CN101134784B - 琼脂糖与透明质酸接枝物及其制备方法与应用 - Google Patents
琼脂糖与透明质酸接枝物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101134784B CN101134784B CN2007100297408A CN200710029740A CN101134784B CN 101134784 B CN101134784 B CN 101134784B CN 2007100297408 A CN2007100297408 A CN 2007100297408A CN 200710029740 A CN200710029740 A CN 200710029740A CN 101134784 B CN101134784 B CN 101134784B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- agarose
- hyaluronic acid
- precipitate
- graft
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 title claims abstract description 123
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims abstract description 80
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims abstract description 80
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 80
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 52
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 44
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 39
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 28
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 27
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 9
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 9
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 7
- 230000006837 decompression Effects 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 claims description 6
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 claims description 5
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000037314 wound repair Effects 0.000 claims description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 abstract description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003519 biomedical and dental material Substances 0.000 abstract description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 40
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 24
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 23
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 5
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 229920006237 degradable polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101001054921 Homo sapiens Lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 208000007433 Lymphatic Metastasis Diseases 0.000 description 1
- 102100026849 Lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003462 bioceramic Substances 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000004791 biological behavior Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012851 eutrophication Methods 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000009442 healing mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000006247 magnetic powder Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 229920005613 synthetic organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
本发明涉及一种透明质酸与琼脂糖接枝物及其制备方法与应用，其制备包括：降解琼脂糖粉末溶于热水，降温至室温，加入氢氧化钠溶液和环氧氯丙烷，磁力搅拌反应；真空除去多余环氧氯丙烷，将溶液减压浓缩，加入乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留的环氧氯丙烷，得到活化琼脂糖沉淀；将活化琼脂糖沉淀溶于热水，降温至室温，活化琼脂糖溶液中加入透明质酸，常温下磁力搅拌，接枝反应；将溶液减压浓缩，用透析袋透析72小时，除去未反应的透明质酸，冷冻干燥后得到透明质酸与琼脂糖接枝物粉末。是一种新型的生物医学材料，可望既保留透明质酸的生物活性和靶向性，同时具有了琼脂糖的成凝胶特性，改善了生物降解性能，同时具有一定的稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学材料，特别是一种琼脂糖与透明质酸接枝物制备方法及应用。
背景技术
生物医学材料在现代医疗技术水平的提高中扮演了极其重要的角色，用其制成的各种药物释放系统、组织工程支架、人工器官、医用敷料等几乎涉及临床的各个领域。伴随着医疗技术水平的提高，那些结构性能单一的生物医学材料已不能满足医学发展的需要，开发新型的生物医学材料是当前的迫切需要。其中靶向药物控释载体材料和功能性活性组织工程支架材料，是未来生物医学材料研究的重要方向。
1976年，Langer和Folkman成功地实现了聚合物作为载体的大分子药物控释。此后30余年人们一直尝试用各种高分子材料作为药物载体，以改进相应的药物控释系统的释药动力学、生物相容性和生物降解性。高分子药物控制释放材料是用高分子材料制备药物控制释放制剂，使药物以最小的剂量在特定的部位产生治疗效应，优化药物释放速率以提高疗效，降低毒副作用。靶向药物控释是利用靶向药物的特点来精确控制药物释放，使药物在病灶区缓慢释放而延长药效，靶向药物制剂能将药物定向的运送到靶器官或靶细胞，而正常的组织部位几乎不受药物的影响，靶向给药系统早期主要针对癌症的治疗，但随着研究的深入，靶向给药系统被引申到运载多种药物。
目前作为控制释放体系的药物载体材料大多是高分子聚合物材料。生物降解聚合物在一定时间内能被水解或酶解成小分子，可通过生理途径代谢排出体外，因此比生物惰性材料更安全、更可靠，有更好的生物相容性，成为药物载体的首选材料。可降解高分子聚合物控释材料主要有天然和人工合成可降解高分子。
20世纪80年代，美国的Robert Langer和P.Vacanti提出“组织工程”的概念。1987年，美国国家科学基金会生物工程会上正式提出“组织工程”一词。在20年的时间里，组织工程发展迅速，取得了丰硕的成就。组织工程支架影响着细胞的生物学行为，更决定了组织工程化组织能否与机体相适应并结合，达到修复的效果。理想支架材料要有良好的生物相容性、生物降解性、适宜的生物力学性能和材料细胞界面等。
目前作为组织工程支架材料的主要有天然材料、合成有机高分子材料、生物陶瓷以及复合材料。经过多年的研究总结，人们发现天然材料作为组织工程支架材料，在生物相容性、生物活性和生物降解性方面有着人工合成材料无法比拟的优势。
透明质酸和琼脂糖是被广泛用于药物控释载体和组织工程支架的两种天然大分子物质，各有优缺点。
透明质酸具有低免疫原性，良好的生物相容性，在体内可控制细胞和分子的渗透和某些细胞的分化。透明质酸可用于组织工程支架，如透明质酸分子可通过软骨细胞上的膜受体使软骨细胞黏附于其上，而促进软骨细胞扩增。透明质酸还广泛被研究用于靶向缓释药物的载体。研究显示，肿瘤细胞或受肿瘤细胞刺激的细胞产生大量的透明质酸，透明质酸受到肿瘤细胞上的透明质酸受体(如CD44等)的介导，对肿瘤细胞的附着、增殖和迁移产生作用，肿瘤细胞自淋巴管向淋巴结转移同样依赖于透明质酸的存在。透明质酸激活淋巴结内的巨噬细胞，从而抑制肿瘤淋巴转移。透明质酸靶向药物和转移抑制素可抑制肿瘤生长和转移。但透明质酸的某些性质，如极易溶于水，稳定性差，对强酸、强碱、热、自由基及透明质酸酶敏感，容易发生降解，在人体内存留时间短，大大限制了透明质酸在生物医学上的应用。因此，需要对透明质酸进行化学改性以降低水溶性，减缓在人体中的吸收速度。常用的方法有交联、酯化、接枝等。透明质酸可以接枝到天然或合成聚合物上，形成有特殊生物性能和物理化学性质的新型材料。
