CN100560173C - 一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法。本发明的技术特征在于：将柿叶烘干、粉碎，加入乙醇溶液，固液浸取，过滤除杂后得到柿叶粗提液。取上述柿叶粗提液，加入PEG聚合物和硫酸铵双水相系统，混匀、分为上、下两相。取出富含聚乙二醇聚合物的上相，加水、乙酸酯类和无机盐，混匀。取出含有大量黄酮类物质的乙酸酯类的相，对其进行减压蒸馏、浓缩溶液，然后将该浓缩液进行真空干燥，得到固体柿叶黄酮类物质。本发明的有益效果是：提高了提取柿叶黄酮类物质的提取率，而且可以得到高品质的黄酮类物质，同时方法本身既经济又操作简单。
Description
技术领域
本发明涉及一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法。
背景技术：
柿叶是柿树的新鲜或干燥叶片。作为药用始载于明《滇南本草》，日：“经霜叶敷臁疮”。以后诸家本草及医(药)书也多有记载。其味苦、酸、涩，性凉，具有清肺止咳、凉血止血、活血化瘀、降血压之功效。主要用于咳喘、肺气肿、各种内出血、高血压等病症。柿叶中的主要有效成分是黄酮。目前已发现的黄酮类化合物有黄芪、异槲皮素、山萘酚、槲皮素等。国内外研究表明：柿叶黄酮具有降血压功能及促进植物生长作用，是一种具有实用价值的作物、瓜果增产剂和很有前途的天然降血压药。
柿叶中黄酮主要以甙类形式存在，一般提取时多采用水、甲醇、乙醇水溶液作溶剂，用乙酸乙酯作萃取剂。另据报道，有人采用水提树酯吸附的方法提取分离柿叶黄酮类化合物。这些方法均存在以下问题：操作繁琐，提取率较低。
发明内容
要解决的技术问题
为了避免现有技术的不足之处，本发明提供了一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，利用双水相萃取技术的特点，不但提高了提取柿叶黄酮类物质的提取率，而且可以得到高品质的黄酮类物质，同时方法本身既经济又操作简单。
技术方案
在本发明中采用双水相提取柿叶黄酮类物质的方法，
双水相萃取技术的特点有：
(1)体系的含水量多达75％～99％，两界面张力极低，有助于保持有效成分的生物活性和相际质量传递；
(2)上、下相密度小，一般10-2g·cm-3左右，是水密度的百分之一；
(3)分相时间短；
(4)双水相萃取易于连续操作、工程放大，可直接线性放大4万倍；
(5)双水相萃取处理量大，能耗低；主要成本消耗在聚合物的使用上，而聚合物又可以循环使用，因此，生产成本较低。
本发明的技术特征在于：
a、固液浸取：将柿叶烘干、粉碎，加入乙醇溶液，固液浸取，过滤除杂后得到柿叶粗提液；
b、双水相萃取：取上述柿叶粗提液，加入聚乙二醇聚合物和硫酸铵双水相系统，混匀、分为上、下两相，分相温度15℃～30℃，时间为2～6小时；
c、乙酸酯类反萃：取出富含聚乙二醇聚合物的上相，加水、加入乙酸丁酯或乙酸乙酯，以及NaCl或Na2SO4，混匀，系统在室温下静置分为上、下两相，分相温度为室温，时间为1～3小时。
d、减压蒸馏、真空干燥：取出含有大量黄酮类物质的乙酸酯类的相，对其进行减压蒸馏、浓缩溶液，然后将该浓缩液进行真空干燥，得到固体柿叶黄酮类物质。
在上述的双水相萃取中，加入聚乙二醇聚合物和硫酸铵双水相系统的同时加入NaCl或Na2SO4。
上述加入的聚乙二醇聚合物为5％～25％，硫酸铵为10％～20％，其中聚乙二醇聚合物的分子量为300～1500。
上述加入的乙酸酯类可以为乙酸丁酯或乙酸乙酯。
有益效果
本发明的有益效果是：
(1)分相迅速
在实验中观察到，采用双水相萃取法，约20分钟左右即可分相，且没有乳化层，缩短了实验周期。
(2)过程集成
双水相萃取既达到了预处理的目的，又浓缩了料液。表现为大量的杂质(如亲水性物质，细胞碎片等)进入下相，黄酮类物质进入上相，上相较原始处理液大为减少，浓缩倍数达到了4倍以上；
(3)本发明方法简单，易于掌握，不受环境影响，见效快。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。
图1：工艺流程示意图
具体实施方式
现结合附图对本发明作进一步描述：
实施例1：
(1)固液浸取
称取经清洗、去杂、烘干、粉碎的柿叶20g，加入50％乙醇300mL进行回流浸提3h，蒸馏回收溶剂，将所剩提取液过滤除杂，得到滤液153g。
(2)双水相萃取
取上述滤液，加入20g聚乙二醇、35g(NH4)2SO4、100g水，再加入无机盐NaCl 5g混匀，在15℃分相2h～6h。
(3)乙酸丁酯或乙酸乙酯反萃
取出富含聚乙二醇聚合物的上相124mL，加水50mL，80mL乙酸丁酯或乙酸乙酯和3gNaCl，充分混匀，系统在室温下静置分相1h～3h至彻底分为上、下两相，含有大量黄酮类物质的乙酸丁酯相待进一步处理。
(4)减压蒸馏、真空干燥
取出乙酸丁酯相102mL进行减压蒸馏，浓缩溶液，将浓缩液置于60℃～80℃下真空干燥，得到固体柿叶黄酮类物质。
实施例2
(1)固液浸取
称取经清洗去杂、烘干、粉碎的柿叶20g，加入70％乙醇400mL回流浸提5h，蒸馏回收溶剂，将所剩提取液过滤除杂，得到滤液190g。
