CN101167697B

CN101167697B - 多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN101167697B
Application number: CN2006101176092A
Authority: CN
Inventors: 李亚平; 顾王文; 陈伶俐
Original assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Current assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Priority date: 2006-10-26
Filing date: 2006-10-26
Publication date: 2011-03-30
Anticipated expiration: 2026-10-26
Also published as: CN101167697A

Abstract

本发明公开了一类多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物及其制备方法。本发明的组合物为微粒状，按重量份计，包含：多奈哌齐类化合物0.5～5份，缓控释的载体材料1～500份，并可进一步包括其它药学上常规辅料。该组合物用于抗老年痴呆，能减少多奈哌齐类制剂给药次数，延长给药周期，增加病人的依从性和顺应性，提高多奈哌齐的生物利用度和治疗指数。本发明同时公开了多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物的多种制备方法。制备方法灵活多样，均采用常规的工艺设备，可工业化规模，高效率生产，产品质量保持稳定，可直接或二次加工制备成注射或口服制剂使用。

Description

多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于药品制剂领域，涉及一类多奈哌齐类化合物的药物组合物及其制备方法，更具体而言，涉及一种含有抗老年痴呆的药物活性成分多奈哌齐类化合物的长效缓控释组合物及其制备方法。

背景技术

多奈哌齐(Donepezil)是日本卫材制药有限公司开发的一种中枢性的乙酰胆碱酯酶抑制剂，商品名称安里申(Aricept)，于1996年11月获FDA批准，1997年11月首先在美国上市，1999年10月在中国上市。目前在世界上50多个国家销售。它属第二代胆碱酯酶抑制剂，具有特异的可逆性，患阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)时，乙酰胆碱浓度降低与认知功能障碍有关，当乙酰胆碱释放进入突触间隙后，AchE将未结合在突触后神经元受体上的乙酰胆碱降解为胆碱和乙酸，胆碱则被吸收到突触前神经元用于再合成乙酰胆碱。多奈哌齐抑制AchE的结果是使突触间隙有大量的乙酰胆碱，加强了胆碱能作用，获得改善记忆和思维的最大效益。多奈哌齐是一种以哌啶环为基础的、有高度选择性的、非竞争性的、可逆的乙酰胆碱酯酶抑制剂，它对乙酰胆碱酶的抑制作用比对丁酰胆碱酶的抑制作用强1000倍，而对脑乙酰胆碱酯酶的选择性(ID50：6.3mmol/kg)比对血浆乙酰胆碱酯酶的选择性(ID50：170mmol/kg)更强，多奈哌齐在脑和血浆中的浓度比为6：1～8：4，故可剂量依赖性地抑制脑乙酰胆碱酯酶，而对心脏和小肠的乙酰胆碱酯酶活性无明显影响。多奈哌齐具有剂量小、毒性低和费用低等优点，是治疗轻、中度AD的首选药物，此外，它还可治疗记忆功能障碍，减少非老年性情感障碍患者的记忆丧失、口干、便秘；还可用于治疗紫癜性皮疹、血管性痴呆、快动眼睡眠时相(REM)的睡眠行为障碍以及Huntington’s病。

多奈哌齐水溶性好，目前市售制剂为薄膜衣片，规格为5mg/片，使用方法为初始治疗每次5mg，每日一次，应在夜间睡前服用，服用一个月后可增至每日一次，每次10mg(2片)。该制剂口服吸收好，生物利用度可达100％，临床使用疗效好，但常规制剂需每天服药，服用周期长，这给病人带来极大的痛苦和不便，加之老年痴呆病人依从性差，导致临床脱失率高，严重影响治疗效果，由此可见，多奈哌齐普通制剂不能完全满足临床需要。

为解决多奈哌齐薄膜衣片带来的问题，国内外学者已对多奈哌齐的其他制剂做了多种尝试。中国专利，授权公告号为CN1175813C，公开了利用水溶性辅料聚乙二醇4000和聚氧乙烯(40)硬脂酸酯制备了一种盐酸多奈哌齐滴丸，该制剂剂量分割方便，减小了增加剂量的梯度，提高了生物利用度；申请号为200410155435(公开号：CN1608623A)的中国专利申请，披露了采用适当辅料制备的盐酸多奈哌齐肠溶片，与多奈哌齐薄膜衣片比较具有副反应少，对胃部无刺激等优点；申请号为200410056864(公开号：CN1602867A)的中国专利申请，研制了盐酸多奈哌齐软胶囊，该制剂与目前市场上销售的盐酸多奈哌齐薄膜衣片相比，具有生物利用度高、稳定性好的优势。尽管对多奈哌齐制剂的研究取得了一定进展，但此类制剂未能解决多奈哌齐需长期、每日服药带来的问题，因此临床和市场上需要一种多奈哌齐长效缓控释制剂。

发明内容

为了解决上述存在的问题，本发明的目的是提供一种长效的性质稳定的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物，该组合物能减少多奈哌齐类化合物药物制剂给药次数，延长多奈哌齐类化合物药物制剂给药周期，增加病人的依从性和顺应性，同时减少多奈哌齐类化合物的毒副作用，提高多奈哌齐类化合物的生物利用度和治疗指数。