琼脂糖是生化分析中常用的惰性载体，琼脂糖凝胶具有一定强度和较大的含水率，常常被用作细胞培养基以及组织工程支架材料。低凝固温度和成凝胶性质是琼脂糖的显著特点，利用这一性质，可在组织工程支架成型前就将细胞及生物大分子与琼脂糖溶液混合均匀，并且细胞及生物大分子不失活，待凝固后，细胞及生物大分子将均匀分布在整个琼脂糖水凝胶上。琼脂糖还广泛用于靶向药物控释载体，但琼脂糖本身不具靶向效应，还需加入磁粉或接枝抗体等达到靶向效果。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术存在的材料选择问题，提供一种透明质酸与琼脂糖接枝物材料的制备方法，将透明质酸与琼脂糖接枝共聚，获得一种新型的生物医学材料，可望既保留透明质酸的生物活性和靶向性，同时具有了琼脂糖的成凝胶特性，改善了生物降解性能，同时具有一定的稳定性。
本发明的目的还在于提供所述方法制备的琼脂糖与透明质酸接枝物。
本发明的目的还在于提供所述琼脂糖与透明质酸接枝物在制备靶向药物控释载体或组织工程支架材料中的应用。选用不同分子量的琼脂糖进行接枝，产物的成凝胶程度不同，可分别适用于靶向药物控释载体材料和组织工程支架材料。
本发明是通过琼脂糖(降解后，不同分子量琼脂糖)与透明质酸接枝后冷冻干燥得到粉末。
本发明的透明质酸与琼脂糖接枝物的制备方法，包括如下步骤：
(1)降解琼脂糖粉末溶于90-95℃热水，降温至室温，加入氢氧化钠溶液和环氧氯丙烷，磁力搅拌反应2-4小时；
(2)采用减压浓缩法除去多余环氧氯丙烷，将溶液减压浓缩，加入相当于溶液体积4-5倍的乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留的环氧氯丙烷，得到活化琼脂糖沉淀；
(3)将活化琼脂糖沉淀溶于90-95℃热水，降温至室温，活化琼脂糖溶液中加入透明质酸，常温下磁力搅拌，接枝反应48-60小时；琼脂糖与透明质酸接枝的接枝配比为1∶1-1∶5质量比；
(4)将溶液减压浓缩，用透析袋透析72小时，冷冻干燥后得到透明质酸与琼脂糖接枝物粉末。
步骤(1)中，各组分浓度优选：琼脂糖1.0-2.0％质量，氢氧化钠0.5-1％质量，环氧氯丙烷3-5％质量。
步骤(1)所述的降解琼脂糖粉末可通过下述方法制备得到：
(1)琼脂糖溶于90-95℃热水中，浓度为1-5％质量，降温至50-60℃，加入浓度为30％质量的过氧化氢，使其最终浓度达到1-3％体积，在50℃-60℃下恒温反应6-15小时；
(2)将步骤(1)得到的溶液减压浓缩后，加入相当于溶液体积4-5倍的乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留过氧化氢，得到降解琼脂糖沉淀，将沉淀用水溶解，放入冷冻干燥机中冻干得降解琼脂糖粉末；
步骤(2)中，所述冷冻干燥是在-40℃冷冻2小时，真空下抽气17小时以上冻干得降解琼脂糖粉末。
所述透明质酸与琼脂糖接枝物用于制备药物载体时，选用降解时间15小时以上，分子量为13-15kDa的琼脂糖与透明质酸按接枝质量配比为1∶1-1∶2制备得到的透明质酸与琼脂糖接枝物。
所述透明质酸与琼脂糖接枝物在制备用于皮肤敷料的多孔支架材料时，选用降解时间8-10小时，分子量约为30kDa-40kDa的琼脂糖与透明质酸按1∶1-1∶3的接枝质量配比制备得到的透明质酸与琼脂糖接枝物。
所述透明质酸与琼脂糖接枝物在制备软组织工程支架材料时，选用降解时间8-10小时，分子量约为30kDa-40kDa的琼脂糖与透明质酸按1∶1-1∶3的接枝质量配比制备得到的透明质酸与琼脂糖接枝物。
所述透明质酸与琼脂糖接枝物在制备薄膜状皮肤创伤修复敷料时，采用琼脂糖与透明质酸按1∶2-1∶5.的接枝质量配比制备得到的透明质酸与琼脂糖接枝物。
根据使用要求可选择不同降解程度的琼脂糖。在一定温度和双氧水浓度的条件下，通过控制降解的时间来控制琼脂糖的降解程度。
琼脂糖的分子量选取，琼脂糖和透明质酸的接枝比例和状态(微颗粒、支架或膜)根据用途确定，得到的微颗粒、薄膜以及支架用环氧乙烷消毒，得到成品封袋保存。
本发明与现有技术相比，具有如下优点：
(1)本发明方法得到的含透明质酸粒子具有靶向性，稳定性好，在体内可长时间存留，并可生物降解，适于作为靶向药物控释载体；
(2)得到的支架或可喷涂敷料，可使愈合区组织的营养供应不受影响，维持组织的正常愈合机制，而且降解产物对细胞的增殖和基质组装具有促进作用，加快组织的生成，可用作烧伤、溃疡大大面积皮肤创伤修复，以及用于软骨、角膜、脂肪等软组织工程支架材料。
(3)可制备水凝胶组织工程支架，在较低温度时(≤37℃)，将种子细胞与样品溶液混合均匀，室温下溶液变成水凝胶，细胞可均匀分布在水凝胶组织工程支架中。
(4)本发明方法提高琼脂糖及其衍生物的附加价值有助于推动大型海藻的种植(琼脂从大型海藻中提取)，有利于近海海域富养的生态修复。
具体实施方式
实施例1，制备多孔复合支架制备及皮肤敷料
制备透明质酸与琼脂糖接枝物，包括如下步骤：
(1)琼脂糖溶于90℃热水中，浓度为5％质量，降温至60℃，加入浓度为30％质量的过氧化氢，使其最终浓度达到1％体积，在50℃下恒温反应15小时；