(2)双水相萃取
取上述滤液，加入25g聚乙二醇、45g(NH4)2SO4、95g水，再加入2g NaCl，混匀，在25℃分相2h～6h。
(3)乙酸丁酯或乙酸乙酯反萃
取出富含聚乙二醇聚合物的上相186mL，加水75mL，113mL乙酸丁酯，3g NaCl，充分混匀，系统在室温下静置分相1h～3h至彻底分为上、下两相，含有大量黄酮类物质的乙酸丁酯相待进一步处理。
(4)减压蒸馏、真空干燥
将上述乙酸丁酯或乙酸乙酯相进行减压蒸馏来浓缩溶液，将浓缩液置于60℃～80℃下真空干燥，得到固体柿叶黄酮类物质。
实施例3
(1)固液浸取
称取经清洗去杂、烘干、粉碎的柿叶20g，加入60％乙醇500mL回流浸提8h，蒸馏回收溶剂，将所剩提取液过滤除杂，得到滤液389g。
(2)双水相萃取
取上述滤液，加入35g聚乙二醇、65g(NH4)2SO4、125g水，再加入无机盐3g NaCl，混匀，在30℃分相2h～6h。
(3)乙酸丁酯或乙酸乙酯反萃
取出富含聚乙二醇聚合物的上相221mL，加水85mL，126mL乙酸丁酯，3g NaCl，充分混匀，系统在室温下静置分相1h～3h至彻底分为上、下两相，含有大量黄酮类物质的乙酸丁酯相待进一步处理。
(4)减压蒸馏、真空干燥
取出乙酸丁酯相238mL进行减压蒸馏浓缩溶液，将浓缩液置于60℃～80℃下真空干燥，得到固体柿叶黄酮类物质。
所得产品按中国药典标准检测，产品中所含柿叶黄酮类化合物约为12.1％(分光光度法)。
本发明基于以下发现：柿叶黄酮类物质在聚乙二醇/硫酸铵双水相系统中分配的极大对称。表1给出了柿叶黄酮类物质在聚乙二醇/硫酸铵双水相中的分配数据。双水相体系萃取分离技术的原理是：柿叶黄酮类物质在双水相体系中的选择性分配。柿叶黄酮类物质进入双水相体系后，在上相和下相间进行选择性分配，表现出一定的分配系数。柿叶黄酮类物质对聚乙二醇具有某种亲和性，使柿叶黄酮类物质能较容易溶解在富含聚乙二醇的上相，而一些杂质分配在下相，柿叶黄酮类物质的分配系数一般大于16，萃取率在78.9％～94.7％之间。
表1柿叶黄酮类物质在聚乙二醇/硫酸铵双水相系统中的分配行为
| 序号 | 总组成％wt聚乙二醇(NH<sub>4</sub>)<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> | 相比(R) | 分配系数(K) | 萃取率％(Y) |
| 1 | 10 9 | 0.354 | 16.0 | 78.9 |
| 2 | 10 11 | 0.332 | 39.8 | 84.2 |
| 3 | 10 13 | 0.276 | 67.6 | 86.9 |
| 4 | 10 15 | 0.257 | 84.5 | 92.1 |
| 5 | 10 17 | 0.249 | 94.7 | 94.7 |
表中：相比R＝Vt/Vb
分配系数K＝Ct/Cb
萃取率Y＝VtCt/(VtCt+VbCb)
式中：Vt、Vb-上、下相的体积；
Ct、Cb-柿叶黄酮类化合物在上、下相中的浓度；
因此，经上述固液浸取、聚乙二醇/硫酸铵双水相系统萃取、有机溶剂反萃等过程的处理，使柿叶黄酮类物质得以浓缩和提纯，最终得到柿叶黄酮类物质的成品。
Claims (6)
1、一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于：
a、固液浸取：将柿叶烘干、粉碎，加入乙醇溶液，固液浸取，过滤除杂后得到柿叶粗提液；
b、双水相萃取：取上述柿叶粗提液，加入聚乙二醇聚合物和硫酸铵双水相系统，混匀、分为上、下两相；
c、乙酸酯类反萃：取出富含聚乙二醇聚合物的上相，加水、加入乙酸丁酯或乙酸乙酯，以及NaCl或Na2SO4，混匀，系统在室温下静置分为上、下两相；
d、减压蒸馏、真空干燥：取出含有大量黄酮类物质的乙酸酯类的相，对其进行减压蒸馏、浓缩溶液，然后将该浓缩液进行真空干燥，得到固体柿叶黄酮类物质。
2、根据权利要求1所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于：加入的聚乙二醇聚合物为5％～25％，硫酸铵为10％～20％。
3、根据权利要求2所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于：加入的聚乙二醇聚合物的分子量为300～1500。
4、根据权利要求1所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于：在双水相萃取中，分相温度15℃～30℃，时间为2～6小时。
5、根据权利要求1所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于：在乙酸酯类反萃中，分相温度为室温，时间为1～3小时。
6、根据权利要求1所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于：在减压蒸馏、真空干燥中，真空干燥温度为60℃～80℃。
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