本发明的另一个目的是提供上述多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物的制备方法。

本发明的技术方案是这样实现的，本发明提供的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物，其特征在于，该组合物为微粒状，按重量份计，包含：多奈哌齐类化合物0.5～5份；具有缓控释作用的载体材料1～500份。

本发明的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物除了上述两种主要成分外，可进一步包含有适量的辅剂，如乳化剂0.1～10份、凝聚剂0.1～10份、固化剂0.2～5份、抗粘剂0～5份、分散剂0～10份、交联剂1～10份、支架剂1～100份。

所述的多奈哌齐类化合物为多奈哌齐或多奈哌齐与酸形成的盐，所述的盐例如盐酸多奈哌齐、枸橼酸多奈哌齐，硫酸多奈哌齐，酒石酸多奈哌齐等。

所述的具有缓控释作用的载体材料为选自明胶、壳聚糖、阿拉伯胶、海藻酸盐、白蛋白、淀粉及淀粉衍生物、羧甲基纤维素盐、丁酸乙酯纤维素、白氨酸-谷氨酸苄酯共聚物、邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)、乙基纤维素(EC)、甲基纤维素(MC)、羟丙甲纤维素(HPMC)、聚乳酸、聚碳酸酯、聚氨基酸、聚丙酸树脂、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸羟乙酯、聚氰基丙烯酸烷酯、乙交酯丙交酯共聚物、聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物、ε-己内酯丙交酯嵌段共聚物、聚合酸酐、羧甲基葡聚糖、乙烯/聚乙烯醇缩聚物、松香季戊四醇酯等中的一种或几种的混合物。

所述的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物微粒的粒径小于500μm。

本发明的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物采用常规制作方法，可以进一步制成注射制剂或口服制剂给予患者，其中注射方式以皮下埋植、皮下注射和肌肉注射为主。

本发明提供上述多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物的制备方法，该方法包括：利用溶剂和乳化剂将多奈哌齐类化合物与载体材料配制成乳状液，脱溶剂后，得到本发明的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物；

或者将多奈哌齐类化合物分散或溶解在载体溶液或熔体中，通过载体的凝聚和/或固化，而得到本发明的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物；

或者将多奈哌齐类化合物分散或溶解在载体材料单体的乳状液中，使载体材料的单体聚合，得到本发明的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物；

其中，多奈哌齐类化合物的用量为0.5～5份，载体材料的用量为1～500份。

下面具体地说明本发明的制备方法。

方法一：将载体材料溶解在易挥发的有机溶剂中，然后将多奈哌齐类化合物溶解或分散在载体材料溶液中，加入含乳化剂的油相或水相制成乳状液，蒸发除去有机溶剂，分离即可得多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物。所述的有机溶剂选自氯仿、乙醚、氯乙烯、乙酸甲酯、苯、乙腈、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮及其混合溶剂；油相选自液体石蜡、蓖麻油、玉米油、矿物油、棉籽油、橄榄油、油酸、葵瓜子油、甘油、丙二醇等中的一种或几种的混合物。

方法二：将含有乳化剂的载体材料有机溶液与多奈哌齐类化合物水溶液混合制成W/O型乳状液，再加入含乳化剂的水作连续相制备W/O/W型复乳，然后蒸发除去溶剂，分离即得多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物；或者将载体材料有机溶液与含乳化剂的多奈哌齐水溶液混合制成O/W型乳状液，再加入含乳化剂的油相制成O/W/O型复乳，然后蒸发除去溶剂，分离即得多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物。

方法三：将多奈哌齐类化合物分散在载体材料有机溶液中，搅拌下加入对载体材料不溶的非溶剂，引起相分离形成多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物。为防止多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物粘连，常加入分散剂。其中所述的载体材料选自乙基纤维素、苄基纤维素、醋酸纤维素丁酯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚醋酸乙烯酯、苯乙烯马来酸共聚物、聚丙烯酸树脂、DL-丙交酯/乙交酯共聚物、聚甲基丙烯酸甲基酯、聚合酸酐等；溶剂-非溶剂系统选自四氯化炭(或苯)-石油醚、三氯乙烯-丙醇、丁酮-异丙醚、四氢呋喃(或环己烷)-水(或乙二醇)、二甲苯—正己烷、氯仿-乙醇、乙醇-乙酸乙酯、四氢呋喃-环己烷、氯仿-乙二醇、乙醇-水、氯仿-石油醚、二氯甲烷-石油醚；分散剂选自聚异丁烯、聚乙烯、丁基橡胶、乙撑聚乙烯醇缩乙醛。

方法四：将多奈哌齐类化合物和载体材料用常规方法配制成溶液、乳状液或悬浮液后，以雾滴形式喷入热气流使液滴收缩成球形，进而干燥固化，即可制得多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物。此过程中常需加入抗粘剂防止粘连，其中抗粘剂选自滑石、硬脂酸镁、微粉硅胶、二氧化钛、氧化铝、色淀(包括氧化铁)以及单硬脂酸甘油酯等。