(2)将步骤(1)得到的溶液减压浓缩后，加入相当于溶液体积4倍的乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留过氧化氢，将沉淀用水溶解，放入冷冻干燥机中冻干得降解琼脂糖粉末；
(3)降解琼脂糖粉末溶于95℃热水，降温至室温，加入氢氧化钠溶液和环氧氯丙烷，使各组分浓度分别为：琼脂糖1.0％质量，氢氧化钠0.5％质量，环氧氯丙烷4％质量，室温下，磁力搅拌反应4小时；
(4)采用减压浓缩法除去多余的环氧氯丙烷。将溶液减压浓缩，加入相当于溶液体积4倍的乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留的环氧氯丙烷，得到活化琼脂糖沉淀；
(5)将活化琼脂糖沉淀溶于95℃热水，降温至室温，活化琼脂糖溶液中加入透明质酸，常温下磁力搅拌，接枝反应48-60小时；琼脂糖与透明质酸接枝的接枝质量配比为1∶1；
(6)将溶液减压浓缩，用透析袋透析72小时，冷冻干燥后得到透明质酸与琼脂糖接枝物粉末。
将透明质酸与琼脂糖接枝物粉末加热溶解，倒入模具中成型(使混合液在模具中高度为5-6mm)；(3)放入冷冻干燥机中，在-35℃下冷冻3小时，然后在0℃抽气17小时以上，冻干成多孔支架，厚约3-4mm，环氧乙烷消毒备用
实施例2，制备脂肪组织工程支架
制备透明质酸与琼脂糖接枝物，包括如下步骤：
(1)琼脂糖溶于95℃热水中，浓度为1％质量，降温至60℃，加入浓度为30％质量的过氧化氢，使其最终浓度达到1％体积，在60℃下恒温反应6小时；
(2)将步骤(1)得到的溶液减压浓缩后，加入相当于溶液体积5倍的乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留过氧化氢，将沉淀用水溶解，放入冷冻干燥机中冻干得降解琼脂糖粉末；
(3)降解琼脂糖粉末溶于90℃热水，降温至室温，加入氢氧化钠溶液和环氧氯丙烷，使各组分浓度分别为：琼脂糖2.0％质量，氢氧化钠0.5％质量，环氧氯丙烷4％质量，室温下，磁力搅拌反应2小时；
(4)采用减压浓缩法除去多余的环氧氯丙烷。将溶液减压浓缩，加入相当于溶液体积5倍的乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留的环氧氯丙烷，得到活化琼脂糖沉淀；
(5)将活化琼脂糖沉淀溶于90℃热水，降温至室温，活化琼脂糖溶液中加入透明质酸，常温下磁力搅拌，接枝反应48-60小时；琼脂糖与透明质酸接枝的接枝质量配比为1∶3；
(6)将溶液减压浓缩，用透析袋透析72小时，冷冻干燥后得到透明质酸与琼脂糖接枝物粉末。
将透明质酸与琼脂糖接枝物粉末加热溶解，待温度降至37℃，加入成体脂肪干细胞悬液，混合均匀，倒入模具中成型(使混合液在模具中高度为5-6mm)；待溶液降至室温，成为水凝胶组织工程支架；直径0.8厘米，厚3-4毫米。加常规培养液(补充10ng/ml bFGF)，三周后成脂肪样软组织，支架降解。
实施例3，制备靶向控释药物载体
制备透明质酸与琼脂糖接枝物，包括如下步骤：
(1)琼脂糖溶于93℃热水中，浓度为3％质量，降温至55℃，加入浓度为30％质量的过氧化氢，使其最终浓度达到2％体积，在55℃下恒温反应10小时；
(2)将步骤(1)得到的溶液减压浓缩后，加入相当于溶液体积4.5倍的乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留过氧化氢，将沉淀用水溶解，放入冷冻干燥机中冻干得降解琼脂糖粉末；
(3)降解琼脂糖粉末溶于93℃热水，降温至室温，加入氢氧化钠溶液和环氧氯丙烷，使各组分浓度分别为：琼脂糖1.5％质量，氢氧化钠0.5％质量，环氧氯丙烷4％质量，室温下，磁力搅拌反应3小时；
(4)采用减压浓缩法除去多余的环氧氯丙烷。将溶液减压浓缩，加入相当于溶液体积4.5倍的乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留的环氧氯丙烷，得到活化琼脂糖沉淀；
(5)将活化琼脂糖沉淀溶于92℃热水，降温至室温，活化琼脂糖溶液中加入透明质酸，常温下磁力搅拌，接枝反应55小时；琼脂糖与透明质酸接枝的接枝质量配比为1∶1-1∶2；
(6)将溶液减压浓缩，用透析袋透析72小时，冷冻干燥后得到透明质酸与琼脂糖接枝物粉末。
将透明质酸与琼脂糖接枝物加热溶解，待温度降至37℃，加入胰岛素(胰岛素与透明质酸质量比5∶1)，混合均匀，搅拌；待溶液降至室温，形成粒径300-600nm的药物粒子。通过注射入小鼠血液或口服给药，血糖水平明显降低。
实施例4，制备可喷涂皮肤创伤修复敷料
制备透明质酸与琼脂糖接枝物，包括如下步骤：
(1)琼脂糖溶于92℃热水中，浓度为2％质量，降温至54℃，加入浓度为30％质量的过氧化氢，使其最终浓度达到2％体积，在54℃下恒温反应10小时；
(2)将步骤(1)得到的溶液减压浓缩后，加入相当于溶液体积4.5倍的乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留过氧化氢，将沉淀用水溶解，放入冷冻干燥机中冻干得降解琼脂糖粉末；
(3)降解琼脂糖粉末溶于93℃热水，降温至室温，加入氢氧化钠溶液和环氧氯丙烷，使各组分浓度分别为：琼脂糖1.5％质量，氢氧化钠0.5％质量，环氧氯丙烷4％质量，室温下，磁力搅拌反应3小时；
