685.1±20.9 | 613.2±91.6625.4±87.4642.5±143.6618.9±104.6617.3±90.9601.1±119.8601.3±72.7621.7±101.2640.4±140.5631.9±82.9612.6±100.5598.1±94.3 | 19.7±4.114.7±3.8*15.3±4.6*14.7±5.0*14.1±3.7**14.2±4.7**13.7±3.1**12.9±3.6***14.8±4.6*14.9±4.0*14.7±3.2**14.4±3.6** | 26.022.326.028.427.930.434.524.924.426.026.9 |
*：P＜0.05 **：P＜0.01 ***：P＜0.01 (与缺血对照组比较)
梗塞组织减少％＝对照组与给药组梗塞组织百分比差值/对照组梗塞组织×100％
表1结果显示，与模型对照组比较，不同配比的三七总皂苷与葛根总黄酮在给药后均能改善脑缺血大鼠的行为障碍，其中，配比为3∶7(三七总皂苷∶葛根总黄酮)起效最快(给药后4天)，作用最强。
表2结果显示：与模型对照组比较，不同配比的三七总皂苷与葛根总黄酮在给药后均能明显减少脑缺血大鼠的梗塞面积，其中，配比为3∶7(三七总皂苷∶葛根总黄酮)作用最强(减少了34.5％)，强于等剂量的三七总皂苷(25.5％)或葛根总黄酮(28.9％)。和改善行为障碍的结果基本一致。
2、不同配比三七总皂苷与葛根总黄酮对高粘滞血症大鼠全血粘
选用上述健康大鼠，雌雄兼用，体重190～230g，按性别、体重随机分为正常对照组、模型对照组、50mg/kg的样品1～9剂量组(三七总皂苷与葛根总黄酮的比例分别为样品1(10∶0)、样品2(8∶2)、样品3(7∶3)、样品4(6∶4)、样品5(5∶5)、样品6(4∶6)、样品7(3∶7)、样品8(2∶8)、样品9(0∶10)、75mg/kg的血塞通注射液组、40mg/kg的葛根素注射液组。进行一次静脉注射给药，给药容量均为0.5ml/100g体重，正常对照组及模型对照组均静脉注射等容量的对照液，各组大鼠(正常对照组除外)均于给药后20分钟，尾静脉注射10％高分子右旋糖酐注射液1ml/kg，造成高粘滞血症模型。造型后10分钟后，自腹主动脉取血，以3.8％枸橼酸钠抗凝(抗凝剂与全血的比为1∶9)，在LG-R-80C型锥板粘度计上测定4个切速下的全血粘度，比较各剂量组的差异。试验结果采用两组均数统计分析-t值法进行显著性检验，见表3。
表3结果显示，与正常对照组比较，模型对照组各切速下的全血粘度均明显升高，表明已造成大鼠高粘滞血症模型，造型成功。与模型对照组比较，75mg/kg的样品1～9、75mg/kg的血塞通注射液及40mg/kg葛根素注射液均能不同程度的抑制大鼠高粘滞血症的形成。其中，等剂量的血塞通注射液与三七总皂苷、葛根素注射液与葛根总黄酮作用强度相当；不同配比的三七总皂苷与葛根总黄酮均有明显作用，以样品7(三七总皂苷∶葛根总黄酮为3∶7)效果最佳，作用强于等剂量的三七总皂苷或葛根总黄酮。
表3不同配比三七总皂苷、葛根总黄酮对高粘滞血症大鼠血液流变学的影响(
)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 动物数(只) | 配比三七∶葛根 | 全血粘度(mpa.s) | |||
| 1S-1 | 5S-1 | 30S-1 | 200 S-1 | ||||
| 正常对照模型对照1号样品2号样品3号样品4号样品5号样品6号样品7号样品8号样品9号样品血塞通葛根素 | 7575757575757575757540 | 8888888888888 | 10∶08∶27∶36∶45∶54∶63∶72∶80∶10 | 10.92±1.2320.63±2.47△△△16.45±1.72**16.52±3.32*17.08±2.92*16.78±2.84*17.39±2.45*16.58±3.24*15.43±1.51***17.52±2.73*17.39±2.85*16.40±1.91**17.59±2.04* | 4.69±0.608.50±0.92△△△6.91±0.68**7.008±1.30*7.08±1.18*6.97±1.18*7.30±1.10*6.82±1.26*6.55±0.66***7.21±1.19*7.25±0.97*6.89±0.65**7.3 1±0.77* | 2.62±0.414.57±0.55△△△3.79±0.44**3.88±0.72*3.83±0.66*3.78±0.69*3.99±0.683.65±0.68*3.63±0.46**3.87±0.72*3.95±0.52*3.78±0.39**3.97±0.46 | 1.93±0.333.27±0.45△△△2.74±0.38*2.83±0.552.75±0.50*2.72±0.54*2.904±0.542.61±0.51*2.664±0.41*2.71±0.572.86±0.422.75±0.35*2.86±0.38 |