方法五：将多奈哌齐类化合物分散在熔融的载体材料中，再喷于冷气流中凝聚而成。这里载体材料选自蜡类、脂肪酸、脂肪醇等。

方法六：将多奈哌齐类化合物在载体材料有机溶液中制成混悬液或乳状液，加入凝聚剂，最后加固化剂交联固化，离心沉降即可制得长效缓控释组合物。其中凝聚剂选自强亲水性电解质如硫酸钠溶液、硫酸铝溶液、三聚磷酸钠溶液、硫酸铵溶液或强亲水性非电解质乙醇、丙酮；固化剂选自氯化钙、甲醛、戊二醛、丙酮醛、异丙醇、丁二酮及其混合物。

方法七：将多奈哌齐类化合物分散在两种带相反电荷的载体材料有机溶液中，得混悬液或乳状液，加入凝聚剂形成凝聚囊，最后经固化，即可制得。其中两种带相反电荷载体材料选自明胶与阿拉伯胶(或羧甲基纤维素或醋酸纤维素酞酸酯或海藻酸盐或邻苯二甲基化明胶或乙酰甲基醚马来酐共聚物或乙酰马来酐共聚物)、海藻酸盐与聚赖氨酸、海藻酸盐与壳聚糖、海藻酸与白蛋白、白蛋白与阿拉伯胶等。

方法八：将乙基纤维素在高温(60-90℃)下溶解于水中，并将多奈哌齐类化合物分散于其中，然后降低温度至(4-50℃)即可得长效缓控释组合物。

方法九：将多奈哌齐类化合物溶解在白蛋白溶液中，加入一定量植物油或有机溶剂(可加或不加乳化剂)制成W/O???型乳状液，再升温至70-150℃固化，即得。为防止长效缓控释组合物粘连，需加入分散剂(如聚异丁烯、聚乙烯、丁基橡胶、乙撑聚乙烯醇缩乙醛等)。

方法十：将载体材料聚合物的单体用乳化或增溶的方法，将其高度分散，将多奈哌齐类化合物加入在该反应液中，然后在交联剂作用下使载体材料单体聚合，同时将多奈哌齐类化合物包裹制成长效缓控释组合物。其中交联剂选自癸二酰氯、苯二甲酰氯、苯甲酰氯、邻苯二甲酰氯、环氧丙烷、戊二醛、甲醛等。

上述制备方法中所用到的乳化剂可选自甘油、极性多元醇、聚乙烯醇、聚乙二醇、硬脂酸钠、硬脂酸钾、油酸钠、油酸钾、硬脂酸钙、十二烷基硫酸钠、溴化十六烷基三甲基铵、十六烷基硫酸化蓖麻油、单甘油脂肪酸酯、三甘油脂肪酸酯、聚甘油硬脂酸酯、聚甘油油酸酯、聚甘油棕榈酸酯、聚甘油月桂酸酯、蔗糖单月桂酸酯、蔗糖单油酸酯、蔗糖单棕榈酸酯、脂肪酸山梨坦类(即span类，如20，40，60，80)、聚山梨酯(即tween类，如20、40、60、80)、卖泽(myrj 45、52、49)、苄泽(brij 30、35)、平平加1-20、乳白灵A、乳化剂OP、泊洛沙姆、阿拉伯胶、西黄蓍胶、明胶、杏树胶、卵黄、白及胶、果胶、桃胶、海藻酸钠、琼脂、酪蛋白、胆酸钠、甲基纤维素等；其用量为每100ml 溶液中加乳化剂的量为0.01g—7g之间。

为延长多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物的存放时间，可将本发明的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物通过真空干燥或冷冻干燥制成粉末状长效缓控释组合物，提高长效缓控释组合物的稳定性；为防止干燥工艺中长效缓控释组合物的聚集和粘连，可以加入支架剂，这里支架剂选自氨基酸、乳糖、甘露糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯胶、木糖醇、山梨醇、果糖及其混合物。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物为微粒，粒径小于500μm，具有缓释性，能显著延长药效，提供持续的治疗效果。实验证明，该多奈哌齐类物质长效缓控释组合物能在较长时间内维持有效血药浓度，而且可降低多奈哌齐类物质的不良反应，增加病人的依从性和顺应性。

实验表明，将多奈哌齐类化合物制备成长效的长效缓控释组合物制剂，随着载体材料的降解和融蚀，该制剂缓慢释放出药物，使多奈哌齐的血药浓度能在较长时间内维持有效，从而延长药物疗效，大大减少服药次数，方便了患者，提高了病人的耐受性。该长效缓控释组合物制剂的固体粉末能保证制品储存过程中的稳定性。