(4)采用减压浓缩法除去多余的环氧氯丙烷。将溶液减压浓缩，加入相当于溶液体积4.5倍的乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留的环氧氯丙烷，得到活化琼脂糖沉淀；
(5)将活化琼脂糖沉淀溶于92℃热水，降温至室温，活化琼脂糖溶液中加入透明质酸，常温下磁力搅拌，接枝反应55小时；琼脂糖与透明质酸接枝的接枝质量配比为1∶2-1∶5；
(6)将溶液减压浓缩，用透析袋透析72小时，冷冻干燥后得到透明质酸与琼脂糖接枝物粉末。
将透明质酸与琼脂糖接枝物粉末加热溶解，过0.22微米微滤膜除菌，冷却到室温后，直接将溶液喷涂敷于皮肤创面，外用纱布简单防菌，两星期后创伤修复，组织切片显示恢复皮肤结构。
Claims (8)
1.一种透明质酸与琼脂糖接枝物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)降解琼脂糖粉末溶于90-95℃热水，降温至室温，加入氢氧化钠溶液和环氧氯丙烷，磁力搅拌反应2-4小时；
(2)采用减压浓缩法除去多余环氧氯丙烷，将溶液减压浓缩，加入相当于溶液体积4-5倍的乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留的环氧氯丙烷，得到活化琼脂糖沉淀；
(3)将活化琼脂糖沉淀溶于90-95℃热水，降温至室温，活化琼脂糖溶液中加入透明质酸，常温下磁力搅拌，接枝反应48-60小时；琼脂糖与透明质酸接枝的接枝配比为1∶1-1∶5质量比；
(4)将溶液减压浓缩，用透析袋透析72小时，冷冻干燥后得到透明质酸与琼脂糖接枝物粉末；
步骤(1)所述的降解琼脂糖粉末通过下述方法制备得到：
(1)琼脂糖溶于90-95℃热水中，浓度为1-5％质量，降温至50-60℃，加入浓度为30％质量的过氧化氢，使其最终浓度达到1-3％体积，在50℃-60℃下恒温反应6-15小时；
(2)将步骤(1)得到的溶液减压浓缩后，加入相当于溶液体积4-5倍的乙醇，离心得到沉淀，将沉淀用水溶解，重复用乙醇沉淀，以除去残留过氧化氢，得到降解琼脂糖沉淀，将沉淀用水溶解，放入冷冻干燥机中冻干得降解琼脂糖粉末。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，各组分浓度分别为：琼脂糖1.0-2.0％质量，氢氧化钠0.5-1％质量，环氧氯丙烷3-5％质量。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于步骤(2)中，所述冷冻干燥是在-40℃冷冻2小时，真空下抽气17小时以上冻干得降解琼脂糖粉末。
4.权利要求1-3之一所述的方法制备的透明质酸与琼脂糖接枝物。
5.权利要求4所述透明质酸与琼脂糖接枝物在制备药物载体中的应用，其特征在于选用降解时间15小时，分子量为13-15kDa的琼脂糖与透明质酸按接枝质量配比为1∶1-1∶2制备得到的透明质酸与琼脂糖接枝物。
6.权利要求4所述透明质酸与琼脂糖接枝物在制备用于皮肤敷料的多孔支架材料中的应用，其特征在于选用降解时间8-10小时，分子量为30kDa-40kDa的琼脂糖与透明质酸按1∶1-1∶3的接枝质量配比制备得到的透明质酸与琼脂糖接枝物。
7.权利要求4所述透明质酸与琼脂糖接枝物在制备软组织工程支架材料中的应用，其特征在于选用降解时间8-10小时，分子量为30kDa-40kDa的琼脂糖与透明质酸按1∶1-1∶3的接枝质量配比制备得到的透明质酸与琼脂糖接枝物。
8.权利要求4所述透明质酸与琼脂糖接枝物在制备可喷涂皮肤创伤修复敷料中的应用，其特征在于采用琼脂糖与透明质酸按1∶2-1∶5的接枝质量配比制备得到的透明质酸与琼脂糖接枝物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2007100297408A CN101134784B (zh) | 2007-08-16 | 2007-08-16 | 琼脂糖与透明质酸接枝物及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2007100297408A CN101134784B (zh) | 2007-08-16 | 2007-08-16 | 琼脂糖与透明质酸接枝物及其制备方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101134784A CN101134784A (zh) | 2008-03-05 |
| CN101134784B true CN101134784B (zh) | 2010-06-16 |
Family
ID=39159131
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2007100297408A Expired - Fee Related CN101134784B (zh) | 2007-08-16 | 2007-08-16 | 琼脂糖与透明质酸接枝物及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101134784B (zh) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103113594B (zh) * | 2013-01-25 | 2014-12-31 | 暨南大学 | 琼脂糖-聚乙烯亚胺-透明质酸接枝物及其制备方法与应用 |