△△△：p＜0.001(与正常对照组比较)
*p＜0.05、**p＜0.01、***p＜0.001(与模型对照组比较)
3、不同配比三七总皂苷与葛根总黄酮对体内血栓形成的影响
选用上述健康Wistar种大鼠，按性别、体重随机分为样品6、样品7、样品8及正常对照4组。各剂量组均按150mg/kg的剂量静脉注射给药，给药体积均为0.5ml/100g体重，正常对照组灌胃给予等容量生理盐水，给药后30分钟，戊巴比妥钠腹腔麻醉(40mg/kg)，分离一侧颈动脉约15mm，用BT87-3型血栓形成仪刺激电极及温度传感器钩于颈动脉上，以1.5mA的电流持续刺激血管壁7分钟，然后停止刺激，同时由温度传感器监测血管表面温度的变化，当血栓形成，堵塞血流时，血管远心端温度突降，仪器报警，记录从刺激开始至报警的时间，作为血栓形成时间(OT值)，试验结果采用两组均数统计分析t-值法进行显著性测验，见表4。
表4 样品6～8对正常大鼠颈动脉血栓形成时间的影响(
)
| 组别 | 配比(三七/葛根) | 剂量(mg/kg) | 动物数(只) | OT值(秒) |
| 正常对照6号样品7号样品8号样品 | 4∶63∶72∶8 | 150150150 | 6666 | 553.2±86.1892.2±212.6**1061.7±195.2***961.0±194.9** |
**：：P＜0.01 ***：：P＜0.001 (与正常对照组比较)
表4结果显示，与正常对照组比较，样品6、样品7、样品8均明显延长大鼠颈动脉血栓形成时间，7号样品作用最好。
(三)实验结论
以上实验结果表明，不同配比的三七总皂苷、葛根总黄酮均能明显改善脑缺血大鼠的行为障碍，明显减少脑梗塞面积，明显抑制大鼠高粘滞血症的形成，明显抑制颈动脉血栓的形成。其中，样品7(三七总皂苷∶葛根总黄酮为3∶7)效果最佳，作用强于等剂量的三七总皂苷或葛根总黄酮，表明有一定的协同作用。
现在已经详细描述了本发明的实施方案，对本领域技术人员来说很明显可以做很多改进和变化而不会背离本发明的基本精神。所有这些变化和改进都认为是本发明的范围之内，其特征由上述说明书确定。
Claims (10)
1.一种治疗心脑血管病的药物组合物，该组合物由三七总皂苷、葛根总黄酮以及药用载体组成；其中所述葛根总黄酮的纯度在50％以上，所述三七总皂苷的纯度在80％以上；所述两种活性成分的重量比为三七总皂苷1份，葛根总黄酮1.5～2.5份。
2.根据权利要求1所述的治疗心脑血管病的药物组合物，其中所述葛根总黄酮的纯度在80％以上。
3.根据权利要求2所述的治疗心脑血管病的药物组合物，其中所述的三七总皂苷是由三七提取的，和其中的葛根总黄酮是由葛根提取的。
4.根据权利要求3所述的治疗心脑血管病的药物组合物，其中所述是葛根总黄酮是按照下述方法制备的：将葛根药材用水或不同浓度的乙醇提取，提取液回收乙醇，浓缩至适当体积；浓缩液用大孔树脂吸附，先用水洗至流出液无色，再用低浓度乙醇解吸附，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，即得葛根总黄酮。
5.根据权利要求4所述的治疗心脑血管病的药物组合物，其中所述两种活性成分的重量比优选为：三七总皂苷∶葛根总黄酮为3∶7份。
6.根据权利要求4所述的治疗心脑血管病的药物组合物，其中所述两种活性成分的重量比优选为：三七总皂苷∶葛根总黄酮为4∶6份。
7.根据权利要求1-6任意一项所述的治疗心脑血管病的药物组合物，该组合物被制成适合于口服和注射的剂型。
8.根据权利要求7所述的治疗心脑血管病的药物组合物，其中所述适于口服的剂型选自下述任一剂型：片剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、滴丸、分散片、缓释片、控释片或口腔速崩片。
9.根据权利要求7所述的治疗心脑血管病的药物组合物，其中所述适于注射的剂型可以是注射液、输液或粉针制剂。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的药物组合物在制备治疗心脑血管疾病的药物中的应用。
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