长效缓控释组合物的制备工艺成熟，产品质量稳定，便于工业化生产。制备方法灵活多样，均采用常规的工艺设备，可工业化规模、高效率生产，产品质量保持稳定。

附图说明

图1为实施例3制备的多奈哌齐长效缓控释组合物在电镜下观测照片。

图2为实施例5制备的盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物的释放度与时间对照表。

图3为实施例7中盐酸多奈哌长效缓控释组合物的释放度与时间对照表。

图4为实施例11制备的盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物粒径分布曲线。

图5为实施例12中盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物的释放曲线。

图6为实施例16中盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物释放度与时间对照表。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细描述，但不作为对本发明的限定。

实施例1

称取100mg载体材料丙烯酸树脂溶于2ml丙酮，冷却磁力搅拌下滴入盐酸多奈哌齐水溶液5ml，并加入3mg的硬脂酸镁，将该混合液缓慢滴入含0.5％Span60的液体石蜡25ml中，形成液体石蜡包裹丙酮的乳化剂，逐渐升高温度，2～3小时后，微粒析出，用正己烷洗涤数次，减压干燥，得到包封盐酸多奈哌齐的丙烯酸树脂长效缓控释组合物。

实施例2

采用乳化-溶剂蒸发法制备盐酸多奈哌齐聚乳酸长效缓控释组合物，将100mg载体材料聚乳酸溶于2ml氯仿中，并将20mg的盐酸多奈哌齐分散于其中，在800rpm搅拌下，缓慢加到分散介质(1％PVA溶液)中，乳化10min后，再倾入到扩散介质(0.2％PVA溶液)中挥发有机溶媒，然后离心、过滤、干燥，即得盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物。

实施例3

将多奈哌齐20mg混悬于3％壳聚糖溶液10ml中，振荡混合均匀，滴入含5％span85及0.5％tween80的玉米油30ml中，以200rpm乳化15min，滴加25％戊二醛2ml固化。随后加入石油醚40ml，搅拌5min后静止，弃去上层，多奈哌齐长效缓控释组合物依次用异丙醇、石油醚洗3-5次，真空干燥，得到疏松的粉末状固体长效缓控释组合物。图1电镜照片观察长效缓控释组合物外观圆整，平均粒径为10.06μm。

实施例4

精密称取实施例3中多奈哌齐长效缓控释组合物25mg于容量瓶中，流动相(甲醇：0.01mol/L(NH₄)H₂PO₄＝85：15)加到刻度50ml，6000r/min离心10min，取上清液20μl测定游离药物量；同法移取多奈哌齐长效缓控释组合物25mg，加入0.1mol/L盐酸50ml，于37℃水浴加热2小时，经微孔滤膜过滤后直接进样，采用HPLC法测定。色谱条件：YMC-Pack ODS柱(150×3.9mm，5μm)；流动相：甲醇：0.01mol/L(NH₄)H₂PO₄；流速：1ml/min；检测波长：315nm。以峰面积计算多奈哌齐含量，按下式求算载药量，

载药量(％)＝(总药量-游离药量)/长效缓控释组合物重量×100％

测定结果：制备的缓释长效缓控释组合物平均载药量为64％。

实施例5

称取30mg多奈哌齐枸橼酸盐溶于10ml明胶溶液(25％，w/w)中，控制温度为50±0.5℃，搅拌，形成A液，作为水相；另在100ml的液体石蜡中加2mlspan-85，搅拌均匀，形成B液，作为油相；再将A液缓慢匀速滴入B液中，剧烈搅拌10min，形成C液，将C液置于4℃的水浴中，搅拌，滴加1ml戊二醛，固化1小时，分别用石油醚、乙醚洗涤数次，真空干燥，即得多奈哌齐枸橼酸盐长效缓控释组合物。

采用动态透析法测定。精密称取明胶药物长效缓控释组合物50mg置于透析袋内，加入磷酸缓冲液(pH＝7.4)50ml。透析袋外为磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)250ml，置于37±0.5℃恒温水浴中，磁力搅拌，每隔30min取10ml磷酸缓冲液进行药物含量的测定，每次取样后立即补给磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)。

如图2可知，5小时内药物释放占总含药量的70％，表明该长效缓控释组合物具有一定的缓释性。

实施例6

取盐酸多奈哌齐160mg，加至500mg/ml的清蛋白磷酸盐缓冲液5ml中(pH7.4)，使其呈均匀分散的混悬液，将该混悬液在1min内加至20ml、400r/min搅拌的精制玉米油中，搅拌10min，形成W/O型乳浊液。在不断搅拌下将乳浊液加温至109℃固化交联10min，停止加热，继续搅拌至室温，抽滤分离上述溶液，用无水乙醚60ml分3次洗涤，分离，室温干燥得流动性粉末长效缓控释组合物。

长效缓控释组合物的粒径分布测定：取待测盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物适量用玉米油涂于细胞计数板中央，用带目测镜的光学显微镜随机目测长效缓控释组合物500个，得每批长效缓控释组合物的粒径分布。

包封率的测定：称取盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物适量于25ml容量瓶中，加入5％胃蛋白酶溶液5ml于(37±5)℃水浴中振荡消解，待溶液澄清后，用双蒸水定容至刻度，后于315测定吸收度，计算药物包封率。