| ITMI20130507A1 (it) | 2013-04-04 | 2014-10-05 | Ghimas Spa | Composizione riempitiva (filler) per il trattamento di lipoatrofie |
| US10149868B2 (en) * | 2016-05-31 | 2018-12-11 | Tco Co., Ltd. | Use of Streptococcus thermophilis TCI633 in treating arthritis |
| EP3638329A4 (en) | 2017-06-12 | 2021-03-10 | Advanced Aesthetic Technologies, Inc. | DERMAL FILLER |
| CN108210983A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-06-29 | 南京天纵易康生物科技股份有限公司 | 一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵及其制备方法 |
| CN108948229B (zh) * | 2018-06-29 | 2021-08-06 | 中南民族大学 | 一种4-甲基伞形酮富集材料及其用途 |
| CN109172481B (zh) * | 2018-10-24 | 2021-05-11 | 西安惟颐生物科技有限公司 | 女性臀疗护臀精华露 |
| CN109438590B (zh) * | 2018-11-13 | 2021-04-27 | 广西科学院 | 一种琼脂糖的修饰方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001025295A1 (fr) * | 1999-10-04 | 2001-04-12 | Societe De Conseils De Recherches_Et D'applicationscientifiques (S.C.R.A.S.) | Copolymeres reticules a base de copolymeres polycarboxyliques non reticules |
| WO2002053201A1 (en) * | 2000-12-28 | 2002-07-11 | Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. | Use of a biological material containing three-dimensional scaffolds of hyaluronic acid derivatives for the preparation of implants in arthroscopy and kit for instruments for implanting said biological material by arthroscopy |
| CN1386478A (zh) * | 2001-05-23 | 2002-12-25 | 中国科学院化学研究所 | 组织工程用复合结构细胞支架及其制法和用途 |
| CN1644221A (zh) * | 2005-01-26 | 2005-07-27 | 徐小良 | 多孔材料与凝胶的复合材料及其应用 |
-
2007
- 2007-08-16 CN CN2007100297408A patent/CN101134784B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001025295A1 (fr) * | 1999-10-04 | 2001-04-12 | Societe De Conseils De Recherches_Et D'applicationscientifiques (S.C.R.A.S.) | Copolymeres reticules a base de copolymeres polycarboxyliques non reticules |
| WO2002053201A1 (en) * | 2000-12-28 | 2002-07-11 | Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. | Use of a biological material containing three-dimensional scaffolds of hyaluronic acid derivatives for the preparation of implants in arthroscopy and kit for instruments for implanting said biological material by arthroscopy |
| CN1386478A (zh) * | 2001-05-23 | 2002-12-25 | 中国科学院化学研究所 | 组织工程用复合结构细胞支架及其制法和用途 |