显微镜观察结果显示，盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物外观圆整，粒径在56～251μm的盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物约占总数的80％，平均粒径139.422μm；药物包封率为84.3％。

实施例7

采用振荡透析法作盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物体外释药实验。

称取实施例6中的盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物10mg，用PBS溶液1.5ml冲洗入透析袋内，两端扎紧，置于50mlPBS溶液中，于(37±5)℃水浴中振荡，并分别于1、2、4、6、8、12、24h取样5ml，在315nm处测定紫外吸收值计算药物的累积溶出量，并及时补充相同体积的缓冲液。

如图3所示，盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物在5h内快速释放约60％的药物，之后进入缓慢的释药状态，24h时药物释放率为80％。

实施例8

参考O/W型乳化挥发法，有机相为10％的聚乳酸(PLA)氯仿溶液，外水相为盐酸多奈哌齐饱和的1.0％聚乙烯醇(PVA)溶液。将15％的盐酸多奈哌齐30mg超声混悬于有机相1mL中，16#针头缓慢注入预冷至10℃以下的外水相35mL中，磁力搅拌乳化10min后，改为四叶搅拌桨机械300r/min搅拌5h，静置24h，过滤，一定量纯化水洗涤3次，抽干，真空硅胶干48h，即得盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物。

取少量盐酸多奈哌齐微球，0.01％聚山梨酯80分散于盖玻片上干燥后，喷金，扫描电子显微镜观察盐酸多奈哌齐微球的外观形态和表面结构。另取少量滴于载玻片上，光学显微镜下照相后游标卡尺测定长效缓控释组合物直径，每批不少于500个，经Statistica510统计软件处理，以平均粒径，跨距＝(d90-d10)/d50为指标评价微球的粒径分布。

测得盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物几何平均粒径为100.94μm，跨距为0.82。

实施例9

喷雾干燥法：将PLA溶于CHCl₃，加入10mg多奈哌齐超声混匀，置喷雾干燥器进行喷雾。喷雾条件：进口温度50～70℃，出口温度约42℃，吸气流速15m³/h，空气流速700L/h，泵流速25ml/min。测得平均粒径为1.09μm，跨距为1.21。

实施例10

称取250mg白蛋白，溶于50ml蒸馏水中，溶解后，加入盐酸多奈哌齐250mg，经0.45μm的微孔滤膜过滤，将过滤后的溶液经蠕动泵(进样速度3mL·min^-1)导入BUCHI190小型喷雾干燥器的双流向螺旋式喷嘴(直径0.7mm)，控制气流量600L·h^-1，压缩空气压450kPa，进风温度(108±1)℃，出风温度(56±1)℃和旋涡式气流泵设置为8挡，喷雾干燥“一步”制成粉末盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物，收集盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物并于硅胶干燥器中放置72h，备用。

精密称取盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物30mg置于100mL量瓶中，加蒸馏水至刻度(100mL)，充分摇匀，超声5min，过滤，弃其初滤液，取续滤液2.5mL，移入25mL量瓶中，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。测定315nm波长处的紫外吸光度。载药量和包封率的计算按下式进行，载药量＝W1/W_微球×100％，包封率＝W1/W2×100％(W1为长效缓控释组合物中测得的盐酸多奈哌齐质量，W2为投入的盐酸多奈哌齐的量)。

按上法测得包封率为93.62％，载药量为46.93％。

实施例11

以聚乳酸(约0.7g)的氯仿(约15mL)溶液作为分散相，在其中加入盐酸多奈哌齐20mg，油相为含1％Span-80的花生油(约200mL)为连续相，在600r/min下电动搅拌，室温下减压使溶液剂挥发而固化，然而再保持抽真空条件下使溶剂挥发完，此过程约需12h左右，制得的聚乳酸长效缓控释组合物先抽滤，然后用汽油反复洗涤2～3次，真空干燥12h，过筛，即得聚乳酸载药长效缓控释组合物样品。

用光学显微镜以测微尺测量粒径并计数(每组样测500个长效缓控释组合物)，按公式：

dav＝(n1d1+n2d2+n3d3+nn dn)/(n1+n2+nn)

计算平均粒径。(n1，n2，n3 nn是粒径为d1，d2，d3dn的粒子数)

按上述方法测得平均粒径为22.04μm，粒径分布如图4所示。

实施例12

准确称取实施例11中的聚乳酸载药长效缓控释组合物25mg，置于自制的释药袋中，紧密封口，然后置于37℃500mL的生理盐水中，以100r/min恒温振荡，定时取5mL释放介质，同时补充等量的新鲜溶媒，测定其吸光度，根据工作曲线方程换算成浓度，并依下式计算出累积释药百分率。

由图5所示的盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物的释放曲线可知，该长效缓控释组合物具有一定的缓释性能，可以缓慢释放包裹在长效缓控释组合物中的盐酸多奈哌齐。

实施例13

盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物的制备：称取PLGA，用二氯甲烷4mL溶解成约7.5％-8.5％(w/v)载体溶液作为油相；另称取盐酸多奈哌齐30mg溶于蒸馏水200μL作为内水相，加入油相后50-200W探头超声5-30s，充分乳化后注入0.5％PVA溶液40mL中，12000r·min^-1搅拌2-3min，静置，减压旋转蒸发30-60min，离心后用蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥。用显微镜观察盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物的形态及表面特征。

包封率的测定：精密称取PLGA长效缓控释组合物10-20mg，用乙腈1.0mL溶解，16000r·min^-1离心10min，弃去含聚合物的溶液，沉淀真空干燥过夜。次日，加水溶解后，于315nm处测定吸收值。

PLGA长效缓控释组合物呈圆球形，表面光滑不粘连，平均粒径约为5.2μm；长效缓控释组合物的包封率为83.5％。

实施例14

在搅拌条件下，将含盐酸多奈哌齐的壳聚糖醋酸明胶溶液2ml滴入到含有表面活性剂Tween80的40℃甲苯10ml中，以4000r/min高速搅拌10min。然后，在25℃超声乳化10min，待温度降至10℃，倾入无水乙醚 20ml中并立即加甲醛2ml与无水硫酸钠固化60min，减压滤过，乙醚洗涤，真空干燥，即得盐酸多奈哌齐明胶网络多聚物长效缓控释组合物。

稳定性考察：将密封于塑料袋中的干燥盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物于冰箱(4℃/RH75％)，室温(25℃/RH75％)和烤箱(40℃/RH75％)条件下放置0、1、2、3个月检查长效缓控释组合物的形态、药物含量。

按盐酸多奈哌齐微球密封于塑料袋中，分别经过4℃/RH75％，25℃/RH75％，40℃/RH75％放置3个月，其外观形态与粒径未观察到明显变化，说明盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物稳定。盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物含药量测定结果如下：4℃变为标示量的103.60％±18.12％，25℃99.80％±17.99％，40℃101.7％±20.18％。表明盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物中药物含量无明显变化，说明盐酸多奈哌齐在长效缓控释组合物中稳定。

实施例15

用溶剂挥发-萃取法制备盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物：称取聚丙交酯(PL)187.50mg和三氯甲烷2.3mL，待PL完全溶解后，加入盐酸多奈哌齐40mg，振摇混匀为有机相；水相为PVA水溶液(置于100mL烧杯中)，冰浴4℃以下800r.min^-1搅拌下，将有机相注入水相液面下1cm处，1min后，往乳状液加入水50mL，同时降低转速至400r·min^-1，继续搅拌5min，将乳状液倾入水1000mL中，200r·min^-1搅拌3h，抽滤收集长效缓控释组合物，用水200mL洗涤，置真空干燥器放置48h以上，即得盐酸多奈哌齐聚丙交酯长效缓控释组合物。

测得盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物几何平均粒径为62.94μm，跨距为0.92，载药量为17.50％，包封率为86.52％。盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物可用0.1％Pluronic F68溶液、0.2％Tween80溶液很好地分散。

实施例16

精密称取实施例15中的盐酸多奈哌齐微球约50mg于预先处理好的透析袋(Visking8000～15000u)中，两端扎紧，放入pH7.4的磷酸盐缓冲液10mL中，(37±0.5)℃，50次/min水浴恒温振荡，定时取样，倾尽全部释放液，再补加新鲜释放介质10mL，样品适当稀释后于315nm波长处测定吸光度(A)，如图6所示。

实施例17

称取100mgPLA溶于2ml CH₂Cl₂，加入含盐酸多奈哌齐30mg的水溶液6ml，混合，超声成乳。将乳液逐滴加入分散相甘油中搅拌30min，然后倾入100ml明胶洗脱液中洗脱，慢速搅拌固化1h，使有机溶剂挥发。离心收集长效缓控释组合物，并用蒸溜水洗涤，减压干燥得到长效缓控释组合物。盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物用扫描电镜观察为光滑圆整的球体，粒径均匀，且约70％长效缓控释组合物粒径集中在14～28μm。

精密称取100mg盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物加入CH₂Cl₂5ml，轻微研磨使盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物溶解破坏，加入适量水，旋涡混合提取，离心收集水，于315nm处测其吸收值，计算盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物中药物量，与所取盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物量相比得到盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物药物含量，与理论投药量相比得到包封率。测定3批的结果表明，载药量为(10.06±0.46)％，包封率为(80.24±4.44)％。

实施例18

取实施例17中的盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物进行以下药效学实验

一.实验动物

雄性SD大鼠144只，月龄7～10个月，体重250～300g，分为4组，正常组16只，模型组、盐水治疗组、盐酸多奈哌齐片治疗组、多奈哌齐类物质长效缓控释组合物治疗组每组各32只。