| CN1644221A (zh) * | 2005-01-26 | 2005-07-27 | 徐小良 | 多孔材料与凝胶的复合材料及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101134784A (zh) | 2008-03-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Self-healing hyaluronic acid nanocomposite hydrogels with platelet-rich plasma impregnated for skin regeneration | |
| Qi et al. | Progress in hydrogels for skin wound repair | |
| Biswas et al. | Recent advancement of biopolymers and their potential biomedical applications | |
| Li et al. | Moist-retaining, self-recoverable, bioadhesive, and transparent in situ forming hydrogels to accelerate wound healing | |
| Tang et al. | Application of chitosan and its derivatives in medical materials | |
| Sheokand et al. | Natural polymers used in the dressing materials for wound healing: Past, present and future | |
| Zhang et al. | Hydrogels based on pH-responsive reversible carbon–nitrogen double-bond linkages for biomedical applications | |
| CN101134784B (zh) | 琼脂糖与透明质酸接枝物及其制备方法与应用 | |
| Kumar et al. | 1, 2, 4-triazine analogs as novel class of therapeutic agents | |
| JP5657545B2 (ja) | 注射用容器内で架橋した注射用ヒドロゲルの調製方法 | |
| Guan et al. | Injectable gelatin/oxidized dextran hydrogel loaded with apocynin for skin tissue regeneration | |
| Khor et al. | Implantable applications of chitin and chitosan | |
| CN107708675A (zh) | 假塑性微凝胶基质的组合物和试剂盒 | |
| Khan et al. | Multifunctional biopolymers‐based composite materials for biomedical applications: a systematic review | |
| CN101227913A (zh) | 自胶凝的藻酸盐体系及其用途 | |
| CN103877621B (zh) | 一种电纺纤维增强磷酸钙骨水泥复合材料及其应用 | |
| CN111303452A (zh) | 一种仿生抗菌高粘附的双网络水凝胶及其制备方法和应用 | |
| Singha et al. | Applications of alginate-based bionanocomposites in drug delivery | |
| CN112807439A (zh) | 一种可植入原位成型的壳聚糖水凝胶的制备方法及应用 | |
| Niu et al. | Highly substituted decoupled gelatin methacrylamide free of hydrolabile methacrylate impurities: an optimum choice for long-term stability and cytocompatibility | |
| CN103113594B (zh) | 琼脂糖-聚乙烯亚胺-透明质酸接枝物及其制备方法与应用 | |
| CN100402097C (zh) | 琼脂/胶原皮肤创伤修复敷料及其制备方法和应用 | |
| Magagula et al. | Biopolymer-based biodegradable biomaterials for in vivo and in vitro biomedical applications | |
| CN112007210A (zh) | 一种光引发聚乙二醇基水凝胶敷料及其制备方法 | |
| CN108421042B (zh) | 一种光控降解水凝胶的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20100616 Termination date: 20130816 |