二、动物模型的制备

模型组、盐水治疗组、盐酸多奈哌齐片治疗组和盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物治疗组大鼠用350mg/kg体重水合氯醛麻醉后，仰卧位固定，颈正中去毛，用碘酒、酒精消毒后，行颈正中切口，分离双侧颈总动脉并埋线，用丝线结扎双侧颈总动脉，缝合手术切口，待大鼠清醒后放回笼中。从手术前一晚开始，盐酸多奈哌齐治疗组大鼠每晚采用盐酸多奈哌齐以3mg/kg体重的剂量灌胃，盐水治疗组大鼠以相同剂量的生理盐水灌胃，持续至术后4周；盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物治疗组以90mg/kg体重的剂量皮下注射。正常组大鼠不做处理，各组大鼠饲养条件相同。

三、水迷宫试验

水迷宫由黑色塑料板制成，共4个盲端，终点有一高出水平面的平台。迷宫内水深控制在(21±1)cm，水温(25±2)℃。每只大鼠试验时间限定为300s，在限定时间内没有到达终点者按300s计。训练前将大鼠置于终点附近，让其自行爬台1次。训练时将大鼠放在起点后，记录其进入盲端的次数(错误次数)及到达终点所需的时间。每次完成后休息1min，每只大鼠每天训练10次。训练第1天路径包括2个盲端，第2天包括3个盲端，第3、4、5天均为4个盲端，实验数据以第5天为准。以进入盲端次数、到达终点所需时间来衡量大鼠学习、记忆的能力。

术后4周，模型组、盐水治疗组和盐酸多奈哌齐片治疗组、盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物治疗组与正常组比较，大鼠水迷宫游出时间均显著延长，进入盲端的错误次数也显著增加(P<0.05)；模型组与盐水治疗组的完成时间和错误次数比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；盐酸多奈哌齐片治疗组和盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物治疗组大鼠水迷宫游出时间较模型组大鼠显著缩短(P<0.05)，进入盲端的错误次数也较模型组大鼠显著减少(P<0.05)，且盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物治疗组水迷宫游出时间较盐酸多奈哌齐片治疗组缩短，进入盲端的错误次数也减少，其结果如如表1所示。

表1

组别	n	完成时间	错误次数
				正常组	16	20.26±1.00	2.78±0.32
模型组	20	75.06±5.67	9.48±0.37
				盐水治疗组	13	76.45±7.24	9.04±1.07
盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物	12	34.51±3.24	5.63±0.71
				盐酸多奈哌齐片	12	55.5±14.23	6.73±0.42

实施例19

各组大鼠按实施例18方案完成水迷宫实验后，用断头法处死，取出大脑，在冰盘上分离出额叶皮质及海马，分别称湿重，加1∶9冰生理盐水，于玻璃匀浆器中匀浆，取匀浆液备检胆碱酯酶，其结果如表2所示。

表2

术后4周，模型组与正常组大鼠比较，胆碱酯酶浓度显著下降(P<0.05)；盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物治疗组和多奈哌齐片治疗组大鼠胆碱酯酶浓度较模型组进一步显著下降(P<0.05)，且长效缓控释组合物治疗组大鼠胆碱酯酶浓度较片剂组低，但无显著性差异(P>0.05)；盐水治疗组大鼠与模型组大鼠间差异无统计学意义(P>0.05)。

实施例20

实施例18中的各组大鼠采用4％冷多聚甲醛(pH＝7.2)灌注，脑组织固定，蔗糖液梯度脱水后取海马区和额叶皮质行冠状连续冰冻切片，厚25μm。采用漂片法，用玻璃勾针将切片转移入孵育液(碘化乙酰硫胆碱6.25mg，0.82％醋酸钠7.9ml，0.6％醋酸0.25ml，2.94％枸橼酸钠0.6ml，0.75％硫酸铜1.25ml，0.165％铁氰化钾1.25ml，0.137％四异丙基焦磷酰胺0.25ml，双蒸水1ml)，37℃孵育1h，然后转入双蒸水中洗2次，每次5 min终止反应。切片用1％硫化铵溶液及0.1％硝酸银溶液加强显色。漂浮切片在双蒸水中移至载玻片上，常规脱水、透明、封片。在光镜下观察额叶皮质及海马CA1区胆碱酯酶阳性神经纤维密度的变化。

用计算机图像分析系统分别测定各组大鼠额叶皮质及海马CA1区胆碱酯酶阳性神经纤维的平均光密度值(每组取8个视野)。分析结果显示，正常组大鼠海马区胆碱酯酶阳性纤维较额叶皮质密集；模型组、盐水治疗组与正常组比较，大鼠额叶皮质及海马区的胆碱酯酶阳性纤维密度显著下降(P<0.05)，海马区下降幅度较额叶皮质更为明显；盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物治疗组大鼠额叶皮质及海马区胆碱酯酶阳性纤维密度较模型组大鼠显著降低(P<0.05)，盐酸多奈哌齐片治疗组大鼠额叶皮质及海马区胆碱酯酶阳性纤维密度较长效缓控释组合物组高，但两组间无显著性差异，其结果如表3所示。

表3

实施例21

20名健康男性受试者，体重(65±7)kg，年龄19～23岁，经生化检验证实肝、肾功能正常，心电图检查正常，精神状态良好。实验前一周及实验期间未用其他任何药物，禁烟酒，实验期间统一饮食。采用随机双交叉试验设计方案，即20名男性受试者，按体重随机分成甲、乙两组，随机一组先口服常规的盐酸多奈哌齐片剂(商品名：安理申)，另一组口服盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物，剂量均为5mg。服药方式：于早晨7时空腹服药，用温开水200mL送服，服药4h后统一进食。于服药前及服药后0.5，1，2，3，4，6，8，12，24，48，96，144和192h各采血4mL于肝素化试管中，盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物组继续在第9，10，11，12，13，14，15天采血，分离出血浆，-16℃保存待测。随后间隔一周后进行交叉试验。

分析方法取血浆样品1mL置离心管中，加内标溶液50μL，以饱和NaHCO₃溶液1mL碱化，乙酸乙酯5mL提取，于4000r·min^-1离心10min。分取有机相，于50℃水浴中以氮气流吹干。残渣用流动相100μL溶解，16000r·min^-1离心5min，吸取上清液转移至自动进样器样品管中，样品以HPLC-MS进行分离分析，采用HypersilODS色谱柱(5μm，250mm×4.6mm ID，JONES Chroma tography，US)，甲醇-水-三乙胺-冰醋酸(70∶30∶0.3∶0.3)为流动相；以质谱(离子化方式：电喷雾；质量分析器：四极杆)作为检测手段，采用选择离子检测方式(SIM)分别在m/z380和m/z344对多奈哌齐和内标进行检测。以多奈哌齐和内标的峰面积比值代入标准曲线计算血浆样品浓度。

结果口服盐酸多奈哌齐片剂后，48小时后，血药浓度已降至50％以下，192小时后，体内血药浓度几乎降至0。其有效浓度只能维持24小时。口服盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物后，48小时后的血药浓度为60％，192小时后，体内血药浓度依然维持在60％，继续检测的结果表明，此盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物能保持此浓度10天。因此说明盐酸多奈哌齐缓控释组合物具有缓控释性能。

实施例22

20名男性健康志愿者，体重(60±9)kg，年龄20～33岁，经生化检验证实肝、肾功能正常。实验前一周及实验期间禁用其他任何药物。实验期间统一饮食。将他们随机分成甲、乙两组，随机一组先口服常规的盐酸多奈哌齐片剂(商品名：安理申)，于早晨7时空腹服药，用温开水200mL送服。另一组皮下注射盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物。于服服药后12小时，24小时，随后第2，3，4，5，6，7，8，9，10，15，20天采血4mL于肝素化试管中，分离出血浆，-16℃保存待测。

分析方法：取血浆样品1mL置离心管中，加内标溶液50μL，以饱和NaHCO₃溶液1mL碱化，乙酸乙酯5mL提取，于4000r min^-1离心10min。分取有机相，于50℃水浴中以氮气流吹干。残渣用流动相100μL溶解，16000r·min^-1离心5min，吸取上清液转移至自动进样器样品管中，样品以HPLC-MS进行分离分析，采用Hypersil ODS色谱柱(5μm，250mm×4.6mm ID，JONES Chromatography，US)，甲醇-水-三乙胺-冰醋酸(70∶30∶0.3∶0.3)为流动相；以质谱(离子化方式：电喷雾；质量分析器：四极杆)作为检测手段，采用选择离子检测方式(SIM)分别在m/z380和m/z344对多奈哌齐和内标进行检测。以多奈哌齐和内标的峰面积比值代入标准曲线计算血浆样品浓度。

结果：口服盐酸多奈哌齐片剂后，12小时的血药浓度为85％，24小时后，体内血药浓度为65％，48小时后，血药浓度已降至50％以下，第3天后已经检测不到盐酸多奈哌齐。皮下注射盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物后，药物稳定释放，20天后的血药浓度依然维持为95％，因此说明盐酸多奈哌齐长效缓控释组合物有明显的长效缓控释性能。

Claims

1.一种多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物，其特征在于，该组合物为微粒状，所述微粒的粒径小于500μm，按重量份计，包含：多奈哌齐类化合物0.5～5份，具有缓控释作用的载体材料1～500份，乳化剂0.1～10份；所述的多奈哌齐类化合物为多奈哌齐或多奈哌齐与酸形成的盐；所述的载体材料为壳聚糖；所述的乳化剂为脂肪酸山梨坦类或聚山梨酯；通过将多奈哌齐类化合物分散在载体材料的溶液中，通过载体材料的固化，得到多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物，固化过程中使用固化剂0.2～5份，且该固化剂为戊二醛。

2.根据权利要求1所述的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物，其特征在于，所述多奈哌齐与酸形成的盐为盐酸多奈哌齐、枸橼酸多奈哌齐、硫酸多奈哌齐、或酒石酸多奈哌齐。

3.根据权利要求1或2所述的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物，其特征在于，所述的多奈哌齐类化合物长效缓控释组合物为注射制剂或口服制剂。